虎杖中白藜芦醇的简易制备方法.pdf

本发明公开了一种虎杖中白藜芦醇的简易制备方法，包括回流提取、过滤或抽滤、液-液萃取、洗涤、浓缩干燥等步骤。本发明方法简单、成本低、收率高，便于实现白藜芦醇规模化生产。

1.  一种虎杖中白藜芦醇的简易制备方法，其特征是：依次包括下列步骤：
(1)回流提取：将虎杖药材粉碎，然后用乙醇浸泡、回流提取，并经减压浓缩干燥、研磨，得干浸膏粉末；
(2)过滤或抽滤：将上述干粉末，按重量/体积比为1∶40～100加水，然后超声分散溶解、过滤或抽滤，得滤渣和水层；
(3)液-液萃取：在上述水层中加入叔丁基甲醚、石油醚-乙酸乙酯或乙醚萃取，得有机层；
(4)洗涤、浓缩干燥：上述有机层中加入pH为8～9的碱性水溶液或5％NaHCO₃溶液，振摇，洗涤至水层由红色变为无色；洗涤后的有机层减压浓缩干燥，即获得白藜芦醇粗品。

2.  根据权利要求1所述的虎杖中白藜芦醇的简易制备方法，其特征是：乙醇为95％乙醇，虎杖药材与95％乙醇的重量/体积比为1∶5。

3.  根据权利要求1或2所述的虎杖中白藜芦醇的简易制备方法，其特征是：步骤(3)中水层与加入叔丁基甲醚、石油醚-乙酸乙酯或乙醚的体积比为1∶1。

4.  根据权利要求1或2所述的虎杖中白藜芦醇的简易制备方法，其特征是：步骤(4)中pH为8～9的碱性水溶液或5％NaHCO₃溶液的用量与所述有机层的体积比为1∶2。

虎杖中白藜芦醇的简易制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从虎杖药材中制备白藜芦醇的方法。
背景技术：
中药虎杖(Rhizoma polygoni cuspidati)系蓼科植物虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.)的干燥根茎及根。具有祛风利湿、散淤定痛、止咳化痰的功效，临床可用于治疗关节痹痛、湿热黄疸、痈肿疮毒等多种疾病。主要含有大黄素甲醚、大黄素、大黄酸、白藜芦醇、白藜芦醇甙等化学成分。
白藜芦醇(3，4′，5-三羟基二苯代乙烯，resveratrol)是中药虎杖的主要有效成分，具有抗氧化、抗增生、抑制血小板聚集、血管舒张等作用。尤其人们亦发现白藜芦醇能够抑制肿瘤细胞生长、降低动物肿瘤生长速度，对肿瘤的预防、与治疗有一定的作用，成为人们研究的热点。
白藜芦醇的生产、制备方法有多种，如层析法(专利号：00121100.5)、超临界流体萃取法(专利号：02139912.3)、酶解法(专利号：200810014833.8)等。柱层析方法(如硅胶)需要消耗大量的有机溶剂，并且由于填料对白藜芦醇有很强的吸附作用，因此，该方法成本高、耗时长、收率低。超临界流体萃取法所需仪器昂贵，在许多生产单位及实验室难以实现普及。
发明内容：
本发明的目的在于提供一种结构合理，方法简单、成本低、便于实现白藜芦醇规模化生产的虎杖中白藜芦醇的简易制备方法。
本发明的技术解决方案是：
一种虎杖中白藜芦醇的简易制备方法，其特征是：依次包括下列步骤：
(1)回流提取：将虎杖药材粉碎，然后用乙醇浸泡、回流提取，并经减压浓缩干燥、研磨，得干浸膏粉末；
(2)过滤或抽滤：将上述干粉末，按重量/体积比为1∶40～100加水，然后超声分散溶解、过滤或抽滤，得滤渣和水层；
(3)液-液萃取：在上述水层中加入叔丁基甲醚、石油醚-乙酸乙酯或乙醚萃取，得有机层；
(4)洗涤、浓缩干燥：上述有机层中加入pH为8～9的碱性水溶液或5％NaHCO₃溶液，振摇，洗涤至水层由红色变为无色；洗涤后的有机层减压浓缩干燥，即获得白藜芦醇粗品。
乙醇为95％乙醇，虎杖药材与95％乙醇的重量/体积比为1∶5。
步骤(3)中水层与加入叔丁基甲醚、石油醚-乙酸乙酯或乙醚的体积比为1∶1。
步骤(4)中pH为8～9的碱性水溶液或5％NaHCO₃溶液的用量与所述有机层的体积比为1∶2。
本发明方法简单、成本低、收率≥90％，便于实现白藜芦醇规模化生产。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
图1、图2、图3是表示虎杖药材经95％乙醇提取、浓缩、干燥后，获得的乙醇提取物色谱图。其中：
图1是白藜芦醇对照品色谱图。
图2是大黄素对照品色谱图。
图3是虎杖乙醇提取物色谱图。其中色谱峰1、2、5为未知物色谱峰，3白藜芦醇，4大黄素。
图4、图5、图6是乙醇提取物经研磨、加水超声分散溶解后，再经过滤获得的滤渣及水层色谱图，其中TLC谱图是以石油醚-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂。谱图显示，通过过滤，能够除去全部或部分极性小的成分(如大黄素、大黄素甲醚等)及残存的药材粉末，而极性相对较大的白藜芦醇损失较少，绝大部分仍保留在水层。其中：
图4是虎杖乙醇提取物溶液抽滤后滤渣色谱图。
图5是虎杖乙醇提取物溶液抽滤后水层色谱图。
图6是虎杖乙醇提取物抽滤前后TCL图。图6中1为虎杖乙醇提取物，2为滤渣，3为水层浓缩物，4为白藜芦醇对照；①为白藜芦醇斑点，②为大黄素斑点。
图7、图8、图9是表示水层经叔丁基甲醚萃取后，得到的有机层及水层色谱图，其中TLC谱图是以氯仿-甲醇(8∶2)为展开剂。谱图显示叔丁基甲醚可将水层中的绝大部分白藜芦醇转移至有机层，提取回收率≥90％。其中：
图7是叔丁基甲醚萃取后有机层色谱图。
图8是叔丁基甲醚萃取后水层HPLC色谱图。
图9是叔丁基甲醚萃取前后TCL谱图。图9中；1萃取前，2萃取前后有机层，3萃取后水层，①为白藜芦醇斑点，②为大黄素斑点。
图10、图11、图12是前述叔丁基甲醚有机层经5％NaHCO₃溶液洗涤后，有机层及水层色谱图。经碱溶液洗涤，有机层中强酸性成分及极性大的成分均被洗去，只剩下白藜芦醇和大黄素两种主要成分，其中白藜芦醇纯度达到64％以上。其中：
图10是5％NaHCO₃洗涤后水层色谱图。
图11是5％NaHCO₃洗涤后叔丁基甲醚有机层色谱图。
图12是5％NaHCO₃洗涤前后TCL谱图。图12中，1洗涤前有机层，2洗涤后有机层，3白藜芦醇对照品，①为白藜芦醇斑点，②为大黄素斑点。
具体实施方式：
实施例1：
取虎杖药材1kg，粉碎、加5000ml95％乙醇浸泡12h、回流提取3次，每次1h。合并提取液，减压浓缩干燥，得到虎杖乙醇提取物的干浸膏，干浸膏粉末经研磨，得均匀一致的粉末。上述粉末，按1∶20-100(例1∶20、1；60、1∶100)重量/体积比(w/v)加水、50℃超声分散溶解、抽滤，得滤渣和水层。水层按体积比1∶1(v/v)的比例加入叔丁基甲醚，萃取3次，合并有机层，白藜芦醇收率≥90％。有机层加入5％NaHCO₃溶液，洗涤2次，至水层由红色变为无色，其中5％NaHCO₃溶液的用量与所述有机层的体积比为1∶2。取有机层，减压浓缩干燥，即获得白藜芦醇含量≥64％的粗品。
实施例2：
取虎杖药材1kg，粉碎、加5000ml 95％乙醇浸泡12h、回流提取3次，每次1h。合并提取液，减压浓缩干燥，得到虎杖乙醇提取物的干浸膏，干浸膏经研磨，得均匀一致的粉末。上述粉末，按1∶20-100(例1∶20、1；60、1∶100)(w/v)加水、50℃超声分散溶解、抽滤，得滤渣和水层。水层按1∶1(v/v)的比例加入石油醚-乙酸乙酯(1∶1)混合溶剂，萃取三次，合并有机层，白藜芦醇收率≥90％。有机层加入适量5％NaHCO₃溶液，洗涤2次，至水层由红色变为无色有机层加入5％NaHCO₃溶液，洗涤2次，至水层由红色变为无色，其中5％NaHCO₃溶液的用量与所述有机层的体积比为1∶2。取有机层，减压浓缩干燥，即获得白藜芦醇含量≥64％的粗品。