含有 DHA 酯的非胃肠道给药的药用组合物 本发明涉及包含二十二碳六烯酸酯的， 非胃肠道给药的药用组合物。
Ω3 脂肪酸是多元不饱和脂肪酸， 其特别发现于藻类、 油质鱼 ( 鲑鱼、 鲭、 沙丁鱼、 金枪鱼 )、 油菜籽、 胡桃、 大豆等。 通常而言， 脂肪酸 CH3-(CH2)n-COOH 的类别是基于碳链长度 ( 短链为 n ＝ 2-4， 中等链为 n ＝ 6-8 且长链为 n ≥ 10)、 双键数量 ( 不饱和的、 单或多元不 饱和的 ) 以及羧基中碳原子起始的双键的位置。ω 参照系统表明了碳链长度、 双键数量和 距离所述 ω 碳的最近的双键的位置， 根据定义， 所述 ω 碳为链中最后的碳， 距离羧基最远。
Ω3 基团中主要的脂肪酸是 ：
- 亚麻酸 18:3(9， 12， 15) 或丙氨酸 (ALA)
- 二十碳五烯酸 20:5(5， 8， 11， 14， 17) 或二十碳五烯酸 (EPA)
- 二十二碳六烯酸 22:6(4， 7， 10， 13， 16， 19) 或二十二碳六烯酸 (DHA)Ω3 脂肪酸对 人体健康提供多种有益效果。
专利申请 WO 01/46115A1 公开了基于富含 EPA 和 DHA 鱼油的饮食有利于降低心血 管疾病的突发。 其中提到的 EPA 和 DHA 的非胃肠道形式， 是采用本领域技术人员所熟知的方 法 ( 例如通过稀释水中非离子除垢表面活性剂， 加热并且加入 DHA 和 EPA 酯 ) 得到的球状 颗粒混悬体的形式。该申请通过引证出版物第 8 页第 2 行 (Billman 等人， 1997 Lipids 32 1161-1168)， 也公开了包含豆油和三酸甘油酯的用于静脉注射给药的乳剂。1997 Lipids 32 1161-1168).
但是， 使用这种方法， 很难得到适合使用的稳定的非胃肠道制剂， 或者很难用冷冻 干燥形式 ( 其中平均粒径低于 100nm) 复溶， 以加入大量的活性成分且不包含过高比例的被 证实为长期毒性的表面活性剂。
DHA 酯中， 烟酸酯或吡啶 -3- 基甲基 - 顺 -4， 7， 10， 13， 16， 19- 二十二碳六烯酸是具 有相当大治疗优势的酯。
DHA 烟酸酯或吡啶 -3- 基甲基 - 顺 -4， 7， 10， 13， 16， 19- 二十二碳六烯酸的结构通 式如下所示 ：
分子量是 419.60g， 与 C28H37NO2 一致。
它是非常亲酯的化合物 (LogP 大约为 7)， 其中在水中平衡时的溶解度＜ 1μg/ml。 因此配制成非胃肠道给药是特别困难的。
特别有利的另一个 DHA 酯是 DHA 的泛醇酯， 也被称作二十二碳六烯酸泛醇酯， 特 别是 DHA 的泛醇单酯 2， 4- 二羟基 -3， 3- 二甲基丁酰胺基 ) 丙基二十二碳 4， 7， 10， 13， 16， 19- 六酸盐， 泛醇酯具有下列通式 A ：
或者其任意药学上可接受的盐、 对映异构体、 非对映异构体， 或者其包括外消旋混 合物的混合物。
更具体地， 该酯可以是具有下列通式 B 的 DHA 的泛醇单酯 ：
也被称作 “D- 泛醇 DHA 酯” 。
这些酯对治疗例如 WO 2007/147899 中描述的心房颤动非常有效。他们作为前药， 在水解作用后释放 DHA 到身体中。
在本发明中， 术语 “对映异构体” 指的是光学同分异构体化合物， 其有相同的分子 式但其空间配置不同并且镜像不重叠。术语 “非对映异构体” 指的是并不是彼此镜像的光 学异构体。根据本发明， “外消旋混合物” 是手性分子左旋和右旋对映异构体的等比例混合 物。
在本发明中， 术语 “药学可接受的” 或 “药学术语中可接受的” 是指适合于制备药 学组合物的那些， 其通常是安全无毒或者无生物学上或其他不良反应并且其适于动物和人 类药用。
术语化合物的 “药学上可接受的盐” 是指此处定义为药学可接受的盐， 并且其有母 体化合物所需的药理学活性。这类盐包括 ：
(1) 与无机酸形成的酸加成盐， 如盐酸、 氢溴酸、 硫酸、 硝酸、 磷酸以及类似物 ； 或 者与有机酸形成的酸加成盐， 如醋酸、 苯磺酸、 苯甲酸、 樟脑磺酸、 柠檬酸、 乙基磺酸、 富马 酸、 葡庚糖酸、 葡萄糖酸、 谷氨酸、 羟基乙酸、 羟萘甲酸、 2- 羟基乙基 - 磺酸、 乳酸、 马来酸、 苹 果酸、 扁桃酸、 甲磺酸、 粘糠酸、 2- 萘磺酸、 丙酸、 水杨酸、 琥珀酸、 联苯甲酰 -L- 酒石酸、 酒石 酸、 对甲苯磺酸、 三甲基乙酸、 三氟乙酸以及类似物 ； 或
(2) 当存在于母体化合物中的酸质子用金属离子 ( 例如碱金属离子、 碱土金属离 子或铝离子 ) 取代或用有机或无机碱结合时形成的盐。可用的有机碱包括二乙醇胺、 乙醇 胺、 N- 葡甲胺、 三乙醇胺、 氨基丁三醇及其类似物。可用无机碱包括氢氧化铝、 氢氧化钙、 氢 氧化钾、 碳酸钠以及氢氧化钠。
优选药学上可接受的盐为由盐酸、 三氟乙酸、 联苯甲酰 -L- 酒石酸和磷酸形成的 盐。
应该理解为任意参考的药学上可接受的盐包括此处定义的相同酸加成盐的溶剂 加成形式 ( 溶剂化物 ) 或结晶形状 ( 多晶型 )。
发明人出乎意料的发现两类表面活性剂 ( 聚氧乙烯脂肪酸酯和磷脂衍生物 ) 联合 使用， 有可能制备包含 DHA 酯的组合物用以非胃肠道给药。
因此本发明涉及非胃肠道给药的药学组合物， 包括使用至少两种表面活性剂 ( 选 自 a) 至少一种聚氧乙烯脂肪酸酯和 b) 至少一种磷脂衍生物 ) 的混合物分散在水相中的 二十二碳六烯酸的亚微米酯颗粒。
根据本发明的一个实施方式， 组合物仅包含表面活性剂 a) 和 b) 这两类作为表面 活性剂。
二 十 二 碳 六 烯 酸 酯 可 以 为 任 意 类 型。 它 特 别 可 以 为 乙 酯 或 如 专 利 申 请 WO 2007/147899 所描述的维他命 B 的酯。
本发明的一个实施方式中， 其是 DHA 的烟酸酯， 例如吡啶 -3- 基甲基 - 顺 -4， 7， 10， 13， 16， 19- 二十二碳六烯酸， 或者 DHA 的泛醇酯， 特别是 DHA 的泛醇单酯 2， 4- 二羟基 -3， 3- 二甲基丁酰胺基 ) 丙基二十二碳 4， 7， 10， 13， 16， 19- 六酸盐， 并且更特别的是 D- 泛醇 DHA 酯， 这些酯配制成非胃肠道给药是相当困难的。
在本发明的一个实施方式中， 二十二碳六烯酸酯浓度大于或等于 10mg/ml， 例如大 于或等于 30mg/ml。
第一表面活性剂 (a) 属于聚氧乙烯脂肪酸酯类。可以通过脂肪酸和环氧乙烷或聚 乙二醇之间的反应得到聚氧乙烯脂肪酸酯。
特别地， 本发明的聚氧乙烯脂肪酸酯具有下列通式 (1) 或 (2) ：
(1)RCOO.(O.CH2CH2)nH
(2)R1COO.(O.CH2CH2)nCOOR2
其中 R、 R1 和 R2 每一各自代表在聚氧乙烯结构单元中， 母体脂肪酸的烷基或烯基， 并且 n 代表聚合物链的长度。例如， n 在 10 和 60 之间， 例如在 12 和 20 之间， 例如 15。
脂肪酸可以为饱和或不饱和。它是羟基化。最常用的饱和脂肪酸如下 ：
常用名 丁酸 己酸 羊脂酸 癸酸 月桂酸 肉豆蔻酸 棕榈酸 硬脂酸 花生酸 IUPAC 名 丁酸 己酸 辛酸 癸酸 十二酸 十四酸 十六酸 十八酸 二十酸 化学结构 CH3(CH2)2COOH CH3(CH2)4COOH CH3(CH2)6COOH CH3(CH2)8COOH CH3(CH2)10COOH CH3(CH2)12COOH CH3(CH2)14COOH CH3(CH2)16COOH CH3(CH2)18COOH 缩写 C4:0 C6:0 C8:0 C10:0 C12:0 C14:0 C16:0 C18:0 C20:0 熔点 (℃ ) -8 -3 16-17 31 44-46 58.8 63-64 69.9 75.56CN 102470104 A 山嵛酸 二十四酸
二十二酸 二十四酸说明书C22:0 C24:0 74-784/9 页CH3(CH2)20COOH CH3(CH2)22COOH因此， R、 R1 或 R2 例如为烷基或烯基链， 比如直链或支链， 例如链在 C3-C23 之间， 例 如在 C11-C23 之间， 例如在 C15-C21 之间， 例如脂肪酸为长链饱和脂肪酸， 比如含有超过 16 个 碳原子的烷基。
在一个实施方式中， 脂肪酸有 12-24 个碳原子， 例如在 14-22 个碳原子， 例如在 16-20 个碳原子， 例如含有 18 个碳原子， 例如它是硬脂酸。
它可以为脂肪酸单酯或二酯， 或者为其混合物。 在本发明一个实施方式中， 它是脂 肪酸单酯或二酯的混合物。例如， 聚氧乙烯脂肪酸酯是聚乙二醇 -15 羟基硬脂酸 ( 商品名 ： SOLUTOLHS15， 生产厂家 ： BASF， 路德维希港， 德国 )。它是非离子溶解剂， 基本上由 12- 羟基 硬脂酸单酯和二酯以及通过 12- 羟基硬脂酸的乙氧基化而得的聚乙二醇组成。与每摩尔 12- 羟基硬脂酸反应的环氧乙烷的摩尔数是 15。它是淡黄色的蜡质， 极易溶于水。
特别地， 适于本发明使用的聚氧乙烯脂肪酸酯是非离子表面活性剂。 第二表面活性剂 (b) 属于磷脂衍生物类 ： 因此它可以由天然的卵磷脂， 如例如大 豆或鸡蛋卵磷脂， 天然的磷脂， 如例如大豆或鸡蛋磷脂， 或者合成磷脂， 或者其混合物组成。 例如， 它可以由中性磷脂 ( 如磷脂酰胆碱， 如比如 1， 2- 二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱或 1- 十六 酰 -2- 油酰卵磷脂， 和磷脂酰乙醇胺， 比如磷脂酰胆碱 )、 带负电荷的磷脂 ( 如磷脂酰甘 油， 如比如 1， 2- 二肉豆蔻磷脂酰甘油， 磷脂酰丝氨酸、 磷脂酰肌醇和磷脂酸， 比如磷脂酰甘 油 )、 或其混合物组成。 例如， 它可以由中性磷脂 ( 比如磷脂酰胆碱 ) 组成， 或它可以由中性 磷脂和带负电荷的磷脂 ( 比如 1- 十六酰 -2- 油酰卵磷脂和 1， 2- 二肉豆蔻磷脂酰甘油 ) 组 成。
在中性磷脂和带负电荷磷脂的混合物中， 带负电荷磷脂质量占混合物总量的比例 少于 10％， 在 1％和 5％之间， 例如等于 3％。
它可以由天然的卵磷脂和带负电荷磷脂的混合物， 特别是鸡蛋卵磷脂和 1， 2- 二 肉豆蔻磷脂酰甘油的混合物组成。
类型 a) 表面活性剂∶类型 b) 表面活性剂的质量比可以在 1 ∶ 3 和 3 ∶ 1 之间， 例如 1 ∶ 1。
磷脂衍生物具有图 1 所示的通式。
在本发明的一个实施实施方式中， 磷脂衍生物并不含有大豆卵磷脂或大豆磷脂。
在一个实施方式中， 亚微米颗粒是如混合胶束或囊或胶束的或囊的结构混合物 (structure hybirds) 的亚微米颗粒。
本发明的混合胶束是如聚集体的胶束， 由两种不同类型表面活性剂 (a) 和 (b) 的 混合物组成， 表面活性剂分子的亲水性极性端正对水相而疏水链背对水相， 与 DHA 酯相互 作用。
本发明的囊是其中表面活性剂根据等同于细胞膜中发现的双层排列来组成的结 构。这些表面活性剂围绕着液泡或水性空腔。
本发明的胶束的和囊的结构混合物是混合胶束和囊之间， 任选与所述液泡共存的 中间体结构。
在这方面， 例如本发明的组合物是混合胶束或囊或胶束和囊的结构混合物的分散 体。例如， 这些颗粒在冷冻断裂之后于电子显微镜下显示出平面断裂现象。
根据本发明的一个实施方式， 本发明的组合物不是乳剂形式。
在本发明的一个实施方式中， 亚微米颗粒平均粒径＜ 100nm， 例如在 25 和 70nm 之 间， 例如多分散体＜ 0.5( 粒径和多分散体在 Malvern Zetasizer 仪上通过光子相关光谱技 术所测定 )。
除上述亚微米颗粒以外， 本发明的组合物也可以包括， 任选地 ：
- 抗氧化剂， 通过氧气溶解在组合物中保护 DHA 酯避免氧化， 特别是 DHA 的烟酸酯 或泛醇酯， 并且特别是 D- 泛醇酯 DHA 酯。非限制性的例子包括 ： 抗坏血酸及其衍生物、 释 放二氧化硫的化合物 ( 例如焦亚硫酸钠 )、 棓酸丙酯、 丁基羟基甲苯、 丁基羟基苯甲醚、 D， L-α- 生育酚、 乙二胺四乙酸衍生物及其组合。其含量在 0.01％和 1％之间 (m/V)， 更具体 地 0.01％和 0.50％之间 (m/V)。 在生产和包装注射用组合物时使用惰性气体 ( 例如氮气或 氩气 ) 以适当增加抗氧化剂的作用。
-pH 调节剂。本领域技术人员所熟知的 pH 调节剂且包括无机或有机酸和碱， 以及 缓冲系统。使用其以控制本发明组合物的 pH 值在 pH ＝ 4 和 pH ＝ 9 之间， 适于非胃肠道给 药。因此其可以由抗坏血酸组成。 - 调节本发明组合物渗透性的试剂以保证其与血液的等渗性。 这些试剂可以是， 比 如， 中性分子如碳水化合物， 如任选还原的单糖， ( 如浓度≤ 5％ (m/V) 的葡萄糖或甘露醇 ) 或二糖 ( 如浓度≤ 10％ (m/V) 的蔗糖 )。
- 作为分散介质的注射用水， 例如 5％葡萄糖溶液或 0.9％氯化钠溶液。
本发明的组合物以适于给药的水分散形式或冻干分散形式存在， 所述冻干分散是 指在给药前用注射用水即时复溶。
在非限制性的例子中， DHA 烟酸酯的浓度为 30ng/ml 或 3％ (m/V)， SOLUTOL HS15 和磷脂衍生物的浓度分别为 2.5 和 5％之间 (m/V) 和 0 和 10％之间 (m/V)。组合物中优选 使用 5％ (m/V) 的 SOLUTOL HS15 和 5％ (m/V) 的磷脂衍生物。
表 1 中列出的制剂用来说明本发明。其通过下文中列出的第一种方法进行制备。
本发明进一步涉及制备本发明组合物的方法， 包括下列步骤 ：
- 将 DHA 酯， 特别是 DHA 烟酸酯或 DHA 泛醇酯 ( 特别是具有通式 A 或 B 的 DHA 泛醇 单酯 )、 磷脂衍生物和聚氧乙烯脂肪酸酯 ( 例如 SOLUTOL HS15)， 分散于非胃肠道给药的水 溶液中 ( 例如 5％葡萄糖溶液 )， 搅拌 ( 例如磁力或锚式搅拌， 比如大约 700rpm) 直至得到 均匀但浑浊的分散体，
- 均化所得分散体， 例如使用转子 / 涡轮静子 ( 例如 Labortechnik T25(IKA) 型或 类似物 ) 在大约 13,500rp 下， 随后在高压匀浆器下 ( 例如 EMULSIFLEX C-5(AVESTIN) 型或 类似物 )， 比如 1300 和 1600 巴之间的压力下，
- 将所得胶体制剂灭菌， 例如穿过 0.2μm 灭菌过滤器 ( 如 MILLIPORE DURAPORE 型或类似物 )。
该方法可以再包括进一步的步骤 ： 在无菌环境下， 在干净并且预先灭菌的一级包 装材料中充填无菌滤液。
这个一级包装是例如密封小瓶， 或用弹性体塞子和卷帽密封的烧瓶， 或者适用于 给药的预装满的注射器。
在另一方法中， 在加入 DHA 酯， 特别是 DHA 的烟酸酯或泛醇酯， 特别是有通式 A 或 B 的 DHA 的泛醇单酯和最终均化之前， 表面活性剂 a) 和 b) 可以在将非胃肠道给药的水溶液 ( 例如 5％葡萄糖溶液 ) 中预先共均化。 在另一方法中， 表面活性剂 a) 和 DHA 酯在加入表面活性剂 b) 之前均化并且然后 全部均化。然后加入溶剂， 例如醇 / 水混合物， 例如乙醇 / 水， 如分别为 15.8 ∶ 1v/v， 并且 继续均化。然后真空干燥移除溶剂。随后将得到的复合物稀释于 5％葡萄糖溶液中。得到 的分散体任选均化， 比如采用高压匀浆机。得到的制剂通过上述 0.22μm 过滤器灭菌。
任意抗氧化剂、 pH- 调节剂和 / 或等渗剂在均化之前或之后溶解在水相中。
在一个实施方式中， 本发明的药用组合物用于静脉、 动脉、 心脏、 皮下、 皮肤内、 肌 肉内、 脊椎内、 鞘膜内、 腹膜内、 眼内、 心室内、 心包内、 硬膜内或关节内给药。
通常而言， 本发明组合物按原样或由生理学可接受的溶液 ( 如 5％葡萄糖溶液或 0.9％氯化钠溶液 ) 稀释后以静脉注射给药。
这些组合物可以通过动脉内、 心脏内、 皮下、 皮肤内、 肌肉内或脊椎内途径给药。
本发明进一步涉及本发明药用组合物用作药用产品。
药用产品用于预防和 / 或治疗心血管疾病， 如选自室上性和 / 或心室性心律失常、 心动过速和 / 或纤维性颤动， 如心房颤动 ； 用于预防和 / 或治疗由心肌细胞电传导缺陷表征 的疾病 ； 用于预防和 / 或治疗心血管疾病的多风险因素， 例如选自高三酸甘油脂血症、 高胆 固醇血症、 高血脂症、 脂肪代谢紊乱 ( 如血液凝血和 / 或血小板聚集因子 II( 凝血酶 ) 的过 度活跃和 / 或动脉高血压诱导的混合脂肪代谢紊乱， 动脉和静脉血栓的形成 ) ； 用于主要或 次要预防和 / 或治疗心血管疾病， 所述疾病来源于心肌梗死， 特别是猝死诱导的室上性和 / 或心室性心律失常、 心动过速和 / 或纤维性颤动和 / 或电传导缺陷 ； 和 / 或用于梗塞后的治 疗。
可以按照下列心房颤动的图示和实验来更清楚地理解本发明 ：
图 1 表示为磷脂衍生物的常规结构。
图 2 表示为对麻醉的猪， 给药本发明组合物 (10mg/kg DHA 烟酸酯大药丸 +10mg/kg
DHA 烟酸酯 40 分钟后 ) 后配合 120bpm 和 150bpm 的刺激频率， 测定心房不应期。
图 3 表示为对麻醉的猪， 给药对比组合物 ( 反例 )(10mg/kg DHA 烟酸酯大药丸 +10mg/kg DHA 烟酸酯 40 分钟后 ) 后配合 150bpm 的刺激频率， 来测定心房不应期。
实施例 1
例如， 表 1 列出的本发明组合物在治疗心房颤动中的活性在下文中描述的药理学 实验中完全列出。
雄性长白猪 (22-25kg) 用异氟醚 (1.5-3％ ) 来麻醉。 然后将导管插入到动物体内 并且通风以保证动脉气体值在生理学限度内。在第四肋间处进行左胸廓切开术。动脉和乳 腺静脉分离， 输尿管插入到静脉中将受试产品给药并且在动脉中测量动脉压并收集血样。 进行心包床 (pericardial bed)。持续记录心房的心电图 (ECG)， 三个电极放置在心外膜和 缝合处。因为这个原因， ECG 只能提供心房位置的信息。两个双极电极也放置在左心耳 ： 他 们用来在给定频率下电刺激心耳。
实验方案 ：
足够的复原期之后， 开始测定在对照阶段下的心房不应期。一系列持续的刺激 (S1) 以很低的电压 (0.1V) 开始， 并不足以刺激心脏。电压逐渐升高 ( 以 0.1v 间隔 ) 以测 定刺激的临界值以监控可应用的频率。在每个刺激频率下都要测定这个临界值。有 4 个刺 激频率， 90、 120、 150 和 180bpm。如果猪心率基值为 90bpm 以上， 第一个刺激频率不能应用。 类似地， 如果基值频率过低 ( ＜ 90bpm)， 测试的最终刺激频率 (180bpm) 不能一直刺激心脏。 一旦测定到临界值， 刺激 S1 的电压 ( 一系列 10 次刺激 ) 等于临界值的二倍， 并且额外刺激 S2 的电压等于临界值的 4 倍。在不应期阶段， 每 10 次 S1 便触发额外刺激 S2( 如最终 S1 后 80ms， 期望的不应期最少是 100ms)， 并且每 10 次刺激 S1， 额外刺激与最终刺激 S1(5ms 增 量 ) 分开直到它能自发跳动。并不导致对 S2 的回应的最长间隔是心房不应期。连续 3 次 ( 以平均值表示 ) 在 4 个不同刺激频率下， 即 12 次测定， 来评估不应期。受试产品以大药丸 形式给药以及注射超过 40 分钟 ( 需要评估所有不应期的时间 )。临界值并不重新计算， 立 即计算出不应期 ( 在大药丸给药后 5 分钟 )。 如果产品有活性， 不应期对比对照阶段应有所 增加。
应该注意的是， 如图 2 和 3 所示， 只有本发明组合物明确地回应了该药学实验。
如下表 2 所示， 反例是与本发明制剂非常相似的制剂， 但他们表现出较差或负面 的药理学活性。
表2
反例 1 DHA 烟酸酯 1， 2- 二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱 SOLUTOL HS 15 吐温 80 10 5.00g 2.50g 3.00g 反例 2 3.00g 反例 3 3.00g 2.00gCN 102470104 A 介质 - 链状三酸甘油酯 1， 2- 二肉豆蔻磷脂酰甘油 5％葡萄糖溶液
说明书2.50g 0.50g8/9 页达到 100ml达到 100ml达到 100ml因此， 值得注意的是， 包含 DHA 烟酸酯的非胃肠道给药的组合物中缺少表面活性 剂 ( 反例 3 和 1 分别为 (a) 或 (b))， 或者使用其他非 a) 或 b) 的表面活性剂 ( 反例 2) 不可 能得到想要的活性。
实施例 2 ： 包含具有通式 B 的 DHA 泛醇酯的注射用制剂
POPC ＝ 1- 十六酰 -2- 油酰卵磷脂
EPCS ＝鸡蛋磷酸酰胆碱
DMPG ＝ 1， 2- 二肉豆蔻磷脂酰甘油
1- 制备溶剂存在下复合的方法 ：
Solutol HS 15 和具有通式 B 的 DHA 泛醇酯在 50℃温度下混合直到均化。然后加 入磷脂并且将混合物置于惰性气氛 ( 例如氮 ) 中于 50℃下磁力搅拌 1 小时到 1 小时 30 分 钟。将乙醇和水， 例如乙醇 / 水 [15.8 ∶ 1， v/v] 加入到混合物中并且在惰性气氛中持续搅 拌直到脂类完全分散。然后将混合物超声粉碎处理 30 分钟以得到完全分散的磷脂。所得 分散体在真空下放置至少 24 小时以移除溶剂和水。
在 5％葡萄糖溶液里稀释复合物。 如果分散体是不透明的， 用高压匀浆机均化直到 分散体透明并且澄清。用 0.22μm PVDF 过滤器对其灭菌。
2- 制备混合 DHA 泛醇酯与磷脂和 Solutol HS 15 分散体的方法。
对磷脂、 Solutol HS 15 和 5％葡萄糖溶液称重并且将混合物磁力搅拌并加热到 60℃直到得到分散体。然后用高压匀浆机使分散体循环直到得到澄清和 / 或透明的分散 体。
然后将具有通式 B 的 DHA 泛醇酯加入到所述分散体中并且将混合物在 13,500rpm 下均化 1-2 分钟。在高压匀浆机中使分散体循环直到得到澄清和 / 或透明的分散体， 例如 不多于 5 个循环。分散体通过 0.22μmPVDF 过滤器过滤。
3- 制备混合 DHA 泛醇酯、 磷脂和 Solutol HS 15 的方法。
所有的成分在烧瓶中称重， 加入磁棒并且在惰性气氛下， 例如氮气中密封烧瓶。 将 混合物搅拌 30 分钟或者直到得到均匀的分散体。 将分散体在 13,500rpm 下均化 1-2 分钟并 且用高压匀浆机处理， 例如 6 个循环后直到得到透明和 / 或澄清的分散体或固定传送。制 剂在 0.22μm 过滤器上过滤并且在 T0 和 4℃、 25℃和 40℃下储存 2 周后测定显微镜下的视 觉外形、 外观， pH、 传送和粒径。
按照下表 3 中给出的组合物来配制制剂 ：
表3
上述实施例常用于评估是否 DAH 的泛醇酯 ( 例如具有通式 B 的泛醇酯 ) 能够与赋 形剂直接结合以形成复合物， 该复合物能够随后稀释在 5％葡萄糖溶液中以形成适合于注 射的分散剂。
分析根据 3 种制备方法所得的组合物。
在显微镜下观察制剂的视觉外形和外观， 在 T0 和 4℃、 25℃和 40℃下储存 2-4 周 后测定 pH、 传送和粒径。
这些观测的结论是含有 30mg 具有通式 B 的 DHA 泛醇酯每 ml 的 Solutol HS 15 和 POPC 或 EPCS 与 DPMG 和 5％葡萄糖溶液的组合物可以根据所述的三种方法来制备。pH 两周 后依然稳定， 粒径仍然小于 100nm。HPLC 色谱图中没有观察到降解峰。