用于提高皂素的生物利用度的组合物 技术领域 本发明涉及具有生物利用度提高的皂素的人参混合组合物。此外， 本发明涉及一 种提取物， 其包含可以提高皂素的生物利用度的五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至 少一种提取物。
背景技术 人参 (Panax ginseng C.A. Meyer) 是五加科人参属的一种植物。在韩国、 中国、 日 本和其它地区已经将它作为草药使用了 2000 多年了， 以预防疾病和延长寿命。如今， 人参 的已知功能及效果包括对中枢神经系统的活性、 抗致癌活性、 抗癌活性、 免疫调节活性、 抗 糖尿病活性、 促进肝功能活性、 改善心血管疾病的活性、 抗动脉硬化活性、 控制血压的活性、 改善更年期疾病的活性、 改善骨质疏松症的活性、 抗压和抗疲劳活性、 抗氧化活性、 抗衰老 活性等。
五味子是木兰科的一种落叶木质藤本植物。干燥其紫红色、 红色或深紫色的果实 以用于食用。 五味子用于改善口干、 发烧和胸部疼痛、 减缓疲劳、 强化心脏功能、 改善血液循 环及预防记忆力或思维能力的减退。 另外， 长期服用五味子可抑制咳嗽和哮喘、 改善精力及 提高免疫力。 药理试验表明五味子具有对中枢神经系统的活性、 减缓疲劳活性、 改善心血管 疾病的活性、 控制血压的活性、 控制胃液分泌的活性、 利胆活性、 降低血糖的活性、 增加糖原 的活性等。
阔叶山麦冬是生长在山的阴凉处的一种多年生植物。 它的块状根是用来治疗阴虚 的草药， 而且可以用于治疗由肺部损伤引起的干咳、 咳血、 痰等。 众所周知， 它具有抗氧化活 性、 促进血液循环活性、 改善心脏收缩活性、 增强免疫力活性、 降低血糖活性、 抗菌活性等。
发明内容
技术问题 本发明涉及提高皂素的生物利用度。
技术方案 在一个总的方面， 本发明提供具有生物利用度提高的皂素的人参混合组合物， 其包含 ： 选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少一种提取物 ； 和含有皂素的人参提取物。
在另一个总的方面， 本发明提供用于提高皂素的生物利用度的组合物， 其包含作 为活性成分的、 选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少一种提取物。
有益效果 本发明所述组合物包含选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少一种提取物。 所述提取物参与人参皂素的代谢， 从而提高人参皂素在人体内的生物利用度， 从而提高人 参皂素的生理活性。这就是说， 所述五味子提取物或阔叶山麦冬提取物可以提高皂素的生 物利用度， 更具体地可提高人参皂素的生物利用度。具体实施方式
无论采用何种提取方法或是何种组合物的成分， 在这里使用的术语 “提取物” 是指 从天然产品中提取的物质。 例如， 它包括， 一种是从天然产品中利用水或有机溶剂提取可溶 性成分， 或一种是从天然产品中只提取特定成分， 如油。 在这里使用的术语 “人参提取物” 是 指从人参的根、 茎、 叶、 浆果、 花或其它部位获得的提取物。
在这里使用的术语 “生物利用度” 是指对进入体循环的活性成分的给药剂量的部 分的测量。
以下， 将详细地说明本发明的实施例。
在一方面， 本发明提供人参混合组合物， 其包含选自五味子提取物和阔叶山麦冬 提取物中的至少一种提取物， 和含有皂素的人参提取物。
在本发明的一个实施例中， 通过一般提取方法从相应的植物中可获得五味子提取 物、 阔叶山麦冬提取物或人参提取物。在本发明的另一个实施例中， 在水或有机溶剂， 如乙 醇中通过加热， 提取相应的植物， 然后过滤， 并经减压浓缩可获得五味子提取物、 阔叶山麦 冬提取物或人参提取物， 但是不限于这种方法。 在本发明的另一个实施例中， 在阳光下或用 热空气干燥相应的植物， 然后使用水或有机溶剂提取， 可获得五味子提取物、 阔叶山麦冬提 取物或人参提取物。 在本发明的实施例中， 所述有机溶剂可以是 C1-C5 低级醇、 乙醚、 乙酸乙 酯或氯仿， 但不会特定地限于这些溶剂。所述 C1-C5 低级醇可以为如选自甲醇、 乙醇、 异丙 醇、 正丙醇、 正丁醇和异丁醇中的至少一种溶剂。
人参皂苷， 是人参的典型的生理活性成分， 均匀地分布于人参的地面和地下部分。 然而， 已知的是人参皂苷的含量和组成随人参部位， 如根、 叶、 果实等的不同而不同。
至今， 超过 30 种的人参皂苷已从人参皂素中分离并识别出。在人参皂苷中， 原人 参二醇基皂素的人参皂苷 Rb1、 Rb2、 Rc 和 Rd 及原人参三醇基皂素的人参皂苷 Re 和 Rg1 占 其主导地位。
人参浆果是人参最有价值的部分之一， 收割人参浆果以获得其种子。 通常， 仅在人 参培养期的第四年收割一次人参浆果。在人参浆果中， 人参皂苷的含量顺序为人参皂苷 Re > Rg1 > Rb1 > Rc > Rd， 这不同于其在人参根中的含量顺序。特别地， 人参浆果含有大量 几乎在人参根中不存在的人参皂苷 Re。
由于人参皂苷是人参的典型的生理活性成分， 人参皂苷组合物的差异表明人参的 根与浆果可表现出不同的活性。已知人参浆果的典型的皂素——人参皂苷 Re 对预防大脑 局部缺血 / 再灌注损伤有效， 而且通过调节涉及细胞凋亡的 Bcl-2 和 Bax 蛋白的表达预防 帕金森氏症。另外， 已知人参皂苷 Re 通过调节 NO/cGMP/PKG 通路提高精子获能。
人参皂苷具有如上所述的全部的各种生理活性， 众所周知当口服给药时它们不能 被很好的吸收。 人参浆果的典型的生理活性成分——人参皂苷 Re 也不能被很好的吸收。 因 此， 提高人参皂苷的生物利用度是必要的， 特别是提高人参的人参皂苷 Re 的生物利用度， 以更有效地利用人参浆果。
在本发明的一个实施例的组合物中， 所述五味子提取物和阔叶山麦冬提取物通过 提高在人参提取物中， 特别是人参浆果提取物中的人参皂素的生物利用度， 来提高人参皂 素的生理活性。特别地， 它们可以提高人参皂苷 Re 的生物利用度， 人参皂苷 Re 为人参浆果 中最为丰富的皂素。五味子提取物或阔叶山麦冬提取物可以提高人参皂素的生物利用度的原因在于 五味子提取物或阔叶山麦冬提取物中含有的成分影响人参皂素的吸收和代谢。 多数口服物 质在胃肠道中被吸收， 然后通过血液的流通转移到肝脏。 相当数量的物质在肠道内代谢， 在 肠道中发生药物 - 药物或药物 - 食物的相互作用。因为这个原因， 吸收和代谢根据服用的 物质而变化巨大。在本发明中， 认为在五味子和阔叶山麦冬中存在的人参皂素 - 类物质使 人参皂素免于受到肠道细菌的代谢和在肝脏内的代谢， 因此减少人参皂素的分解从而增加 转移到血液中的人参皂素。
在本发明的一个典型实施例中， 选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少 一种提取物的每种的质量含量是基于 100 份质量的人参提取物的 10 ～ 1000 份的质量。在 本发明的另一个实施例中， 选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少一种提取物的 每种的质量含量是基于 100 份质量的人参提取物的 10 ～ 500 份的质量。
在本发明的另一个实施例中， 选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少一 种提取物的每种的质量含量是基于 100 份质量的人参提取物的 10 ～ 200 份的质量。上述 范围在保证所述组合物的稳定性和安全性且提供良好的成本效益的同时， 也足以达到本发 明所期望的效果。更为特别地， 由于期望选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少 一种提取物的浓度足以提高皂素的生物利用度， 因此选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取 物中的至少一种提取物的质量含量可以为基于 100 份质量的人参提取物的多于 10 份的质 量。考虑到生物利用度的上限， 含量超过 1000 份质量将不切实际。 另一方面， 本发明提供用于提高皂素的生物利用度的一种组合物， 包含选自五味 子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少一种提取物作为活性成分。 所述皂素可以为源自人 参的皂素， 特别为源自人参浆果的皂素， 更特别为人参皂苷 Re。
在本发明的一个实施例中， 可仅包括所述五味子提取物或阔叶山麦冬提取物。在 本发明的另一个实施例中， 可同时包括所述五味子提取物和阔叶山麦冬提取物。在本发明 的另一个实施例中， 所述五味子提取物和阔叶山麦冬提取物的重量比可以为从 100:1 至 1:100， 特别为从 50:1 至 1:50， 更特别为 10:1 至 1:10， 更特别为 5:1 至 1:5。上述范围在保 证所述组合物的稳定性和安全性且提供良好的成本效益的同时， 也足以达到本发明所期望 的效果。
本发明也提供包含本发明的上述组合物的保健食品组合物。可以通过添加通常 用于保健食品的赋形剂或添加剂的方式将所述组合物制成各种剂型， 包括饮剂、 丸剂、 颗粒 剂、 片剂、 胶囊剂、 代餐条等。根据组合物的剂型或目的， 除了活性成分， 所述保健食品组合 物可以进一步包含常用的其它成分。其它成分的添加可以产生协同效应。
所属领域的技术人员可以适当地确定所述活性成分的给药剂量。 每日的给药剂量 会根据多种因素而不同， 包括受试者的年龄和身体状况、 病发症状等。对于成年人， 所述组 合物的一般给药剂量为 1-500mg/kg 体重， 特别为 30-200mg/kg 体重。可以在一天内进行一 次或几次给药。但是， 所述给药剂量不会以任何方式限制本发明的范围。
本发明也提供一种药物组合物， 其包含本发明的上述组合物。所述药物组合物可 以通过加入常用的有机或无机载体， 以固体、 半固体、 或液体剂型口服给药， 或可以肠外给 药， 如直肠给药、 局部给药、 经皮给药、 静脉注射、 肌肉注射、 腹腔注射或皮下注射。特别地， 可以口服给药。
口服给药的剂型可以为片剂、 丸剂、 颗粒剂、 软 / 硬胶囊剂、 粉末剂、 细粒剂、 粉剂、 乳剂、 糖浆、 丸剂、 液体等。肠外给药的剂型可以为注射液、 滴剂、 膏药、 洗剂、 喷雾、 悬浮剂、 乳胶、 栓剂、 贴片剂等， 但不限于这些形式。
根据通常采用的方法可将本发明的所述活性成分容易地制成这样的剂型， 也可适 当地使用常用的佐剂如表面活性剂、 赋形剂、 稀释剂、 润滑剂、 粘合剂、 崩解剂、 着色剂、 香 料、 甜味剂、 防腐剂、 稳定剂等。
活性成分的药学上可接受的剂量， 如给药剂量， 将根据受试者的年龄、 性别和体 重， 特定的疾病或待治疗的病理状态、 疾病的严重程度或病理状态、 给药途径、 或医嘱而不 同。基于这些因素确定给药剂量在本领域普通技术人员的知识范围内。一般的给药剂量为 0.001-2000mg/kg/ 天， 更特别为 0.5-2.5mg/kg/ 天。 但是， 所述给药剂量不会以任何方式限 制本发明的范围。 实施例 参考实施例和测试实施例， 将更为详细的说明本发明的组成和效果。以下实施例 和测试实施例仅作说明目的， 并不是为了限制本发明的范围。
[ 实施例 ] 人参浆果提取物、 五味子提取物和阔叶山麦冬提取物的制备 收获新鲜的人参浆果。去除种子后， 在阳光下或利用热空气将人参浆果的果肉和果皮 干燥。将 3L 的水加入 1kg 已干燥的人参浆果中。回流提取， 然后过滤， 并且在 40-45ºC 下 减压浓缩， 获得人参浆果提取物。以与人参浆果提取物的制备方法相同的方法制得五味子 提取物和阔叶山麦冬提取物。
[ 测试实施例 1] 人参浆果中的人参皂苷的成分分析 用乙醚处理实施例中制备的人参浆果提取物， 以清除油溶性成分。 然后， 用丁醇 （BuOH） 萃取粗皂素并浓缩。使用高效液相色谱法 （HPLC） 分析人参皂苷的成分。结果如表 1 所示。
【表 1】
成分 人参皂苷 Re 人参皂苷 Rb1 人参皂苷 Rb2 人参皂苷 Rc 人参皂苷 Rd 人参皂苷 Rg1 人参皂苷 Rg2 含量 (%) 11.06 0.77 1.9 2.11 1.65 1.66 0.84如表 1 所示， 在人参浆果提取物中的人参皂苷中， 人参皂苷 Re 的含量最高。
[ 测试实施例 2] 对含有五味子提取物或阔叶山麦冬提取物及人参浆果提取物的 组合物提高人参皂苷 Re 的生物利用度的效果的评估 对含有五味子提取物或阔叶山麦冬提取物及人参浆果提取物的组合物提高人参皂苷 Re 的生物利用度的效果评估如下。
步骤 1. 测试动物及样品的准备和处理 准备 48 只平均体重为 23.55g 的雄性 ICR 小鼠作为测试动物。将它们分为 3 组 （对照 组， 测试组 1 和测试组 2） ， 每组各有 16 只。待以普通饲料喂养一周后， 禁食 12 个小时， 按照 表 2 所述地将样品口服给药至小鼠。6CN 102458434 A
【表 2】组 对照组 测试组 1 测试组 2说明书5/8 页处理方法 将含有 11.06% 人参皂苷 Re 的人参浆果提取物溶解于去离子水获得 50mg/10mL/kg 的人参皂苷 Re， 然后以 453mg/10mL/kg 的剂量口服给药至小鼠。 将人参浆果提取物及五味子提取物 1:1 的混合物 [ 人参浆果提取物 + 五味子提取物 =(453mg+453mg)/10mL/ kg] 口服给药至小鼠 将 人 参 浆 果 提 取 物 及 阔 叶 山 麦 冬 提 取 物 1:1 的 混 合 物 [ 人 参 浆 果 提 取 物 + 阔 叶 山 麦 冬 提 取 物 =(453mg+453mg)/10mL/kg] 口服给药至小鼠步骤 2. 血液样本的采集和血清的分离 待口服给药 10、 20、 30 和 60 分钟及 2、 4、 8 和 24 小时后， 使用扁平毛细管从小鼠的眼眶 后静脉丛中采集血液。将每组 16 只小鼠再分成 4 小组， 并且在每个时间周期 （10 分钟和 2 小时 ； 20 分钟和 4 小时 ； 30 分钟和 8 小时 ； 60 分钟和 24 小时） 从 4 只小鼠中采集 2 次血液。 所述血液在 13,000 rpm 下离心 （Micro 12, Hanil, Korea） 10 分钟， 从而分离出用于分析 的血清。
步骤 3. 药理分析 根据以前报道的方法 （Wang BYG et. al, Biol. Pharm. Bull. 30(9) 1657-1662 ） 处 理血清， 以用于药理分析。利用 UPLC/MS (SIR 模式 ) 分析人参皂苷 Re 的含量。其量化精 度为 5ng/mL（检出限 ： 1 ng/mL） ， 而且使用二醇组人参皂苷、 化合物钾作为内部标准。人参 皂苷的生物利用度可以表示为 Cmax、 Tmax 和 AUC 值。结果如表 3 所示。
【表 3】Cmax(ng/mL) Tmax(hr) AUC(ng·hr/mL) 对照组 35.3±59.5 0.4±0.2 103.36±56.7 测试组 1 485.47±46.6 0.4±0.2 447.09±100.3 测试组 2 90.35±56.1 0.5±0.4 173.78±50.1* Cmax(ng/mL) ： 从观察的血清浓度或浓度 - 时间曲线中计算或评价而得的最大血清浓 度。 * Tmax(hr) ： Cmax 出现的时间点。
* AUC（曲线下方的面积 ； ng·hr/mL） ： 血清浓度 - 时间曲线下方的面积。
如表 3 所示，全 3 组的 Tmax 都为 0.4-0.5 小时， 并无显著差异。然而， 将五味子提 取物一起给药与人参浆果提取物单独给药相比， 表示生物利用度的 Cmax 值和 AUC 值分别增 长 13.7 倍和 3.32 倍。而且， 将阔叶山麦冬提取物一起给药与人参浆果提取物单独给药相 比， 表示生物利用度的 Cmax 值和 AUC 值分别增长 2.56 倍和 1.68 倍。因此， 这表明当五味子 提取物或阔叶山麦冬提取物与人参浆果提取物一同给药时， 它们可以提高人参浆果的活性 成分——人参皂苷 Re 的生物利用度。
[ 测试实施例 3] 确定人参浆果提取物与五味子提取物的最佳比例的测试 以与测试实施例 2 相同的方式进行测试， 来确定人参浆果提取物和五味子提取物的最 佳比例， 用于使人参皂苷 Re 的生物利用度最大化。按照如表 4 所描述的准备测试组 3 和 4， 并将测试样品口服给药， 以评估五味子提取物和人参浆果提取物的比率对提高人参皂苷 Re 的生物利用度的效果的差异。
【表 4】
7CN 102458434 A组 测试组 3 测试组 4说明书6/8 页治疗 将 人 参 浆 果 提 取 物 和 五 味 子 提 取 物 1:0.5 的 混 合 物 [ 人 参 浆 果 提 取 物 + 五 味 子 提 取 物 =(453mg+226.5mg)/10mL/kg] 口服给药至小鼠。 将 人 参 浆 果 提 取 物 和 五 味 子 提 取 物 1:2 的 混 合 物 [ 人 参 浆 果 提 取 物 + 五 味 子 提 取 物 =(453mg+906mg)/10mL/kg] 口服给药至小鼠。以与测试实施例 2 相同的方式进行药理分析。结果如表 5 所示。
【表 5】Cmax(ng/mL) Tmax(hr) AUC(ng·hr/mL) 对照组 35.3±59.5 0.4±0.2 103.36±56.7 测试组 3 282.1±78.9 1.1±1.1 269.8±22.2 测试组 4 2655.5±59.7 0.5±0.1 2320.4±84.2同测试实施例 2 中、 将人参浆果提取物单独给药的对照组相比， 测试组 3 显示， 表示生 物利用度的 Cmax 和 AUC 分别增加了 8 倍和 2.61 倍。同测试实施例 2 的对照组相比， 测试组 4 显示， Cmax 和 AUC 分别增加了 75.2 倍和 22.4 倍。也就是说， 当人参浆果提取物和五味子 提取物以 1:2 的比例混合时， 人参皂苷 Re 的生物利用度更高。
从测试实施例 2 和 3 的结果中可以看出五味子提取物的含量比人参浆果提取物的 含量越高， 人参皂苷 Re 的生物利用度也越高。 下面将详细描述本发明保健食品和药物组合物的剂型实施例， 所述保健食品和药 物组合物包含选自五味子提取物和阔叶山麦冬提取物中的至少一种提取物及人参提取物。 下列实施例仅作说明目的， 并不是为了限制本发明的范围。
[ 剂型实施例 1] 保健食品的制备
保健食品中的维生素和矿物质的典型含量可以根据需求作出改变。 根据通常采用的保 健食品的制备方法将上述成分混合并制成颗粒， 用于制备保健食品组合物。
[ 剂型实施例 3] 保健饮料的制备人参浆果提取物和五味子提取物或阔叶山麦冬提取物 柠檬酸 低聚糖 梅子提取物 牛磺酸 制备的纯净水 1000mg 1000mg 100g 2g 1g 900mL根据通常采用的保健饮料的制备方法将上述成分混合， 并在 85ºC 下搅拌加热 1 小时。将所得溶液放入 2L 的消毒容器内， 密封并消毒， 然后存放于冰箱中， 用于制备保健饮料组 合物。
考虑到地区和民族喜好， 如特定的客户、 国家、 使用目的等， 可以改变所述保健饮 料的组成。
[ 剂型实施例 3] 丸剂的制备 将质量分数为 20wt% 的人参浆果提取物与 10wt% 的五味子提取物或阔叶山麦冬提取 物、 30wt% 的玉米淀粉、 20wt% 的甘油和 20wt% 的山梨醇粉混合， 然后利用药丸成形机将其制 成丸剂。最终重量为 3.5g。
[ 剂型实施例 4] 片剂的制备 将质量分数为 20wt% 的人参浆果提取物与 10wt% 的五味子提取物或阔叶山麦冬提取 物、 20.5wt% 的乳糖、 20wt% 的糊精、 20wt% 的麦芽糖醇粉和 7wt% 的木糖醇粉混合， 再利用流 化床干燥机将制成颗粒， 然后加入 2.5 wt% 糖酯后制成片剂。最终重量为 2g。
[ 剂型实施例 5] 颗粒剂的制备 将质量分数为 20wt% 的人参浆果提取物与 10wt% 的五味子提取物或阔叶山麦冬提取 物、 5wt% 的木糖醇和 65wt% 的异麦芽酮糖醇混合， 利用流化床干燥机将其制成颗粒， 然后装 入小袋。最终重量为 2g。10