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1、(10)授权公告号 CN 102772820 B (45)授权公告日 2014.06.18 CN 102772820 B (21)申请号 201210299092.9 (22)申请日 2012.08.21 A61L 15/28(2006.01) A61L 15/18(2006.01) A61L 15/44(2006.01) A61L 15/42(2006.01) (73)专利权人 中国人民解放军军事医学科学院 卫生装备研究所 地址 300161 天津市河东区万东路 106 号 (72)发明人 李钒 刘长军 田丰 杨健 张彦军 杜振杰 孙秋明 (74)专利代理机构 天津市北洋有限责任专利代 理事。
2、务所 12201 代理人 陆艺 US 2007/0225631 A1,2007.09.27, 全文 . US 2009/0186851 A1,2009.07.23, 全文 . CN 101991875 A,2011.03.30, 全文 . CN 102580685 A,2012.07.18, 全文 . Matthew B. Dowling等.A self-assembling hydrophobically modified chitosan capable of reversible hemostatic action. Biomaterials .2011, 第 32 卷 ( 第 13 期。
3、 ), 参 见第 3351-3357 页， 尤其是摘要、 2、 材料与方法、 3、 结果与讨论、 以及图 1-5. Jae-Ho Lee 等 .Vesicle-Biopolymer Gels: Networks of Surfactant Vesicles Connected by Associating Biopolymers. Langmuir .2005, 第 21 卷 ( 第 1 期 ), 第 27 页 材料与方法 . 戴程隆 . 用于局部快速止血和骨修复的可降 解介孔硅基干凝胶设计制备与性能研究 .中国 博士学位论文电子期刊网 .2011, 第 37-38 页及 第 85-94 页 。
4、. (54) 发明名称 烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止 血粉及制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二 氧化硅复合快速止血粉及制备方法， 方法为 ： 1） 烷基改性壳聚糖制备 ； 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制 备 ； 3） 复合快速止血粉制备 ： 将烷基改性壳聚糖 溶于乙酸水溶液中， 加入聚乙二醇 20000， 溶解后 加入步骤 2） 制备的介孔硅二氧化硅颗粒， 室温搅 拌， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于二甲基亚砜中， 调 pH 值， 离心、 用去离子水洗涤后冷冻干燥， 得到烷 基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉。 本发明的止血粉能快速止血， 适用于。
5、严重出血伤 员的院前紧急救治。 该材料止血速率极快， 止血效 果优， 生物和组织相容性良好， 无任何副作用。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 潘艺茗 权利要求书 1 页 说明书 7 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 (10)授权公告号 CN 102772820 B CN 102772820 B 1/1 页 2 1. 一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 其特征在于包括 以下步骤 ： 1） 烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例， 将 4g 平均分子量为 150-300K、 脱乙酰度。
6、为 75 -85% 的壳聚糖加入到 200ml 体积浓度为 0.5-3的乙酸水溶液中， 完全溶解后， 加入 150ml 乙醇 共混， 用氢氧化钠水溶液调节pH值为4-6， 加入10ml浓度为15-25mg/ml的对十八烷基苯甲 醛乙醇溶液， 再加入 2-5mg 硼氢化氰钠， 在室温下搅拌 24 小时， 用氢氧化钠水溶液调 pH 值 到7， 加入200ml乙醇沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为70%、 85%的乙醇水溶液和乙醇洗 涤， 冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ； 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制备 ： 将200ml正硅酸乙酯、 100ml乙醇、 20-25ml平均分子量为 5800 的聚醚。
7、多元醇 P123、 10ml 2M 盐酸在 45混和搅拌 4-6 小时， 在 500-650煅烧 5-8h， 球磨 2-4h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ； 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 0.5-2的乙酸 水溶液中， 加入 6-9g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 15-30g 步骤 2） 制备的介孔硅二氧化硅颗 粒， 室温搅拌 24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于 300ml 二甲基亚砜中， 用氢氧化钠水溶液调 pH 值 =7， 离心、 用去离子水洗涤 3-5 次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复 合快速。
8、止血粉。 2. 权利要求 1 的方法制备的烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉。 权 利 要 求 书 CN 102772820 B 2 1/7 页 3 烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉及制备方 法 技术领域 0001 本发明涉及一种止血材料及制备方法， 尤其是涉及一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二 氧化硅复合快速止血粉及其制备方法。 背景技术 0002 外伤出血是战场和平时各类事故现场的最常见伤情之一， 出血失控是导致伤员现 场死亡和后期严重并发症 （如截肢等） 的首要原因。因此， 在现场和院前对伤员出血进行有 效控制意义重大。 止血带是能控制出血的救生器材， 但人体很多部。
9、位如胸、 腹、 头、 颈等处无 法使用止血带。传统的止血材料 （如棉纱、 绷带） 对于不规则形状、 深、 窄、 动脉破裂等现场常 见创伤的止血效果很不理想。因此， 开发针对现场和院前急救用快速、 安全、 有效的新型止 血材料成为材料科学领域中的重要课题。 0003 目前快速止血材料的研究主要集中于高分子多糖类和无机类止血材料。 0004 高分子多糖类止血材料的典型代表是壳聚糖。自从 1983 年 Malette WG 等首次发 现壳聚糖的止血功能后， 国内外学者纷纷尝试用壳聚糖研制止血敷料。壳聚糖的止血机理 可能为 ： 与组织紧密粘着， 封闭创面 ； 降低局部一氧化氮浓度而导致血管收缩， 减少。
10、血 流， 降低血管内压 ； 促进红细胞、 凝血因子、 血小板等在伤口局部聚集等。2002 年 HemCon 壳聚糖敷料获美国食品与药品管理局 （FDA） 认可， 随后在美军阿富汗和伊拉克战场发挥重 要作用而闻名于世， HemCon 是壳聚糖醋酸溶液冻干后的薄片。2007 年出现了 CELOX 止血 粉， 其功能成分为颗粒状的壳聚糖。此外还有一种淀粉多糖止血材料 TraumaDEX， 其为粒径 30 100m、 表面多孔的球形颗粒， 能够从血液中吸收水分及低分子量的成分， 进而使凝 血因子和血小板浓集而达到促进血凝块形成的目的。 最近Srinivasa R.Raghavan课题组在 壳聚糖主链上。
11、接枝疏水性烷基链段的研究中发现， 疏水改性壳聚糖对肝素化的人全血具有 凝胶化作用， 0.25wt% 的疏水改性壳聚糖可使全血立即凝胶化， 其原理是改性壳聚糖的烷基 疏水链段可以嵌入血小板、 红细胞和白细胞的细胞膜， 形成血细胞网络凝胶。然而， 研究表 明高分子多糖类止血材料对于严重出血创面的效果并不稳定。在 Kheirabadi 等的动脉出 血动物模型试验中， 壳聚糖敷料虽然最初实现了 70动物的止血并延长了动物存活时间， 但所有动物均在 120 分钟后止血失败。而在 Acheson 等更严重的动脉出血模型试验中， 壳 聚糖敷料在减少出血和延长存活时间上几乎没有作用。Alam HB 等在猪股动。
12、静脉横切出血 模型的结果也表明， 与传统止血材料相比， TraumaDEX 在减少失血量， 降低死亡率方面无明 显优势。 0005 无机类止血材料的研究是从沸石开始的。20 世纪 80 年代， 沸石被无意中发现 具有优秀的止血作用。2002 年 5 月， QuikClot 沸石止血粉通过 FDA 的批准用于严重出血 创伤的急救。其作用机理是 ： 吸收血液中的水分， 使凝血因子和血小板浓集而达到促进 凝血的效果。也有研究提示沸石应用后的放热反应造成的组织热凝固也对凝血有一定的 促进作用。2007 年出现了由蒙脱石颗粒构成的 WoundStat 止血材料。Ward 等发现， 与标 说 明 书 CN。
13、 102772820 B 3 2/7 页 4 准纱布、 HemCon 和 QuikClot 比较， WoundStat 可明显提高存活率， 减少出血量， 但雨水环 境下其止血效果下降。Kheirabadi 等在 6mm 动脉切开动物模型上的研究表明， 与 Celox、 HemCon 等比较， WoundStat 的止血性能最佳。推出 QuikClot 的 Z-Medica 公司于 2007 年 又推出新产品 Combat Gauze， 这是一种混合了高岭土的柔顺布料。目前 Combat Gauze 被 推荐作为战场致命出血急救产品替代 HemCon。然而， 无机类止血材料的生物安全性往往 存在。
14、一定缺陷， QuikClot 的缺点是使用时的放热反应会产生超过 100高温， 造成创面组 织伤害。Wright 等在研究沸石止血作用时发现沸石遗留在组织中会出现炎症反应， 有的甚 至出现脓肿。Gerlach 等对 WoundStat 长时间应用的安全性进行了研究， 结果表明 ： 虽然 WoundStat 可有效止血， 但直到使用后 5 周仍伴随着明显的炎症反应以及对神经和血管的 伤害。Kheirabadi 课题组的研究结果也表明， WoundStat 颗粒状止血材料很容易在脉管内 腔残留， 阻塞末梢动脉流动形成血栓， 甚至在部分动物肺部发现了小的血凝块。因此， 基于 生物安全考虑， 美军已宣。
15、布禁止使用 Woundstat。 0006 无论是基于沸石材料的 QuikClot， 基于蒙脱石的 WoundStat， 还是基于高岭土的 Combat Gauze， 都利用了天然硅铝酸盐材料多孔结构、 高比表面积等特性， 通过吸收血液中 水份， 浓缩创面局部的凝血成分， 从而实现快速止血。 而人工制备的介孔硅材料同样具有多 孔结构、 高比表面积等特性， 而且比天然硅铝酸盐材料具有成分、 粒径、 孔径可控等优势， 近 年来已有部分研究者尝试将介孔硅材料应用于止血。TraumaStat 是一种结合了介孔硅、 壳 聚糖和聚乙烯材料的一种新型止血材料。 国内周来生课题组开发了钙、 磷、 硅等多种无机。
16、元 素组成的无机活性元素骨组织工程支架材料， 在动物试验和临床应用中， 发现该材料具有 优良的止血性能。Changsheng Liu 课题组在介孔硅材料作骨修复材料研究中， 发现介孔硅 材料具有优秀的止血性能， 并在介孔硅材料基础上引入抗菌成分银和凝血因子钙离子制备 了载银含钙介孔硅材料AgCaMSS， 又利用壳聚糖-介孔硅干凝胶混合制备了CSSX材料， 两种 材料均具有较优的止血性能。 Baker等在介孔硅材料上固定了凝血酶， 实验表明,介孔硅泡 沫材料固定凝血酶后可显著较少凝血时间。 然而， 同硅铝酸盐止血材料一样， 介孔硅止血材 料的生物安全性也同样值得重视。Hudson 等研究了不同粒。
17、径和孔径的介孔硅颗粒在皮下、 腹膜内和静脉内的生物安全性， 结果显示， 虽然介孔硅颗粒的局部组织反应是良性的， 但是 进入脉管和组织器官的介孔硅颗粒会引起严重的全身毒性。 0007 本申请的发明人认为,Srinivasa R.Raghavan课题组的烷基改性壳聚糖乙酸溶液 可以使全血立即凝胶化， 但较低的凝胶强度和凝胶化后的水残留问题并不利于实际应用中 的止血控制 ； 介孔硅材料可吸收血液中水份， 浓缩局部凝血成分， 从而实现快速止血， 但颗 粒物易残留带来的生物安全性隐患不容忽视。 发明内容 0008 本发明的目的是在于克服现有技术的不足， 提供一种能保障快速止血的同时， 兼 备良好的生物和。
18、组织相容性， 并解决颗粒物易残留带来的生物安全性隐患的烷基改性壳聚 糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉。 0009 本发明的第二个目的是提供一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血 粉的制备方法。 0010 本发明的技术方案概述如下 ： 说 明 书 CN 102772820 B 4 3/7 页 5 0011 一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0012 1）烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例， 将 4g 平均分子量为 150-300K、 脱乙酰度为 75 -85% 的壳聚糖加入到 200ml 体积浓度为 0.5-3的乙酸水溶液中， 完全溶解后。
19、， 加入 150ml 乙醇共混， 用氢氧化钠水溶液调节 pH 值为 4-6， 加入 10ml 浓度为 15-25mg/ml 的对 十八烷基苯甲醛乙醇溶液， 再加入2-5mg硼氢化氰钠， 在室温下搅拌24小时， 用氢氧化钠水 溶液调 pH 值到 7， 加入 200ml 乙醇沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为 70%、 85% 的乙醇水 溶液和乙醇洗涤， 冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ；（烷基改性壳聚糖的接枝率为 1% 8%。 ） 0013 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制备 ： 将 200ml 正硅酸乙酯、 100ml 乙醇、 20-25ml 平均分 子量为 5800 的聚醚多元醇 P123、 。
20、10ml2M 盐酸在 45混和搅拌 4-6 小时， 在 500-650煅烧 5-8h， 球磨 2-4h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ； 0014 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 0.5-2的 乙酸水溶液中， 加入 6-9g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 15-30g 步骤 2） 制备的介孔硅二氧化 硅颗粒， 室温搅拌 24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于 300ml 二甲基亚砜中， 用氢氧化钠水溶 液调pH值=7， 离心、 用去离子水洗涤3-5次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖/介孔二氧化 硅复合快速止血粉。 0015 上述。
21、方法制备的烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉。 0016 本发明的烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉能快速止血， 特别适用 于严重出血伤员的院前紧急救治。该材料止血速率极快 （对兔全血和肝素血的体外凝血时 间均小于 10s） ， 止血效果优于目前市面上的壳聚糖和分子筛类产品， 生物和组织相容性良 好， 无任何副作用。 附图说明 0017 图 1 为本发明中烷基改性壳聚糖的紫外可见光吸收光谱图。 0018 图 2 为本发明中介孔二氧化硅颗粒的扫描电镜照片。 0019 图 3 为本发明中烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的浸提液培养 L929 细胞， 24h 后。
22、细胞生长状态。参考 GB/T 16886.5-2003医疗器械生物学评价第 5 部 分 ： 体外细胞毒性试验 测定， 细胞毒性复合相关标准。 具体实施方式 0020 为了使本技术领域的人员更好地理解本发明技术方案， 下面结合附图和实施方式 对本发明作进一步的详细说明。 0021 实施例 1 0022 一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0023 （1） 烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例， 将 4g 平均分子量为 300K、 脱乙酰度为 85% 的壳 聚糖加入到 200ml 体积浓度为 1的乙酸水溶液中， 完全溶解后， 加入 150ml 乙醇共混， 。
23、用 1M 氢氧化钠水溶液调节 pH 值为 5， 加入 10ml 浓度为 25mg/ml 的对十八烷基苯甲醛乙醇溶 液， 再加入 5mg 硼氢化氰钠， 在室温下搅拌 24 小时， 用 1M 氢氧化钠水溶液调 pH 值到 7， 加 说 明 书 CN 102772820 B 5 4/7 页 6 入 200ml 乙醇沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为 70%、 85% 的乙醇水溶液和乙醇洗涤， 冷 冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ； 0024 图1为烷基改性壳聚糖的紫外-可见光吸收光谱图， 可看到与壳聚糖原料相比， 改 性壳聚糖 270nm 处有明显的苯环吸收峰。 0025 2） 介孔硅二氧化硅颗粒。
24、制备 ： 将 200ml 正硅酸乙酯、 100ml 乙醇、 25ml 平均分子量 为 5800 的聚醚多元醇 P123、 10ml 2M 盐酸在 45混和搅拌 5 小时， 在 600煅烧 8h， 球磨 3h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ； 0026 图 2 为介孔硅二氧化硅颗粒的扫描电镜图片。 0027 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 0.5的 乙酸水溶液中， 加入 8g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 20g 步骤 2） 制备的介孔硅二氧化硅颗 粒， 室温搅拌 24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于 300ml 二甲基亚砜中，。
25、 用 1M 氢氧化钠水溶液 调pH值=7， 离心、 用去离子水洗涤4次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖/介孔二氧化硅复 合快速止血粉。 0028 图 3 为烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉浸提液培养 L929 细胞 24 小时后细胞的生长状态， 细胞绝大部分生长良好， 表明烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复 合快速止血粉具有良好的生物相容性。 0029 实施例 2 0030 一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0031 烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例， 将 4g 平均分子量为 200K、 脱乙酰度为 75的壳聚 糖加入到 200ml。
26、 体积浓度为 1的乙酸水溶液中， 完全溶解后， 加入 150ml 乙醇共混， 用 1M 氢氧化钠水溶液调节 pH 值为 5， 加入 10ml 浓度为 25mg/ml 的对十八烷基苯甲醛乙醇溶液， 再加入 5mg 硼氢化氰钠， 在室温下搅拌 24 小时， 用氢氧化钠水溶液调 pH 值到 7， 加入 200ml 乙醇沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为 70%、 85% 的乙醇水溶液和乙醇洗涤， 冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ； 0032 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制备 ： 将 200ml 正硅酸乙酯、 100ml 乙醇、 25ml 平均分子量 为 5800 的聚醚多元醇 P123、 10ml 。
27、2M 盐酸在 45混和搅拌 5 小时， 在 600煅烧 8h， 球磨 2h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ； 0033 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 0.5-2的 乙酸水溶液中， 加入 9g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 20g 步骤 2） 制备的介孔硅二氧化硅颗 粒， 室温搅拌 24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于 300ml 二甲基亚砜中， 用氢氧化钠水溶液调 pH 值 =7， 离心、 用去离子水洗涤 3-5 次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复 合快速止血粉。 0034 实施例 3 0035 一种烷基。
28、改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0036 （1） 烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例， 将 4g 平均分子量为 150K、 脱乙酰度为 85% 的壳 聚糖加入到 200ml 体积浓度为 1的乙酸水溶液中， 完全溶解后， 加入 150ml 乙醇共混， 用 1M 氢氧化钠水溶液调节 pH 值为 5， 加入 10ml 浓度为 25mg/ml 的对十八烷基苯甲醛乙醇溶 说 明 书 CN 102772820 B 6 5/7 页 7 液， 再加入 5mg 硼氢化氰钠， 在室温下搅拌 24 小时， 用 1M 氢氧化钠水溶液调 pH 值到 7， 加 入 200ml 乙醇。
29、沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为 70%、 85% 的乙醇水溶液和乙醇洗涤， 冷 冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ； 0037 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制备 ： 将 200ml 正硅酸乙酯、 100ml 乙醇、 25ml 平均分子量 为 5800 的聚醚多元醇 P123、 10ml 2M 盐酸在 45混和搅拌 5 小时， 在 600煅烧 8h， 球磨 4h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ； 0038 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 0.5的乙 酸水溶液中， 加入 6g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 20g 步骤 2） 制。
30、备的介孔硅二氧化硅颗粒， 室温搅拌24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于300ml二甲基亚砜中， 用氢氧化钠水溶液调pH值 =7， 离心、 用去离子水洗涤 5 次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速 止血粉。 0039 实施例 4 0040 一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0041 （1） 烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例， 将 4g 平均分子量为 300K、 脱乙酰度为 85% 的壳 聚糖加入到 200ml 体积浓度为 0.5的乙酸水溶液中， 完全溶解后， 加入 150ml 乙醇共混， 用 1M 氢氧化钠水溶液调节 pH 值。
31、为 4， 加入 10ml 浓度为 15mg/ml 的对十八烷基苯甲醛乙醇 溶液， 再加入2mg硼氢化氰钠， 在室温下搅拌24小时， 用1M氢氧化钠水溶液调pH值到7， 加 入 200ml 乙醇沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为 70%、 85% 的乙醇水溶液和乙醇洗涤， 冷 冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ； 0042 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制备 ： 将 200ml 正硅酸乙酯、 100ml 乙醇、 25ml 平均分子量 为 5800 的聚醚多元醇 P123、 10ml 2M 盐酸在 45混和搅拌 4 小时， 在 500煅烧 8h， 球磨 3h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ；。
32、 0043 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 2的乙酸 水溶液中， 加入 9g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 15g 步骤 2） 制备的介孔硅二氧化硅颗粒， 室 温搅拌 24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于 300ml 二甲基亚砜中， 用 1M 氢氧化钠水溶液调 pH 值 =7， 离心、 用去离子水洗涤 4 次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快 速止血粉。 0044 实施例 5 0045 一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0046 （1） 烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例。
33、， 将 4g 平均分子量为 300K、 脱乙酰度为 85% 的壳 聚糖加入到 200ml 体积浓度为 3的乙酸水溶液中， 完全溶解后， 加入 150ml 乙醇共混， 用 1M 氢氧化钠水溶液调节 pH 值为 6， 加入 10ml 浓度为 25mg/ml 的对十八烷基苯甲醛乙醇溶 液， 再加入 5mg 硼氢化氰钠， 在室温下搅拌 24 小时， 用 1M 氢氧化钠水溶液调 pH 值到 7， 加 入 200ml 乙醇沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为 70%、 85% 的乙醇水溶液和乙醇洗涤， 冷 冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ； 0047 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制备 ： 将 200ml 正硅。
34、酸乙酯、 100ml 乙醇、 20ml 平均分子量 为 5800 的聚醚多元醇 P123、 10ml 2M 盐酸在 45混和搅拌 6 小时， 在 650煅烧 5h， 球磨 说 明 书 CN 102772820 B 7 6/7 页 8 3h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ； 0048 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 0.5的 乙酸水溶液中， 加入 6g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 30g 步骤 2） 制备的介孔硅二氧化硅颗 粒， 室温搅拌 24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于 300ml 二甲基亚砜中， 用 1M 氢氧化钠水溶。
35、液 调pH值=7， 离心、 用去离子水洗涤4次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖/介孔二氧化硅复 合快速止血粉。 0049 实施例 6 0050 一种烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉的制备方法， 包括以下步 骤 ： 0051 （1） 烷基改性壳聚糖制备 ： 按比例， 将 4g 平均分子量为 300K、 脱乙酰度为 85% 的壳 聚糖加入到 200ml 体积浓度为 1的乙酸水溶液中， 完全溶解后， 加入 150ml 乙醇共混， 用 1M 氢氧化钠水溶液调节 pH 值为 5， 加入 10ml 浓度为 25mg/ml 的对十八烷基苯甲醛乙醇溶 液， 再加入 5mg 硼氢化氰钠， 在室温下。
36、搅拌 24 小时， 用 1M 氢氧化钠水溶液调 pH 值到 7， 加 入 200ml 乙醇沉淀， 离心， 沉淀物依次用体积浓度为 70%、 85% 的乙醇水溶液和乙醇洗涤， 冷 冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖 ； 0052 2） 介孔硅二氧化硅颗粒制备 ： 将 200ml 正硅酸乙酯、 100ml 乙醇、 20ml 平均分子量 为 5800 的聚醚多元醇 P123、 10ml 2M 盐酸在 45混和搅拌 5 小时， 在 650煅烧 8h， 球磨 4h， 150 目过筛后得到介孔硅二氧化硅颗粒 ； 0053 3） 复合快速止血粉制备 ： 将 4g 烷基改性壳聚糖溶于 200ml 体积浓度为 0.5。
37、的 乙酸水溶液中， 加入 8g 聚乙二醇 20000， 溶解后加入 20g 步骤 2） 制备的介孔硅二氧化硅颗 粒， 室温搅拌 24h， 将沉淀物冷冻干燥后悬浮于 300ml 二甲基亚砜中， 用 1M 氢氧化钠水溶液 调pH值=7， 离心、 用去离子水洗涤4次后冷冻干燥， 得到烷基改性壳聚糖/介孔二氧化硅复 合快速止血粉。 0054 实施例 2-6 制备的烷基改性壳聚糖具有类似实施例 1 的紫外 - 可见光吸收光谱 图。 0055 实施例 2-6 制备的介孔硅二氧化硅颗粒具有类似实施例 1 的扫描电镜图片。 0056 实验证明实施例2-6制备的烷基改性壳聚糖/介孔二氧化硅复合快速止血粉浸提 液。
38、培养L929细胞24小时后细胞的生长状态， 细胞绝大部分生长良好， 表明烷基改性壳聚糖 / 介孔二氧化硅复合快速止血粉具有良好的生物相容性。 0057 表 1 为本发明中壳聚糖原料和实施例 1 步骤 （1） 获得的烷基改性壳聚糖的元素分 析结果。 0058 表 1 改性壳聚糖的元素分析结果 0059 样品 N（） C（） H（） C/N ratio C/H ratio 壳聚糖 7.31 39.70 6.73 5.43 5.90 改性壳聚糖 7.08 41.60 7.11 5.87 5.85 说 明 书 CN 102772820 B 8 7/7 页 9 0060 由表 1 可以看出， 十八烷基苯甲基接枝壳聚糖后， 改性壳聚糖的 C 含量明显上升， 由于改性前后， N 元素物质的量是没有变化的， 所以 C/N 比例的变化证明了烷基改性壳聚糖 的生成。 说 明 书 CN 102772820 B 9 1/2 页 10 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 102772820 B 10 2/2 页 11 图 3 说 明 书 附 图 CN 102772820 B 11 。