使用藻酸盐低聚物和抗生素治疗不动杆菌 本发明涉及使用藻酸盐低聚物加强或改进抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 抵抗 不动杆菌生物体的功效、 特别是抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 抑制不动杆菌生物体生 长的有效性 ( 或功效 )。本发明基于对藻酸盐低聚物与抗生素之间抵抗不动杆菌的协同作 用的观察， 因此提供了与抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 一起使用 ( 或者联合或协同 ) 的 藻酸盐低聚物， 以抗击某位置的不动杆菌污染 ( 即， 建群 )、 抗击不动杆菌微生物体的群体， 特别是治疗受试对象的不动杆菌感染。
不动杆菌是严格好氧的非发酵革兰氏阴性杆菌的细菌属。 不动杆菌物种广泛分布 在自然界中， 并可以长期生存在湿或干的表面上。不动杆菌物种被认为对于健康对象是非 致病的， 但是越来越明显的是， 不动杆菌物种会在医院环境中保持存在很长时间， 并导致易 感染患者的医院内感染。鲍曼不动杆菌是医院获得性肺炎、 特别是晚发性呼吸机相关性肺 炎的常见致因， 其可导致各种其他感染， 包括皮肤和伤口感染、 菌血症和脑膜炎。鲁氏不动 杆菌也与脑膜炎有关。 包括溶血不动杆菌、 约氏不动杆菌、 琼氏不动杆菌、 抗辐射不动杆菌、 谭氏不动杆菌 (Acinetobacter tandoii)、 特氏不动杆菌 (Acinetobacter tjernbergiae)、 汤氏不动杆菌 (Acinetobacter towneri) 或邬氏不动杆菌的其他不动杆菌物种也与感染有 关。需要特别注意的是驻在中东 ( 例如伊拉克 ) 的美国士兵中鲍曼不动杆菌的流行。
需要留心的是， 事实上许多不动杆菌菌株似乎对于多种药物具有抗性， 因此使对 不动杆菌感染和污染的抗击变得比较困难。细菌的多重抗药性 (MDR) 描述的是以下情况， 其中细菌抵抗至少三类药物， 尤其是在细菌背景下抵抗至少三类抗微生物剂 ( 或者更特别 是抗菌剂 )， 特别是在本发明的背景下抵抗至少三类抗生素。 一类抗生素与不同类抗生素是 功能上不相关和 / 或结构上不相关的。细菌的 MDR 因此通常被称作多重抗菌药抗性或多重 抗抗生素抗性。在本领域和本文中这两个术语可以互换使用。显示多重抗药性表型 ( 或多 种抗菌药 / 抗生素抗性表型 ) 的细菌被称作 MDR 细菌 ( 或者有时称作 MAR 细菌 )。同样， 在 本领域和本文中这两个术语可以互换使用。
但是， 即便不动杆菌生物体是非 MDR 的， 不动杆菌感染也会引起问题。因此， 对于 安全并有效地治疗包括 MDR 不动杆菌的感染和污染在内的不动杆菌感染和污染存在着迫 切的需求。
藻酸盐是 (1-4) 连接的 β-D- 甘露糖醛酸 (M) 和 / 或其 C-5 差向异构体 α-L- 古 罗糖醛酸 (G) 的线性聚合物。藻酸盐的一级结构可以显著不同。M 和 G 残基可以被排列为 邻接的 M 或 G 残基的均聚嵌段、 排列为交替的 M 和 G 残基的嵌段， 并且可能发现单个 M 或 G 残基将这些嵌段结构隔开。藻酸盐分子可以包含一些或所有这些结构， 并且这些结构可能 在整个聚合物中不均匀地分布。极端情况下， 存在古罗糖醛酸的均聚物 ( 聚古罗糖醛酸 ) 或甘露糖醛酸的均聚物 ( 聚甘露糖醛酸 )。
间聚物已与海生褐藻 ( 例如， 丛梗藻属、 巨藻属和海带属的某些种 ) 和如铜绿假单 胞菌和棕色固氮菌等细菌分离。其他假单胞菌 ( 例如， 荧光假单胞菌、 恶臭假单胞菌和门多 萨假单胞菌 ) 保持产生藻酸盐的遗传能力， 但在野外它们不产生可检测水平的藻酸盐。通 过突变， 这些非生产性的假单胞菌可以被诱使而稳定产生大量藻酸盐。
藻酸盐作为聚甘露糖醛酸合成， 并且 G 残基通过差向异构酶 ( 特别是 C-5 差向异 构酶 ) 在聚合物中 M 残基上作用而形成。在提取自藻类的藻酸盐的情形中， G 残基主要被 排列为 G 嵌段， 这是因为在藻类中参与藻酸盐生物合成的酶优先将 G 残基引入来与另一个 G 邻接， 从而将 M 残基的延伸链转化成 G 嵌段。对这些生物合成系统的明晰已经使得能够生 产具有特定一级结构的藻酸盐 (WO 94/09124、 Gimmestad， M 等， Journal of Bacteriology， 2003， 第 185 卷 (12)3515-3523 和 WO 2004/011628)。
藻酸盐通常作为大型高分子量聚合物 ( 例如， 平均分子量为 300,000 道尔顿～ 500,000 道尔顿 ) 分离自天然来源。然而， 已知这种大型藻酸盐聚合物可以通过化学水解 或酶水解而降解或断裂， 从而产生较低分子量的藻酸盐结构。尽管重均分子量为约 35,000 道尔顿的藻酸盐已经被用在医药品中， 工业上使用的藻酸盐通常具有 100,000 道尔顿～ 300,000 道尔顿的重均分子量 ( 这种藻酸盐仍被认为是大型聚合物 )。
现已发现， 藻酸盐低聚物可以显著增强抗生素 ( 特别是包括大环内酯类抗生素， 以及其他类抗生素 ) 抵抗不动杆菌生物体的作用， 因此将藻酸盐低聚物与抗生素 ( 例如大 环内酯类抗生素 ) 一起使用构成了对于不动杆菌污染和感染的非常有效的治疗。藻酸盐低 聚物似乎在加强或增强抗生素抵抗不动杆菌属的细菌的作用方面特别有效。换言之， 对于 该特定菌属， 藻酸盐低聚物似乎表现出令人惊讶的与抗生素的协同作用。加强或增强抗生 素作用的效果对于该菌属而言特别显著。
因此， 在第一方面中， 本发明提供了一种改进抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 功 效、 特别是抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 抑制不动杆菌 ( 更具体地表达则为不动杆菌 生物体 ) 或换言之不动杆菌属的生长和 / 或生存力的有效性 ( 或功效 )( 包括抑制不动杆 菌群体的生长和单个不动杆菌生物体的生长 )， 所述方法包含将所述抗生素与藻酸盐低聚 物一起 ( 协同或联合 ) 使用。
更具体而言， 所述使用步骤可以包含在将不动杆菌生物体与抗生素 ( 例如大环内 酯类抗生素 ) 接触的同时、 基本同时或之前将不动杆菌生物体与有效量的藻酸盐低聚物接 触， 所述有效量可改进抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 的功效、 特别是抗生素 ( 例如大环 内酯类抗生素 ) 抑制不动杆菌生物体生长的有效性 ( 或功效 )。 具体而言， 将不动杆菌生物 体与藻酸盐低聚物接触的步骤可以包括对受试对象、 特别是需要该种治疗的受试对象 ( 例 如被不动杆菌感染、 疑似被不动杆菌感染或具有被不动杆菌感染的风险的受试对象 ( 或更 具体地表达， 所述不动杆菌为不动杆菌生物体 )) 施用藻酸盐低聚物。
因此， 本发明提供了一种藻酸盐低聚物， 所述藻酸盐低聚物用于在治疗被不动杆 菌感染、 疑似被不动杆菌感染或者具有被不动杆菌感染的风险 ( 或更具体地表达， 所述不 动杆菌为不动杆菌生物体 ) 的受试对象中与至少一种抗生素一起 ( 或联合或协同 ) 使用。
本发明的该方面还提供了一种治疗被不动杆菌感染、 疑似被不动杆菌感染或具有 被不动杆菌的风险的受试对象的方法， 所述方法包含将有效量抗生素与有效量藻酸盐低聚 物一起施用于所述受试对象。
“一起使用” 具体指以下述方式施用药用有效量的藻酸盐低聚物和药用有效量的 抗生素， 所述方式引起不动杆菌 ( 更具体而言为不动杆菌生物体或其群体 ) 在与抗生素接 触的同时、 基本同时或之前与藻酸盐低聚物接触。可以使用任何临床可接受的给药方案来 实现这一目的。本领域技术人员将能够考虑任何相关可变因素 ( 例如， 施用途径、 生物利用度、 所使用的低聚物和抗生素的药物代谢动力学、 受试对象身体状况、 细菌的位置等等 )， 以 设计针对特定对象的适当的给药方案。在一个实施方式中， 药用有效量的藻酸盐低聚物在 施用药用有效量的抗生素同时、 基本同时或之前施用。 在另一实施方式中， 低聚物与抗生素 分开并于其后施用。本领域技术人员能够轻易地设计给药方案， 以使抗生素对抵抗不动杆 菌生物体的有效性的改善最大化。 他也能够根据其所面对的特定临床情况选择两种活性剂 的最佳组合。
“一起使用” 并不意味着各试剂存在于同一制剂或组合物中， 因此即使在同时或基 本同时使用或施用， 藻酸盐低聚物和抗生素也不需要 ( 事实上大多数情况下不会 ) 存在于 同一组合物或制剂中， 而可以分别施用。因此 “分别” 使用 / 施用包括同时或基本同时使用 / 施用， 或者在不同时间 ( 例如依次 ) 或根据所需剂量或使用方案以不同时间间隔使用 / 施 用。
术语 “感染有” (或 “感染” ) 在本文中被广泛使用， 其表示受试对象可以包含、 含有 或载有所讨论的不动杆菌生物体， 即， 不动杆菌可以只是存在于受试对象之上或之中， 并且 这可以包括受试对象本体之中或之上的任何部位或位置。 受试对象的感染并不必须像临床 疾病那样明显 ( 即， 感染导致受试对象出现临床症状 )， 当然这是包括在上述范围内的。疑 似被不动杆菌感染或具有感染不动杆菌风险的受试对象可以是曾与该不动杆菌生物体或 被不动杆菌感染的受试对象接触的受试对象， 或者表现出不动杆菌感染的临床体征或症状 的受试对象 ( 在疑似感染的情况下 )， 或者因一般性原因 ( 例如由于受试对象的临床状态 ) 或特别地因所关注的不动杆菌而易于感染不动杆菌的受试对象。 作为另外一种选择， 本发明提供了藻酸盐低聚物在制造药剂中的用途， 所述药剂 用于与至少一种抗生素一起治疗被不动杆菌 ( 或者不动杆菌生物体或不动杆菌属 ) 感染、 疑似被其感染或具有被其感染的风险的受试对象。
药剂可以还包含所述抗生素 ( 或多种抗生素 )。药剂可以是包含藻酸盐低聚物和 抗生素的单一组合物或制剂的形式， 或者可以制备和使用分开的组合物或制剂， 所述分开 的组合物或制剂各自分别含有藻酸盐低聚物或抗生素。
因此， 在一个更具体的方面中， 本发明提供了藻酸盐低聚物和至少一种抗生素在 制造药剂中的用途， 所述药剂用于治疗被不动杆菌 ( 或者不动杆菌生物体或不动杆菌属 ) 感染、 疑似被其感染或具有被其感染的风险的受试对象。
如上所述， 抗生素可以与藻酸盐低聚物分别应用或施用。
因此， 在另一个方面中， 本发明提供了一种含有作为分别、 同时或依次使用的联合 制剂的藻酸盐低聚物和抗生素 ( 例如一种或多种抗生素 ) 的产品， 所述产品用于在治疗被 不动杆菌 ( 或者不动杆菌生物体或不动杆菌属 ) 感染、 疑似被其感染或具有被其感染的风 险的受试对象中分别、 同时或依次使用。
抗生素可以与藻酸盐低聚物同时或依次应用或施用。如上所述， 在一个实施方式 中， 抗生素与藻酸盐低聚物同时或基本同时施用， 而在另一个实施方式中抗生素在藻酸盐 低聚物之后施用。在又一个实施方式中， 低聚物与抗生素分开并于其后施用。在藻酸盐低 聚物之前或之后立即或几乎立即应用或施用抗生素包括在 “基本同时” 的范围内。术语 “几 乎立即” 可以解读为包括在之前应用或施用的一小时内、 优选 30 分钟内应用或施用。不过， 抗生素可以在藻酸盐低聚物之后至少 1 小时、 至少 3 小时或至少 6 小时以上应用或施用。 在
这些实施方式中， 抗生素可以在另外应用或不另外应用藻酸盐低聚物时应用或施用。藻酸 盐低聚物可以以多种应用方式在抗生素之前或在与其同时应用或施用， 包括如上所述的在 抗生素之后立即或几乎立即应用或施用。在另一些实施方式中， 抗生素可以在藻酸盐低聚 物之前 ( 例如在藻酸盐低聚物之前至少 1 小时、 至少 3 小时、 至少 6 小时 ) 方便地应用或施 用。 在这些实施方式中， 藻酸盐低聚物可以在另外应用或不另外应用抗生素时应用或施用。 抗生素可以以多种应用方式在藻酸盐低聚物之前或在与其同时应用或施用， 包括如上所述 的在低聚物之后立即或几乎立即应用或施用。
常用的是， 将大环内酯类抗生素与低聚物同时或者在低聚物之前或之后几乎立即 应用或施用。不过， 大环内酯类抗生素可以在藻酸盐低聚物之后至少 1 小时、 至少 3 小时、 至少 6 小时应用或施用。在这些实施方式中， 大环内酯类抗生素可以在另外应用或不另外 应用藻酸盐低聚物时应用或施用。 低聚物可以以多种应用方式在大环内酯类抗生素之前或 在与其同时应用或施用。
抗生素可以是任何抗生素。抗生素及其代表性成分的种类包括但不限于 ： 氨基糖 苷 ( 例如， 丁胺卡那霉素、 庆大霉素、 卡那霉素、 新霉素、 奈替米星、 链霉素、 妥布霉素 ) ； 碳头 孢烯 ( 如氯碳头孢 ) ； 第 1 代头孢菌素 ( 如头孢羟氨苄、 头孢唑啉、 头孢氨苄 ) ； 第 2 代头孢 菌素 ( 如头孢克洛、 头孢孟多、 头孢氨苄、 头孢西丁、 头孢丙烯、 头孢呋辛 ) ； 第 3 代头孢菌素 ( 如头孢克肟、 头孢地尼、 头孢托仑、 头孢哌酮、 头孢噻肟、 头孢泊肟、 头孢他啶、 头孢布烯、 头 孢唑肟、 头孢曲松 ) ； 第 4 代头孢菌素 ( 如头孢吡肟 ) ； 大环内酯 ( 如阿奇霉素、 克拉霉素、 地 红霉素、 红霉素、 醋竹桃霉素 ) ； 单环 β- 内酰胺 ( 如氨曲南 ) ； 青霉素 ( 如阿莫西林、 氨苄青 霉素、 羧苄青霉素、 邻氯青霉素、 双氯西林、 萘夫西林、 苯唑青霉素、 青霉素 G、 青霉素 V、 哌拉 西林、 替卡西林 ) ； 多肽抗生素 ( 如杆菌肽、 粘菌素、 多粘菌素 B) ； 喹诺酮 ( 如环丙沙星、 依诺 沙星、 加替沙星、 左氧氟沙星、 洛美沙星、 莫西沙星、 诺氟沙星、 氧氟沙星、 曲伐沙星 ) ； 磺胺 ( 如磺胺米隆、 磺胺醋酰、 磺胺甲二唑、 柳氮磺胺吡啶、 磺胺异噁唑、 甲氧苄啶磺胺甲基异噁 唑)； 四环素 ( 如去甲基金霉素、 强力霉素、 米诺环素、 土霉素、 四环素 ) ； 甘氨酰环素 ( 如替 加环素 ) ； 碳青霉烯 ( 如亚胺培南、 美罗培南、 厄他培南、 多尼培南、 帕尼培南 / 倍他米隆、 比 阿培南、 PZ-601) ； 其他抗生素包括氯霉素、 克林霉素、 乙胺丁醇、 磷霉素、 异烟肼、 利奈唑胺、 甲硝唑、 呋喃妥因、 吡嗪酰胺、 奎奴普丁 / 达福普汀、 利福平、 大观霉素和万古霉素。
在本发明的方法的优选实施方式中， 所使用的抗生素是选自大环内酯、 β- 内酰胺 ( 其可以包括碳青霉烯和 / 或单环 β- 内酰胺和 / 或碳头孢烯 )、 四环素和喹诺酮的抗生 素。在另一些实施方式中， 抗生素种类可能包括氨基糖苷和 / 或多肽抗生素。更具体而言， 在这些实施方式中， 抗生素可以选自大环内酯、 单环 β- 内酰胺、 碳青霉烯、 碳头孢烯、 第3 和第 4 代头孢菌素、 四环素和喹诺酮， 并且可选的是氨基糖苷和 / 或多肽抗生素。在更具 体的代表性实施方式中， 抗生素可以选自大环内酯、 β- 内酰胺、 四环素和喹诺酮， 例如大环 内酯、 单环 β- 内酰胺、 碳青霉烯、 碳头孢烯、 第 3 和第 4 代头孢菌素、 四环素和喹诺酮。在 更具体的代表性实施方式中， 抗生素可以选自大环内酯、 β- 内酰胺和喹诺酮， 例如大环内 酯、 单环 β- 内酰胺、 碳青霉烯、 碳头孢烯、 第 3 和第 4 代头孢菌素和喹诺酮。例如， 抗生素 可以选自丁胺卡那霉素、 庆大霉素、 卡那霉素、 新霉素、 奈替米星、 链霉素、 妥布霉素、 阿奇霉 素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 泰利霉素、 碳霉素 A、 交沙霉素、 吉他霉素、 麦迪 霉素、 竹桃霉素、 螺旋霉素、 泰乐菌素、 醋竹桃霉素、 氨曲南、 亚胺培南、 美罗培南、 厄他培南、多尼培南、 帕尼培南 / 倍他米隆、 比阿培南、 PZ-601、 头孢克肟、 头孢地尼、 头孢托仑、 头孢哌 酮、 头孢噻肟、 头孢泊肟、 头孢他啶、 头孢布烯、 头孢唑肟、 头孢曲松、 头孢吡肟、 地美环素、 强 力霉素、 米诺环素、 土霉素、 四环素、 杆菌肽、 粘菌素、 多粘菌素 B、 环丙沙星、 依诺沙星、 加替 沙星、 左氧氟沙星、 洛美沙星、 莫西沙星、 诺氟沙星、 氧氟沙星和曲伐沙星。 具体而言， 抗生素 可以选自头孢他啶、 亚胺培南 / 西司他丁、 美罗培南、 氨曲南、 土霉素、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素、 环丙沙星， 特别优选的是抗生素选自头孢他啶、 亚 胺培南 / 西司他丁、 美罗培南、 氨曲南、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素和环丙沙星。更优选的是， 抗生素选自氨曲南、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红 霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素和环丙沙星。在另一些实施方式中， 所使用的抗生素不是妥布霉 素、 丁胺卡那霉素和 / 或粘菌素。在另一些实施方式中， 所使用的抗生素不是氨基糖苷和 / 或多肽抗生素。在又一些实施方式中， 所使用的抗生素不是在将其与藻酸盐低聚物共同使 用的条件下具有正电荷的抗生素， 例如具有至少 3 个、 例如至少 4、 5、 6 或 7 个氨基 (-NH2) 基团的抗生素。特别优选的是大环内酯、 β- 内酰胺、 四环素和喹诺酮， 例如大环内酯、 单环 β- 内酰胺、 碳青霉烯、 第 3 和第 4 代头孢菌素、 四环素和喹诺酮 ； 例如头孢他啶、 亚胺培南 / 西司他丁、 美罗培南、 氨曲南、 土霉素、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺 旋霉素和环丙沙星。 在另一些优选实施方式中， 抗生素是大环内酯类抗生素， 并可以选自阿奇霉素、 克 拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 泰利霉素、 碳霉素 A、 交沙霉素、 吉他霉素、 麦迪霉素、 竹桃霉素、 螺旋霉素、 醋竹桃霉素、 泰乐菌素。优选的是， 大环内酯类抗生素为氮杂大环内 酯， 优选阿奇霉素， 或选自克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素或螺旋霉素。
如上所述， 藻酸盐通常作为平均分子量至少为 35,000 道尔顿 ( 即约 175 ～ 190 个 单体残基 ) 但通常高得多的聚合物出现， 而本发明的藻酸盐低聚物可以被定义为通过将藻 酸盐聚合物、 通常是天然存在的藻酸盐片段化 (fractionation)( 即尺寸降低 ) 获得的材 料。藻酸盐低聚物可以被认为是平均分子量低于 35,000 道尔顿 ( 即， 少于约 190 或少于 175 个单体残基 ) 的藻酸盐， 特别是平均分子量低于 30,000 道尔顿 ( 即， 少于约 175 或少于 约 150 个单体残基 )、 更特别是平均分子量低于 25,000 道尔顿或 20,000 道尔顿 ( 即， 少于 约 135 或 125 个单体残基或者少于约 110 或 100 个单体残基 ) 的藻酸盐。
作为另一种选择而言， 藻酸盐通常包含两个或多于两个单元或残基， 并且根据本 发明使用的藻酸盐低聚物将通常含有 2 ～ 100 个单体残基、 优选 2 ～ 75、 优选 2 ～ 50、 更优 选 2 ～ 40、 2 ～ 35 或 2 ～ 30 个残基。 因此， 根据本发明使用的藻酸盐低聚物将通常具有 350 道尔顿～ 20,000 道尔顿、 优选 350 道尔顿～ 15,000 道尔顿、 优选 350 道尔顿～ 10,000 道 尔顿， 并且更优选 350 道尔顿～ 8000 道尔顿、 350 道尔顿～ 7000 道尔顿或者 350 道尔顿～ 6,000 道尔顿的平均分子量。
作为另一种选择而言， 藻酸盐低聚物可以具有 2 ～ 100、 优选 2 ～ 75、 优选 2 ～ 50、 更优选 2 ～ 40、 2 ～ 35、 2 ～ 30、 2 ～ 28、 2 ～ 25、 2 ～ 22、 2 ～ 20、 2 ～ 18、 2 ～ 17、 2 ～ 15 或 2 ～ 12 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。
其他代表性范围 ( 无论是对残基数、 DP 或 DPn 而言 ) 包括 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10 或 11 中 的 任 一 个 至 50、 45、 40、 39、 38、 37、 36、 35、 34、 33、 32、 31、 30、 29、 28、 27、 26、 25、 24、 23、 22、 21、 20、 19、 18、 17、 16、 15、 14、 13 或 12 中的任一个。
其他代表性范围 ( 无论是对残基数、 DP 或 DPn 而言 ) 包括 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14 或 15 中的任一个至 50、 45、 40、 39、 38、 37、 36、 35、 34、 33、 32、 31、 30、 29、 28、 27、 26、 25、 24、 23、 22、 21、 20、 19、 18、 17 或 16 中的任一个。
其他代表性范围 ( 无论是对残基数、 DP 或 DPn 而言 ) 包括 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17 或 18 中的任一个至 50、 45、 40、 39、 38、 37、 36、 35、 34、 33、 32、 31、 30、 29、 28、 27、 26、 25、 24、 23、 22、 21、 20 或 19 中的任一个。
如上所述， 藻酸盐低聚物将含有 ( 或包含 ) 古罗糖醛酸盐或古罗糖醛酸 (G) 和 / 或甘露糖醛酸盐或甘露糖醛酸 (M) 残基或单元。本发明的藻酸盐低聚物将优选单独或基 本单独 ( 即主要由其构成 ) 由糖醛酸盐 / 糖醛酸残基组成， 更具体而言单独或基本单独由 G 和 / 或 M 残基构成。换言之， 在用于本发明的藻酸盐低聚物中， 至少 80％、 更特别是至少 85％、 90％、 95％或 99％的单体残基可以是糖醛酸盐 / 糖醛酸， 或者更特别是 G 和 / 或 M 残 基。换言之， 优选的是， 藻酸盐低聚物将不包含其他残基或单元 ( 例如， 其他糖残基， 或者更 具体而言是其他糖醛酸 / 糖醛酸盐残基 )。
藻酸盐低聚物优选为线性低聚物。
更具体而言， 在一个优选实施方式中， 藻酸盐低聚物的至少 30％的单体残基为 G 残基 ( 即， 古罗糖醛酸盐或古罗糖醛酸 )。换言之， 藻酸盐低聚物将含有至少 30％古罗糖醛 酸盐 ( 或古罗糖醛酸 ) 残基。 具体实施方式由此包括具有 ( 例如含有 )30％～ 70％ G( 古罗 糖醛酸盐 ) 残基或 70％～ 100％ G( 古罗糖醛酸盐 ) 残基的藻酸盐低聚物。因此， 根据本发 明使用的代表性藻酸盐低聚物可以含有至少 70％的 G 残基 ( 即， 藻酸盐低聚物的至少 70％ 的单体残基将是 G 残基 )。
优选至少 50％或 60％、 更特别是至少 70％或 75％、 进而更特别是至少 80％、 85％、 90％、 91％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％或 99％的单体残基是古罗糖醛酸盐。 在 一个实施方式中， 藻酸盐低聚物可以是低聚古罗糖醛酸盐 ( 即， G 的均聚低聚物， 或 100％ G)。
在另一个优选实施方式中， 本发明的上述藻酸盐具有其中大多数 G 残基处于所谓 的 G 嵌段中的一级结构。优选至少 50％、 更优选至少 70％或 75％、 最优选至少 80％、 85％、 90％、 92％或 95％的 G 残基处于 G 嵌段中。G 嵌段为至少 2 个 G 残基、 优选至少 3 个邻接的 G 残基、 更优选至少 4 或 5 个邻接的 G 残基、 最优选至少 7 个邻接的 G 残基的邻接序列。
特别地， 至少 90％的 G 残基与另一 G 残基 1-4 连接。 更特别地， 藻酸盐的至少 95％、 更优选至少 98％且最优选至少 99％的 G 残基与另一 G 残基 1-4 连接。
用于本发明的藻酸盐低聚物优选为三聚物～三十五聚物、 更优选为三聚物～ 二十八聚物、 特别是四聚物～二十五聚物、 尤其是六聚物～二十二聚物、 特别是八聚物～ 二十聚物、 尤其是十聚物～十五聚物， 例如， 其分子量为 350 道尔顿～ 6400 道尔顿或 350 道 尔顿～ 6000 道尔顿、 优选为 550 道尔顿～ 5500 道尔顿、 优选为 750 道尔顿～ 5000 道尔顿、 尤其是 750 道尔顿～ 4500 道尔顿或 2000 道尔顿～ 3000 道尔顿。如上所述， 其他代表性藻 酸盐低聚物包括具有 7、 8、 9、 10、 11 或 12 ～ 50、 45、 40、 35、 28、 25、 22 或 20 个残基的低聚物。
藻酸盐低聚物可以为单一化合物， 或其可以为化合物的混合物， 例如具有一定聚 合度范围的混合物。 如上所述， 藻酸盐低聚物中的单体残基可以相同或不同， 并且不需要所 有都携带带电基团， 但优选大多数 ( 例如， 至少 60％、 优选至少 80％且更优选至少 90％ )携带带电基团。优选基本上大多数 ( 例如， 至少 80％、 更优选至少 90％ ) 的带电基团具有 相同的极性。在藻酸盐低聚物中， 羟基与带电基团的比例优选为至少 2 ∶ 1， 更优选为至少 3 ∶ 1。
本发明的藻酸盐低聚物可以具有 3 ～ 28、 4 ～ 25、 6 ～ 22、 8 ～ 20 或 10 ～ 15、 或 5 ～ 18 或 7 ～ 15 或 8 ～ 12、 尤其是 10 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。
本发明的藻酸盐低聚物可以具有 8 ～ 50、 8 ～ 40、 8 ～ 35、 8 ～ 30、 8 ～ 28、 8 ～ 25、 8 ～ 22、 8 ～ 20、 8 ～ 18、 8 ～ 16 或 8 ～ 14 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。
本发明的藻酸盐低聚物可以具有 9 ～ 50、 9 ～ 40、 9 ～ 35、 9 ～ 30、 9 ～ 28、 9 ～ 25、 9 ～ 22、 9 ～ 20、 9 ～ 18、 9 ～ 16 或 9 ～ 14 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。
本发明的藻酸盐低聚物可以具有 10 ～ 50、 10 ～ 40、 10 ～ 35、 10 ～ 30、 10 ～ 28、 10 ～ 25、 10 ～ 22、 10 ～ 20、 10 ～ 18、 10 ～ 16 或 10 ～ 14 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。
本发明的藻酸盐低聚物可以具有 12 ～ 50、 12 ～ 40、 12 ～ 35、 12 ～ 30、 12 ～ 28、 12 ～ 25、 12 ～ 22、 12 ～ 20、 12 ～ 18、 12 ～ 16 或 12 ～ 14 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。
本发明的藻酸盐低聚物可以具有 15 ～ 50、 15 ～ 40、 15 ～ 35、 15 ～ 30、 15 ～ 28、 15 ～ 25、 15 ～ 22、 15 ～ 20、 15 ～ 18 或 15 ～ 16 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。 本发明的藻酸盐低聚物可以具有 18 ～ 50、 18 ～ 40、 18 ～ 35、 18 ～ 30、 18 ～ 28、 18 ～ 25、 18 ～ 22 或 18 ～ 20 的聚合度 (DP) 或数均聚合度 (DPn)。
优选本发明的藻酸盐低聚物基本不含、 优选完全不含聚合度在此处所公开的范围 之外的藻酸盐低聚物。 这可以以本发明的藻酸盐低聚物的分子量分布来表达， 例如， 每摩尔 DP 在相关范围之外的根据本发明使用的藻酸盐低聚物的百分比。
优选的分子量分布使得不超过 10 摩尔％、 优选不超过 9 摩尔％、 8 摩尔％、 7摩 尔％、 6 摩尔％、 5 摩尔％、 4 摩尔％、 3 摩尔％、 2 摩尔％或 1 摩尔％的分子具有比相关 DPn 上 限高出 3、 2 或 1 的 DP。类似地， 优选的分子量分布使得不超过 10 摩尔％、 优选不超过 9 摩 尔％、 8 摩尔％、 7 摩尔％、 6 摩尔％、 5 摩尔％、 4 摩尔％、 3 摩尔％、 2 摩尔％或 1 摩尔％的分 子具有其数值比相关 DPn 下限低 3、 2 或 1 的 DP。
合适的藻酸盐低聚物描述于 WO2007/039754、 WO2007/039760 和 WO2008/125828 和 PCT/GB2008/003607 中， 本文通过参考明确并入其全部公开内容。
代表性的合适的藻酸盐低聚物的 DPn 为 5 ～ 30， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐分 数 (FG) 至少为 0.80， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.20， 至少 95 摩尔％的分子的 DP 不超 过 25。
其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 7 ～ 15( 优选为 8 ～ 12)， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐分数 (FG) 至少为 0.85( 优选至少为 0.90)， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.15( 优选不超过 0.10)， 至少 95 摩尔％的分子的聚合度小于 17( 优选小于 14)。
其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 5 ～ 18( 尤其是 7 ～ 15)， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐分数 (FG) 至少为 0.80( 优选为至少 0.85， 尤其是至少 0.92)， 甘露糖醛酸盐 分数 (FM) 不超过 0.20( 优选不超过 0.15， 尤其不超过 0.08)， 至少 95 摩尔％的分子的聚合 度小于 20( 优选小于 17)。
其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 5 ～ 18， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐 分数 (FG) 至少为 0.92， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.08， 至少 95 摩尔％的分子的聚合
度小于 20。
其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 5 ～ 18( 优选为 7 ～ 15， 更优选为 8 ～ 12， 尤其约为 10)， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐分数 (FG) 至少为 0.80( 优选为至少 0.85， 更优选为至少 0.90， 尤其是至少 0.92， 最优选为至少 0.95)， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.20( 优选不超过 0.15， 更优选不超过 0.10， 尤其不超过 0.08， 最优选不超过 0.05)， 至少 95 摩尔％的分子的聚合度小于 20( 优选小于 17， 更优选小于 14)。
其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 7 ～ 15( 优选为 8 ～ 12)， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐分数 (FG) 至少为 0.92( 优选至少为 0.95)， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.08( 优选不超过 0.05)， 至少 95 摩尔％的分子的聚合度小于 17( 优选小于 14)。
其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 5 ～ 18， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐 分数 (FG) 至少为 0.80， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.20， 至少 95 摩尔％的分子的聚合 度小于 20。
其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 7 ～ 15， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐 分数 (FG) 至少为 0.85， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.15， 至少 95 摩尔％的分子的聚合 度小于 17。 其他合适的藻酸盐低聚物的数均聚合度为 7 ～ 15， 古洛糖醛酸盐 / 半乳糖醛酸盐 分数 (FG) 至少为 0.92， 甘露糖醛酸盐分数 (FM) 不超过 0.08， 至少 95 摩尔％的分子的聚合 度小于 17。
由此可以看出， 本发明所倾向的特定种类的藻酸盐低聚物是被定义为所谓 “高 G” 或 “G 嵌段” 低聚物 ( 即， 具有高含量的 G 残基或 G 嵌段 ) 的藻酸盐低聚物 ( 例如， 其中至少 70％单体残基为 G、 优选以 G 嵌段排列 )。然而， 也可以使用其他类型的藻酸盐低聚物， 包括 特别是如下文将进一步描述的 “高 M” 或 “M 嵌段” 低聚物或 MG 嵌段低聚物。因此， 其为具 有高比例单一单体类型的藻酸盐低聚物， 并且当所述该类型的单体主要以该单体类型的邻 接序列存在时， 所述藻酸盐低聚物代表了特别优选的低聚物， 例如下述低聚物， 其中低聚物 中至少 70％的单体残基为与另一 G 残基 1-4 连接的 G 残基， 或者更优选至少 75％、 并且最 优选低聚物中至少 80％、 85％、 90％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 99％的单体 残基为与另一 G 残基 1-4 连接的 G 残基。两个 G 残基的 1-4 连接可以另外表达为古罗糖醛 酸单元连接于相邻的古罗糖醛酸单元。
在另一个实施方式中， 藻酸盐低聚物的超过 50％的单体残基可以是 M 残基 ( 即， 甘 露糖醛酸盐或甘露糖醛酸 )。换言之， 藻酸盐低聚物将含有超过 50％甘露糖醛酸盐 ( 或甘 露糖醛酸 ) 残基。具体实施方式由此包括具有 ( 例如含有 )50％～ 70％ M( 甘露糖醛酸盐 ) 残基或例如 70％～ 100％ M( 甘露糖醛酸 ) 残基的藻酸盐低聚物。另一些具体实施方式也 包括含有 71％～ 85％ M 残基或 85％～ 100％ M 残基的低聚物。因此， 根据本发明的此实施 方式使用的代表性藻酸盐低聚物将含有超过 70％ M 残基 ( 即， 藻酸盐低聚物的超过 70％的 单体残基将是 M 残基 )。
在另一些实施方式中， 至少 50％或 60％、 更特别是至少 70％或 75％、 进而更特别 是至少 80％、 85％、 90％、 95％、 或 99％的单体残基是甘露糖醛酸盐。在一个实施方式中， 藻 酸盐低聚物可以是低聚甘露糖醛酸盐 ( 即， M 的均聚低聚物， 或 100％ M)。
在另一个实施方式中， 本发明的上述藻酸盐具有其中大多数 M 残基处于所谓的 M
嵌段中的一级结构。在该实施方式中， 优选至少 50％、 更优选至少 70％或 75％且最优选至 少 80％、 85％、 90％或 95％的 M 残基处于 M 嵌段中。M 嵌段为至少 2 个 M 残基、 优选至少 3 个邻接的 M 残基、 更优选至少 4 或 5 个邻接的 M 残基、 最优选至少 7 个邻接的 M 残基的邻接 序列。
特别地， 至少 90％的 M 残基与另一 M 残基 1-4 连接。 更特别地， 藻酸盐的至少 95％、 更优选至少 98％且最优选至少 99％的 M 残基与另一 M 残基 1-4 连接。
其他优选单体为下述藻酸盐低聚物， 其中低聚物中至少 70 ％的单体残基为与另 一 M 残基 1-4 连接的 M 残基， 或更优选低聚物的至少 75％且最优选至少 80％、 85％、 90％、 92％、 93％、 94％、 95％、 96％、 97％、 98％、 99％的单体残基为与另一 M 残基 1-4 连接的 M 残 基。 两个 M 残基的 1-4 连接可以另外表达为甘露糖醛酸单元连接于相邻的甘露糖醛酸单元。
在又一实施方式中， 本发明的藻酸盐低聚物包含交替的 M 和 G 残基的序列。至少 3 个、 优选至少 4 个交替的 M 和 G 残基的序列表示 MG 嵌段。优选本发明的藻酸盐低聚物包 含 MG 嵌段。更具体而言， MG 嵌段是由 G 和 M 残基构成的至少 3 个邻接的残基的序列， 并且 其中邻接序列中的各非末端 ( 内部 )G 残基与 M 残基 1-4 连接和 4-1 连接， 且邻接序列中的 各非末端 ( 内部 )M 残基与 G 残基 1-4 连接和 4-1 连接。优选 MG 嵌段是至少 5 或 6 个邻接 的残基， 更优选至少 7 或 8 个邻接的残基。 在另一实施方式中， 发现藻酸盐低聚物 ( 即甘露糖醛酸盐或古罗糖醛酸盐 ) 中 的少量糖醛酸盐主要处在 MG 嵌段中。在该实施方式中， MG 嵌段藻酸盐低聚物中优选至少 50％、 更优选至少 70％或 75％且最优选至少 80％、 85％、 90％或 95％的少量糖醛酸盐单体 存在于 MG 嵌段中。在另一实施方式中， 藻酸盐低聚物的排列使得低聚物中至少 50％、 至少 60％、 至少 70％、 至少 80％、 至少 85％、 至少 90％、 至少 95％、 至少 99％ ( 例如 100％ ) 的 G 和 M 残基排列在 MG 嵌段中。
但在最广泛的意义上来说， 本发明可扩展至以下实施方式， 其中低聚物的至少 1％ 但低于 100％的单体残基为 G 残基 ( 即， 古罗糖醛酸盐或古罗糖醛酸 )， 更具体而言如下文 中进一步定义的至少 30％的单体残基为 G 残基。因此， 在最广泛的意义上来说， 含有 MG 嵌 段的藻酸盐低聚物可以含有至少 1％但低于 100％的古罗糖醛酸盐 ( 或古罗糖醛酸 ) 残基， 但通常含有 MG 嵌段的藻酸盐低聚物将含有至少 30％ ( 或至少 35％、 40％或 45％或 50％ G) 但小于 100％的 G。具体实例因此包括具有 ( 例如含有 )1％～ 30％ G( 古罗糖醛酸盐 ) 残 基、 30％～ 70％ G( 古罗糖醛酸盐 ) 残基或 70％～ 99％ G( 古罗糖醛酸盐 ) 残基的含有 MG 嵌段的藻酸盐低聚物。因此， 代表性的根据本发明使用的含有 MG 嵌段的藻酸盐低聚物可以 含有超过 30％但低于 70％的 G 残基 ( 即， MG 嵌段藻酸盐低聚物的超过 30％但低于 70％的 单体残基是 G 残基 )。
含有 MG 嵌段的藻酸盐低聚物优选超过 30％、 更特别是超过 35％或 40％、 进而更 特别是超过 45％、 50％、 55％、 60％或 65％且在各情况下皆低于 70％的单体残基为古罗糖 醛酸盐。作为另外一种选择， 含有 MG 嵌段的藻酸盐低聚物优选低于 70％、 更优选低于 65％ 或 60％、 进而更优选低于 55％、 45％、 40％或 35％且在各情况下皆超过 30％的单体残基为 古罗糖醛酸盐。可以选择由这些值的任何组合形成的任何范围。因此， 例如含有 MG 嵌段的 藻酸盐低聚物可以具有例如 35％～ 65％、 40％～ 60％或 45％～ 55％的 G 残基。
在另一个实施方式中， 含有 MG 嵌段的藻酸盐低聚物可以具有近似相等量的 G 和 M
残基 ( 例如， 比例为 65％ G/35％ M ～ 35％ G/65％ M， 如 60％ G/40％ M ～ 40％ G/60％ M； 55％ G/45％ M ～ 45％ G/55％ M ； 53％ G/47％ M ～ 47％ G/53％ M ； 51％ G/49％ M ～ 49％ G/51％ M ； 例如约 50％ G 和约 50％ M)， 并且这些残基主要优选全部或尽可能完全地 被排列为交替的 MG 模式 ( 例如， 至少 50％或至少 60％、 70％、 80％、 85％、 90％或 95％或者 100％的 M 和 G 残基处于交替的 MG 序列中 )。
在某些实施方式中， 本发明的低聚物的末端的糖醛酸残基不具有双键、 特别是位 于 C4 和 C5 原子之间的双键。此类低聚物可以被描述为具有饱和的末端糖醛酸残基。本领 域技术人员将无需过度劳动即能够制备具有饱和的末端糖醛酸残基的低聚物。 这可以通过 使用产生上述低聚物的生产技术或者通过使下述低聚物转化 ( 饱和化 ) 而实现， 所述低聚 物通过产生具有不饱和的末端糖醛酸残基的低聚物的方法生产。
藻酸盐低聚物将通常携带电荷， 因此藻酸盐低聚物的反离子可以是任何生理上耐 受的离子、 尤其是那些常用于带电药物的离子， 例如钠、 钾、 铵、 氯化物、 甲磺酸盐、 甲葡胺 等。还可以使用促进藻酸盐凝胶化的离子， 例如 2 族金属离子。
尽管藻酸盐低聚物可以为由合适数量的古洛糖醛酸盐和甘露糖醛酸盐残基的聚 合产生的合成材料， 用于本发明的藻酸盐低聚物可以从天然来源 ( 例如上述那些天然来 源 ) 即天然藻酸盐源材料获得、 生产或衍生。
产生可用于本发明的藻酸盐低聚物的多糖至低聚糖的裂解可以使用传统的多糖 裂解技术 ( 例如酶促消化和酸水解 ) 来进行。在一个优选实施方式中， 使用酸水解制备本 发明的藻酸盐低聚物。在另一些实施方式中， 使用酶促消化和额外的处理步骤使低聚物中 的末端糖醛酸饱和。然后可以使用离子交换树脂通过色谱或通过分级沉淀、 溶解或过滤从 多糖分解产物分离低聚物。 US 6,121,441 和 WO 2008/125828( 本文通过参考明确并入其全 部内容 ) 描述了适合制备用于本发明中的藻酸盐低聚物的方法。其他的信息和讨论可见于 例如 “水性胶体手册 (Handbooks of Hydrocolloids)” ， Phillips 和 Williams 编著， CRC， Boca Raton， Florida， USA， 2000， 本文通过参考明确并入该教科书的全部内容。
藻酸盐低聚物还可以进行化学修饰， 包括但不限于添加带电基团 ( 例如羧基化或 羧甲基化的聚糖 ) 的修饰， 和经修饰以改变柔性 ( 例如通过高碘酸盐氧化 ) 的藻酸盐低聚 物。
适用于本发明的藻酸盐低聚物 ( 例如低聚古洛糖醛酸 ) 可以方便地通过以下 方式来生产 ： 将 来 自 但 不 限 于 北 方 海 带 (Laminaria hyperbora) 和 叶 巨 藻 (Lessonia nigrescens) 的藻酸进行酸水解， 在中性 pH 溶解， 添加无机酸降低 pH 至 3.4 以使藻酸盐低 聚物 ( 低聚古洛糖醛酸 ) 沉淀， 用弱酸洗涤， 在中性 pH 重悬并冻干。
用于生产本发明的藻酸盐低聚物的藻酸盐还可以从合适的细菌源 ( 例如铜绿假 单胞菌或棕色固氮菌 ) 直接获得。
在需要具有其中大多数 G 残基排列在 G 嵌段中而不是作为单个残基的一级结构的 藻酸盐低聚物的实施方式中， 考虑到在这些生物体中产生的藻酸盐倾向于具有上述结构， 因而预期藻类来源最合适。细菌源可能更适于获得不同结构的藻酸盐低聚物。
参与荧光假单胞菌和棕色固氮菌中藻酸盐生物合成的分子器件已经得到克隆和 表 征 (WO 94/09124 ； H. 等， Metabolic Engineering， 1999， 第 1 卷， 262-269 ； WO 2004/011628 ； Gimmestad， M. 等 ( 见上 ) ； Remminghorst 和 Rehm， Biotechnology Letters，2006， 第 28 卷， 1701-1712 ； Gimmestad， M. 等， Journal of Bacteriology， 2006， 第 188 卷 (15)， 5551-5560)， 并且通过操纵这些系统可以容易地获得具有特制的一级结构的藻酸盐。
藻酸盐 ( 例如藻类源材料 ) 的 G 含量能够通过差向异构化来增加， 例如使用来自 棕色固氮菌的甘露糖醛酸 (mannuronan)C-5 差向异构酶或其他差向异构酶。如此， 例如可 以使用来自假单胞菌或固氮菌的分离的差向异构酶 ( 例如， 来自荧光假单胞菌或棕色固氮 菌的 AlgG， 或来自棕色固氮菌的 AlgE 酶 (AlgE1 ～ AlgE7)) 来进行体外差向异构化。此外， 特别考虑了使用来自具有产生藻酸盐的能力的其他生物体、 特别是藻类的差向异构酶。使 用棕色固氮菌 AlgE 差向异构酶的低 G 藻酸盐的体外差向异构化详细地描述于 等 ( 见上 ) 和 Strugala 等 (Gums and Stabilisers for the Food Industry， 2004， 12， The Royal Society of Chemistry， 84-94)。
为获得含有 G 嵌段的藻酸盐或藻酸盐低聚物， 优选采用除了 AlgE4 以外的其他一 种或多种棕色固氮菌 AlgE 差向异构酶进行差向异构化， 这是因为这些酶能够产生 G 嵌段结 构。 另一方面， AlgE4 差向异构酶可用于产生具有交替的 M/G 序列的延伸链或含有单个 G 残 基的一级结构的藻酸盐或藻酸盐低聚物， 因为已经发现该酶似乎优先使单独的 M 残基差向 异构化以产生与 M 残基连接的单个 G 残基而不是产生 G 嵌段。可以通过使用这些酶的不同 组合而获得特定的一级结构。 在 使 用 时， 还 特 别 考 虑 了 这 些 酶 的 突 变 形 式 或 来 自 其 他 生 物 体 的 同 源 物。 WO94/09124 描述了重组或经修饰的甘露糖醛酸 C-5 差向异构酶 (AlgE 酶 )， 例如由差向异 构酶序列编码的甘露糖醛酸 C-5 差向异构酶， 在所述差向异构酶序列中编码差向异构酶的 不同结构域或模块的 DNA 序列已经被改组或缺失并重组。作为另一种选择， 可以使用天然 存在的差向异构酶 (AlgG 或 AlgE) 的突变体， 这些突变体通过例如 AlgG 或 AlgE 基因的定 点或随机诱变而获得。
另一种方法是创建在其一些或全部差向异构酶基因中进行了突变的假单胞菌和 固氮菌， 从而这些突变体产生具有适于后续藻酸盐低聚物产生所需的结构的藻酸盐、 甚至 具有所需结构和尺寸 ( 或分子量 ) 的藻酸盐低聚物。 具有突变的 AlgG 基因的许多荧光假单 胞菌生物体的产生详细地描述于 WO 2004/011628 和 Gimmestad， M. 等， 2003( 见上 )。具有 突变的 AlgE 基因的许多棕色固氮菌生物体的产生公开于 Gimmestad， M. 等， 2006( 见上 )。 本领域技术人员无需过度劳动即能使用该教导来制备可用于生成本发明的藻酸盐低聚物 的新突变体。
另一种方法是使来自固氮菌和假单胞菌生物体的内源性差向异构酶基因缺失或 失活， 然后引入一种或多种外源性差向异构酶基因， 这些外源性差向异构酶基因可以为突 变的或未突变的 ( 即可以为野生型或经修饰的 ) 并且其表达可以例如通过使用诱导型启动 子或其他 “可控启动子” 控制。通过选择基因的合适组合， 能够生产具有预定一级结构的藻 酸盐。
另一种方法是将假单胞菌和 / 或固氮菌的藻酸盐生物合成机制的一些或所有引 入不产生藻酸盐的生物体 ( 例如大肠杆菌 )， 并且诱导藻酸盐从这些经遗传修饰的生物体 产生。
当使用这些基于培养的系统时， 藻酸盐或藻酸盐低聚物产品的一级结构能够受培 养条件影响。本领域技术人员完全有能力调整例如温度、 摩尔渗透压浓度、 养料水平 / 来源
和气氛参数等培养参数以便控制由特定生物体产生的藻酸盐的一级结构。
对于 “G 残基 /G” 和 “M 残基 /M” 、 古洛糖醛酸或甘露糖醛酸或者古洛糖醛酸盐或 甘露糖醛酸盐的指代， 与对于古洛糖醛酸 / 古洛糖醛酸盐以及甘露糖醛酸 / 甘露糖醛酸盐 ( 具体而言是 α-L- 古洛糖醛酸 / 古洛糖醛酸盐和 β-D- 甘露糖醛酸 / 甘露糖醛酸盐 ) 的 指代应当认为是可相互替换的， 并且进一步包括它们的衍生物， 在所述衍生物中， 一个或多 个可利用的侧链或基团已被修饰而未造成比未修饰低聚物显著更低的活性 ( 例如， 增强抗 生素效应的活性或协同作用活性 )。常见的糖修饰基团包括乙酰基、 硫酸根、 氨基、 脱氧基 团、 醇基、 醛基、 酮基、 酯基和脱水基团。 还可对藻酸盐低聚物进行化学修饰以添加带电基团 ( 例如羧基化或羧甲基化的聚糖 ) 和改变柔性 ( 例如通过高碘酸盐氧化 )。本领域技术人 员了解可以对低聚糖的单糖亚基进行的其他化学修饰， 并且这些化学修饰可以应用于本发 明的藻酸盐低聚物。
不动杆菌生物体可以来自任何不动杆菌物种， 例如鲍曼不动杆菌、 贝氏不动杆 菌、 布氏不动杆菌 (Acinetobacter bouvetii)、 乙酸钙不动杆菌、 格尔纳不动杆菌、 格氏 不动杆菌、 溶血不动杆菌、 约氏不动杆菌、 琼氏不动杆菌、 鲁氏不动杆菌、 帕氏不动杆菌 (Acinetobacter parvus)、 抗辐射不动杆菌、 申氏不动杆菌、 谭氏不动杆菌 (Acinetobacter tandoii)、 特氏不动杆菌 (Acinetobacter tjernbergiae)、 汤氏不动杆菌 (Acinetobacter towneri)、 邬氏不动杆菌。 优选其为鲍曼不动杆菌、 溶血不动杆菌、 约氏不动杆菌、 琼氏不动 杆菌、 抗辐射不动杆菌、 鲁氏不动杆菌、 谭氏不动杆菌、 特氏不动杆菌、 汤氏不动杆菌或邬氏 不动杆菌， 更优选鲍曼不动杆菌和鲁氏不动杆菌， 最优选鲍曼不动杆菌。 不动杆菌可以被确定抵抗一种以上具有抵抗革兰氏阴性细菌的活性的抗生素， 例 如选自大环内酯、 β- 内酰胺 ( 其可包括单环 β- 内酰胺、 碳青霉烯、 碳头孢烯 )、 四环素、 多 肽抗生素和喹诺酮的抗生素。在另一些实施方式中， 所述种类可以包括氨基糖苷。在又一 些实施方式中， 所述种类可以包括大环内酯、 β- 内酰胺和喹诺酮。 应当注意， 本发明可以引 起对于不动杆菌所抵抗的一个或多个种类的抗生素的抵抗性的克服， 但是并不必然意味着 对于不动杆菌可能抵抗的所有种类的抗生素的抵抗性的克服。因此， 例如对于大环内酯和 / 或 β- 内酰胺和 / 或喹诺酮的抵抗性可以在仍抵抗其他抗生素 ( 例如氨基糖苷 ) 的 MDR 菌株中得到克服。
更具体而言， 在这些实施方式中， 抗生素可以选自大环内酯、 单环 β- 内酰胺、 碳 青霉烯、 碳头孢烯、 第 3 和第 4 代头孢菌素、 四环素、 多肽抗生素和喹诺酮。在更具体的代表 性实施方式中， 细菌可以抵抗选自大环内酯、 β- 内酰胺和喹诺酮的抗生素， 例如选自大环 内酯、 单环 β- 内酰胺、 碳青霉烯、 碳头孢烯、 第 3 和第 4 代头孢菌素和喹诺酮的抗生素。在 另一些实施方式中， 以上所列的抗生素种类也可以包括氨基糖苷。 例如， 抗生素可以选自丁 胺卡那霉素、 庆大霉素、 卡那霉素、 新霉素、 奈替米星、 链霉素、 妥布霉素、 阿奇霉素、 克拉霉 素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 泰利霉素、 碳霉素 A、 交沙霉素、 吉他霉素、 麦迪霉素、 竹桃 霉素、 螺旋霉素、 泰乐菌素、 醋竹桃霉素、 氨曲南、 亚胺培南、 美罗培南、 厄他培南、 多尼培南、 帕尼培南 / 倍他米隆、 比阿培南、 PZ-601、 头孢克肟、 头孢地尼、 头孢托仑、 头孢哌酮、 头孢噻 肟、 头孢泊肟、 头孢他啶、 头孢布烯、 头孢唑肟、 头孢曲松、 头孢吡肟、 地美环素、 强力霉素、 米 诺环素、 土霉素、 四环素、 杆菌肽、 粘菌素、 多粘菌素 B、 环丙沙星、 依诺沙星、 加替沙星、 左氧 氟沙星、 洛美沙星、 莫西沙星、 诺氟沙星、 氧氟沙星和 / 或曲伐沙星。特别地， 不动杆菌生物
体可以抵抗选自丁胺卡那霉素、 妥布霉素、 头孢他啶、 亚胺培南 / 西司他丁、 美罗培南、 氨曲 南、 土霉素、 粘菌素、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素和环丙沙 星的一种或多种抗生素， 并且特别优选的是， 不动杆菌生物体抵抗选自头孢他啶、 亚胺培南 / 西司他丁、 美罗培南、 氨曲南、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素 和环丙沙星的一种或多种抗生素。更优选的是， 不动杆菌生物体抵抗选自氨曲南、 阿奇霉 素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素和环丙沙星的一种或多种抗生素。
“抵抗抗生素” 是指与对抗生素敏感的对照菌或者典型或野生型形式的细菌相比， 细菌对于该抗生素显示出显著更大的耐受性 ( 较低的敏感性 )。虽然抵抗性可以获得或发 展出 ( 例如， 通过由另一种细菌转化或通过突变， 此处所使用的术语 “获得” 包括产生抵抗 性的任何手段或机制 )， 但是也可以是生物所固有的 ( 或天生的 )。所述显著较大的耐受性 可以是对于抗生素的敏感性的统计性显著的降低， 例如其通过标准检测、 如 MIC 检测而测 得。在一些情况下， 细菌可以完全不受暴露于抗生素的影响。在此情形下， 可以认为细菌完 全抵抗该抗生素。
代表性对照菌是牛津金黄色葡萄球菌 (NCTC 6571)， 但许多其他细菌在本领域中 也是已知并可容易获得的。 典型或野生型形式的细菌可以容易地从全世界的实验室和培养 物收集库中获得。 可以以任何方便的方法测量对抗生素的敏感性 ( 以及相反的抵抗性和耐受性 )， 例如使用稀释敏感性测试和 / 或纸片扩散法。本领域技术人员将会理解， 在足以构成抵抗 性的耐受性 / 敏感性方面的差异程度将随测试下的抗生素和生物体以及所采用的测试而 变。然而， 抵抗性细菌的耐受性优选是对抗生素敏感的对照菌或者典型或野生型形式的细 菌对于抗生素耐受性的至少 2 倍、 例如至少 3 倍、 4 倍、 5 倍、 6 倍、 10 倍、 20 倍或 50 倍。优选 的是， 使用不处在生物膜中或者不具有生物膜表型的细菌确定特定细菌对于抗生素的抵抗 性。
不动杆菌可以被确定为多重抗药 (MDR)， 例如不动杆菌显示出对于超过 2 种 ( 例 如， 超过 3 种、 超过 5 种或超过 10 种 ) 具有抵抗革兰氏阴性菌活性的抗生素的抵抗性。 优选 的是， 不动杆菌生物体抵抗至少 3 种或至少 4 种、 5 种、 6 种、 7 种、 8 种、 9 种或 10 种抗生素种 类， 例如如上所述的那些种类。如上所述， 不同种类的抗生素在结构上和 / 或功能上不同。 在另一些实施方式中， 本发明的方法所针对的不动杆菌生物体可以是任何具有极大抗药性 的不动杆菌生物体， 根据本发明， 这意味着该细菌抵抗大多数或者所有抗生素。特别是， 极 大抗药性细菌抵抗至少一种作为最后防线的抗生素 ( 例如万古霉素、 利奈唑酮等 )。 本领域 技术人员了解作为最后防线的抗生素的实例。
在优选实施方式中， 本发明的方法中所使用的抗生素是所针对的不动杆菌生物体 对其显示抵抗性的抗生素。根据本发明， 本发明的藻酸盐低聚物改进了所使用的抗生素抵 抗靶不动杆菌生物体的有效性。如果该生物体抵抗抗生素， 则本发明可以被视作克服所述 不动杆菌对所述抗生素的抵抗性的方法。在本发明的方法的优选实施方式中， 所使用的抗 生素是选自大环内酯、 β- 内酰胺、 四环素和喹诺酮的抗生素。在另一个实施方式中， 可以 包括多肽抗生素和 / 或氨基糖苷。在另一些实施方式中， 抗生素不包括氨基糖苷和 / 或多 肽抗生素 ( 例如粘菌素 )。
“克服抵抗性” 应因此理解为不动杆菌所显示的对于抗生素的抵抗性的上述指标
的明显降低 ( 或者敏感性的明显提高或耐受性的明显降低 )。因此作为另外一种选择， “克 服抵抗性” 也可以表达为 “降低抵抗性” 。其为对所观察到的靶不动杆菌的表型的参考， 并 且不应必然地认为其在任何程度上等同于在任何特定抵抗性机制的机制水平上的反转。 如 从实施例中可以看出， 藻酸盐低聚物和抗生素具有联合效应 ( 例如协同效应 )， 其使具有抵 抗抗生素的表型的不动杆菌对于该抗生素更敏感。在一个实施方式中， 藻酸盐低聚物将显 著降低抵抗性不动杆菌对于抗生素的 MIC 值， 例如 MIC 值为根据本发明治疗之前不动杆菌 对于抗生素的 MIC 值的至少 50％、 25％、 20％、 15％、 10％、 5％、 2％或 1％。
因此， 本发明的藻酸盐低聚物的使用可以使得此前被认为对于特定不动杆菌无用 / 无效的抗生素或者为通常对给定不动杆菌无效的抗生素可用 ( 或有效 )。其也能使得可 以以较低的剂量使用抗生素。
然而， 如上所述， 这并不要求或者意味着任何给定的具有抵抗性 ( 例如 MDR) 的菌 株的抵抗性全部能被克服。本发明可能例如会对克服给定菌株对于某类抗生素 ( 例如对于 大环内酯和 / 或喹诺酮和 / 或 β- 内酰胺 ) 的抵抗性有效， 其可能在临床上有用， 但是对其 他抗生素的抵抗性可能仍然存在。
可以看出， 藻酸盐低聚物的克服对于抗生素的抵抗性或加强 ( 等 ) 抗生素的效果 的效果与对于所讨论的抗生素的抵抗性的机制无关。不过， 对于环丙沙星已经观察到良好 的结果。对于该抗生素的抵抗性会涉及突变的累积， 特别是在编码 DNA 促旋酶或拓扑异构 酶 IV 的基因中的突变的累积。不希望受限于理论， 本发明的藻酸盐低聚物可以因此例如通 过防止、 减缓或中断累积过程而影响该累积过程。 然而， 不能由此认定或认为其意味着藻酸 盐低聚物会对任何抵抗性机制具有任何影响。
不动杆菌也可以是此前已在患者 ( 例如人类患者 ) 或健康护理机构 ( 例如医院 ) 发现或也在其中发现的菌株。 如上所述， 不动杆菌在中东国家流行， 因此不动杆菌可以是任 何此类菌株或物种。例如， 不动杆菌可以是在利比亚发现的菌株。作为另一种选择而言， 本 发明所指向的不动杆菌生物体是临床相关的不动杆菌生物体， 例如已知与受试对象的疾病 和 / 或感染有关的不动杆菌生物体 ； 尤其是对于一种抗生素或抗生素种类、 优选至少 3 种结 构上和 / 或功能上不同的抗生素或者至少 3 种抗生素种类、 更特别是至少 4 种、 5 种、 6 种、 7 种、 8 种、 9 种或 10 种结构上和 / 或功能上不同的抗生素或抗生素种类无响应的疾病和感 染， 所述抗生素或抗生素种类通常用于所述疾病和 / 或感染的治疗。更特别地， 本发明所指 向的不动杆菌生物体可以来自临床相关的 MDR 不动杆菌菌株。所述不动杆菌生物体可以引 起或导致临床严重性或临床重大感染， 换言之即作为严重临床问题的成因的感染。 例如， 不 动杆菌生物体可以是与医院感染、 患者 ( 例如罹患囊性纤维化、 慢性阻塞性肺病、 充血性气 道阻塞病 / 充血性气道阻塞性肺炎 (COAD/COAP)、 肺炎、 气肿、 支气管炎和鼻窦炎的患者 ) 的 呼吸道感染 ； 慢性伤口 ( 包括灼伤 ) 感染、 与可植入或假体医疗装置相关的装置相关感染 ( 例如， 人工瓣膜心内膜炎， 或者线路、 导管、 人工关节、 组织替代物、 气管内或气管切开插管 的感染 ) 相关的不动杆菌生物体。显著的是， 如上所述， 在例如战场 ( 例如中东战场 ) 等军 事环境中获得的不动杆菌感染正越来越成问题， 并可能易受本发明的治疗的影响。
本发明的方法所指向的不动杆菌生物体可以与以前已从受试对象分离的细菌相 同。因此， 不动杆菌生物体优选为临床菌株或临床分离菌株。本发明的方法所针对的不动 杆菌生物体可以存在于受试对象之中或之上。 不动杆菌生物体可以是已知的或据发现可抵抗抗生素 ( 例如具有 MDR) 的不动杆菌生物体， 或者所述不动杆菌生物体可能在受试对象的 治疗中发展出抵抗性或 MDR。根据本发明治疗的不动杆菌生物体通常不是常规实验室菌株 或参照菌株。
优选的是， 不动杆菌物种为鲍曼不动杆菌， 藻酸盐低聚物为具有其中大多数 G 残 基处于 G 嵌段中的一级结构的低聚物， 并且抗生素为大环内酯， 例如抗生素为阿奇霉素。
在另一些优选实施方式中， 不动杆菌物种为鲍曼不动杆菌或鲁氏不动杆菌， 并且 抗生素选自大环内酯、 β- 内酰胺、 四环素和喹诺酮， 例如阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红 霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素、 氨曲南、 亚胺培南、 美罗培南、 头孢他啶、 土霉素或环丙沙星， 尤 其是阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素、 氨曲南、 美罗培南或头孢 他啶。
本发明的方法会需要将不动杆菌与超过一种抗生素接触。 额外的抗生素可以是任 何抗生素， 例如以上所列的那些抗生素。 额外的抗生素可以是不动杆菌对其敏感的抗生素。 额外的抗生素可以是不动杆菌对其抵抗的抗生素。 额外的抗生素可以与第一或其他抗生素 和 / 或藻酸盐低聚物一起 ( 协同或联合 ) 使用。更特别地， 使用的步骤可以包含在将不动 杆菌生物体以可以抑制不动杆菌的生长和 / 或生存的有效量与一些或所有抗生素接触的 同时、 基本同时或之前将不动杆菌与藻酸盐低聚物接触。
如上所述， 抗生素可以方便地与藻酸盐低聚物同时或者在藻酸盐低聚物之前、 之 后立即或几乎立即应用或施用。 不过， 抗生素可以在藻酸盐低聚物之后的不同时间点， 例如 至少 1 小时、 至少 3 小时、 至少 6 小时应用或施用。开发优化藻酸盐低聚物和抗生素的效果 的剂量方案在医学从业者的技术范围之内。在这些实施方式中， 抗生素可以在另外应用或 不另外应用藻酸盐低聚物下应用或施用。 藻酸盐低聚物可以在抗生素之前或与其同时以多 种应用方式应用或施用。 在另一些实施方式中， 抗生素可以在藻酸盐低聚物之前、 例如在藻 酸盐低聚物之前至少 1 小时、 至少 3 小时、 至少 6 小时方便地应用或施用。在这些实施方式 中， 藻酸盐低聚物可以在另外应用或不另外应用抗生素下应用或施用。抗生素可以在藻酸 盐低聚物之前或与其同时以多种应用方式应用或施用。 本领域技术人员能够容易地确定计 划使用的藻酸盐低聚物和抗生素的适当给药方案。
优选的抗生素组合可以是来自粘菌素、 环丙沙星、 美罗培南、 头孢他啶、 氨曲南、 阿 奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素和亚胺培南 / 西司他丁、 丁胺卡 那霉素、 庆大霉素、 土霉素、 妥布霉素和万古霉素中的两种或多于两种。 更特别地， 它们可以 选自美罗培南、 环丙沙星、 头孢他啶、 氨曲南、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红 霉素、 螺旋霉素、 亚胺培南 / 西司他丁或土霉素， 更特别地是选自环丙沙星、 美罗培南、 头孢 他啶、 氨曲南、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素和螺旋霉素。
不动杆菌群体可以包含任何上述不动杆菌物种， 并可以是同源的或异源的。不动 5 杆菌群体被认为具有至少 1000 个生物体， 例如至少 10 、 106、 107、 108 或 109 个生物体。不动 杆菌生物体或不动杆菌群体也可以与其他微生物共享所处的地点。
本文所使用的术语 “微生物” 包括任何微生物生物体， 其为显微级别的， 即小到肉 眼无法看到的任何生物体。特别是， 本文所使用的该术语包括病毒和更通常被认为是微生 物的生物体， 特别是细菌、 真菌、 古细菌、 藻类和原生生物。因此， 该术语特别包括通常为单 细胞但能够在某些条件下组成成简单的协作菌落或如丝、 菌丝或菌丝体 ( 但不是真正的组织 ) 的微生物。微生物可以是原核或真核微生物， 并可以来自任何微生物的科、 属或种。原 核微生物的实例包括但不限于细菌， 所述细菌包括支原体 ( 例如， 革兰氏阳性菌、 革兰氏阴 性菌或革兰氏测试无响应性细菌 ) 和古细菌。真核微生物包括真菌、 藻类和正被或已在原 生生物界中被分类为或被认作原生生物的其他生物， 并包括但不限于例如原生动物、 硅藻、 原生植物、 真菌状霉菌。微生物可以是需氧的或厌氧的。微生物可以是致病的或非致病的， 或者是腐败微生物或指示微生物。在特别优选的实施方式中， 微生物是致病的。
细 菌 的 属 或 种 的 实 例 包 括 但 不 限 于 营 养 缺 陷 菌 属 (Abiotrophia)、 无色菌属 (Achromobacter)、 氨 基 酸 球 菌 属 (Acidaminococcus)、 食 酸 菌 属 (Acidovorax)、 不动杆 菌 属 (Acinetobacter)、 放 线 杆 菌 属 (Actinobacillus)、 放 线 棒 菌 属 (Actinobaculum)、 马 杜 拉 菌 属 (Actinomadura)、 放 线 菌 属 (Actinomyces)、 气 球 菌 属 (Aerococcus)、 气单 胞 菌 属 (Aeromonas)、 阿 菲 波 菌 属 (Afipia)、 土 壤 杆 菌 属 (Agrobacterium)、 产碱菌属 (Alcaligenes)、 差 异 球 菌 属 (Alloiococcus)、 交 替 单 胞 菌 属 (Alteromonas)、 无枝酸菌 属 (Amycolata)、 拟 无 枝 菌 酸 菌 (Amycolatopsis)、 厌 氧 螺 菌 属 (Anaerobospirillum)、 棍 状 厌 氧 菌 属 (Anaerorhabdus)、 蛛 菌 属 (Arachnia)、 隐 秘 杆 菌 属 (Arcanobacterium)、 弓 形 菌 属 (Arcobacter)、 节 杆 菌 属 (Arthrobacter)、 奇 异 菌 属 (Atopobium)、 金杆菌 属 (Aureobacterium)、 拟 杆 菌 属 (Bacteroides)、 巴 氏 发 菌 属 (Balneatrix)、 巴尔通体 菌 属 (Bartonella)、 伯 杰 氏 菌 属 (Bergeyella)、 双 歧 杆 菌 属 (Bifidobacterium)、 嗜胆 菌属 (Bilophila)、 布兰汉氏菌属 (Branhamella)、 包柔氏螺旋体菌属 (Borrelia)、 博德 特 杆 菌 属 (Bordetella)、 短 螺 菌 属 (Brachyspira)、 短 芽 胞 杆 菌 属 (Brevibacillus)、 枯 草 芽 孢 杆 菌 属 (Brevibacterium)、 短 波 单 胞 菌 属 (Brevundimonas)、 布鲁氏杆菌属 (Brucella)、 伯 克 霍 尔 德 菌 属 (Burkholderia)、 布 丘 氏 菌 属 (Buttiauxella)、 丁酸弧菌 属 (Butyrivibrio)、 鞘 杆 菌 属 (Calymmatobacterium)、 螺 旋 杆 菌 属 (Campylobacter)、 二 氧 化 碳 噬 纤 维 菌 属 (Capnocytophaga)、 心 杆 菌 属 (Cardiobacterium)、 卡托氏菌 属 (Catonella)、西 地 西 菌 属 (Cedecea)、纤 维 单 胞 菌 属 (Cellulomonas)、百 足 菌 属 (Centipeda)、 披 衣 菌 属 (Chlamydia)、 嗜 衣 原 体 属 (Chlamydophila)、 色杆菌属 (Chromobacterium)、 金 黄 杆 菌 属 (Chyseobacterium)、 金 色 单 胞 菌 属 (Chryseomonas)、 柠檬酸杆菌属 (Citrobacter)、 梭菌属 (Clostridium)、 柯林斯氏菌属 (Collinsella)、 丛 毛单胞菌 (Comamonas)、 棒状杆菌属 (Corynebacterium)、 柯克斯体属 (Coxiella)、 短小 杆 菌 属 (Cryptobacterium)、 代 尔 夫 特 菌 属 (Delftia)、 皮 杆 菌 属 (Dermabacter)、 嗜皮 菌 属 (Dermatophilus)、 脱 硫 单 胞 菌 属 (Desulfomonas)、 脱 硫 弧 菌 属 (Desulfovibrio)、 戴 阿 李 斯 特 杆 菌 属 (Dialister)、腐 蹄 杆 菌 属 (Dichelobacter)、狡 诈 球 菌 属 (Dolosicoccus)、狡 诈 菌 属 (Dolosigranulum)、爱 德 华 氏 菌 属 (Edwardsiella)、埃 格 特 菌 属 (Eggerthella)、 埃 利 希 体 属 (Ehrlichia)、 艾 肯 菌 属 (Eikenella)、 稳杆菌 属 (Empedobacter)、 肠 杆 菌 属 (Enterobacter)、 肠 球 菌 属 (Enterococcus)、 欧文菌属 (Erwinia)、 丹毒丝菌属 (Erysipelothrix)、 埃希氏菌属 (Escherichia)、 粘球生孢噬纤维 菌属 (Eubacterium)、 爱文氏菌属 (Ewingella)、 锰氧化还原菌属 (Exiguobacterium)、 费 克蓝姆菌属 (Facklamia)、 产线菌属 (Filifactor)、 黄色单胞菌属 (Flavimonas)、 伊氏螺 菌 属 (Flavobacterium)、 弗 朗 西 氏 菌 属 (Francisella)、 梭 形 杆 菌 属 (Fusobacterium)、 加 德 纳 氏 菌 属 (Gardnerella)、 球 链 菌 属 (Globicatella)、 孪 生 球 菌 属 (Gemella)、戈 登 氏 菌 属 (Gordona)、 嗜 血 菌 属 (Haemophilus)、 哈 夫 尼 菌 属 (Hafnia)、 螺杆菌属 (Helicobacter)、 盐 球 菌 属 (Helococcus)、 霍 尔 德 曼 氏 菌 属 (Holdemania)、 不活动粒菌 属 (Ignavigranum)、 约翰森氏菌属 (Johnsonella)、 金氏菌属 (Kingella)、 克雷伯氏菌属 (Klebsiella)、 考克斯菌属 (Kocuria)、 科泽氏菌属 (Koserella)、 库特氏菌属 (Kurthia)、 盖 球 菌 属 (Kytococcus)、 乳 杆 菌 属 (Lactobacillus)、 乳 球 菌 属 (Lactococcus)、 劳特洛 普 氏 菌 属 (Lautropia)、 勒 克 氏 菌 属 (Leclercia)、 军 团 菌 属 (Legionella)、 勒米诺氏 菌 属 (Leminorella)、 钩 端 螺 旋 体 属 (Leptospira)、 纤 毛 菌 属 (Leptotrichia)、 明串珠 菌 属 (Leuconostoc)、 利 斯 特 氏 菌 属 (Listeria)、 利 斯 顿 氏 菌 属 (Listonella)、 巨球形 菌 属 (Megasphaera)、 甲 基 杆 菌 属 (Methylobacterium)、 微 杆 菌 属 (Microbacterium)、 微 球 菌 属 (Micrococcus)、 光 岗 菌 属 (Mitsuokella)、 动 弯 杆 菌 属 (Mobiluncus)、 米勒 氏 菌 属 (Moellerella)、 莫 拉 氏 菌 属 (Moraxella)、 摩 根 氏 菌 属 (Morganella)、 分枝杆 菌 属 (Mycobacterium)、 支 原 体 属 (Mycoplasma)、 香 味 菌 属 (Myroides)、 奈瑟氏球菌 属 (Neisseria)、 诺 卡 氏 菌 属 (Nocardia)、 拟 诺 卡 氏 菌 属 (Nocardiopsis)、 苍白杆菌属 (Ochrobactrum)、 厄氏菌属 (Oeskovia)、 寡源杆菌属 (Oligella)、 东方体属 (Orientia)、 类 芽 孢 杆 菌 属 (Paenibacillus)、 泛 菌 属 (Pantoea)、 副 衣 原 体 属 (Parachlamydia)、 巴 斯 德 氏 菌 属 (Pasteurella)、 片 球 菌 属 (Pediococcus)、 消 化 球 菌 属 (Peptococcus)、 消 化 链 球 菌 属 (Peptostreptococcus)、 发 光 杆 菌 属 (Photobacterium)、 光杆状菌属 (Photorhabdus)、 邻单胞菌属 (Plesiomonas)、 卟啉单胞菌属 (Porphyrimonas)、 普雷沃氏 菌属 (Prevotella)、 丙酸杆菌属 (Propionibacterium)、 变形菌属 (Proteus)、 普罗威登斯 菌 属 (Providencia)、 假 单 胞 菌 属 (Pseudomonas)、 假 诺 卡 氏 菌 属 (Pseudonocardia)、 假 支杆菌属 (Pseudoramibacter)、 嗜冷杆菌属 (Psychrobacter)、 拉恩氏菌属 (Rahnella)、 劳 尔 氏 菌 属 (Ralstonia)、 红 球 菌 属 (Rhodococcus)、 立 克 次 氏 体 属 (Rickettsia)、 罗 卡 利 马 氏 体 属 (Rochalimaea)、 玫 瑰 单 胞 菌 属 (Roseomonas)、 罗 氏 菌 属 (Rothia)、 瘤胃 球 菌 属 (Ruminococcus)、 沙 门 氏 菌 属 (Salmonella)、 月 形 单 胞 菌 属 (Selenomonas)、 小 蛇 菌 属 (Serpulina)、 沙 雷 氏 菌 属 (Serratia)、 希 瓦 氏 菌 属 (Shewenella)、 志贺氏 菌 属 (Shigella)、 芯 卡 体 属 (Simkania)、 史 雷 克 氏 菌 属 (Slackia)、 鞘氨醇杆菌属 (Sphingobacterium)、 鞘氨醇单胞菌属 (Sphingomonas)、 螺菌属 (Spirillum)、 葡萄球菌 属 (Staphylococcus)、 寡养单胞菌属 (Stenotrophomonas)、 口腔球菌属 (Stomatococcus)、 链杆菌属 (Streptobacillus)、 链球菌属 (Streptococcus)、 链霉菌属 (Streptomyces)、 琥 珀酸弧菌属 (Succinivibrio)、 萨特氏菌属 (Sutterella)、 萨顿氏菌属 (Suttonella)、 塔 特姆氏菌属 (Tatumella)、 替策氏菌属 (Tissierella)、 特拉布斯氏菌属 (Trabulsiella)、 密螺旋体属 (Treponema)、 创非锐属 (Tropheryma)、 束村氏菌属 (Tsakamurella)、 苏黎世 菌属 (Turicella)、 尿枝原体属 (Ureaplasma)、 漫游球菌属 (Vagococcus)、 韦荣氏球菌属 (Veillonella)、 弧菌属 (Vibrio)、 威克斯氏菌属 (Weeksella)、 沃林氏菌属 (Wolinella)、 黄单胞菌属 (Xanthomonas)、 致病杆菌属 (Xenorhabdus)、 耶尔森氏菌属 (Yersinia) 和预 研菌属 (Yokenella) ； 例如， 革兰氏阳性细菌， 如结核分枝杆菌 (M.tuberculosis)、 牛分枝 杆菌 (M.bovis)、 鼠伤寒分枝杆菌 (M.typhimurium)、 牛分枝杆菌 BCG 菌株、 BCG 亚菌株、 鸟 分枝杆菌 (M.avium)、 胞内分枝杆菌 (M.intracellular)、 非洲分枝杆菌 (M.africanum)、 堪 萨斯分枝杆菌 (M.kansasii)、 海洋分枝杆菌 (M.marinum)、 溃疡分枝杆菌 (M.ulcerans)、鸟分枝杆菌副结核分枝杆菌亚种、 金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、 表皮葡萄 球 菌 (Staphylococcus epidermidis)、 马 葡 萄 球 菌 (Staphylococcus equi)、 酿脓链球 菌 (Streptococcus pyogenes)、 无乳链球菌 (Streptococcus agalactiae)、 单核细胞增 生利斯特氏菌 (Listeria monocytogenes)、 伊氏利斯特氏菌 (Listeria ivanovii)、 炭疽 芽孢杆菌 (Bacillus anthracis)、 枯草芽胞杆菌 (B.subtilis)、 星状诺卡氏菌 (Nocardia asteroides)、 衣氏放线菌 (Actinomyces israelii)、 疮疱丙酸杆菌 (Propionibacterium acnes)、 破伤风梭菌 (Clostridium tetani)、 产气荚膜梭菌 (Clostridium perfringens)、 肉毒梭菌 (Clostridiumbotulinum) 和肠球菌属的物种 ； 和革兰氏阴性细菌， 如铜绿假单 胞菌 (Pseudomonas aeruginosa)、 霍乱弧菌 (Vibrio cholerae)、 大叶性肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae)、 溶 血 巴 斯 德 氏 菌 (Pasteurella haemolytica)、 多杀巴斯德氏菌 (Pasteurella multocida)、 嗜肺军团菌 (Legionella pneumophila)、 伤 寒沙门氏菌 (Salmonella typhi)、 流产布鲁氏菌 (Brucella abortus)、 伯氏考克斯氏体 (Coxiella burnetii)、 大肠埃希氏菌 (Escherichia coli)、 脑膜炎奈瑟氏球菌 (Neiserria meningitidis)、 淋 病 奈 瑟 氏 球 菌 (Neiserria gonorrhea)、 流 感 嗜 血 菌 (Haemophilus influenzae)、 杜氏嗜血菌 (Haemophilus ducreyi)、 鼠疫耶尔森氏菌 (Yersinia pestis)、 小肠结肠炎耶尔森氏菌 (Yersinia enterolitica)、 大肠埃希氏菌 (Escherichia coli)、 希 拉肠球菌 (E.hirae)、 洋葱伯克霍尔德氏菌 (Burkholderia cepacia)、 类鼻疽伯克霍尔德氏 菌 (Burkholderia pseudomallei)、 土拉热弗朗西丝氏菌 (Francisella tularensis)、 脆 弱拟杆菌 (Bacteroides fragilis)、 具核梭杆菌 (Fusobascterium nucleatum)、 反刍类考 德里氏体 (Cowdria ruminantium) ； 以及革兰氏非响应性细菌， 如砂眼披衣菌 (Chlamydia trachomatis) 和鹦鹉披衣菌 (Chlamydia psittaci)。
微生物也可以是或者来自真菌， 包括例如正在或已经分类为原生生物的真菌， 例 如来自念珠菌属、 曲霉菌属、 肺孢子虫属、 青霉菌属和镰刀菌属的真菌。代表性真菌属包括 但不限于白色念珠菌、 都柏林念珠菌、 隐球酵母菌、 组织胞浆菌、 烟曲菌、 粗球孢子菌、 巴西 副球孢子菌、 皮炎芽生菌、 卡氏肺孢菌、 马尔尼菲青霉菌、 链格孢菌。
微生物也可以是或来自藻类， 包括例如可以是正在或已经分类为原生生物的藻 类。代表性藻种包括胶毛藻属 (Chaetophora)、 异养小球藻 (Chlorella protothecoides)、 鞘 毛 藻 (Coleochaete scutata)、散 生 鞘 毛 藻 (Coleochaete soluta)、单 核 红 藻 (Cyanidioschyzon merolae)、 隐 毛 藻 属 (Aphanochaete)、 胶 带 藻 属 (Gloeotaenium)、 鞘 藻 属 (Oedogonium)、 卵 囊 藻 属 (Oocystis)、 颤 藻 属 (Oscillatoria)、 玛尔提奇异藻 (Paradoxia multisitia)、 席 藻 属 (Phormidium)、 色 球 藻 属 (Chroococcus)、 隐杆藻属 (Aphanothece)、 脆杆藻属 (Fragillaria)、 卵形藻属 (Cocconis)、 舟形藻属 (Navicula)、 桥 弯藻属 (Cymbella)、 褐指藻属 (Phaeodactylum) 以及蓝藻目 (cyanobacteria)( 蓝绿藻 ) 和 硅藻属 (diatoms)( 例如， 谷皮菱形藻 (Nitzschia palea))。
微生物也可以是原生动物， 例如阿米巴、 孢子虫类、 纤毛虫类和鞭毛虫类的成员。 代表性原生动物包括如刚地弓形虫 (Toxoplasma gondii) 等弓形虫属 (Toxoplasma) 物 种、 如镰状疟原虫 (Plasmodium falciparum)、 间日疟原虫 (Plasmodium vivax)、 三日疟 原虫 (Plasmodium malariae) 等疟原虫属 (Plasmodium) 物种、 如布氏锥虫 (Trypanosoma brucei)、 克氏锥虫 (Trypanosoma cruzi) 等锥虫属 (Trypanosoma) 物种、 如硕大利什曼原虫 (Leishmania major) 等利什曼原虫属 (Leishmania) 物种， 和如溶组织内阿米巴虫 (Entamoeba histolytica) 等内阿米巴属 (Entamoeba) 物种。
术语 “病毒” 包括所有病毒。因此， 病毒可以是 RNA 病毒 ( 单链或双链的 ) 或 DNA 病毒 ( 单链或双链的 )。也可以是具包膜或无包膜病毒。病毒可以靶向原核生物或真核生 物； 其可以是噬菌体或靶向植物、 动物或真菌的病毒。 优选的是， 病毒靶向真核生物、 优选动 物或植物。靶向动物的代表性病毒家族为细小病毒科、 乳多泡病毒科、 腺病毒科、 短尾噬菌 体科、 呼肠孤病毒科、 逆转录病毒科、 冠状病毒科、 弹性病毒科、 副粘病毒科、 正粘病毒科、 疱 疹病毒科、 嗜肝 DNA 病毒科和痘病毒科。靶向植物的代表性病毒家族为雀麦花叶病毒科、 线 虫传多面体病毒科、 豇豆花叶病毒科、 花椰菜花叶病毒科、 呼肠孤病毒科、 弹状病毒科、 烟草 花叶病毒科、 黄瓜花叶病毒科、 黄矮病毒科、 马铃薯 X 病毒科和马铃薯 Y 病毒科。病毒可以 是这些家族中的任何一种， 例如 HIV、 单纯疱疹病毒、 EB 病毒、 正痘病毒、 禽痘病毒、 乳头状 瘤病毒、 腺病毒、 细小病毒、 流感病毒、 甲肝病毒、 乙肝病毒、 丙肝病毒、 丁肝病毒、 戊肝病毒、 狂犬病毒、 麻疹病毒、 手足口病病毒、 SARS 冠状病毒、 鼻病毒、 轮状病毒、 风疹病毒和腮腺炎 病毒。
不动杆菌生物体的或其群体的地点不受限制。 不动杆菌生物体或其群体可以存在 于表面上。表面不受限制， 并包括不动杆菌生物体或其群体可出现于其上的任何表面。该 表面可以是生物的或非生物的， 并且无生命的 ( 或非生物的 ) 表面包括可能暴露于微生物 接触或污染的任何表面。因此， 所述表面特别包括机械、 特别是工业机械上的表面， 或暴露 于水生环境 ( 例如海事设备、 或者船、 艇或其零件或组件 ) 的任何表面， 或暴露于所述环境 的任何部分的任何表面， 例如管道或建筑物上。暴露于微生物接触或污染的所述无生命表 面具体地包括任何以下部分 ： 食品或饮品加工、 制备、 贮存或配送机械或设备、 空调设备、 工 业机械 ( 例如， 化学或生物技术加工厂中的工业机械 )、 储存罐、 医学或外科手术设备， 和细 胞和组织培养设备。 任何用于运载、 运输或输送材料的装置或设备易受微生物污染的影响。 此类表面特别包括管道 ( 本文该术语用于广义地包括任何导管或线路 (line))。代表性的 无生命或非生物表面包括但不限于食品加工、 贮存、 配送或制备设备或表面、 罐、 输送机、 地 板、 排液装置、 冷却器、 冷冻器、 设备表面、 墙、 阀、 带、 管道、 空调导管、 冷却装置、 食品或饮品 配送线、 热交换器、 艇壳或暴露于水的艇结构的任何部分、 牙科水线、 石油钻探导管、 隐形眼 镜和贮存盒。
如上所述， 医学或外科手术设备或装置代表其上可以形成不动杆菌污染的一类特 定表面。这类表面可以包括任何种类的包括导管 ( 例如中心静脉导管和导尿管 ) 在内的线 齿冠、 齿帽 (dental caps) 和软组织植入物 路和假体装置， 例如心脏瓣膜、 人工关节、 假牙、 ( 例如胸部、 臀部和唇部植入物 )。任何种类的可植入 ( 或 “留置” ) 医疗装置 ( 例如支架、 子宫内装置、 起搏器、 插管 ( 气管内或气管切开插管 )、 假体或或假体装置、 线路或导管 ) 都 包括在内。 “留置” 医疗装置可包括其任何部分都被容纳于身体内的装置， 即该装置可以全 部或部分地留置。
所述表面可由任何材料制造。例如其可以为金属， 例如， 铝、 钢、 不锈钢、 铬、 钛、 铁 及其合金等。所述表面还可以为塑料， 例如， 聚烯烃 ( 例如聚乙烯、 ( 超高分子量 ) 聚乙烯、 聚丙烯、 聚苯乙烯、 聚 ( 甲基 ) 丙烯酸酯、 丙烯腈、 丁二烯、 ABS、 丙烯腈丁二烯等 )、 聚酯 ( 例 如聚对苯二甲酸乙二酯等 ) 和聚酰胺 ( 例如尼龙 ) 及其组合等。其他实例包括缩醛共聚物、 聚苯砜、 聚砜、 聚醚酰亚胺、 聚碳酸酯、 聚醚醚酮、 聚偏氟乙烯、 聚 ( 甲基丙烯酸甲酯 ) 和 聚 ( 四氟乙烯 )。所述表面还可以为砖、 瓦、 陶瓷、 瓷器、 木材、 乙烯树脂、 油毡或地毡及其组 合等。所述表面还可以为食品， 例如牛肉、 家禽、 猪肉、 蔬菜、 水果、 鱼、 贝类及其组合等。为 抗击不动杆菌感染进行的对任何所述表面的 “处理” ( 即， 将藻酸盐低聚物与抗生素一起应 用于任何所述表面 ) 都包括在本发明内。
在可根据本发明治疗的不动杆菌感染中， 不动杆菌可以出现在受试对象的表面 上。此外， 在医疗治疗的背景之外， 不动杆菌生物体也可能出现在生物表面上。因此， 本发 明包括生物表面的处理。生物或有生命的表面可以包括在动物、 植物或真菌体内或其上的 任何表面或界面。因此， 其可以被视为 “生理性” 或 “生物性” 表面。其可以为任何内部或 外部身体表面， 包括任何组织或器官表面， 对于动物体而言所述组织可以包括血液组织或 造血组织 ( 例如， 血液 )。死亡或垂死 ( 例如坏死 ) 或者受损 ( 例如， 发炎、 断裂或破裂 ) 组 织特别易受微生物污染的影响， 并且此类组织被术语 “有生命的” 或 “生物的” 所涵盖。所 述表面可以为粘膜或非粘膜表面。
代表性的生物表面包括但不限于 ： 在口腔中的任何表面 ( 例如， 牙齿、 牙龈、 牙龈 缝隙、 牙周袋 )、 生殖道 ( 例如子宫颈、 子宫、 输卵管 )、 腹膜、 中耳、 前列腺、 尿道、 血管内膜、 眼 ( 即， 任何眼组织， 例如结膜、 角膜组织、 泪道、 泪腺、 眼睑 )、 呼吸道、 肺组织 ( 例如支气管 和肺泡 )、 心脏瓣膜、 胃肠道、 皮肤、 头皮、 指甲、 以及伤口、 特别是慢性伤口和手术伤口的内 部 ( 可以为局部或内部伤口 )。 其他表面包括器官、 特别是进行移植的那些器官 ( 例如， 心、 肺、 肾、 肝、 心脏瓣膜、 胰腺、 小肠、 角膜组织、 动脉和静脉移植物， 和皮肤 ) 的外部。
在一方面所述表面不会是粘膜表面， 或更具体而言， 其将不具有高粘性粘液包被 物。本领域技术人员将能够确定给定表面处的粘液何时是高粘性的。在一个实施方式中， 所述表面不是分泌粘液的组织的表面。 更具体地， 在此类实施方式中， 所述表面不是由粘液 包被的组织的表面。 本领域技术人员将根据其常识识别分泌粘液的组织和由粘液包被的组 织。
所述地点也可以是非表面地点。换言之， 不动杆菌生物体或其群体可见于材料内 部及其表面上。材料可以是化学异源性和化学同源性的。材料可以由不同部分或组分构成 或形成， 或者包含不同部分或组分。 材料可以是较大的材料或实体的一部分。 材料可以是或 者包含形成上述表面的材料。 在一些情况下， 材料可以被认为是物体， 该术语包括无论见于 何处的液体量。材料可以包含任何上述表面。材料可以是生物的或非生物的 ( 有生命的或 无生命的 )， 这与关于表面的上述讨论相似。例如， 表面可以完全或部分地是固体、 液体、 半 固体、 凝胶或凝胶 - 溶胶。因此， 例如不动杆菌生物体或其群体可以存在于以下物质之中 ： 体液 ( 例如血液、 血浆、 血清、 脑脊液、 胃肠道内容物、 精液 ) ； 组织 ( 例如肾上腺、 肝、 肾、 胰 腺、 垂体、 甲状腺、 免疫体、 卵巢、 睾丸、 前列腺、 子宫内膜、 眼、 乳腺、 脂肪、 上皮、 内皮、 神经、 肌肉、 肺、 表皮、 骨)； 细胞和组织培养基 ； 细胞和组织培养物 ； 临床 / 科研废料 ( 其可包含 任何前述材料 )、 医药品 ( 例如片剂、 丸剂、 粉末剂、 锭剂、 袋剂 (sachet)、 扁囊剂、 酏剂、 悬浮 剂、 乳剂、 溶液剂、 糖浆剂、 气雾剂、 喷雾剂、 用于雾化器的组合物、 膏剂、 软和硬明胶胶囊、 栓 剂、 无菌注射液和无菌包装的粉末剂 ) ； 动物或人类食品 ( 例如肉、 鱼、 贝类、 蔬菜、 谷物、 乳 制品、 果汁、 蔬菜汁、 酱料、 原汁、 汤、 甜食、 酒精饮料、 调味品 ) ； 个人卫生用品 ( 例如牙膏、 漱 口水、 洗发水、 香皂、 除臭剂、 洗浴凝胶 ) ； 化妆品 ( 例如润唇膏、 眼影、 粉底 ) ； 饮用水源 ； 废水源 ； 农用饲料和水源 ； 杀虫制剂 ； 除害制剂和除草制剂 ； 工业润滑剂 ； 等等。 值得注意的是 液体、 半固体、 凝胶或凝胶 - 溶胶。体液和组织可以进行体外 / 离体治疗， 并可以同样地进 行体内治疗。
在某些实施方式中， 不动杆菌生物体不处于生物膜中。在某些实施方式中， 不动 杆菌生物体处于生物膜中。换言之， 不动杆菌生物体不处于或处于生物膜生长模式 ； 或 者处于或不处于非生物膜生长模式。已经获得了表明藻酸盐低聚物可以在体外破坏不动 杆菌生物膜的数据。例如， 在鲍曼不动杆菌的体外生物膜的情况中， 藻酸盐低聚物 Oligo CF-5/20(90％～ 95％ G 残基 ) 在 6％和 10％时引起约 80％的由细胞死亡和显著的形态改 变所表征的破坏。藻酸盐低聚物、 特别是以上被定义为 “高 G” 或具有高 G 嵌段含量的那些 藻酸盐低聚物抵抗不动杆菌特别有效， 包括对于不动杆菌的直接效果或者破坏不动杆菌生 物膜的效果， 并可因此凭其自身用于抵抗不动杆菌。
因此， 在另一些方面， 本发明也提供了下述藻酸盐低聚物 ( 其可以是本文中所定 义的任何藻酸盐 )， 所述藻酸盐低聚物用于抗击不动杆菌感染或污染 ( 即， 建群 )， 或者抑制 不动杆菌 ( 包括不动杆菌生物膜或含有不动杆菌的生物膜 ) 的生长和 / 或生存。
“生物膜” 是指特征在于固着细胞占主导的微生物的群落， 所述固着细胞附着于基 底 (substratum) 或界面或者相互附着 ( 还可以存在一些游动细胞 ) 并且其包埋于细胞外 聚合物 ( 更具体为所述细胞已经产生的细胞外聚合物 ) 的基质中， 其特征在于所述菌落的 微生物显示出就生长速率和基因转录而言经改变的表型 ( 例如， 与其 “非生物膜” 或自由漂 浮或浮游的对应物相比 )。
“处于生物膜中” 是指不动杆菌生物体 ( 完全或部分 ) 处于生物膜的聚合物基质之 中、 之上或与其结合， 并具有在生物膜中的不动杆菌生物体的特征性表型 ( 即， 就生长速率 和基因转录而言经改变的表型， 例如， 与其 “非生物膜” 或自由漂浮或浮游的不动杆菌生物 体相比 )。
换个角度来看， “不处于生物膜中” 的不动杆菌生物体是孤立 ( 例如浮游的 ) 的生 物体， 或如果处于多个生物体的聚集体中时， 该聚集体是未经组织的。在每种情况下， 单个 不动杆菌生物体均不表现出在其处于生物膜中的对应物中所观察到的经改变的表型。
公知的是， 不动杆菌生物体可以将其已产生的细胞外聚合物 ( 例如多糖 ) 形成胶 囊， 并且不动杆菌生物体通常与这种胶囊一起出现。 还公知的是， 不动杆菌生物体的聚合物 胶囊的简单存在在功能上不等同于生物膜生长模式， 因而此类胶囊的存在自身并不指示生 物膜表型。因此， 还公知的是， “不处于生物膜中” 的不动杆菌生物体可能仍与它们所产生 的细胞外聚合物 ( 即， 胶囊 ) 的基质接触， 但是此类生物体将不表现出在其处于生物膜中的 对应物中观察到的改变的表型。因此， 不动杆菌生物体的给定群体可以具有一些具有生物 膜表型 ( 例如， 处于生物膜生长模式 ) 的生物体， 并且另一些生物体可以不具有生物膜表型 ( 例如， 不处于生物膜生长模式 )。
由上可知， 很明显的是， 本发明的方法 ( 即， 上文所述的那些方法 ) 具有医疗和非 医疗应用。特别是， 本发明提供了一种抗击某一位置 ( 或部位 ) 的不动杆菌污染、 特别是治 疗受试对象的不动杆菌感染的方法， 还提供了一种抗击不动杆菌生物体的群体的方法。因 此， 所述方法可以是体外或体内方法。如下文中将更详细解释的， “抗击” 包括对现存污染或 感染的治疗和预防污染或感染发生的治疗， 即， 包括了 “治疗性” / 反应性和预防性治疗。因此， 在本发明的一个方面中， 提供了一种治疗受试对象不动杆菌感染的方法， 所 述方法包含在施用药用有效量抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 的基本同时或之前， 对受 试对象施用药用有效量的藻酸盐低聚物。
因此， 本发明提供了一种用于与抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 一起 ( 或者联 合或协同 ) 使用以用于治疗受试对象不动杆菌感染的藻酸盐低聚物。
在本发明的另一个方面中， 提供了一种治疗或预防需要所述治疗 ( 例如， 被不动 杆菌生物体、 疑似被其感染有或具有被其感染的风险 ) 的受试对象的不动杆菌感染的方 法， 所述方法包含将药用有效量藻酸盐低聚物与药用有效量抗生素一起施用于受试对象。
因此， 本发明提供了一种用于与抗生素一起 ( 或者联合或协同 ) 使用以治疗或预 防需要所述治疗的受试对象的不动杆菌感染的藻酸盐低聚物。
如上文中所详细描述的， “与……一起使用” 包括在施用药用有效量抗生素 ( 例如 大环内酯类抗生素 ) 同时、 基本同时或之前施用药用有效量藻酸盐低聚物， 但在另一些实 施方式中该低聚物被与抗生素分开并于其后施用。
作为另外一种选择， 本发明提供了藻酸盐低聚物用于制造药剂的用途， 所述药剂 用于与抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 一起用于治疗受试对象不动杆菌感染。本发明还 提供了藻酸盐低聚物用于制造药剂的用途， 所述药剂用于与抗生素一起用于治疗或预防有 需要的受试对象的不动杆菌感染。
药剂可以还包含抗生素， 例如大环内酯类抗生素， 并且如上所述可以提供并使用 单一或分开的组合物或制剂。
本发明的该方面也提供了藻酸盐低聚物与抗生素一起在药剂制造中的用途， 所述 药剂用于治疗不动杆菌所造成的受试对象的感染。
本发明的该方面还提供了一种产品， 所述产品含有作为分别、 同时或依次使用的 联合制剂的藻酸盐低聚物和抗生素， 所述联合制剂用于在治疗或预防不动杆菌所造成的受 试对象。
受试对象可以是任何人类或非人类的动物受试对象， 但更特别地可以是脊椎动 物， 例如选自哺乳动物、 鸟类、 两栖类、 鱼类和爬行动物的动物。 所述动物可以是家畜或家养 动物， 或者具有商业价值的动物， 包括实验室动物或者动物园或游乐园中的动物。因此， 代 表性动物包括狗、 猫、 兔、 小鼠、 豚鼠、 仓鼠、 马、 猪、 绵羊、 山羊、 牛、 鸡、 火鸡、 珍珠鸡、 鸭、 鹅、 鹦鹉、 虎皮鹦鹉、 鸽、 鲑鱼、 鳟鱼、 鳕鱼、 黑线鳕、 花鲈和鲤鱼。 因此， 本发明的兽医用途也得到 涵盖。受试对象可以被视为患者。优选的是， 受试对象为人类。
术语 “受试对象中” 在本文中宽泛地用于包括受试对象内部或受试对象上的部位 或位置， 例如身体外表面， 并且具体可以包括医疗装置， 例如植入或 “留置” 的医疗装置。应 当与此一致地理解术语 “患者中” 。
不动杆菌感染的位置不受限制， 可以是上述受试对象的任何部位或位置。优选的 是， 对受试对象施用藻酸盐低聚物和抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 引起感染位置与足 以治疗感染的量的藻酸盐低聚物和抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 接触。
不动杆菌感染可以额外包括任何上述微生物。
不动杆菌感染可以为急性的或者慢性的， 例如持续至少 5 天或至少 10 天、 特别是 至少 20 天、 更特别是至少 30 天、 最特别是至少 40 天的感染。在本发明的该方面中， 不动杆菌感染可以发生在受试对象之中或之上的表面上 ( 即， 如上所述的生物的表面 ) 和 / 或医疗装置、 特别是可植入的或 “留置” 医疗装置的表面 上， 其代表性实例已在上文中讨论过。
在该方面的一个实施方式中， 不动杆菌生物体不处于生物膜中 ( 不动杆菌感染因 此可以被认为是非生物膜感染 )。 在另一个实施方式中， 不动杆菌生物体处于生物膜中。 在 一个实施方式中中， 本发明的该方面的方法可以包含下述步骤， 其中受试对象被诊断为具 有不动杆菌感染， 或者是具有发展不动杆菌感染风险的候选者。 在另一个实施方式中， 本发 明的该方面的方法可以还包含下述步骤， 其中该治疗所针对的不动杆菌感染将被确定为不 是或者不涉及生物膜 ( 即， 非生物膜感染 )。
就此而言， 不动杆菌感染可以是在并非受试对象的表面的位置处发现的感染， 例 如是体液的不动杆菌感染， 包括血液感染和脑脊液感染， 或在组织内的感染。 本发明的该方 面因此提供了一种治疗菌血症、 败血症、 脓毒性休克、 脓毒症、 脑膜炎或不动杆菌衍生的毒 素所造成的中毒的方法。
在一些具体实施方式中， 本发明可以提供呼吸道感染 ( 例如囊性纤维化、 肺炎、 COPD、 COAD、 COAP、 菌血症、 败血症、 脓毒性休克、 脓毒症、 脑膜炎或细菌衍生的毒素所造成的 中毒 ) 的治疗。
一种不动杆菌感染可发生于任何受试对象中， 但一些受试对象比其他受试对象更 容易受感染。易受不动杆菌感染的受试对象包括但不限于 ： 其上皮和 / 或内皮屏障受到 削弱或损害的受试对象， 其针对微生物感染的基于分泌的防御已经被废除、 破坏、 削弱或逐 渐损坏的受试对象， 和免疫受损、 免疫缺陷或免疫抑制的受试对象 ( 即， 其中免疫系统的任 何部分没有正常地工作、 或在亚常态工作的受试对象， 换言之， 无论由于疾病或临床干预或 其他治疗或者任何方式所致， 在所述受试对象中免疫响应的任何部分或免疫活性降低或受 损 )。
易受不动杆菌感染的受试对象的代表性实例包括但不限于 ： 患有事先建立的感染 ( 例如， 细菌、 病毒、 真菌或如原生动物等寄生物引起的感染 ) 的受试对象， 尤其是带有 HIV 的受试对象、 患有菌血症、 脓毒症的受试对象和患有脓毒性休克的受试对象 ； 患有免疫缺陷 的受试对象， 例如， 准备进行或正在进行化学治疗和 / 或放射治疗或者正从化学治疗和 / 或 放射治疗恢复的受试对象、 器官 ( 例如骨髓、 肝、 肺、 心脏、 心脏瓣膜、 肾等 ) 移植受试对象 ( 包括自体移植、 同种异体移植和异种移植患者 ) ； 患有 AIDS 的受试对象 ； 在健康护理机构 ( 例如医院 ) 中驻留的受试对象， 特别是在重症监护或危重监护中 ( 即关注于为患者提供生 命支持或器官支持系统的那些单位 ) 的受试对象 ； 依靠呼吸机的受试对象 ； 遭受创伤的受 试对象 ； 具有灼伤的受试对象、 具有急性和 / 或慢性伤口的受试对象 ； 新生儿受试对象 ； 老 年受试对象 ； 患有癌症 ( 此处被广义地定义为包括任何恶性或非恶性的赘生性病况 ) 的受 试对象， 特别是患有免疫系统癌症 ( 例如白血病、 淋巴瘤和其他血液学癌症 ) 的那些受试对 象； 患有如类风湿性关节炎、 I 型糖尿病、 克罗恩氏病等自身免疫疾病的受试对象， 特别是 经受针对这些疾病的免疫抑制治疗的那些受试对象 ； 具有减少或终止的上皮或内皮分泌物 ( 例如粘液、 泪液、 唾液 ) 和 / 或分泌物清除的受试对象 ( 例如， 患有粘膜组织上的纤毛功能 不良的受试对象， 和 / 或具有高粘性粘液的患者 ( 例如吸烟者和患有 COPD、 COAP、 COAD、 支 气管炎、 囊性纤维化、 气肿、 肺癌、 哮喘、 肺炎或鼻窦炎的受试对象 )) ； 以及配备有医疗装置的受试对象。
这样， 根据本发明可以特别抗击的不动杆菌感染的受试对象包括受到损伤 ( 无论 是由于灌注不良、 反复性创伤、 营养不良、 给氧不足或白细胞障碍导致 ) 的患者。
特别值得注意的是已经经受物理创伤的受试对象。 创伤自身可能引起受试对象上 皮和 / 或内皮屏障的削弱或损害， 或受试对象可能响应于创伤 ( 休克响应 ) 而变得免疫受 损。术语 “创伤” 广义地指被外来物体的细胞攻击和 / 或细胞的物理损伤。外来物体包括 微生物、 颗粒物质和化学试剂等。物理损伤包括机械损伤 ； 热损伤， 例如由过热或过冷导致 的损伤 ； 电损伤， 例如由与电势源接触导致的损伤 ； 和由例如在红外线、 紫外线或电离辐射 中长期、 彻底的暴露引起的辐射损害。
此外特别值得注意的是具有灼伤的受试对象。 任何灼伤、 特别是严重的灼伤， 对受 试对象的上皮和 / 或内皮屏障的完整性具有显著的影响， 并且受试对象将通常响应于灼伤 ( 休克响应 ) 而变得免疫受损。
典型的引起灼伤的因素为极端温度 ( 例如在极端温度的火和液体及气体 )、 电、 腐 蚀性化学品、 摩擦和辐射。暴露的程度和持续时间以及因素的强度 / 力度导致不同严重性 的灼伤。烫伤 ( 即与高温液体和 / 或气体相关的创伤 ) 被视为灼伤。 表皮灼伤严重性通常以两种方式分类。最常见的是根据程度的分类。一级灼伤通 常限于在整体损伤区域内的红斑 ( 发红 ) 和损伤位置处的白色斑块。这些灼伤的细胞创伤 仅延伸至表皮深度。二级灼伤也显示出在整体损伤区域内的红斑， 但具有表皮的浅表性起 泡。二级灼伤的细胞损伤涉及浅表 ( 乳头状 ) 真皮， 并且还可以涉及深的 ( 网状 ) 真皮层。 三级灼伤为其中表皮丧失且皮下组织受损的那些灼伤。损伤通常是极端的， 包括炭化。有 时存在焦痂 ( 干的黑色坏死组织 )。三级灼伤可能需要进行移植。在四级灼伤中， 发生皮下 组织的灾难性损伤， 例如皮下组织完全失去， 伴随着损伤延伸至下面的肌肉、 肌腱和韧带组 织。观察到炭化和焦痂。如果证明灼伤并非致命的， 则需要进行移植。
另一常见的分类系统为通过厚度的分类。 “浅层厚度” 灼伤对应于一级灼伤。二级 灼伤的范围由两类 “部分厚度 (partial thickness)” 灼伤所覆盖。 “部分厚度 - 浅层” 为 仅影响至乳头状真皮为止的表皮的灼伤。 “部分厚度 - 深层” 为影响至网状真皮为止的真皮 的灼伤。 “完全厚度” 灼伤对应于三级和四级灼伤。
一些物理损伤 ( 例如一些灼伤 ) 和被外来物体的细胞攻击导致伤口的形成。更具 体地， 可以认为伤口是组织中的的裂口或组织的剥蚀 (denudement)。伤口还可以由例如皮 肤溃疡 ( 例如， 静脉性溃疡、 糖尿病性溃疡或压力性溃疡 )、 肛裂或口腔溃疡等自发形成的 病灶导致。
伤口通常被定义为急性或慢性。急性伤口为依次经过愈合过程的三个公认阶段 ( 即， 炎性阶段、 增殖阶段和重塑阶段 ) 进行而时间过程未延长的伤口。 然而， 慢性伤口是由 于伤口停滞在某一个愈合阶段而没有完成愈合过程的生化事件的有序序列的那些伤口。 通 常， 慢性伤口停滞在炎性阶段。根据本发明的一个特定方面， 慢性伤口是在至少 40 天、 尤其 至少 50 天、 更优选至少 60 天、 最优选至少 70 天内尚未愈合的伤口。
如上所述， 伤口是不动杆菌感染、 特别是慢性感染的理想环境， 这是因为它们缺乏 上皮屏障， 以及具有可用于微生物附着和建群的基质和表面。 问题在于， 伤口的感染通常进 一步延迟愈合， 并因而使该伤口更易受已建立的感染的影响。 因此， 本发明的方法可有效治
疗和预防伤口的不动杆菌感染， 并且在治疗伤口、 特别是慢性伤口中使用本发明的方法代 表了本发明的一个优选方面。
因此， 本发明的一个实施方式中提供了将藻酸盐低聚物与抗生素 ( 例如大环内酯 类抗生素 ) 一起 ( 或者联合或协同 ) 使用的方法， 所述方法用于治疗或预防上述受试对象、 特别是患有呼吸道疾病或病症 ( 例如 COPD、 COAD、 COAP、 肺炎、 气肿、 支气管炎、 囊性纤维 化 )、 伤口、 灼伤和 / 或创伤的受试对象的不动杆菌感染、 特别是慢性不动杆菌感染， 所述方 法包含在施用药用有效量抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 的基本同时或之前施用药用有 效量藻酸盐低聚物。在另一些实施方式中， 本方法包含在施用药用有效量抗生素 ( 例如大 环内酯类抗生素 ) 之后施用药用有效量藻酸盐低聚物。
在一个特别重要的方面， 本发明的藻酸盐低聚物和抗生素 ( 例如大环内酯类抗生 素 ) 可以一起 ( 或者联合或协同 ) 使用以治疗或预防在伤口 ( 例如灼伤 ) 中的不动杆菌感 染， 例如用于治疗不动杆菌感染的伤口 ( 例如灼伤 )。
通过治疗和预防伤口的感染的能力， 如本文所定义的本发明的藻酸盐低聚物和抗 生素可以除去伤口愈合的障碍之一， 因此如上定义的藻酸盐低聚物和抗生素也可有效促进 急性和慢性伤口的愈合。
促进愈合是指所述治疗加速所述伤口的愈合过程 ( 即伤口经过愈合过程的三个 公认阶段的进展 )。 愈合过程的加速可以表现为愈合阶段中的一个、 两个或全部 ( 即炎症阶 段、 增殖阶段和 / 或重塑阶段 ) 的进展速率的增加。如果伤口为停滞在愈合阶段之一的慢 性伤口， 加速可以表现为停滞后线性、 顺序愈合过程的重启。换言之， 治疗将伤口从非愈合 状态转变为其中伤口通过愈合阶段开始进展的状态。 重启后的进展可以以正常速率或与正 常急性伤口愈合的速率相比稍慢的速率进行。
本发明的藻酸盐低聚物和抗生素可以一起 ( 或者联合或协同 ) 使用以治疗在身体 中或身体上任何地方发生的不动杆菌感染。因此， 在另一实施方式中， 感染可以为医疗装 置、 特别是留置医疗装置、 例如气管内插管或气管切开插管的不动杆菌感染。
本发明的藻酸盐低聚物和抗生素可以一起 ( 或者联合或协同 ) 用作口腔保健剂， 例如用于控制牙菌斑， 如通过抑制牙齿或牙科 / 口腔修补体上不动杆菌生物体的生长使其 减少或者预防、 降低或延迟其发展。也可以将本发明的藻酸盐低聚物和抗生素一起 ( 或者 联合或协同 ) 用在可能出现在口腔中的不动杆菌感染或涉及不动杆菌生物体的感染性病 症、 例如牙龈炎和牙周炎的治疗和预防中。
方便的是， 通过任何口腔健康 / 口腔卫生输送系统应用藻酸盐低聚物和 / 或抗生 素。这可以通过使用牙膏、 牙科用凝胶、 牙科用泡沫 (dental foams) 和漱口剂实现。可以 使用相同的组合物或其他适合的药用可接受组合物在口腔外部治疗活动义齿和其他活动 牙科修补体。也可以将藻酸盐低聚物和 / 或抗生素并入组合物中， 所述组合物应用于口腔 ( 或在口腔外部应用于活动义齿和其他活动牙科修补体 ) 以形成随时间推移持续作用于表 面上或随时间推移从涂布的表面释放藻酸盐低聚物和 / 或抗生素的涂层， 并且该组合物抑 制口腔中以及活动义齿和其他活动牙科修补体的表面上的不动杆菌生物体的生长。
虽然肺和呼吸道以及身体的所有区域的不动杆菌感染的治疗一般性地由本发明 所涵盖， 但在一个实施方式中， 本发明的医疗用途并不针对下述治疗 ： (i) 罹患 COPD( 慢性 阻塞性肺病 ) 的患者的呼吸道、 特别是鼻窦和肺的感染， 特别是囊性纤维化、 慢性阻塞性肺病、 气肿、 支气管炎和鼻窦炎的治疗 ； (ii) 罹患咽鼓管堵塞的患者的中耳的感染 ； 或 (iii) 生育力受损的女性患者的生殖道的感染 ； 或 (iv) 具有消化道机能障碍 ( 例如便秘 ) 的患者 的消化道的感染。
在本发明的具体实施方式中， 本发明的藻酸盐低聚物和抗生素 ( 例如大环内酯类 抗生素 ) 可以在治疗下述病况中一起 ( 或者联合或协同 ) 使用 ： 不动杆菌相关性自体瓣膜 心内膜炎、 急性中耳炎、 慢性细菌性前列腺炎、 与不动杆菌生物体相关的肺炎 ( 特别是呼吸 机相关性肺炎 ) ； 呼吸道疾病 ( 其可以包括 COPD、 COAD、 COAP、 肺炎、 囊性纤维化和哮喘 ) 中 的不动杆菌感染 ； 和与可植入或假体医疗装置相关的装置相关不动杆菌感染 ( 例如， 人工 瓣膜心内膜炎， 或者线路、 导管、 人工关节、 组织替代物、 气管内或气管切开插管的感染 )。
在另一些实施方式中， 本发明的藻酸盐低聚物和抗生素被一起使用， 从而控制眼 的不动杆菌感染， 例如以使其减少或者预防、 降低或延迟其发展。特别地， 将本发明的藻酸 盐和抗生素一起使用以治疗或预防与不动杆菌相关的细菌性结膜炎和其造成的可通过泪 腺阻塞导致的干燥性角膜结膜炎 ( 也称作干眼症 )。
如前所述， 在一个实施方式中， 上述不动杆菌感染和相关疾病不是生物膜或不涉 及生物膜， 换言之， 它们是非生物膜感染。在另一实施方式中， 上述不动杆菌感染和相关疾 病是生物膜或涉及生物膜。
在另一个方面中， 本发明提供了一种抗击某一部位的不动杆菌污染的方法， 所述 方法包含在施用有效量抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 的基本同时或之前将所述部位和 / 或不动杆菌生物体与有效量藻酸盐低聚物接触。该方法也可以被描述为一种抗击某一部 位的不动杆菌污染的方法， 所述方法包含将所述部位和 / 或所述不动杆菌生物体与藻酸盐 低聚物和抗生素一起接触。
本发明还提供了一种用于与抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 一起 ( 或者联合或 协同 ) 使用的藻酸盐低聚物， 以用于抗击某一部位的不动杆菌污染。所述方法特别可以是 体外方法， 并且所述部位可以是上述任何表面或位置。
换言之， 本发明的该方面提供了藻酸盐低聚物用于制造药剂的用途， 所述药剂用 于与抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 一起用于在抗击某一位置的不动杆菌污染。该药剂 可以还包含抗生素， 例如大环内酯类抗生素。
“抗击污染” 包括预防性和反应性措施或治疗， 因此涵盖了污染的预防以及降低、 限制或消除。
“污染” 是指不动杆菌生物体在特定部位或位置的不合需要的存在。污染可以被认 为涵盖了不动杆菌生物体在某位置的建群， 即不动杆菌生物体在某一位置的建立和该生物 体通过可以是相同或不同类型的额外的不动杆菌生物体的复制或募集的数量扩张。 在一个 实施方式中， 建群过程将不涉及生物膜的形成。
污染或潜在的污染的部位或位置不受限制， 可以是以上所述或提及的各种部位或 位置中的任一种， 例如其可以是体外或体内， 但特别在本发明的该方面中， 其是 “体外” 或 “离体” 部位或位置 ( 即， 无生命或非生物的部位或位置 )。然而， 所述部位或位置可以处于 受试对象中， 在该情况下， 将药物有效量藻酸盐低聚物和抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 施用于受试对象。
在一个具体实施方式中， 本发明的该方面可以应用于临床、 科学和工业废料的消除污染。在另一个具体实施方式中， 本发明的该方面可用于在移植之前对移植组织 ( 例如， 心、 肺、 肾、 肝、 心脏瓣膜、 胰腺、 小肠、 角膜组织、 动脉和静脉移植物， 和皮肤 ) 和医疗装置 ( 例如气管内或气管切开插管 ) 消除污染。 在另一个实施方式中， 该方面可以被认为涵盖将 藻酸盐低聚物与抗生素一起用作材料、 特别是溶液和液体中的抗不动杆菌防腐剂。
在本发明的另一个方面中， 提供了一种抗击不动杆菌生物体的群体的方法， 所述 方法包含在施用有效量抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 的基本同时或之前将所述生物体 与有效量藻酸盐低聚物接触。
在该方面的一个实施方式中， 不动杆菌生物体或其群体不处于生物膜中， 或不处 于形成生物膜的过程中。 例如， 不动杆菌生物体或其群体不能引起生物膜形成， 或者群体中 的多个生物体数量不足或未处于能使生物膜形成的生命周期阶段。
不动杆菌生物体的群体可以是同源的 ( 即， 含有单一种类的不动杆菌生物体 ) 或 者可以是异源的 ( 即， 含有多个种类的不动杆菌生物体和 / 或其他微生物 )。例如， 在群体 中可以发现任何或所有上述各种微生物。群体中的一些或所有微生物可以是致病的。群体 可以是已建立的群体或已部分建立的群体。换言之， 待处理的位置已由至少一种微生物预 先建群， 所述微生物已经繁殖或募集其他微生物以建立群体。
“抗击不动杆菌生物体的群体” 是指预防群体的形成或者控制群体的生长。
“控制不动杆菌生物体的群体的生长” 是指群体中不动杆菌生物体的总量的扩张 速率得到降低。优选的是， 扩张速率降低至少 50％、 更优选至少 75％、 85％、 95％或 99％。 最优选的是， 扩张基本停止或反转， 即， 群体中不动杆菌生物体的总量得到保持或降低。优 选的是， 群体中各种不动杆菌生物体的总量减少至少 50％、 更优选至少 75％、 85％、 95％或 99％。最优选的是， 群体基本或完全被根除。基本根除是指群体含有很少或者实际上不含 各种不动杆菌生物体。
在一个实施方式中， 群体的生长的控制可以通过控制群体中不动杆菌生物体的复 制速率来实现。 就此而言， 群体中不动杆菌生物体的复制速率优选降低至少 50％、 更优选至 少 75％、 85％、 95％或 99％。换一个角度看， 优选复制基本终止或实际上停止。
作为另外一种选择或者补充， 群体生长可以通过杀死群体中的一些或所有不动杆 菌生物体来控制。
“预防不动杆菌群体的形成” 是指预防少量 ( 子群体数量 ) 不动杆菌生物体扩张至 达到群体规模， 例如通过预防复制或者杀死已经存在的不动杆菌生物体或杀死添加至已经 存在的那些不动杆菌生物体中的不动杆菌生物体来实现。
不动杆菌生物体的群体的部位或位置不受限制， 上述各种位置也适用于此。
因此， 本发明所涵盖的医疗用途可以包括使用藻酸盐低聚物和抗生素 ( 例如大环 内酯类抗生素 ) 抗击受试对象中的不动杆菌群体。因此在本发明的该方面中提供了一种抗 击受试对象的不动杆菌生物体的群体的方法， 所述方法包含在施用药用有效量抗生素 ( 例 如大环内酯类抗生素 ) 的基本同时或之前将所述生物体与药用有效量藻酸盐低聚物接触。
抗生素可以与藻酸盐低聚物同时或依次应用或施用。如上所述， 在一个实施方式 中， 抗生素与藻酸盐低聚物同时或基本同时施用， 而在另一个实施方式中其在藻酸盐低聚 物之后施用。在又一个实施方式中， 低聚物与抗生素分开并于其后施用。在藻酸盐低聚物 之前或之后立即或几乎立即应用或施用抗生素包括在 “基本同时” 的范围内。术语 “几乎立即” 可以解读为包括在之前应用或施用的一小时内、 优选 30 分钟内应用或施用。不过， 抗生 素可以在藻酸盐低聚物之后至少 1 小时、 至少 3 小时或至少 6 小时以上应用或施用。在这 些实施方式中， 抗生素可以在另外应用或不另外应用藻酸盐低聚物时应用或施用。藻酸盐 低聚物可以以在抗生素之前或在与其同时的多种应用方式应用或施用， 包括如上所述的在 抗生素之后立即或几乎立即应用或施用。在另一些实施方式中， 抗生素可以在藻酸盐低聚 物之前、 例如在藻酸盐低聚物之前至少 1 小时、 至少 3 小时、 至少 6 小时方便地应用或施用。 在这些实施方式中， 藻酸盐低聚物可以在另外应用或不另外应用抗生素时应用或施用。抗 生素可以以在藻酸盐低聚物之前或在与其同时的多种应用方式应用或施用。
本发明还提供了一种用于与抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 一起 ( 或者联合或 协同 ) 使用的藻酸盐低聚物， 以用于抗击受试对象中的不动杆菌群体。
作为另外一种选择， 本发明的该方面提供了藻酸盐低聚物用于制造药剂的用途， 所述药剂用于与抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 一起用于抗击受试对象中的不动杆菌群 体。该药剂可以还包含抗生素， 例如大环内酯类抗生素。
在一个实施方式中， 本发明的该方面的方法可以包含下述步骤， 其中受试对象被 诊断为将受益于其内所有的不动杆菌生物体的群体被抗击的候选者。在另一个实施方式 中， 本发明的方法可以还包含下述步骤， 其中待抗击的不动杆菌生物体的群体将被确定为 不是生物膜、 不处于生物膜中或不涉及生物膜。
如上所述， 藻酸盐低聚物可以改进抗生素抵抗不动杆菌生物体的功效、 特别是抗 生素抑制不动杆菌生物体的功效 ( 或有效性 )。
改进抗生素的功效包括改进或增强抗生素抵抗不动杆菌生物体的有效性的任何 方面， 例如以使抗生素的抗不动杆菌效果相对于在不存在藻酸盐低聚物的情形中所见的抗 生素的效果以任何方式提高或增强。这可以从以下方面看出 ： 例如抗生素抑制不动杆菌生 物体生长的效果更强， 实现与不存在藻酸盐低聚物时所发现的相同的效果所需要的抗生素 更少， 或有效性随作用速度或比率的升高而得到提高， 比不存在低聚物时在更少的时间内 产生抑菌效果。
“不动杆菌生物体的生长” 是指不动杆菌生物体尺寸或者不动杆菌生物体的成分 的量和 / 或体积 ( 例如， 核酸的量、 蛋白的量、 核的数量、 细胞器的数量或尺寸、 细胞质的体 积 ) 的增加和不动杆菌生物体数目的增加 ( 即， 不动杆菌生物体的复制的增加 )。
典型的不动杆菌生物体的生长伴随着生物体的放大。 不动杆菌生物体的生长可以 使用常规技术测量。 例如， 可以使用随时间推移的微生物形态的显微镜检查， 或者测量全体 蛋白或核酸 ( 例如 DNA) 的量的变化或特定蛋白或核酸的量的变化的测定。 本领域技术人员 将能轻易地选择适当的标记物来跟踪。通常， 可以监控所谓的管家基因 ( 例如， β- 肌动蛋 白、 GAPDH( 甘油醛 3- 磷酸脱氢酶 )、 SDHA( 琥珀酸脱氢酶 )、 HPRT1( 次黄嘌呤磷酸核糖基转 移酶 1)、 HBS1L(HBS1 样蛋白 )、 AHSP(α- 血红蛋白稳定蛋白 ) 和 β2M(β-2- 微球蛋白 ))、 16S RNA 和病毒基因及其表达产物。
“不动杆菌生物体的复制” 是指不动杆菌生物体繁殖的活动。通常， 这通过微生物 一分为二的二分分裂实现。为支持微生物一分为二的分裂， 二分分裂通常通过分裂微生物 的增大和细胞成分的量和 / 或体积的增加来进行。复制引起细胞数目的增加， 因此可以通 过任何评估群体中微生物数目的方法来进行跟踪。 另一选择是通过使用显微镜目视检查来实时跟踪该过程。微生物复制 ( 即， 产生其自身的另一个版本 ) 所花费的时间即世代时间。 世代时间将取决于不动杆菌生物体所处的条件。复制速率可以用世代时间来表达。
“抑制不动杆菌生物体的生长” 是指使不动杆菌生物体的可测量的生长 ( 例如复 制 ) 或其速率降低。优选的是， 不动杆菌生物体的可测量的生长 ( 例如复制 ) 或其速率降 低至少 50％、 更优选至少 60％、 70％、 80％或 90％， 例如至少 95％。优选的是， 可测量的生 长 ( 例如复制 ) 终止。以微生物尺寸增大或扩张等衡量的生长可以独立于复制得到抑制， 反之亦然。
因此， 关于 “改进抗生素抑制不动杆菌生物体生长和 / 或生存的有效性” 等的指代 可以包括藻酸盐低聚物在抑制细菌生长和 / 或生存方面赋予抗生素至少 2 倍、 或至少 4 倍、 至少 8 倍、 至少 16 倍或至少 32 倍的有效性 ( 例如充当抑菌剂或杀菌剂 )。换言之， 低聚物 可以使抗生素抑制不动杆菌生物体的生长和 / 或生存的有效性翻为至少 2 倍、 至少 4 倍、 至 少 8 倍、 至少 16 倍或至少 32 倍。 抗生素的抑制效果可以通过评估最小抑制浓度 (MIC)( 即， 完全抑制不动杆菌生物体生长的抗生素的浓度 ) 而方便地测量。MIC 的减半对应于抗生素 抑制效果成倍提高。MIC 减至四分之一对应于抑制效果成四倍提高。
该方面还可以使得施用于受试对象或应用于某一位置的抗生素的浓度降低， 而同 时保持同样的抵抗不动杆菌生物体的有效性。这在抗生素昂贵或带有副作用时会很有益。 使抗生素的使用最小化对于降低抵抗性的发展也是理想的。根据本发明， 如上所述的藻酸 盐低聚物的使用 ( 即与抗生素一起使用， 例如在施用抗生素同时或基本同时或之前 ) 允许 抗生素以下述浓度使用， 所述浓度为低于在不存在藻酸盐低聚物的情况下实现对不动杆菌 生物体的生长和 / 或存在的特定抑制水平时所正常施用 / 应用的量的 50％、 低于其 25％、 低于其 10％或低于其 5％。 在该方面中， 藻酸盐低聚物可以是任何所讨论的那些藻酸盐低聚物并且特别是上 述优选的那些藻酸盐低聚物， 并且藻酸盐低聚物将以至少 2％、 至少 4％、 至少 6％、 至少 8％ 或至少 10％ ( 重量体积比 ) 的局部浓度与不动杆菌生物体和 / 或其位置接触。
术语 “接触” 包括将藻酸盐低聚物和抗生素无论直接还是间接地输送至不动杆菌 生物体的任何手段， 因此包括将藻酸盐低聚物和抗生素应用于不动杆菌生物体或将不动杆 菌生物体暴露于藻酸盐低聚物和抗生素的任何手段， 例如， 将藻酸盐低聚物和抗生素直接 应用于不动杆菌生物体， 或者将藻酸盐低聚物和生物体施用于其中或其上存在不动杆菌生 物体的受试对象 ( 例如， 具有不动杆菌感染的受试对象 )。
更特别地， 不动杆菌生物体将与有效量藻酸盐低聚物和抗生素、 更特别是与一定 量藻酸盐低聚物和一定量抗生素接触， 所述一定量藻酸盐低聚物和一定量抗生素一起 ( 或 者联合或协同 ) 抑制不动杆菌生物体生长和 / 或生存， 从而治疗或预防感染 / 污染。
“有效量” 的藻酸盐低聚物和抗生素是下述量的藻酸盐低聚物和下述量的抗生素， 所述量的藻酸盐低聚物和所述量的抗生素对于不动杆菌生物体或其群体的生长和 / 或生 存提供了可测量的抑制。在某些实施方式中， “有效量” 的藻酸盐低聚物可以被认为是下述 量， 所述量可有效地改进抗生素的功效、 特别是抗生素抑制不动杆菌生物体或其群体的生 长和 / 或生存的有效性 ( 或功效 )。
“药用有效” 量的藻酸盐低聚物和抗生素是下述量的藻酸盐低聚物和下述量的抗 生素， 所述量的藻酸盐低聚物和所述量的抗生素对于受试对象之中或之上的不动杆菌生物
体或其群体的生长和 / 或生存提供了可测量的抑制和 / 或对于所针对的不动杆菌感染提供 了可测量的治疗和预防。
根据常规剂量响应方案、 方便的是如上所述的用于评估微生物生长抑制等的常规 技术， 本领域技术人员将能够容易地确定藻酸盐低聚物和抗生素的有效量 / 药用有效量。 无需过度劳动， 本领域技术人员还能优化这些量来使其靶系统中藻酸盐低聚物和抗生素的 联合效果最大化。
藻酸盐低聚物和抗生素的适当剂量将视不同受试对象而变， 并且可以根据受试对 象的体重、 年龄和性别、 疾病的严重性、 施用方式以及所选择的特定藻酸盐低聚物或抗生素 由医师或兽医从业者确定。通常， 本发明的藻酸盐低聚物将以至少 0.5％、 优选至少 2％或 至少 4％、 更优选至少 6％且最优选至少 10％ ( 重量体积比 ) 的局部浓度应用于进行治疗的 位置。通常， 本发明的抗生素将以至少 0.03125μg/ml、 优选至少 0.0625μg/ml、 0.125μg/ ml、 0.25μg/ml、 0.5μg/ml、 1μg/ml、 2μg/ml、 4μg/ml、 8μg/ml、 16μg/ml、 32μg/ml、 64μg/ml、 128μg/ml、 256μg/ml、 512μg/ml、 1024μg/ml、 2048μg/ml 或 4096μg/ml 的局 部浓度应用于进行治疗的位置。
当涉及在根据本发明治疗受试对象的医学病况 / 感染中使用时， “治疗” 在本文中 被广义使用以包括任何治疗性效果， 即， 关于病况或与感染有关的任何有益效果。因此， 其 不仅包括根除或消除感染或者治愈受试对象或感染， 还包括改善受试对象的感染或病况。 因此其包括例如感染或病况的任何症状或迹象的改善， 或者感染 / 病况的任何临床接受指 标的改善 ( 例如伤口尺寸的减小或愈合时间的加速 )。治疗因此包括对例如预先存在的或 经诊断的感染 / 病况的治疗性和缓解性治疗， 即反应性治疗。 本文使用的 “预防” 是指任何预防性效果。因此， 例如相对于预防性治疗之前的状 况、 症状或指征， 预防包括对病况 ( 其含义包括适用于本发明的不同方面的感染和污染 ) 或 病况的发作或者其一种或多种症状或指征的延缓、 限制、 减弱或避免。因此， 预防明确地包 括绝对防止病况或其症状或迹象的出现或发展， 以及对所述病况或症状或迹象的发作或发 展的任何延缓， 或对所述病况或症状或迹象的发展或进展的任何减弱或限制。
具体地， 本发明的藻酸盐低聚物和抗生素可一起 ( 或者联合或协同 ) 作为预防性 治疗， 例如用以预防不动杆菌感染或污染或至少使其风险最小化。
本发明的关于抗击 ( 治疗或预防 ) 不动杆菌感染的方面在护理住院患者中特别有 用， 因为使用本文定义的藻酸盐低聚物和抗生素的预防性方案能使感染不动杆菌医院感染 ( 常称为医院相关 / 获得性感染或健康护理相关感染 ) 的风险最小化。本发明的该方面还 在遭受创伤的受试对象、 具有灼伤的受试对象和具有伤口的受试对象的护理中特别有用， 所有上述受试对象比未受到类似影响的受试对象对不动杆菌感染更易感。
通常， 需要本发明的治疗或预防的受试对象将被诊断为罹患或有风险受到不动杆 菌感染， 例如被鉴定为患有不动杆菌感染或具有发生不动杆菌感染的风险。
具体地， 本发明的藻酸盐低聚物和抗生素可一起 ( 或者联合或协同 ) 作为预防性 治疗以预防发生不动杆菌感染或至少使其发生风险最小化， 所述不动杆菌感染包括例如伤 口的不动杆菌感染、 不动杆菌相关的自体瓣膜心内膜炎、 急性中耳炎、 慢性细菌性前列腺 炎、 牙周炎、 呼吸道和肺的不动杆菌感染 ( 例如， 囊性纤维化、 COPD、 COAD、 COAP、 肺炎或其他 呼吸道疾病 ) 或医学 ( 例如留置 ) 医疗装置的感染。
本发明包括使用单一藻酸盐低聚物或不同藻酸盐低聚物的混合物 ( 多样性 / 多重 性 )。因此， 例如可以使用不同藻酸盐低聚物 ( 例如两种或多于两种 ) 的组合。
本发明包括使用单一抗生素或不同抗生素的混合物 ( 多样性 / 多重性 )。 因此， 例 如可以使用不同抗生素 ( 例如两种或多于两种 ) 的组合。
在本发明的一个有利的实施方式中， 藻酸盐低聚物和抗生素可以以与另外的抗微 生物剂 ( 下文中称为 “另外的抗微生物剂” ) 协同或联合的方式用在本发明的方法中。
在医学应用背景下， 此类抗微生物剂可以是任何临床上有用的抗微生物剂， 特别 是抗生素、 抗病毒剂或抗真菌剂。 在非临床应用背景下， 抗微生物剂也可以为用于该目的的 任何抗微生物剂， 例如任何消毒剂、 防腐剂、 清洁剂或杀菌剂。 所述试剂可以分别使用， 或在 相同组合物中同时地、 依次地或分别地 ( 例如以任何所需的时间间隔 ) 使用。
因此借助于代表性实例， 另外的抗微生物剂可以在藻酸盐低聚物和 / 或抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 之后使用， 但是在某些情况下可能有益的是在其之前、 同时或居 间使用。
当然， 抗微生物剂的选择对于经受处理的位点而言必须合适， 但是可以使用例如 抗微生物剂 ( 如抗生素、 抗真菌剂、 抗病毒剂、 防腐剂 ) 和 / 或如辐射 ( 比如紫外线、 X 射线、 γ)、 极端温度和极端 pH 等灭菌条件。
代表性的抗生素包括上述那些抗生素， 特别是上述优选的那些抗生素。藻酸盐低 聚物也可以增强这些另外的抗生素的抗生效果。
代表性的防腐剂包括但不限于 ： 氯漂白剂 ( 次氯酸钠 )、 季铵盐化合物 ( 例如， 苯 扎氯铵、 十六烷基三甲基溴化铵、 十六烷基氯化吡啶 )、 过氧化氢、 苯酚化合物 ( 例如 TCP、 三 TM 氯生 )、 醇 ( 例如乙醇 )、 Virkon 、 碘化合物 ( 例如聚维酮碘 )、 银化合物 ( 例如元素银纳米 颗粒 / 微粒 )。
抗微生物表面活性剂是另一类防腐剂。它们是使微生物细胞膜和其他结构成分 破裂由此抑制微生物生长和 / 或生存的化合物。抗微生物表面活性剂及其在抗微生物组 合物中的应用是本领域中所公知的， 如果需要进一步指导， 可以通过援引明确地将 “无防腐 剂和自保持性化妆品和药物——原理和实践 (Preservative-free and self-preserving cosmetics and drugs-Principles and practice)” ， Kabara 和 Orth 编著， Marcel Dekker， NY， NY， 1997 中抗微生物表面活性剂的讨论以其整体并入本说明书中。抗微生物表面活性 剂可以是阴离子表面活性剂、 阳离子表面活性剂、 非离子表面活性剂或两性表面活性剂。 抗 微生物阴离子表面活性剂的实例包括但不限于十二烷基硫酸钠 ( 月桂基硫酸钠 )、 十二烷 基氨基丙酸钠、 蓖麻醇酸钠、 胆汁酸、 烷基芳基磺酸盐、 Grillosan DS7911、 十一烯酸单乙醇 氨基磺基丁二酸二钠。抗微生物阳离子表面活性剂的实例包括但不限于季铵化合物、 氨基 酰亚胺和双氯苯双胍己烷化合物。抗微生物非离子表面活性剂的实例包括但不限于脂肪 酸的单酯、 烷基二羟基苯甲酸的聚乙二醇单酯、 葡糖胺衍生物和 N- 月桂基二肽的二乙醇酰 胺。 抗微生物两性表面活性剂的实例包括但不限于烷基甜菜碱、 烷基氨基丙基甜菜碱、 烷基 氨基丙酸酯、 烷基亚氨基二丙酸酯和烷基咪唑啉。
代表性的抗真菌剂包括但不限于 ： 多烯类 ( 例如， 那他霉素、 龟裂杀菌素、 非律平、 制霉菌素、 两性霉素 B、 坎狄辛 ) ； 咪唑类 ( 例如， 咪康唑、 酮康唑、 克霉唑、 益康唑、 联苯苄唑、 布康唑、 芬替康唑、 异康唑、 奥昔康唑、 舍他康唑、 硫康唑、 噻康唑 ) ； 三唑类 ( 例如， 氟康唑、伊曲康唑、 艾沙康唑、 雷夫康唑、 泊沙康唑、 伏立康唑、 特康唑 ) ； 烯丙胺类 ( 例如， 特比萘芬、 阿莫罗芬、 萘替芬、 布替萘芬 ) ； 和棘球白素类 ( 例如， 阿尼芬净、 卡泊芬净、 米卡芬净 )。
代表性的抗病毒剂包括但不限于 ： 阿巴卡韦、 阿昔洛韦、 阿德福韦、 安普那韦、 金 刚 烷 胺、 阿 比 朵 尔、 阿 扎 那 韦、 立 普 妥 (atripla)、 波 普 瑞 韦 (boceprevir)、 西多福 韦、 可 比 韦 (combivir)、 达 芦 那 韦 (darunavir)、 地 拉 韦 啶、 去 羟 肌 苷、 二 十 二 烷 醇、 依 度 尿 苷、 依 非 韦 伦、 恩 曲 他 滨、 恩 夫 韦、 恩 替 卡 韦、 泛 昔 洛 韦、 福 米 韦 生 (fomivirsen)、 福 沙 那 韦 (fosamprenavir)、 膦 甲 酸 钠、 磷 酰 基 乙 酸 (fosfonet)、 更 昔 洛 韦、 伊巴他滨 (ibacitabine)、 异丙肌苷、 疱疹净、 咪喹莫特、 茚地那韦、 肌苷、 III 型干扰素、 II 型干扰素 类、 I 型干扰素、 拉米夫定、 洛匹那韦、 洛韦胺、 马拉韦罗、 吗啉胍、 奈非那韦、 奈韦拉平、 蕾莎 瓦 (nexavir)、 奥司他韦、 喷昔洛韦、 帕拉米韦、 普可那利 (pleconaril)、 鬼臼毒素、 雷特格 韦 (raltegravir)、 金刚乙胺、 利巴韦林、 利托那韦、 沙奎那韦、 司他夫定、 替诺福韦、 替诺福 韦酯 (tenofovir disoproxil)、 替拉那韦、 曲氟胸苷 (trifluridine)、 三协韦 (trizivir)、 曲 金 刚 胺 (tromantadine)、 特 鲁 瓦 达 (truvada)、 伐 昔 洛 韦、 缬 更 昔 洛 韦、 维克瑞韦罗 (vicriviroc)、 阿糖腺苷、 韦拉咪丁 (viramidine)、 扎西他宾 (zalcitabine)、 扎那米韦和 齐多夫定。
可以在藻酸盐低聚物和 / 或抗生素之前、 同时、 之后或之间方便地应用其他抗微 生物剂。方便的是， 在与藻酸盐低聚物和 / 或抗生素基本同时或于其后应用其他抗微生物 剂。例如， 在施用藻酸盐低聚物和 / 或抗生素之后至少 1 小时、 优选至少 3 小时、 更优选至 少 5 小时且最优选至少 6 小时应用其他抗微生物剂。 在另一些实施方式中， 其他抗微生物剂 可以在藻酸盐低聚物和 / 或抗生素之前、 例如在藻酸盐低聚物和 / 或抗生素之前至少 1 小 时、 至少 3 小时、 至少 6 小时方便地应用或施用。在这些实施方式中， 藻酸盐低聚物和 / 或 抗生素可以在另外应用或不另外应用其他抗微生物剂时应用或施用。 为优化其他抗微生物 剂的抗微生物效果， 可以在适于所用试剂的时间点反复给予其他抗微生物剂 ( 例如施用或 输送 )。 本领域技术人员能够设计适当的剂量或使用方案。 在长期治疗中， 藻酸盐低聚物和 / 或抗生素也可以反复使用。藻酸盐低聚物的使用频率可以与抗生素和 / 或其他抗微生物 剂相同， 但通常频率更低。 所需频率将取决于不动杆菌生物体的位置、 菌落组成和所使用的 抗微生物剂， 并且本领域技术人员能够优化剂量或使用模式从而优化结果。
在一个有利的实施方式中， 藻酸盐低聚物和 / 或抗生素可以在物理去除或减少 ( 例如清创 ) 引起经受治疗的位置感染的含有不动杆菌的菌落 / 群体之后使用或应用。菌 体可以处于或不处于生物膜中。
在除去或尝试除去含有不动杆菌的菌落 / 群体之后， 可以使该位置与藻酸盐低聚 物接触 0 小时～ 24 小时、 特别是 2 小时～ 12 小时、 更特别是 4 小时～ 8 小时、 最特别是 5 小时～ 7 小时， 例如 6 小时。之后， 可以应用抗生素并在必要时应用其他抗微生物剂。这 在临床环境下可能是期望的或特别适合的情境。在受生物膜感染的伤口的情形中， 培养 (incubation) 的持续时间能够方便地进行设计从而对应于所预定的伤口敷料的变化。
含有不动杆菌的菌落 / 群体的物理去除能够使用任何合适的外科手术、 机械或化 学手段进行。 方便起见， 所述手段可以是使用液体、 凝胶、 凝胶溶胶、 半固体组合物或加压下 施加至菌落 / 群体的气体、 超声、 激光或利用研磨工具。自身在去除中使用或在去除之前、 期间或其后用作洗涤溶液的组合物可以方便地含有藻酸盐低聚物和 / 或抗生素。因此， 在一个具体实施方式中， 本发明提供了用在本发明的治疗和方法中的清创 或洗涤组合物， 例如伤口用溶液， 其含有藻酸盐低聚物 ( 特别是如本文定义的任何藻酸盐 低聚物 ) 和 / 或抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素、 特别是如本文定义的任何大环内酯类抗 生素 ( 例如优选选自阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素或螺旋霉素的大环 内脂 ))。 此类清创组合物通常为无菌溶液、 特别是无菌水溶液或油类无菌溶液， 并且还可以 含有蛋白水解酶 ( 例如， 胶原酶、 胰蛋白酶、 胃蛋白酶、 弹性蛋白酶 )、 研磨固相 ( 例如， 胶态 二氧化硅、 浮石粉、 植物粉末或动物外壳 )。
藻酸盐低聚物和抗生素与免疫刺激剂的联合或协同使用也将有益于本发明的方 法在临床情形中的应用。 这些免疫刺激剂可以在对应于上文关于抗微生物剂所述的时间点 方便地使用， 并且可以可选地与藻酸盐低聚物和 / 或抗生素和 / 或其他抗微生物剂联合使 用。合适的免疫刺激剂包括但不限于 ： 如 TNF、 IL-1、 IL-6、 IL-8 等细胞因子和免疫刺激性 藻酸盐 ( 例如， 如 US 5,169,840、 WO91/11205 和 WO03/045402 中所述的高 M 含量藻酸盐， 本 文通过援引明确地并入其全部内容， 但是包括任何具有免疫刺激性质的藻酸盐 )。
藻酸盐低聚物和抗生素与生长因子 ( 例如， PDGF、 FGF、 EGF、 TGF、 hGF) 和酶的联 合或协同使用也可能有益于本发明的医学用途。合适的酶的代表性实例包括但不限于 ： 蛋 白酶， 例如， 丝氨酸蛋白酶、 金属蛋白酶和半胱氨酸蛋白酶 ( 这些蛋白酶类型的实例列于 EP0590746 中， 本文通过援引并入其全部内容 ) ； 核酸酶， 例如， DNA 酶 I 和 II， RNA 酶 A、 H、 I、 II、 III、 P、 PhyM、 R； 脂肪酶和能够降解多糖的酶。
藻酸盐低聚物和抗生素与生理学耐受的降粘膜粘度剂联合或协同使用也可能是 有益的， 例如， 核酸切割酶 ( 例如， 如 DNA 酶 I 等 DNA 酶 )、 凝溶胶蛋白、 巯基还原剂、 乙酰半 胱氨酸、 氯化钠、 不带电的低分子量多糖 ( 例如右旋葡萄糖苷 )、 精氨酸 ( 或其他一氧化氮前 体或合成刺激剂 )， 或阴离子聚氨基酸 ( 例如聚 ASP 或聚 GLU)。 值得注意的具体粘液溶解剂 (mucolytics) 是氨溴索、 溴己新、 羧甲司坦、 多米奥醇、 依普拉酮、 厄多司坦、 来托司坦、 巯乙 磺酸钠、 奈替克新、 索布瑞醇、 司替罗宁、 硫普罗宁。
藻酸盐低聚物和抗生素与 α 阻断剂的联合或协同使用在本发明的医学用途上、 特别是慢性细菌性前列腺炎的治疗中也可能是有益的。合适的 α 阻断剂的代表性实例包 括但不限于 ： 选择性 α-1 阻断剂 ( 例如多沙唑嗪、 dilodosin、 哌唑嗪、 坦索罗辛、 阿夫唑嗪、 特拉唑嗪 ) 和非选择性肾上腺素能阻断剂 ( 例如苯氧苄胺、 芬妥胺 )。
藻酸盐低聚物和抗生素与支气管扩张剂的联合或协同使用也可能有益于本发明 的医学用途、 特别是与不动杆菌生物体相关的呼吸道疾病 ( 其可包括 COPD、 COAD、 COAP、 肺 炎囊性纤维化、 气肿和哮喘 ) 的治疗。合适的支气管扩张剂的代表性实例包括但不限于 ： β-2 激动剂 ( 例如吡布特罗、 肾上腺素、 沙丁胺醇、 沙美特罗、 左沙丁胺醇、 克伦特罗 )、 抗胆 碱能药物 ( 例如异丙托铵、 氧托铵、 噻托溴铵 ) 和茶碱。
藻酸盐低聚物和抗生素与糖皮质激素的联合和或协同使用也可能有益于本发明 的医学用途、 特别是与不动杆菌生物体相关的呼吸道疾病 ( 其可包括 COPD、 COAD、 COAP、 肺 炎囊性纤维化、 气肿和哮喘 ) 的治疗。 合适的糖皮质激素的代表性实例包括但不限于 ： 泼尼 松、 氟尼缩松、 曲安奈德、 氟替卡松、 布地奈德、 莫美他松、 倍氯米松、 安西缩松、 布地奈德、 地 索奈德、 醋酸氟轻松、 氟轻松、 哈西奈德、 氢化可的松、 可的松、 氢可的松、 氢化泼尼松、 甲泼 尼龙、 泼尼松、 倍他米松、 地塞米松、 氟可龙、 阿氯米松、 泼尼卡酯、 氯倍他松、 氯倍他索和氟泼尼定。 藻酸盐低聚物和抗生素可以可选地与可能需要使用的任何其他治疗活性剂 ( 例 如抗微生物剂、 抗炎剂 ( 例如抗炎类固醇 )、 免疫刺激剂、 降粘膜粘度剂、 生长抑制剂、 酶、 α 阻断剂、 支气管扩张剂或糖皮质激素 ) 一起使用。藻酸盐低聚物和抗生素与其他治疗活性 剂 ( 例如抗微生物剂或抗炎剂、 免疫刺激剂、 降粘膜粘度剂、 生长抑制剂、 酶、 α 阻断剂、 支 气管扩张剂或糖皮质激素 ) 的组合使用可以改进活性剂的临床效果， 并可有利地使得可以 减少其他治疗活性剂的剂量 ( 例如通常或正常的剂量 )， 例如， 可以将其以正常或通常剂量 或更低的剂量 ( 例如， 其正常剂量的至多 50％ ( 或 50％ )) 使用。
在医学应用的情形中， 可以以任何便利形式或通过任何便利手段 ( 例如， 通过局 部、 口腔、 胃肠外、 肠内、 胃肠外途径或通过吸入 ) 来对受试对象施用本发明的藻酸盐和抗 生素。优选将藻酸盐和抗生素通过局部、 口腔或胃肠外途径施用或通过吸入施用。藻酸盐 低聚物和抗生素不必处于同一组合物中， 且不必通过同一途径施用。 在一些情形中， 优选的 是它们不通过同一途径施用。
本领域技术人员将能够根据本领域已知和广泛地描述于文献中的任何常规方法 将本发明的藻酸盐低聚物和抗生素配制成适合这些施用途径的药物组合物。
因此， 本发明还提供用于任何上述方法或用途的药物组合物， 所述药物组合物包 含本文定义的藻酸盐低聚物以及至少一种药物可接受的载体、 稀释剂或赋形剂。该组合物 还可以包含本文定义的抗生素。
因此， 本发明还提供用于任何上述方法或用途的药物组合物， 所述药物组合物包 含本文定义的抗生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 以及至少一种药物可接受的载体、 稀释剂 或赋形剂。该组合物还可以包含本文定义的藻酸盐低聚物。
所述活性成分、 必要时与其他活性剂一起可以与一种或多种常规载体、 稀释剂和 / 或赋形剂合并以生产常规盖伦制剂， 例如， 片剂、 丸剂、 粉末剂 ( 例如吸入粉末 )、 锭剂、 袋 剂、 扁囊剂、 酏剂、 悬浮剂、 乳剂、 溶液剂、 糖浆剂、 气雾剂 ( 作为固体或处于液体介质中 )、 喷 雾剂 ( 例如鼻喷雾剂 )、 用于雾化器的组合物、 膏剂、 软和硬明胶胶囊、 栓剂、 无菌注射液和 无菌包装的粉末剂等。无菌吸入组合物用于与不动杆菌生物体相关的呼吸道疾病 ( 其可以 包括 COPD、 COAD、 COAP、 肺炎、 囊性纤维化、 气肿和哮喘 ) 的治疗值得特别关注。
合适的载体、 赋形剂和稀释剂的实例为乳糖、 右旋葡萄糖、 蔗糖、 山梨醇、 甘露醇、 淀粉、 阿拉伯树胶、 磷酸钙、 惰性藻酸盐、 黄芪胶、 凝胶、 硅酸钙、 微晶纤维素、 聚乙烯吡咯烷 酮、 纤维素、 水糖浆 (water syrup)、 水、 水 / 乙醇、 水 / 乙二醇、 水 / 聚乙烯、 高渗盐水、 乙二 醇、 丙二醇、 甲基纤维素、 羟基苯甲酸甲酯、 羟基苯甲酸丙酯、 滑石、 硬脂酸镁、 矿物油或脂肪 物质 ( 例如硬脂 ) 或其合适的混合物。值得注意的赋形剂和稀释剂为甘露醇和高渗盐水。
另外， 该组合物还可以包含润滑剂、 润湿剂、 乳化剂、 悬浮剂、 防腐剂、 甜味剂和调 味剂等。
如上讨论， 提出用于本发明的藻酸盐低聚物和抗生素可以与其他治疗剂联合使 用， 例如， 用来在单一的药物制剂或组合物中共同施用， 或分别施用 ( 即分别、 依次或同时 施用 )。 因此， 本发明的藻酸盐低聚物和 / 或抗生素可以与其他治疗活性剂联合， 例如， 在药 物试剂盒中或作为联合的 (“联合” ) 产品。
因此， 本发明的另一方面提供了含有本文定义的藻酸盐低聚物和 / 或抗生素 ( 例
如大环内脂类抗生素 ) 和其他活性剂作为联合制剂的产品， 所述联合制剂适于分别、 同时 或依次使用 ( 例如应用于不动杆菌生物体和 / 或施用于受试对象或位置 ) 以抑制不动杆菌 生物体的生长和 / 或生存、 抗击某一位置的不动杆菌污染、 抗击不动杆菌生物体的群体， 特 别是治疗受试对象的不动杆菌感染。
如以上关于联合治疗所述， 药物组合物中可以包含其他治疗活性剂。
本发明还提供产品 ( 例如药物试剂盒或联合的 (“联合” ) 产品 ) 或组合物 ( 例如 药物组合物 )， 其中， 所述产品或组合物包含本文定义的藻酸盐低聚物和抗生素， 所述抗生 素例如选自阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 醋竹桃霉素、 氨曲南、 亚胺培南、 美罗培 南、 厄他培南、 多尼培南、 帕尼培南 / 倍他米隆、 比阿培南、 PZ-601、 头孢克肟、 头孢地尼、 头 孢托仑、 头孢哌酮、 头孢噻肟、 头孢泊肟、 头孢他啶、 头孢布烯、 头孢唑肟、 头孢曲松、 头孢吡 肟、 地美环素、 强力霉素、 美满霉素、 土霉素、 四环素、 杆菌肽、 粘菌素、 多粘菌素 B、 环丙沙星、 依诺沙星、 加替沙星、 左氧氟沙星、 洛美沙星、 莫西沙星、 诺氟沙星、 氧氟沙星和曲伐沙星。 优 选的是， 抗生素选自头孢他啶、 亚胺培南 / 西司他丁、 美罗培南、 氨曲南、 土霉素、 粘菌素、 阿 奇霉素、 环丙沙星， 优选其为阿奇霉素。例如， 抗生素可以选自丁胺卡那霉素、 庆大霉素、 卡 那霉素、 新霉素、 奈替米星、 链霉素、 妥布霉素、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红 霉素、 泰利霉素、 碳霉素 A、 交沙霉素、 吉他霉素、 麦迪霉素、 竹桃霉素、 螺旋霉素、 泰乐菌素、 醋竹桃霉素、 氨曲南、 亚胺培南、 美罗培南、 厄他培南、 多尼培南、 帕尼培南 / 倍他米隆、 比阿 培南、 PZ-601、 头孢克肟、 头孢地尼、 头孢托仑、 头孢哌酮、 头孢噻肟、 头孢泊肟、 头孢他啶、 头 孢布烯、 头孢唑肟、 头孢曲松、 头孢吡肟、 地美环素、 强力霉素、 米诺环素、 土霉素、 四环素、 杆 菌肽、 粘菌素、 多粘菌素 B、 环丙沙星、 依诺沙星、 加替沙星、 左氧氟沙星、 洛美沙星、 莫西沙 星、 诺氟沙星、 氧氟沙星和曲伐沙星。具体而言， 抗生素可以选自头孢他啶、 亚胺培南 / 西司 他丁、 美罗培南、 氨曲南、 土霉素、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉 素和环丙沙星， 特别优选的是抗生素选自头孢他啶、 亚胺培南 / 西司他丁、 美罗培南、 氨曲 南、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素和环丙沙星。更优选的是， 抗生素选自氨曲南、 阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 螺旋霉素和环丙沙 星。在另一些实施方式中， 所使用的抗生素不是妥布霉素、 丁胺卡那霉素和 / 或粘菌素。在 另一些实施方式中， 所使用的抗生素不是氨基糖苷和 / 或多肽抗生素。在又一些实施方式 中， 所使用的抗生素不是在与藻酸盐低聚物使用的条件下具有正电荷的抗生素， 例如具有 至少 3 个、 例如至少 4、 5、 6 或 7 个氨基 (-NH2) 基团的抗生素。
在优选实施方式中， 产品或组合物包含本文定义的藻酸盐低聚物和大环内酯类抗 生素， 所述大环内酯类抗生素选自阿奇霉素、 克拉霉素、 地红霉素、 红霉素、 罗红霉素、 泰利 霉素、 碳霉素 A、 交沙霉素、 吉他霉素、 麦迪霉素、 竹桃霉素、 螺旋霉素、 醋竹桃霉素、 泰乐菌 素。优选的是， 大环内酯类抗生素为氮杂大环内酯、 优选阿奇霉素。
这些产品和组合物被特别考虑用于本发明的方法。 产品和组合物可以是药物或非 药物。因此， 本发明的该方面的产品和组合物可以用在本发明的任何方法中。
还考虑了本文定义的藻酸盐低聚物制造此类用于本发明的医学方法中的药物产 品和药物组合物的用途。 还可以并入其他活性剂。 上文和下文对额外的活性剂和和赋形剂等的讨论以其整 体直接适用于本发明的该方面。
在一些情况下， 这对于将本文定义的藻酸盐低聚物和 / 或抗生素施用于动物例如 以促进重量增加 / 生长可能有益。施用可以以上述药物组合物的形式实现， 但方便的是， 本 文定义的藻酸盐低聚物和 / 或抗生素可以用作常规饲料添加剂， 即， 以很少的在营养上无 关紧要的量添加至动物饲料的产品。饲料添加剂在动物饲料中的使用已得到良好建立， 对 于本领域技术人员而言， 确定和使用适量的本发明的藻酸盐来实现所需效果 ( 例如重量增 加 / 生长 ) 完全是常规工作。
藻酸盐低聚物和抗生素的相对含量可以根据所需剂量和所遵循的剂量方案而变， 这取决于待处理的受试对象和位置以及不动杆菌的特性， 和 / 或不动杆菌污染或含有不动 杆菌的群体的成分。 优选的是， 组合物将包含一定量的藻酸盐低聚物， 所述一定量的藻酸盐 低聚物将提供可测量的对抗生素抑制不动杆菌生物体生长和 / 或生存的效果的提高， 例如 包含下述量的藻酸盐低聚物， 藻酸盐低聚物的所述量将至少使大环内酯类抗生素抑制不动 杆菌生物体的生长和 / 或生存的有效性翻为至少 2 倍、 至少 4 倍、 至少 8 倍、 至少 16 倍或至 少 32 倍。换言之， 组合物将包含对所针对的感染提供可测量的治疗的一定量藻酸盐低聚物 和一定量抗生素。
优选的是， 组合物和产品将包含足量的藻酸盐低聚物， 在施用于受试对象或应 用于某一位置时， 该低聚物的局部浓度将为至少 2 ％、 优选至少 4 ％、 6 ％或 8 ％且最优选 至少 10 ％ ( 重量体积比 )。优选的是， 抗生素将以足以提供至少 0.03125μg/ml、 优选 至 少 0.0625μg/ml、 0.125μg/ml、 0.25μg/ml、 0.5μg/ml、 1μg/ml、 2μg/ml、 4μg/ml、 8μg/ml、 16μg/ml、 32μg/ml、 64μg/ml、 128μg/ml、 256μg/ml、 512μg/ml、 1024μg/ml、 2048μg/ml 或 4096μg/ml 的局部浓度的量存在。 本领域技术人员理解， 在遵循多次给药方 案时可以减少藻酸盐低聚物和 / 或抗生素的量， 或者可以将其增加以减少施用或应用的次 数。
该方面的组合物和产品通常包含 1％～ 99％、 5％～ 95％、 10％～ 90％或 25％～ 75％的藻酸盐低聚物和 1％～ 99％、 5％～ 95％、 10％～ 90％或 25％～ 75％大环内酯类抗 生素， 其余部分为其他成分。
胃肠外施用形式 ( 例如静脉内溶液 ) 应该为无菌的， 并且不含生理学上不能接受 的试剂， 以及应该具有较低摩尔渗透压浓度以便使施用时的剌激或其他副作用最小化， 因 此溶液应该优选为等渗溶液或稍微高渗的溶液， 例如高渗盐水。合适的载剂包括惯常用于 施用胃肠外溶液的水性载剂， 例如， 氯化钠注射液、 林格氏注射液、 右旋葡萄糖注射液、 右 旋葡萄糖和氯化钠注射液、 乳酸化林格氏注射液， 以及如 Remington′ s Pharmaceutical Sciences， 第 15 版， Easton ： Mack Publishing Co.， 第 1405-1412 页 和 第 1461-1487 页 (1975) 和 The National Formulary XIV， 第 14 版， Washington ： American Pharmaceutical Association(1975) 中所述的其他溶液。所述溶液可以含有传统上用于胃肠外溶液的防腐 剂、 抗微生物剂、 缓冲剂和抗氧化剂以及赋形剂与其他添加剂， 其与生物聚合物相容并且不 干扰产品的制造、 贮存或使用。
为进行局部施用， 可将藻酸盐低聚物和 / 或抗生素加入霜剂、 膏剂、 凝胶剂和透皮 贴剂等中。还可以将藻酸盐低聚物和 / 或抗生素加入医用敷料中， 例如， 如织造 ( 例如织 物 ) 敷料或非织造敷料 ( 例如凝胶或具有凝胶成分的敷料 ) 等伤口敷料。藻酸盐聚合物在 敷料中的使用是已知的， 并且可以将本发明的藻酸盐低聚物加入此类敷料或实际上任何敷料中。 因此， 在另一个具体实施方式中， 本发明还提供包含藻酸盐低聚物 ( 其可为本文 定义的任何藻酸盐低聚物 ) 和 / 或抗生素、 例如大环内酯类抗生素 ( 其可为本文定义的任 何抗生素或大环内酯类抗生素 ) 的伤口敷料以在必要时用于本发明的治疗和方法。
本发明设想的另一个合适的局部系统是原位药物输送系统， 例如， 其中固体、 半固 体、 无定形或液晶凝胶基质原位形成并且可以包含藻酸盐低聚物和 / 或抗生素的凝胶。可 以方便地将此类基质设计来控制藻酸盐低聚物和 / 或抗生素从基质的释放， 例如能够在选 定的时期使释放延迟和 / 或持续。此类系统仅当与生物组织或流体接触时才可以形成凝 胶。该凝胶通常是生物粘附性的。通过此类输送技术能够针对向任何身体部位的输送， 所 述输送能够保持或适合保持前凝胶 (pre-gel) 组合物。此类系统描述于 WO2005/023176。
对于对口腔、 面颊和牙齿表面的应用， 特别可举出牙膏、 牙科用凝胶、 牙科用泡沫 和漱口剂。因此， 在一个特定方面， 本发明包括包含藻酸盐低聚物和抗生素 ( 其可以为本文 定义的任何藻酸盐低聚物或抗生素 ) 的口腔保健或口腔卫生组合物、 特别是漱口剂、 牙膏、 牙科用凝胶、 牙科用泡沫， 以在必要时用于本发明的治疗和方法中。
还值得注意的是可吸入组合物。 适于吸入的组合物的配制对于本领域技术人员而 言是常规工作， 并且在呼吸道疾病的治疗中很久以来都是标准实践方法。可吸入组合物可 以例如采用可吸入粉末、 溶液或悬浮液的形式。本领域技术人员能够选择最适当形式的输 送系统来满足其需要， 并且能够制备本发明的藻酸盐和 / 或抗生素的合适的制剂以用于该 系统。特别优选的是无推进剂的可雾化溶液和可吸入粉末制剂。
如上所述， 本发明的一个优选组合物为用于清创过程中除去 ( 例如从组织中除 去 ) 不动杆菌生物体的菌落或群体的清创组合物。此类组合物通常是液体， 但是可以使用 凝胶、 凝胶溶胶或半固体组合物。该组合物可用于清除菌落 / 群体 ( 例如通过在压力下应 用于组织 ) 和 / 或可以用于在借助其他手段 ( 例如通过外科手术、 机械或化学方法 ) 进行 清创之前、 期间和 / 或之后冲洗组织。本领域技术人员能够容易地配制本发明的清创组合 物。
在无生命表面上或在无生命材料中的不动杆菌生物体的情形中， 可以以任何便利 的组合物或制剂或者通过任何便利手段将藻酸盐低聚物和 / 或抗生素应用至待处理表面 或材料。因此， 藻酸盐低聚物和 / 或抗生素可以为液体、 凝胶、 凝胶溶胶、 半固体或固体形式 ( 例如溶液剂、 悬浮剂、 匀浆剂 (homogenate)、 乳剂、 糊剂、 粉末剂、 气雾剂、 蒸汽剂 )。 用于处 理此类无生命表面或材料的组合物通常是非药物可接受的组合物。 组合物形式的选择将由 表面上或材料中的不动杆菌生物体的特性和表面或材料的位置决定。例如， 如果所处位置 为流体线， 则应用流体组合物可能较为方便。此外可能优选的是使用持续作用于待处理的 流体线的表面上或部分中但不会浸入正常使用的流体中的组合物， 例如粘合性凝胶。本领 域技术人员能够根据其公知常识容易地制备合适的组合物。例如， 可以将藻酸盐低聚物和 / 或抗生素添加至涂料制剂， 并应用于待处理表面 ( 例如， 艇壳或艇结构的暴露于水中的其 他部分 )， 或应用于建筑物或其任何部分、 罐 ( 例如贮存罐或处理罐 )， 或实际上可应用于任 何工业机械的任何部分。 如上所述， 此类组合物还可以方便地包含其他抗微生物剂， 例如抗 TM 生素、 氯漂白剂、 TCP、 乙醇、 Virkon 、 聚维酮碘、 银化合物、 抗微生物表面活性剂等。由于该 组合物不必为药物可接受的， 因而考虑到表面损伤、 环境污染、 用户安全和受处理表面的污
染以及与组合物其他成分的相互作用， 能够使用较苛刻的抗微生物剂。
通过使用本领域已知的方法可以将本发明的组合物配制来以便在施用于受试对 象 / 表面后提供对活性成分的快速、 持续或延迟的释放。还优选粘合性组合物。粘合性的、 持续和 / 或延迟释放的制剂可能是特别方便的。
在另一方面， 本发明提供了已对其易感表面用本文定义的藻酸盐低聚物和 / 或抗 生素 ( 例如大环内酯类抗生素 ) 进行预处理的、 易受不动杆菌生物体污染 / 建群影响的产 品。
“预处理” 是指将易感表面在暴露于不动杆菌生物体之前暴露于藻酸盐低聚物和 / 或抗生素， 并且藻酸盐低聚物和 / 或抗生素持续作用于该表面一段时间， 该持续时间足以 在相当的一段时间内预防不动杆菌生物体污染 / 建群。优选的是藻酸盐低聚物和 / 或抗生 素将持续作用基本等同于表面的使用寿命的时间， 例如， 预处理形成基本永久的藻酸盐低 聚物和 / 或抗生素的涂层。因此， 预处理的表面 / 产品是将藻酸盐低聚物和 / 或抗生素施 用并保持于其上的表面 / 产品。此类产品 / 表面可以是涂布的产品 / 表面。
易受不动杆菌污染 / 不动杆菌生物体建群影响的产品和表面的非限制性实例如 上所述。特别可以举出医疗和外科手术装置 ( 例如气管内或气管切开插管 ) 以及食品或饮 品加工、 贮存或配送设备和医疗装置。
预处理能够通过任何方便的手段来实现， 例如将藻酸盐低聚物和抗生素应用至表 面的任何形式、 特别是对表面进行涂布 ( 例如， 喷雾干燥、 用加入有藻酸盐低聚物和 / 或抗 生素的聚合物进行聚合物涂布， 和使用含有藻酸盐低聚物和 / 或抗生素的涂料、 清漆或漆 制剂进行涂布、 涂清漆或涂漆 )。此类含有藻酸盐低聚物和 / 或抗生素的 “涂布” 组合物 ( 例如油漆、 清漆或漆 ) 代表本发明的又一个方面。作为另一种选择， 可将藻酸盐低聚物和 / 或抗生素并入制造物体或其易感部分的材料中。该方法适于由聚合物 ( 如塑料和聚硅氧 烷等 ) 制造的物体或其构成部分， 例如上述医疗装置和外科手术装置。其可包括任何种类 的线路， 包括导管 ( 例如中心静脉导管和导尿管 )、 例如心脏瓣膜、 人工关节、 假牙、 齿冠、 齿 帽和软组织植入物 ( 例如胸部、 臀部和唇部植入物 ) 等假体装置。任何种类的可植入 ( 或 “留置” ) 医疗装置 ( 例如支架、 子宫内装置、 起搏器、 插管 ( 气管内或气管切开插管 )、 假体 或假体装置、 线路或导管 ) 都包括在内。其他产品包括食品加工、 贮存、 配送或制备设备或 表面、 罐、 输送机、 地板、 排液装置、 冷却器、 冷冻器、 设备表面、 墙、 阀、 带、 管道、 空调导管、 冷 却装置、 食品或饮品配送线、 热交换器、 艇壳或暴露于水的艇结构的任何部分、 牙科水线、 石 油钻探导管、 隐形眼镜和贮存箱。
现在通过参考以下非限制性实施例来进一步描述本发明。 实施例 实施例 1
G 片段藻酸盐低聚物对于与不同浓度阿奇霉素联合的头孢他啶或环丙沙星的最小 抑制浓度的作用
细菌菌株
从来自利比亚的来源分离的多重抗药性不动杆菌生物体
金黄色葡萄球菌 NCTC 6571 MIC CONTROL STRAIN(Oxford Staph.)
化学药品和细菌培养基
在从 -80 ℃的贮存器中取出后， 细菌菌落在具有 5 ％绵羊血的血液琼脂上生 长， 并用于接种胰蛋白胨大豆肉汤 (TSB) 以生长过夜。在经阳离子调节的米勒 - 海顿 (Mueller-Hinton) 肉汤 (CAMHB) 或具有 2％、 6％或 10％的 G 片段 (Oligo CF-5/20 90-95％ G 残基 ) 的 CAMHB 中稀释抗生素。 抗生素为医药级 ( 购自 Sigma-Aldrich)。 OligoG CF-5/20G 片段由 Algipharma 提供。
最小抑制浓度测试 (Jorgensen 等， Manual of Clinical Microbiology， 第 7 版， Washington， D.C ： American Society for Microbiology， 1999 ； 1526-43)
在无菌水中稀释如上所述的过夜的细菌培养物直至 OD625 为 0.08 ～ 0.10， 以确定 细胞密度等于 0.5 麦克法兰 (McFarland) 标准。
在 CAMHB 或补充有 4μg/ml 或 8μg/ml 阿奇霉素和 0 ％、 2 ％、 6 ％或 10 ％ G 片段 (Oligo CF-5/2090-95％ G 残基 ) 的 CAMHB 中制备两倍环丙沙星和两倍头孢他啶系列稀释 液， 并将其置于平底 96 孔微量滴定板的完全相同的孔中 ( 每孔中 100μl)。头孢他啶以 0μg ml-1 ～ 1024μg ml-1 使用且环丙沙星以 0μg ml-1 ～ 256μg ml-1 使用。
将 0.5 麦克法兰标准的细菌培养物在 CAMHB 中稀释十倍， 并将 5μl 添加至容有抗 生素系列稀释液的微量滴定板中。 将该板用石蜡封口膜包裹并于 37℃培养 16 小时～ 20 小 时。将各抗生素的 MIC 值确定为无可见生长时的最低浓度。结果见表 1。
表1
这些数据显示， 该鲍曼不动杆菌的菌株的生长可以被 4μg/ml 阿奇霉素和 2％以 上的 G 片段的联合完全抑制。在不存在 G 片段的情形下， 4μg/ml 和 8μg/ml 阿奇霉素不能 抑制生长， 抑制只能通过添加额外的抗生素 ( 头孢他啶或环丙沙星 ) 来实现。
可以得出结论 ： 藻酸盐低聚物 ( 例如 G 片段 ) 增强了阿奇霉素抵抗鲍曼不动杆菌 的功效， 特别是藻酸盐低聚物 ( 例如 G 片段 ) 增强了阿奇霉素抑制鲍曼不动杆菌生长的有 效性。因此， 预计阿奇霉素与藻酸盐低聚物 ( 例如 G 片段 ) 的一起使用构成了对于不动杆 菌感染和污染的高度有效的处理。
实施例 2
利用 1μg/ml 或 2μg/ml 阿奇霉素并对于铜绿假单胞菌的 MDR 菌株重复实施例 1 的研究。结果显示在表 2 中。
表 2. 彼此联合的两种抗生素 ( 阿奇霉素和头孢他啶或环丙沙星 ) 在不同浓度 OligoCF-5/20(0 ～ 10％ ) 存在下针对铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的多重抗药性 (MDR) 菌株的最小抑制浓度 (MIC)(MIC 值以 μg ml-1 表达 )
指示随 G 片段浓度增加而增加的 MIC 值
指示随 G 片段浓度增加而降低的 MIC 值
这 些 数 据 显 示， 在 不 动 杆 菌 生 物 体 中 环 丙 沙 星 和 头 孢 他 啶 的 MIC 值 被 OligoCF-5/20 显著降低， 尽管在铜绿假单胞菌中看到 MIC 值存在一定程度的降低。如实 施例 1 中所讨论的， 在使用较高浓度阿奇霉素 ( 即， 8μg/ml 或 4μg/ml) 的几乎所有实验 中， OligoCF-5/20 的存在在不添加环丙沙星或头孢他啶的情况下引起了对不动杆菌生长的
完全抑制， 因此可以看出， OligoCF-5/20 也显著地降低了阿奇霉素在不动杆菌生物体中的 MIC 值。
实施例 3
G 片段藻酸盐低聚物对于各种抗生素和不动杆菌菌株的最小抑制浓度的作用。
使用以下不动杆菌菌株、 抗生素和如表 3 和表 4 中所述浓度的 OligoCF-5/20 进行 实施例 1 中所述的 MIC 测试。
非 MDR 菌株 *
·V19 7789 鲍曼不动杆菌 *
·V20 8065 鲁氏不动杆菌
MDR 菌株 *
·V4 MDR ACB( 利比亚 ) 鲍曼不动杆菌 *
·V9 ( 埃及 ) 鲍曼不动杆菌 *
·V10 ( 埃及 ) 鲁氏不动杆菌 *
·V22 6056 鲁氏不动杆菌
表 3. 在不同浓度 OligoCF-5/20(0 ～ 10％ ) 存在下不同抗生素在鲍曼不动杆菌和 鲁氏不动杆菌的不同菌株中的最小抑制浓度 (MIC)(MIC 值以 μg ml-1 表达 )
指示随 G 片段浓度增加而增加的 MIC 值
指示随 G 片段浓度增加而降低的 MIC 值
采用以下方案使用表 4 中所列的不同菌株和抗生素进行进一步的 MIC 测试。 将 G 嵌段藻酸盐 (OligoG CF-5/20) 溶解在米勒 - 海顿肉汤 (Lab M limited， LAB114 米勒 - 海顿肉汤 ) 中使其达到所需测试浓度 (2 ％、 6 ％和 10 ％ ) 的 1.25 倍。将抗生 素溶解在米勒 - 海顿肉汤和具有浓度为最高所需测试浓度的 1.25 倍的 G 嵌段藻酸盐的米 勒 - 海顿肉汤中。抗生素为医药级 ( 购自 Sigma-Aldrich)。OligoG CF-5/20G 片段由挪威 的 Algipharma AS 提供。
使用不同浓度的 G 嵌段藻酸盐在米勒 - 海顿中制备抗生素的两倍系列稀释液， 并 将该溶液置于 Nunc 384 孔微板的四个平行孔中 ( 在 Nunc 242757 微板的每孔中 30μl)。 每个微孔板包括有对于各 G 嵌段浓度未添加抗生素的一组孔 (8 个 ) 作为生长参照组。
通过在 -80℃冷冻之前添加甘油至浓度为 15％， 由所有菌株在 TSB 肉汤中的过夜 培养物制备冷冻的贮存培养物。在分析当日， 将过夜的 TSB 培养物 (6ml， 处于倾斜 45 度角 的 50ml 试管中， 200rpm， 2.5cm 振幅， 37℃ ) 于 TSB 中稀释直至 OD600 为 0.10， 并在米勒 - 海 顿肉汤中进一步稀释至 1 ∶ 40。384 孔试验板中的各孔接种 7.5μl 稀释的培养物。将微 板置于塑料袋中并在 37℃温育。 在温育约 18 小时后测量微孔中在 600nm 的光密度， 并基于 对照组中的生长计算各孔中的相对生长产率。将 MIC 值设定为在样品组内所有 4 个平行孔 中提供低于 30％生长的最高浓度。将微板再温育 8 小时， 并再一次测量培养物的光密度以 确认所估计的 MIC 值。
表 4 中提供了基础数据的主表和次级表， 所述次级表呈现了 OligoCF-5/20 对于各 特定藻酸盐和抗体组合的 MIC 值的总体作用。在次级表中， 带深色阴影的框代表 MIC 值的 总体降低 ； 带阴影线的框代表 MIC 值的总体升高 ； M 表示所有 MIC 值都大于所使用的抗生素 的最大浓度 ； L 表示所有 MIC 值都小于所使用的抗生素的最小浓度 ； NE 表示未观察到对于 MIC 值的作用。
表 4. 在不同浓度 OligoCF-5/20(0 ～ 10％ ) 存在下不同抗生素在不同的鲍曼不动 杆菌和鲁氏不动杆菌的菌株中的最小抑制浓度 (MIC)(MIC 值以 μg ml-1 表达 )
表 3 和 4 中提供的数据概括地显示了 OligoCF-5/20(0 ～ 10％ ) 浓度的增加降低 了所测试的所有抗生素在一种或另一种不动杆菌菌株中的 MIC 值 ( 阿奇霉素、 红霉素、 罗红 霉素、 地红霉素、 克拉霉素和螺旋霉素 ( 大环内酯 )、 氨曲南 ( 单环 β- 内酰胺 )、 头孢他啶 ( 头孢菌素 )、 亚胺培南 ( 碳青霉烯 )、 美罗培南 ( 碳青霉烯 )、 环丙沙星 ( 喹诺酮 ) 和土霉素 ( 四环素 ))。在所测试的菌株不完全易受所测试的抗生素影响的几乎各个情形 ( 即， 生长 抑制见于所测试的抗生素的最低浓度时 ) 中， 可见 MIC 值的降低。在表 4 中， 当使用氨曲南 或头孢他啶时菌株 V9 显示的是 M(MIC 高于所使用的抗生素的最大浓度 )。然而在表 3 中，
这些抗生素显示了随着在菌株 V9 中 OligoCF-5/20 的浓度的升高， MIC 值降低。类似地， 在 表 4 中， 当使用环丙沙星或头孢他啶时菌株 V19 显示的是 M(MIC 高于所使用的抗生素的最 大浓度 )。然而在表 3 中， 这些抗生素显示了随着在菌株 V9 中 OligoCF-5/20 的浓度的升 高， MIC 值降低。在表 4 中， 菌株 V19 中亚胺培南的 MIC 值随着 OligoCF-5/20 浓度的升高 而降低。然而， 根据表 3 中的数据， OligoCF-5/20 浓度的增加对于该菌株中亚胺培南的 MIC 值没有作用。总体来看， 土霉素的有效性受 OligoCF-5/20 浓度的升高影响最小， 然而， 土霉 素仍在所测试的菌株 V10( 表 3) 和 V4( 表 4) 中的两种中显示了较低的 MIC 值。
这些数据凸显了藻酸盐低聚物增强抗生素抵抗不动杆菌生物体的有效性的能力、 更特别是藻酸盐低聚物克服这些细菌可能具有的对于抗生素的抵抗性的能力。
发现不动杆菌菌株的 MIC 的加强在使用大环内脂类时最为显著， 但是在使用 β- 内酰胺类时也观察到了 MIC 值的明显降低。重要的是， MIC 值的降低可以引起表型由抵 抗向敏感的改变。
实施例 4
M 嵌段藻酸盐低聚物对于氨曲南、 环丙沙星、 美罗培南和阿奇霉素在两种不动杆菌 菌株中的最小抑制浓度的作用
使用以下在表 5 中详细列出的鲍曼不动杆菌菌株、 抗生素和代替 OligoG CF-5/20 的 M 嵌段藻酸盐低聚物重复实施例 1 中所述的研究。M 嵌段低聚物为 DPn 为 15 ～ 18 的 100％ M。
表 5. 在不同浓度 M 嵌段低聚物 (0 ～ 10％ ) 存在下不同抗生素对于显示 MDR 表型 的鲍曼不动杆菌的两种菌株的最小抑制浓度 (MIC)(MIC 值以 μg ml-1 表达 )
指示随 G 片段浓度增加而降低的 MIC 值指示随 G 片段浓度增加而增加的 MIC 值
表 5 中显示的结果表明， 与 OligoG CF-5/20 相似， M 嵌段低聚物也对降低许多不 同抗生素在鲍曼不动杆菌的 MDR 和非 MDR 菌株中的 MIC 值有效。50