抗病毒剂 本发明涉及核苷和核苷衍生物、 它们的合成、 以及它们作为 RNA- 依赖性 RNA 病毒 聚合酶抑制剂的用途。本发明的化合物是 RNA- 依赖性 RNA 病毒复制抑制剂， 因此可用于治 疗 RNA 依赖性 RNA 病毒感染。他们尤其可用作丙型肝炎病毒 (HCV)NS5B 聚合酶的抑制剂、 用作 HCV 复制的抑制剂、 以及用于治疗丙型肝炎感染。
在相当多的被感染个体 （估计占世界人口的 2-15%） 中， 丙型肝炎病毒 (HCV) 感染 是导致慢性肝病如肝硬化和肝细胞癌的主要健康问题。根据美国疾病控制中心估计， 仅仅 在美国有 450 万被感染。根据世界卫生组织报道， 全世界有 2 亿感染个体， 每年至少 3 至 ４百万人感染。一旦被感染， 大约 20% 的人清除了该病毒， 但其余的人在他们的余生一直携 带着 HCV。百分之十至二十的慢性感染个体最后发展为损害肝脏的肝硬化或癌。该病毒性 疾病通过污染的血液和血液制品、 污染的针、 或性行为非经口传播和由感染的母亲或携带 者母亲垂直地传播到她们的后代。 目前对 HCV 感染的治疗， 限于用重组干扰素 -α 单独免疫 治疗或其与核苷类似物利巴韦林联合治疗， 临床价值有限。此外， 还没有公认的 HCV 疫苗。 因此， 迫切需要有效抗击慢性 HCV 感染的改进的治疗剂。已经采取了不同的方法进行 HCV 治疗， 包括抑制病毒丝氨酸蛋白酶 （NS3 蛋白酶） 、 解旋酶、 和 RNA 依赖性 RNA 聚合酶 （NS5B） 、 以及开发疫苗。
HCV 病毒颗粒是被包膜的正链 RNA 病毒， 具有大约 9600 个碱基的单寡核糖核苷 酸基因组序列， 其编码大约 3,010 个氨基酸的多聚蛋白。该 HCV 基因蛋白质产物由结构蛋 白质 C、 E1 和 E2、 以及非结构蛋白质 NS2、 NS3、 NS4A 和 NS4B、 及 NS5A 和 NS5B 组成。非结 构 (NS) 蛋白被认为是提供病毒复制的催化机器。NS3 蛋白酶从多聚蛋白链释放 NS5B、 RNA 依赖性 RNA 聚合酶。由充当 HCV 复制周期中模板的单链病毒 RNA 合成双链 RNA 需要 HCV NS5B 聚合酶。因此认为 NS5B 聚合酶是 HCV 复制复合体中的主要成分 [ 参见 K.Ishi, et al., "Expression of Hepatitis C Virus NS5B Protein: Characterization of Its RNA Polymerase Activity and RNA Binding," Hepatology. 29:1227-1235(1999) 和 V. Lohmann, et al., "Biochemical and Kinetic Analyses of NS5B RNA-Dependent RNA Polymerase of the HepatitisC Virus," Virology., 249:108-118(1998)]。抑制 HCV NS5B 聚合酶能阻止双链 HCV RNA 的形成， 因此成为一种有吸引力的开发 HCV 特异性抗病毒 治疗的方法。
开发具有潜力的 HCV NS5B 聚合酶的抑制剂用于治疗 HCV 感染已经在 M.P.Walker et al, "Promising candidates for the treatment of chronic hepatitis C," Expert Opin. Invest. Drugs. 12: 1269-1280(2003) 和 P. Hoffmann et al, "Recent patents on experimental therapy for hepatitis C virus infection(1999-2002)." Expert Opin. Ther. Patents."13:1707-1723(2003) 中作了综述。嘌呤核糖核苷的抗 HCV 聚 合 酶 活 性 由 A.E. Eldrup et al, "Structure-Activity Relationship of Purine Ribonucleosides for Inhibition of HCV RNA-Dependent RNA Polymerase," J. Med. Chem..47:2283-2295(2004) 报道。仍然需要结构多样的作为 HCV 聚合酶抑制剂的核苷衍 生物用作 HCV 治疗的治疗途径。
中国专利申请 CN10117742 公开了下式的核苷衍生物具有抗病毒活性 ：其中 R 为甲基、 腈基、 叠氮基或乙炔基， 且 B 是任选地被取代的嘧啶、 嘌呤或 7- 去氮杂 嘌呤碱 （7-deazapurine base） 。
具体地公开了其中 R 为叠氮基且 b 为尿苷的化合物并报道其具有抗 HCV 病毒的活 性。
Journal of Biological Chemistry(208), 283(4), 2167-2175 公开了含取代的 嘧啶碱基的 c2'-dexy4- 叠氮基核苷类似物为 " HCV 复制的高效抑制剂 "。
本发明提供一类新型核苷和核苷酸， 其为 RNA 依赖性 RNA 病毒复制尤其是 HCV 复 制的有效抑制剂。
本发明涉及结构式 (I) 的化合物 ：及其可药用的盐 ； 其中 ： 6 Y 为 CR 基团， 其中 R6 为氢、 CHO、 腈基、 乙炔基、 任选地被一个或两个 C1-3 脂肪族基取代 的基团 CONH2、 或任选地被氟取代的 C1-3 脂肪族基， 或者 R6 为任选地被 COR7 取代的氨基， 其 7 5 中 R 为 C1-6 脂肪族基或苯基， 或者 Y 与 R 连接形成三环核 ：其中虚线表示单键或双键， 当虚线表示双键时 Z 表示 CH， 或者当虚线表示单键时 Z 表示 O 或 CH2 ； W 为 N 或 CH ； R1 为叠氮基、 乙炔基、 腈基或任选地被氟取代的 C1-3 脂肪族基 ； 2 R 为氢或氟 ； R3 为氢、 氟或羟基或 C1-3 烷氧基或任选地被氟取代的 C1-3 脂肪族基 ； 4 R 为氢、 氨基或羟基 ；R5 为羟基或氨基 ； Q1 为氢或单、 二或三磷酸基或保护基 Q3 ； 且 2 4 Q 为氢或保护基 Q ； 该化合物用于预防和 / 或治疗 HCV 感染。
适宜地 R1 为叠氮基或乙炔基且最适宜为叠氮基。
适宜地 R2 为氢。
适宜地 R3 为氟。
适宜地 R4 为氢。
适宜地 R5 为氨基。
适宜地 Y 为 CH。
适宜地 W 为 CH。
适宜的基团 Q3 和 Q4 为本领域的技术人员公知， 例如公开在 WO2006/065335 和 PCT/ EP2008/056128 中的那些， 这些文献在此引入作为参考。例如 Q3 可为 C1-16 烷基羰基、 C2-18 烯 基羰基、 C1-10 烷氧羰基、 C3-6 环烷基羰基、 C3-6 环烷氧基羰基或单磷酸酯前药残基。
R7 为氢、 任选地被选自氟、 羟基、 甲氧基、 氨基、 羧基、 氨甲酰基、 胍基、 巯基、 甲硫 7 基、 1H - 咪唑基、 和 1H - 吲哚 -3- 基中的一个取代基取代的 C1-6 烷基 ； 或者 R 为苯基、 苄基或 苯乙基， 各自任选地被一至两个独立地选自卤素、 羟基和甲氧基的取代基取代 ； 8 R 为氢或甲基 ； 或者 R7 和 R8 与它们所连接的碳原子一起形成 3 至 6 元脂肪族螺环系统 ； R9 为芳基、 芳基烷基、 杂芳基或或其中 R11 为 C1-16 烷基、 C2-20 烯基、 (CH2)0-4C7-9 环烷基、 (CH2)0-4C3-9 环烯基或金刚烷基， 各 15 16 自任选地被一至三个独立地选自卤素、 羟基、 羧基、 C1-4 烷氧基、 三氟甲基和 (CH2)0-4NR R 的 15 16 15 取代基取代， 其中 R 和 R 独立地选自氢和 C1-6 烷基 ； 或者 R 和 R16 与它们所连接的氮原 子一起形成任选地含 1 或 2 个以上杂原子的 4 至 7 元杂环， 其中杂原子选自 N、 O 和 S， 所述 环任选地被 C1-6 烷基取代 ； R10 为羟基或 OR16 基团， 其中 R16 为 CH2OC(O)R17 或 CH2CH2SR17， 其中 R17 为任选地被羟基 取代的 C1-6 烷基羰基， 或者 R16 为 (CH2)2-4-O-(CH2)1-17CH3、 或选自苯基、 萘基、 吡啶基、 嘧啶 基、 吡嗪基、 哒嗪基、 吲哚基、 喹啉基或异喹啉基的芳环， 其中该芳环任选地被一至五个选自 卤素、 C1-4 烷基、 C1-4 烷氧基、 C1-4 烷硫基、 氰基、 硝基、 氨基、 羧基、 三氟甲基、 三氟甲氧基、 C1-4烷基氨基、 二 (C1-4 烷基 ) 氨基、 C1-4 烷基羰基、 C1-4 烷基羰基氧基和 C1-4 烷氧羰基的取代基取 10 4 代； 或者 R 和 Q 形成键构成环状磷酸基 ； R12 为 C6-16 烷基、 C2-20 烯基、 (CH2)0-2C7-9 环烷基、 (CH2)0-2C3-9 环烯基、 OC1-6 烷基或金刚烷 基； 且 R13 和 R14 独立地选自氢和 C1-6 烷基 ； 或者 R13 和 R14 与它们所连接的碳原子一起形成 3 至 6 元脂肪族螺环系统 ； 和 / 或 Q4 可以是甲基、 C1-16 烷基羰基、 C2-18 烯基羰基、 C1-10 烷氧羰基、 C3-6 环烷基羰基、 C3-6 环烷氧基羰基和下述结构式的氨基酰基残基 ：其中 R18 为氢、 C1-5 烷基或苯基 C0-2 烷基 ； 且 R19 为氢、 C1-4 烷基、 C1-4 烷基磺酰基或苯基 20 20 C0-2 烷基磺酰基、 或基团 COR ， 其中 R 为任选地被苯基取代的 C1-4 烷基、 任选地被苯基取代 的 C1-4 烷氧基、 任选地被任选地被苯基取代的 C1-4 烷基取代的 C1-4 烷基氨基。 适宜地， Q1 选自氢、 单磷酸根、 二磷酸根或三磷酸根， 或 C1-C16- 烷基羰基或前面描 7 述的结构的单磷酸盐 （或酯） 前药， 其中 ： R 为氢、 甲基或苄基 ； 更适宜地为氢或甲基 ； R8 为氢 或甲基 ； 更适宜为氢 ； R9 为 Ph、 CO2R11 或 CR13R14OC(O) R12， 且 R10 为羟基或 OR16 ； 其中 R16 为芳 环或杂芳环或 CH2CH2SR17， 其中 R17 为 C1-C6 烷基羰基， 任选地被羟基取代 ； 更适宜地 R10 为羟 基、 O- 苯基或任选地被羟基取代的 CH2CH2S-C1-C6- 烷基羰基 ； 最适宜地 R10 为羟基或 CH2CH2S S- 叔丁基羰基或 CH2CH2S - 羟基 - 叔丁基羰基。
适宜地 R11 为 C1-C16 烷基， 优选为 C7-C16 烷基 ； R12 为 C1-C16 烷基， 优选为 C7-C16 烷基 ； 13 14 且 R 和 R 均为氢。
最适宜地 Q1 为氢或三磷酰基。
适宜地， Q2 选自氢、 C1-C16- 烷基羰基或前面描述的结构的氨基酰基残基， 其中 R18 为 氢或 C1-C5 烷基， 更适宜为甲基， 且 R19 为氢， 最适宜地 Q2 为氢。
式 (I) 化合物具有所标明的立体化学构型。
式 (I) 化合物优选的实施方案包括选自式 (III)、 (IV)、 (V) 和 (VI) 的那些化合 物：
及其可药用的盐 ； 其中 R1 至 R6、 Z、 Q1 和 Q2 如上文定义。
优选地式 (I) 化合物为式 (VII) 化合物 ：及其可药用的盐 , 其中 R6、 Q1 和 Q2 如本文中之前的定义。
优选地 R6 为氢。优选地 Q1 和 Q2 为氢。
式 (VII) 化合物为新型化合物， 因此构成本发明的其它方面。
本发明优选的化合物包括 ： 7-(4- 叠氮基 -2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋喃糖 基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺及其可药用的盐。
式 (I) 化合物用作 RNA 依赖性 RNA 病毒聚合酶的抑制剂， 尤其是 HCV NS5B 聚合酶的抑制剂。它们还是 RNA 依赖性 RNA 病毒复制的抑制剂， 尤其是 HCV 复制的抑制剂， 用于治 1 2 疗 RNA 依赖性 RNA 病毒感染， 尤其用于治疗 HCV 感染。其中 Q 和 Q 分别不为 5'- 三磷酸基 和羟基的式 (I) 化合物可以充当前药或可以变为用于治疗 RNA 依赖性 RNA 病毒感染尤其用 于治疗 HCV 感染的式 (I) 化合物。
不受其作用机理的限制， 本文中定义的本发明化合物的前药充当相应的核苷 5'- 单磷酸盐的前体。内源性激酶酶将 5' - 单磷酸盐转化为它们的 5'- 三磷酸盐衍生物， 该衍生物为 RNA 依赖性 RNA 病毒聚合酶的抑制剂。因而， 前药可以提供比核苷本身更有效 的靶细胞穿透， 可能对代谢性代谢性降解更不敏感， 可能具有靶向特定组织如肝脏， 导致宽 的治疗指数， 允许降低抗病毒剂的总剂量。
包含单独的该化合物或与其它抗 RNA 依赖性 RNA 病毒的活性剂尤其是抗 HCV 的活 性剂组合的药物组合物以及抑制 RNA 依赖性 RNA 病毒复制和用于治疗 RNA 依赖性 RNA 病毒 感染的方法也包括本发明的范围内。
在本发明的一实施方案中， 本发明的化合物用作正义单链 RNA 依赖性 RNA 病毒聚 合酶的抑制剂、 正义单链 RNA 依赖性 RNA 病毒复制的抑制剂的前体， 和 / 或用于治疗正义单 链 RNA 依赖性 RNA 病毒感染。在该类实施方案中， 正义单链 RNA 依赖性 RNA 病毒为黄病毒 科病毒 (Flaviviridae virus) 或细小 RNA 病毒科病毒 (Picornaviridae virus)。在该类 的一个亚类中， 细小 RNA 病毒科病毒为鼻病毒、 脊髓灰质炎病毒或甲型肝炎病毒。在该类的 第二亚类中， 黄病毒科病毒选自丙型肝炎病毒、 黄热病毒、 登革病毒、 西尼罗病毒、 日本脑炎 病毒、 斑齐病毒 (Banzi virus) 和牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)。 在该亚类中的一个亚类， 黄病 毒科病毒为丙型肝炎病毒。
本发明的另一方面涉及在有需要的哺乳动物中抑制 RNA 依赖性 RNA 病毒聚合酶的 方法、 抑制 RNA 依赖性 RNA 病毒复制的方法、 和 / 或治疗 RNA 依赖性 RNA 病毒感染的方法， 包括给哺乳动物施用治疗有效量的结构式 (I) 化合物。
在本发明此方面的一实施方案中， RNA 依赖性 RNA 病毒聚合酶为正义单链 RNA 依 赖性 RNA 病毒聚合酶。在该实施方式的一类中， 正义单链 RNA 依赖性 RNA 病毒聚合酶为黄 病毒科病毒聚合酶或细小 RNA 病毒科病毒聚合酶。在该类的一个亚类中， 细小 RNA 病毒科 病毒聚合酶为鼻病毒聚合酶、 脊髓灰质炎病毒聚合酶、 或甲型肝炎病毒聚合酶。 在该类的第 二亚类中， 黄病毒科病毒聚合酶选自丙型肝炎病毒聚合酶、 黄热病毒聚合酶、 登革病毒聚合 酶、 西尼罗病毒聚合酶、 日本脑炎病毒聚合酶、 斑齐病毒聚合酶和牛病毒性腹泻病毒 (BVDV) 聚合酶。在该亚类的一个亚类中， 黄病毒科病毒聚合酶为为丙型肝炎病毒聚合酶。
在本发明此此方面的第二实施方式中， RNA 依赖性 RNA 病毒复制为正义单链 RNA 依 赖性 RNA 病毒复制， 如黄病毒科病毒复制或细小 RNA 病毒科病毒复制。在一个亚类中， 细小 RNA 病毒科病毒复制为鼻病毒复制、 脊髓灰质炎病毒复制、 或甲型肝炎病毒复制。在第二亚 类中， 黄病毒科病毒复制选自丙型肝炎病毒复制、 黄热病毒复制、 登革病毒复制、 西尼罗病 毒复制、 日本脑炎病毒复制、 斑齐病毒复制， 和牛病毒性腹泻病毒复制， 优选地为丙型肝炎 病毒复制。
在本发明此方面的第三实施方式中， RNA 依赖性 RNA 病毒感染为正义单链 RNA 依 赖性病毒感染， 如黄病毒科病毒感染或细小 RNA 病毒科病毒感染。在该类的一个亚类中， 细 小 RNA 病毒感染科病毒感染为鼻病毒感染、 脊髓灰质炎病毒感染或甲型肝炎病毒感染。在此类的第二亚类中， 黄病毒科病毒感染选自丙型肝炎病毒感染、 黄热病毒感染、 登革病毒感 染、 西尼罗病毒感染、 日本脑炎病毒感染、 斑齐病毒感染、 和牛病毒性腹泻病毒感染， 优选地 黄病毒科病毒感染为丙型肝炎病毒感染。
在本申请全文中， 下列术语具有下述含义 ： 术语 " 脂肪族 " 意指含指定碳原子数的烷基、 烯基和炔基。
上面所指的烷基包括直链或支链结构中指定长度的那些烷基。 示例性的此种烷基 是甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基、 仲丁基、 叔丁基、 戊基、 异戊基、 己基、 异己基、 庚基、 1- 丙 基丁基、 辛基、 2- 丙基戊基等。
术语 " 金刚烷基 " 既包括 1- 金刚烷基又包括 2- 金刚烷基。
术语 " 烯基 " 指含指定碳原子数、 或在该范围之内任何数目的直链或支链烯烃 ( 例如， 乙烯基、 丙烯基、 丁烯基、 戊烯基、 油烯基等 )。
术语 " 炔基 " 指含指定碳原子数、 或在该范围之内任何数目的直链或支链炔烃 ( 例如， 乙炔基、 丙炔基等 )。
术语 " 环烷基 " 指具有指定碳原子数、 在该范围之内任何数目的环烷烃 （实例包括 环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 或环辛基 )。术语 " 环烯基 " 指具有指定碳原子 数、 在该范围之内任何数目的环烯烃 （也就是， 环丙烯基、 环丁烯基、 环戊烯基、 环己烯基、 环 庚烯基、 或环辛烯基 )。 术语 "C1-6 脂肪族基 " 指含一至六个碳原子的烷基、 烯基、 炔基、 环烷基、 环烯基或 环炔基基团。
术语 " 烷氧基 " 是指指定碳原子数目 ( 例如， C1-4 烷氧基 )、 或在该范围之内任何 数目的直链或支链烷氧基 [ 也就是， 甲氧基、 乙氧基、 异丙氧基等 ]。
术语 " 烷基氨基 " 是指指定碳原子数目 ( 例如， C1-4 烷基氨基 )、 或在该范围之内 任何数目的直链或支链烷基胺 [ 也就是， 甲氨基、 乙氨基、 异丙氨基、 叔丁氨基等 ]。
术语 " 烷基磺酰基 " 是指指定碳原子数目 ( 例如， C1-6 烷基磺酰基 )、 或在该范围之 内任何数目的直链或支链烷基砜 [ 也就是， 甲磺酰基 (MeSO2-)、 乙磺酰基、 异丙磺酰基等 ]。
术语 " 烷氧羰基 " 指具有指定碳原子数目 （例如， C1-8 烷氧羰基 )、 或在该范围之内 任何数目 [ 也就是， 甲氧基羰基 (MeOCO-)、 乙氧基羰基、 或丁氧基羰基 ] 的存在于本发明化 合物之中的直链或支链羧酸基团或氨基甲酸基团的酯。
术语 " 烷基羰基 " 指具有指定碳原子数目 （例如， C1-8 烷基羰基 )、 或在该范围之内 任何数目 [ 也就是， 甲氧基羰基 (MeOCO-)、 乙氧基羰基、 或丁氧基羰基 ] 的直链或支链烷基 酰基。
术语 " 卤代 " 包括氟代、 氯代、 溴代和碘代 [ 也就是， 氯代或氟代 ]。
术语 " 单磷酸根 " 指 -P(O)(OH)2， 术语 " 二磷酸根 " 指具有下述结构的基团 ：
术语 " 三磷酸根 " 指具有下述结构的基团 ：。 术语 " 取代 " 应认为包括被指定取代基多取代。在多取代基部分被公开或要求保 护的情况下， 取代化合物可以独立地被一个或多个所公开或要求保护的取代基部分单或多 取代。
术语 "5'- 三磷酸酯 " 指具有以下式结构的本发明核苷化合物的 5'- 羟基的三磷 酸酯衍生物
其中 R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 Y、 W、 Q1 和 Q2 定义如上。
术语 " 组合物 "， 如在 " 药物组合物 " 中， 包括含活性成分和构成载体的惰性成分 的产品， 以及由两种或更多成分组合、 络合或聚集、 或由一种或多种成分分解、 或由一种或 多种成分的其它类型反应或相互作用直接或间接得到的任何产品。因此， 本发明的药物组 合物包括由本发明的化合物和可药用的载体混合制得的任何组合物。
术语 " 的施用和 " 施用 " 化合物应理解为指给有需要的个体提供本发明的化合物 或本发明化合物的前药。
本发明的另一方面涉及抑制 HCV NS5B 聚合酶、 抑制 HCV 复制、 或用本发明的 化合物与一种或多种可用于治疗 HCV 感染的治疗剂组合治疗 HCV 感染的方法。此种抗 HCV 的活性剂包括但不限于利巴韦林 (ribavirin)、 levovirin、 viramidine、 硝唑尼特 (nitazoxanide)、 胸腺素 α-1、 干扰素 -β、 干扰素 -α、 聚乙二醇化干扰素 -α( 聚乙二醇 干扰素 -α） 、 干扰素 -α 和利巴韦林的组合、 聚乙二醇干扰素 -α 和利巴韦林的组合、 干扰 素 -α 和 levovirin 的组合、 以及聚乙二醇干扰素 -α 和 levovirin 的组合。干扰素 -α 包括但不限于重组干扰素 -α2a （如可由 Hoffmann--LaRoche, Nutley, NJ 获得的 Roferon 干扰素） 、 聚乙二醇化干扰素 -α2a(PegasysTM))、 干扰素 -α2b( 如可由 Schering Corp. Kenilworth, NJ 获得的内含子 -A 干扰素） 、 聚乙二醇化干扰素 -α2b(PeglntronTM)、 重组复 合干扰素 (recombinant consensus interferon)（如干扰素 alphacon-1)、 以及纯化的干 扰素 -α 产品。Amgen 的重组复合干扰素商标名称为 Infergen®。levovirin 为利巴韦林的 L- 对映体， 其显示与利巴韦林类似的免疫调节活性。Viramidine 表示 WO01/60379( 转让给 ICN Pharmaceuticals) 中公开的利巴韦林的类似物。根据本发明的该方法， 组合中的单个 组分可以在治疗过程中在不同的时间分别施用或以分开的形式或单一组合形式同时施用。 因此本发明应理解为包含同时或交替治疗的所有这类情形， 术语 " 施用 " 应据此解释。应 理解本发明化合物与其它可用于治疗 HCV 感染的治疗剂的组合范围原则上包括与治疗 HCV感染的任何药物组合物的任何组合。当本发明的化合物或其可药用的盐用于与另一抗 HCV 的活性剂组合时， 各化合物的剂量可与该化合物单独使用时相同或者不同。
对于治疗 HCV 感染， 本发明的化合物也可与 HCV NS3 丝氨酸蛋白酶的抑制剂治 疗剂组合施用。HCV NS3 丝氨酸蛋白酶为必需的病毒酶且被描述为优良的抑制 HCV 复 制的靶标。HCV NS3 蛋白酶抑制剂的以底物为基础的抑制剂和不以底物为基础的抑制 剂 (non-substrate based inhibitor) 公 开 于 WO98/22496、 WO98/46630、 WO99/07733、 WO99/07734、 WO99/38888、 WO99/50230、 WO99/64442、 WO00/09543、 WO00/59929、 GB-2337262、 WO02/18369、 WO02/08244、 WO02/48116、 WO02/48172、 WO05/037214 和美国专利号 6,323,180 中。作为开发 HCV 复制抑制剂和治疗 HCV 感染的靶标的 HCV NS3 蛋白酶在 B.W. Dymock, "Emerging therapies for hepatitis C virus infection," Emerging Drugs, 6:13-42(2001) 中有论述。可与本发明的化合物组合的特定的 HCV NS3 蛋白酶抑制剂包括 BILN2061、 VX-950、 SCH6、 SCH7 和 SCH-503034。
利 巴 韦 林、 levovirin 和 viramidine 可 通 过 调 整 鸟 嘌 呤 核 苷 酸 的 胞 内 库 (intracellular pools) 经抑制胞内酶肌苷一磷酸脱氢酶 (IMPDH) 而发挥它们的抗 HCV 作 用。在鸟嘌呤核苷酸的从头生物合成中 IMPDH 为合成路线上的限速酶。利巴韦林容易在细 胞内被磷酸化且单磷酸酯衍生物为 IMPDH 的抑制剂。 因而， IMPDH 的抑制代表发现 HCV 复制 抑制剂的另一个有用的靶标。因此， 本发明的化合物也可与 IMPDH 抑制剂例如公开于 WO97 97/41211 和 WO01/00622（转让给 Vertex） 中的 VX-497、 另一种 IMPDH 抑制剂例如公开于 WO00/25780（转让给 Bristol-Myers Squibb） 中的物质 ； 或麦考酚酸吗啉乙酯 [ 参见 A.C. Allison and E.M. Eugui, Agents Action.44(Suppl.):165(1993)] 组合施用。
对于治疗 HCV 感染， 本发明的化合物也可与抗病毒剂金刚胺 （1- 氨基金刚烷） [关 于该药物的全面描述， 参见 J. Kirschbaum, Anal. Profiles Drug Subs.12:1-36(1983)] 组合施用。
本 发 明 的 化 合 物 也 可 与 公 开 于 R. E. Harry-O'kuru, et al., J. Org. Chem., 62:1754-1759(1997); M. S. Wolfe, et al., Tetrahedron Lett., 36: 7611-7614(1995)、美 国 专 利 号 3,480,613(1969 年 11 月 25 日 )、美 国 专 利 号 6,777,395(2004 年 8 月 17 日 )、 美国专利号 6,914,054(2005 年 7 月 5 日 )、 国际专利申请公 开号 WO01/90121(2001 年 11 月 29 日 )、 WO01/92282(2001 年 12 月 6 日 )、 WO02/32920(2002 年 4 月 25 日 )、 WO02/057287(2002 年 7 月 25 日 )、 WO02/057425(2002 年 7 月 25)、 WO04/002422(2004 年 1 月 8 日 )、 WO04/002999(2004 年 1 月 8 日 )、 WO04/003000(2004 年 1 月 8 日 )、 WO04/002422(2004 年 1 月 8 日 )、 美国专利申请公开 2005/0107312、 US2005/0090463、 US2004/0147464 和 US2004/0063658 中的抗病毒的 2'-C - 支链的核糖核苷组合用于治疗 HCV 感染 ； 上述各专利文献的内容全文引入作为参考。此种 2'-C - 支链核糖核苷包括但不 限于 2'-C - 甲基胞苷、 2'- 氟 -2'-C - 甲基胞苷 2'-C - 甲基尿苷、 2'-C - 甲基腺苷、 2'-C - 甲 基鸟苷和 9-(2-C - 甲基 -β-D- 呋喃核糖基 (ribofuranosyl))-2,6- 二氨基嘌呤 ； 该呋喃糖 C-2'、 C-3' 和 C-5' 羟基 ( 如 3'-O -(L- 缬氨酰 )-2'-C - 甲基胞苷二盐酸盐， 也称为伐洛他 滨二盐酸盐或 NM-283 和 3'-O -(L- 缬氨酰 )-2'- 氟 -2'-C - 甲基胞苷） 的相应氨基酸酯、 以 及它们的 5'- 磷酸酯衍生物的任选地被取代的相应环状 1,3- 丙二醇酯。
本发明的化合物也可与其它具有抗 HCV 性质的核苷组合用于治疗 HCV 感染， 这些核苷例如公开于美国专利号 6,864,244(2005 年 3 月 8 日 )、 转让给 Mitsubishi Pharma Corp 的 WO02/51425(2002 年 7 月 4 日 )、转 让 给 Pharmasset, Ltd. 的 WO01/79246、 ， WO02/32920 和 WO02/48165(2002 年 6 月 20 日 )、 转 让 给 ICN Pharmaceuticals 的 WO01/68663(2001 年 9 月 20 日 )、 WO99/43691(1999 年 9 月 2 日 )、 转让给 Hoffmann-LaRoche 的 WO02/18404(2002 年 3 月 7 日 ) 、 U.S.2002/0019363(2002 年 2 月 14 日 ) 、 WO02/100415(2002 年 12 月 19 日 )、 WO03/026589(2003 年 4 月 3 日 )、 WO03/026675(2003 年 4 月 3 日 )、 WO03/093290(2003 年 11 月 13 日 )、 US2003/0236216(2003 年 12 月 25 日 )、 US2004/0006007(2004 年 1 月 8 日 )、 WO04/011478(2004 年 2 月 5 日 )、 WO04/013300(2004 年 2 月 12 日 )、 US2004/0063658(2004 年 4 月 1 日 ) 和 WO04/028481(2004 年 4 月 8 日 ) 中 的那些。
在一个实施方案中， 可与本发明的核苷衍生物组合的核苷 HCV NS5B 聚合酶抑制剂 选自下列化合物 ： 4'- 叠氮基 - 胞苷、 4- 氨基 -7-(2-C - 甲基 -β-D- 呋喃核糖基 )-7H- 吡 咯并 [2,3-d] 嘧啶、 4- 氨基 -7-(2-C - 羟甲基 -β-D- 呋喃核糖基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧 啶、 4- 氨 基 -7-(2-C - 氟 甲 基 -β-D- 呋 喃 核 糖 基 )-7H- 吡 咯 并 [2,3-d] 嘧 啶、 4- 氨 基 -5- 氟 -7-(2-C - 甲基 -β-D- 呋喃核糖基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶、 2- 氨基 -7-(2-C - 甲 基 -β-D- 呋喃核糖基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d] 嘧啶 -4(3H )- 酮、 4- 氨基 -7-(2-C ,2-O - 二甲 基 -β-D- 呋喃核糖基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶、 β-D-2'- 脱氧 -2'- 氟 -2'-C - 甲基 - 胞 苷及其可药用的盐和前药。
本发明的化合物也可与 HCV 聚合酶的非核苷抑制剂组合用于治疗 HCV 感染， 这些 非核苷抑制剂例如有公开于转让给 Tularik, Inc 的 WO01/77091(2001 年 10 月 18 日 )、 转 让 给 Japan Tobacco, Inc. 的 WO01/47883(2001 年 7 月 5 日 )、 转 让 给 Boehringer Ingelheim 的 WO02/04425(2002 年 1 月 17 日 )、 转让给 Istituto di Ricerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A. 的 WO02/06246(2002 年 1 月 24 日 )、 WO02/20497(2002 年 3 月 3 日 )、 转让给 Japan Tobacco, Inc. 的 WO2005/016927( 特别是 JTK003) 中的那些 ； 上述各专利文献的内容全文引入本文作为参考 ； 以及 HCV-796（Viropharma Inc.)。
在一个实施方案中， 可与本发明的核苷衍生物组合的非核苷 HCV NS5B 聚合酶 抑制剂选自下列化合物 ： 14- 环 己 基 -6-[2-( 二 甲 氨 基 ) 乙 基 ]-7- 氧 代 -5,6,7,8- 四 氢 吲 哚 并 [2,1-a][2,5] 苯 并 二 氮 杂 芳 辛 -11- 羧 酸 ； 14- 环 己 基 -6-(2- 吗 啉 -4- 基 乙 基 ]-5,6,7,8- 四 氢 吲 哚 并 [2,1-a][2,5] 苯 并 二 氮 杂 芳 辛 -11- 羧 酸 ； 14- 环 己 基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-3- 甲氧基 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a ][2,5] 苯并二氮 杂芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -3- 甲氧基 -6- 甲基 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 甲基 ({[(14- 环己基 -3- 甲氧基 -6- 甲基 -5,6,7,8- 四氢吲 哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 基 ) 羰基 ] 氨基 } 磺酰基 ) 醋酸盐 ； ({[(14- 环 己基 -3- 甲氧基 -6- 甲基 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 基 ) 羰基 ] 氨基 } 磺酰基 ) 乙酸 ； 14- 环 己 基 -N-[( 二 甲 氨 基 ) 磺 酰 基 ]-3- 甲 氧 基 -6- 甲 基 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a ][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酰胺 ； 3- 氯 -14- 环己 基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-7- 氧代 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂 芳辛 -11- 羧酸 ； N’ -(11- 羧基 -14- 环己基 -7,8- 二氢 -6H - 吲哚并 [1,2-e][1,5] 氧氮苯 并因辛 (benzoxazocin)-7- 基 )-N,N- 二甲基乙烷 -1,2- 二铵双 ( 三氟醋酸 ) 盐 ； 14- 环己基 -7,8- 二氢 -6H- 吲哚并 [1,2-e][1,5] 氧氮苯并因辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -6- 甲 基 -7- 氧 -5,6,7,8- 四 氢 吲 哚 并 [2,1-a][2,5] 苯 并 二 氮 杂 芳 辛 -11- 羧 酸 ； 14- 环 己 基 -3- 甲 氧 基 -6- 甲 基 -7- 氧 代 -5,6,7,8- 四 氢 吲 哚 并 [2,1-a ][2,5] 苯 并 二 氮 杂 芳 辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-3- 甲氧基 -7- 氧 -5,6,7,8- 四氢吲哚 并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -6-[3-( 二甲氨基 ) 丙基 ]-7- 氧 代 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -7- 氧 代 -6-(2- 哌啶 -1- 基乙基 )-5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧 酸； 14- 环己基 -6-(2- 吗啉 -4- 基乙基 )-7- 氧代 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯 并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -6-[2-( 二乙氨基 ) 乙基 ]-7- 氧代 -5,6,7,8- 四氢吲 哚并 [2,1-a ][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -6-(1- 甲基哌啶 -4- 基 )-7- 氧 代 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a ][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -N-[( 二 甲氨基 ) 磺酰基 ]-7- 氧代 -6-(2- 哌啶 -1- 基乙基 )-5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酰胺 ； 14- 环己基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-N -[( 二甲氨基 ) 磺 酰基 ]-7- 氧代 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酰胺 ； 14- 环 戊基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-7- 氧代 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a ][2,5] 苯并二氮杂 芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧 酸； 6- 烯丙基 -14- 环己基 -3- 甲氧基 -5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳 辛 -11- 羧酸 ； 14- 环戊基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-5,6,7,8- 四氢吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 14- 环己基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-5,6,7,8- 四氢吲哚 并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -11- 羧酸 ； 13- 环己基 -5- 甲基 -4,5,6,7- 四氢呋喃并 [3',2':6,7][1,4] 二氮芳辛并 [1,8-a ]- 吲哚 -10- 羧酸 ； 15- 环己基 -6-[2-( 二甲氨基 ) 乙基 ]-7- 氧代 -6,7,8,9- 四氢 -5H - 吲哚并 [2,1-a][2,6] 苯并二氮杂芳辛 -12- 羧酸 ； 15- 环己基 -8- 氧代 -6,7,8,9- 四氢 -5H - 吲哚并 [2,1-a][2,5] 苯并二氮杂芳辛 -12- 羧 酸； 13- 环己基 -6- 氧代 -6,7- 二氢 -5H - 吲哚并 [1,2-d ][1,4] 苯二氮 -10- 羧酸 ； 及其 可药用的盐。
" 可药用的 " 指载体、 稀释剂或赋形剂必须与制剂中其它成分相容而且对接受者 无害。
包含本发明化合物与可药用的载体的药物组合物也包括在本发明的范围内。 本发 明的另一个实施例为通过将上述的任何化合物和可药用的载体组合制得的药物组合物。 本 发明的另一个例证为一种制备药物组合物的方法， 包括将上述的任何化合物和可药用的载 体组合。
可用于抑制 RNA 依赖性 RNA 病毒聚合酶尤其是 HCV NS5B 聚合酶、 且包含有效量 的本发明化合物和可药用的载体的药物组合物也包括在本发明的范围内。本发明还包括 可用于治疗 RNA 依赖性 RNA 病毒感染尤其是 HCV 感染的药物组合物以及抑制 RNA 依赖性 RNA 病毒聚合酶尤其是 HCV NS5B 聚合酶的方法和治疗 RNA 依赖性病毒复制尤其是 HCV 复 制的方法。另外， 本发明涉及包含与治疗有效量的另一种抗 RNA 依赖性 RNA 病毒尤其是抗 HCV 的活性剂组合的治疗有效量的本发明化合物的药物组合物。抗 HCV 的活性剂包括但不 限于利巴韦林、 levovirin、 viramidine、 胸腺素 α-1（HCV NS3 丝氨酸蛋白酶的抑制剂） 、 干扰素 -α、 聚乙二醇化干扰素 -α（聚乙二醇干扰素 -α） 、 干扰素 -α 和利巴韦林的组合、 聚乙二醇干扰素 -α 和利巴韦林的组合、 干扰素 -α 和 levovirin 的组合、 以及聚乙二 醇干扰素 -α 和 levovirin 的组合。干扰素 -α 包括但不限于重组干扰素 -α2a( 如可由 Hoffmann-LaRoche, Nutley, NJ 获得的 Roferon 干扰素 )、 干扰素 -α2b（如由 Schering Corp. Kenilworth, NJ 获得的内含子 -A 干扰素） 、 复合干扰素、 以及纯化的干扰素 -α 产品。关于利巴韦林及其抗 HCV 活性的论述， 参见 J.O. Saunders 和 S.A. Raybuck, "Inosine Monophosphate Dehydrogenase: Consideration of Structure, Kinetics, and Therapeutic Potential," Ann. Rep. Med. Chem., 35:201-210(2000)。
本发明的另一方面提供本发明化合物以及它们的药物组合物用于制备抑制 RNA 依赖性 RNA 病毒复制尤其是 HCV 复制、 和 / 或治疗 RNA 依赖性 RNA 病毒感染尤其是 HCV 感 染的药物的用途。本发明的其它方面还提供用作抑制 RNA 依赖性 RNA 病毒复制尤其是 HCV 复制、 和 / 或治疗 RNA 依赖性 RNA 病毒感染尤其是 HCV 感染的药物的本发明化合物以及它 们的药物组合物。
本发明的药物组合物包含式 (I) 化合物或其可药用的盐作为活性成分， 且还可含 可药用的载体和任选的其它治疗成分。
组合物包括适合于经口腔、 直肠、 局部、 肠胃外 ( 包括皮下、 肌肉内和静脉内） 、 眼睛 ( 眼用） 、 肺部 ( 鼻或面颊吸入） 、 或鼻施用的组合物， 尽管在任何给定的情况下大多数适宜的 途径会依赖于所治疗病症的特性和严重程度和依赖于活性成分的特性。 它们可方便地存在 于单位剂型之中和通过药学领域中公知的任何方法制备。 在实际使用中， 式 (I) 化合物可按照常规的药物配制技术作为活性成分与药物载 体直接 (in intimate) 混合而组合。载体可采取多种形状， 依赖于所期望施用的配制物的 形式， 例如， 经口腔或肠胃外 （包括静脉内） 施用。在制备口服剂型的组合物中， 任何常规的 药物媒介都可以使用， 在口服液体制剂例如悬浮液、 酏剂和溶液的情形下， 例如有水、 二醇 类、 油类、 醇类、 调味剂、 防腐剂、 着色剂等 ； 在口服固体制剂例如散剂、 硬胶囊和软胶囊和片 剂的情形下， 载体有例如淀粉、 糖、 微晶纤维素、 稀释剂、 造粒剂、 润滑剂、 粘合剂、 崩解剂等， 与液体制剂相比优选固体口服制剂。
因为其易于施用， 片剂和胶囊代表大多数有利的口服剂量单位形式， 在这种情况 下显而易见要使用固体药物载体。如有需要， 片剂可通过标准的水或非水方法包衣。此种 组合物和制剂包含至少 0.1% 的活性化合物。当然， 这些组合物中活性化合物的百分比可变 化， 并可适宜地在该单位重量的约 2% 至约 60 % 之间变化。在此种治疗有用的组合物中活 性化合物的量是能获得有效剂量的量。 活性化合物还可以鼻内施用， 例如， 以液滴或喷雾的 形式。
片剂、 丸剂、 胶囊等等还可以含粘合剂如黄蓍胶、 阿拉伯胶、 玉米淀粉或明胶 ； 赋形 剂如磷酸二钙 ； 崩解剂如玉米淀粉、 马铃薯淀粉、 藻酸 ； 润滑剂如硬脂酸镁 ； 和甜味剂如蔗 糖、 乳糖或糖精。 当剂量单位形式为胶囊时， 除以上类型的材料之外它还可以含液体载体如 脂肪油。
各种其它材料可以以包衣的形式或为改变剂量单位的物理形式而存在。例如， 片 剂可用虫胶、 糖或两者包衣。 糖浆或酏剂中， 除活性成分之外， 还可以含作为甜味剂的蔗糖、 作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、 着色剂和调味剂如樱桃味或橙子味。
式 I 化合物也可胃肠外施用。这些活性化合物的溶液或悬浮液可在适当地混有表
面活性剂如羟基丙基纤维素的水中制备。 分散物还可以在甘油、 液体聚乙二醇、 以及它们在 油中的混合物中制备。在通常的储存和和使用条件下， 这些制剂含防腐剂以防止微生物的 生长。
适合于注射使用的药物剂型包括无菌水溶液或分散物和用于无菌注射溶液或分 散物临时配制的无菌粉末。在所有的情形中， 剂型必须无菌且必须达到容易注射存在的流 体程度。它在生产和贮存的条件下必须是稳定的且必须抗微生物如细菌和真菌的污染保 存。载体可以是含例如水、 乙醇、 多元醇 （例如甘油、 、 丙二醇和液体聚乙二醇） 、 其适宜的混 合物和植物油的溶剂或分散介质。
为了给哺乳动物特别是人提供有效剂量的本发明化合物， 任何适宜的给药途径都 可采用。例如 ： 可采用经口腔、 直肠、 局部、 肠胃外、 眼睛、 肺部、 鼻给药等。剂型包括片剂、 锭剂、 分散物、 悬浮液、 溶液、 胶囊、 乳膏、 软膏、 气雾剂等。优选地， 结构式 I 的化合物口服给 药。还优选地， 结构式 I 的化合物胃肠外给药。
对于给人口服给药， 剂量范围在分份剂量中是 0.01 至 1000mg/kg 体重。在一个实 施方案中剂量范围为在分份剂量中 0.1 至 100mg/kg 体重。在另一实施方案中剂量范围为 在分份剂量中 0.5 至 20mg/kg 体重。对于口服给药， 组合物优选以片剂或胶囊形式提供， 其 中含 1.0 至 1000 毫克活性成分， 尤其含 1、 5、 10、 15、 20、 25、 50、 75、 100、 150、 200、 250、 300、 400、 500、 600、 750、 800、 900 和 1000 毫克的活性成分， 根据所治疗的患者的症状调节剂量。
所采用的活性成分的有效剂量可以变化， 依赖于所用的特定化合物、 施用的方式、 所治疗的病症和所治疗病症的严重程度。此种剂量可由本领域技术人员容易确定。可对此 给药方案进行调节以提供最佳的治疗反应。
本发明的化合物含一个或多个不对称中心， 因而可以以外消旋体和外消旋混合 物、 单个对映体、 非对映异构体混合物和单独的非对映异构体的形式存在。当 Q2 的氨基酰 基残基实施方式中的 R18 为式中的氢之外的取代基时，氨基酰基残基含不对称中心且包括单独的 R- 和 S- 立体异构体和 RS- 非对映异构体 混合物。在一个实施方案中， 在形成立体的碳 (stereogenic carbon) 上的立体化学对应于 S- 氨基酸的立体化学， 即天然 α- 氨基酸立体化学， 如下式所述 ： 。 此外， 当 R9 为 ：
且 R13 和 R14 不都是氢时， 羧基残基含不对称中心且包括单独的 R - 和 S - 立体异构体和 RS - 立体异构体混合物。因而， 当 R4 和 R5 也不都是氢时， 氨基醇残基含两个不对称中心且 包括单独的 R,R -、 R,S -、 S,R - 和 S,S - 非对映异构体及其混合物。
本发明对于结构式中描述的 5 元呋喃糖环应理解为具有 β-D 立体化学构型的化 合物， 即， 其中在 5 元呋喃糖环的 C-1 和 C-4 上的取代基具有 β- 立体化学构型 ( 以粗线表 示的 " 向上 " 方向） 的核苷氨基磷酸酯。本文中描述的一些化合物含烯烃双键， 除非另有说 明， 其包括 E 和 Z 几何异构体。
本文中描述的一些化合物可以以互变异构体的形式如酮 - 烯醇互变异构体存在。 该单独的互变异构体和其混合物包括在结构式 (I) 化合物的范围内． 结构式 (I) 的化合物可通过例如从适宜的溶剂例如甲醇或乙酸乙酯或其混合物中分 级结晶、 或经使用旋光固定相的手性色谱法分离成其单独的非对映异构体。
或者， 结构式 (I) 的化合物的任何立体异构体可使用光学纯的起始原料或已知构 型的试剂通过立体有择合成来获得。
本发明的化合物可以可药用的盐的形式施用。术语 " 可药用的盐 " 指由可药用的 无毒碱或酸包括无机碱或有机碱和无机酸或有机酸制得的盐。包括在术语 " 可药用的盐 " 范围内的碱性化合物的盐指的是本发明化合物的无毒盐， 通常由游离碱游离碱与适宜的有 机酸或无机酸反应来制备。 本发明的代表性的碱性化合物的盐包括但不限于下列 ： 醋酸盐， 苯磺酸盐， 苯甲酸盐， 碳酸氢盐， 硫酸氢盐， 酒石酸氢盐， 硼酸盐， 溴化物， 右旋樟脑磺酸盐 (camsylate)， 碳酸盐， 氯化物， 克拉维酸盐 (clavulanate)， 柠檬酸盐， 二盐酸盐， 乙二胺四 乙酸盐， 乙二磺酸盐 (edisylate)， 丙酸酯十二烷基硫酸盐 (estolate)， 乙磺酸盐， 延胡索酸 盐， 葡庚糖酸盐， 葡糖酸盐， 谷氨酸盐， 乙醇酰对氨基苯基砷酸盐 (glycollylarsanilate)， 己基间二苯酚盐， 哈胺 （hydrabamine） ， 氢溴酸盐， 盐酸盐， 羟基萘甲酸盐， 碘化物， 异硫代硫 酸盐 （isothionate） ， 乳酸盐， 乳糖酸盐， 月桂酸盐， 苹果酸盐， 马来酸盐， 扁桃酸盐， 甲磺酸 盐， 甲基溴化物 （methylbromide） ， 甲基硝酸盐 （methylnitrate） ， 甲基硫酸盐， 粘酸盐， 萘 磺酸盐， 硝酸盐， N- 甲基葡糖胺铵盐， 油酸盐， 草酸盐， 双羟萘酸盐 （恩波酸盐） ， 棕榈酸盐， 泛酸盐， 磷酸盐 / 二磷酸盐， 多聚半乳糖醛酸盐， 水杨酸盐， 硬脂酸盐， 硫酸盐， 次醋酸盐， 琥 珀酸盐， 丹宁酸盐， 酒石酸盐， 茶氯酸盐， 甲苯磺酸盐， 三乙基碘化物 （triethiodide） 和戊 酸盐。此外， 在本发明化合物带酸性部分的情况下， 其适宜的可药用的盐包括但不限于由 无机碱得来的盐， 包括铝盐、 铵盐、 钙盐、 铜盐、 铁盐、 亚铁盐、 锂盐、 镁盐、 锰盐、 mangamous、 钾盐、 钠盐、 锌盐等。特别优选铵盐、 钙盐、 镁盐、 钾盐和钠盐。由可药用的有机无毒碱得 来的盐包括伯胺、 仲胺和叔胺、 环胺和碱离子 - 交换树脂的盐， 如精氨酸， 甜菜碱， 咖啡因， 胆碱， N,N- 二苄基乙烯二胺， 二乙胺， 2- 二乙氨基乙醇， 2- 二甲氨基乙醇， 乙醇胺， 乙二 胺， N- 乙基吗啉， N- 乙基哌啶， 葡糖胺 (glucamine)， 葡糖胺 (glucosamine)， 组氨酸， 哈胺 （hydrabamine） ， 异丙胺， 赖氨酸， 甲基葡糖胺， 吗啉， 哌嗪， 哌啶， 多胺树脂， 普鲁卡因， 嘌呤，可可碱， 三乙胺， 三甲胺， 三丙胺， 缓血酸胺等。
还有， 在本发明化合物中存在羧酸 (-COOH) 或羟基的情形下， 可以采用可药用的 前药羧酸酯衍生物， 如甲基、 乙基或新戊酰氧基甲基酯或核糖 C-2'、 C-3' 和 C-5' 羟基的酰 基衍生物前药， 如 O - 乙酰基、 O - 新戊酰基、 O - 苯甲酰基和 O - 氨基酰基。包括那些本领域 已知的用于改变生物利用度、 组织分布、 溶解性和用于缓释或前药制剂的水解特征的酯和 酰基基团。所考虑的衍生物容易在体内转化为需要的化合物。因此， 在本发明的治疗方法 中， 术语 " 施用 " 指包括用明确公开的化合物或用可能没有明确公开、 但在施用于哺乳动物 包括人患者之后能转化为明确说明的化合物的化合物治疗所述的病毒感染。 适宜的前药衍 生物的选择和制备的常规步骤公开在例如 "Design of Prodrugs," ed. H. Bundgaard, Elsevier,1985， 此文献在此全文引入作为参考。
合成概述 在本发明中描述的化合物可按照流程图 1 中概述的方法制备。进行了适当地保护 并 在 端 基 位 置 中 具 有 离 去 基 团 的 糖 结 构 单 元 如 1（例 如 3,5- 二 -O - 苯 甲 酰 基 -2- 脱 氧 -2- 氟 -α-D- 阿拉伯呋喃糖基溴化物， 按照 J. Org.Chem .1988, 55, 85 中报道的方法 制备 ) 可以在适宜的碱的存在下与官能化的杂环衍生物如 2 反应。 然后必需脱除保护基以 对 5'- 羟基部分进行其它操作。 典型地， 5'-OH 转化为相应的 5'- 碘化物的步骤通过本领域 的技术人员已知的方法完成 ： 适宜的步骤包括用碘和 Ph3P 在吡啶中的处理 3， 所述吡啶任 选地与适宜的有机溶剂如二烷、 乙腈或类似物组合， 或者使 3 与适宜的试剂如甲基三苯 氧基碘化反应。将所得碘化物用适宜的有机碱， 例如 DBU 或 tBuOK 处理， 随后在羟基和氨 基部分引入适宜的保护基得到所需的 4',5'- 烯 4。然后依次通过两步程序特色 (two-step sequence featuring) 的烯环氧化和以路易斯酸促进的叠氮化物加成来插入所需的 4'- 叠 氮基官能团。实施该转化的实际路线依赖于环氧化步骤中 DMDO 的使用和在 SnCl4 的存在 下用 TMS-N3 处理， 如 McGuigan et al, J. Med. Chem. 2007, 50, 54623 所述。最后进行 脱保护和纯化步骤 （典型地通过制备型 HPLC 进行） 完成朝着本发明中所述化合物方向的合 成程序。
在所选择的案例中， 略微改变合成步骤的顺序可能是有利的， 如流程图 2 中所述。 尤其是在 5'- 位引入碘的步骤之前实施氯置换可能是有益的。采用本领域的技术人员已知的方法， 可以将本文中描述的核苷类似物转化为各种 核苷衍生物， 例如相应的单磷酸酯和单磷酸酯前药、 二磷酸酯和三磷酸酯 （所选择的参考文 献： Ludwig, J. Acta Biochim. Biophys. Acad. Sci. Hung. 1981,16,131 ； Ludwig, J., Eckstein, F. J. Org.Chem. 1989, 54, 613; Mishra, N.C ； Broom, A. D. J. Chem. Soc, Chem. Commun. 1991,1276; McGuigan et al, J. Med. Chem. 1993, 36,1048 ； Uchiyama et al, J. Org. Chem. ,1993, 58, 373)。 用于预备三磷酸酯衍生物的方法的非限制性实例描 述于流程图 3。
合成核苷单磷酸酯和核苷单磷酸酯前药的非限制性实例描述于流程图 4。一般的合成步骤 所有的溶剂获自商业来源且不需进一步纯化就使用。除常规的脱保护和偶联步骤外， 反应在烘干的 (110 ℃ ) 玻璃容器中在氮气氛下进行。有机提取物用硫酸钠干燥， 并且在 旋转蒸发器上在减压下操作来进行浓缩 （过滤所述干燥剂后的滤液） 。快速色谱 (flash chromatography) 在硅胶上按照公开的步骤 (W.C. Still et al, J. Org. Chem. 1978, 43, 2923) 进行或者在利用预填充柱的半自动化快速色谱系统上进行。
试剂通常直接从供应商获得 ( 提供后直接使用） ， 但利用了获自内部公司收集 (in-house corporate collection) 的数量有限的化合物。 在后者的情况下， 试剂采用科学 文献报道的或本领域的技术人员已知的常规合成步骤容易获得。
22CN 102482314 A
1说明书18/24 页19 H、 F 和 31P nmr 谱记录在 Bruker AM 系分光计上， 分光计在 300-600MHz 之间的 （报道的） 频率操作。与非交换的质子 （和在可视情况下的可交换质子） 相应的信号的化学 位移 （δ） 以相对于四甲基硅烷的百万分率 (ppm) 记录并采用残留溶剂峰作为参考进行测 量。 信号以如下的级别列表 ： 峰裂数 (s， 单峰 ； d， 双峰 ； t， 三重峰 ； q， 四重峰 ； m， 多重峰 ； br， － 宽峰， 及其组合） ； 以赫兹为单位的偶合常数 ； 质子数。质谱 (MS) 数据在以负 (ES ） 或正 + (ES ) 电离方式操作的 Waters Micromass ZMD 上获得， 结果以质荷比 (m/z ) 报道。制备规 模的 RP-HPLC 分离在下列设备上进行 ： 1)Waters Delta Prep 4000 制备型色谱系统， 装有 Waters 2487 双重 λ 吸光检测器 ； 2) 自动化 (UV- 触发） RP-HPLC Shimadzu Discovery VP 系统， 装有 LC-8A 制备型液相色谱模块、 SPD-10A UV-VIS 检测器和 FRC-10A 级分收集器模 块。 在两种情况下所使用的固定相为 Atlantis Prep T3 5μm OBD(19×150mm) 或 XBridge PrepC18 5μmOBD(19x150mm)。除非另有说明， 流动相包括线性梯度的 MeCN( 含 0.1% TFA) 和水 ( 含 0.1% TFA) 的二元混合物、 或 MeCN 和 5mM 在水中的二甲基已基碳酸氢铵， 流速在 15-25mL/min 之间。
在微波照射下的反应在 Personal Chemistry， Sweden 的 Emrys Optimizer 反应器 中进行。下列缩写用于流程图和实施例中 ： AcOH ： 乙酸 ； aq. ： 含水的 ； bs ： 宽单峰 ； bt ： 宽三 重峰 ； DBU ： 1,8- 二氮杂双环 [5.4.0] 十一碳 -7- 烯 ； DIAD ： 二异丙基偶氮二羧酸酯 ； DIPEA ： 二异丙基乙基胺 ； DMF ： 二甲基甲酰胺 ； DMSO ： 二甲亚砜 ； eq. ： 当量 ； Et2O ： 二乙醚 ； EtOAc ： 乙酸乙酯 ； EtOH ： 乙醇 ； (HNBu3)2H2P2O7 ： 焦磷酸双 ( 三丁基铵 ) 盐 ； h： 小时 ； M： 摩尔 ； MeCN ： 乙腈 ； MeOH ： 甲醇 ； (MeO)3PO ： 磷酸三甲酯 ； min ： 分钟 ； NaBH3CN ： 氰基硼氢化钠 ； NBu3 ： 三丁 胺； NMP ： 1- 甲基 -2- 吡咯烷酮 ； Pd(PPh3)4 ： 四 ( 三苯基膦 ) 钯 (0) ； PE ： 石油醚 ； P(O)Cl3 ： 三氯氧化磷 ； RP-HPLC ： 反相高效液相色谱 ； RT ： 室温 ； SPE ： 固相提取物 ； TBDMS ： 叔丁基二 甲基硅烷基 ； TEA ： 三乙胺 ； TFA ： 三氟乙酸 ； THF ： 四氢呋喃 ； UPLC ： 超高效液相色谱 (ultra performance liquid chromatography)。
实施例 1（表 1， 实体 (entry)1) ： 7-(4- 叠氮基 -2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋 喃糖基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺
步骤1： 4- 氯 -7-(3,5- 二 -O - 苯 甲 酰 基 -2- 脱 氧 -2- 氟 -β-D- 阿 拉 伯 呋 喃 糖 基 )-7H- 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶将三 ( 二氧杂 -3,6- 庚基 ) 胺 (0.2eq) 加入搅拌过的 KOH(3.0eq) 在无水 AcCN(0.1M) 中的悬浮液中并将混合物在室温下搅拌 20min。然后加入一份 4- 氯 -7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 （1.0eq）并将所得混合物在室温下搅拌 1 h。将 0.2M 3,5- 二 -O 苯甲酰基 -2- 脱 氧 -2- 氟 -α-D- 阿拉伯呋喃糖基溴化物在无水 AcCN(1.0eq ； 按照 J. Org.Chem.1988, 53, 85 中的报道制备 ) 中的溶液滴加到上述溶液中。 将该反应混合物在室温下搅拌过夜然后用 AcOEt 稀释。将呈褐色的浆液用硅藻土的短垫过滤并用 AcOEt 洗涤。减压下浓缩有机相， 残 留物通过 SiO2 凝胶色谱 ( 梯度洗脱 10% 到 40% AcOEt / PE) 纯化得到标题化合物 （50%） ， 为白色泡沫。
步骤 2 ∶ 4- 氯 -7-(2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋喃糖基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ]嘧啶将由步骤 1 得到的 4- 氯 -7-(3,5- 二 -O - 苯甲酰基 -2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋喃 糖基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶溶于 7N 在 MeOH 中的 NH3 中， 并将所得溶液 (0.5M) 在室温下 搅拌过夜。在减压下除去挥发物并将标题化合物由 DCM/MeOH 中结晶得到白色粉末 (68% )。步骤 3 ： 7-(2,5- 双 脱 氧 -2- 氟 -β-D- 苏 - 戊 -4- 烯 呋 喃 糖 基 )-7H - 吡 咯 并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺
向 0.1M 由步骤 2 得到的 4- 氯 -7-(2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋喃糖基 )-7H - 吡咯 并 [2,3-d ] 嘧啶的吡啶溶液中加入碘 (1.5eq) 和 Ph3P(1.5eq)， 并将所得混合物在室温下 搅拌过夜。在减压下除去挥发物， 将残留物与甲苯一起共蒸发并通过快速色谱用 DCM/MeOH 洗脱纯化得到浅黄色泡沫状物 4- 氯 -7-(2,5- 双脱氧 -2- 氟 -5- 碘 -β-D- 阿拉伯呋喃糖 基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶。将后一化合物溶于无水 AcCN （0.1M） 中并加入 DBU(2.0eq)。 将该反应混合物在室温下搅拌过夜并在减压下除去挥发物。将残留物溶于 7N 在 MeOH 中 的 NH3 中， 并将所得溶液 (0.1M) 在压力密封管内于 110℃搅拌过夜。让反应混合物冷却至 室温， 在减压下除去挥发物， 并将标题化合物由 DCM/MeOH 中结晶得到白色粉末 （16%， 经三 步） 。
步 骤 4： 7-{3-O -[ 叔 丁 基 ( 二 甲 基 ) 甲 硅 烷 基 -2,5- 双 脱 氧 -2- 氟 -β-D- 苏 - 戊 -4- 烯呋喃糖基｝ -N -(2,2- 二甲基丙酰基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺向 0.2M 由步骤 4 得到的 7-(2,5- 双脱氧 -2- 氟 -β-D- 苏 - 戊 -4- 烯呋喃糖基 )-7H - 吡 咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺的无水吡啶溶液中加入咪唑 (8.0eq) 和 TBDMS-Cl(4.0eq)， 并将 所得混合物在室温下搅拌过夜。用 MeOH 终止反应并在减压下除去挥发物。将残留物溶于 DCM 中， 用柠檬酸 (1N 水溶液） 、 水和盐水洗涤。分离出有机相， 用 MgSO4 干燥并在减压下浓 缩。将残留物溶于无水 DMF(0.1N) 中， 加入 DIPEA(2.0eq)， 随后加入新戊酰氯 (1.9eq)， 并 将所得反应混合物在室温下搅拌过夜。然后在减压下除去挥发物， 并将残留物通过 SiO2 凝胶色谱用 2% MeOH/DCM 洗脱纯化得到白色 (off-white) 泡沫状标题化合物。MS(ES+) C22H33FN4O3Si 理论值 ： 448, 实测值 ： 449(M+H+)。Rt ＝ 1.7min (UPLC: 柱子 Acquity BEH C18 1.7mm 2.1*50mm ； 梯度 : 在 2 分钟内 10% 至 100% AcCN)。步骤 5 ： 7-(4- 叠 氮 基 -2- 脱 氧 -2- 氟 -β-D- 阿 拉 伯 呋 喃 糖 基 )-7H - 吡 咯 并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺将新制得的 DMDO 在丙酮 （0.07M, 3eq) 中的溶液在 –30℃下逐滴加入到 0.03M 由步骤 4 得到的 7-{3-O -[ 叔丁基 （二甲基 ) 甲硅烷基 -2,5- 双脱氧 -2- 氟 -β-D- 苏 - 戊 -4- 烯 呋喃糖基｝ -N -(2,2- 二甲基丙酰基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺的丙酮溶液中。将 混合物在相同的温度下搅拌 1h。然后在减压下除去挥发物， 将粗制的环氧化物溶于无水 DCM(0.03M) 中并冷却至 -78° C。加入 SnCl4(3eq) 和 TMS-N3(3eq)， 并将所得反应混合物 在 -78℃搅拌 1 小时， 然后搅拌 30min 至室温。在 0℃下滴加数滴 2N NH3 在 MeOH 2N 中的溶 液直到 pH ＝ 7 终止反应。将褐色浆液用硅藻土的短垫过滤并将滤液在减压下浓缩。将粗 制的 7-{4- 叠氮基 -3-O -[ 叔丁基 ( 二甲基 ) 甲硅烷基 ]-2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 苏 - 戊呋 喃糖基｝ -N -(2,2- 二甲基丙酰基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺的差向异构体混合物溶 于无水 THF 中， 并加入 1N 的 TBAF 在 THF(4eq) 中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌 2h， 在减压下除去挥发物， 将残留物溶于氨 / 甲醇 7N(0.1M) 中并在压力密封管内于 40℃搅拌 48 小时。然后在减压下除去挥发物并将粗制物与水一起共蒸发两次。在制备型 RP-HPLC 纯化之后分离出极性更强的差向异构体标题化合物 (9%， 经 4 步） （柱 ： Atlantis T3 OBD 190×150mm/5μM ； 流动相 ： H2O/MeCN /0.1%TFA ； 梯度 ： 2min 5% MeCN， 14min 5% 至 50%） 。实施例 2 （表 1， 实体 (entry) 2) ： 7-(4- 叠氮基 -2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋 喃糖基 )-5- 氟 -7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺
标题化合物可以根据流程图 1 和流程图 2 中描述的合成路线、 按照与实施例 1 类似的 方式获得。实施例 3 （表 1， 实体 (entry)3) ： 9-(4- 叠氮基 -2- 脱氧 -2- 氟 -b-D- 阿拉伯呋喃 糖基 )-9H- 嘌呤 -6- 胺标题化合物可以根据流程图 1 和流程图 2 中描述的合成路线、 按照与实施例 1 类似的 方式获得。
表1。还在如下所述的计数器筛选试验中对本发明的化合物的细胞毒性和抗病毒特异 性进行了评价。
已经通过其具体实施方式对本发明进行了描述和举例说明， 本领域的技术人员将 理解在不背离本发明的精神和范围的情况下可以在其中进行各种变化、 修改和替换。 例如， 除了上文中描述的优选剂量外有效剂量由于接受治疗的人对 HCV 感染的严重程度的反应 而变化可能是适当的。同样地， 所观察到的药理学反应可以根据和随所选择的特定活性化
合物或是否存在药物载体、 以及制剂的类型和所采用的施用方式而变化， 这些结果中预见 到的变化或差异根据本发明的目的和实践来考虑。 因此本发明仅仅由随后的权利要求的范 围限定而且这些权利要求尽可能合理地进行宽泛地解释。
生物学试验 用于测定对 HCV NS5B 聚合酶和 HCV 复制的抑制的试验如下所述。
本发明化合物作为 HCV NS5B RNA 依赖性 RNA 聚合酶 (RdRp) 抑制剂的有效性按以 下的试验测定。
A. 抑制 HCV NS5B 聚合酶的试验 ： 该试验用于在异数 （heteromeric） RNA 模板上测定本发明的核苷衍生物抑制丙型肝炎 病毒 (HCV) 的 RNA 依赖性 RNA 聚合酶 (NS5B) 的酶活性的能力。
程序 ： 试验缓冲条件 ： （52.5μL- 总数 / 反应） -20mM Tris, pH 7.5 -45mM KCl -2mM MgCl2 -0.01% Triton X-100 -lμg BSA, DNase Free -1mM DTT -2nM DC55-lb.BK 或 10nM DC55-2b.2 -20nM 非均质的模板 dCoh -UTP1uM -ATP1uM -CTP1uM -GTP1uM -3H-UTP 1,000,000 cpm -2.5μl/ 在 H2O 中的反应抑制剂化合物。
将化合物在最终浓度最高为 100μM 的各种浓度下进行试验。将核苷衍生物移液 到 96 孔板中。将在反应缓冲剂中稀释了的酶移液到孔中并在室温下孵育 10 分钟 ； 然后加 入模板 dCoh 并在室温下孵育 10 分钟。通过加入包含放射性标记的 UTP 的核苷三磷酸酯 (NTP' s) 的混合物引发反应， 并让其在室温下进行 2 小时。制备空白试样时省去 dCoh 模 板。通过加入 50ul TCA 20%( 三氯乙酸） /NaPPi 20mM 终止反应并将板置入冰中 5 分钟。然 用 TCA 2.5% 洗涤。加入 后， 将混合物过滤到 Unifilter GF/B 96- 孔板 (PerkinElmer) 上， 50ul/ 孔的闪烁剂溶液 (Microscint 20， PerkinElmer) 并在闪烁剂计数器中计数。
根据以下等式计算抑制百分比 ： % 抑制 = [1-( 测试反应中的 cpm －空白中的 cpm)/( 对照反应中的 cpm －空白中的 cpm)]x 100。
在 HCV NS5B 聚合酶试验中测试代表性的化合物。
活性范围 ： +++: <1μM ； ++: <50μM ； +: > 50μM 。B. 抑制 HCV RNA 复制的试验 ： 还评价了本发明的化合物影响包含次基因组 HCV 复制子的培养过的肝癌 (HuH-7) 中 丙型肝炎病毒 RNA 复制的能力。试验的细节描述如下。复制子试验是对 V. Lohmann, F. Korner, J-O. Koch, U. Herian, L. Theilmann, 和 R. Bartenschlager, "Replication of a Sub-genomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line," Science 285:110(1999) 中公开的试验进行的改进。
方案 ： 该 试 验 是 原 位 核 糖 核 酸 酶 保 护、 闪 烁 亲 近 测 定 法 (Scintillation Proximity based-plate assay) （SPA） 。将 10,000-40,000 个细胞铺在 100-200μL 在 96 孔 cytostar 板 （Amersham） 且包含 0.8mg/mL G418 的培养基中。在 0 至 18 h 的时间加入浓度最高为 100μM 的在 1% DMSO 中的各种浓度的化合物， 然后培养 24 ～ 96 h。将细胞固定 （20min、 10% 福尔马林） 、 透化 （20min、 0.25％、 Triton X-100 ／ PBS） ， 并与和包含在所述 RNA 病毒基 33 因组中的 (+) 链 NS5B（或其它的基因） 互补的单链 P RNA 探针杂交 （整夜、 50℃ )。将细胞 洗涤， 用 RNAse 处理， 洗涤， 加热至 65℃并在 Top-Count 中计数。复制的抑制以每分钟计数 (cpm) 的下降读取。
人 HuH-7 肝癌细胞被选择成包含次基因组复制子， 该肝癌细胞携带由 HCV 5' 非 翻译区 (NTR)、 新霉素可选择标记物、 EMCV IRES( 内部核糖体进入位点） 、 和 HCV 非结构蛋白 质 NS3 到 NS5B、 接着是 3' NTR 的组成的胞质 RNA。
代表性化合物在 HCV 复制试验中进行测试， 结果以 EC50 活性范围在下面的表 2 中 报道 ： 表2# 1 2 3 名称 7-(4- 叠氮基 -2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋喃糖基 )-7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺 7-(4- 叠氮基 -2- 脱氧 -2- 氟 -β-D- 阿拉伯呋喃糖基 )-5- 氟 -7H - 吡咯并 [2,3-d ] 嘧啶 -4- 胺 9-(4- 叠氮基 -2- 脱氧 -2- 氟 -b-D- 阿拉伯呋喃糖基 )-9H- 嘌呤 -6- 胺 EC50(μM) +++ + CC50(μM) >100 100 >100活性范围 ： +++: <20μM; +: 20 < EC50 <100μM; -: >100μM。
药物制剂实施例 作为本发明化合物的口服组合物的具体实施方式， 将 50mg 的实施例的任一化合物与 充分磨碎的乳糖进行配制以提供 580 至 590mg 的总量装入 O 号尺寸的硬明胶胶囊中。
已经通过其具体实施方式对本发明进行了描述和举例说明， 本领域的技术人员将 理解在不背离本发明的精神和范围的情况下可以在其中进行各种变化、 修改和替换。 例如， 除了上文中描述的优选剂量外有效剂量由于接受治疗的人对 HCV 感染的严重程度的响应 而变化可能是适当的。同样地， 所观察到的药理学反应可能根据和随所选择的特定活性化 合物或是否存在药物载体、 以及制剂的类型和所采用的给药方式而变化， 这些结果中预见 到的变化或差异根据本发明的目的和实践来考虑。 因此本发明仅仅由随后的权利要求的范 围限定而且这些权利要求尽可能合理地进行宽泛地解释。29