一种干细胞组合物和抗皱美白补水的面部年轻化美容制剂.pdf

本申请属于化妆品领域，具体涉及一种干细胞组合物和抗皱美白补水的面部年轻化美容制剂。本发明所提供的干细胞组合物包括：脐带间充质干细胞、烟酰胺、PRP和EGF，配伍合理，协同增效，使得本发明干细胞组合物同时具有抗皱美白补水的功能，且维持的时间更长。将上述干细胞组合物应用于制备一种具有抗皱美白补水功效的面部年轻化美容制剂，可消除面部皱纹，改善皮肤质地，提亮肤色，修复效果好，维持时间长。

1.一种干细胞组合物，其特征在于，包括：脐带间充质干细胞、烟酰胺、PRP和EGF。 2.根据权利要求1所述的干细胞组合物，其特征在于，所述脐带间充质干细胞的细胞密度为5×10～5×10个/mL。 3.根据权利要求1所述的干细胞组合物，其特征在于，所述烟酰胺的浓度为5～10mg/mL。 4.根据权利要求1所述的干细胞组合物，其特征在于，所述PRP的浓度为35vol％～60vol％。 5.根据权利要求1所述的干细胞组合物，其特征在于，所述EGF的浓度为10～50μg/mL。 6.一种抗皱美白补水的面部年轻化美容制剂，其特征在于，包含权利要求1至5任意一项所述的干细胞组合物和药剂学上可接受的辅料。 7.根据权利要求6所述的面部年轻化美容制剂，其特征在于，其剂型为注射制剂、水剂、凝胶剂或霜剂。

技术领域

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种干细胞组合物和抗皱美白补水的面部年轻化美容制剂。

背景技术

面部年轻化(Face rejuvenation)是指能够使老化的面部恢复年轻化外貌的各种手段和方法。面部衰老，是机体和面/颈部的软硬组织共同变化的结果，主要表现为：面部皮肤薄而干燥，皮肤弹性减弱，皮肤色素沉着，肤色暗淡不均匀，皱纹增多，皮下脂肪组织减少或局部堆积，支持结构松弛导致的下垂，肌肉萎缩。面部衰老与体质、遗传因素、生活环境、心理情绪、工作环境、营养状况、疾病和局部皮肤护理等因素有着密切的关联。一般人到了25岁之后便开始出现衰老征象，面部皮肤皱纹的形成是一个重要特征和指标。

目前，采用自体脂肪和PRP联合注射面部使面部恢复年轻化是一种使用较为广泛的美容手段。然而因自体脂肪的自身吸收，其修复效果有限，而且维持时间较短。

发明内容

为了解决现有美容技术中修复效果有限的这一技术问题，本发明提供了一种新型的干细胞组合物和抗皱美白补水的面部年轻化美容制剂，修复效果好，维持时间长。

本发明的具体技术方案如下：

本发明提供了一种干细胞组合物，包括：脐带间充质干细胞、烟酰胺、PRP和EGF。

优选的，所述脐带间充质干细胞的细胞密度为5×105～5×106个/mL。

优选的，所述烟酰胺的浓度为5～10mg/mL。

优选的，所述PRP的浓度为35vol％～60vol％。

优选的，所述EGF的浓度为10～50μg/mL。

本发明还提供了一种抗皱美白补水的面部年轻化美容制剂，包含上述干细胞组合物和药剂学上可接受的辅料。

优选的，所述面部年轻化美容制剂的剂型为注射制剂、水剂、凝胶剂或霜剂。

综上所述，本发明采用脐带间充质干细胞联合PRP使用，并同时添加烟酰胺和EGF获得了一种干细胞组合物，应用于皮肤抗皱并改善皮肤质地和肤色。脐带间充质干细胞在机体的调控下增殖并分泌大量的活性因子，改善肌肤，还能分化形成脂肪组织填充面部细纹；烟酰胺能保持皮肤能量平衡，同时能恢复细胞能量，加速胶原质合成，从而避免肌肤因油脂含量低、角质层变薄而导致的黑色素过度沉着，增强美白效果；PRP可提高皮肤内胶原蛋白和弹力纤维的含量，促进细胞黏连生长，加速伤口愈合，利于损伤皮肤或发炎皮肤的修复；EGF可迅速提高皮肤的含水量，维持肌肤的水润。上述各组分配伍合理，协同增效，使得本发明干细胞组合物同时具有抗皱美白补水的功能，且维持的时间更长。将上述干细胞组合物应用于制备一种具有抗皱美白补水功效的面部年轻化美容制剂，可消除面部皱纹，改善皮肤质地，提亮肤色，修复效果好，维持时间长。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。

图1为脐带间充质干细胞的细胞表型特征的鉴定结果，其中图1-1a、图1-2a、图1-3a和图1-4a为空白对照组的鉴定结果，图1-1b、图1-2b、图1-3b和图1-4b为空白对照组的鉴定结果。

具体实施方式

为了提供一种修复效果好，维持时间长的面部年轻化美容制剂，本发明提供了一种干细胞组合物和抗皱美白补水的面部年轻化美容制剂。

本发明对干细胞组合物中的烟酰胺和EGF的来源不作特殊限定，采用本领域技术人员所熟知的市售产品即可，或者采用本领域常规技术进行制备获得。以下实施例中的EGF为EGF冻干粉和溶媒混合溶解得到的EGF溶液，均购买于康杰生物工程有限公司；烟酰胺购自广州医药有限公司。

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1脐带间充质干细胞的分离培养

1、取健康足月剖腹产婴儿的脐带，于超净台中进行无菌清洗后剥离脐带羊膜和动静脉，取出沃顿胶；用手术剪进行剪碎，加入高糖DMEM+10％FBS完全培养基重悬，然后接种至15cm平皿中，转移至5％CO2、37℃的环境中培养。每培养5天补液一次，直至细胞爬出，弃去组织块，补充新的完全培养基继续培养，待细胞形成较大的克隆，进行传代培养。

2、取可传代的P0代细胞，弃掉皿内原培养液，加入10mLPBS缓冲液轻轻冲洗细胞生长面，弃去洗液。然后，加入2mL 0.25％胰蛋白酶，左右摇晃平皿使胰酶均匀覆盖于皿底；于显微镜下观察可见细胞间隙增大，胞质回缩，当观察到长梭形细胞变圆变亮时，立即加入10倍体积的完全培养基终止消化。接着，用移液枪反复吹打细胞，直至细胞全部脱落成单细胞悬液后将悬液转移至离心管中，室温下300rpm离心5min。接着，去掉上清液后加入DMEM+10％FBS完全培养基重悬细胞，按1×105个/mL的细胞密度接种，置于37℃、5％二氧化碳、饱和湿度的细胞培养箱中进行传代培养。最后，分别收集P2至P5代的脐带间充质干细胞，待用。

3、脐带间充质干细胞的细胞表型特征的鉴定

取P3代脐带间充质干细胞，采用生理盐水稀释得到密度为1×106个/mL的干细胞悬液，分别吸取抗CD105、CD73、CD34、CD45的单克隆抗体各5μL，加入细胞悬液500μL，室温下避光孵育20min，同时设立空白同型对照组；1500prm离心5min，弃上清，用含10％FBS的PBS洗涤2遍，再用500μL PBS重悬过筛后上机检测。图1为鉴定结果。

实施例2

取40mL健康胎儿脐带血，加入4mL枸橼酸钠抗凝剂，300g离心10min，然后用巴氏吸管吸取上层血浆，转移至50mL离心管中，继续1500g离心10min。吸弃离心后的部分血浆，使离心管底残留1mL血浆。最后，重悬血浆和底部的血小板，制成PRP。

取300uL PRP，等份分成3份，然后使用血细胞分析仪在1h内检测血小板数量，表1为检测结果，说明PRP中的血小板的含量在400以上，符合制备标准，可应用于面部年轻化制剂的制备。

表1

组别 血小板数量 1 443.14±25.39 2 452.56±30.27 3 439.82±26.48

实施例3

按照表2所述的配方分别配制A、B和C三种面部年轻化美容制剂，其具体制备过程如下：

1、烟酰胺母液的制备：称取烟酰碱粉末，加入生理盐水，溶解，得到浓度为500mg/mL的烟酰胺母液，用0.22μm滤膜过滤，置于4℃冰箱待用。

2、EGF溶液的制备：分别取出一瓶EGF冻干粉和一瓶溶媒，用一次性注射器吸取溶媒，打入EGF冻干粉瓶中，充分混匀，形成2.5mL的EGF溶液。

3、往EGF溶液中加入实施例2中制备的PRP，得到A液；用生理盐水重悬实施例1中制备的脐带间充质干细胞，得到脐带间充质干细胞混悬液，然后加入步骤1中制备的烟酰碱母液，得到B液；最后，将A液和B液混合，然后转移至注射器中，制得面部年轻化美容制剂A、B和C。

表2

脐带间充质干细胞(个/mL) 烟酰胺(g/mL) EGF(g/mL) PRP(vol％) 制剂A 5×105 5 50 20 制剂B 1×106 7.5 35 10 制剂C 5×106 10 60 30

实施例4面部抗皱效果评价

选取120例面部有明显皱纹的健康成年人(男女各半)，年龄段为40～60岁；随机分成4组，包括3组对照组和1组实验组，然后将如表3所示的制剂分别注射至面部皱纹较多处的真皮深层，4周以后评价抗皱效果。其评价指标为：按照面部皱纹修复程度进行美容效果评分，修复越好，评分越高；维持时间则为从出现美容效果至美容效果丧失的时间跨度。如表4结果所示，实施例1在皱纹修复效果和维持时间方面远高于对照组1至3，显示出其良好的美容效果。

表3

组别 组份 对照组1 生理盐水 对照组2 脐带间充质干细胞+生理盐水 对照组3 脐带间充质干细胞+PRP+生理盐水 实验组 制剂A

表4

对照组1 对照组2 对照组3 实验组 平均抗皱评分 10.23±0.72 68.06±2.49 76.77±3.78 85.39±3.65 平均维持时间(月) / 12.7±0.8 18.46±0.6 23.5±1.1

实施例5皮肤色度检测

采用Lab色度系统光谱光度计(美能达光谱光度计)测量皮肤颜色的变化。光源选用标准照明体(典型昼光)—D65，1931CIE—RGB系统标准观察者光谱三刺激值的X-0.3127.Y—0.3291，相关色温6504，以D65/100方式输出数据。

在注射前1天，检测皮肤的美白度。在注射制剂后的第1个月、第2个月和第3个月分别使用光谱光度计测量检测皮肤亮度值，取平均值，评价美白效果。如表5结果所示，实验组在皮肤美白效果和维持时间方面优于对照组1～3，显示出其良好的美容效果。

表5

对照组1 对照组2 对照组3 实施例1 注射前 65.42±3.89 64.05±4.16 63.68±3.57 64.58±4.25 第1个月 65.33±3.07 66.19±3.84 68.47±2.55 72.73±2.28 第2个月 64.10±2.78 68.24±3.17 69.26±3.38 73.73±3.13 第3个月 63.97±3.16 69.73±2.80 70.47±3.29 75.27±2.46

实施例6皮肤水分检测

使用皮肤水分含量测试仪Corneometer CM825(德国CK公司)测试皮肤的含水量MMV值。在注射的前1天检测皮肤的MMV值。然后在注射后的第1个月、第2个月和第3个月使用光谱光度计测量检测皮肤含水量，取平均值，评价保水效果。如表6结果所示，实验组在皮肤保水效果和维持时间方面优于对照组1～3，显示出其良好的美容效果。

表6

对照组1 对照组2 对照组3 实验组 注射前 20.56±1.76 21.68±2.25 20.73±2.09 21.80±2.14 第1个月 21.32±1.59 45.27±1.88 48.36±3.46 61.55±2.33 第2个月 19.98±1.44 48.13±2.06 47.70±2.27 62.03±2.28 第3个月 20.37±1.62 49.52±2.15 49.65±2.13 62.18±1.35