发明背景
本发明涉及使用吡咯并[2，3-b]嘧啶化合物治疗或预防慢性或急 性组织移植排斥的方法，所述吡咯并[2，3-b]嘧啶化合物是在治疗哺 乳动物尤其是人的上述适应症的蛋白激酶抑制剂，所述蛋白激酶诸如酶 Janus激酶3(此后也称JAK3)及其可用的药物组合物。
JAK3是蛋白激酶Janus家族的一个成员。虽然基本上全部组织都表达 此家族的其他成员，但是JAK3表达限于造血细胞(hematopoetic cell)。 这与其在经由IL-2、IL-4、IL-7、IL-9和IL-15的受体，通过JAK3与这 些多链受体的γ链非共价缔合信号传导(signaling)中的基本角色相一 致。XSCID患者人群已经被确认伴有JAK3蛋白水平的严重下降，或伴有共 有的γ链的基因缺陷，提示免疫抑制应该源于通过JAK3途径的信号传导 阻滞。动物研究已经提示JAK3不仅在B和T淋巴细胞成熟中扮演重要角 色，而且JAK3是维持T细胞功能的基本需要。通过此种新机制的免疫活 性的调节可证明可用于治疗T细胞增殖疾病例如移植排斥和自身免疫病。
发明概述
本发明涉及治疗或预防哺乳动物，包括人的慢性组织移植排斥(同 种异体移植物、异种移植物)的方法，包括给予所述哺乳动物在治疗这 些疾病中有效数量的下式化合物或其可药用盐；
其中
R1是下式的基团
其中，y是0、1或2。
R4选自由氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰基、(C2-C6)链烯 基、(C2-C6)炔基组成的组，其中所述烷基、链烯基和炔基任选被氘、 羟基、氨基、三氟甲基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C6)酰氧基、(C1-C6) 烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、氰基、硝基、(C2-C6)链烯基、 (C2-C6)炔基或(C1-C6)酰氨基所取代；或者R4是(C3-C10)环烷基， 其中所述环烷基基团任选被氘、羟基、氨基、三氟甲基、(C1-C6)酰氧 基、(C1-C6)酰氨基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、 氰基、氰基(C1-C6)烷基、三氟甲基(C1-C6)烷基、硝基、硝基(C1-C6) 烷基或(C1-C6)酰氨基所取代；
R5是(C2-C9)杂环烷基，其中所述杂环烷基基团必须被1-5个羧基、 氰基、氨基、氘、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代、(C1-C6) 酰基、(C1-C6)烷基氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH、 (C1-C6)烷基氨基-CO-、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C6)烷 基氨基、氨基(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)酰氧基(C1-C6)烷基、硝基、氰基(C1-C6)烷基、卤代 (C1-C6)烷基、硝基(C1-C6)烷基、三氟甲基、三氟甲基(C1-C6)烷基、 (C1-C6)酰氨基、(C1-C6)酰氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 酰氨基、氨基(C1-C6)酰基、氨基(C1-C6)酰基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氨基(C1-C6)酰基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)酰基、R15R16N-CO-O-、 R15R16N-CO-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-S(O)m、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m(C1-C6)烷基、R15S(O)mR16N、R15S(O)mR16N(C1-C6)烷基，其中m是0、1 或2，且R15和R16各自独立地选自氢或(C1-C6)烷基；或下式基团，
其中a是0、1、2、3或4；
b、c、e、f和g各自独立地是0或1；
d是0、1、2或3；
X是S(O)n，其中n是0、1或2；氧、羰基或-C(＝N-氰基)-；
Y是S(O)n，其中n是0、1或2；或羰基；和
Z是羰基、C(O)O-、C(O)NR-或S(O)n，其中n是0、1或2；
R6、R7、R8、R9、R10和R11各自独立地选自由氢或任选被氘、羟基、 氨基、三氟甲基、(C1-C6)酰氧基、(C1-C6)酰氨基、(C1-C6)烷基氨 基、((C1-C6)烷基)2氨基、氰基、氰基(C1-C6)烷基、三氟甲基(C1-C6) 烷基、硝基、硝基(C1-C6)烷基或(C1-C6)酰氨基所取代的(C1-C6)烷 基；
R11是羧基、氰基、氨基、氧代、氘、羟基、三氟甲基、(C1-C6)烷 基、三氟甲基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代、(C1-C6)酰基、 (C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基-CO-NH、(C1-C6)烷基氨基-CO-、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔 基、(C1-C6)烷基氨基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)酰氧基(C1-C6)烷基、硝基、氰基(C1-C6)烷基、卤代 (C1-C6)烷基、硝基(C1-C6)烷基、三氟甲基、三氟甲基(C1-C6)烷基、 (C1-C6)酰氨基、(C1-C6)酰氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 酰氨基、氨基(C1-C6)酰基、氨基(C1-C6)酰基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷基氨基(C1-C6)酰基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)酰基、R15R16N-CO-O-、 R15R16N-CO-(C1-C6)烷基、R15C(O)NH、R15OC(O)NH、R15NHC(O)NH、(C1-C6) 烷基-S(O)m、(C1-C6)烷基-S(O)m-(C1-C6)烷基、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m(C1-C6)烷基、R15S(O)mR16N、R15S(O)mR16N(C1-C6)烷基，其中m是0、1 或2，且R15和R16各自独立地选自氢或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立地选自氢、氘、氨基、卤代、羟基、硝基、羧基、 (C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔基、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C6)烷 基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C10)环烷基，其中所述烷基、烷氧基或环 烷基基团任选被1-3个选自卤代、羟基、羧基、氨基(C1-C6)烷基硫基、 (C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C5-C9)杂芳基、(C2-C9) 杂环烷基、(C3-C9)环烷基或(C6-C10)芳基的基团所取代；或者R2和 R3各自独立地是(C3-C10)环烷基、(C3-C10)环烷氧基、(C1-C6)烷基 氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C5-C10)芳基氨基、(C1-C6)烷基硫 基、(C6-C10)芳基硫基、(C1-C6)烷基亚磺酰基、(C6-C10)芳基亚磺 酰基、(C1-C6)烷基磺酰基、(C6-C10)芳基磺酰基、(C1-C6)酰基、 (C1-C6)烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨基-CO-、(C5-C9)杂芳基、 (C2-C9)杂环烷基或(C6-C10)芳基，其中所述杂芳基、杂环烷基和芳 基任选被1-3个卤代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-CO-NH-、(C1-C6) 烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基 -CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-(C1-C6)烷氧基、羧基、 羧基(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷氧基、苄氧基羰基(C1-C6)烷氧基、 (C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷氧基、(C6-C10)芳基、氨基、氨基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基羰基氨基、(C6-C10)芳基(C1-C6)烷氧基羰基 氨基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C1-C6)烷基氨 基(C1-C6)烷基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)烷基、羟基、(C1-C6) 烷氧基、羧基、羧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷 氧基羰基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基-CO-NH-、 氰基、(C5-C9)杂环烷基、氨基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨基-CO-NH-、 ((C1-C6)烷基)2氨基-CO-NH-、(C6-C10)芳基氨基-CO-NH-、(C5-C9) 杂芳基氨基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、((C1-C6) 烷基)2氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C6-C10)芳基氨基-CO-NH-(C1-C6) 烷基、(C5-C9)杂芳基氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰 基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基(C1-C6)烷基、 (C6-C10)芳基磺酰基、(C6-C10)芳基磺酰基氨基、(C6-C10)芳基磺酰 基氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基、(C1-C6)烷基磺酰基 氨基(C1-C6)烷基、(C5-C9)杂芳基或(C2-C9)杂环烷基所取代。
本发明还涉及所述式I化合物的可药用的酸加成盐。用于制备本发 明前述碱化合物的可药用酸加成盐的酸是那些形成无毒性酸加成盐的 酸，即，包括药理学可接受的阴离子的盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、氢 碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、 乳酸盐、柠檬酸盐、酸性柠檬酸盐(acidcitrate)、酒石酸盐、酒石 酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、糖二酸盐、苯甲 酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和pamoate[即， 1，1’-亚甲基-双-(2-羟基-3-萘甲酸盐)]。
本发明还涉及所述式I化合物的碱加成盐。可用作试剂以制备性质 为酸性的式I那些化合物的可药用碱盐的化学碱是那些与这些化合物形 成无毒性碱盐的碱。这些无毒性碱盐包括但不限于衍生自下述药理可接 受的阳离子的盐，所述阳离子诸如碱金属阳离子(例如，钾和钠)和碱 土金属阳离子(例如，钙和镁)、铵或水溶性胺加成盐诸如N-甲基葡糖 胺-(甲基葡胺)、和低级链烷醇铵和其他可药用有机胺的碱盐。
本文所用术语“烷基”，除非另外指出，包括具有直链和支链部分 或其结合的饱和单价烃基。
本文所用术语“烷氧基”，包括O-烷基，其中“烷基”如上定义。
本文所用术语“卤代”，除非另外指出，包括氟代、氯代、溴代或 碘代。
本发明的化合物可包括双键。当这些键存在时，本发明的化合物作 为顺式和反式或作为其混合物存在。
除非另外指出，本文所指的烷基和链烯基，以及本文所指其他基团 (例如，烷氧基)的烷基部分，可是直链或支链的，且它们还可以是环 状的(例如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基)或者是直链 或支链的并含环状部分。除非另外指出，卤素包括氟、氯、溴和碘。
当用于本文时，(C2-C9)杂环烷基指吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢 呋喃基、四氢吡喃基、吡喃基、噻喃基(thiopyranyl)、吖丙啶基、 环氧乙烷基(oxiranyl)、亚甲二氧基、色烯基(chromenyl)、异噁 唑烷基、1，3-噁唑烷-3-基、异噻唑烷基、1，3-噻唑烷-3-基、1，2-吡唑 烷-2-基、1，3-吡唑烷-1-基、哌啶基、硫代吗啉基(thiomorpholinyl)、 1，2-四氢噻嗪-2-基、1，3-四氢噻嗪-3-基、四氢噻二嗪基、吗啉基、1，2- 四氢二嗪-2-基、1，3-四氢二嗪-1-基、四氢氮杂_基 (tetrahydroazepinyl)、哌嗪基、苯并二氢吡喃基等。本领域普通技 术人员将理解的是所述(C2-C9)杂环烷基环的连接是通过碳原子或sp3杂交的氮杂原子。
当用于本文时，(C2-C9)杂芳基指呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑 基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、咪唑基、 1，3，5-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，3，5-噻二唑基、 1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、 1，2，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基、1，3，5-三嗪基、吡唑并[3，4-b]吡啶基、 噌啉基、蝶啶基、嘌呤基、6，7，-二氢-5H-[1]氮茚基、苯并[b]噻吩基、 5，6，7，8-四氢-喹啉-3-基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、 苯并异噁唑基、苯并咪唑基、硫茚基、异硫茚基、苯并呋喃基、异苯并 呋喃基、异吲哚基、吲哚基、中氮茚基、吲唑基、异喹啉基、喹啉基、 2，3-二氮杂萘基、喹喔啉基、喹唑啉基、苯并噁嗪基等。本领域普通技 术人员将理解的是所述(C2-C9)杂环烷基环的连接是通过碳原子或sp3杂交的氮杂原子。
当用于本文时，(C6-C10)芳基指苯基或萘基。
式(I)化合物可以以药物可接受的形式单独给药或与其他一种或 多种调节哺乳动物的免疫系统的附加成分或抗炎物质联合给药。这些物 质包括但不限于环孢霉素A(例如，Sandimmune_或Neoral_、雷帕霉 素、FK-506(他克莫司)、来氟米特、脱氧司加林、霉酚酸酯(例如骁 悉_)、硫唑嘌呤(例如依木兰_)、达利珠单抗(例如赛尼哌_、OKT3 (例如Orthoclone_)、抗胸腺细胞丙种球蛋白(AtGam)、阿司匹林、 对乙酰氨基酚、布洛芬、萘普生、吡罗昔康、和抗炎性类固醇(例如泼 尼松或地塞米松)。根据标准的药物试验，这些物质可作为相同或分离 的剂型的部分，经相同或不同的给药途径，根据相同或不同的给药方案 给药)。
本发明的化合物包括所有构象的异构体(例如，顺式或反式异构体)。 本发明的化合物具有不对称中心，并因此存在不同的对映异构和非对映异 构形式。此发明涉及本发明的化合物的所有光学异构体和立体异构体及其 混合物的用途，并涉及可能应用或包含它们的所有药物组合物和治疗方 法。在这方面，本发明包括E和Z两种构型。式I化合物还可作为互变异 构体存在。此发明涉及所有这些互变异构体及其混合物的用途。
此发明还涵盖包含所述式I化合物前药的药物组合物。此发明还涵 盖治疗或预防疾病的方法，所述疾病能通过包括给予所述式I化合物的 前药抑制蛋白激酶，诸如酶Janus激酶3被治疗或预防。具有游离氨基、 酰氨基、羟基或羧基的式I化合物可转化为前药。前药包括其中氨基酸 残基，或两个或多个(例如2、3或4个)氨基酸残基的多肽链通过肽 键共价结合于式I化合物的游离氨基、羟基或羧酸基团的化合物。所述 氨基酸残基包括通常由3个字母符号标示的20个天然存在的氨基酸， 且还包括4-羟脯氨酸、羟赖氨酸、demosine、isodemosine、3-甲基组 氨酸、norvlin、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、高半胱氨酸、高 丝氨酸、鸟氨酸和蛋氨酸砜(methioine sulfone)。前药还包括其中 碳酸酯、氨基甲酸酯、酰氨和烷基酯通过所述羰基碳前药侧链共价结合 于式I的上述取代基的化合物。
本发明的优选方法包括其中a是0；b是1；X是羰基；c是0；d 是0；e是0；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是羰基；c是0； d是1；e是0；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是羰基；c是1； d是0；e是0；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是-C(＝N＝氰基)-； c是1；d是0；e是0；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是0；c是0；d是0； e是0；f是0；g是1；和Z是-C(O)-O-的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是S(O)n；n是2； c是0；d是0；e是0；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是S(O)n；n是2； c是0；d是2；e是0；f是1；g是1；和Z是羰基的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是S(O)n；n是2； c是0；d是2；e是0；f是1；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是羰基；c是1； d是0；e是1；Y是S(O)n；n是2；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是S(O)n；n是2； c是1；d是0；e是0；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是1；b是1；X是羰基；c是1； d是0；e是0；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是S(O)n；c是0； d是1；e是1；Y是S(O)n；n是2；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是S(O)n；c是0； d是1；e是1；Y是S(O)n；n是2；f是1；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是氧；c是0；d 是1；e是1；Y是S(O)n；n是2；f是1；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是氧；c是0；d 是1；e是1；Y是S(O)n；n是2；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是羰基；c是1； d是1；e是1；Y是S(O)n；f是0；和g是0的式I的化合物。
本发明的其他优选方法包括其中a是0；b是1；X是羰基；c是1； d是1；e是1；Y是S(O)n；n是2；f是1；和g是0的式I的化合物。
本发明其他的优选方法包括其中R12是氰基、三氟甲基、(C1-C6) 烷基、三氟甲基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基) 2氨基、(C2-C6)炔基、氰基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-S(O)m其中 m是0、1或2的式I的化合物。
本发明特别优选的方法包括其中所述化合物选自下面化合物组成 的组的式I的化合物：
甲基-[4-甲基-1-(丙烷-1-磺酰基)-哌啶-3-基]-(7H-吡咯并 [2，3-d]嘧啶-4-基)-胺；
4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1- 羧酸甲酯；
3，3，3-三氟-1-(4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基) -氨基]-哌啶-1-基)-丙-1-酮；
4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1- 羧酸二甲酰胺；
({4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶 -1-羰基}-氨基)-乙酸乙酯；
3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶 -1-基}-3-氧代-丙腈；
3，3，3-三氟-1-(4-甲基-3-[甲基-(5-甲基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧 啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基)-丙-1-酮；
1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶 -1-基}-丁-3-炔-1-酮；
1{3-[(5-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-甲基-氨基]-4-甲基- 哌啶-1-基}-丙-1-酮；
1{3-[(5-氟-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-甲基-氨基]-4-甲基- 哌啶-1-基}-丙-1-酮；
N-氰基-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨 基]-N’-丙基-哌啶-1-carboxamidine；
N-氰基-4，N’，N’-三甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4- 基)-氨基]-哌啶-1-carboxamidine；
甲基-[(3R，4R)-4-甲基-1-(丙烷-1-磺酰基)-哌啶-3-基]-(7H- 吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-胺；
(3R，4R)-)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)- 氨基]-哌啶-1-羧酸甲酯；
3，3，3-三氟-1-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d] 嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-丙-1酮；
(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-氨 基]-哌啶-1-羧酸二甲酰胺；
(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-1-羰基}氨 基)-乙酸乙酯；
3-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基) -氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈；
3，3，3-三氟-1-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(5-甲基-7H-吡咯并 [2，3-d]嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-基}-丙-1-酮；
1-{(3R，4R)-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基) -氨基]-哌啶-1-基}-丁-3-炔-1-酮；
1-{(3R，4R)-3-[(5-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-甲基- 氨基]-4-甲基-哌啶-1-基}-丙-1-酮；
1-{(3R，4R)-3-[(5-氟-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-基)-甲基- 氨基]-4-甲基-哌啶-1-基}-丙-1-酮；
(3R，4R)-N-氰基-4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4- 基)-氨基]-N’-丙基-哌啶-1-carboxamidine；
(3R，4R)-N-氰基-4，N’，N’-三甲基-3-[甲基-(7 H-吡咯并[2，3-d] 嘧啶-4-基)-氨基]-哌啶-1-carboxamidine。
本发明涉及治疗或预防哺乳动物，包括人的急性组织移植排斥(同 种异体移植物、异种移植物)的方法，包括给予所述哺乳动物在治疗这 些疾病中有效数量的下式化合物或其可药用盐；
其中
R1是下式的基团
其中，y是0、1或2。
R4选自由氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰基、(C2-C6)链烯 基、(C2-C6)炔基组成的组，其中所述烷基、链烯基和炔基任选被氘、 羟基、氨基、三氟甲基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C6)酰氧基、(C1-C6) 烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、氰基、硝基、(C2-C6)链烯基、 (C2-C6)炔基或(C1-C6)酰氨基所取代；或者R4是(C3-C10)环烷基， 其中所述环烷基基团任选被氘、羟基、氨基、三氟甲基、(C1-C6)酰氧 基、(C1-C6)酰氨基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、 氰基、氰基(C1-C6)烷基、三氟甲基(C1-C6)烷基、硝基、硝基(C1-C6) 烷基或(C1-C6)酰氨基所取代；
R5是(C2-C9)杂环烷基，其中所述杂环烷基基团必须被1-5个羧基、 氰基、氨基、氘、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代、(C1-C6) 酰基、(C1-C6)烷基氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH、 (C1-C6)烷基氨基-CO-、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C6)烷 基氨基、氨基(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)酰氧基(C1-C6)烷基、硝基、氰基(C1-C6)烷基、卤代 (C1-C6)烷基、硝基(C1-C6)烷基、三氟甲基、三氟甲基(C1-C6)烷基、 (C1-C6)酰氨基、(C1-C6)酰氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 酰氨基、氨基(C1-C6)酰基、氨基(C1-C6)酰基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氨基(C1-C6)酰基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)酰基、R15R16N-CO-O-、 R15R16N-CO-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-S(O)m、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m(C1-C6)烷基、R15S(O)mR16N、R15S(O)mR16N(C1-C6)烷基，其中m是0、1 或2，且R15和R16各自独立地选自氢或(C1-C6)烷基；或下式基团，
其中a是0、1、2、3或4；
b、c、e、f和g各自独立地是0或1；
d是0、1、2或3；
X是S(O)n，其中n是0、1或2；氧、羰基或-C(＝N-氰基)-；
Y是S(O)n，其中n是0、1或2；或羰基；和
Z是羰基、C(O)O-、C(O)NR-或S(O)n，其中n是0、1或2；
R6、R7、R8、R9、R10和R11各自独立地选自由氢或任选被氘、羟基、 氨基、三氟甲基、(C1-C6)酰氧基、(C1-C6)酰氨基、(C1-C6)烷基氨 基、((C1-C6)烷基)2氨基、氰基、氰基(C1-C6)烷基、三氟甲基(C1-C6) 烷基、硝基、硝基(C1-C6)烷基或(C1-C6)酰氨基所取代的(C1-C6)烷 基；
R11是羧基、氰基、氨基、氧代、氘、羟基、三氟甲基、(C1-C6)烷 基、三氟甲基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代、(C1-C6)酰基、 (C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基-CO-NH、(C1-C6)烷基氨基-CO-、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔 基、(C1-C6)烷基氨基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)酰氧基(C1-C6)烷基、硝基、氰基(C1-C6)烷基、卤代 (C1-C6)烷基、硝基(C1-C6)烷基、三氟甲基、三氟甲基(C1-C6)烷基、 (C1-C6)酰氨基、(C1-C6)酰氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 酰氨基、氨基(C1-C6)酰基、氨基(C1-C6)酰基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷基氨基(C1-C6)酰基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)酰基、R15R16N-CO-O-、 R15R16N-CO-(C1-C6)烷基、R15C(O)NH、R15O C(O)NH、R15NH C(O)NH、(C1-C6) 烷基-S(O)m、(C1-C6)烷基-S(O)m-(C1-C6)烷基、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m(C1-C6)烷基、R15S(O)mR15N、R15S(O)mR16N(C1-C6)烷基，其中m是0、1 或2，且R15和R16各自独立地选自氢或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立地选自氢、氘、氨基、卤代、羟基、硝基、羧基、(C2-C6) 链烯基、(C2-C6)炔基、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基、(C3-C10)环烷基，其中所述烷基、烷氧基或环烷基基团任选被 1-3个选自卤代、羟基、羧基、氨基(C1-C6)烷基硫基、(C1-C6)烷基氨 基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C5-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基、(C3-C9) 环烷基或(C6-C10)芳基的基团所取代；或者R2和R3各自独立地是(C3-C10) 环烷基、(C3-C10)环烷氧基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨 基、(C5-C10)芳基氨基、(C1-C6)烷基硫基、(C6-C10)芳基硫基、(C1-C6) 烷基亚磺酰基、(C6-C10)芳基亚磺酰基、(C1-C6)烷基磺酰基、(C6-C10) 芳基磺酰基、(C1-C6)酰基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨 基-CO-、(C5-C9)杂芳基、(C2-C9)杂环烷基或(C6-C10)芳基，其中所 述杂芳基、杂环烷基和芳基任选被1-3个卤代、(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷基-CO-NH-、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基-CO-NH-(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH- (C1-C6)烷氧基、羧基、羧基(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷氧基、苄氧 基羰基(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷氧基、(C6-C10) 芳基、氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基氨基、(C6-C10) 芳基(C1-C6)烷氧基羰基氨基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6) 烷基、羟基、(C1-C6)烷氧基、羧基、羧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧 基羰基、(C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-、 (C1-C6)烷基-CO-NH-、氰基、(C5-C9)杂环烷基、氨基-CO-NH-、(C1-C6) 烷基氨基-CO-NH-、((C1-C6)烷基)2氨基-CO-NH-、(C6-C10)芳基氨基 -CO-NH-、(C5-C9)杂芳基氨基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨基-CO-NH-(C1-C6) 烷基、((C1-C6)烷基)2氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C6-C10)芳基氨 基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C5-C9)杂芳基氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷基磺酰基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基(C1-C6) 烷基、(C6-C10)芳基磺酰基、(C6-C10)芳基磺酰基氨基、(C6-C10)芳基 磺酰基氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基、(C1-C6)烷基磺酰 基氨基(C1-C6)烷基、(C5-C9)杂芳基或(C2-C9)杂环烷基所取代。
本发明还涉及用于治疗或预防哺乳动物，包括人的慢性组织移植排 斥的药物组合物，包括在治疗这些疾病或状态中有效数量的下式化合物 或其可药用盐和可药用载体；
其中
R1是下式的基团
其中，y是0、1或2。
R4选自由氢、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰基、(C2-C6)链烯 基、(C2-C6)炔基组成的组，其中所述烷基、链烯基和炔基任选被氘、 羟基、氨基、三氟甲基、(C1-C4)烷氧基、(C1-C6)酰氧基、(C1-C6) 烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、氰基、硝基、(C2-C6)链烯基、 (C2-C6)炔基或(C1-C6)酰氨基所取代；或者R4是(C3-C10)环烷基， 其中所述环烷基基团任选被氘、羟基、氨基、三氟甲基、(C1-C6)酰氧 基、(C1-C6)酰氨基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、 氰基、氰基(C1-C6)烷基、三氟甲基(C1-C6)烷基、硝基、硝基(C1-C6) 烷基或(C1-C6)酰氨基所取代；
R5是(C2-C9)杂环烷基，其中所述杂环烷基基团必须被1-5个羧基、 氰基、氨基、氘、羟基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代、(C1-C6) 酰基、(C1-C6)烷基氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH、 (C1-C6)烷基氨基-CO-、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔基、(C1-C6)烷 基氨基、氨基(C1-C6)烷基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)酰氧基(C1-C6)烷基、硝基、氰基(C1-C6)烷基、卤代 (C1-C6)烷基、硝基(C1-C6)烷基、三氟甲基、三氟甲基(C1-C6)烷基、 (C1-C6)酰氨基、(C1-C6)酰氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 酰氨基、氨基(C1-C6)酰基、氨基(C1-C6)酰基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氨基(C1-C6)酰基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)酰基、R15R16N-CO-O-、 R15R16N-CO-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-S(O)m、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m(C1-C6)烷基、R15S(O)mR16N、R15S(O)mR16N(C1-C6)烷基，其中m是0、1 或2，且R15和R16各自独立地选自氢或(C1-C6)烷基；或下式基团，
其中a是0、1、2、3或4；
b、c、e、f和g各自独立地是0或1；
d是0、1、2或3；
X是S(O)n，其中n是0、1或2；氧、羰基或-C(＝N-氰基)-；
Y是S(O)n，其中n是0、1或2；或羰基；和
Z是羰基、C(O)O-、C(O)NR-或S(O)n，其中n是0、1或2；
R6、R7、R8、R9、R10和11各自独立地选自由氢或任选被氘、羟基、 氨基、三氟甲基、(C1-C6)酰氧基、(C1-C6)酰氨基、(C1-C6)烷基氨 基、((C1-C6)烷基)2氨基、氰基、氰基(C1-C6)烷基、三氟甲基(C1-C6) 烷基、硝基、硝基(C1-C6)烷基或(C1-C6)酰氨基所取代的(C1-C6)烷 基；
R11是羧基、氰基、氨基、氧代、氘、羟基、三氟甲基、(C1-C6)烷 基、三氟甲基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、卤代、(C1-C6)酰基、 (C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷氧基-CO-NH、(C1-C6)烷基氨基-CO-、(C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔 基、(C1-C6)烷基氨基、羟基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)酰氧基(C1-C6)烷基、硝基、氰基(C1-C6)烷基、卤代 (C1-C6)烷基、硝基(C1-C6)烷基、三氟甲基、三氟甲基(C1-C6)烷基、 (C1-C6)酰氨基、(C1-C6)酰氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6) 酰氨基、氨基(C1-C6)酰基、氨基(C1-C6)酰基(C1-C6)烷基、(C1-C6) 烷基氨基(C1-C6)酰基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)酰基、R15R16N-CO-O-、 R15R16N-CO-(C1-C6)烷基、R15C(O)NH、R15O C(O)NH、R15NHC(O)NH、(C1-C6) 烷基-S(O)m、(C1-C6)烷基-S(O)m-(C1-C6)烷基、R15R16NS(O)m、R15R16NS(O)m(C1-C6)烷基、R15S(O)mR16N、R15S(O)mR16N(C1-C6)烷基，其中m是0、1 或2，且R15和R16各自独立地选自氢或(C1-C6)烷基；
R2和R3各自独立地选自氢、氘、氨基、卤代、羟基、硝基、羧基、 (C2-C6)链烯基、(C2-C6)炔基、三氟甲基、三氟甲氧基、(C1-C6)烷 基、(C1-C6)烷氧基、(C3-C10)环烷基，其中所述烷基、烷氧基或环 烷基基团任选被1-3个选自卤代、羟基、羧基、氨基(C1-C6)烷基硫基、 (C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C5-C9)杂芳基、(C2-C9) 杂环烷基、(C3-C9)环烷基或(C6-C10)芳基的基团所取代；或者R2和 R3各自独立地是(C3-C10)环烷基、(C3-C10)环烷氧基、(C1-C6)烷基 氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C5-C10)芳基氨基、(C1-C6)烷基硫 基、(C6-C10)芳基硫基、(C1-C6)烷基亚磺酰基、(C6-C10)芳基亚磺 酰基、(C1-C6)烷基磺酰基、(C6-C10)芳基磺酰基、(C1-C6)酰基、 (C1-C6)烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨基-CO-、(C5-C9)杂芳基、 (C2-C9)杂环烷基或(C6-C10)芳基，其中所述杂芳基、杂环烷基和芳 基任选被1-3个卤代、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-CO-NH-、(C1-C6) 烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基 -CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-(C1-C6)烷氧基、羧基、 羧基(C1-C6)烷基、羧基(C1-C6)烷氧基、苄氧基羰基(C1-C6)烷氧基、 (C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷氧基、(C6-C10)芳基、氨基、氨基(C1-C6) 烷基、(C1-C6)烷氧基羰基氨基、(C6-C10)芳基(C1-C6)烷氧基羰基 氨基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2氨基、(C1-C6)烷基氨 基(C1-C6)烷基、((C1-C6)烷基)2氨基(C1-C6)烷基、羟基、(C1-C6) 烷氧基、羧基、羧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷 氧基羰基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基-CO-NH-、(C1-C6)烷基-CO-NH-、 氰基、(C5-C9)杂环烷基、氨基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨基-CO-NH-、 ((C1-C6)烷基)2氨基-CO-NH-、(C6-C10)芳基氨基-CO-NH-、(C5-C9) 杂芳基氨基-CO-NH-、(C1-C6)烷基氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、((C1-C6) 烷基)2氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C6-C10)芳基氨基-CO-NH-(C1-C6) 烷基、(C5-C9)杂芳基氨基-CO-NH-(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰 基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基(C1-C6)烷基、 (C6-C10)芳基磺酰基、(C6-C10)芳基磺酰基氨基、(C6-C10)芳基磺酰 基氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基磺酰基氨基、(C1-C6)烷基磺酰基 氨基(C1-C6)烷基、(C5-C9)杂芳基或(C2-C9)杂环烷基所取代。
本发明的详细描述
下述反应流程图说明本发明的化合物的制备。除非另外指出，反应 流程图中的R2、R3、R4、和R5以及其后的讨论如上所定义。
制备A
制备B
流程图1
流程图2
流程图3
在制备A的反应1中，通过使XXI与N-氯琥珀酰亚胺、N-溴琥珀酰 亚胺或N-碘琥珀酰亚胺反应，将式XXI的4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶化合 物(其中R是氢或诸如苯磺酰基或苄基的保护基团)转化为式XX的4- 氯-5-卤代吡咯并[2，3-d]嘧啶化合物(其中Y是氯代、溴代或碘代)。 在氯仿中将该反应混合物加热回流约1小时到约3小时的时间，优选约 1小时。作为选择，在制备A的反应1中，通过在约-10℃到约10℃之 间，优选约0℃的温度使XXI与硝酸在硫酸中反应约5分钟到约15分钟 之间，优选约10分钟的时间，将式XXI的4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶(其 中R是氢)转化为式XX相应的4-氯-5-硝基吡咯并[2，3-d]嘧啶(其 中Y是硝基)。通过使XXI在各种本领域技术人员已知的条件下，诸如 钯氢解作用或锡(IV)氯化物和盐酸，将式XXI的化合物(其中Y是硝 基)转化为式XX相应的4-氯-5-氨基吡咯并[2，3-d]嘧啶(其中Y是 氨基)。
在制备A的反应2中，通过在约-78℃的温度用N-丁基锂处理XX， 并使如此形成的二价阴离子中间体与烷基卤或苄基卤在约-78℃到室温 之间的温度，优选室温反应，将式XX的4-氯-5-卤代吡咯并[2，3-d] 嘧啶化合物(其中R是氢)转化为相应的式XIX的化合物(其中R2是 (C1-C6)烷基或苄基)。作为选择，将如此形成的二价阴离子与分子氧 反应，形成相应的式XIX的4-氯-5-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶化合物， 其中R2是羟基。通过在约-78℃的温度用N-丁基锂处理XX，之后在约 -78℃的温度加入氯化锌，将式XX的化合物(Y是溴或碘，且R是苯磺 酸酯)转化为式XIX的化合物(其中R2是(C6-C12)芳基或乙烯基)。 然后将如此形成的相应的有机锌中间体与芳基碘或乙烯基碘在催化量 钯存在下反应。将反应混合物在约50℃到约80℃之间，优选约70℃的 温度，搅拌约1小时到约3小时，优选约1小时的时间。
在制备A的反应3中，在极性非质子溶剂诸如四氢呋喃的存在下， 在约-78℃的温度通过用N-丁基锂处理XIX，将式XIX的化合物转化为 相应的式XVI的化合物。将如此形成的阴离子中间体进一步(a)当R3是烷基或苄基时，在约-78℃到室温之间的温度，优选-78℃，与烷基卤 或苄基卤反应；(b)当R3是烷氧基时，在约-78℃到室温之间的温度， 优选-78℃，与醛或酮反应；(c)在约-78℃到室温之间的温度，优选 -78℃，与氯化锌反应，然后将如此形成的相应的有机锌中间体与芳基 碘或乙烯基碘在催化量钯存在下反应。将反应混合物在约50℃到约80 ℃之间，优选约70℃的温度，搅拌约1小时到约3小时，优选约1小时 的时间。作为选择，将如此形成的二价阴离子与分子氧反应，形成相应 的式XVI的4-氯-6-羟基吡咯并[2，3-d]嘧啶化合物，其中R3是羟基。
在制备B的反应1中，根据在上述制备A的反应3中的工艺，将式 XXI的4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶化合物转化为相应的式XXII的化合物。
在制备B的反应2中，根据在上述制备A的反应1和2中的工艺， 将式XXII的化合物转化为相应的式XVI的化合物。
在流程图1的反应1中，在碱诸如氢化钠或碳酸钾和极性非质子溶 剂诸如二甲基甲酰胺或四氢呋喃存在下，通过用苯磺酰氯、苄基氯或苄 基溴处理XVII，将式XVII的4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶化合物转化为相应 的式XVI的化合物，其中R是苯磺酰基或苄基。在约0℃到约70℃，优 选30℃将该反应混合物搅拌约1小时到约3小时之间，优选约2小时的 时间。
在流程图1的反应2中，通过用式HNR4R5的胺偶联XVI，将式XVI 的4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶化合物转化为相应的式XV的4-氨基吡咯并 [2，3-d]嘧啶化合物。该反应在约60℃到约120℃之间，优选80℃的温 度，在醇溶剂诸如叔丁醇、甲醇或乙醇，或其他高沸点有机溶剂，诸如 二甲基甲酰胺、三乙胺、1，4-二噁烷或1，2-二氯乙烷中进行。典型的反 应时间是约2小时到约48小时之间，优选约16小时。当R5是含氮杂环 烷基基团时，每个氮必须被保护基团诸如苄基保护。R5保护基团的去除 是在适于特定保护基团应用的条件下进行的，不会影响在该吡咯并 [2，3-d]嘧啶环上的R保护基团。当是苄基时，R5保护基团的去除是在 醇溶剂诸如乙醇中，在氢和催化剂诸如碳上的氢氧化钯的存在下进行 的。如此形成的R5含氮杂环烷基基团可进一步与式II的各种不同的亲 电子试剂反应。关于脲形成，将式II的亲电子试剂诸如异氰酸盐、氨 基甲酸酯和氨基甲酰氯与所述杂烷基的R5氮在溶剂诸如乙腈或二甲基 甲酰胺中，在碱诸如碳酸钠或碳酸钾存在下，在约20℃到约100℃之间 的温度，反应约24小时到约72小时之间的时间。关于酰胺和磺酰胺形 成，在溶剂诸如二氯甲烷在碱诸如吡啶存在下，在室温将式II的亲电 子试剂诸如酰基氯和磺酰基氯与所述杂烷基的R5氮反应约12小时到约 24小时的时间。酰胺形成还可通过使羧酸与所述杂烷基在碳二亚胺诸如 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺存在下在溶剂诸如二氯甲烷中 在室温反应12-24小时进行。关于烷基形成，在溶剂诸如甲醇于室温将 式II的亲电子试剂诸如α，β-不饱和酰胺、酸、腈、酯和α-卤代酰胺 与所述杂烷基的R5氮反应约12小时到约18小时的时间。烷基形成还可 通过使醛与所述杂烷基在还原剂诸如氰基硼氢化钠存在下，在溶剂诸如 甲醇中于室温反应约12小时到约18小时的时间。
在流程图1的反应3中，从式XV的化合物(其中R是苯磺酰基) 去除所述保护基团以得到相应的式I化合物是通过在醇溶剂诸如甲醇或 乙醇或混合溶剂诸如醇/四氢呋喃或醇/水中，用碱金属碱诸如氢氧化钠 和氢氧化钾处理XV进行的。该反应在室温进行约15分钟到约1小时 之间，优选30分钟的时间。从式XV的化合物(其中R是苄基)去除 所述保护基团是通过在约-78℃的温度用在氨中钠处理XV约15分钟到 约1小时之间的时间进行的。
在流程图2的反应1中，根据在上述流程图1的反应2中的工艺将 式XX的4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶化合物转化为式XXIV的4-氨基吡咯 并[2，3-d]嘧啶化合物。
在流程图2的反应2中，通过使XXIV(a)当R2是芳基时，在非 质子溶剂诸如四氢呋喃或二噁烷中，在催化量钯(O)存在下在约50℃ 到约100℃之间，优选70℃的温度，与芳基硼酸反应约2小时到约48 小时之间，优选约12小时的时间；(b)当R2是炔基时，在催化量碘化 铜(I)和钯(O)以及极性溶剂诸如二甲基甲酰氨存在下，在室温与炔 反应约1小时到约5小时之间，优选约3小时的时间；和(c)当R2是 乙烯基或苯乙烯基时，在二甲基甲酰氨、二噁烷或四氢呋喃中，在约80 ℃到约100℃之间，优选100℃的温度，在催化量钯存在下与烯或苯乙 烯反应约2小时到约48小时之间，优选约48小时的时间。
在流程图2的反应3中，根据在上述制备A的反应3中的工艺将式 XXIII的化合物转化为式XV的相应化合物。
在流程图3的反应1中，根据在上述流程图1的反应2中的工艺将 式XVII的化合物转化为式I的相应化合物。
性质为碱性的本发明化合物能够与各种无机或有机酸形成广泛种 类的不同的盐。虽然这些盐对于向动物给药必须是可药用的，但是在实 践中通常需要将本发明化合物最初作为不可药用的盐从所述反应混合 物中分离，然后通过用碱性试剂处理将后者简单转化回所述游离碱化合 物，随后将后者游离碱转化为可药用酸加成盐。本发明碱化合物的酸加 成盐通过用基本等量的所选择的无机酸或有机酸，在水性溶剂介质中或 在合适的有机溶剂诸如甲醇或乙醇中处理所述碱性化合物易于制备。依 靠小心蒸发所述溶剂，易于得到所需固体盐。还可通过向该溶液加入合 适的无机酸或有机酸，将所需酸盐从在有机溶剂中的游离碱溶液沉淀。
性质是酸性的本发明的那些化合物能够与各种可药用阳离子形成 碱盐。这些盐的实例包括碱金属或碱土金属盐且尤其是钠和钾盐。这些 盐都通过常规技术制备。用作试剂以制备本发明可药用碱盐的化学碱是 与本发明酸性化合物形成无毒性碱盐的那些。此类无毒性盐包括衍生自 这些可药用阳离子如钠、钾、钙和镁等的那些。通过用包含所需可药用 阳离子的水性溶液处理相应的酸性化合物，然后优选在减压下将所得溶 液蒸发至干，能容易地制备这些盐。作为选择，它们还可通过将所述酸 性化合物的低级烷醇溶液和所需碱金属醇盐一起混合，然后以如上相同 方式蒸发至干来制备。在每个例子中，为了确保反应完全和所需终产物 的最大产率，优选使用试剂的化学计量的数量。
使用一种或多种可药用载体，本发明的组合物可按常规方式制备。 因此，本发明的活性化合物可制备用于口服、颊膜、鼻内、胃肠外(例 如，静脉内、肌内或皮下)或直肠给药，或者以适合于通过吸入或吹入 给药的形式。本发明的活性化合物还可制备用于持续传递。
关于口服给药，所述药物组合物可采用例如通过常规方法用可药用 赋形剂诸如粘合剂(例如预明胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基 甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸钙)；润滑剂(例 如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟基乙酸 钠)；或湿润剂(例如十二烷基硫酸钠)制备的片剂或胶囊的形式。片 剂可通过本领域熟知的方法包衣。用于口服给药的液体制剂可采用例如 溶液、糖浆或悬浮液的形式，或者它们可以表现为在使用前用水或其他 合适载体构建的干燥产物。此类液体制剂可通过常规方法用可药用添加 剂诸如悬浮剂(例如山梨醇糖浆、甲基纤维素或氢化食用脂肪)；乳化 剂(例如卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水性载体(例如杏仁油、油性酯或 乙醇)；和防腐剂(例如对-羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)制备。
对于颊膜给药，该组合物可采用以常规方式制备的片剂或锭剂的形 式。
本发明的活性化合物可制备用于通过注射胃肠外给药，包括使用常 规导管插入技术或输注。用于注射的制剂可呈现与加入的防腐剂一起的 单位剂量形式，例如在安瓿或多次剂量容器中。该组合物可采用如悬浮 液、溶液或在油性或水性载体中的乳化剂的形式，且可包括诸如悬浮剂、 稳定剂和/或分散剂的制剂。作为选择，该活性成分可以是用于在使用 前与合适的载体，例如灭菌的无热原水重构的粉末形式。
本发明的活性化合物还可配制于直肠组合物诸如栓剂或保留灌肠 剂中，所述组合物例如包含常规栓剂基质诸如可可油或其他甘油酯。
关于鼻内给药或通过吸入给药，本发明的活性化合物以溶液或悬浮 液的形式由患者挤或泵压从泵喷雾容器常规传递，或使用合适的推进物 例如二氯氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的 气体，作为气雾剂喷雾形式从增压过的容器或喷雾器常规传递。对于增 压过的气雾剂，用阀传递计量量可决定剂量单位。所述增压过的容器或 喷雾器可包括所述活性化合物的溶液或悬浮液。用在吸入器或吹入器中 的囊和药筒(例如由明胶生产)可制备包含本发明化合物的粉末混合物 和合适的粉末基质例如乳糖或淀粉。
用于治疗上述病症(例如类风湿性关节炎)的用于口服、胃肠外或 颊膜向一般成年人给药的本发明活性化合物的建议剂量是每单位剂量 0.1到1000mg的活性成分，所述单位剂量可给予例如每天1到4次。
用于在一般成年人中治疗上述病症(例如哮喘)的气雾剂制剂优选 这样安排，以致气雾剂的每个计量剂量或“喷”含20μg到1000μg的 本发明的化合物。使用气雾剂的全天剂量将在0.1mg到1000mg的范围 内。每天可给药数次，例如2、3、4或8次，每次给予例如1、2或3 剂量。
式(I)化合物以药物可接受的形式单独给药或与其他一种或多种 调节哺乳动物的免疫系统的附加成分或与抗炎物质联合给药，抗炎物质 包括但不限于环孢霉素A(例如，Sandimmune_或Neoral_、雷帕霉素、 FK-506(他克莫司)、来氟米特、脱氧司加林、霉酚酸酯(例如骁悉_)、 硫唑嘌呤(例如依木兰_)、达利珠单抗(例如赛尼哌_、OKT3(例如 Orthoclone_)、抗胸腺细胞丙种球蛋白(AtGam)、阿司匹林、对乙酰 氨基酚、布洛芬、萘普生、吡罗昔康、和抗炎性类固醇(例如泼尼松或 地塞米松)；根据标准的药物实践，这些物质可作为同样或分离的剂型 的部分，经相同或不同的给药途径，根据相同或不同的给药方案给药。
在手术后的第一个48小时内每12小时以0.10-0.15mg/kg体重口 服给予FK-506(他克莫司)。通过血清他克莫司波谷水平监测剂量。
在手术后的第一个48小时内每12小时以5mg/kg体重口服给予环 孢霉素A(例如，Sandimmune口服或静脉内制剂，或Neoral_，口服溶 液或胶囊)。通过血环孢霉素A波谷水平监测剂量。
根据本领域普通技术人员熟知的方法，该活性物质可制备用于持续 传递。这些制剂的实例可见于美国专利3,538,214、4,060,598、 4,173,626、3,119,742和3,492,397。
式I的化合物或其可药用盐抑制Janus激酶3并因此证明它们有 效治疗以Janus激酶3为特征的疾病或病症的能力通过下列体外分析 实验显示。
生物分析
JAK 3(JH1：GST)酶分析
JAK3激酶分析使用在杆状病毒感染的SF9细胞表达的通过在谷胱 甘肽-Sepaharose上亲合色谱纯化的蛋白(GST和人JAK3的催化区的融 合蛋白)。反应底物是聚-谷氨酸-酪氨酸(PGT(4∶1)，Sigma catalog #P0275)，以100μg/ml涂敷于Nunc Maxi Sorp平板上在37℃过夜。 在涂敷之后的上午，将该平板洗涤3次，将JAK3加入到含100μl激酶 缓冲液(50mM HEPES，Ph 7.3，125mM NaCl，24mM MgCl2)+0.2μ M ATP+1mM原钒酸钠)的孔。反应在室温进行30分钟，将所述平板另 外洗涤3次。在指定孔中的磷酸化酪氨酸水平通过标准ELISA分析使用 抗磷酸酪氨酸抗体(ICN PY20，cat.#69-151-1)定量。
人IL-2依赖的T-细胞胚细胞增殖的抑制
这项筛选测量化合物对IL-2依赖的T-细胞胚细胞增殖的体外抑制 效果。由于通过IL-2受体的信号传导需要JAK3，JAK3的细胞活性抑制 剂应该抑制IL-2依赖的T-细胞胚细胞增殖。
用于此项分析的细胞从新鲜人血分离。用Accuspin System- Histopaque-1077(Sigma#A7054)分离单核细胞后，用Lympho-Kwik T(One Lambda，Inc.，Cat#LK-50T)通过阴性选择分离主要的人T- 细胞。将T-细胞在培养基(RPMI+10％热灭活的胎牛血清(Hyclone Cat #A1111-L)+1％青霉素/链霉素(Gibco))中以1-2×106/ml培养，并 通过加入10μg/ml PHA(Murex Diagnostics，Cat#HA 16)诱导增 殖。在37℃5％CO2下3天后，在培养基中将细胞洗涤3次，在培养基 加100单位/ml的人重组IL-2(R & D Systems，Cat#202-IL)中重 悬至1-2×106细胞/ml的密度。1周后，所述细胞为IL-2依赖的，且通 过每周2次给予等体积培养基+100单位/ml的IL-2能维持直至3周。
为分析测试化合物抑制IL-2依赖的T-细胞增殖的能力，将IL-2 依赖的细胞洗涤3次，重悬于培养基中，然后加入到平底96-孔微量滴 定平板(Falcon#353075)中(50,000个细胞/孔/0.1ml)。从在DMSO 中的测试化合物的10mM储存液，以10μm开始将化合物的系列2倍稀 释溶液加入到3复孔中。1小时后，每个测试孔加入10单位/ml的IL-2。 然后将平板在37℃、5％CO2下孵育72小时。然后将平板与3H-胸(腺嘧 啶脱氧核)苷(0.5uCi/孔)(NEN Cat#NET-027A)脉冲(pulsed)， 并孵育另外18小时。然后将培养板用96-孔板收获器收获，通过在 Packard Top Count闪烁计数器上计数测定3H-胸(腺嘧啶脱氧核)苷结 合到增殖细胞中的数量。通过将增殖的％抑制与测试化合物的浓度作 图，分析数据。从此图测定IC50值(uM)。
下面的实施例说明了本发明化合物的制备，但是不限于其细节。熔 点是未校正的。NMR数据报告为百万分之几(δ)，且与样品溶剂(含 氘氯仿，除非另外说明)的氘锁峰信号有关。使用商用试剂，无需进一 步纯化。THF指四氢呋喃。DMF指N，N-二甲基甲酰胺。或者用化学电离 (铵)在Hewlett Packard 5989_上，或者在使用乙腈/水的50/50混 合物，以0.1％甲酸为电离剂的Fisons(或Micro Mass)气压化学电 离(APCI)平台上记录低分辨率质谱(LRMS)。室内或环境温度指20-25 ℃。
实施例1
1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-乙酮(ethanone)
方法A
(1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-胺
向通过Iorio，M.A.和Damia，G.，Tetrahedron， 26，5519(1970) 和Grieco等人，Journal of the American Chemical Society， 107， 1768(1985)，(修改为用5％甲醇做助溶剂)，两文献全文引入作为参 考，制备的溶解于23ml的2M四氢呋喃中的甲基胺中的1-苄基-4-甲 基-哌啶-3-酮(2.3g，11.5mmol)的搅拌溶液加入1.4ml(23mmol)乙 酸，将所得混合物在密封管中于室温搅拌16小时。加入三乙酰氧基硼 氢化钠(4.9g，23mmol)，将新混合物在密封管中于室温搅拌24小时， 此时，通过加入1N氢氧化钠(50ml)淬灭反应。然后将该反应混合物 用乙醚萃取3×80ml，在硫酸钠(Na2SO4)上将合并的乙醚层干燥，并真 空浓缩至干，得到1.7g(69％)标题化合物，为白色固体。LRMS：219.1 (M+1)。
方法B
(1-苄基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
将溶解在2当量三乙胺中的通过Davoll，J.Am.Chem.Soc.，82， 131(1960)，其全文引入作为参考，制备的4-氯吡咯并[2，3-d]嘧啶 (2.4g，15.9mmol)和方法A的产物(1.7g，7.95mmol)的溶液在密封 管中于100℃加热3天。冷却到室温后，在减压下浓缩，将该残余物通 过闪式色谱(二氧化硅；在二氯甲烷中的3％甲醇)纯化，得到1.3g(50 ％)标题化合物，为无色油。LRMS：336.1(M+1)。
方法C
甲基-(4-甲基-哌啶-3-基)-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
向溶解在15ml乙醇中的方法B的产物(0.7g，2.19mmol)加入1.5ml 的2N盐酸，将该反应混合物通过氮净化脱气。然后向该反应混合物加 入0.5g的20％在碳上的氢氧化钯(50％水)(Aldrich)，将所得混 合物在室温在50psi氢气氛下振荡(Parr-Shaker)2天。将Celite过 滤的反应混合物在真空浓缩至干，该残余物通过闪式色谱(二氧化硅； 在二氯甲烷中的3％甲醇)纯化，得到0.48g(90％)标题化合物。LRMS： 246.1。
方法D
1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-乙酮
向溶解在5ml的10∶1二氯甲烷/吡啶中的方法C的产物(0.03g， 0.114mmol)的搅拌溶液加入乙酰氯(0.018g，0.228mmol)，将所得 混合物在室温搅拌18小时。然后将该反应混合物在二氯甲烷和饱和碳 酸氢钠(NaHCO3)之间分配。用饱和NaHCO3将有机层再次洗涤，硫酸钠 上干燥，真空浓缩至干。将该残余物通过制备薄层色谱(PTLC)(二氧 化硅；在二氯甲烷中的4％甲醇)纯化，得到0.005mg(15％)标题化 合物，为无色油。LRMS：288.1(M+1)。
实施例2-26的标题化合物通过类似于实施例1中所述的方法制备。
实施例2
[1-(2-氨基-乙磺酰基)-4-甲基-哌啶-3-基]-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
[1-(2-氨基-乙磺酰基)-4-甲基-哌啶-3-基]-甲基-胺。LRMS：353。
实施例3
(1-乙磺酰基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
(1-乙磺酰基-4-甲基-哌啶-3-基)-甲基-胺。LRMS：338。
实施例4
[1-(丁烷-1-磺酰基)-4-甲基-哌啶-3-基]-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
[1-(丁烷-1-磺酰基)-4-甲基-哌啶-3-基]-甲基-胺。LRMS：366。
实施例5
4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-羧酸异丁酯
4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-羧酸异丁酯。LRMS：346。
实施例6
N-(2-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-磺酰基}-乙基)-丙酰胺
N-[2-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-磺酰基)-乙基]-丙酰胺。LRMS： 409。
实施例7
(2-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-磺酰基}-乙基)-氨基甲酸甲酯
[2-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-磺酰基)-乙基]-氨基甲酸甲酯。 LRMS：411。
实施例8
N-(2-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-磺酰基}-乙基)-异丁酰胺
N-[2-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-磺酰基)-乙基]-异丁酰胺。 LRMS：423。
实施例9
(1-甲磺酰基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺(1-甲磺酰基-哌啶-3-基)-甲基-胺。LRMS：310。
实施例10
(1-乙磺酰基-哌啶-3-基)-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺(1-乙磺酰基-哌啶-3-基)-甲基-胺。LRMS：324。
实施例11
甲基-[1-(丙烷-1-磺酰基)-哌啶-3-基]-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
(1-丙基磺酰基-哌啶-3-基)-甲基-胺。LRMS：338。
实施例12
[1-(丁烷-1-磺酰基)-哌啶-3-基]-甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
(1-丁基磺酰基-哌啶-3-基)-甲基-胺。LRMS：352。
实施例13
2，2-二甲基-N-(2-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-磺酰基}-乙基)-丙酰胺
2，2-二甲基-N-[2-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-磺酰基)-乙基]- 丙酰胺。LRMS：437。
实施例14
3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙腈
3-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-3-氧代-丙腈。LRMS：313。
实施例15
(3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁酯
[3-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔 丁酯。LRMS：417。
实施例16
甲基-[4-甲基-1-(丙烷-1-磺酰基)-哌啶-3-基]-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
甲基-[4-甲基-1-(丙烷-1-磺酰基)-哌啶-3-基]-胺。LRMS：352。
实施例17
3-氨基-1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-丙-1-酮
3-氨基-1-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-丙-1-酮。LRMS：317。
实施例18
2-甲氧基-1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-乙酮
2-甲氧基-1-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-乙酮。LRMS：318。
实施例19
2-二甲基氨基-1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-乙酮
2-二甲基氨基-1-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-乙酮。LRMS： 331。
实施例20
(3-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-3-氧代-丙基)-氨基甲酸叔丁酯
[3-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-3-氧代-丙基]-氨基甲酸叔 丁酯。LRMS：417。
实施例21
3，3，3-三氟-1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-丙-1-酮
3，3，3-三氟-1-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-丙-1-酮。LRMS： 317。
实施例22
N-(2-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-2-氧代-乙基)-乙酰胺
N-[2-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-2-氧代-乙基]-乙酰胺。 LRMS：345。
实施例23
3-乙氧基-1-{4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-基}-丙-1-酮
3-乙氧基-1-(4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-基)-丙-1-酮。LRMS： 346。
实施例24
4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-羧酸甲酰胺
4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-羧酸甲酰胺。LRMS：303。
实施例25
4-甲基-3-[甲基-(7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4基)-氨基]-哌啶-1-羧酸二乙酰胺
4-甲基-3-甲基氨基-哌啶-1-羧酸二乙酰胺。LRMS：345。
实施例26
甲基-[4-甲基-1-(2-甲基氨基-乙磺酰基)-哌啶-3-基]-(7H-吡咯
并[2，3-d]嘧啶-4基)-胺
甲基-[4-甲基-1-(2-甲基氨基-乙磺酰基)-哌啶-3-基]-胺。LRMS： 367。