雪莲果植物提取物的提取方法、提取物及应用.pdf

摘要
申请专利号：	CN201410124593.2	申请日：	20140328
公开号：	CN104940049B	公开日：	20180102
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	A61K8/9789,A61Q19/00,A61Q19/02,A61Q19/08	主分类号：	A61K8/9789,A61Q19/00,A61Q19/02,A61Q19/08
申请人：	浙江大学
发明人：	文岳中
地址：	310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号
优先权：	CN201410124593A
专利代理机构：	杭州天勤知识产权代理有限公司	代理人：	胡红娟
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内容摘要

本发明公开了一种雪莲果植物提取物的提取方法，包括：向预处理后的雪莲果的叶或者块根中，加入乙醇或者乙醇水溶液作为提取剂，超声，过滤，滤液浓缩；将浓缩液经过大孔树脂柱层析进行分离，柱层析采用梯度洗脱，先用去离子水进行洗脱，然后依次分别用质量百分比浓度逐渐增加的乙醇水溶液进行梯度洗脱，后处理得到提取物。本发明还公开了由上述方法得到的雪莲果植物提取物以及该提取物的应用方法。本发明采用雪莲果的叶或者块根为原料，经过简单的提取工艺，即可得到不同活性的具有美白作用和抗老化作用的提取成分，可以根据实际需要进行分类收集，以及进一步制备成所需的产品，实用性强，具有广阔的市场前景。

权利要求书

1.一种雪莲果植物提取物的提取方法，包括：(1)向预处理后的雪莲果的叶或者块根中，加入乙醇或者乙醇水溶液作为提取剂，超声，过滤，滤液浓缩；(2)将步骤(1)得到的浓缩液经过大孔树脂进行柱层析进一步分离提纯，并采用梯度洗脱，先用去离子水进行洗脱，然后依次分别用质量百分比浓度逐渐增加的乙醇水溶液进行梯度洗脱，后处理得到提取物；所述的大孔树脂为AB-8大孔吸附树脂；所述梯度洗脱的洗脱剂依次为质量百分比浓度为20-40％的乙醇水溶液、质量百分比浓度为60-80％的乙醇水溶液、质量百分比浓度为90-100％的乙醇水溶液。 2.一种雪莲果植物提取物，其特征在于，所述雪莲果植物提取物由权利要求1所述的方法提取得到。 3.一种雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述雪莲果植物提取物由权利要求1所述的方法制备得到。 4.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述的皮肤外用剂为化妆品。 5.根据权利要求4所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述的皮肤外用剂为精华液化妆品，在精华液中雪莲果提取物占的重量百分比为1-10％。 6.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的叶为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为20-100％的乙醇水溶液的洗脱产品；当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的块根为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为20-80％的乙醇水溶液的洗脱产品。 7.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，采用雪莲果的块根为原料；梯度洗脱时收集质量百分比浓度为60-80％的乙醇水溶液的洗脱产品。 8.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，采用雪莲果的块根或叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70-95％的乙醇水溶液的洗脱产品。

说明书

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体是涉及一种雪莲果植物提取物的提取方法、提取物及作为美白活性物、抗老化活性物以及包含这些美白活性物、抗老化活性物的应用。

背景技术

人的肤色的决定因素中，人体产生黑色素的黑素细胞的活性占据了最重要的位置。研究表明，人体黑素细胞通过各种酶(例如，酪氨酸酶)的活动而产生黑色素，黑色素的形成过程还受到遗传因素、激素分泌、与应激有关的生理因素以及环境因素(例如，紫外线照射)的影响。黑色素具有阻断太阳紫外线，保护真皮下面的皮肤器官，清除皮肤组织中产生的游离自由基，保护皮肤中的蛋白质和基因的作用。但是，由于黑色素是一种稳定的物质，当应激消失后也不容易被除去，直至随着角质细胞的老化脱落才能从皮肤中除去。因此，如果由于环境因素产生了大量不必要的黑色素就会出现有损美容的色素过度沉着，例如：变黑、雀斑和斑点。随着喜欢户外活动的人群增多，防止由UV辐射引起的黑色素过度沉着的需求也在增加。为了满足这一需求，已经在化妆品等皮肤外用剂中使用了诸如抗坏血酸、曲酸、熊果苷等具有酪氨酸酶抑制活性的物质。但是，由于美白效果不理想以及其它问题(例如，将上述美白活性物加入到化妆品中所引起的皮肤刺激问题、配方稳定性问题等)，使得这些成分的使用受到了限制。来源于植物提取物的酪氨酸酶抑制剂作为潜在的美白活性物，同时又具有安全性和对皮肤低刺激性的预期，目前已有各种开发的报道(专利文献CN201310411195：白蔹提取物美白功效的检测方法；CN201310382406.6：白木香果皮提取物在制备美白化妆品中的应用)。

皮肤老化的原因可以分为光老化和内因引起的老化，UV暴露引起的光老化会引起皮肤弹性蛋白酶的活性增加。弹性蛋白酶(Elastase)分布于多种组织和细胞中，弹性蛋白酶活性增加可导致皮肤弹性纤维的水解，从而加速真皮内胶原蛋白和弹性蛋白的分解，使皮肤失去弹性，出现皱纹等皮肤老化现象。目前已知有植物来源的抗老化活性物具有弹性蛋白酶抑制作用，如蓼蓝(专利文献CN200680023570.6：皮肤外用剂)、香豌豆(专利文献CN200680009020.9：含有香豌豆提取物的化妆料)等。

雪莲果(Smallanthus sonchifolius(Poepp.&Endl.)H.Robinson)属菊科向日葵属植物，原产南美安第斯山区，在21世纪初由日本引入我国云南等地大量栽培。雪莲果原名亚贡(yacon)，又叫雅贡、菊薯、雪莲薯，是南美印第安人的传统食品，具有缓解糖尿病等多种功效的南美药食两用植物。

雪莲果块根含有大量的低聚果糖，有“低聚果糖之王”的称谓。雪莲果块根中还含有多种酚酸、萜类和黄酮类化合物。目前已有报道雪莲果叶提取物具有抗氧化、清除自由基的功效。

发明内容

本发明提供了一种雪莲果植物提取物的提取方法，该提取方法操作简单，适于工业化生产，且由该方法提取得到的提取物具有良好的护肤和美白效果。

本发明还提供了一种由上述方法提取得到的雪莲果植物提取物，该提取物具有良好的护肤和美白效果。

本发明还提供了一种上述雪莲果植物提取物的应用方法，可用作美白和抗老化皮肤外用剂的活性成分。

一种雪莲果植物提取物的提取方法，包括：

(1)向预处理后的雪莲果的叶或者块根中，加入乙醇或者乙醇水溶液作为提取剂，超声，过滤，滤液浓缩；

(2)将步骤(1)得到的浓缩液经过大孔树脂进行进一步分离提纯，优选为采用大孔树脂柱层析并采用梯度洗脱，先用去离子水进行洗脱，然后依次分别用质量百分比浓度逐渐增加的乙醇水溶液进行梯度洗脱，后处理得到提取物。

步骤(1)中，为提高提取效果，所述的预处理主要包括清洗、粉碎等步骤。作为优选，提取剂采用乙醇水溶液，所述乙醇水溶液的质量百分比浓度为50-90％，进一步优选为60-80％，更进一步优选为70％。以保证尽可能多的活性成分被提取出来。

步骤(1)中，一次加入的提取剂的量一般为雪莲果的叶或者块根体积的5-15倍。超声处理时间可根据实际需要确定，一般为0.5-2小时，更进一步为1-2小时。提取次数一般也可根据实际需要确定，作为优选，提取两次到三次，每次提取都进行超声处理。提取温度可选择室温下进行，也可适当升温。

步骤(2)中，大孔树脂柱层析过程中，作为优选，所述的大孔树脂为AB-8大孔吸附树脂。首先用去离子水对AB-8大孔吸附树脂进行洗脱，主要去除一些水溶性杂质。步骤(2)中，作为优选，所述梯度洗脱的洗脱剂依次为质量百分比浓度为20-40％的乙醇水溶液、质量百分比浓度为60-80％的乙醇水溶液、质量百分比浓度为90-100％的乙醇水溶液，同时分别收集乙醇洗脱液，浓缩后分别制备得到三种提取物。作为进一步优选，所述的洗脱剂依次分别为质量百分比浓度为30％的乙醇水溶液、质量百分比浓度为70％的乙醇水溶液、质量百分比浓度为95％的乙醇水溶液。采用浓度阶梯变化的洗脱剂，可以保证提取液中各种有效成分被分离，且分离出来的活性成分活性各不相同，实际应用时，根据活性不同，对三种成分的量进行调整和选择，以满足不同场合的需求。

本发明还提供了一种由上述方法提取得到的雪莲果植物提取物。该雪莲果植物提取物可根据实际需要使用于不同的场合。

本发明还提供了几种上述雪莲果植物提取物作为皮肤外用剂的应用方法。

一种雪莲果植物提取物在制备具有抗氧化、自由基清除作用的皮肤外用剂的应用，其中所述雪莲果植物提取物由上述各种方法制备得到。

当应用上述场合时，作为优选，当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的叶为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为20-100％的乙醇水溶液的洗脱产品。当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的块根为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为20-80％的乙醇水溶液的洗脱产品。作为更进一步优选，所述雪莲果植物提取物采用雪莲果的叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70-95％的乙醇水溶液的洗脱产品。

一种雪莲果植物提取物在制备具有抗老化作用的皮肤外用剂的应用，其中所述雪莲果植物提取物由上述各种方法制备得到。

当应用上述场合时，作为优选，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为60-80％的乙醇水溶液的洗脱产品。作为进一步优选，采用雪莲果的块根为原料。作为更进一步优选，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70％的乙醇水溶液的洗脱产品；同时采用雪莲果的块根为原料。

一种雪莲果植物提取物在制备具有美白作用的皮肤外用剂的应用，其中所述雪莲果植物提取物由上述各种方法制备得到。

当应用上述场合时，作为优选，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为60-100％的乙醇水溶液的洗脱产品。作为进一步优选，采用雪莲果的叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70-95％的乙醇水溶液的洗脱产品。更进一步优选为，采用雪莲果的块根或叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70％的乙醇水溶液的洗脱产品。

作为对上述几种方案的优选，所述的皮肤外用剂为化妆品，特别是精华液化妆品，在精华液中雪莲果提取物占的重量百分比为1-10％，进一步优选为1-7％。

本发明中使用的是菊科向日葵属植物，优选为雪莲果(Smallanthus sonchifolius(Poepp.&Endl.)H.Robinson)。

与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

本发明采用雪莲果的叶或者块根为原料，经过简单的提取工艺，即可得到不同活性的具有美白作用和抗老化作用的提取成分，可以根据实际需要进行分类收集，以及进一步制备成所需的产品，实用性强，具有广阔的市场前景。

具体实施方式

实施例1：雪莲果提取物的制备

在本实施例中均使用云南产的雪莲果叶或者块根，但不限于此。另外，实施例中提到的百分含量，在没有特殊说明的情况下，均代表质量百分比浓度。

(1)在100g雪莲果的叶中加入70％乙醇1000mL，在室温超声1小时，提取2次，然后过滤。将滤液的溶剂减压浓缩至50ml，上AB-8树脂柱，依次用去离子水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脱(各500ml)，分别收集后减压蒸馏除去溶剂，得到干燥固体，称重，得到雪莲果叶的30％乙醇部位2.95g，70％乙醇部位9.89g，95％乙醇部位2.45g。

(2)在100g雪莲果的块根中加入70％乙醇1000mL，在室温超声1小时，提取2次，然后过滤。将滤液的溶剂减压浓缩至50ml，上AB-8树脂柱，依次用去离子水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脱(各500ml)，分别收集后减压蒸馏除去溶剂，得到干燥固体，称重，得到雪莲果块根的30％乙醇部位3.0g，70％乙醇部位3.6g，95％乙醇部位1.0g。

实施例2：抗氧化活性的检测

按照实施例1制备雪莲果提取物，用DPPH法测定其清除自由基活性。测定步骤为：将雪莲果提取物分别用去离子水配制成水溶液(质量体积浓度为0.05mg/mL)，移取2mL于10mL具塞试管中，加人2mL DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)乙醇溶液(摩尔体积浓度为2*10-4mol/L)，充分混匀，室温静置，30min后用分光光度计测定517nm波长的吸光度T；同时测定2mL DPPH溶液与2mL乙醇混合后的吸光度C，2mL去离子水与2L乙醇混合后的吸光度C0，以及2mL提取液与2mL乙醇溶液混合后的吸光度T0。平行测定三次，取平均值，根据以下公式计算自由基清除率。

自由基清除率＝[1-(T-T0)/(C-C0)]×100％。

表1DPPH法自由基清除活性的测定结果

由表1可知，在本发明中使用的雪莲果提取物中，任一溶剂提取物均具有优异的自由基清除作用，作为抗老化剂是有用的。特别是采用雪莲果叶作为提取材料时，洗脱剂采用70％-95％的乙醇水溶液时，其自由基清除率最好。因此，可以将雪莲果提取物配合在外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态的抗老化活性物使用。

实施例3：弹性蛋白酶抑制的检测

分别按照实施例1制备的雪莲果提取物，溶于去离子水，配制成水溶液(质量体积浓度为0.5mg/ml)，用于测定弹性蛋白酶抑制活性。测定步骤为：在96孔板中加入10μL样品溶液和130μL含有1.015mM反应底物N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-丙酰氨-对硝基苯胺(英文名Succ-Ala-Ala-Ala-pNA，CAS号：52299-14-6)的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(pH8.0)，在25℃下温育5分钟，加入15μL弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25℃下温育30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度A410。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度，结果见表2。

弹性蛋白酶活性抑制率计算公式为：抑制率(％)＝(1-(A410-C0)/A0)×100％，其中A0是参比溶液的吸光度，A410是样品溶液的吸光度，C0是样品溶液本底的吸光度。

表2弹性蛋白酶抑制的测定结果

由表2可知，在本发明中使用的雪莲果提取物中，雪莲果块根70％乙醇部位和雪莲果叶70％乙醇部位，均具有抑制弹性蛋白酶作用，可以将雪莲果块根和雪莲果叶提取物配合在外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状的抗老化剂使用。

实施例4：酪氨酸酶活性抑制的检测

分别按照实施例1制备的雪莲果提取物，溶于去离子水，配制成水溶液(质量体积浓度为0.5mg/ml)，用于测定酪氨酸酶抑制活性，以熊果苷为参照物。测定步骤为：磷酸盐缓冲溶液(pH6.8，30mmol/L)70μL、1.66mmol/L酪氨酸溶液80μL、样品溶液80μL混合均匀，在37℃恒温水槽中温育5分钟，加入酪氨酸酶溶液(1000U/ml)10μL，在37℃恒温10min后，用酶标仪测定475nm波长的吸光度A475。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度，结果见表3。

酪氨酸酶活性抑制率计算公式为：抑制率(％)＝(1-(A475-C0)/A0)×100％，其中A0是参比溶液的吸光度，A475是样品溶液的吸光度，C0是样品溶液本底的吸光度。

表3酪氨酸酶抑制活性的测定结果

由表3可知，在本发明中使用的各雪莲果提取物都具有酪氨酸酶活性抑制作用。其中，雪莲果块根70％乙醇部位和雪莲果叶70％乙醇部位抑制酪氨酸酶作用较强，而且都优于相同浓度的阳性对照品熊果苷，可以将雪莲果块根和雪莲果叶提取物配合在外用剂中，作为防止肌肤色素沉着的美白活性物使用。

实施例5：含有雪莲果提取物的皮肤外用剂

在100g雪莲果的块根中加入70％乙醇1000mL，在室温超声1小时，提取2次，然后过滤。将滤液的溶剂减压浓缩至50ml，上AB-8树脂柱，依次用去离子水、30％乙醇、70％乙醇和95％乙醇洗脱(各500ml)，收集70％乙醇洗脱部位后减压蒸馏除去溶剂，得到雪莲果块根的70％乙醇部位，用于皮肤外用剂的制备。所述雪莲果提取物在皮肤外用剂中的重量百分比是1-10％，优选1-7％。以下是雪莲果块根在皮肤外用剂中的具体应用的实施例。下表4中“-”表示无添加。

实施例6：含有雪莲果块根的精华液

取雪莲果块根提取物，用于制备具有美白作用的精华液，所述精华液含有的组分如表4所示：

表4

以上是发明较佳的实施例，并不用以限制本发明。

资源描述

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410124593.2 (22)申请日 2014.03.28 (65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 104940049 A (43)申请公布日 2015.09.30 (73)专利权人浙江大学地址 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路 38号 (72)发明人文岳中 (74)专利代理机构杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 代理人胡红娟 (51)Int.Cl. A61K 8/9789(2017.01) A61Q 19/00(2006.01) A61Q。

2、 19/02(2006.01) A61Q 19/08(2006.01) (56)对比文件 FR 2907338 A2,2008.04.25, JP 特开2006-273755 A,2006.10.12, CN 1826989 A,2006.09.06, 陈红惠.雪莲果叶中酚酸的分离鉴定及其生物活性研究. 中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑 .2010, (第7期),第15、 16、 18、 30、 32、 40、 50、 63-64页. 陈红惠.雪莲果叶中酚酸的分离鉴定及其生物活性研究. 中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑 .2010, (第7期),第15、 16、。

3、 18、 30、 32、 40、 50、 63-64页. 审查员顾瑜尉 (54)发明名称雪莲果植物提取物的提取方法、提取物及应用 (57)摘要本发明公开了一种雪莲果植物提取物的提取方法，包括：向预处理后的雪莲果的叶或者块根中，加入乙醇或者乙醇水溶液作为提取剂，超声，过滤，滤液浓缩；将浓缩液经过大孔树脂柱层析进行分离，柱层析采用梯度洗脱，先用去离子水进行洗脱，然后依次分别用质量百分比浓度逐渐增加的乙醇水溶液进行梯度洗脱，后处理得到提取物。本发明还公开了由上述方法得到的雪莲果植物提取物以及该提取物的应用方法。本发明采用雪莲果的叶或者块根为原料，。

4、经过简单的提取工艺，即可得到不同活性的具有美白作用和抗老化作用的提取成分，可以根据实际需要进行分类收集，以及进一步制备成所需的产品，实用性强，具有广阔的市场前景。权利要求书1页说明书7页 CN 104940049 B 2018.01.02 CN 104940049 B 1.一种雪莲果植物提取物的提取方法，包括： (1)向预处理后的雪莲果的叶或者块根中，加入乙醇或者乙醇水溶液作为提取剂，超声，过滤，滤液浓缩； (2)将步骤(1)得到的浓缩液经过大孔树脂进行柱层析进一步分离提纯，并采用梯度洗脱，先用去离子水进行洗脱，然后依次分别用质量百分比浓度逐渐增加。

5、的乙醇水溶液进行梯度洗脱，后处理得到提取物；所述的大孔树脂为AB-8大孔吸附树脂；所述梯度洗脱的洗脱剂依次为质量百分比浓度为20-40的乙醇水溶液、质量百分比浓度为60-80的乙醇水溶液、质量百分比浓度为90-100的乙醇水溶液。 2.一种雪莲果植物提取物，其特征在于，所述雪莲果植物提取物由权利要求1所述的方法提取得到。 3.一种雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述雪莲果植物提取物由权利要求1所述的方法制备得到。 4.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述的皮肤外用剂为化妆品。 5.根据权利要求4所述的雪。

6、莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，所述的皮肤外用剂为精华液化妆品，在精华液中雪莲果提取物占的重量百分比为1-10。 6.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的叶为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为 20-100的乙醇水溶液的洗脱产品；当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的块根为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为20-80的乙醇水溶液的洗脱产品。 7.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，采用雪莲果的块根为原料；梯度洗脱时收集质量百分比浓度为。

7、60-80的乙醇水溶液的洗脱产品。 8.根据权利要求3所述的雪莲果植物提取物在制备皮肤外用剂的应用，其特征在于，采用雪莲果的块根或叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70-95的乙醇水溶液的洗脱产品。权利要求书 1/1 页 2 CN 104940049 B 2 雪莲果植物提取物的提取方法、提取物及应用技术领域 0001 本发明属于植物提取技术领域，具体是涉及一种雪莲果植物提取物的提取方法、提取物及作为美白活性物、抗老化活性物以及包含这些美白活性物、抗老化活性物的应用。背景技术 0002 人的肤色的决定因素中，人体产生黑色素的黑素细胞的活性占据了最重要的。

8、位置。研究表明，人体黑素细胞通过各种酶(例如，酪氨酸酶)的活动而产生黑色素，黑色素的形成过程还受到遗传因素、激素分泌、与应激有关的生理因素以及环境因素(例如，紫外线照射)的影响。黑色素具有阻断太阳紫外线，保护真皮下面的皮肤器官，清除皮肤组织中产生的游离自由基，保护皮肤中的蛋白质和基因的作用。但是，由于黑色素是一种稳定的物质，当应激消失后也不容易被除去，直至随着角质细胞的老化脱落才能从皮肤中除去。因此，如果由于环境因素产生了大量不必要的黑色素就会出现有损美容的色素过度沉着，例如：变黑、雀斑和斑点。随着喜欢户外活动的人群增多，防止由UV辐射。

9、引起的黑色素过度沉着的需求也在增加。为了满足这一需求，已经在化妆品等皮肤外用剂中使用了诸如抗坏血酸、曲酸、熊果苷等具有酪氨酸酶抑制活性的物质。但是，由于美白效果不理想以及其它问题(例如，将上述美白活性物加入到化妆品中所引起的皮肤刺激问题、配方稳定性问题等)，使得这些成分的使用受到了限制。来源于植物提取物的酪氨酸酶抑制剂作为潜在的美白活性物，同时又具有安全性和对皮肤低刺激性的预期，目前已有各种开发的报道(专利文献 CN201310411195：白蔹提取物美白功效的检测方法； CN201310382406.6：白木香果皮提取物在制备美白化妆品中的应用)。 00。

10、03 皮肤老化的原因可以分为光老化和内因引起的老化， UV暴露引起的光老化会引起皮肤弹性蛋白酶的活性增加。弹性蛋白酶(Elastase)分布于多种组织和细胞中，弹性蛋白酶活性增加可导致皮肤弹性纤维的水解，从而加速真皮内胶原蛋白和弹性蛋白的分解，使皮肤失去弹性，出现皱纹等皮肤老化现象。目前已知有植物来源的抗老化活性物具有弹性蛋白酶抑制作用，如蓼蓝(专利文献CN200680023570.6：皮肤外用剂)、香豌豆(专利文献 CN200680009020.9：含有香豌豆提取物的化妆料)等。 0004 雪莲果(Smallanthus sonchifolius(Poepp.&。

11、Endl.)H.Robinson)属菊科向日葵属植物，原产南美安第斯山区，在21世纪初由日本引入我国云南等地大量栽培。雪莲果原名亚贡(yacon)，又叫雅贡、菊薯、雪莲薯，是南美印第安人的传统食品，具有缓解糖尿病等多种功效的南美药食两用植物。 0005 雪莲果块根含有大量的低聚果糖，有 “低聚果糖之王” 的称谓。雪莲果块根中还含有多种酚酸、萜类和黄酮类化合物。目前已有报道雪莲果叶提取物具有抗氧化、清除自由基的功效。发明内容 0006 本发明提供了一种雪莲果植物提取物的提取方法，该提取方法操作简单，适于工说明书 1/7 页 3 CN 1049400。

12、49 B 3 业化生产，且由该方法提取得到的提取物具有良好的护肤和美白效果。 0007 本发明还提供了一种由上述方法提取得到的雪莲果植物提取物，该提取物具有良好的护肤和美白效果。 0008 本发明还提供了一种上述雪莲果植物提取物的应用方法，可用作美白和抗老化皮肤外用剂的活性成分。 0009 一种雪莲果植物提取物的提取方法，包括： 0010 (1)向预处理后的雪莲果的叶或者块根中，加入乙醇或者乙醇水溶液作为提取剂，超声，过滤，滤液浓缩； 0011 (2)将步骤(1)得到的浓缩液经过大孔树脂进行进一步分离提纯，优选为采用大孔树脂柱层析并采用梯度洗脱，先用去离子水进行洗脱，。

13、然后依次分别用质量百分比浓度逐渐增加的乙醇水溶液进行梯度洗脱，后处理得到提取物。 0012 步骤(1)中，为提高提取效果，所述的预处理主要包括清洗、粉碎等步骤。作为优选，提取剂采用乙醇水溶液，所述乙醇水溶液的质量百分比浓度为50-90，进一步优选为 60-80，更进一步优选为70。以保证尽可能多的活性成分被提取出来。 0013 步骤(1)中，一次加入的提取剂的量一般为雪莲果的叶或者块根体积的5-15倍。超声处理时间可根据实际需要确定，一般为0.5-2小时，更进一步为1-2小时。提取次数一般也可根据实际需要确定，作为优选，提取两次到三次，每次提取都进。

14、行超声处理。提取温度可选择室温下进行，也可适当升温。 0014 步骤(2)中，大孔树脂柱层析过程中，作为优选，所述的大孔树脂为AB-8大孔吸附树脂。首先用去离子水对AB-8大孔吸附树脂进行洗脱，主要去除一些水溶性杂质。步骤(2) 中，作为优选，所述梯度洗脱的洗脱剂依次为质量百分比浓度为20-40的乙醇水溶液、质量百分比浓度为60-80的乙醇水溶液、质量百分比浓度为90-100的乙醇水溶液，同时分别收集乙醇洗脱液，浓缩后分别制备得到三种提取物。作为进一步优选，所述的洗脱剂依次分别为质量百分比浓度为30的乙醇水溶液、质量百分比浓度为70的乙醇水溶液、质。

15、量百分比浓度为95的乙醇水溶液。采用浓度阶梯变化的洗脱剂，可以保证提取液中各种有效成分被分离，且分离出来的活性成分活性各不相同，实际应用时，根据活性不同，对三种成分的量进行调整和选择，以满足不同场合的需求。 0015 本发明还提供了一种由上述方法提取得到的雪莲果植物提取物。该雪莲果植物提取物可根据实际需要使用于不同的场合。 0016 本发明还提供了几种上述雪莲果植物提取物作为皮肤外用剂的应用方法。 0017 一种雪莲果植物提取物在制备具有抗氧化、自由基清除作用的皮肤外用剂的应用，其中所述雪莲果植物提取物由上述各种方法制备得到。 0018 当应用上述场合时，作为优。

16、选，当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的叶为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为20-100的乙醇水溶液的洗脱产品。当所述雪莲果植物提取物为采用雪莲果的块根为原料时，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为20-80 的乙醇水溶液的洗脱产品。作为更进一步优选，所述雪莲果植物提取物采用雪莲果的叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70-95的乙醇水溶液的洗脱产品。 0019 一种雪莲果植物提取物在制备具有抗老化作用的皮肤外用剂的应用，其中所述雪莲果植物提取物由上述各种方法制备得到。说明书 2/7 页 4 CN 104940049 B 4 0020 当应用上述场合时，作为。

17、优选，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为60-80的乙醇水溶液的洗脱产品。作为进一步优选，采用雪莲果的块根为原料。作为更进一步优选，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70的乙醇水溶液的洗脱产品；同时采用雪莲果的块根为原料。 0021 一种雪莲果植物提取物在制备具有美白作用的皮肤外用剂的应用，其中所述雪莲果植物提取物由上述各种方法制备得到。 0022 当应用上述场合时，作为优选，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为60-100的乙醇水溶液的洗脱产品。作为进一步优选，采用雪莲果的叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70-95的乙醇水溶液的洗脱产品。更进一步优选为，采用。

18、雪莲果的块根或叶为原料，梯度洗脱时收集质量百分比浓度为70的乙醇水溶液的洗脱产品。 0023 作为对上述几种方案的优选，所述的皮肤外用剂为化妆品，特别是精华液化妆品，在精华液中雪莲果提取物占的重量百分比为1-10，进一步优选为1-7。 0024 本发明中使用的是菊科向日葵属植物，优选为雪莲果 (Smallanthus sonchifolius(Poepp.&Endl.)H.Robinson)。 0025 与现有技术相比，本发明的有益效果体现在： 0026 本发明采用雪莲果的叶或者块根为原料，经过简单的提取工艺，即可得到不同活性的具有美白作用和抗老化作用的提取成。

19、分，可以根据实际需要进行分类收集，以及进一步制备成所需的产品，实用性强，具有广阔的市场前景。具体实施方式 0027 实施例1：雪莲果提取物的制备 0028 在本实施例中均使用云南产的雪莲果叶或者块根，但不限于此。另外，实施例中提到的百分含量，在没有特殊说明的情况下，均代表质量百分比浓度。 0029 (1)在100g雪莲果的叶中加入70乙醇1000mL，在室温超声1小时，提取2次，然后过滤。将滤液的溶剂减压浓缩至50ml，上AB-8树脂柱，依次用去离子水、 30乙醇、 70乙醇和95乙醇洗脱(各500ml)，分别收集后减压蒸馏除去溶剂，得到干燥固体，。

20、称重，得到雪莲果叶的30乙醇部位2.95g， 70乙醇部位9.89g， 95乙醇部位2.45g。 0030 (2)在100g雪莲果的块根中加入70乙醇1000mL，在室温超声1小时，提取2次，然后过滤。将滤液的溶剂减压浓缩至50ml，上AB-8树脂柱，依次用去离子水、 30乙醇、 70乙醇和95乙醇洗脱(各500ml)，分别收集后减压蒸馏除去溶剂，得到干燥固体，称重，得到雪莲果块根的30乙醇部位3.0g， 70乙醇部位3.6g， 95乙醇部位1.0g。 0031 实施例2：抗氧化活性的检测 0032 按照实施例1制备雪莲果提取物，用DPPH法测定其清除自由基。

21、活性。测定步骤为：将雪莲果提取物分别用去离子水配制成水溶液(质量体积浓度为0.05mg/mL)，移取2mL于 10mL具塞试管中，加人2mL DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)乙醇溶液(摩尔体积浓度为2* 10-4mol/L)，充分混匀，室温静置， 30min后用分光光度计测定517nm波长的吸光度T；同时测定2mL DPPH溶液与2mL乙醇混合后的吸光度C， 2mL去离子水与2L乙醇混合后的吸光度C0，以及2mL提取液与2mL乙醇溶液混合后的吸光度T0。平行测定三次，取平均值，根据以下公式计算自由基清除率。说明书 3/7 页 5 CN 1049400。

22、49 B 5 0033 自由基清除率1-(T-T0)/(C-C0)100。 0034 表1DPPH法自由基清除活性的测定结果 0035 0036 由表1可知，在本发明中使用的雪莲果提取物中，任一溶剂提取物均具有优异的自由基清除作用，作为抗老化剂是有用的。特别是采用雪莲果叶作为提取材料时，洗脱剂采用 70-95的乙醇水溶液时，其自由基清除率最好。因此，可以将雪莲果提取物配合在外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状态的抗老化活性物使用。 0037 实施例3：弹性蛋白酶抑制的检测 0038 分别按照实施例1制备的雪莲果提取物，溶于去离子水，配制成水溶液(质量体。

23、积浓度为0.5mg/ml)，用于测定弹性蛋白酶抑制活性。测定步骤为：在96孔板中加入10 L样品溶液和130 L含有1.015mM反应底物N-琥珀酰-丙酰氨-丙酰氨-丙酰氨-对硝基苯胺(英文名 Succ-Ala-Ala-Ala-pNA， CAS号： 52299-14-6)的0.1M Tris-Cl缓冲溶液(pH8.0)，在25下温育5分钟，加入15 L弹性蛋白酶溶液(0.5U/ml)，继续在25下温育30min，然后用酶标仪测定410nm波长的吸光度A410。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度，结果见表2。 0039 弹性蛋白酶活性抑制率计算公式为。

24、：抑制率()(1-(A410-C0)/A0)100，其中 A0是参比溶液的吸光度， A410是样品溶液的吸光度， C0是样品溶液本底的吸光度。 0040 表2弹性蛋白酶抑制的测定结果说明书 4/7 页 6 CN 104940049 B 6 0041 0042 由表2可知，在本发明中使用的雪莲果提取物中，雪莲果块根70乙醇部位和雪莲果叶70乙醇部位，均具有抑制弹性蛋白酶作用，可以将雪莲果块根和雪莲果叶提取物配合在外用剂中，作为防止肌肤老化、维持年轻健康的肌肤状的抗老化剂使用。 0043 实施例4：酪氨酸酶活性抑制的检测 0044 分别按照实施例1制备的雪莲果提取物，。

25、溶于去离子水，配制成水溶液(质量体积浓度为0.5mg/ml)，用于测定酪氨酸酶抑制活性，以熊果苷为参照物。测定步骤为：磷酸盐缓冲溶液(pH6.8， 30mmol/L)70 L、 1.66mmol/L酪氨酸溶液80 L、样品溶液80 L混合均匀，在37 恒温水槽中温育5分钟，加入酪氨酸酶溶液(1000U/ml)10 L，在37恒温10min后，用酶标仪测定475nm波长的吸光度A475。用去离子水替换样品水溶液，作为参比溶液同样测定吸光度，结果见表3。 0045 酪氨酸酶活性抑制率计算公式为：抑制率()(1-(A475-C0)/A0)100，其中A0 是参比。

26、溶液的吸光度， A475是样品溶液的吸光度， C0是样品溶液本底的吸光度。 0046 表3酪氨酸酶抑制活性的测定结果说明书 5/7 页 7 CN 104940049 B 7 0047 0048 由表3可知，在本发明中使用的各雪莲果提取物都具有酪氨酸酶活性抑制作用。其中，雪莲果块根70乙醇部位和雪莲果叶70乙醇部位抑制酪氨酸酶作用较强，而且都优于相同浓度的阳性对照品熊果苷，可以将雪莲果块根和雪莲果叶提取物配合在外用剂中，作为防止肌肤色素沉着的美白活性物使用。 0049 实施例5：含有雪莲果提取物的皮肤外用剂 0050 在100g雪莲果的块根中加入70乙醇1000mL，在。

27、室温超声1小时，提取2次，然后过滤。将滤液的溶剂减压浓缩至50ml，上AB-8树脂柱，依次用去离子水、 30乙醇、 70乙醇和 95乙醇洗脱(各500ml)，收集70乙醇洗脱部位后减压蒸馏除去溶剂，得到雪莲果块根的 70乙醇部位，用于皮肤外用剂的制备。所述雪莲果提取物在皮肤外用剂中的重量百分比是1-10，优选1-7。以下是雪莲果块根在皮肤外用剂中的具体应用的实施例。下表4中 “-” 表示无添加。 0051 实施例6：含有雪莲果块根的精华液 0052 取雪莲果块根提取物，用于制备具有美白作用的精华液，所述精华液含有的组分如表4所示： 0053 表4 说明书 6/7 页 8 CN 104940049 B 8 0054 0055 以上是发明较佳的实施例，并不用以限制本发明。说明书 7/7 页 9 CN 104940049 B 9 。

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