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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410097089.8 (22)申请日 2014.03.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104905242 A (43)申请公布日 2015.09.16 (73)专利权人 浙江欧诗漫生物股份有限公司 地址 313200 浙江省湖州市德清县武康镇 中兴北路518号 (72)发明人 杨安全 王菁 张丽华 骆建芬 谢敏 (74)专利代理机构 杭州丰禾专利事务所有限公 司 33214 代理人 王从友 (51)Int.Cl. A61K 8/98(2006.01)。
2、 A61K 8/64(2006.01) A23L 33/00(2016.01) A61Q 19/02(2006.01) 审查员 王成君 (54)发明名称 一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和 珍珠复合美白因子溶液的方法 (57)摘要 本发明涉及一种从珍珠中分离制备珍珠可 溶食用钙和珍珠复合美白因子溶液的方法， 步骤 如下： 1） 将珍珠粉碎至纳米级， 然后加入去离子 水， 通过压力和温度的协同， 将珍珠粉进行微乳 化； 2） 然后将珍珠粉乳液进行电渗析， 浓水池装 去离子水， 淡水池装珍珠粉乳液， 进行循环脱钙 分离获得含钙盐溶液和珍珠蛋白溶液； 3） 钙获得 含钙盐溶液作为可溶食用钙或可溶食。
3、用钙原料； 4） 将获得的珍珠蛋白溶液中加入磷酸盐缓冲液， 匀质； 5） 首先预处理， 然后将混合液置于反应锅 中， 进行酶催化反应， 反应结束后在沸水浴灭酶 离心， 去上清液， 即为珍珠复合美白因子溶液。 本 发明方法的应用， 极大的扩大珍珠粉的应用领 域， 并精细化珍珠粉的深加工应用。 权利要求书1页 说明书5页 附图5页 CN 104905242 B 2017.06.13 CN 104905242 B 1.一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子溶液的方法， 其特征在 于该方法包括以下的步骤： 1） 将珍珠粉碎至纳米级， 然后加入510份的去离子水， 通过压力0.520MPa。
4、和温度30 60的协同， 将珍珠粉进行微乳化； 2） 然后将珍珠粉乳液进行电渗析， 电渗析选择压力为3040V， 流速6080L/h， 浓水池 装去离子水， 淡水池装珍珠粉乳液， 去离子水与珍珠粉乳液的体积比为1： 151： 2， 进行循环 脱钙13h， 分离获得含钙盐溶液和珍珠蛋白溶液； 3） 钙获得含钙盐溶液作为可溶食用钙或可溶食用钙原料； 4） 将获得的珍珠蛋白溶液中加入520倍pH值6.57.5的磷酸盐缓冲液， 匀质； 5） 首先进入100120、 0.150.2MPa环境下预处理2060分钟处理， 然后将混合液 置于反应锅中， 加入体系质量0.5%2%的中性蛋白酶， 在4070温度中。
5、进行酶催化反应4 8小时， 反应结束后在沸水浴灭酶515min， 离心， 去上清液， 即为珍珠复合美白因子溶 液。 2.根据权利要求1所述的一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子 溶液的方法， 其特征在于珍珠粉的粒度为10100nm。 3.根据权利要求1所述的一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子 溶液的方法， 其特征在于去离子水与珍珠粉乳液的体积比为1： 101： 2。 4.根据权利要求1所述的一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子 溶液的方法， 其特征在于获得含钙盐溶液过滤得到透明清夜， 灭菌处理， 无菌灌装， 即为珍 珠可溶性液体钙。 5.根据权。
6、利要求1所述的一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子 溶液的方法， 其特征在于获得含钙盐溶液真空干燥研磨制成粉状珍珠蛋白保健品和化妆品 原料。 6.根据权利要求1所述的一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子 溶液的方法， 其特征在于珍珠复合美白因子溶液灭菌处理， 无菌灌装， 压盖制成珍珠珍珠复 合美白因子溶液。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 104905242 B 2 一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子 溶液的方法 技术领域 0001 本发明涉及珍珠加工方法， 尤其涉及一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍 珠复合美白因子溶液的方法。 。
7、发明内容 0002 目前， 珍珠粉的应用过程中， 曾相继遇到颗粒大小安全隐患、 流动性差、 不溶水以 及功效成分难以释放等诸多问题， 这些直接影响珍珠粉的应用领域。 为能解决以上问题， 业 内已经向水溶性珍珠粉以及珍珠水解液发展， 然而， 在此过程中， 我们只是简单的进行原有 成分的复配或者粗放型的水解， 未能研究其中各个成分的功效， 很少进行精细分离纯化。 0003 中国发明专利 （申请号： 93117551.8 申请日： 1993-09-18） 公开了一种以珍珠和珍 珠层粉为原料经与有机酸反应,用氢氧化钠中和、 过滤、 浓缩、 结晶、 干燥、 粉碎成粉末制备 珍珠钙的方法,及其所得珍珠钙。。
8、 该产品含有20%wt左右的钙,及多种氨基酸,易溶解于水, 易于人体吸收,是人体补充钙的理想钙源。 0004 中国发明专利 （申请号： 200710035508.5 申请日： 2007-08-03） 公开了一种水溶性 混合活性珍珠钙及其制备方法， 它包括如下步骤： 将珍珠和蚌肉粉碎和绞碎混合； 加水 胶磨成混合浆体； 加入生物酶酶解； 采用负压过滤， 得滤液1； 将滤渣放入酸解罐， 加 入适量乳酸， 升温并搅拌0.51小时； 采用负压过滤得滤液2； 将步骤中得到的滤渣 放入酸解罐， 加入适量食用磷酸， 搅拌水解过滤后得水解液3； 合并滤液1、 滤液2和水解液 3， 搅拌并调节PH值到56， 即。
9、成本发明水溶性混合珍珠钙液； 将步骤中得到的钙液浓 缩、 干燥后粉碎成粉剂， 即成为水溶性混合活性珍珠钙粉。 0005 中国发明专利 （申请号： 200910186567.1 申请日： 2009-11-27） 公开了一种高品质 水溶珍珠钙粉的制备方法及其应用产品。 所述水溶珍珠钙粉的制备方法包括以下步骤:选 用珍珠蚌制粗粉,并制成滤饼。 按重量比0.05-2.95 2.95-0.05(珍珠 珍珠层粉),加饮用 水,混合搅拌入并蹍磨,再用少许饮用水冲洗磨体后并入浆料中,入酶解罐中,升温加入食 用级枯草杆菌中性蛋白酶,进行酶解,滤液为复合氨基酸液(称A液)。 滤饼置酸解罐中,加入 乳酸,升温、 搅。
10、拌下水解,当固形物基本溶解后即可终止,调节pH6.3-6.6,过滤后,滤液为水 溶珍珠钙液(称B液),在120脱去结晶水成无水物。 将A,B液混合经喷雾干燥成水溶珍珠 粉。 0006 中国发明专利 （申请号： 201310383763.4 申请日： 2013-08-29） 公开了利用珍珠贝 壳制备可溶性珍珠钙的方法。 先将珍珠贝壳制备成混悬液， 再将食用碱及牛磺酸分别制备 成溶液， 将食用碱溶液加热至55-85， 以混悬液和食用碱溶液是1： 3-6的体积比， 把混悬液 加入食用碱溶液中混合均匀， 保持55-85恒温60-72小时， 然后以混悬液与牛磺酸溶液的 体积比是1： 3-6的比例， 加入。
11、牛磺酸溶液混合均匀， 直至珍珠贝壳细粉完全溶解得到钙化 液， 浓缩、 干燥后即得。 0007 中国发明专利 （申请号： 01139157.X 申请日： 2001-12-19） 公开了一种珍珠粉的生 说 明 书 1/5 页 3 CN 104905242 B 3 物酶解制备方法,其关键是以乳酸水溶液为溶剂,将珍珠溶解,并调整溶液的pH值至近中性 再用酸回调至偏酸性,再放入适量生物活性酶催化分解其蛋白质,得到酶解珍珠胶液,再采 用喷雾干燥将酶解珍珠胶液快速干燥,固化造粒,制得超细酶解珍珠粉。 所制备的珍珠粉保 留了珍珠中的多种氨基酸、 微量元素等有效成份,并使珍珠中的碳酸钙转化为人体易吸收 的活性钙。
12、,胃酸不溶解的角质蛋白酶解成易吸收的游离氨基酸。 0008 中国发明专利 （申请号： 200710141569.X 申请日： 2007-08-07） 公开了一种制备珍 珠活性肽的方法,它从新活的珍珠贝里取出珍珠粒,水洗干净,将珍珠粒与去离子水混合 后,用磷酸盐缓冲溶液将混合液的PH值调至中性偏酸,然后用沙雷肽酶与珍珠粒进行酶水 解反应； 用滤网过滤分离得珍珠粒和澄清液,然后将反应液水煮灭酶； 再将所得的溶液经喷 雾干燥即得珍珠活性肽。 0009 中国发明专利 （申请号： 200910114409.5 申请日： 2009-09-18） 公开了珍珠水解液 的制备方法， 其步骤如下： 1)取珍珠粉置。
13、于盐酸水溶液中， 搅拌， 直至反应完全， 用氨水调节 该混合液的pH值至中性， 离心， 得沉淀A； 2)沉淀A用纯净水溶解， 再以氨水调节其pH值为7.5 8.5， 离心， 得沉淀B； 3)沉淀B用纯净水溶解， 加入酶进行酶解， 酶解液离心， 得上清液和沉 淀C； 所述的酶为蜗牛蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物， 加入量为沉淀B重量的0.31.05； 4)将沉淀C用纯净水溶解加酶进行二次酶解， 离心， 收集上清液； 酶为胰蛋白酶、 木瓜蛋白酶 和中性蛋白酶的混合物， 加入量为沉淀B重量的0.20.45； 5)合并两次上清液， 煮沸， 用 孔径为13nm的纳滤膜过滤， 即得。 发明内容 0010 为了。
14、解决上述的技术问题， 本发明的目的是提供一种从珍珠中分离制备珍珠可溶 食用钙和珍珠复合美白因子溶液的方法， 本该方法利用机械化学原理， 对珍珠粉进行预处 理， 提高珍珠粉的反应表面积和晶体结构， 快速无破损地分离珍珠功效成分， 获得珍珠液体 钙和珍珠复合美白因子溶液， 为珍珠护肤品和保健品提供原料。 0011 为了实现上述的目的， 本发明采用了以下的技术方案： 0012 一种从珍珠中分离制备珍珠可溶食用钙和珍珠复合美白因子溶液的方法， 该方法 包括以下的步骤： 0013 1） 将珍珠粉碎至纳米级， 然后加入510份的去离子水， 通过压力0.520MPa和温 度3060的协同， 将珍珠粉进行微乳。
15、化； 0014 2） 然后将珍珠粉乳液进行电渗析， 电渗析选择压力为3040V， 流速6080L/h， 浓 水池装去离子水， 淡水池装珍珠粉乳液， 去离子水与珍珠粉乳液的体积比为1： 151： 2， 进行 循环脱钙13h， 分离获得含钙盐溶液和珍珠蛋白溶液； 0015 3） 钙获得含钙盐溶液作为可溶食用钙或可溶食用钙原料； 0016 4） 将获得的珍珠蛋白溶液中加入520倍pH值6.57.5的磷酸盐缓冲液， 匀质； 0017 5） 首先进入100120、 0.150.2MPa环境下预处理2060分钟处理， 然后将混 合液置于反应锅中， 加入体系质量0.5%2%的中性蛋白酶， 在4070温度中进。
16、行酶催化 反应48小时， 反应结束后在沸水浴灭酶515min， 离心， 去上清液， 即为珍珠复合美白因 子溶液。 0018 作为优选， 所述的珍珠粉的粒度为10100nm。 说 明 书 2/5 页 4 CN 104905242 B 4 0019 作为优选， 所述的去离子水与珍珠粉乳液的体积比为1： 101： 2。 0020 作为优选， 所述的获得含钙盐溶液过滤得到透明清夜， 灭菌处理， 无菌灌装， 即为 珍珠可溶性液体钙。 0021 作为优选， 所述的获得含钙盐溶液真空干燥研磨制成粉状珍珠蛋白保健品和化妆 品原料。 0022 作为优选， 所述的珍珠复合美白因子溶液灭菌处理， 无菌灌装， 压盖制。
17、成珍珠珍珠 复合美白因子溶液。 0023 本发明由于采用了上述的技术方案， 将珍珠粉中功效成分进行分离， 并将机械化 学原理应用于制备方法中。 机械方法能在不破坏珍珠粉成分活性的基础下， 进行珍珠粉重 要成分的分离提取， 珍珠粉中蛋白的获得， 并纯化后酶解， 能够更为有效发挥珍珠粉美白的 作用。 此方法的应用， 极大的扩大珍珠粉的应用领域， 并精细化珍珠粉的深加工应用。 附图说明 0024 图1为实施例1的方法每隔15min取样测定珍珠粉乳液中的电导率曲线图。 0025 图2为实施例1的方法每隔15min取样测定珍珠粉乳液中的钙盐含量曲线图。 0026 图3为实施例1的经压力温度处理过后的珍珠。
18、蛋白相比未处理过的珍珠蛋白酶解 效果存在明显的提升作用。 0027 图4为实施例1制得的珍珠复合美白因子溶液成分分析图。 0028 图5实施例1制得的珍珠复合美白因子对酪氨酸酶活性的影响图。 0029 图6 为实施例1制得的珍珠复合美白因子溶液对细胞生长的影响图。 0030 图7为实施例1制得的珍珠复合美白因子对细胞内黑色素含量的影响图。 0031 图8为显微镜观察珍珠复合美白因子对细胞的影响， a c分别表示添加珍珠复合美 白因子24h和48h的细胞生长情况， b d分别表示未添加珍珠复合美白因子24h和48h的细胞 生长情况。 具体实施方式 0032 下面结合实施例， 对本发明做进一步详细。
19、说明， 但本发明不仅限于以下实施例。 0033 实施例1 0034 一种从珍珠中分离得到可溶食用钙的方法， 包括以下原料和步骤： 将珍珠粉碎至 纳米级10100nm， 然后加入6份的去离子水， 通过压力1MPa和温度50的协同， 将珍珠粉进 行微乳化， 然后将珍珠粉乳液进行电渗析， 选择压力为3040V,流速6080L/h， 浓水池装 去离子水5L， 淡水池装珍珠粉乳液15L， 进行循环脱钙Ca2+ 1 h， 每隔15min取样测定珍珠 粉乳液中的电导率和钙盐含量， 测定结果如图1和图2所示。 将获得含钙盐溶液过滤得到透 明清夜， 灭菌处理， 无菌灌装， 即为珍珠可溶性液体钙。 0035 将获。
20、得的珍珠蛋白溶液中加入10倍pH值7.0的磷酸盐缓冲液， 匀质； 首先进入120 、 0.15MPa环境下预处理40分钟处理， 然后将混合液置于反应锅中， 加入体系质量1.0%的 中性蛋白酶， 在40温度中进行酶催化反应6小时， 反应结束后在沸水浴灭酶515min， 离 心， 去上清液， 即为珍珠复合美白因子溶液。 0036 实施例2 说 明 书 3/5 页 5 CN 104905242 B 5 0037 一种从珍珠中分离得到可溶食用钙的方法， 包括以下原料和步骤： 将珍珠粉碎至 纳米级10100nm， 然后加入10份的去离子水， 通过压力10MPa和温度40的协同， 将珍珠粉 进行微乳化， 。
21、然后将珍珠粉乳液进行电渗析， 选择压力为3040V,流速6080L/h， 浓水池 装去离子水5L， 淡水池装珍珠粉乳液10L， 进行循环脱钙Ca2+ 2h。 获得含钙盐溶液真空干燥 研磨制成粉状珍珠蛋白保健品和化妆品原料。 0038 将获得的珍珠蛋白溶液中加入15倍pH值6.5的磷酸盐缓冲液， 匀质； 首先进入100 、 0.2MPa环境下预处理40分钟处理， 然后将混合液置于反应锅中， 加入体系质量1.0%的中 性蛋白酶， 在40温度中进行酶催化反应6小时， 反应结束后在沸水浴灭酶515min， 离心， 去上清液， 即为珍珠复合美白因子溶液。 0039 实施例3 0040 一种从珍珠中分离得。
22、到可溶食用钙的方法， 包括以下原料和步骤： 将珍珠粉碎至 纳米级10100nm， 然后加入10份的去离子水， 通过压力15MPa和温度30的协同， 将珍珠粉 进行微乳化， 然后将珍珠粉乳液进行电渗析， 选择压力为3040V,流速6080L/h， 浓水池 装去离子水2L， 淡水池装珍珠粉乳液10L， 进行循环脱钙Ca2+ 2h。 获得含钙盐溶液真空干燥 研磨制成粉状珍珠蛋白保健品和化妆品原料。 0041 将获得的珍珠蛋白溶液中加入8倍pH值7.5的磷酸盐缓冲液， 匀质； 首先进入120 、 0.15MPa环境下预处理60分钟处理， 然后将混合液置于反应锅中， 加入体系质量1.0%的 中性蛋白酶，。
23、 在50温度中进行酶催化反应5小时， 反应结束后在沸水浴灭酶515min， 离 心， 去上清液， 即为珍珠复合美白因子溶液。 0042 试验例1 0043 1、 实施例1制备的珍珠复合美白因子溶液成分分析 0044 经过氨基酸分析仪、 凯式定氮仪和原子吸收分光光度计等仪器的精密检测， 获得 如下数据。 这些数据说明， 较之以往的水解珍珠液蛋白含量0.15%， 珍珠符合美白因子溶液 中含有较高的蛋白质含量为1.58%， 蛋白质含量明显升高。 并且未检测到钙离子， 说明溶液 中不再存在钙元素。 0045 表1珍珠复合美白因子溶液成分分析表 说 明 书 4/5 页 6 CN 104905242 B 。
24、6 0046 0047 2、 分子量分析 0048 进行液相串联质谱分析， 看到珍珠复合美白因子中有效成分分子量均在1000Da以 内， 说明蛋白质酶解完全， 多肽为寡肽、 三肽、 二肽以及各种氨基酸。 有益于皮肤吸收， 以及 充分发挥多肽和氨基酸的活性功能。 0049 、 抑制黑色素 0050 珍珠复合美白因子溶液对酪氨酸酶的影响 0051 珍珠复合美白因子能明显抑制细胞内酪氨酸酶活性。 8%浓度时， 珍珠复合美白因 子对细胞内酪氨酸酶活性达到半抑制剂量。 0052 珍珠复合美白因子溶液对B16黑色素瘤细胞的影响 0053 A、 对细胞生长的影响 0054 根据B16细胞生长的结果， 样品浓。
25、度达到10%时对细胞的存活率仍几乎没有影响， 并且相对于对照， 珍珠复合美白因子还能促进细胞生长。 0055 B、 对细胞中黑色素的影响 0056 结果表明， 4%浓度时， 珍珠复合美白因子溶液能明显减少黑色素的相对含量。 说 明 书 5/5 页 7 CN 104905242 B 7 图1 图2 说 明 书 附 图 1/5 页 8 CN 104905242 B 8 图3 说 明 书 附 图 2/5 页 9 CN 104905242 B 9 图4 说 明 书 附 图 3/5 页 10 CN 104905242 B 10 图5 图6 说 明 书 附 图 4/5 页 11 CN 104905242 B 11 图7 图8 说 明 书 附 图 5/5 页 12 CN 104905242 B 12 。