用于癌症治疗的抗高血压剂的新型组合物和用途.pdf

本发明公开了用于改善癌症治疗剂的递送和/或效力的方法和组合物。本发明公开了通过如下过程用于治疗或预防癌症（例如，实体瘤，如促结缔组织增生性肿瘤）的方法和组合物：将抗高血压剂作为单一试剂给予受试者、或与癌症治疗剂（例如，大小从大的纳米治疗剂至低分子量化疗剂的癌症治疗剂和/或氧自由基的治疗剂）联合给予受试者。

1.一种改善癌症治疗在受试者中的递送或效力的方法，所述方法包括：基于对改善所述癌症治疗的递送或效力的需要，对需要接受抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（“AHCM”）的受试者进行识别；以及（a）或（b）中任一项、或（a）与（b）两者皆有：（a）向所述受试者给予所述AHCM；或者（b）给予所述癌症治疗，其中，以足以改善所述癌症治疗的递送或效力的剂量给予所述AHCM。 2.一种在受试者中对癌症进行治疗或预防的方法，所述方法包括：基于对改善癌症治疗的递送或效力的需要，对需要接受抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（“AHCM”）的受试者进行识别；以及（a）或（b）中任一项、或（a）与（b）两者皆有：（a）向所述受试者给予所述AHCM；或者（b）给予所述癌症治疗，其中，以足以对所述癌症进行治疗或预防的剂量给予所述AHCM。 3.如权利要求1或2所述的方法，所述方法包括下列中的一项或多项：a）将所述AHCM、所述癌症治疗、或这两者作为流体动力学直径大于1nm、5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm，但小于300nm的实体进行给予；b）在癌症诊断或所述AHCM用药开始的5天、10天、30天、60天或100天之内，未曾向所述受试者给予AHCM剂量；c）所述受试者在给予所述AHCM之前并不是高血压、或已经患有高血压；d）在给予所述癌症治疗前至少1天、2天、3天或5天时给予所述AHCM；或在给予所述癌症治疗前1周、2周、3周、4周或5周以上时给予所述AHCM；e）在给予所述癌症治疗前至少1天、2天、3天或5天时给予所述AHCM；或在给予所述癌症治疗前1周、2周、3周、4周或5周以上时给予所述AHCM，以及将所述AHCM与所述癌症治疗同时给予；或者f）将所述AHCM在至少1小时、5小时、10小时或24小时的时间段内连续进行给予；至少2天、5天、10天或14天的时间段内连续进行给予；至少2周、3周、4周、5周或6周的时间段内连续进行给予；至少2个月、3个月、4个月、5个月或6个月的时间段内连续进行给予；或至少1年、2年、3年、4年或5年的时间段内连续进行给予。 4.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM选自于下列试剂中的一种或多种：（i）血管紧张素II受体阻断剂（AT阻断剂）；（ii）肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂（“RAAS拮抗剂”）；（iii）血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂；（iv）血小板反应素1（TSP-1）抑制剂；（v）转化生长因子β1（TGF-β1）抑制剂；或者（vi）结缔组织生长因子（CTGF）抑制剂。 5.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为AT阻断剂，所述AT阻断剂选自于下列试剂中的一种或多种：氯沙坦坎地沙坦甲磺酸依普沙坦EXP3174、厄贝沙坦L158,809、奥美沙坦沙拉新、替米沙坦缬沙坦或上述试剂的衍生物。 6.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦。 7.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为RAAS拮抗剂，所述RAAS拮抗剂选自于下列试剂中的一种或多种：阿利吉仑瑞米吉仑（Ro42-5892）、依那吉仑（A-64662）、SPP635，或上述试剂的衍生物。 8.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为ACE抑制剂，所述ACE抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：贝那普利卡托普利依那普利福辛普利赖诺普利莫昔普利培哚普利喹那普利雷米普利群多普利或上述试剂的衍生物。 9.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为TSP-1抑制剂，所述TSP-1抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：ABT-510、CVX-045、LSKL，或上述试剂的衍生物。 10.如权利要求3所述的方法，其中，所述TGF-β1抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：抗TGF-β1抗体或TGF-β1肽抑制剂。 11.如权利要求3所述的方法，其中，所述CTGF抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：DN-9693、FG-3019，或上述试剂的衍生物。 12.如权利要求4所述的方法，其中，以足以增强所述癌症治疗的分布或效力的量给予所述AHCM。 13.如权利要求4所述的方法，其中，以使得所述癌症治疗在所述受试者的肿瘤或肿瘤血管中引起下列一种或多种变化的剂量给予所述AHCM：降低胶原蛋白的水平或生成、降低肿瘤纤维化、提高间质肿瘤运输、改善肿瘤灌注或增强穿透或扩散。 14.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦，并且将其以25-100mg/天的量进行给予。 15.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦，并且将其以12.5mg、25mg、50mg或100mg的剂型提供。 16.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦，并且将其以下列范围内的亚抗高血压剂量进行给予：0.25-17.5mg/天、0.5-15mg/天、1.3-12mg/天、1.5-12mg/天、2-12mg/天、2-10mg/天、2-5mg/天、2-3mg/天、或2mg/天。 17.如权利要求3所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦，并且将其以高于抗高血压用途或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准的1.1倍、1.5倍、1.7倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10倍以上的剂量进行给予。 18.如权利要求4所述的方法，其中，将所述AHCM以如下方式进行给予：以亚抗高血压剂量的所述AHCM进行第一疗程；随后以标准高血压剂量或高于标准高血压剂量的所述AHCM进行第二疗程。 19.如权利要求4所述的方法，其中，所述AHCM作为流体动力学直径大于1nm、5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm，但小于300nm的实体进行给予。 20.如权利要求19所述的方法，其中，所述AHCM作为聚合物纳米颗粒或脂质纳米颗粒进行给予。 21.如权利要求4所述的方法，其中，所述癌症治疗为癌症治疗剂，所述癌症治疗剂作为流体动力学直径大于1nm、5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm，但小于300nm的实体进行给予。 22.如权利要求21所述的方法，其中，所述癌症治疗剂作为聚合物纳米颗粒或脂质纳米颗粒进行给予。 23.如权利要求4所述的方法，其中，将所述AHCM或所述癌症治疗剂各自独立地以具有下列大小范围（以nm计）的实体提供：流体动力学直径小于或等于1nm、或为0.1-1.0nm；流体动力学直径为5-20nm、或5-15nm；或流体动力学直径为1nm、5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm，但小于300nm。 24.如权利要求4所述的方法，其中，所述受试者具有下列一种或多种情形：（i）未患有高血压；（ii）在所述AHCM治疗开始时，并未对高血压进行治疗；或者（iii）具有正常血压或低血压。 25.如权利要求4所述的方法，其中，在癌症诊断或所述AHCM用药开始的5天、10天、30天、60天或100天之内，未曾向所述受试者给予所述AHCM。 26.如权利要求4所述的方法，其中，所述受试者需要、或正在考虑进行癌症治疗。 27.如权利要求4所述的方法，其中，所述方法包括如下步骤：确定所述受试者是否患有癌症；以及针对所述确定的结果给予所述AHCM和所述癌症治疗。 28.如权利要求4所述的方法，其中，所述受试者处于实体瘤、纤维化肿瘤患病风险中；或患有实体瘤、纤维化肿瘤。 29.如权利要求28所述的方法，其中，所述受试者具有瘤前病变状态或癌症易感性。 30.如权利要求4所述的方法，其中，所述癌症选自于下列癌症中的一种或多种：胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌、皮肤癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌、胃肠癌、胃癌、头颈部癌、肾癌、或肝癌，或上述癌症的转移病灶。 31.如权利要求4所述的方法，其中，在所述癌症治疗前和/或与所述癌症治疗联合给予所述AHCM。 32.如权利要求31所述的方法，其中，所述癌症治疗选自于抗癌剂、手术和/或放射中的一种或多种。 33.如权利要求32所述的方法，其中，在所述癌症治疗前至少1天、2天、3天或5天时给予所述AHCM；或在所述癌症治疗前1周、2周、3周、4周或5周以上时给予所述AHCM。 34.如权利要求32所述的方法，其中，在所述受试者接受癌症治疗的预先选定的部分时间段内维持所述AHCM。 35.如权利要求34所述的方法，其中，在给予所述癌症治疗的整个时间段内维持所述AHCM。 36.如权利要求4所述的方法，其中，将所述AHCM在至少1小时、5小时、10小时或24小时的时间段内连续进行给予；至少2天、5天、10天或14天的时间段内连续进行给予；至少2周、3周、4周、5周或6周的时间段内连续进行给予；至少2个月、3个月、4个月、5个月或6个月的时间段内连续进行给予；或至少1年、2年、3年、4年或5年的时间段内连续进行给予。 37.如权利要求4所述的方法，其中，所述AHCM作为缓释制剂进行给予。 38.如权利要求4所述的方法，其中，将所述AHCM配制成用于口服、皮下或静脉内连续递送。 39.如权利要求4所述的方法，其中，所述AHCM通过皮下泵、植入物或储库剂进行给予。 40.如权利要求4所述的方法，其中，所述癌症治疗选自于下列中的一种或多种：（i）癌症治疗剂，所述癌症治疗剂选自于病毒癌症治疗剂、抗癌治疗剂的脂质纳米颗粒、抗癌治疗剂的聚合物纳米颗粒、针对癌症靶标的抗体、dsRNA试剂、反义RNA试剂或化学治疗剂；（ii）放射；（iii）手术；或者（iv）（i）-（iii）的任意组合。 41.如权利要求40所述的方法，其中，所述脂质纳米颗粒选自于聚乙二醇化脂质体多柔比星或脂质体紫杉醇（例如，）。 42.如权利要求40所述的方法，其中，所述化学治疗剂选自于吉西他滨、顺铂、表柔比星、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、奥沙利铂或亚叶酸。 43.如权利要求40所述的方法，其中，所述针对癌症靶标的抗体选自于抗HER-2/neu抗体、抗HER3抗体、抗VEGF抗体或抗EGFR抗体。 44.如权利要求4所述的方法，其中，所述癌症治疗为酪氨酸激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自于：舒尼替尼、厄洛替尼、吉非替尼、索拉非尼、埃克替尼、拉帕替尼、来那替尼、凡德他尼、BIBW2992或XL-647；或者，所述癌症治疗为抗EGFR抗体，所述抗EGFR抗体选自于：西妥昔单抗、帕尼单抗、扎芦木单抗、尼妥珠单抗、奈昔木单抗或马妥珠单抗。 45.如权利要求40所述的方法，其中，所述化学治疗剂为细胞毒素剂或细胞生长抑制剂。 46.如权利要求40所述的方法，其中，所述化学治疗剂选自于：抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂、紫杉烷、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、烷化剂或嵌入剂。 47.如权利要求4所述的方法，其中，所述癌症治疗选自于下列试剂中的一种或多种：抗血管生成剂、血管靶向剂或血管破裂剂。 48.如权利要求4所述的方法，其中，所述AHCM或所述癌症治疗通过全身给药给予所述受试者，所述全身给药选自于：口服给药、胃肠外给药、皮下给药、静脉内给药、直肠给药、肌内给药、腹膜内给药、鼻内给药、经皮给药、或通过吸入器或腔内装置给药。 49.如权利要求4所述的方法，所述方法进一步包括对所述受试者在下列一个或多个方面的变化进行监测：肿瘤大小；转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）或血小板反应素1（TSP-1）中的一种或多种的水平或信号；肿瘤胶原蛋白I水平；纤维化的量；间质压力；血浆生物标记物或血清生物标记物，所述生物标记物选自于胶原蛋白I、胶原蛋白III、胶原蛋白IV、TGF-β1、CTGF或TSP-1；一种或多种癌症标记物的水平；新病变出现、代谢、缺氧演化的速度；新疾病相关症状的出现；组织块的大小；疾病相关疼痛的程度；组织学分析、小叶模式和/或有丝分裂细胞存在与否；或者肿瘤侵袭性、原发肿瘤的血管化或转移扩散。49.一种包含纳米颗粒的药物组合物，所述纳米颗粒包含AHCM。 50.一种包含纳米颗粒的药物组合物，所述纳米颗粒包含AHCM和癌症治疗剂。 51.如权利要求50所述的药物组合物，其中，所述癌症治疗剂选自于病毒癌症治疗剂、抗癌剂的脂质纳米颗粒、抗癌剂的聚合物纳米颗粒、针对癌症靶标的抗体、dsRNA试剂、反义RNA试剂或化学治疗剂。 52.如权利要求49-51中任一项所述的药物组合物，其中，所述纳米颗粒为聚合物纳米颗粒或脂质纳米颗粒。 53.如权利要求49-51中任一项所述的药物组合物，其中，将所述AHCM配制成如下剂型：根据所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中的治疗剂型标准配制成的剂型。 54.如权利要求49-51中任一项所述的药物组合物，其中，将所述AHCM配制成如下剂型：低于所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中的治疗剂型标准的0.01倍、0.02倍、0.03倍、0.04倍、0.05倍、0.06倍、0.07倍、0.08倍、0.09倍、0.1倍、0.15倍、0.16倍、0.2倍、0.3倍、0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.7倍的剂型。 55.如权利要求49-51中任一项所述的药物组合物，其中，将所述AHCM配制成如下剂型：高于所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中的治疗剂型标准的1.1倍、1.5倍、1.7倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10倍以上的剂型。 56.一种AHCM剂型，其中，将所述AHCM配制成如下剂型：低于所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中的治疗剂型标准的0.01倍、0.02倍、0.03倍、0.04倍、0.05倍、0.06倍、0.07倍、0.08倍、0.09倍、0.1倍、0.15倍、0.16倍、0.2倍、0.3倍、0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.7倍的剂型。 57.一种AHCM剂型，其中，将所述AHCM配制成如下剂型：高于所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中的治疗剂型标准的1.1倍、1.5倍、1.7倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10倍以上的剂型。 58.一种使试剂向癌症的接近最优化、或使试剂向癌症的递送最优化的方法，所述试剂例如为诊断剂或显像剂，所述方法包括：向受试者给予抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（“AHCM”）；以及任选地，向所述受试者给予所述试剂，其中，所述方法包括下列中的一项或多项：a）所述诊断剂或显像剂的流体动力学直径大于1nm、5nm、或为20-150nm；b）所述试剂为放射性试剂、NMRA试剂、造影剂；或者c）以AHCM给药对所述受试者进行治疗，其中，在给予所述试剂之前至少2天、3天或5天时开始所述AHCM给药；或在给予所述试剂之前1周、2周、3周、4周或5周以上时开始所述AHCM给药。 59.一种用于对抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（AHCM）进行鉴定的方法或测定法，所述方法或测定法包括：将癌细胞或癌症相关细胞与候选试剂接触；对所述候选试剂存在或不存在时所述癌细胞内的变化进行检测，其中，所检测的变化包括下列变化中的一种或多种：活化TGF-β的增减、TGF-β1水平的增减、结缔组织生长因子（CTGF）水平的增减或胶原蛋白（例如胶原蛋白I）水平的增减。 60.如权利要求59所述的方法或测定法，其中，所述候选试剂选自于下列试剂中的一种或多种：肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂（“RAAS拮抗剂”）、血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂（AT阻断剂）、血小板反应素1（TSP-1）抑制剂、转化生长因子β1（TGF-β1）抑制剂或结缔组织生长因子（CTGF）抑制剂。 61.如权利要求59或60所述的方法或测定法，其中，所述候选试剂降低下列中的一项或多项：活化TGF-β、TGF-β1水平、结缔组织生长因子（CTGF）水平或胶原蛋白水平。 62.如权利要求59或60所述的方法或测定法，所述方法或测定法进一步包括如下步骤：将治疗方法或测定法与参比值进行比较；并对治疗值和所述参比值之间的差异进行比较。 63.如权利要求59或60所述的方法或测定法，所述方法或测定法在体外、体内、或两者结合进行。 64.如权利要求59或60所述的方法或测定法，所述方法或测定法包括通过如下方式在体外对所述候选试剂进行评价：将所述候选试剂添加至培养基；并对条件培养基中的活化TGF-β、TGF-β1水平、结缔组织生长因子（CTGF）水平或胶原蛋白水平的增减进行分析。 65.如权利要求59或60所述的方法或测定法，所述方法或测定法包括如下步骤：将所述候选试剂给予动物肿瘤模型；并对所述受试者的活化TGF-β、TGF-β1水平、结缔组织生长因子（CTGF）水平或胶原蛋白水平的增减进行分析。 66.一种将抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（AHCM）单独使用或与癌症治疗剂联合使用以对癌症进行治疗的组合物；或者，单独的、或与癌症治疗剂联合的所述抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂AHCM在对癌症进行治疗中的用途。 67.一种用于治疗癌症的治疗试剂盒，所述试剂盒包含：单独的、或与癌症治疗剂联合的抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（AHCM）；以及说明书。 68.一种用于诊断癌症的诊断试剂盒，所述试剂盒包含：单独的、或与显像剂联合的抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（AHCM）；以及说明书。 69.一种用于对接受抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂（“AHCM”）的受试者进行选择的方法，所述方法包括：基于对改善癌症治疗的递送或效力的需要，对需要接受所述AHCM的受试者进行选择；以及（a）或（b）中任一项、或（a）与（b）两者皆有：（a）向所述受试者给予所述AHCM；或者（b）给予所述癌症治疗，其中，以足以改善所述癌症治疗的递送或效力的剂量给予所述AHCM。

相关申请的交叉引用

根据35U.S.C§119(e)，本申请要求2010年11月18日提交的美国 临时申请序列No.61/415,192和2011年1月31日提交的美国临时申请序 列No.61/438,240的优先权，以引用的方式将其内容各自整体并入本文。

政府支持

本发明是在由美国国立卫生研究院授予的基金号PO1-CA-80124-03 的联邦资助下完成的。美国政府对本发明享有一定的权利。

背景技术

生物医学研究的进展已经使得在临床前和临床环境(setting)中均引 入了数种全身给药的新型分子剂和纳米治疗剂(Jones，D.(2007)Nat Rev  Drug Discov6，174-175；Moghimi，S.M.等，(2005)Faseb J19，311-330)。 尽管这些新试剂作用于独特靶点(提供了针对肿瘤细胞的更高特异性或 改进的药效学特性)，然而由于肿瘤微环境的性质，使它们的效果受到其 递送的限制(Jain，R.K.(1998)Nat Med4，655-657；Sanhai，W.R.等， (2008)Nat Nanotechnol3，242-244)。例如，经FDA批准的聚乙二醇 化脂质体多柔比星(pegylated liposomal doxorubicin)和目前 在进行多种临床试验的溶瘤病毒(oncolytic viruses)代表了两种纳米治 疗剂(nanotherapeutics)，其大小(～100nm)阻碍了它们的瘤内分布和疗 效(Nemunaitis J等，(2001)J Clin Oncol19：289-298)。

对于所有种类的治疗剂，支配全身给药后药物递送的至少两种过程 (即：遍及整个组织的血管运输以及进入组织的跨血管运输)受到肿瘤 中生理屏障的阻碍(Jain，R.K.&Stylianopoulos(2010)Nat Rev Clin Oncol. 139；Chauhan，V.P.等，(2009)Biophysical journal97，330-336)。这些 屏障尤其是对患有促结缔组织增生性(desmoplastic)、纤维化(fibrotic) 肿瘤患者的治疗产生影响，所述肿瘤如胰腺癌(Olive，K.P.等，(2009) Science324，1457-1461)、结直肠癌(Halvorsen，T.B.&Seim，E.(1989) J Clin Pathol42，162-166)、肺癌和乳腺癌(Ronnov-Jessen，L.等，(1996) Physiol Rev76，69-125)。纤维化肿瘤通常具有密集的胶原蛋白网络，所 述胶原蛋白网络使间质(interstitium)中产生小的纤维间(interfibrillar) 间距，以阻滞大于10纳米的颗粒的移动(Netti PA等，(2000)Cancer Res 60：2497-2503；Pluen A等，(2001)Proc Natl Acad Sci USA98：4628-4633； Ramanujan S等，(2002)Biophys J83：1650-1660；以及Brown E等，(2003) Nat Med9：796-800)。这些屏障限制了到达目标癌细胞的药物的量，进 而导致药效很低。

目前，针对克服纳米治疗剂和低分子量药物的这些递送障碍的方法 很有限。因此，对确定新的癌症治疗、尤其是对增强癌症治疗的递送和 分布的新试剂存在需要，所述试剂包括纳米治疗剂(例如，脂质纳米颗 粒或聚合物纳米颗粒以及病毒)、蛋白质药物和核酸药物、以及小分子化 疗剂。

发明内容

本发明部分基于下列发现：氯沙坦(losartan)，一种被批准用于治疗 高血压(高血压，hypertension)的血管紧张素II受体拮抗剂药物，改善 了癌症治疗剂的递送和效力。特别地，发明人发现氯沙坦使胶原蛋白(实 体瘤的间质基质)正常化，并促进化疗剂的分布和/或穿透(penetration)， 所述化疗剂包括高分子量化疗剂(例如，纳米治疗剂)。例如，氯沙坦降 低了癌相关成纤维细胞(CAF)(由乳腺癌活检组织(biopsies)中分离) 中的I型胶原蛋白的水平(例如，降低胶原蛋白产生)，并使得人乳腺肿 瘤、胰腺肿瘤和皮肤肿瘤的促结缔组织增生性小鼠模型中的基质 (stromal)胶原蛋白发生剂量依赖性(dose-dependent)的降低。氯沙坦 还改善了纳米颗粒(例如，溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)和聚乙二醇化脂 质体多柔比星)的分布、疗效和/或穿透。发明人还发现，氯 沙坦促进血管降压和血管正常化，并改善低分子量化疗剂的肿瘤灌注 (tumor perfusion)和递送，从而增强了放射疗法和化疗剂的疗效。

因此，公开了用于改善治疗剂(例如，癌症治疗剂)的递送和/或效 力的方法和组合物。公开了用于通过如下方式治疗或预防癌症(例如， 实体瘤，如促结缔组织增生性肿瘤)的方法和组合物：通过将抗高血压 剂和/或胶原蛋白改性剂(collagen modifying agent)作为单一试剂给予受 试者、或与治疗剂(例如，大小从大的纳米治疗剂至低分子量化疗剂和/ 或氧自由基的癌症治疗剂)联合给予受试者。

因此，在一方面中，本发明的特征在于治疗或预防受试者的过度增 生性病症(hyperproliferative disorder)(例如，癌症)的方法、或改善针 对受试者的治疗(例如，癌症治疗)的递送和/或效力的方法。所述方法 包括：

向所述受试者给予抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂(本文称为 “AHCM”或“AHCM剂”)；以及

任选地，在如下情况下给予所述治疗(例如，癌症治疗)：例如，AHCM 和抗癌剂的剂量足以治疗或预防受试者的所述病症(例如，癌症或肿瘤)、 或足以改善提供给受试者的治疗(例如，癌症治疗)的递送和/或效力。

在一个实施方式中，所述方法包括下列中的一项或多项：

a)基于对改善治疗(例如，癌症治疗)的递送和/或效力的需要，选 择或确定需要接受AHCM的受试者；

b)将所述AHCM、治疗(例如，癌症治疗)、或这两者作为流体动 力学直径(hydrodynamic diameter)大于约1、5、10、15、20、25、30、 35、45、50、75、100、150、200nm，但小于300nm的实体(entity)(例 如，作为纳米颗粒)进行给予；

c)如本文所述，受试者具有治疗高血压(或缺乏治疗)的历史，例 如，在癌症诊断或AHCM用药开始的5天、10天、30天、60天或100 天内，未曾向受试者给予AHCM，例如本文命名的AHCM、或任何AHCM (例如，足以明显降低受试者血压的剂量或亚抗高血压剂量 (sub-anti-hypertensive dose))。在一个实施方式中，受试者在给予AHCM 之前并不是高血压、或已经患有高血压；

d)根据本文所述的给药方案(dosing regimen)对受试者进行治疗， 例如，在给予癌症治疗之前，开始给予AHCM，例如，在癌症治疗前至 少一天、二天、三天、或五天、或一周、二周、三周、四周、五周以上 开始给予AHCM(例如，在癌症治疗前至少两周给予AHCM)；

e)根据本文所述的给药方案提供AHCM和癌症治疗，例如，提供 AHCM为亚抗高血压剂量的第一疗程，继以AHCM为较高剂量(例如， AHCM为标准抗高血压剂量或高于标准抗高血压剂量的剂量)的第二疗 程(例如，其中，在将抵消抗癌治疗的高血压效果的时程中给予所述第 二疗程)；

f)在至少1小时、5小时、10小时或24小时；至少2天、5天、10 天或14天；至少2周、3周、4周、5周或6周；至少2个月、3个月、 4个月、5个月或6个月；或至少1年、2年、3年、4年或5年；或更久 的时间段内，大体上连续地给予所述AHCM；

g)将AHCM与所述治疗(例如，癌症治疗)序贯(sequentially) 给予和/或同时(concurrently)给予。可以以任何顺序给予AHCM和治 疗(以相同或不同剂量)和/或以与治疗重叠的方式给予AHCM。在一个 实施方式中，在治疗前给予AHCM(例如，如步骤d中所述)。在其它实 施方式中，将AHCM和治疗序贯给予并同时给予(例如，在治疗前给予 AHCM(例如，如步骤d中所述)并将其与治疗同时给予)。在又一实施 方式中，首先给予治疗，并在治疗开始后给予AHCM。在同时给予AHCM 和治疗的实施方式中，可以以临床上适当的方式继续所述AHCM和所述 治疗的给予，例如，(i)作为联合治疗进行给予；(ii)在一段治疗期间 内以所述AHCM或所述治疗进行给予；或(iii)以任意顺序的(i)和(ii) 的组合进行给予。

在一个实施方式中，以足以改变(例如，增强)治疗(例如，癌症 治疗)的分布或效力的量给予AHCM。在一些实施方式中，以自身不足 以抑制或阻止(prevent)肿瘤生长、但足以改变(例如，增强)治疗(例 如，癌症治疗)的分布或效力的量给予AHCM。

在实施方式中，以使癌症治疗剂在受试者的肿瘤或肿瘤血管中引起 下列一种或多种变化的剂量给予AHCM：降低胶原蛋白的水平或生成、 降低肿瘤纤维化、提高间质肿瘤的运输、改善肿瘤灌注或增强穿透或扩 散。

在一个实施方式中，AHCM选自于下列试剂中的一种或多种：

血管紧张素II受体阻断剂(AT1阻断剂)；

肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂(“RAAS拮抗剂”)；

血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂；

血小板反应素(thrombospondin)1(TSP-1)抑制剂；

转化生长因子β1(TGF-β1)抑制剂；

结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂；或

上述试剂中两种以上的组合。

除非上下文另有说明，术语“AHCM”可指本文所述的一种或多种 试剂。

所述方法可包含单独的、或与一种或多种癌症治疗联合的一种、两 种或三种以上的AHCM。

在一个实施方式中，AHCM为RAAS拮抗剂。在实施方式中，RAAS 拮抗剂选自于下列试剂中的一种或多种：阿利吉仑(aliskiren， )、瑞米吉仑(remikiren，Ro42-5892)、依那 吉仑(enalkiren，A-64662)、SPP635，或上述试剂的衍生物。

在另一实施方式中，AHCM为AT1抑制剂。在实施方式中，AT1阻 断剂选自于下列试剂中的一种或多种：氯沙坦、坎地沙坦 甲磺酸依普沙坦(eprosartan mesylate，)、 EXP3174、厄贝沙坦L158，809、奥美沙坦(olmesartan， )、沙拉新、替米沙坦(telmisartin，)、缬沙坦 或上述试剂的衍生物。

在又一实施方式中，AHCM为ACE抑制剂。在实施方式中，ACE 抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：贝那普利(benazepril， )、卡托普利依那普利福 辛普利赖诺普利莫昔普 利(moexipril，)、培哚普利喹那普利(quinapril， )、雷米普利群多普利(trandolapril， )，或上述试剂的衍生物。

在又一实施方式中，AHCM为TSP-1抑制剂。在实施方式中，TSP-1 抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：ABT-510、CVX-045、LSKL， 或上述试剂的衍生物。

在一个实施方式中，AHCM为TGF-β1抑制剂，例如，抗TGF-β1 抗体、TGF-β1肽抑制剂。在某些实施方式中，TGF-β1抑制剂选自于下 列试剂中的一种或多种：CAT-192、fresolimumab(GC1008)、LY2157299、 肽144(P144)、SB-431542、SD-208、在美国专利序列号7,846,908和美 国专利申请公开号201I/0008364中描述的化合物，或上述试剂的衍生物。

在又一实施方式中，AHCM为CTGF抑制剂。在某些实施方式中， CTGF抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：DN-9693、FG-3019、和 在欧洲专利申请公开号1839655以及美国专利序列号7,622,454中描述的 化合物，或上述试剂的衍生物。

本文描述的示例性AHCM是非限制性的，例如，本文描述的AHCM 的衍生物可用于本文描述的方法。

AHCM剂量和剂型

本发明的方法使用AHCM来加强治疗(例如，癌症治疗)。

在一个实施方式中，以相当于治疗剂量标准(a standard of care dose) 的剂量给予AHCM。AHCM的治疗剂量标准在本领域是可获得的。例如， 如果AHCM为AT1抑制剂(氯沙坦)，则用于人类抗高血压用途的治疗 剂量标准为约25-100mg/天。在本方法中，可将氯沙坦每日单独口服给予 或与本文描述的癌症治疗联合口服给予(一天一次或两次)。可以以约 12.5mg、25mg、50mg或100mg的剂型(例如，口服片剂)提供氯沙 坦。

对于其它用于人类抗高血压用途或抗心力衰竭用途的AT1抑制剂， 示例性的治疗剂量标准如下：坎地沙坦为4mg/天-32mg/ 天(例如，以含有4mg、8mg、16mg或32mg坎地沙坦的口服剂型的形 式可得)；甲磺酸依普沙坦为400mg/天-800mg/天(例如， 以包含400mg或600mg依普沙坦的口服剂型的形式可得)；厄贝沙坦 为150mg/天-300mg/天(例如，以包含150mg或300mg 厄贝沙坦的口服剂型的形式可得)；奥美沙坦为20mg/天 -40mg/天(以包含5mg、20mg、或40mg奥美沙坦的口服剂型的形式可 得)；替米沙坦为20mg/天-80mg/天(例如，以包含20mg、 40mg、或80mg替米沙坦的口服剂型的形式可得)；以及缬沙坦 为80mg/天-320mg/天(例如，以包含40mg、80mg、160mg 或320mg缬沙坦的口服剂型的形式可得)。

在一个实施方式中，以亚抗高血压剂量给予AHCM(例如，当给予 高血压受试者时，对平均动脉压不具有显著影响的剂量；或低于抗高血 压治疗剂量标准的剂量)。在实施方式中，以大体上不降低受试者平均动 脉压的量给予AHCM，例如，对于给定剂量，在以该剂量给予预定次数 后，例如在稳态血浆水平下进行测量。在实施方式中，至少一次以下述 剂量给予AHCM：使受试者的平均动脉压降低小于1％、5％、10％、15％、 20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％的剂量。在实施方式中，以下 述剂量给予AHCM：使血压的降低小于由该AHCM的抗高血压治疗剂量 标准引起的降低的1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、 45％、50％、60％、70％、80％、90％、或使血压的降低更小的剂量。在 实施方式中，以下述剂量给予AHCM：低于能使受试者的血压进入正常 范围(例如，收缩压为约120且舒张压为约80)的AHCM剂量的1％、 5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、 80％、90％的剂量；或低于能使受试者的血压进入收缩压为120+/-5、舒 张压为80+/-5的范围内的AHCM剂量的1％、5％、10％、15％、20％、 25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％的剂量。

在实施方式中，以下述剂量给予AHCM：低于用于抗高血压用途或 抗心力衰竭用途的治疗剂量标准的剂量(例如，低于用于抗高血压用途 或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准的0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、 0.07、0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7的剂量)。AHCM 的治疗剂量标准在本领域是可获得的。例如，如果AHCM为AT1抑制剂 (氯沙坦)，治疗剂量标准为约25mg/天-100mg/天，次优(suboptimal) 的抗高血压药物可以为0.25-17.5mg/天、0.5-15mg/天、1.3-12mg/天、 1.5-12mg/天、2-12mg/天、2-10mg/天、2-5mg/天、2-3mg/天，通常为2mg/ 天。在一个实施方式中，AHCM为氯沙坦，并将其以低于25mg/天、20mg/ 天、15mg/天、10mg/天、5mg/天、4mg/天、3mg/天、2mg/天、1mg/天的 剂量给予。可单独地、或与本文所述的癌症治疗剂联合，每日以2-3mg/ 天的亚抗高血压剂量口服给予氯沙坦(每天一次或两次)。对于其它AT1抑制剂，示例性的治疗剂量标准如下：坎地沙坦为4mg/ 天-32mg/天；甲磺酸依普沙坦为400mg/天-800mg/天； 厄贝沙坦为150mg/天-300mg/天；奥美沙坦为20mg/天-40mg/天；替米沙坦为20mg/天-80mg/天； 以及缬沙坦为80mg/天-320mg/天。在实施方式中，以下述 剂量给予AHCM：低于抗高血压用途或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准 的剂量(例如，对于其它AT1抑制剂(如坎地沙坦、依普沙坦(eprosartan)、 厄贝沙坦、奥美沙坦、替米沙坦和缬沙坦)，为低于抗高血压用途或抗心 力衰竭用途的治疗剂量标准的0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、 0.08、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7的剂量)。

在某些实施方式中，将所述AHCM配制成如下剂型：低于抗高血压 或抗心力衰竭的治疗剂型标准的剂型(例如，低于治疗剂型标准(standard  of care dosage form)的0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、 0.09、0.1、0.15、0.16、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7的剂型)。例如， 如果AHCM为氯沙坦，剂型可为约0.5mg-11mg、1mg-10mg、1mg-5mg， 或1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg或10mg。在 一些实施方式中，可以以低于12.5mg(例如，约0.1mg、约0.2mg、约 0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、 约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、 约9mg、约10mg、约11mg、或约12mg)的剂型(例如，口服片剂)提 供氯沙坦。

在一个实施方式中，将AHCM配制成片剂(例如，口服片剂)。在 其它实施方式中，将AHCM配制成用于其它给药途径，例如，皮下给药 或静脉内给药。

在一些实施方式中，AHCM的亚抗高血压剂量或AHCM的低于用于 抗高血压用途或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准的剂量可为下述剂量： 将该剂量的AHCM单独给予受试者时，不足以抑制或阻止肿瘤生长或发 展。

在又一实施方式中，以下述剂量给予AHCM：高于用于抗高血压用 途或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准的剂量(例如，高于抗高血压用途 或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准的1.1、1.5、1.7、2、3、4、5或10 倍以上的剂量)。AHCM的治疗剂量标准在本领域是可获得的；在本文中 对其中一些进行了举例。

在其它实施方式中，将所述AHCM配制成如下剂型：高于抗高血压 或抗心力衰竭的治疗剂型标准的剂型(例如，高于所述治疗剂型标准的 1.1、1.5、1.7、2、3、4、5或10倍以上的剂型)。AHCM的治疗剂型标 准在本领域是可获得的；在本文中对其中一些进行了举例。

在一些实施方式中，相当于或高于抗高血压或抗心力衰竭治疗剂量 标准的AHCM剂量可为下述剂量：将该剂量的AHCM单独给予受试者 时，不足以抑制或阻止肿瘤生长或发展。

在其它实施方式中，相比于参考剂量(例如说明书(package insert) 上的剂量、治疗剂量标准、或最大耐受剂量(MTD))，以较大的剂量、 或使得抗癌剂水平较高的方案给予抗癌剂。

在某些实施方式中，相比于参考剂量(例如，说明书上的剂量、治 疗剂量标准、或MTD)，以较小的剂量、或使得抗癌剂水平较低的方案 给予抗癌剂。在一些实施方式中，给予下述量的抗癌剂：当单独给予该 量的抗癌剂时，对于抑制或阻止肿瘤生长或发展无效；但将该量的抗癌 剂与AHCM联合给药时，足以抑制或阻止肿瘤生长或发展。

在一些实施方式中，当与AHCM联合给药时，将癌症治疗或癌症治 疗剂以下述剂量给予受试者：低于在无AHCM存在的情况下用于对受试 者的癌症进行治疗或预防的最低剂量的剂量。

在一些实施方式中，当向受试者给予AHCM和癌症治疗或癌症治疗 剂这两者时，所述抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂的剂量可为下述剂 量：低于用于对高血压相关病症或心力衰竭进行治疗的最低剂量的剂量； 而所述癌症治疗或癌症治疗剂的剂量可为下述剂量：低于在无AHCM存 在的情况下用于对受试者的癌症进行治疗或预防的最低剂量的剂量。

在一些实施方式中，当给予受试者的癌症治疗或癌症治疗剂的剂量 低于单独用于治疗癌症患者的最低剂量时，作为佐药(adjuvant)给予受 试者的AHCM试剂的剂量可低于单独用于治疗癌症时的最低剂量。在此 类实施方式中，作为佐药给予受试者的AHCM试剂的剂量可为亚抗高血 压剂量、或者可为相当于或高于用于治疗高血压或心力衰竭的治疗剂量 标准的剂量。

在一些实施方式中，当给予受试者的癌症治疗或癌症治疗剂的剂量 低于在无AHCM存在的情况下用于治疗癌症患者的最低剂量时，作为佐 药给予受试者的AHCM试剂的剂量可低于单独用于治疗癌症时的最低剂 量，但该剂量足以改善癌症治疗的效力或癌症治疗剂向肿瘤的递送。在 此类实施方式中，作为佐药给予受试者的AHCM试剂的剂量可为亚抗高 血压剂量、或者可为相当于或高于用于治疗高血压或心力衰竭的治疗剂 量标准的剂量。

测定任何试剂(例如，抗癌剂和/或AHCM)用于治疗的最低剂量的 方法是本领域技术人员所熟知的。例如，本领域技术人员可以通过例如 给予动物不同剂量的AHCM和/或抗癌剂并监测相比于对照的肿瘤生长， 来测定AHCM和/或抗癌剂在相当于特定类型癌症的动物模型中对治疗 有效的最低剂量。对照可以是以单独的抗癌剂(即，在不存在AHCM的 情况下)进行治疗的动物。

如本文所述，可以通过例如序贯给予和/或同时给予的方式联合给予 所述AHCM和治疗(例如，癌症治疗)。可以以任意顺序给予所述AHCM 和治疗(以相同剂量或不同剂量)和/或以与治疗重叠的方式给予AHCM。 在一个实施方式中，在治疗之前给予AHCM。在其它实施方式中，将 AHCM和治疗序贯给予并同时给予(例如，在治疗前给予AHCM并将其 与治疗同时给予)。在又一实施方式中，先给予癌症治疗，并在所述癌症 治疗开始后给予AHCM。在同时给予AHCM和治疗的实施方式中，可以 下述临床上适当的方式继续所述AHCM和所述癌症治疗的给予：(i)作 为联合治疗进行给予；(ii)在一段治疗期间内以所述AHCM或所述癌症 治疗进行给予；或(iii)以任意顺序的(i)和(ii)的组合进行给予。

AHCM的给予可为大体上连续的。例如，AHCM的给予可在至少1 小时、5小时、10小时、24小时；2天、5天、10天、14天；或更长的 时间内为大体上连续的。

在其它实施方式中，所述AHCM的给予可为间歇性(intermittent) 的，例如，可在疗程中具有预定间隔的间断。在某些实施方式中，可单 独给予或与治疗(例如，癌症治疗)联合给予两剂或更多剂AHCM。在 一个实施方式中，在疗程中以次优抗高血压剂量和抗高血压剂量给予 AHCM。例如，可在治疗(例如，癌症治疗)(例如，以提高平均动脉压 的抗癌剂进行的治疗，例如，以抗血管生成药物(例如，阿瓦斯汀 (Avastin)、舒尼替尼(sunitinib)或索拉非尼(sorafenib))进行的治疗) 之前或治疗之时给予次优抗高血压剂量的AHCM；继以第二个高血压剂 量的AHCM。

治疗剂实体的大小

本文所述的方法使得在所使用或选定的治疗模式(treatment  modalities)的范围内，例如在治疗剂实体的大小方面，得到增强的灵活 性。因此，在一个实施方式中，将AHCM以流体动力学直径大于约1nm、 5nm、10nm、100nm、500nm、或1000nm的实体的形式进行给予。例如， 所述AHCM可为蛋白质(例如，抗体)。所述AHCM也可以纳米颗粒的 形式(例如，聚合物纳米颗粒或脂质体)进行给予，所述纳米颗粒包含 有作为小分子治疗剂或蛋白质(例如，抗体)的AHCM。

在实施方式中，癌症治疗为癌症治疗剂(在本文中也称为“抗癌剂”)， 或者将第二治疗剂以流体动力学直径大于约1nm、5nm、10nm、20nm、 50nm、75nm、100nm、150nm、200nm、500nm、或1,000nm的实体的形 式给予。例如，所述抗癌剂可为蛋白质(例如，抗体)。也可将所述抗癌 剂以纳米颗粒(例如聚合物纳米颗粒或脂质体)的形式进行给予，所述 纳米颗粒包含有作为小分子治疗剂(即，流体动力学直径为约1nm以下 的分子)或蛋白质(例如，抗体)的抗癌剂。

在实施方式中，将AHCM以流体动力学直径大于约1nm(例如，大 于约1nm、5nm、10nm、20nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm、 500nm、或1,000nm)的实体的形式进行给予，并将抗癌剂以流体动力学 直径为约1nm以下的实体的形式进行给予。在一个实施方式中，所述 AHCM存在于无化疗剂的实体中。可将AHCM制成缓释型，例如，用于 大体上连续释放数小时、数天、数周、数月或数年的缓释制剂。

在实施方式中，将AHCM以流体动力学直径为约1nm以下的实体的 形式进行给予，并将抗癌剂以流体动力学直径为约1nm以上(例如，大 于约1nm、5nm、10nm、20nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm、 500nm、或1,000nm)的实体的形式进行给予。

在实施方式中，将AHCM以流体动力学直径小于或等于约1nm的实 体的形式进行给予，并将抗癌剂以流体动力学直径小于约1nm的实体的 形式进行给予。

在实施方式中，将AHCM以流体动力学直径大于约1nm(例如，大 于约1nm、5nm、10nm、20nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm、 500nm、或1,000nm)的实体的形式进行给予，并将抗癌剂以流体动力学 直径大于约1nm(例如，大于约1nm、5nm、10nm、20nm、50nm、75nm、 100nm、150nm、200nm、500nm、或1,000nm)的实体的形式进行给予。 所述AHCM和抗癌剂可以处于不同实体或同一实体中。例如，如果以不 同实体提供，可将AHCM作为第一纳米颗粒提供，并将抗癌剂作为第二 纳米颗粒提供(例如，在所述第二纳米颗粒具有不同于第一纳米颗粒的 结构特性(例如，大小或组成)或功能特性(例如，释放动力学或药效 学特性)的情况下)。或者，可在同一实体(例如，在同一纳米颗粒中) 上提供AHCM和抗癌剂。

在实施方式中，AHCM选自于具有下列流体动力学直径的治疗剂实 体：等于或小于1nm或2nm；2-20nm、10-25nm、20-40nm、40-150nm、 50-150nm；10-100nm、15-100nm、20-100nm、25-100nm、35-100nm、 40-100nm、45-100nm、50-100nm；10-200nm、15-200nm、20-200nm、 25-200nm、35-200nm、40-200nm、45-200nm、50-200nm；10-500nm、 15-500nm、20-500nm、25-500nm、35-500nm、40-500nm、45-500nm、 50-500nm、75-500nm、100-500nm、150-500nm、200-500nm、300-500nm； 10-1000nm、15-1000nm、20-1000nm、25-1000nm、35-1000nm、40-1000nm、 45-1000nm、50-1000nm、75-1000nm、100-1000nm、150-1000nm、 200-1000nm、300-1000nm；或10nm、15nm、20nm、25nm、35nm、45nm、 50nm、75nm、100nm、150nm或200nm。

在实施方式中，AHCM为：小分子治疗剂；蛋白质(例如，抗体)； 或在纳米颗粒中提供。

在实施方式中，抗癌剂或第二治疗剂选自于具有下列流体动力学直 径的治疗剂实体：等于或小于1nm或2nm；2-20nm、10-25nm、20-40nm、 40-150nm、50-150nm；10-100nm、15-100nm、20-100nm、25-100nm、 35-100nm、40-100nm、45-100nm、50-100nm；10-200nm、15-200nm、 20-200nm、25-200nm、35-200nm、40-200nm、45-200nm、50-200nm； 10-500nm、15-500nm、20-500nm、25-500nm、35-500nm、40-500nm、 45-500nm、50-500nm、75-500nm、100-500nm、150-500nm、200-500nm、 300-500nm；10-1000nm、15-1000nm、20-1000nm、25-1000nm、35-1000nm、 40-1000nm、45-1000nm、50-1000nm、75-1000nm、100-1000nm、 150-1000nm、200-1000nm、300-1000nm；或10nm、15nm、20nm、25nm、 35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、150nm或200nm。

在实施方式中，抗癌剂为：流体动力学直径为1nm或更小的小分子 治疗剂；蛋白质(例如，抗体)；或在纳米颗粒中提供。

在实施方式中，所述AHCM或者抗癌剂或第二治疗剂可以各自独立 地以具有下列大小范围(以nm计)的实体的形式提供：小于或等于1nm、 或为0.1-1.0nm的流体动力学直径，例如，典型的小分子的流体动力学直 径；5-20nm、或5-15nm的流体动力学直径，例如，蛋白质(例如，抗体) 的流体动力学直径；或10-5,000nm、20-1,000nm、10-500nm、10-200nm、 10-150nm、或10-100nm、10-25nm、20-40nm、40-150nm、50-150nm； 10-100nm、15-100nm、20-100nm、25-100nm、35-100nm、40-100nm、 45-100nm、50-100nm；10-200nm、15-200nm、20-200nm、25-200nm、 35-200nm、40-200nm、45-200nm、50-200nm；10-500nm、15-500nm、 20-500nm、25-500nm、35-500nm、40-500nm、45-500nm、50-500nm、 75-500nm、100-500nm、150-500nm、200-500nm、300-500nm；以及 10-1000nm、15-1000nm、20-1000nm、25-1000nm、35-1000nm、40-1000nm、 45-1000nm、50-1000nm、75-1000nm、100-1000nm、150-1000nm、 200-1000nm、300-1000nm；或10nm、15nm、20nm、25nm、35nm、45nm、 50nm、75nm、100nm、150nm或200nm的流体动力学直径，例如，典型 的纳米颗粒的范围。

受试者

本文所述的方法可用于对具有本文定义的特征或需要的受试者进行 治疗。在实施方式中，根据本文所述的特征选择受试者或受试者的治疗。 在一个实施方式中，本文所述的方法允许对患者和治疗进行最优化选择。

在一些实施方式中，可在对受试者进行本文所述的方法的任何方面 之前选择或确定受试者。

在一个实施方式中，选择或确定在最优化治疗的基础上存在接受 AHCM需要的受试者，例如，对改善治疗(例如，癌症治疗)递送和/ 或效力的需要。

在一个实施方式中，在AHCM治疗开始时、或在对进行AHCM给 药的患者进行选择时，受试者并不患有高血压、或未对高血压进行治疗。

在实施方式中，在癌症诊断或AHCM用药开始的5天、10天、30 天、60天或100天内，并未向受试者(例如，患者)给予一定剂量的AHCM (例如，本文命名的AHCM、或任何AHCM)。

在实施方式中，根据对AHCM的需要对受试者(例如，具有正常血 压或低血压的受试者)进行选择或确定，例如，选择或确定在最优化治 疗基础上存在接受AHCM需要的受试者(例如，对改善所述治疗(例如， 癌症治疗)的递送和/或效力的需要)。

在一些实施方式中，基于对改善癌症治疗的递送或效力的需要、或 基于对最优化治疗的需要，存在接受AHCM需要的受试者为对单独的癌 症治疗产生部分响应或不响应的受试者。

在实施方式中，根据AHCM优化癌症治疗(例如，改善所述癌症治 疗的递送和/或效力)的能力，选择AHCM来对受试者进行治疗。

在实施方式中，治疗的受试者并非高血压患者，例如，并不具有高 血压病史、或未用抗高血压剂进行过治疗。在一个实施方式中，治疗的 受试者具有正常的平均动脉压或低的平均动脉压。在其它实施方式中， 治疗的受试者未曾经历、或未进行抗高血压治疗。

在一个实施方式中，受试者需要癌症治疗。在另一实施方式中，受 试者需要或被考虑给予抗癌症治疗(例如，以本文所述的任何抗癌症治 疗剂进行的治疗)。在某些实施方式中，所述方法包括确定患者是否患有 癌症(例如，实体瘤癌症或纤维化癌症)的步骤；以及针对上述确定的 结果给予AHCM和抗癌剂的步骤。

在其它实施方式中，受试者处于癌症发展或癌症复发的风险中，例 如，有瘤前病变(pre-neoplasia)或癌症遗传易感性的受试者(例如，具 有BRCA1突变的受试者；或用辅助治疗(adjuvant setting)(例如，以他 莫昔芬)进行治疗的乳腺癌患者)。

在其它实施方式中，受试者患有早期癌症、或进一步发展的(例如， 中期)癌症、或转移性癌症。

在一个实施方式中，受试者具有选自于下列一种或多种的实体纤维 化肿瘤：胰腺癌(pancreatic cancer)(例如，胰腺腺癌(pancreatic  adenocarcinoma))、乳腺癌、结直肠癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小 细胞肺癌)、皮肤癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌、胃肠癌(例如，类癌 (carcinoid)或基质癌)、胃癌、头颈部癌、肾癌、或肝癌，或所述癌症 的转移病灶(metastatic lesion)。在其它实施方式中，所述受试者有过度 增生性癌状态(cancerous condition)(例如，良性状态、恶性肿瘤前状态 (pre-malignant condition)或恶性肿瘤状态(malignant condition))。受 试者可为处于患病风险中的受试者，例如，其亲属患有所述病症的受试 者、或具有与所述病症患病风险相关的遗传特性(genetic trait)的受试 者。在一个实施方式中，所述受试者可以为有症状的或无症状的。在实 施方式中，受试者的致癌基因或基因产物中存在变化。在实施方式中， 受试者为正在接受癌症治疗(例如，相同或其它的抗癌剂、手术和/或放 射)的患者。在实施方式中，受试者为已接受过癌症治疗(例如，其它 的抗癌剂、手术和/或放射)的患者。在一个实施方式中，所述受试者未 曾接受过癌症治疗。

在一个实施方式中，所述受试者为患有转移性癌症的患者，例如， 本文公开的癌症(胰腺癌(例如，胰腺腺癌)、乳腺癌、结直肠癌、肺癌 (例如，小细胞肺癌或非小细胞肺癌)、皮肤癌、卵巢癌、或肝癌中的一 种或多种)的转移性形式。

在一个实施方式中，所述受试者为患有难治性(treatment-resistant) 癌症或过度增生性病症的患者。

在一些实施方式中，选定的用来接受本文的方法或药物组合物的受 试者并不患有肾病或肾脏相关的疾病。

在一个实施方式中，治疗的受试者为哺乳动物，例如，灵长类动物， 通常为人类(例如，患有本文所述的癌症或肿瘤、或处于所述癌症或肿 瘤患病风险中的患者)。

在一个实施方式中，治疗的受试者患有过度增生性病症，例如，过 度增生性结缔组织病症(例如，过度增生性纤维化疾病)。在一个实施方 式中，所述过度增生性纤维化疾病是多系统的或器官特异性的。示例性 的过度增生性纤维化疾病包括但不限于：多系统病症(例如，全身性硬 化症、多灶性纤维硬化症(multifocal fibrosclerosis)、骨髓移植受者中的 硬皮病样移植物抗宿主病(sclerodermatous graft-versus-host disease)、肾 源性(nephrogenic)系统性纤维化、硬皮病)和器官特异性病症(例如， 肺、肝、心脏、肾、胰腺、皮肤及其它器官的纤维化)。

在其它实施方式中，治疗的受试者患有过度增生性遗传病症，例如， 选自于Marfan氏综合征或Loeys-Dietz综合征的过度增生性遗传病症。

在其它实施方式中，所述过度增生性病症(例如，过度增生性纤维 化病症)选自于下列中的一种或多种：慢性阻塞性肺病、哮喘、主动脉 瘤、辐射诱导的纤维化、骨骼肌肌病、糖尿病肾病、和/或关节炎。

联合治疗

在一个实施方式中，将AHCM与治疗、例如，癌症治疗(例如，一 种或多种抗癌剂、手术和/或放射)联合给予。术语“化学治疗剂/化疗剂 (chemotherapeutic/chemotherapeutic agent)”和“抗癌剂”在本文中可互 换使用。AHCM和癌症治疗的给予可以是序贯的(重叠或不重叠)或同 时的。可在治疗(例如，癌症治疗)过程中连续或间歇地进行AHCM的 给药。

在实施方式中，在开始给予癌症治疗之前开始AHCM给药，例如， 在癌症治疗前至少1天、2天、3天或5天、或1周、2周、3周、4周或 5周以上开始AHCM给药(例如，在癌症治疗前最少两周给予AHCM)。 在实施方式中，在癌症治疗开始前不超过5天、10天、20天、30天、60 天或120天时开始AHCM给药。在实施方式中，在癌症治疗前开始AHCM 给药；并且，在达到标准(例如，基于时间的标准(例如，给予AHCM 预定天数或预定AHCM给药次数))时才开始所述癌症治疗。在实施方 式中，所述标准为达到预先选定的AHCM水平，例如，在血清或血浆中 的预先选定水平。在一个实施方式中，所述标准为生物标记物在血浆或 血清中达到预先选定的水平，所述生物标记物包括但不限于：胶原蛋白I、 胶原蛋白III、胶原蛋白IV、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长 因子(CTGF)、或血小板反应素1(TSP-1)。在另一实施方式中，所述 标准为肿瘤形态变化达到预先选定的水平。

在一个实施方式中，如本文所述，所述AHCM给药与治疗(例如， 癌症治疗)为序贯进行和/或同时进行的。

在实施方式中，在受试者接受癌症治疗的预先选定时间段中给予 AHCM、或维持预先选定水平的AHCM(例如，AHCM的血浆水平)。 举例而言，在给予癌症治疗的整个期间、或在受试者中存留有预先选定 水平的抗癌剂的整个期间中维持AHCM治疗。

通常，在整个癌症治疗计划期间都持续AHCM治疗。在又一实施方 式中，在癌症治疗停止前中止AHCM给药。在其它实施方式中，在癌症 治疗停止后继续进行AHCM给药。

在实施方式中，单独给予、或与癌症治疗联合给予两剂或更多剂 AHCM。在一个实施方式中，在疗程中以亚抗高血压剂量和抗高血压剂 量给予所述AHCM。例如，可在癌症治疗(例如，以提高平均动脉压的 抗癌剂进行的治疗，例如，以抗血管生成药物(例如，阿瓦斯汀、舒尼 替尼或索拉非尼)进行的治疗)之前或治疗之时给予亚抗高血压剂量的 AHCM；继以后续的高血压剂量的AHCM。

在一个实施方式中，在下列时间内或至少下列时间内大体上连续给 予AHCM(单独给予或联合给予)：15分钟、30分钟、45分钟；或1小 时、5小时、10小时、24小时；2天、5天、10天、14天；3周、4周、 5周、6周、7周、8周；2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个 月、8个月、9个月、10个月、11个月；1年、2年、3年、4年、5年； 或更久的时间。在一个实施方式中，将所述AHCM以缓释制剂进行给予。 在某些实施方式中，将AHCM配制成用于连续递送，例如，口服连续递 送、皮下连续递送或静脉内连续递送。在一个实施方式中，经由可植入 装置(例如，泵(例如，皮下泵)、植入物或储库剂(depot))给予AHCM。 可对所述递送方法进行优化，使得在预定的时期内(例如，下列时间内 或至少下列时间：15分钟、30分钟、45分钟；1小时、5小时、10小时、 24小时；2天、5天、10天、14天；3周、4周、5周、6周、7周、8 周；2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、 10个月、11个月；1年、2年、3年、4年、5年；或更久的时间)，在受 试者中给予和/或维持如本文所述的AHCM剂量(例如，标准剂量、亚高 血压剂量或高于标准剂量的剂量)。AHCM大体上连续的或延长的释放递 送或制剂(有或者没有化学治疗)可用于在数小时、数天、数周、数月 或数年里对癌症进行预防或治疗。在一个实施方式中，所述癌症治疗选 自于下列中的一种或多种：纳米治疗(例如，病毒癌症治疗剂(例如， 溶瘤单纯疱疹病毒(HSV))、脂质纳米颗粒(例如，脂质体制剂(例如， 聚乙二醇化脂质体多柔比星))、或聚合物纳米颗粒)；结合至 癌症靶点的抗体；RNAi或反义RNA试剂；化疗剂(例如，细胞毒素剂 或细胞生长抑制剂(cytostatic agent))；放射；或手术；或上述治疗的任 意组合。下文提供了可用于与AHCM联合的抗癌治疗的其它实例。

在其它实施方式中，所述AHCM和/或治疗(例如，癌症治疗或过度 增生治疗)与促纤维化途径(例如，依赖于或不依赖于TGF-β和/或CTGF 活化的途径)的抑制剂(“促纤维化途径抑制剂”)联合给予。在一个实 施方式中，所述AHCM和/或癌症治疗与下列试剂中的一种或多种联合给 予：内皮素1抑制剂、PDGF抑制剂、Wnt/β-连环蛋白(catenin)抑制剂、 IGF-1抑制剂、TNF-α抑制剂、和/或IL-4抑制剂。在另一实施方式中， 所述AHCM和/或癌症治疗与内皮素1抑制剂和/或PDGF抑制剂联合给 予。在其它实施方式中，所述AHCM和/或癌症治疗与下列一种或多种试 剂的抑制剂联合给予：4型趋化因子受体(CXCR4)(例如，AMD3100、 MSX-122)；基质细胞衍生因子1(SDF-1)(例如，鞣酸)；hedgehog(例 如，GDC-0449、环巴胺或GANT58)。

AHCM、癌症治疗和/或纤维化途径抑制剂的给药可为序贯的(有或 没有重叠)或同时的(例如，如本文所述)。

癌症治疗

在一个实施方式中，所治疗的癌症为上皮恶性肿瘤、间充质恶性肿 瘤或血液恶性肿瘤。在实施方式中，所治疗的癌症为实体瘤(例如，类 癌、癌(carcinoma)或肉瘤(sarcoma))、软组织肿瘤(例如，血红素恶 性肿瘤(heme malignancy))、以及转移病灶(例如，本文公开的任何癌 症的转移病灶)。在一个实施方式中，所治疗的癌症为纤维化实体瘤或促 结缔组织增生性实体瘤，例如，所治疗的癌症为具有下列一种或多种特 征的肿瘤：受限的肿瘤灌注、受压迫的血管、或纤维化的肿瘤间质。在 一个实施方式中，所述实体瘤选自于下列中的一种或多种：胰腺癌(例 如，胰腺腺癌)、乳腺癌、结直肠癌、肺癌(例如，小细胞肺癌或非小细 胞肺癌)、皮肤癌、卵巢癌、或肝癌。本文在下文中提供了所治疗的癌症 的其它实例。

在另一实施方式中，所述AHCM与癌症治疗(例如，一种或多种抗 癌剂、手术和/或放射)联合给予。在一个实施方式中，所述癌症治疗包 括下列中的一种或多种：癌症治疗剂，包括例如纳米治疗(例如，一种 或多种纳米治疗剂，包括病毒癌症治疗剂(例如，溶瘤单纯疱疹病毒 (HSV))、脂质纳米颗粒(例如，聚乙二醇化脂质体多柔比星)、 或聚合物纳米颗粒)；一种或多种癌症治疗抗体(例如，抗HER2抗体、 抗EGFR抗体、抗CD20抗体)；RNAi和反义RNA试剂；一种或多种化 疗剂(例如，低分子量化疗剂，包括细胞毒素剂或细胞生长抑制剂)；放 射；或者手术；或者上述治疗的任意组合。可使用一种或多种AHCM与 一种或多种治疗模式的任意组合，(例如，第一、第二、第三)纳米治疗 剂、抗体试剂、低分子量化疗剂、放射。示例性的癌症治疗剂包括但不 限于：纳米治疗剂(例如，一种或多种脂质纳米颗粒(例如，脂质体制 剂(例如，聚乙二醇化脂质体多柔比星或脂质体紫杉醇(例 如，))、或聚合物纳米颗粒)；一种或多种低分子量化疗剂(例 如，吉西他滨(gemcitabine)、顺铂、表柔比星(epirubicin)、5-氟尿嘧 啶、紫杉醇(paclitaxel)、奥沙利铂、或亚叶酸(leucovorin))；一种或多 种抗癌症靶点(例如，生长因子受体如HER-2/neu、HER3、VEGF)抗 体；一种或多种酪氨酸激酶抑制剂，例如，包括低分子量试剂和抗体试 剂，如舒尼替尼、厄洛替尼(erlotinib)、吉非替尼(gefitinib)、索拉非 尼、埃克替尼(icotinib)、拉帕替尼(lapatinib)、来那替尼(neratinib)、 凡德他尼(vandetanib)、BIBW2992或XL-647、抗EGFR抗体(例如， 西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab)、扎芦木单抗 (zalutumumab)、尼妥珠单抗(nimotuzumab)、奈昔木单抗(necitumumab) 或马妥珠单抗(matuzumab))。下文描述了用于联合治疗的化疗剂的额外 实例。

在一个实施方式中，与AHCM联合使用的化疗剂为细胞毒素剂或细 胞生长抑制剂。示例性的细胞毒素剂包括抗微管剂、拓扑异构酶抑制剂 (例如，伊立替康(irinotecan))、或紫杉烷类(例如，多西他赛)、抗代 谢物、有丝分裂抑制剂、烷化剂、嵌入剂(intercalating agents)、能够干 扰信号转导通路的试剂、促进凋亡以及放射的试剂。在其它实施方式中， 所述方法可与免疫调节剂(例如，IL-1、IL-2、IL-4、IL-6或IL-12、或 干扰素α或干扰素γ、或免疫细胞生长因子如GM-CSF)联合使用。

在一个实施方式中，在病症活跃(active disorder)期间、或在病症 缓解(remission)或较不活跃期间，将AHCM单独地、或与本文所述的 一种或多种癌症治疗联合进行给予，以用于癌症预防(例如，单独给予 或与癌症预防剂联合给予)。可在治疗或预防前、与治疗或预防同时、在 治疗或预防后，或在病症缓和期间，将AHCM单独地、或与本文所述的 一种或多种癌症治疗联合进行给予，以预防癌症。在一个实施方式中， 将所述癌症治疗与AHCM同时给予、序贯给予、或以两者联合的形式进 行给予。

在一个实施方式中，将所述AHCM单独给予或与癌症预防剂联合给 予，例如，以在高风险受试者(例如，患有瘤前病变或具有癌症遗传易 感性的受试者(例如，具有BRCA1突变的受试者)；或以他莫昔芬进行 治疗的乳腺癌患者)中对癌症进行治疗或预防。

在一些实施方式中，单独的、或与癌症治疗联合的AHCM为对癌症 的第一线治疗(first line treatment)，例如，在之前未给予用来治疗癌症 的另一药物的受试者中使用所述AHCM。

在其它实施方式中，单独的、或与癌症治疗联合的AHCM为对癌症 的第二线治疗，例如，在之前已给予用来治疗癌症的另一药物的受试者 中使用所述AHCM。

在其它实施方式中，单独的、或与癌症治疗联合的AHCM为对癌症 的第三线治疗、第四线治疗、或多于第四线的治疗，例如，在之前已给 予了两种、三种、或超过三种用来治疗癌症的其它药物的受试者中使用 所述AHCM。

在其它实施方式中，将所述AHCM作为附属治疗(adjunct therapy) 给予，例如，除主要治疗以外的治疗。

在一个实施方式中，将所述AHCM作为辅助治疗(adjuvant therapy) 给予。

在其它实施方式中，将所述AHCM作为新辅助治疗(neoadjuvant  therapy)给予。

在一些实施方式中，在癌症的手术切除/除去之前或之后向受试者给 予所述AHCM。

在一些实施方式中，在癌症的放射治疗之前、期间或之后向受试者 给予所述AHCM。

在一些实施方式中，向受试者(例如即将接受、正在接受、或已经 接受癌症治疗(例如，用化疗剂进行的治疗、放射治疗和/或手术)的癌 症患者)给予所述AHCM。

在其它实施方式中，在所述癌症治疗之前给予所述AHCM。在其它 实施方式中，所述AHCM与所述癌症治疗同时给予。在其它实施方式中， 在癌症治疗之前并与癌症治疗同时给予所述AHCM。在同时给予的情况 下，可在所述癌症治疗终止后继续给予所述AHCM。

在其它实施方式中，将所述AHCM与所述癌症治疗序贯给予。例如， 可在以癌症治疗进行治疗开始前、或在癌症治疗终止后给予AHCM。在 一个实施方式中，所述AHCM给药与癌症治疗重叠、并在癌症治疗终止 后继续。在一个实施方式中，将所述AHCM同时给予、序贯给予、或以 同时给药的组合(a combination of concurrent administration)进行给予， 然后进行癌症治疗或AHCM的单一治疗(monotherapy)。

在一个实施方式中，所述方法包括将AHCM作为第一治疗剂进行给 予，随后给予癌症治疗(例如，以第二治疗剂进行的治疗、放射治疗和/ 或手术)。在另一实施方式中，所述方法包括先给予癌症治疗(例如，以 第一治疗剂进行的治疗、放射治疗和/或手术)，随后给予AHCM作为第 二治疗剂。在其它实施方式中，所述方法包括将AHCM与第二治疗剂、 第三治疗剂或更多其它治疗剂(例如，本文所述的抗癌剂)联合给予。

可将本文所述的AHCM和/或抗癌剂对受试者进行全身给药(例如， 口服给药、胃肠外给药、皮下给药、静脉内给药、直肠给药、肌内给药、 腹膜内给药、鼻内给药、经皮给药、或通过吸入器或腔内装置(intracavitary  installation)给药)。通常，口服给予AHCM。在某些实施方式中，瘤内 给予(例如，经由溶瘤病毒)所述AHCM和/或抗癌剂。

在一些实施方式中，将所述AHCM作为药物组合物进行给予，所述 药物组合物包含一种或多种AHCM、和药学上可接受的赋形剂。

在实施方式中，所述AHCM在组合物中给予、或所述AHCM存在 于组合物中，例如药物组合物(例如，同一纳米颗粒组合物)。

在其它实施方式中，将所述AHCM和癌症治疗以不同的组合物(例 如，药物组合物(例如，纳米颗粒组合物))进行给予。在其它实施方式 中，将所述AHCM和癌症治疗分别、但经由同一途径进行给予(例如， 均为口服给予或均为静脉内给予)。在一些实施方式中，所述AHCM和 癌症治疗经由不同途径给予(例如，口服给予AHCM而静脉内给予癌症 治疗剂)。在其它情况中，将AHCM和癌症治疗在同一组合物(例如， 药物组合物)中进行给予。

监测受试者

本发明的方法可进一步包括对受试者进行监测的步骤，例如，监测 下列一种或多种指标的变化(例如，增加或减少)：肿瘤大小；转化生长 因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、或血小板反应素1(TSP-1) 中的一种或多种的水平或信号；肿瘤胶原蛋白I水平；纤维化的量，间 质压力(interstitial pressure)；血浆生物标记物或血清生物标记物，例如， 胶原蛋白I、胶原蛋白III、胶原蛋白IV、TGF-β1、CTGF、TSP-1；一种 或多种癌症标记物的水平；新病变出现、代谢、缺氧演化(hypoxia  evolution)的速度；新疾病相关症状的出现；组织块的大小，例如，减 小或稳定；生活质量，例如，疾病相关疼痛的程度；组织学分析、小叶 模式(lobular pattern)、和/或有丝分裂细胞存在与否；肿瘤侵袭性、原发 肿瘤的血管化、转移扩散；可使用多模式成像技术(multimodal imaging  techniques)观察的肿瘤大小和位置；或与临床结果(clinical outcome) 相关的任何其它参数。可在下列时期的一个或多个中对受试者进行监测： 治疗开始之前；治疗期间；或已经给予一种或多种治疗要素之后。监测 可用于评价对用同一AHCM单独或与同一抗癌剂联合进行进一步治疗的 需求、或用于评价对用额外的试剂进行额外治疗的需求。通常，上述一 种或多种参数的降低表明受试者状况改善。

本发明的方法可进一步包括对来自受试者的核酸或蛋白质进行分析 的步骤，例如，对受试者的基因型进行分析。所述分析例如可用于评价 可选治疗的适用性，或在其之间做出选择，例如特定剂量、递送模式、 递送时间、附属治疗的纳入(例如，与第二试剂联合给药)；或通常用于 测定受试者的可能药物响应表现型或基因型。可在治疗的任何阶段对核 酸或蛋白质进行分析，但优选在给予AHCM和/或抗癌剂之前进行分析， 从而确定用于受试者的预防性或治疗性治疗的AHCM的适当剂量和治疗 方案(例如，每次治疗的量或治疗频率)。

剂型

在另一方面，本发明的特征在于药学上可接受的组合物，所述组合 物在单一剂型中包含AHCM和抗癌剂，例如，小分子或蛋白质(例如， 抗体)。在另一实施方式中，在纳米颗粒中提供AHCM和抗癌剂之一或 提供这两者。AHCM和抗癌剂可在不同实体或同一实体中。例如，若以 不同实体提供，可以第一纳米颗粒提供AHCM、并以第二纳米颗粒提供 抗癌剂(例如，其中所述第二纳米颗粒具有与所述第一纳米颗粒不同的 结构特性(例如，大小或组成)或功能特性(例如，释放动力学或药效 学特性))。或者，可在同一实体(例如，同一纳米颗粒中)上提供AHCM 和抗癌剂。

在另一方面，本发明的特征在于包含AHCM(例如，本文所述的 AHCM)的药学上可接受的组合物(例如，纳米颗粒)。在一个实施方式 中，AHCM处于本文所述的剂型，例如，治疗剂型标准、亚抗高血压剂 型、或高于治疗剂型标准的剂型。

在一个实施方式中，将AHCM配制成根据抗高血压治疗剂型标准或 抗心力衰竭治疗剂型标准(例如，如本文所述的治疗剂型标准)的剂型。

在某些实施方式中，将AHCM配制成低于抗高血压治疗剂型标准或 抗心力衰竭治疗剂型标准的剂型(例如，低于治疗剂型标准(例如，本 文所述的治疗剂型标准)的0.01倍、0.02倍、0.03倍、0.04倍、0.05倍、 0.06倍、0.07倍、0.08倍、0.09倍、0.1倍、0.15倍、0.16倍、0.2倍、 0.3倍、0.4倍、0.5倍、0.6倍、0.7倍的剂型)。

在其它实施方式中，将AHCM配制成高于抗高血压治疗剂型标准或 抗心力衰竭治疗剂型标准的剂型(例如，高于治疗剂型标准(例如，本 文所述的治疗剂型标准)的1.1倍、1.5倍、1.7倍、2倍、3倍、4倍、5 倍或10倍以上的剂型)。

在另一方面，本发明的特征在于包含抗癌剂(例如，本文所述的抗 癌剂)的药学上可接受的组合物，如纳米颗粒(例如，配置用于本文所 述方法的纳米颗粒)。

在另一方面，本发明的特征在于治疗试剂盒(例如，用于治疗癌症)， 所述试剂盒包含单独的AHCM或与本文所述的治疗(例如，抗癌剂)联 合的AHCM，并任选地包含使用说明。在实施方式中，所述试剂盒包含 本文所述的一种或多种剂型、药物制剂、或纳米颗粒。

递送方法

在另一方面，本发明的特征在于使试剂(例如，全身给药试剂，如 诊断剂或显像剂)向目标组织(例如，癌症)的接近最优化、或使试剂 向目标组织(例如，癌症)的递送最优化的方法。所述方法包括：

向受试者给予抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂(“AHCM”)；以及

任选地，向所述受试者给予试剂(例如，诊断剂或显像剂)。

在实施方式中，所述方法包括下列中的一项或多项：

a)AHCM为抗高血压剂，并被以治疗剂量标准、亚抗高血压剂量、 或高于治疗剂量标准的剂量给予；

b)试剂(例如，诊断剂或显像剂)的流体动力学直径大于1nm、5nm 或20nm，例如，为纳米颗粒；

c)试剂为显像剂，例如，放射性试剂、NMRA试剂、造影剂(contrast  agent)；或者

d)以本文所述的给药方案对受试者进行治疗，例如，在给予所述试 剂之前(例如，在给予所述试剂前至少1天、2天、3天或5天；或1周、 2周、3周、4周或5周以上时)开始给予AHCM。

在实施方式中，以足以改变(例如，增强)所述试剂的分布或效力 的量给予所述AHCM。在一个实施方式中，以足以改变(例如，增强) 所述试剂的分布或效力、但自身不足以抑制或阻止肿瘤生长或发展的量 给予AHCM。

在实施方式中，以使得癌症治疗剂在受试者的肿瘤或肿瘤血管中产 生下列一种或多种变化的剂量给予AHCM：降低胶原蛋白的水平或生成、 降低肿瘤纤维化、提高间质肿瘤运输、改善肿瘤灌注、或增强穿透或扩 散。

在实施方式中，以癌症治疗(例如，如本文所述的治疗)对所述受 试者进行进一步治疗。

在实施方式中，所述受试者为人、或非人动物(例如，小鼠、大鼠、 非人灵长类动物、马、或牛)。

在另一方面，本发明的特征在于诊断试剂盒(例如，用于诊断癌症)， 所述试剂盒包含单独的AHCM或与本文所述试剂(例如，诊断剂或显像 剂)联合的AHCM，并任选地包含使用说明。

筛选测定法

在另一方面，本发明的特征在于用于鉴定AHCM的方法或测定法。 所述方法或测定法包括如下步骤：提供癌细胞或癌症相关细胞(例如， 癌相关成纤维细胞的培养物)；将所述癌细胞或癌症相关细胞与候选试剂 相接触；检测癌细胞在有无候选试剂时的变化。在一个实施方式中，所 检测的变化包括下列变化的一种或多种：TGF-β1水平的提高或降低、结 缔组织生长因子(CTGF)水平的提高或降低、或胶原蛋白(例如，胶原 蛋白I)水平的提高或降低。在一个实施方式中，所述候选试剂选自于下 列试剂中的一种或多种：肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂(“RAAS” 拮抗剂)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂 (AT1阻断剂)、血小板反应素1(TSP-1)抑制剂、转化生长因子β1 (TGF-β1)抑制剂、以及结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂。适合的候 选试剂降低了TGF-β1水平(例如，总TGF-β1和/或活化TGF-β1)、结缔 组织生长因子(CTGF)水平、或胶原蛋白水平中的一种或多种。

所述方法或测定法可进一步包括如下步骤：将治疗方法或测定法与 参比值进行比较，以及对治疗方法和对照方法之间的差异进行比较，所 述参比值例如为，在不存在候选试剂时获得的值、或通过添加对照试剂 (例如，阳性试剂(例如，氯沙坦)、或阴性试剂(例如，盐水对照)) 获得的值。

所述方法或测定法可在体外、体内、或两者结合进行。在一个实施 方式中，所述方法或测定法包括：在体外对候选试剂进行评价(例如， 使用癌相关细胞的培养物)。在此类实施方式中，将所述候选试剂添加至 培养基；并对条件培养基的TGF-β1水平、结缔组织生长因子(CTGF) 水平、或胶原蛋白水平的增减进行分析。

在另一实施方式中，将所述候选试剂给予受试者(例如，动物模型， 例如，动物肿瘤模型)。在此类实施方式中，在适宜条件下将候选试剂给 予受试者；并对受试者的TGF-β1水平、结缔组织生长因子(CTGF)水 平、或胶原蛋白水平的增减进行分析。在一个实施方式中，根据所附实 施例中的描述，对这些参数的水平进行了分析。

在其它实施方式中，在体内对使用体外测定法评价的候选试剂进行 测试。

在另一方面，本发明的特征在于用于治疗本文所述的癌症或肿瘤的 组合物、或AHCM剂(单独的或与本文所述的抗癌剂联合的AHCM剂) 在治疗本文所述的癌症或肿瘤中的用途。

标题或以数字或字母编号的要素，例如，(a)、(b)、(i)等，仅为了 方便阅读而存在。在本文件中对标题、以数字或字母编号的要素的使用 并不要求所述步骤或要素按照字母顺序进行、也不要求所述步骤或要素 都必须相互分立(discrete)。

对于本文中提及的全部出版物、专利申请、专利以及其它参考文献， 以引用的方式将其整体并入本文。

从说明书、附图和权利要求中，将明显看出本发明的其它特征、目 的和优点。

附图说明

图1为显示氯沙坦(10μmol/L)在体外对如下方面的影响的一组柱 状图：总TGF-β水平和活化TGF-β水平、以及癌相关成纤维细胞(CAF) 对胶原蛋白I的合成。

图2A-图2B示出了氯沙坦对肿瘤中胶原蛋白生产的影响。

图2A示出了显示在2周时间内，相比于对照而言，经氯沙坦治疗的 HSTS26T肿瘤的胶原蛋白水平(通过SHG成像进行评价)发生剂量依赖 性降低的一组照片(10mg/kg/天、20mg/kg/天和60mg/kg/天)。比例尺 ＝200μm。

图2B显示10mg/kg/天、20mg/kg/天和60mg/kg/天的氯沙坦剂量对 SHG水平的影响的剂量响应曲线，在15天结束时，10mg/kg/天、20mg/kg/ 天和60mg/kg/天的氯沙坦剂量分别使SHG水平降低了20％、33％和67％， 表明在经氯沙坦治疗的肿瘤中，胶原蛋白水平发生剂量依赖性的降低。 在对照组和两个较高剂量组(20mg/kg/天和60mg/kg/天)之间存在着统 计学显著差异(*)。在20mg/kg/天组和60mg/kg/天组之间也存在着统计 学显著差异()。

图3为显示在HSTS26T肿瘤中氯沙坦与胶原蛋白含量的剂量响应的 柱状图。20mg/kg/天和60mg/kg/天的氯沙坦治疗分别使得胶原蛋白I染 色降低了42％和63％。将各治疗组中的染色与接受盐水的对照组进行比 较。

图4为显示氯沙坦在小鼠中以剂量依赖性的方式降低平均动脉压 (MABP)的效果的柱状图。虽然20mg/kg/天将MABP降低了10mm Hg (*p＜0.04)，MABP仍保持在SCID小鼠的正常范围内(70mmHg -95mmHg)(13)。相反，当以60mg/kg/天对动物进行治疗时，降低了35mm  Hg(**p＜0.04)的MABP低于SCID小鼠的正常MABP范围。

图5A-图5D示出了氯沙坦对肿瘤内胶原蛋白水平的影响。

图5A示出了在L3.6pl和MMTV对照以及氯沙坦治疗(20mg/kg/天) 的肿瘤中肿瘤切片的胶原蛋白I和细胞核免疫染色的结果。比例尺 ＝100μm。氯沙坦治疗(例如，20mg/kg/天)显著降低了所治疗的肿瘤中 的胶原蛋白水平。

图5B为总结了以20mg/kg/天的氯沙坦治疗两周后的效果的柱状图； 氯沙坦治疗分别将L3.6pL(p＜0.03)和FVB MMTV PyVT中的胶原蛋白 I免疫染色显著降低了50％(p＜0.05)和47％(P＜0.05)。

图5C为显示HSTS26T和MU89对照以及氯沙坦治疗(20mg/kg/天) 的肿瘤中肿瘤切片的胶原蛋白I和细胞核免疫染色的一组照片。注意到 在距HSTS26T肿瘤边缘200μm处的胶原蛋白I免疫染色并没有可检出的 降低。这一现象在经治疗的Mu89肿瘤中不明显，其中，在肿瘤的边缘 区域和中心区域都有一些顽固的染色。比例尺＝100μm。

图5D为总结了氯沙坦在HSTS26T和Mu89中使胶原蛋白I免疫染 色各自显著降低了44％(p＜0.02)和20％(p＜0.05)的效果的柱状图。

图6为示出了氯沙坦在HSTS26T肿瘤中对TSP-1、活化TGF-β1和 总TGF-β1、以及胶原蛋白I的影响的一组柱状图。所治疗的动物接受处 于饮用水中的氯沙坦(15mg/kg/天)。在治疗两周后切取肿瘤，匀浆化、 并通过ELISA分析总TGF-β1水平和活化TGF-β1水平。注意到在氯沙坦 治疗之后，TSP-1降低了3.5倍、活化TGF-β1降低了4倍、而胶原蛋白 I降低了2倍(p＜0.05)。

图7A示出了氯沙坦在MU89和HSTS26T肿瘤中使肿瘤TSP-1免疫 染色降低的效果。在HSTS26T肿瘤中，氯沙坦治疗后TSP-1的变化与胶 原蛋白I免疫染色的变化相一致；TSP-1水平在肿瘤中心处降低，但在距 肿瘤边缘200μm处依然保持高水平。TSP-1边界(margin)在Mu89肿 瘤中更大(距边缘500μm)。比例尺＝100μm。

图7B为总结了氯沙坦治疗在HSTS26T和Mu89肿瘤中使TSP-1免 疫染色各自显著降低了73％(p＜0.04)和24％(p＜0.03)的效果的柱状 图。

图8A-图8C示出了氯沙坦在提高纳米颗粒和纳米治疗剂的递送方面 的效果。

图8A示出了总结瘤内(i.t.)注入的直径100nm的纳米颗粒在 HSTS26T肿瘤中的分布的两张照片(对照和氯沙坦)和柱状图。氯沙坦 显著提高了(p＜0.001)瘤内注入的纳米颗粒在两种肿瘤类型中的分布 (HSTS26T中为1.5倍；Mu89中为4倍)。对分布模式的分析显示对照 肿瘤具有较少的瘤内纳米颗粒，而多数纳米颗粒由针道返回并累积于肿 瘤表面。相反，经治疗的肿瘤具有数量可观的瘤内纳米颗粒。比例尺 ＝100μm。

图8B示出了总结瘤内注射表达绿色荧光蛋白的HSV后24小时时病 毒感染的分布的两张照片(对照和氯沙坦)和柱状图。在对照肿瘤内， HSV感染限于紧邻注射位点处的细胞，而氯沙坦治疗的肿瘤在肿瘤内具 有更广的HSV感染传播。比例尺＝1mm。氯沙坦显著增加了(p＜0.05) HSTS26T和Mu89肿瘤中的病毒传播。

图8C显示了总结静脉内(i.v.)注入的直径100nm的纳米颗粒在 L3.6pl肿瘤中的分布的两张照片(对照和氯沙坦)和柱状图。纳米颗粒 位于经灌注的血管附近。与对照肿瘤相比，在氯沙坦治疗的肿瘤中纳米 颗粒的含量提高了2倍(p＜0.05)。比例尺＝100μm。

图9为显示经氯沙坦治疗后HSTS26T肿瘤在扩散系数方面的变化的 柱状图。对植入SCID小鼠背部窗室(dorsal window chamber)的HSTS26T 肿瘤的IgG扩散系数进行了测量。治疗动物通过i.p.注射接受(40mg/kg/ 天)氯沙坦，而对照动物接受盐水。结果显示通过光漂白后多光子荧光 恢复(multiphoton fluorescence recovery after photobleaching，FRAP)测 得的扩散系数显著提高(p＜0.04)。

图10为根据与肿瘤血管的距离(穿透深度)来描绘注入的纳米球分 数(fractions)的代表性分布曲线。在来自静脉内注射纳米球后24小时 切除的肿瘤的冷冻切片中，对纳米球穿透深度进行了分析。平均特征性 穿透长度从对照中的18±5μm(平均值±SE)提高至氯沙坦治疗后的肿 瘤中的37±6μm。在6份对照和6份治疗的肿瘤中对每一肿瘤进行了10 个区域的分析。

图11A-图11D示出了氯沙坦在显著延缓用或HSV治疗的 肿瘤的生长方面的效果。

图11A-图11B显示了来自携有HSTS26T(A)和Mu89(B)肿瘤的 小鼠的结果的线性图，所述小鼠在i.t.注射HSV前用氯沙坦或盐水治疗 了2周。单独的氯沙坦并不影响Mu89或HSTS26T肿瘤的生长。与单独 用HSV治疗的肿瘤相比，以氯沙坦和HSV治疗的HSTS26T肿瘤的生长 延缓显著更久。HSV的i.t.注射并不延缓Mu89肿瘤生长，但氯沙坦和 HSV联合治疗显著减缓了Mu89肿瘤的生长。

图11C示出了在小鼠肿瘤体积方面的效果，就L3.6p1肿瘤而言，在 i.v.灌注之前接受氯沙坦治疗(氯沙坦和)的小鼠与接 受单独的(仅)的小鼠相比，具有较小的肿瘤。注意 到在盐水治疗的小鼠和氯沙坦治疗的小鼠之间不存在肿瘤大小的差异。

图11D为显示在灌注后一周时对照肿瘤(左栏)与氯沙坦 治疗的肿瘤(右栏)之间的明显大小差异的图像。比例尺＝1em。灌注后一周时，氯沙坦治疗的肿瘤(右栏)比对照肿瘤(左栏)小。

图12A-图12B示出了胶原蛋白结构和病毒感染以及坏死之间的关 系。

在图12A中，在Mu89肿瘤边界附近观测到肿瘤胶原蛋白束。这些 胶原蛋白束偶尔会突出(project)至肿瘤(黑色箭头)中，并将肿瘤分 隔成独立区室。这些区室似乎限制了HSV的移动；这可以由在胶原蛋白 束包围的区域内的坏死区域得以证明。当用氯沙坦对这些肿瘤进行治疗 时，肿瘤边界处的胶原蛋白束保持完好，但是突出部分变得较松散(插 图)。这可能允许病毒传播(propagation)和坏死延伸越过边际 (boundaries)。比例尺＝100μm。

在图12B中，HSTS26T中的密集网格状胶原蛋白网络将病毒感染限 制在注射点周围临近区域。当以氯沙坦治疗时，所述网络的密度降低， 可能允许病毒颗粒感染更大区域以及更多肿瘤细胞。箭头分别指示活细 胞和病毒感染的细胞。比例尺＝100μm。

图13A-图13B示出了在Mu89(A)和HSTS26T(B)肿瘤中的病毒 分布和感染的示意图。所述示意图示出了不同胶原蛋白网络结构对病毒 传播和分布的影响。胶原纤维(1)限制病毒颗粒(圆球体，2)移动和 对未感染(4)的癌细胞的感染(3)。

在图13A中，Mu89肿瘤中的胶原蛋白束将肿瘤分隔成不能使病毒 颗粒穿过的独立区域。氯沙坦治疗使所述胶原蛋白束变得不稳定，并允 许病毒颗粒从一个区域移动至另一区域。

在图13B中，HSTS26T肿瘤中的胶原蛋白结构为网格状筛。病毒颗 粒仍然可穿过所述筛传播，但不能从注射位点处延伸出很远。氯沙坦治 疗使肿瘤内部区域中的网格结构显著地变得不稳定，并允许病毒传播并 感染较大的区域。

图14A示出了在HSTS26T和Mu89中注射HSV后21天时的病毒感 染(HSV免疫染色)和坏死。显示了完整的肿瘤区域、坏死和HSV免疫 染色的苏木精染色。坏死区域由黑色箭头标出。虽然在HSTS26T和Mu89 的坏死区域之间不存在可检测到的差异，在Mu89中坏死被限制在特定 区域，而坏死组织(以HSV免疫染色为界)遍及HSTS26T肿瘤。比例 尺＝2mm。

图14B为显示在HSV注射前接受氯沙坦的肿瘤(HSTS26T与Mu89) 中的坏死产生了两倍的增加(p＜0.05)的柱状图。

图15示出了氯沙坦处理后HSTS26T和Mu89的体内增殖速率。切 除肿瘤并对Ki67染色从而对增殖速率进行评估。在氯沙坦治疗后， HSTS26T和Mu89肿瘤在阳性Ki67染色方面不存在统计学显著差异。然 而在两种肿瘤类型的增殖之间存在显著差异，HSTS26T肿瘤中Ki67阳 性细胞的数量高出3倍。

图16示出了在CAF、MU89和HSTS26T细胞中AGTR1表达的PCR 分析结果。MU89细胞和CAF表达AGTR1、而HSTS26T细胞不表达。 HUVEC用作阳性对照。GAPDH水平揭示全部三种样品具有大致相同量 的cDNA。

图17A-图17D示出了以AT1阻断剂或ACE抑制剂进行的血管紧张 素阻断在使肿瘤微环境正常化中的效果。显示了对ARB、氯沙坦的研究。 血管紧张素阻断：(A)使小鼠的乳腺肿瘤(MMTV)和胰腺肿瘤(L3.6PL) 的间质基质密度减小；(B)减小了乳腺肿瘤(E0771)和胰腺肿瘤(Pan-02) 中的压应力(compressive stress)。(C)这提高了肿瘤(E0771示出)中 灌注血管(箭头)的分数，使得产生(D)在药物和氧递送方面更高效且 更有效的正常化血管网络(E0771示出)。

图18A-图18D示出了以AT1阻断剂或ACE抑制剂进行的血管紧张 素阻断在改善肿瘤中药物运输和分布中的效果。此处显示了对ARB、氯 沙坦的研究。经过肿瘤正常化，血管紧张素阻断：(A)通过增强的灌注 改善肿瘤氧合(oxygenation)(E0771示出)，同时(B)使血管更快速地 递送药物。间质基质的重组(reorganization)还(C)改善了纳米颗粒在 促结缔组织增生性肿瘤(L3.6PL示出)中的穿透(D)。

图19A-图19E示出了以AT1阻断剂或ACE抑制剂进行的血管紧张 素阻断在改善癌症治疗效力方面的效果。显示了对ARB、氯沙坦的研究。 与化学治疗联合给予的血管紧张素阻断：(A)改善了低分子量化疗剂多 柔比星在乳腺癌模型中的效果；(B)减慢了肿瘤生长；并且(C)增加 了动物生存率(E0771示出)。类似地，血管紧张素阻断(D、E)例如通 过降低肿瘤重量(D)和/或肿瘤大小或体积(E)改善了纳米颗粒在胰腺肿瘤中的效果(L3.6PL示出)。

具体实施方式

本发明至少部分基于下列发现：氯沙坦(一种抗高血压剂)能改善 癌症治疗剂的递送和效力。

在许多类型的癌症(例如，胰腺癌、乳腺癌、肺癌、结直肠癌)中， 肿瘤的异常基质限制了纳米治疗剂的递送。纤维组织的过度生长以两种 机制妨碍纳米治疗剂在肿瘤中移动：粘弹性阻力和空间位阻。纤维组织 是高度粘弹性的，意味着其相当厚且硬，因此将这些药物的移动降低至 其典型速度的一小部分。此类组织基本上是极端密集的网格，具有与纳 米治疗剂的大小大致相同的小孔，因此所述组织并未给予这些药物太多 空间、并经常通过将所述药物限制在血管附近(在静脉内注射的情况下) 或接近注射位点处(在瘤内注射的情况下)来使它们的移动停止。除了 脑肿瘤可能是个例外以外，这一屏障存在于所有实体瘤中，然而这一屏 障在胰腺癌、乳腺癌、肺癌和结直肠癌中最为显著。纳米治疗剂由于其 大小相对于形成肿瘤微环境的孔而言较大，因而尤其为纤维组织所阻碍。

在某些实施方式中，申请人已证明氯沙坦阻止了基质分子(如胶原 蛋白)的产生，所述基质分子是纤维组织密集网格的组成部分。氯沙坦 被认为是通过抑制TGF-β通路和CTGF通路来对成纤维细胞和肿瘤细胞 起作用，由此限制了它们的促纤维化(pro-fibrotic)活性。它是通过阻断 血管紧张素II的1型受体(AT1)实现的，所述AT1在多种癌症的成纤维 细胞和肿瘤细胞中均高度表达。因此，氯沙坦在多种信号通路中阻断了 AT1的下游活性，包括TGF-β和CTGF的活化。由于这两条通路促进纤 维组织的胶原蛋白和其它组分的产生，对它们进行阻断将允许纤维化消 退(subside)。结果使得组织更类似于正常的周围器官，因此更易于穿透。

本文证明了用氯沙坦进行的治疗显著降低了数种类型肿瘤中的胶原 蛋白水平(纤维化的标记物)，所述肿瘤包括胰腺肿瘤、乳腺肿瘤、皮肤 肿瘤和软组织肿瘤。而且，纤维化降低使得纳米治疗剂在肿瘤内具有改 善的移动性，这允许其更易于穿透肿瘤；并允许这些药物在整个肿瘤中 分布更广，这使其在对抗肿瘤生长方面更加有效。因此，氯沙坦使纳米 治疗剂对于抗癌而言更加有效。

具体而言，申请人发现氯沙坦使胶原蛋白(数种实体瘤的间质基质) 正常化，因此有助于化学治疗剂(如高分子量(例如，纳米级)化学治 疗剂)的穿透。例如，氯沙坦降低了由乳腺癌活检组织中分离出的癌相 关成纤维细胞(CAF)中的胶原蛋白I的水平，并使得人乳腺肿瘤、胰 腺肿瘤和皮肤肿瘤的促结缔组织增生性小鼠模型中的基质胶原蛋白发生 剂量依赖性的降低。氯沙坦还改善了纳米颗粒(例如，溶瘤单纯疱疹病 毒(HSV)和聚乙二醇化脂质体多柔比星)的分布、疗效和/ 或穿透。

低分子量治疗剂(远小于纳米治疗剂)并不受间质基质屏障所限制， 但类似地受其它屏障(如异常和萎陷(collapsed)的血管)影响。

在其它实施方式中，申请人发现氯沙坦促进血管降压，因此改善肿 瘤灌注和低分子量化学化疗剂的递送，从而通过血管正常化促进放射物 和化疗剂的递送。

因此，这些试剂通过血管正常化改善像氧分子一样小的分子(放射 和化疗敏化剂)的递送(图18A-图18B)；同时还通过间质基质正常化增 强更大试剂的穿透(图18C、图18D)。通过对整个肿瘤微环境的这一修 复，这些试剂增强了低分子量化学治疗剂和纳米治疗剂在乳腺癌模型和 胰腺癌模型中的效果：导致肿瘤生长下降和动物存活延长(图19A-图 19E)。因此，血管紧张素抑制剂(例如，血管紧张素受体阻断剂)和ACE 抑制剂可增强治疗剂的递送，并因此对于与所有种类的抗癌剂进行联合 治疗具有广泛的适用性，所述抗癌剂包括低分子量化学治疗剂、小分子 化学治疗剂、生物制剂、核酸试剂和纳米颗粒治疗。

与其它方法相比，血管紧张素阻断剂提供了许多优点。抗血管紧张 素治疗仅使血管正常化，并且仅被批准用于有限数量的适应症。同时， ARB和ACE-I被FDA批准作为具有可控副作用的抗高血压剂。可使胶 原蛋白基质正常化的基质降解酶对肿瘤不具有选择性，可增强侵润和转 移。ARB和ACE-I在正常组织中没有与基质重塑(matrix remodeling) 相关的明显并发症，这使得其作为抗高血压剂具有安全性。作为小分子 试剂，ARB和ACE-I还可经由含有化学治疗剂的纳米载体(例如，脂质 体、纳米颗粒)递送，以增强其定位至肿瘤，从而进一步限制毒性。抗 血管生成剂(唯一经FDA批准的增强药物向肿瘤递送的辅药(adjunct)) 由于能减小血管壁的“孔”大小，因而不能改善较大颗粒的递送。血管 紧张素阻断剂可以改善所有种类的抗肿瘤诊断和治疗的递送。

因此，公开了用于改善癌症治疗剂的递送和/或效力的方法和组合 物。公开了用于通过如下方式治疗或预防癌症(例如，实体瘤，如促结 缔组织增生性肿瘤)的方法和组合物：通过将抗高血压剂作为单一试剂 给予受试者、或与癌症治疗剂(例如，大小从大的纳米治疗剂至低分子 量化疗剂和/或氧的癌症治疗剂)联合给予受试者。

首先对特定术语进行定义。

“约/大约/大致(about/approximately)”通常指在考虑到测量的性质 或精确度的情况下，所测值的可接受误差程度。示例性的误差程度在给 定值或取值范围的20％之内；一般在10％之内；更一般地在5％、4％、 3％、2％或1％之内。

在试剂向肿瘤递送的背景下，本文所使用的“递送”指的是将所述 试剂放置为与下列中的一种或多种(或全部)足够接近以具有预期效果： 肿瘤血管、肿瘤间质基质、或肿瘤细胞或肿瘤相关细胞(例如，成纤维 细胞)。所述试剂可为例如，癌症治疗(例如，如本文所述的癌症治疗剂)、 或诊断剂或显像剂。除非另有注明，本文通常使用的术语“试剂”可包 括一种或两种以上的试剂。

在一个实施方式中，癌症治疗剂包括例如，一种或多种小分子、蛋 白质或核酸药物、溶瘤病毒、疫苗、抗体或其片段、或上述试剂的组合。 所述癌症治疗剂可以是“独立的(free)”，或者被封装或配制进递送载体， 例如，颗粒(例如，纳米颗粒，如脂质纳米颗粒、聚合物纳米颗粒、或 病毒颗粒)。治疗剂递送的特征在于：将治疗剂放置为足够接近细胞从而 改变细胞活性(例如，杀死细胞和/或降低其分裂能力)。

在其它实施方式中，所述试剂为诊断剂或显像剂(例如，下列试剂 中的一种或多种：放射性试剂、NMRA剂、造影剂等)。所述诊断剂或显 像剂可以是“独立的”，或被封装或配制进递送载体。诊断剂或显像剂递 送的特征在于将试剂放置为足够接近靶细胞或靶组织从而允许对所述靶 细胞或靶组织进行检测。

在实施方式中，增强(或改善)的递送(与相同或相似的递送(除 在AHCM不存在的情况下进行外)相比)可包括下列情况中的一种或多 种：

试剂向肿瘤血管的递送增加、或肿瘤血管中试剂的量或浓度增加；

试剂向肿瘤(例如，肿瘤血管间质基质)的递送增强、或肿瘤(例 如，肿瘤血管间质基质)中试剂的量或浓度增加；

试剂向肿瘤细胞或肿瘤相关细胞(例如，成纤维细胞)的递送增强、 或肿瘤细胞或肿瘤相关细胞(例如，成纤维细胞)中试剂的量或浓度增 加；

肿瘤血管中的流速(例如，试剂的流速)增加；

改善(或正常化)的血管形态(例如，肿瘤状水平低)；

肿瘤血管的减压；

肿瘤中(例如，间质基质中)的孔大小增加、或试剂的扩散速率提 高；

试剂在肿瘤中(例如，间质基质中)的灌注增强；

试剂在整个肿瘤中的分布更广和/或更均匀；

试剂在整个肿瘤间质基质中的分布更广和/或更均匀；

试剂在肿瘤(例如，肿瘤间质基质)中(而不是非肿瘤组织(例如， 外周血))的比例增加；

肿瘤中(例如，肿瘤血管间质基质中)TGF-β通路的抑制；

肿瘤中(例如，肿瘤血管间质基质中)CTGF通路的抑制；

血管紧张素II的1型受体活性的抑制；

肿瘤中(例如，肿瘤血管间质基质中)纤维化的降低；或者

肿瘤中(例如，肿瘤血管间质基质中)胶原蛋白或胶原沉积的降低。

在一些实施方式中，增强(或改善)的递送(与相同或相似的递送 (除在AHCM不存在的情况下进行外)相比)还可包括分布于肿瘤的至 少一部分的试剂的量增加。在一些实施方式中，在AHCM存在的情况下， 递送至肿瘤的量增加的试剂可在整个肿瘤中均匀分布或不均匀分布。

在治疗(例如，癌症治疗)的背景下，本文使用的“效力”可被视 为治疗带来预期效果的程度，所述效果包括但不限于(不管是可检测的 还是不可检测的)：症状减轻(alleviation)、疾病程度减小、疾病状态稳 定、疾病发展延缓或放慢、疾病状态转佳(amelioration)或缓和 (palliation)、以及缓解(无论是部分或全部)。

在癌症治疗的效力的背景下，改善的效力可以下列情况中的一种或 多种为特征：与相同或相似的治疗(除在不存在AHCM治疗的情况下进 行外)相比，癌症治疗的抗肿瘤效果增强、和/或癌症治疗的不期望的副 作用(例如，毒性)减小。在一个实施方式中，癌症治疗抗肿瘤效果的 增强包括下列情况中的一种或多种：抑制原发肿瘤或转移性肿瘤生长； 降低原发肿瘤或转移性肿瘤的质量或体积；降低转移病灶的大小或数量； 抑制新转移病灶的发展；降低非侵入性肿瘤的体积或代谢的一种或多种； 提供延长的生存期；提供延长的无进展生存期；提供延长的进展时间 (prolonged time to progression)；和/或提高生活质量。

在一些实施方式中，对于与AHCM联合的癌症治疗，本文所使用的 术语“改善的效力”可指与单独进行癌症治疗(即，无AHCM)期间原 发性肿瘤或转移性肿瘤生长的减小相比，原发性肿瘤或转移性肿瘤生长 的减小增加了至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至 少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少 约90％、至少约95％、上至并包括100％。在一些实施方式中，与单独进 行癌症治疗(即，无AHCM)期间原发性肿瘤或转移性肿瘤生长的减小 相比，AHCM与癌症治疗的联合给予可使原发性肿瘤或转移性肿瘤生长 的减小增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约5倍、至少 约6倍、至少约7倍、或更高。用于监测体内肿瘤生长的方法在本领域 中是熟知的，例如，但不限于：X射线、CT扫描、MRI以及其它本领域 认可的医学成像方法。

在一些实施方式中，对于与AHCM联合的癌症治疗，本文所使用的 术语“改善的效力”可指与单独灌注抗癌剂(即，无AHCM)相比，抗 癌剂(例如，低分子量治疗剂或纳米治疗剂，如)向肿瘤中的 灌注增加了例如，至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、 至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至 少约90％、至少约95％、上至并包括100％。在一些实施方式中，与单独 的抗癌剂(即，无AHCM)的灌注效率相比，AHCM与癌症治疗的联合 给予可使抗癌剂(例如，低分子量治疗剂或纳米治疗剂，如) 向肿瘤中的灌注增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约5 倍、至少约6倍、至少约7倍、或更高。测量体内肿瘤灌注的方法在本 领域已得以充分建立，所述方法包括但不限于：正电子发射断层扫描 (PET)、以及超声或造影增强超声(contrast-enhanced ultrasound)。

在一些实施方式中，对于与AHCM联合的癌症治疗，本文所使用的 术语“改善的效力”可指与单独给予癌症治疗(即，无AHCM)时至少 一种癌症生物标记物表达水平的降低相比，至少一种癌症生物标记物(例 如，生物样品中，如血样、血清样品、血浆样品或组织活检样品中)表 达水平的降低增加了例如，至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少 约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约 80％、至少约90％、至少约95％、上至并包括100％。在一些实施方式中， 与单独给予癌症治疗(即，无AHCM)时至少一种癌症的生物标记物表 达水平的降低相比，AHCM与癌症治疗的联合给予可使至少一种癌症生 物标记物(例如，生物样品中，如血样、血清样品、血浆样品或组织活 检样品中)表达水平的降低增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、 至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、或更高。血清/血浆癌症生物标 记物的实例可包括但不限于：TGF-β1、TGF-β2、CTGF、TSP-1、胶原蛋 白I、胶原蛋白II、胶原蛋白III、胶原蛋白IV。可利用本领域认可的任 何分析方法(例如，PCR、免疫印迹、ELISA、和/或免疫染色)在转录 本水平和/或蛋白水平上对血清/血浆癌症生物标记物的表达水平进行测 量。

通常基于收缩压和舒张压来对“血压”进行分类。“收缩压”或Psys 指的是在心跳时血管中的血压。“舒张压”或Pdias指心跳与心跳之间的 压力。高于个体年龄的公认正常值的收缩压或舒张压测量值被归为高血 压前期(prehypertension)或高血压。低于个体年龄的公认正常值的收缩 压或舒张压测量值被归为低血压。对于成人，“正常”收缩压通常为 90mmHg-120mmHg；“正常”舒张压通常为60mmHg-80mmHg。在人群 中，成人的平均血压(Psys/Pdias的比值)可为110/65mmHg-140/90mmHg； 对于1岁的婴儿，为95/65mmHg；以及对于6-9岁的儿童，为100/65mmHg。

高血压具有数种子分类，包括：高血压前期 (120/80mmHg-139/89mmHg)；高血压I期(140/90mmHg-159/99mmHg)、 高血压II期(高于或等于160/100mmHg)、以及单纯收缩期高血压(isolated  systolic hypertension)(高于或等于140/90mmHg)。单纯收缩期高血压是 指收缩压升高而舒张压正常，常见于老年人中。将两次或多次门诊时读 取的患者静息血压进行平均后，做出这些分类。

通常以持续高血压为依据来诊断高血压。通常，需要在至少间隔一 周进行三次独立的血压计测量。这经常需要三次独立的医师门诊。对高 血压患者的初次评估应当包括全部病史和身体检查。

本文中使用的“高血压(hypertension/high blood pressure)”指的是 收缩压为120以上(通常为140以上)、舒张压为80以上的高血压前期 或高血压期(本文中的全部血压均以mmHg表示)。

本文中使用的术语“平均动脉压”(MAP)是本领域认可的，指的是 心动周期中的平均值，并由心输出量(CO)、全身血管阻力(systemic  vascular resistance，SVR)和中心静脉压(CVP)确定，MAP＝(CO×SVR) +CVP。MAP可由对收缩压(Psys)和舒张压(Pdias)的测量来大致确 定，当处于正常静息心率时，MAP约为Pdias+1/3(Psys-Pdias)。

本文所使用的“抗高血压剂”指当给予选定剂量(在本文中称为“抗 高血压剂量”)时通常使患者(例如，高血压患者)血压降低的试剂(例 如，化合物、蛋白质)。抗高血压剂在临床上常规用于以本领域已知的剂 量对患有高血压的患者进行治疗。示例性的抗高血压剂包括但不限于： 肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂(“RAAS拮抗剂”)、血管紧张素转换 酶(ACE)抑制剂、以及血管紧张素II受体阻断剂(AT1阻断剂)。本文 还公开了这些试剂中的一些的示例性抗高血压剂量。

本文使用的“亚抗高血压剂量”指的是通常低于用于对患者的高血 压进行治疗的最低剂量的抗高血压剂的剂量。在实施方式中，亚抗高血 压剂量具有下列特性中的一种或多种：

其大体上并未降低受试者(例如，高血压受试者)的血压(例如， 平均动脉压)；

其使受试者的平均动脉压降低了不到1％、5％、10％、15％、20％、 25％、30％、35％、40％、45％、50％；

其使血压降低了小于由该AHCM的抗高血压治疗剂量标准引起的降 低的1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、 60％、70％、80％、90％、或降低更少；

其小于能使受试者的血压进入正常范围(例如，收缩压为120且舒 张压为80)的AHCM剂量的1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、 35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％；或小于能使受试者的 血压进入收缩压为120+/-5且舒张压为80+/-5的范围内的AHCM剂量的 1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、 70％、80％、90％；或者

其低于抗高血压治疗剂量标准。

在某些实施方式中，剂量满足这些标准中的一个或多个的能力可在 预先选定的剂量数(例如，1、2、5或10)后、或获得稳态水平(例如， 血浆水平)的足够剂量后做出测量。

本文使用的“AHCM”可以是具有下列性质中的一种或多种的试剂：

其为肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂(“RAAS拮抗剂”)；

其为血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂；

其为血管紧张素II受体阻断剂(AT1阻断剂)；

其为血小板反应素1(TSP-1)抑制剂；

其为转化生长因子β1(TGF-β1)抑制剂；或者

其为结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂。

本文使用的“治疗”肿瘤，通常指的是下列情况中的一种或多种：

抑制原发性肿瘤或转移性肿瘤生长；

降低原发性肿瘤或转移性肿瘤的质量或体积；

降低转移病灶的大小或数量；

抑制新转移病灶的发展；

降低非侵入性肿瘤的体积或代谢的一种或多种；

提供延长的生存期；

提供延长的无进展生存期；

提供延长的进展时间；和/或提高生活质量。

下文对本发明的多个方面进行进一步的详细描述。其它定义在整个 申请文件中进行陈述。

抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂(AHCM剂)

在某些实施方式中，用于本发明的方法和组合物的AHCM剂可选自 于下列试剂中的一种或多种：肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂(“RAAS 拮抗剂”)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断 剂(AT1阻断剂)、血小板反应素1(TSP-1)抑制剂、转化生长因子β1 (TGF-β1)抑制剂、以及结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂。所述方法 可包含一种、两种或三种以上单独的AHCM剂或与一种或多种癌症治疗 剂联合的AHCM剂。

示例性的肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)拮抗剂包括但不限于： 阿利吉仑瑞米吉仑(Ro42-5892)、依那 吉仑(A-64662)、SPP635，以及上述试剂的衍生物。

示例性的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂包括但不限于：贝那普 利卡托普利依那普利福辛普利赖诺普利莫昔 普利培哚普利喹那普利雷米普利群多普利以及上述试剂的衍生物。

示例性的血管紧张素II受体阻断剂(AT1阻断剂)包括但不限于： 氯沙坦坎地沙坦甲磺酸依普沙坦 EXP3174、厄贝沙坦L158，809、奥美沙 坦沙拉新、替米沙坦缬沙坦以及上述试剂的衍生物。

在一个实施方式中，AT1阻断剂为氯沙坦或其衍生物。氯沙坦为安全 风险最低的抗高血压剂(Johnston CI(1995)Lancet346：1403-1407)。 此外，除其抗高血压特性以外，氯沙坦还是已被证明降低心脏和肾脏纤 维化发病率的抗纤维化剂(Habashi JP等，(2006)Science312：117-121； 以及Cohn RD等，(2007)Nat Med13：204-210)。氯沙坦的抗纤维化效 果部分地由如下过程引起：经由血管紧张素II的I型受体(AGTR1)介 导的TGF-β1活化剂(如血小板反应素1(TSP-1))下调，而对活化的转 化生长因子β1(TGF-β1)的水平进行抑制(Habashi JP等，(2006)Science 312：117-121；Cohn RD等，(2007)Nat Med13：204-210；Lavoie P等， (2005)J Hypertens23：1895-1903；Chamberlain JS(2007)Nat Med13： 125-126；以及Dietz HC(2010)J Clin Invest120：403-407)。

示例性的血小板反应素1(TSP-1)抑制剂包括但不限于：ABT-510、 CVX-045、LSKL，以及上述试剂的衍生物。

示例性的转化生长因子β1(TGF-β1)抑制剂包括但不限于：CAT-192、 fresolimumab(GC1008)、LY2157299、肽144(P144)、SB-431542、SD-208、 在美国专利序列号7,846,908和美国专利申请公开号2011/0008364中描 述的化合物，以及上述试剂的衍生物。

示例性的结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂包括但不限于： DN-9693、FG-3019、和在欧洲专利申请公开号1839655以及美国专利序 列号7,622,454中描述的化合物，以及上述试剂的衍生物。

示例性的β阻断剂包括但不限于：阿替洛尔倍他 洛尔比索洛尔美托洛尔美托洛尔缓释剂纳多洛尔普萘洛尔 长效普萘洛尔噻吗洛尔 醋丁洛尔(acebutolol)喷布洛尔 (penbutolol)吲哚洛尔、卡维地洛拉贝 洛尔以及上述试剂的衍生物。

在一个实施方式中，所述AHCM剂为TGF-β1抑制剂，例如，抗 TGF-β1抗体、TGF-β1肽抑制剂。在某些实施方式中，TGF-β1抑制剂选 自于下列试剂中的一种或多种：CAT-192、fresolimumab(GC1008)、LY 2157299、肽144(P144)、SB-431542、SD-208、在美国专利序列号7,846,908 和美国专利申请公开号2011/0008364中描述的化合物，或上述试剂的衍 生物。

基于在本领域可获得的AHCM剂的抗高血压治疗剂量标准，可对用 于AHCM剂给药的适合剂量进行评估。

对于AT1抑制剂，其在人中的示例性抗高血压和抗心力衰竭的治疗 剂量标准和治疗剂型标准如下：氯沙坦为25-100mg/天以包含12.5mg、 25mg、50mg或100mg氯沙坦的口服剂型的形式可得)；坎地沙坦 为4-32mg/天(例如，以包含4mg、8mg、16mg或32mg 坎地沙坦的口服剂型的形式可得)；甲磺酸依普沙坦为 400-800mg/天(例如，以包含400mg或600mg依普沙坦的口服剂型的形 式可得)；厄贝沙坦为150-300mg/天(例如，以包含150mg 或300mg厄贝沙坦的口服剂型的形式可得)；奥美沙坦为20-40mg/天(以包含5mg、20mg、或40mg奥美沙坦的口服剂型的形 式可得)；替米沙坦为20-80mg/天(例如，以包含20mg、 40mg、或80mg替米沙坦的口服剂型的形式可得)；以及缬沙坦 为80-320mg/天(例如，以包含40mg、80mg、160mg或 320mg缬沙坦的口服剂型的形式可得)。

对于ACE抑制剂，其在人中的示例性抗高血压和抗心力衰竭的治疗 剂量标准和治疗剂型标准如下：贝那普利为10-40mg/ 天(Lotensin(贝那普利)作为含有5mg、10mg、20mg、或40mg贝那 普利盐酸盐的口服片剂提供)；卡托普利为25-100mg/ 天(以包含12.5mg、25mg、50mg、或100mg卡托普利的口服剂型的形 式可得)；依那普利为5-40mg/天(以包含2.5mg、5mg、 10mg、或20mg依那普利的口服剂型的形式可得)；福辛普利 为10-40mg/天(以包含10mg、20mg、或40mg福辛普 利的口服剂型的形式可得)；赖诺普利为 10-40mg/天(以包含2.5mg、5mg、10mg、20mg、30mg或40mg赖诺普 利的口服剂型的形式可得)；莫昔普利为7.5-30mg/天(以 包含7.5mg或15mg莫昔普利的口服剂型的形式可得)；培哚普利 为4-8mg/天(以包含2mg、4mg、或8mg培哚普利的口服 剂型的形式可得)；喹那普利为10-80mg/天(以包含5mg、 10mg、20mg、或40mg喹那普利的口服剂型的形式可得)；雷米普利 为2.5-20mg/天(以包含1.25mg、2.5mg、5mg、或10mg 雷米普利的口服剂型的形式可得)；群多普利为1-4mg/天(以 包含1mg、2mg、或4mg群多普利的口服剂型的形式可得)。

在一个实施方式中，以抗高血压和抗心力衰竭的治疗剂量标准和治 疗剂型标准(例如，本文所述的剂量或剂型)给予AHCM剂。

在某些实施方式中，AHCM剂的亚抗高血压剂量或剂型(例如，低 于治疗剂量标准或治疗剂型标准的AHCM剂的剂量)是期望的。在一个 实施方式中，亚抗高血压剂量或剂型对于高血压受试者的血压具有最小 的影响(例如，在高血压受试者中将平均动脉压降低了小于20％、10％、 或5％或更少)。在某些实施方式中，以低于抗高血压治疗剂量标准(例 如，较低的治疗剂量标准)的0.01、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、 0.7、0.8、0.9的剂量或剂型给予AHCM剂。在一个实施方式中，所述剂 量或剂型为用于抗高血压和抗心力衰竭用途的治疗剂量标准或治疗剂型 标准的例如0.01-0.9倍、0.02-0.8倍、0.05-0.7倍、0.1-0.5倍、0.1-0.2倍。 AHCM的治疗剂量标准或治疗剂型标准在本领域是可获得的，在本文中 对其中一些进行了举例。

在其它实施方式中，以下述剂量或剂型给予AHCM剂：高于用于抗 高血压或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准或治疗剂型标准的剂量或剂型 (例如，高于用于抗高血压或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准或治疗剂 型标准的1.1、1.5、1.7、2、3、4、5或10倍以上的剂量或剂型)。在一 个实施方式中，所述剂量或剂型为抗高血压和抗心力衰竭用途的治疗剂 量标准或治疗剂型标准的例如1.1-10倍、1.5-5倍、1.7-4倍、或2-3倍。 AHCM的治疗剂量标准或治疗剂型标准在本领域是可获得的，在本文中 对其中一些进行了举例。

对于许多AHCM(例如，氯沙坦)，本文提供了治疗剂量标准和治疗 剂型标准。在实施方式中，所述剂量和/或剂型低于(或高于)治疗剂量 标准和/或治疗剂型标准。在示例性的实施方式中，所述剂量或剂型低于 治疗剂量标准或治疗剂型标准的0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、0.7、 0.8、0.9倍。在实施方式中，所述剂量或剂型所包含的AHCM量落入治 疗剂量标准和/或治疗剂型标准的减少量的范围之内。例如，治疗剂量标 准或治疗剂型标准的0.01-0.9倍、0.02-0.8倍、0.05-0.7倍、0.1-0.5倍、 0.1-0.2倍的AHCM剂型。在某些实施方式中，所述剂量或剂型范围为本 文列举的降低的剂量或剂型的0.5-2.0倍，只要所述剂量或剂型的值低于 治疗剂量标准或治疗剂型标准就行。例如，氯沙坦的治疗剂型标准为 12.5mg。因此，在实施方式中，所述剂型为0.125mg(0.01×12.5mg)、 0.625mg(0.05×12.5mg)、1.25mg(0.1×12.5mg)、2.5mg(0.2×12.5mg)、 或6.25mg(0.5×12.5mg)。在实施方式中，AHCM剂型为0.5-2.0(× 0.125mg)＝0.0625-0.25mg、0.5-2.0(×0.625mg)＝0.312-1.25mg；诸如 此类，只要所述剂量或剂型的值低于治疗剂量标准或治疗剂型标准。这 一计算可应用于本文所述的任何AHCM的任何治疗剂量标准和/或治疗 剂型标准。在某些实施方式中，所述值低于治疗值标准。在其它实施方 式中，所述值高于治疗值标准。

在一个实施方式中，基于肿瘤样品中纤维化的严重程度对AHCM剂 的剂量进行计算。

在一些实施方式中，AHCM剂的剂量可为亚抗高血压剂量，所述剂 量不具有任何抗肿瘤效果(例如，当单独给予时，不具有抑制或阻止肿 瘤生长或发展的显著效果)。在一些实施方式中，AHCM剂的剂量可与用 于抗高血压或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准或治疗剂型标准相当或更 高，且不具有任何抗肿瘤效果(例如，当单独给予时，不具有抑制或阻 止肿瘤生长或发展的显著效果)。

治疗方法

在一方面，本发明涉及通过向患者给予单独的、或与治疗剂(例如， 本文所述的抗癌剂)联合的AHCM剂来治疗过度增生性病症(例如，癌 症)的方法。

除非另有特别说明，本文所使用的术语“治疗 (treat/treating/treatment)”指的是治疗性处理和预防性(prophylactic) 或防护性措施，其中，目的在于预防或减慢(减少)不期望的生理变化 或病症(如癌症的患病或扩散)。有益的或期望的临床结果包括但不限于 (无论是可检测的还是不可检测的)：症状减轻、疾病程度减小、疾病状 态稳定(即，不恶化)、疾病发展延缓或放慢、疾病状态转佳或缓和、以 及缓解(无论部分的或全部的)。“治疗”还可意味着与未接受治疗时的 预期生存期相比，延长了生存期。需要治疗的受试者包括已有症状或病 症的受试者、以及易于患上所述症状或病症的受试者、或者要对所述症 状或病症进行预防的受试者。

例如，在治疗癌症的情况下，在一些实施方式中，治疗性处理可指 在根据本文所述的方法进行给予或给予本文所述的药物组合物之后抑制 或降低肿瘤生长或发展。例如，治疗后肿瘤生长或发展被抑制或降低了 至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、或 至少约50％。在另一实施方式中，治疗后肿瘤生长或发展被抑制或降低 了超过50％，例如，至少约60％、或至少约70％。在一个实施方式中， 与对照(例如，无本文所述的药物组合物)相比，肿瘤生长或发展被抑 制或降低了至少约80％、至少约90％或更高。

在另一实施方式中，所述治疗性处理指至少一种与癌症相关的症状 减轻。可测量的减小包括治疗后可测量的标记物或症状的任何统计学显 著下降，如对癌症生物标记物(如血样中的血清/血浆癌症生物标记物) 的测量。在一个实施方式中，至少一种癌症生物标记物或症状减轻了至 少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、或至 少约50％。在另一实施方式中，至少一种癌症生物标记物或症状减轻了 超过50％，例如，至少约60％、或至少约70％。在一个实施方式中，与 对照(例如，无本文所述的药物组合物)相比，至少一种癌症生物标记 物或症状减轻了至少约80％、至少约90％或更高。

除非另有特定说明，本文使用的术语“预防/阻止 (prevent/preventing/prevention)”着眼于在患者开始遭受癌症再生长前发 生的行为、和/或抑制或降低癌症严重程度的行为。

除非另有特定说明，本文使用的化合物的“治疗有效量”为足以在 病症(例如，癌症)治疗中提供治疗益处的量、或足以使一种或多种病 症(例如，癌症)相关症状延缓或最小化的量。化合物的治疗有效量是 指单独的、或与其它治疗剂联合时在病症的治疗或管理中提供了治疗益 处的治疗剂的量。术语“治疗有效量”可涵盖改善总体治疗的量、降低 或避免病症(例如，癌症)的症状或病因的量、或增强另一治疗剂的疗 效的量。

除非另有特定说明，本文使用的化合物的“预防有效量”为足以预 防病症(例如，癌症再生长、或一种或多种癌症相关的症状、或阻止其 复发)的量。化合物的预防有效量是指单独的、或与其它治疗剂联合时 在病症预防中提供了预防益处的化合物的量。术语“预防有效量”可涵 盖改善总体预防的量、或增强另一预防剂的预防效力的量。

本文中使用的术语“患者”或“受试者”指的是将成为或已经成为 治疗、观察、和/或实验对象的动物，通常为人类(即，任何年龄段的男 性或女性)，例如，儿科患者(例如，婴儿、儿童、青少年)或成人患者 (例如、青年人、中年人或老年人))；或其它哺乳动物，如灵长类动物 (例如，食蟹猴(cynomolgus monkey)、恒河猴(rhesus monkey))；商 业相关哺乳动物，如牛、猪、马、绵羊、山羊、猫、和/或狗；和/或鸟类， 包括商业相关鸟类(如鸡、鸭、鹅、和/或火鸡)。当将所述术语与化合 物或药物的给予联系使用时，所述患者已经成为治疗、观测、和/或给予 所述化合物或药物的对象。本文所述的方法和/或药物组合物也可用于治 疗驯养动物或宠物(如猫和狗)。

本文使用的“癌症(癌症)”和“肿瘤(tumor)”是同义术语。

本文使用的“癌症治疗(‘cancer therapy’和‘cancer treatment’)” 是同义术语。

本文中使用的“化学治疗(chemotherapy)”、“化疗剂/化学治疗剂 (chemotherapeutic/chemotherapeutic agent)”和“抗癌剂(anti-cancer  agent)”是同义术语。

在一些实施方式中，单独的或联合的AHCM剂为对癌症的第一线治 疗，即，在之前未曾给予用来治疗癌症的另一药物的受试者中使用所述 AHCM。

在其它实施方式中，单独的或联合的AHCM剂为对癌症的第二线治 疗，即，在之前曾给予用来治疗癌症的另一药物的受试者中使用所述 AHCM。

在其它实施方式中，单独的或联合的AHCM剂为对癌症的第三线治 疗或第四线治疗，即，在之前曾给予用来治疗癌症的两种或三种其它药 物的受试者中使用所述AHCM。在一些实施例中，在对癌症进行放射治 疗或手术治疗之前、期间、和/或之后，向受试者给予AHCM剂。

在一些实施方式中，将AHCM单独给予或与癌症治疗或抗癌剂联合 给予之前对至少一种癌症治疗或抗癌剂(包括至少两种、至少三种、或 至少四种癌症治疗或抗癌剂)不产生响应的受试者。在此类实施方式中， 可将AHCM剂与他/她之前未对其产生响应的癌症治疗或抗癌剂联合给 予受试者、或与曾用于对他/她进行治疗的癌症治疗或抗癌剂不同的癌症 治疗或抗癌剂联合给予受试者。

在其它实施方式中，将AHCM剂作为附属治疗(即，除主要治疗以 外的治疗)给予。在实施方式中，与主要治疗联合给予的AHCM的附属 效应可为累加的(additive)。

在某些实施方式中，所述癌症为上皮恶性肿瘤、间充质恶性肿瘤或 血液恶性肿瘤。在某些实施方式中，所治疗的癌症为实体瘤(例如，类 癌、癌或肉瘤)、软组织肿瘤(例如，血红素恶性肿瘤)、以及转移病灶 (例如，本文公开的任何癌症的转移病灶)。在一个实施方式中，所治疗 的癌症为纤维化实体瘤或促结缔组织增生性实体瘤，例如，所治疗的癌 症为具有下列一种或多种特征的肿瘤：受限的肿瘤灌注、受压迫的血管、 或纤维化的肿瘤间质。在一个实施方式中，所述实体瘤选自于下列中的 一种或多种：胰腺癌(例如，胰腺腺癌)、乳腺癌、结直肠癌、肺癌(例 如，小细胞肺癌(SCLC)或非小细胞肺癌(NSCLC))、皮肤癌、卵巢癌、 肝癌、食管癌、子宫内膜癌、胃癌、头颈部癌、肾癌、或前列腺癌。

“过度增生性癌症疾病或病症”指的是全部赘生性细胞(neoplastic  cell)的生长和增殖(无论恶性或良性)，包括所有转化细胞和组织以及 所有癌细胞和组织。过度增生性疾病或病症包括但不限于：癌前病变、 异常细胞生长、良性肿瘤、恶性肿瘤、和“癌症”。

本文使用的术语“癌症”、“肿瘤”或“肿瘤组织”是指由过度细胞 分裂导致的异常组织块，在某些情况下为包含表达、过表达、或异常表 达过度增生细胞蛋白的细胞的组织。癌症、肿瘤或肿瘤组织包含“肿瘤 细胞”，所述肿瘤细胞为具有异常生长特性且不具有有用身体机能的赘生 性细胞。癌症、肿瘤、肿瘤组织和肿瘤细胞可以是良性或恶性的。癌症、 肿瘤或肿瘤还可包含“肿瘤相关的非肿瘤细胞”，例如，形成供应肿瘤或 肿瘤组织的血管的血管细胞。非肿瘤细胞可被肿瘤细胞诱导进行复制和 发展，例如，在肿瘤或肿瘤组织中诱导血管生成。

癌症的实例包括但不限于：癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤、以及白 血病或淋巴恶性肿瘤(lymphoid malignancies)。下面列出了此类癌症更 具体的实例，其包括：鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)、肺癌(包括 小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞癌)、腹膜癌、肝细胞癌 (hepatocellular cancer)、胃癌(gastric cancer/stomach cancer)(包括胃肠 癌)、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀 胱癌、肝细胞瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结直肠癌、子 宫内膜癌或子宫癌、涎腺癌、肾癌(kidney cancer/renal cancer)、前列腺 癌、外阴癌(vulvar cancer)、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、肛 门癌、阴茎癌、以及头颈部癌。术语“癌症”包括原发性恶性细胞或肿 瘤(例如，其细胞未曾迁移至受试者体内除初始恶性肿瘤或肿瘤外的位 点的肿瘤)以及继发性恶性细胞或肿瘤(例如，由转移产生的肿瘤，所 述转移为恶性细胞或肿瘤细胞迁移至与初始肿瘤位点不同的继发性位 点)。

癌症或恶性肿瘤的其它实例包括但不限于：儿童急性淋巴母细胞性 白血病(Acute Childhood Lymphoblastic Leukemia)、急性淋巴母细胞性 白血病、急性淋巴细胞性白血病(Acute Lymphocytic Leukemia)、急性骨 髓性白血病、肾上腺皮质癌、成人(原发性)肝细胞癌、成人(原发性) 肝癌、成人急性淋巴细胞性白血病、成人急性骨髓性白血病、成人霍奇 金病(Adult Hodgkin’s Disease)、成人霍奇金淋巴瘤、成人淋巴细胞性白 血病、成人非霍奇金淋巴瘤、成人原发性肝癌、成人软组织肉瘤、AIDS 相关淋巴瘤、AIDS相关恶性肿瘤，肛门癌、星形细胞瘤(Astrocytoma)、 胆管癌、膀胱癌、骨癌、脑干胶质瘤、脑肿瘤、乳腺癌、肾盂和输尿管 癌(Cancer of the Renal Pelvis and Ureter)、中枢神经系统(原发性)淋 巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤、小脑星形细胞瘤(Cerebellar Astrocytoma)、 大脑星形细胞瘤(Cerebral Astrocytoma)、宫颈癌、儿童(原发性)肝细 胞癌、儿童(原发性)肝癌、儿童急性淋巴母细胞性白血病、儿童急性 骨髓性白血病、儿童脑干胶质瘤、儿童小脑星形细胞瘤、儿童大脑星形 细胞瘤、儿童颅外生殖细胞肿瘤(Childhood Extracranial Germ Cell  Tumors)、儿童霍奇金病、儿童霍奇金淋巴瘤、儿童下丘脑和视觉通路胶 质瘤(Childhood Hypothalamic and Visual Pathway Glioma)、儿童淋巴母 细胞性白血病、儿童髓母细胞瘤(Childhood Medulloblastoma)、儿童非 霍奇金淋巴瘤、儿童松果体和幕上原始神经外胚层肿瘤(Childhood Pineal  and Supratentorial Primitive Neuroectodermal Tumors)、儿童原发性肝癌、 儿童横纹肌肉瘤(Childhood Rhabdomyosarcoma)、儿童软组织肉瘤、儿 童视觉通路和下丘脑胶质瘤、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白 血病(Chronic Myelogenous Leukemia)、结肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤 (Cutaneous T-Cell Lymphoma)、内分泌胰岛细胞癌(Endocrine Pancreas  Islet Cell Carcinoma)、子宫内膜癌、室管膜瘤(Ependymoma)、上皮癌、 食管癌、尤文氏肉瘤(Ewing’s Sarcoma)及相关肿瘤、外分泌胰腺癌 (Exocrine Pancreatic Cancer)、颅外生殖细胞肿瘤、性腺外生殖细胞肿瘤 (Extragonadal Germ Cell Tumor)、肝外胆管癌(Extrahepatic Bile Duct  Cancer)、眼癌、女性乳腺癌、高雪氏病(Gaucher’s Disease)、胆囊癌、 胃癌、胃肠道类癌肿瘤(Gastrointestinal Carcinoid Tumor)、胃肠道肿瘤、 生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤(Gestational Trophoblastic Tumor)、 毛细胞白血病(Hairy Cell Leukemia)、头颈部癌、肝细胞癌、霍奇金病、 霍奇金淋巴瘤、高丙种球蛋白血症(Hypergammaglobulinemia)、下咽癌 (Hypopharyngeal Cancer)、肠癌、眼内黑色素瘤(Intraocular Melanoma)、 胰岛细胞癌、胰岛细胞胰腺癌(Islet Cell Pancreatic Cancer)、Kaposi肉 瘤、肾癌、喉癌(Laryngeal Cancer)、唇和口腔癌(Lip and Oral Cavity  Cancer)、肝癌、肺癌、淋巴组织增生性疾病(Lymphoproliferative  Disorders)、巨球蛋白血症(Macroglobulinemia)、男性乳腺癌、恶性间 皮瘤(Malignant Mesothelioma)、恶性胸腺瘤(Malignant Thymoma)、髓 母细胞瘤、黑色素瘤、间皮瘤、转移性隐匿原发性鳞状颈部癌(Metastatic Occult Primary Squamous Neck Cancer)、转移性原发性鳞状颈部癌 (Metastatic Primary Squamous Neck Cancer)、转移性鳞状颈部癌、多发 性骨髓瘤(Multiple Myeloma)、多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤(Multiple  Myeloma/Plasma Cell Neoplasm)、骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic  Syndrome)、髓细胞性白血病、骨髓性白血病、骨髓增殖性疾病 (Myeloproliferative Disorders)、鼻腔和鼻窦癌(Nasal Cavity and  Paranasal Sinus Cancer)、鼻咽癌(Nasopharyngeal Cancer)、神经母细胞 瘤(Neuroblastoma)、妊娠期间非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin′s Lymphoma  During Pregnancy)、非黑色素瘤皮肤癌、非小细胞肺癌、隐匿性原发性 转移性鳞状颈部癌、口咽癌(Oropharyngeal Cancer)、骨/恶性纤维肉瘤 (Osteo-/Malignant Fibrous Sarcoma)、骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤 (Osteosarcoma/Malignant Fibrous Histiocytoma)、骨肉瘤/骨恶性纤维组 织细胞瘤、卵巢上皮癌(Ovarian Epithelial Cancer)、卵巢生殖细胞肿瘤、 卵巢低度恶性潜能肿瘤(Ovarian Low Malignant Potential Tumor)、胰腺 癌、副蛋白血症(Paraproteinemias)、紫癜、甲状旁腺癌、阴茎癌、嗜铬 细胞瘤(Pheochromocytoma)、垂体肿瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、 原发性中枢神经系统淋巴瘤、原发性肝癌、前列腺癌、直肠癌、肾细胞 癌、肾盂和输尿管癌症、视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma)、横纹肌肉 瘤、涎腺癌、结节病肉瘤(Sarcoidosis Sarcomas)、Sezary综合征、皮肤 癌、小细胞肺癌、小肠癌、软组织肉瘤、鳞状颈部癌、胃癌、幕上原始 神经外胚层和松果体肿瘤、T细胞淋巴瘤、睾丸癌、胸腺瘤、甲状腺癌、 肾盂和输尿管移行细胞癌(Transitional Cell Cancer of the Renal Pelvis and  Ureter)、肾盂和输尿管移行癌(Transitional Renal Pelvis and Ureter  Cancer)、滋养细胞肿瘤(Trophoblastic Tumors)、输尿管和肾盂细胞癌、 尿道癌、子宫癌、子宫肉瘤、阴道癌、视觉通路和下丘脑胶质瘤、外阴 癌、Waldenstrom氏巨球蛋白血症、Wilm氏肿瘤、以及位于上面所列出 的器官系统的除瘤形成(neoplasia)之外的任何其它过度增生性疾病。

在其它实施方式中，上文和本文中所述的AHCM剂用于对过度增生 性病症(例如，过度增生性结缔组织病症(例如，过度增生性纤维化疾 病))进行治疗。在一个实施方式中，所述过度增生性纤维化疾病是多系 统的或器官特异性的。示例性的过度增生性纤维化疾病包括但不限于： 多系统病症(例如，全身性硬化症、多灶性纤维硬化症、骨髓移植受者 中的硬皮病样移植物抗宿主病、肾源性系统性纤维化、硬皮病)和器官 特异性病症(例如，肺、肝、心脏、肾、胰腺、皮肤和其它器官的纤维 化)。

在其它实施方式中，所治疗的受试者患有过度增生性遗传病症，例 如，选自于Marfan氏综合征或Loeys-Dietz综合征的过度增生性遗传病 症。已证明氯沙坦可对人类Marfan氏综合征进行治疗，Marfan氏综合征 是由编码细胞外基质蛋白原纤蛋白-1(fibrillin-1)的基因中的突变所引 起的结缔组织病症(Dietz，H.C.等，(2010)New Engl J Med363(9)： 852-863)。原纤蛋白-1包含弹性组织的微原纤维(microfibril)和许多其 它结缔组织的组分。受Marfan氏综合征影响的患者具有血管异常情况(如 主动脉瘤)。所述血管病可在儿童期和随后的一生中导致血管破裂和死 亡。Dietz等首先在Marfan氏综合征的小鼠模型中发现，潜伏型TGF-β 的过度活化在病理生理学中具有重要作用。他们给受影响的小鼠使用氯 沙坦，这在改善血管结构方面显示出显著效果、同时预防了主动脉瘤产 生。他们还使用氯沙坦来对患有Marfan氏综合征的儿童进行了治疗，证 明该药物可显著预防主动脉和肌肉病变的发展。Marfan氏综合征之外的 主动脉疾病也可从氯沙坦的使用中受益。因此，对潜伏型TGF-β活化的 局部抑制和活化TGF-β的循环水平降低可对癌症组织的细胞外基质中的 胶原蛋白以外的结缔组织组分产生影响，这改变了纳米治疗剂的递送和 效力。

在其它实施方式中，过度增生性病症(例如，过度增生性纤维化病 症)选自于下列中的一种或多种：慢性阻塞性肺病、哮喘、主动脉瘤、 辐射诱导的纤维化、骨骼肌肌病、糖尿病肾病、和/或关节炎。

其它可由本发明的方法和组合物进行治疗的示例性过度增生性病症 公开于Sounni，N.E.等，(2010)Diseases Models&Mechanisms3：317-332 中。

联合治疗

应当认识到，上文和本文所述的AHCM剂可与一种或多种其它治疗 (例如，如放射治疗、手术)和/或一种或多种治疗剂联合给予，来对本 文所述的癌症进行治疗。

“联合”并非旨在暗示所述治疗或治疗剂必须同时给予、和/或配制 用于同时递送，虽然这些递送方法也落入本发明的范围之内。可在给予 一种或多种其它额外治疗或治疗剂的同时、之前、或之后给予所述药物 组合物。通常，各试剂根据为该试剂确定的剂量和/或时间表进行给予。 将进一步认识到的是，在这一联合中应用的其它治疗剂可在单一组合物 中一起给予、或在不同的组合物中分别给予。在方案中采用的特定联合 要考虑本发明的药物组合物与其它治疗活性试剂的相容性和/或想要实 现的期望疗效。

通常，预期在联合中使用的其它治疗剂以不超过其单独使用时的水 平被使用。在一些实施方式中，在联合中采用的水平将低于其单独使用 时的水平。

在一个实施方式中，所述AHCM和/或治疗(例如，癌症治疗或过度 增生治疗)与促纤维化途径(例如，依赖于或不依赖于TGF-β和/或CTGF 活化的途径)的抑制剂(“促纤维化途径抑制剂”)联合给予。在一个实 施方式中，所述AHCM和/或癌症治疗与下列试剂中的一种或多种联合给 予：内皮素1抑制剂、PDGF抑制剂、Wnt/β-连环蛋白抑制剂、IGF-1抑 制剂、TNF-α抑制剂、和/或IL-4抑制剂。在另一实施方式中，所述AHCM 和/或癌症治疗与内皮素1抑制剂和/或PDGF抑制剂联合给予。在其它实 施方式中，所述AHCM和/或癌症治疗与下列一种或多种试剂的抑制剂联 合给予：4型趋化因子受体(CXCR4)(例如，AMD3100、MSX-122)； 基质细胞衍生因子1(SDF-1)(例如，鞣酸)；hedgehog(例如，GDC-0449、 环巴胺或GANT58)。

在其它实施方式中，所述AHCM与低分子量化学治疗剂或小分子量 化学治疗剂联合给予。示例性的低分子量化学治疗剂或小分子量化学治 疗剂包括但不限于：13-顺式-维甲酸(13-cis-retinoic acid)(异维甲酸 (isotretinoin)，)、2-CdA(2-氯脱氧腺苷 (chlorodeoxyadenosine)，克拉屈滨(cladribine)，LEUSTATINTM)、5- 阿扎胞苷(5-azacitidine)(阿扎胞苷，)、5-氟尿嘧啶(5-FU， 氟尿嘧啶，)、6-巯基嘌呤(6-MP，巯基嘌呤，)、 6-TG(6-硫鸟嘌呤，硫鸟嘌呤，THIOGUANINE)、abraxane (蛋白结合型紫杉醇)、放线菌素-D(actinomycin-D)(放线菌素-D (dactinomycin)，)、阿利维甲酸(alitretinoin) 全反式维甲酸(ATRA，维甲酸，)、六 甲蜜胺(altretamine)(六甲基三聚氰胺，HMM，)、氨甲蝶 呤(amethopterin)(甲氨蝶呤(methotrexate)，甲氨蝶呤钠，MTX， TREXALLTM，)、氨磷汀阿糖胞嘧啶 (arabinosylcytosine)(Ara-C，阿糖胞苷(cytarabine)，)、 三氧化二砷天冬酰胺酶(欧文氏菌(Erwinia)L-天冬 酰胺酶，L-天冬酰胺酶，)、BCNU(卡莫司 汀(carmustine)，)、苯达莫司汀(bendamustine)贝沙罗汀(bexarotene)博来霉素(bleomycin) 白消安亚叶酸钙 (calcium leucovorin)(亚叶酸(Citrovorum Factor)，亚叶酸(folinic acid)， 亚叶酸(leucovorin))，喜树碱-11(CPT-11，伊立替康，)、 卡培他滨(capecitabine)卡铂卡莫 司汀圆片(含卡莫司汀植入物的prolifeprospan20，圆片)、 CCI-779(坦罗莫司(temsirolimus)，)、CCNU(洛莫司汀， CeeNU)、CDDP(顺铂，)、苯丁酸氮芥 (chlorambucil)(留可然(leukeran))、环磷酰胺达卡巴嗪(dacarbazine)(DIC，DTIC，咪唑甲酰胺， )、道诺霉素(柔红霉素，柔红霉素盐酸盐，红比霉素盐 酸盐(rubidomycin hydrochloride)，)、地西他滨 (decitabine)右雷佐生(dexrazoxane)DHAD(米托蒽醌，)、多西他赛多 柔比星表柔比星(ELLENCETM)、雌莫 司汀(estramustine)依托泊苷(VP-16，依托泊苷磷酸盐， )、氟尿苷氟达 拉滨(fludarabine)氟尿嘧啶(乳膏)(CARACTM， )、吉西他滨羟基脲 (DROXIATM，MYLOCELTM)、伊达比星异环磷酰胺伊沙匹隆(ixabepilone)(IXEMPRATM)、LCR(新 长春碱(leurocristine)，长春新碱(vincristine)，VCR，VINCASAR)、L-PAM(L-溶肉瘤素(L-sarcolysin)，美法仑 (melphalan)，苯基丙氨酸氮芥，)、甲二氯二乙胺 (mechlorethamine)(甲二氯二乙胺盐酸盐，氮芥(mustine)，氮芥(nitrogen  mustard)，)、美司钠(mesna)(MESNEXTM)、丝裂霉素 (丝裂霉素-C，MTC，)、奈拉滨(nelarabine) 奥沙利铂(ELOXATINTM)、紫杉醇(ONXALTM)、培门冬酶(pegaspargase)(PEG-L-天冬酰胺酶， )、PEMETREXED喷司他丁(pentostatin) 丙卡巴肼(procarbazine)链脲菌素 替莫唑胺替尼泊甙(teniposide) (VM-26，)、TESPA(硫代磷酰胺(thiophosphoamide)，噻替 派，TSPA，)、拓扑替康(topotecan)长 春花碱(vinblastine)(硫酸长春碱，长春花碱(vincaleukoblastine)，VLB， )、长春瑞滨(酒石酸长春瑞滨， )、以及伏林司他(vorinostat)

在另一实施方式中，与生物制剂联合给予所述AHCM剂。在治疗癌 症方面有用的生物制剂在本领域中是已知的，并且可将本发明的结合分 子，例如，与此类已知的生物制剂联合给予。

例如，FDA已经批准了下列用于治疗乳腺癌的生物制剂： (曲妥珠单抗(trastuzumab)，Genentech Inc.，South San  Francisco，Calif.；在HER2阳性乳腺癌中具有抗肿瘤活性的人源化单克 隆抗体)；(氟维司群(fulvestrant)，AstraZeneca  Pharmaceuticals，LP，Wilmington，Del.；用于治疗乳腺癌的雌激素受体 拮抗剂)；(阿那曲唑(anastrozole)，AstraZeneca  Pharmaceuticals，LP；阻断芳香酶(一种制造雌激素所需的酶)的非甾类 芳香酶抑制剂)；(依西美坦(exemestane)，Pfizer Inc.，New  York，N.Y.；用于治疗乳腺癌的不可逆甾类芳香酶灭活剂)；(来曲唑，Novartis Pharmaceuticals，East Hanover，N.J.；由FDA批准 用于治疗乳腺癌的非甾类芳香酶抑制剂)；以及(他莫昔 芬，AstraZeneca Pharmaceuticals，LP；由FDA批准用于治疗乳腺癌的非 甾类抗雌激素剂)。可与本发明的结合分子联合的其它生物制剂包括： (贝伐珠单抗(bevacizumab)，Genentech Inc.；FDA首个批 准的用于抑制血管生成的治疗)；以及(替伊莫单抗 (ibritumomab tiuxetan)，Biogen Idec，Cambridge，Mass.；目前批准用 于治疗B细胞淋巴瘤的放射性标记单克隆抗体)。

另外，FDA已经批准了下列用于治疗结直肠癌的生物制剂： (西妥昔单抗，ImClone Systems Inc.，New York， N.Y.，以及Bristol-Myers Squibb，New York，N.Y.；为针对表皮生长因子 受体(EGFR)的单克隆抗体)；(甲磺酸伊马替尼(imatinib  mesylate)；蛋白激酶抑制剂)；以及(盐酸左旋咪唑 (levamisole hydrochloride)，Janssen Pharmaceutica Products，LP， Titusville，N.J.；1990年由FDA批准的免疫调制剂，在对患有Dukes C 期结肠癌的患者进行手术切除后，与5-氟尿嘧啶联合作为辅助治疗)。

对于肺癌的治疗，示例性的生物制剂包括(厄洛替尼 (erlotinib)HCL，OSI Pharmaceuticals Inc.，Melville，N.Y.；用于靶向 人表皮生长因子受体1(HER1)通路的小分子)。

对于多发性骨髓瘤的治疗，示例性的生物制剂包括 Velcade(硼替佐米(bortezomib)，Millennium Pharmaceuticals，Cambridge  Mass.；蛋白酶体抑制剂)。其它生物制剂包括(沙利度 胺，Clegene Corporation，Warren，N.J.；免疫调节剂，并显出具有多种 作用，包括抑制骨髓瘤细胞的生长和存活、以及抗血管生成的能力)。

其它示例性的癌症治疗抗体包括但不限于：3F8、阿巴伏单抗 (abagovomab)、阿德木单抗(adecatumumab)、阿托珠单抗(afutuzumab)、 培化阿珠单抗(alacizumab pegol)、阿仑珠单抗(alemtuzumab) 喷替酸阿妥莫单抗(altumomab  pentetate)麻安莫单抗(anatumomab mafenatox)、 安芦珠单抗(anrukinzumab)(IMA-638)、阿泊珠单抗(apolizumab)、阿 西莫单抗(arcitumomab)巴土昔单抗(bavituximab)、 贝妥莫单抗(bectumomab)贝利木单抗(belimumab) 贝索单抗(besilesomab) 贝伐珠单抗比伐珠单抗(bivatuzumab mertansine)、兰妥莫单抗(blinatumomab)、brentuximab vedotin、美坎珠 单抗(cantuzumab mertansine)、卡罗单抗喷地肽(capromab pendetide) 卡妥索单抗(catumaxomab)CC49、 西妥昔单抗(C225，)、泊西他珠单抗(citatuzumab bogatox)、 西妥木单抗(cixutumumab)、clivatuzumab tetraxetan、可那木单抗 (conatumumab)、达西珠单抗(dacetuzumab)、地舒单抗(denosumab) 地莫单抗(detumomab)、伊美昔单抗(ecromeximab)、 依决洛单抗(edrecolomab)依洛珠单抗(elotuzumab)、 西伊匹莫单抗(epitumomab cituxetan)、依帕珠单抗(epratuzumab)、厄 马索单抗(ertumaxomab)埃达珠单抗(etaracizumab)、 法妥珠单抗(farletuzumab)、芬妥木单抗(figitumumab)、夫苏木单抗 (fresolimumab)、加利昔单抗(galiximab)、吉妥珠单抗奥佐米星 (gemtuzumab ozogamicin)吉瑞昔单抗(girentuximab)、 glembatumumab vedotin、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan) 伊戈伏单抗(igovomab)应妥木 单抗(intetumumab)、伊珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin)、伊 匹木单抗(ipilimumab)、伊妥木单抗(iratumumab)、拉贝珠单抗 (labetuzumab)来沙木单抗(lexatumumab)、林妥珠单 抗(lintuzumab)、鲁卡木单抗(lucatumumab)、鲁昔单抗(lumiliximab)、 马帕尼单抗(mapatumumab)、马妥珠单抗、米拉珠单抗(milatuzumab)、 明瑞莫单抗(minretumomab)、米妥莫单抗(mitumomab)、他那可单抗 (nacolomab tafenatox)、他那莫单抗(naptumomab estafenatox)、奈昔木 单抗、尼妥珠单抗巯诺莫单抗 (nofetumomab merpentan)奥法木单抗(ofatumumab) olaratumab、莫奥珠单抗(oportuzumab monatox)、奥 戈伏单抗(oregovomab)帕尼单抗pemtumomab培妥珠单抗(pertuzumab) 平妥单抗(pintumomab)、普立木单抗(pritumumab)、 雷莫芦单抗(ramucirumab)、雷珠单抗(ranibizumab)利妥木单抗(rilotumumab)、利妥昔单抗(rituximab)罗妥木单抗(robatumumab)、沙妥莫单抗喷地肽 (satumomab pendetide)、西罗珠单抗(sibrotuzumab)、赛妥昔单抗 (siltuximab)、松妥珠单抗(sontuzumab)、tacatuzumab tetraxetan 帕他莫单抗(taplitumomab paptox)、替妥莫单抗 (tenatumomab)、TGN1412、替昔木单抗(ticilimumab)(曲美木单抗 (tremelimumab))、替加珠单抗(tigatuzumab)、TNX-650、托西莫单抗 (tositumomab)曲妥珠单抗曲美木单 抗、西莫白介素单抗(tucotuzumab celmoleukin)、维妥珠单抗 (veltuzumab)、伏洛昔单抗(volociximab)、伏妥莫单抗(votumumab) 扎芦木单抗以及扎木单抗 (zanolimumab)

在其它实施方式中，与病毒癌症治疗剂联合给予所述AHCM。示例 性的病毒癌症治疗剂包括但不限于：痘苗病毒(vvDD-CDSR)、表达癌 胚抗原的麻疹病毒(carcinoembryonic antigen-expressing measles virus)、 重组痘苗病毒(TK-缺失加GM-CSF)、Seneca Valley病毒-001、新城病 毒(Newcastle virus)、柯萨奇病毒(coxsackie virus)A21、GL-ONC1、 表达EBNA1C末端/LMP2嵌合蛋白的重组改良痘苗安卡拉疫苗(EBNA1 C-terminal/LMP2chimeric protein-expressing recombinant modified  vaccinia Ankara vaccine)、表达癌胚抗原的麻疹病毒、G207溶瘤病毒、 表达p53的改良痘苗病毒安卡拉疫苗、OncoVEX GM-CSF改性单纯疱疹 病毒1(OncoVEX GM-CSF modified herpes-simplex1virus)、禽痘病毒疫 苗载体(fowlpox virus vaccine vector)、重组痘苗前列腺特异性抗原疫苗、 人乳头瘤病毒16/18L1病毒样颗粒/AS04疫苗、MVA-EBNA1/LMP2Inj. 疫苗、四价HPV疫苗、四价人乳头瘤病毒(6型、11型、16型、18型) 重组疫苗重组禽痘-CEA(6D)/TRICOM疫苗；重组痘 苗-CEA(6D)-TRICOM疫苗、重组改良痘苗安卡拉-5T4疫苗、重组禽痘 -TRICOM疫苗、溶瘤疱疹病毒NV1020、HPV L1VLP疫苗V504、人乳 头瘤病毒二价(16型和18型)疫苗单纯疱疹病毒HF10、 Ad5CMV-p53基因、重组痘苗DF3/MUC1疫苗、重组痘苗-MUC-1疫苗、 重组痘苗-TRICOM疫苗、ALVAC MART-1疫苗、表达人前脑啡肽原 (Preproenkephalin)的复制-缺陷型单纯疱疹病毒I型(HSV-1)载体 (NP2)、野生型呼肠孤病毒(reovirus)、呼肠孤病毒3型Dearing 溶瘤病毒HSV1716、基于重组改良痘苗安卡拉(MVA) 的编码Epstein-Barr病毒靶抗原的疫苗、重组禽痘-前列腺特异性抗原疫 苗、重组痘苗-前列腺特异性抗原疫苗、重组痘苗-B7.1疫苗、rAd-p53基 因、Ad5-A24RGD、HPV疫苗580299、JX-594(胸苷激酶缺失的痘苗病 毒加GM-CSF)、HPV-16/18L1/AS04、禽痘病毒疫苗载体、痘苗-酪氨酸 酶疫苗、MEDI-517HPV-16/18VLP AS04疫苗、含有单纯疱疹病毒的胸 苷激酶的腺病毒载体TK99UN、HspE7、FP253/氟达拉滨、ALVAC(2)黑 色素瘤多抗原治疗疫苗、ALVAC-hB7.1、金丝雀痘(canarypox)-hIL-12 黑色素瘤疫苗、Ad-REIC/Dkk-3、rAd-IFN SCH721015、TIL-Ad-INFg、 Ad-ISF35、以及柯萨奇病毒A21(CVA21，)。

在其它实施方式中，与纳米药物联合给予所述AHCM。示例性的癌 症纳米药物包括但不限于：(白蛋白结合型紫杉醇纳米颗 粒)、CRLX101(与基于线性环糊精的聚合物缀合的CPT)、CRLX288(多 西他赛缀合至可生物降解聚合物乳酸-羟基乙酸共聚物)、阿糖胞苷脂质 体(脂质体Ara-C，DEPOCYTTM)、道诺霉素脂质体多柔比星脂质体封装道诺霉素柠檬酸盐的脂 质体以及PEG抗VEGF适配子

在一些实施方式中，与紫杉醇或紫杉醇制剂(例如，蛋 白结合型紫杉醇(例如，))联合给予所述AHCM。示例 性的紫杉醇制剂包括但不限于：白蛋白结合型紫杉醇纳米颗粒 (由Abraxis Bioscience市售)、二十二碳六烯酸结合型 紫杉醇(DHA-紫杉醇，Taxoprexin，由Protarga市售)、聚谷氨酸结合型 紫杉醇(PG-紫杉醇，聚谷氨酸紫杉醇(paclitaxel poliglumex)，CT-2103， XYOTAX，由Cell Therapeutic市售)、肿瘤活化前药(TAP)、ANG105 (结合至三个紫杉醇分子的Angiopep-2，由ImmunoGen市售)、紫杉醇 -EC-1(结合至erbB2识别肽EC-1的紫杉醇；参见Li等，Biopolymers (2007)87：225-230)、以及缀合有葡萄糖的紫杉醇(例如，2’-紫杉醇 甲基2-吡喃葡萄糖基琥珀酸盐，参见Liu等，Bioorganic Medicinal  Chemistry Letters(2007)17：617-620)。

示例性的用于治疗癌症的RNAi和反义RNA剂包括但不限于： CALAA-01、siG12D LODER(Local Drug EluteR)、以及ALN-VSP02。

其它癌症治疗剂包括但不限于：细胞因子(例如，阿地白介素(IL-2， 白介素-2，))、α干扰素(IFN-α、干扰素α、(干扰素α-2b)、(干扰素α-2a))；阿法依泊汀(Epoetin alfa) 非格司亭(filgrastim)(G-CSF、粒细胞集落刺激因子、 )、GM-CSF(粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、沙格司亭 (sargramostim)、LEUKINETM)、IL-11(白介素-11、奥普瑞白介素 (oprelvekin)、)、干扰素α-2b(PEG缀合物)(PEG干扰 素、PEG-INTRONTM)、以及培非司亭(pegfilgrastim)(NEULASTATM))； 激素治疗剂(例如，氨鲁米特(aminoglutethimide)阿 那曲唑比卡鲁胺(bicalutamide)依 西美坦氟甲睾酮氟他胺 氟维司群戈舍瑞林来曲唑亮丙立德(ELIGARDTM、LUPRON VIADURTM)、甲地孕酮(醋酸甲地孕酮、)、尼鲁 米特(nilutamide)奥曲肽(醋酸奥 曲肽、)、雷洛昔芬 罗米司亭(romiplostim)他莫昔芬以 及托瑞米芬)；磷脂酶A2抑制剂(例如，阿那格雷 )；生物响应改良剂(例如、BCG以及阿法达贝泊汀(Darbepoetin alfa))；靶向治疗剂(例 如，硼替佐米达沙替尼(dasatinib)(SPRYCELTM)、 地尼白介素毒素连接物厄洛替尼依维莫 司吉非替尼甲磺酸伊马替尼(STI-571、 GLEEVECTM)、拉帕替尼索拉非尼以 及SU11248(舒尼替尼、))；免疫调节剂和抗血管生成剂(例 如、CC-5013(来那度胺(lenalidomide)、)、以及沙利度胺 )；糖皮质激素(例如，可的松(氢化可的松、氢化可 的松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠、hydrocortone phosphate)、 decadron(地塞米松、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠、)、甲基强的松龙(6-甲基强的 松龙、醋酸甲基强的松龙、甲基强的松龙琥珀酸钠、)、 强的松龙以及强的松)；以及二膦酸盐类(例如，帕米膦酸盐 (pamidronate)；以及唑来膦酸(zoledronic acid) )。

在一些实施方式中，与酪氨酸激酶抑制剂(例如，受体酪氨酸激酶 (RTK)抑制剂)联合使用所述AHCM剂。示例性的酪氨酸激酶抑制剂 包括但不限于：表皮生长因子(EGF)通路抑制剂(例如表皮生长因子 受体(EGFR)抑制剂)、血管内皮生长因子(VEGF)通路抑制剂(例如 血管内皮生长因子受体(VEGFR)抑制剂(例如，VEGFR-1抑制剂、 VEGFR-2抑制剂、VEGFR-3抑制剂)、血小板衍生生长因子(PDGF)通 路抑制剂(例如血小板衍生生长因子受体(PDGFR)抑制剂(例如， PDGFR-β抑制剂))、RAF-1抑制剂、KIT抑制剂以及RET抑制剂。在一 些实施方式中，与AHCM剂联合使用的抗癌剂选自于由下列试剂所组成 的组：阿昔替尼(AG013736)、波舒替尼(SKI-606)、西地尼布(cediranib) (RECENTINTM，AZD2171)、达沙替尼(BMS-354825)、 厄洛替尼吉非替尼伊马替尼(CGP57148B，STI-571)、拉帕替尼来妥替 尼(lestaurtinib)(CEP-701)、来那替尼(HKI-272)、尼洛替尼(nilotinib) 司马沙尼(semaxinib，SU5416)、舒尼替尼(SU11248)、toceranib凡德他尼(ZD6474)、 伐他拉尼(PTK787，PTK/ZK)、曲妥珠单抗贝伐珠 单抗利妥昔单抗西妥昔单抗 帕尼单抗雷珠单抗尼 洛替尼索拉非尼阿仑珠单抗 吉妥珠单抗奥佐米星ENMD-2076、 PCI-32765、AC220、乳酸多韦替尼(dovitinib lactate)(TKI258，CHIR-258)、 BIBW2992(TOVOKTM)、SGX523、PF-04217903、PF-02341066、 PF-299804、BMS-777607、ABT-869、MP470、BIBF1120AP24534、JNJ-26483327、MGCD265、DCC-2036、BMS-690154、 CEP-11981、tivozanib(AV-951)、OSI-930、MM-121、XL-184、XL-647、 XL228、AEE788、AG-490、AST-6、BMS-599626、CUDC-101、PD153035、 培利替尼(pelitinib)(EKB-569)、凡德他尼(zactima)、WZ3146、WZ4002、 WZ8040、ABT-869(linifanib)、AEE788、AP24534(ponatinib)、 AV-951(tivozanib)、阿昔替尼、BAY73-4506(regorafenib)、丙氨酸布立 尼布(brivanib alaninate)(BMS-582664)、布立尼布(BMS-540215)、西 地尼布(AZD2171)、CHIR-258(dovitinib)、CP673451、CYC116、E7080、 Ki8751、马赛替尼(masitinib)(AB1010)、MGCD-265、二磷酸莫替沙 尼(motesanib diphosphate)(AMG-706)、MP-470、OSI-930、盐酸帕唑 帕尼、PD173074、甲苯磺酸索拉非尼(nSorafenib Tosylate)(BAY43-9006)、 SU5402、TSU-68(SU6668)、伐他拉尼、XL880(GSK1363089， EXEL-2880)。选定的酪氨酸激酶抑制剂选自于舒尼替尼、厄洛替尼、吉 非替尼、或索拉非尼。在一个实施方式中，所述酪氨酸激酶抑制剂为舒 尼替尼。

在一个实施方式中，与下列试剂中的一种或多种联合给予所述 AHCM：抗血管生成剂、或血管靶向剂或血管破裂剂(vascular disrupting  agent)。示例性的抗血管生成剂包括但不限于：VEGF抑制剂(例如，抗 VEGF抗体(例如，贝伐珠单抗))；VEGF受体抑制剂(例如，伊曲康唑 (itraconazole))；内皮细胞的细胞增殖和/或迁移的抑制剂(例如，羧胺 三唑(carboxyamidotriazole)，TNP-470)；血管生成刺激剂的抑制剂(例 如，苏拉明(suramin))。血管靶向剂(VTA)或血管破裂剂(VDA)被 设计用于破坏癌症肿瘤的血管(血管)以使其发生中心性坏死(在例如 Thorpe，P.E.(2004)Clin.Cancer Res.Vol.10：415-427中评论)。VTA 可以是小分子。示例性的小分子VTA包括但不限于：微管去稳定药物 (microtubule destabilizing drugs)(例如，康普瑞汀A-4磷酸二钠 (combretastatin A-4disodium phosphate)(CA4P)、ZD6126、AVE8062、 Oxi4503)；以及vadimezan(ASA404)。

将要认识到的是，以同位素标记的抗肿瘤抗体已成功用于在动物模 型中、且某些情况下在人类中对实体瘤以及淋巴瘤/白血病中的细胞进行 破坏。示例性的放射性同位素包括：90y、125I、131I、123I、111In、105Rh、 153Sm、67Cu、67Ga、166Ho、177Lu、186Re以及188Re。放射性核素通过产 生电离辐射起作用，所述电离辐射引起核DNA中多条链断裂，导致细胞 死亡。用于产生治疗缀合物的同位素通常产生具有高能量的α粒子或β 粒子，所述粒子具有短的路径长度(path length)。此类放射性核素杀死 紧邻它们的细胞(例如，所述缀合物附着或进入的赘生性细胞)。所述放 射性核素对非定位(non-localized)细胞具有很小影响或不具有影响。放 射性核素基本上是非免疫原性的。

根据本文的教导还将认识到的是，出于诊断和治疗目的，结合分子 可与不同放射性标记缀合。为了这一日的，上文所述的美国专利号 6,682,134、6,399,061、以及5,843,439公开了在给予治疗抗体之前用于肿 瘤诊断“成像”的放射性同位素标记的治疗缀合物。“In2B8”缀合物包 含对人CD20抗原具有特异性的鼠源单克隆抗体2B8，所述抗体通过双 官能团螯合剂(即，MX-DTPA(二乙烯三胺五乙酸)，其中包含1-异硫 氰酸苯甲基-3-甲基-DTPA与1-甲基-3-异硫氰酸苯甲基-DTPA的1∶1混合 物)附着至111In。作为诊断放射性核素尤其优选111In，因为其可安全地 给予约1-约10mCi而不产生可检测的毒性；且成像数据通常能对随后的 90y标记的抗体分布具有预测性。许多成像研究使用5mCi的111In标记的 抗体，因为这一剂量既安全、又具有与更低剂量相比提升的成像效率， 在给予抗体后3-6天时出现最佳成像。例如，参见：Murray，J.Nuc.Med. 26：3328(1985)以及Carraguillo等，J.Nuc.Med.26：67(1985)。

在某些实施方式中，同时给予(例如，同时或同日、或在同一治疗 方案中给予两种试剂)和/或序贯给予(例如，在一段时间内给予一种试 剂，随后在第二段时间内、或在不同治疗方案内给予另一试剂)AHCM 剂和另外的抗癌剂。

在一个实施方式中，在抗癌剂之前给予AHCM。在其它实施方式中， 在抗癌剂之前给予AHCM，并随后同时给予所述AHCM和所述抗癌剂。

在某些实施方式中，同时给予AHCM剂和另外的抗癌剂。例如，在 某些实施方式中，同时、同日、或在同一治疗方案中给予AHCM剂和另 外的抗癌剂。在某些实施方式中，同日、或在同一治疗方案内，在另外 的抗癌剂之前给予AHCM剂。

在某些实施方式中，在一段时间内与另外的抗癌剂同时给予AHCM 剂，在上述给予点后，停止以另外的抗癌剂进行的治疗、继续以AHCM 进行的治疗。

在其它实施方式中，在一段时间内与另外的抗癌剂同时给予AHCM 剂，在上述给予点后，停止以AHCM进行的治疗、继续以另外的抗癌剂 进行的治疗。

在某些实施方式中，序贯给予AHCM剂和另外的抗癌剂。例如，在 某些实施方式中，在另外的抗癌剂的治疗方案已经停止后给予AHCM剂。 在某些实施方式中，在AHCM剂的治疗方案已经停止后给予另外的抗癌 剂。

在一些实施方式中，可以脉冲给药的方式来给予AHCM剂和抗癌剂。 在其它实施方式中，可将所述试剂以pulse-chase给药的方式进行给予， 例如，在短暂的时间内给予AHCM剂(pulse)，随后在较长时间内给予 抗癌剂(例如，chase)；或反之亦然。

诊断方法和测定法

AHCM剂可用于在哺乳动物(优选人类)中改善癌症的诊断、治疗、 预防和/或预后。这些诊断测定法可以在体内或体外进行(例如，在血样、 活检组织或尸检组织上进行)。

因此，本发明提供在癌症诊断期间有用的诊断方法，所述方法包括 如下步骤：对来自个体的组织或其它细胞或体液中的靶蛋白或转录本的 表达水平进行测量；以及将测得的表达水平与正常组织或体液中的标准 靶表达水平进行比较，其中，与标准相比表达水平的提高表明存在病症。

一个实施方式提供了对流体或组织样品中异常过度增生性的细胞 (例如，癌前细胞或癌细胞)存在与否进行检测的方法，所述方法包括 如下步骤：对个体的组织或体液样品中目标的表达进行分析；以及将在 样品中测得的目标表达存在与否或目标表达水平与一组标准组织或体液 样品中的所述目标表达存在与否或目标表达水平进行比较，其中，检测 到目标表达或目标表达相比标准有所提高表明存在异常过度增生性细胞 生长。

本发明的一个方面为在受试者中进行癌症的体内检测或诊断的方 法，所述受试者优选为哺乳动物、并最优选为人类。在一个实施方式中， 诊断包括：a)向受试者给予(例如，胃肠外给予、皮下给予、或腹膜内 给予)有效量的抗癌症抗原的标记抗体或其片段，所述受试者已进行过 AHCM治疗或正在进行AHCM治疗；b)在给予后等待一段时间，以使 标记抗体在受试者中优先集中于表达目标的位点(并且将未结合的标记 分子清除至背景水平)；c)测定背景水平；以及d)对受试者中的标记分 子进行检测，当标记分子的检测高于背景水平时，表明受试者患有与目 标异常表达相关的特定疾病或病症。可通过多种方法对背景水平进行测 定，所述方法包括对于特定体系，将检测到的标记分子的量与之前测定 的标准值进行比较。

本领域中将理解的是，受试者的大小和所使用的成像系统将决定产 生诊断图像所需的成像部分的量。就放射性同位素部分的情况来说，对 于人类受试者，注入的放射性的量将通常为约5-20毫居里、例如5-20 毫居里的99Tc。标记的结合分子(例如，抗体或抗体片段)然后将优先 累积于含有特定蛋白质的细胞位置处。体内肿瘤成像在S.W.Burchiel等， “Immunopharmacokinetics of Radiolabeled Antibodies and Their  Fragments.”(Tumor Imaging中第13章：The Radiochemical Detection of  Cancer，S.W.Burchiel和B.A.Rhodes著，Masson Publishing Inc.(1982)) 中有所描述。

根据几种可变因素(包括所用标记的类型和给药方式)，给药后用于 使标记分子在受试者中优先集中于位点且未结合的标记分子被清除至背 景水平的时间间隔为6-48小时、或6-24小时、或6-12小时。在另一个 实施方式中，给药后的所述时间间隔为5-20天或7-10天。

可使用本领域已知的用于体内扫描的方法对患者中标记分子的存在 与否进行检测。这些方法取决于所用标记的类型。本领域技术人员将能 够确定用于检测特定标记的适当方法。可用于本发明的诊断方法的方法 和装置包括但不限于：计算机断层扫描(CT)、全身扫描(如正电子发 射断层扫描(PET)、磁共振成像(MRI)、以及超声波检查(sonography))、 X射线照相术、核磁共振成像(NMR)、CAT扫描或电子自旋共振成像 (ESR)。

药物组合物

本文所述的组合物可被引入于多种用于给药的制剂之中。更具体而 言，所述组合物可通过与适当的、药学上可接受的载体或稀释剂联合而 被制成药物组合物，并可被制成半固体、液体或气体形式的制剂(如胶 囊剂、粉末剂、颗粒剂、凝胶剂、浆剂、膏剂、溶液剂、栓剂、注射剂、 吸入剂和气雾剂)。同样地，所述组合物的给药可以多种方式实现，包括 口服给药、口腔含化给药、直肠给药、胃肠外给药、腹膜内给药、皮内 给药、经皮给药、气管内给药。另外，所述组合物可处于储库剂型或缓 释剂型中以局部方式而不是全身方式给药。

另外，可将所述组合物与常用赋形剂、稀释剂或载体一起配制并压 制成片剂，或配制成酏剂(elixir)或溶液剂以方便口服给药，或通过肌 内或静脉内途径给药。可将所述组合物经皮给予，并可配制为缓释剂型 等。组合物可被单独给予、彼此间联合给予，或者其可与其它已知化合 物(本文论述的化合物)联合使用。

用于本发明的适合剂型记载于Remington’s Pharmaceutical Sciences (1985)中。此外，关于药物递送方法的综述，参见：Langer(1990) Science249：1527-1533。可以本领域技术人员知晓的方式制造如本文所 述的药物组合物，例如，通过混合、溶解、造粒、制造糖衣、研细、乳 化、封装、包埋或冻干处理进行。下列方法和赋形剂仅为示例性的、而 决不是限制性的。

对于口服给药，可通过与本领域已知的药学上可接受的载体结合来 配制所述组合物。此类载体使所述化合物能被配制为丸剂、胶囊剂、乳 剂、亲脂性和亲水性混悬剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、浆剂、混悬剂 等，用于由待治疗的患者口服摄取。用于口服使用的药物制剂可通过下 列步骤获得：将所述组合物与赋形剂混合，并在加入适合的助剂(若有 需要的话)后，对颗粒混合物进行加工，以获得片剂或糖衣剂的核(dragee  core)。特别地，适合的赋形剂为：填充剂，如糖(包括乳糖、蔗糖、甘 露醇、或山梨醇)；纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马 铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤 维素钠、和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。

对于吸入给药，用于本发明的用途的组合物可以气溶胶喷雾制剂的 形式方便地递送，所述气溶胶喷雾制剂来自于使用适合的推进剂 (propellant)(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧 化碳或其它适合的气体)的加压包装或喷雾器、或来自于无推进剂的干 粉吸入器。就加压气溶胶而言，可通过提供用于递送规定供给量的阀来 确定剂量单位。用于在吸入器或吹入器中使用的例如明胶的胶囊和药筒 (cartridge)可被配制成包含所述化合物与适合的粉末基底(powder base) (如乳糖或淀粉)的混合粉末。

可将所述组合物配制成用于由注射(例如，団注(bolus injection) 或连续输注)进行的胃肠外给药。用于注射的制剂可在具有所添加的防 腐剂的情况下以单位剂型(例如，处于安瓿或多剂量容器中)存在。所 述组合物可采用如下形式：混悬剂、溶液剂或处于油性或水性载体中的 乳剂，并可含有配方剂(formulator agent)(如悬浮剂、稳定剂和/或分散 剂)。

还可将所述组合物配制为直肠组合物(如栓剂或保留灌肠(retention  enemas))，所述组合物例如含有传统的栓剂基底(如可可脂、卡波蜡 (carbowax)、聚乙二醇或其它甘油酯)，所有这些基底均在体温下融化， 而在室温下凝固。

另外，还可将所述组合物配制成储库剂。此类长效作用制剂可通过 植入给药(例如，皮下或肌内给药)或通过肌肉注射给药。因此，例如， 可将化合物与适合的聚合物或疏水物质(例如，处于可接受的油中的乳 剂)或离子交换树脂一起进行配制，或以微溶衍生物(例如，微溶盐类) 的形式来进行配制。

脂质颗粒(例如，脂质体)和乳剂为已知的用于疏水性药物的递送 的媒介(vehicle)或载体的实例。可使用长循环脂质体(例如，隐形脂 质体(stealth liposome))。U.S.专利号5,013,556中总体描述了此类脂质 体。本发明的化合物也可通过控释手段和/或递送装置进行给药，所述控 释手段和/如递送装置描述于美国专利号3,845,770、3,916,899、3,536,809、 3,598,123、以及4,008,719中。

适合用于本发明的药物组合物包括其中含有治疗有效量的活性成分 的组合物。给予的组合物的量自然将取决于进行治疗的受试者、受试者 的体重、病痛的严重程度、给药方式以及处方医师的判断。对有效量的 确定是在本领域技术人员的能力范围之内的，尤其是在基于本文提供的 详细公开的情况之下。通常，AHCM剂和/或癌症治疗剂的合适日剂量可 为化合物产生有效疗效的最低剂量的量。该有效剂量可通常取决于上述 因素。

接受这一治疗的受试者为任何有需要的动物，包括灵长类动物(特 别是人类)、马、牛、猪、羊、家禽、狗、猫、小鼠和大鼠。

可每日、每两日、每周三次、每周两次、每周、或每两周给予所述 化合物。用药方案可包括“药物假期”，即，可给药两周停一周、或给药 三周停一周、或给药四周停一周等；或者可连续地、无药物假期地给药。 可通过口服、静脉内、腹膜内、局部、经皮、肌内、皮下、鼻内、舌下 或任何其它途径给予所述化合物。

由于与其它治疗(例如另外的化疗剂、放射或手术)联合给予AHCM 剂，各试剂或治疗的剂量可低于用于单一试剂治疗的相应剂量。对给药 方式和正确剂量的确定是本领域技术人员所熟知的。

在一个实施方式中，经由可植入输注装置(例如，泵)给予AHCM。 可植入输注装置通常包括含有储液器的外壳，所述储液器可通过穿透装 料口隔膜的皮下注射针经皮充满。药物储存器通常经由内流道与装置出 口连接，以将液体通过导管递送至患者身体位点。典型的输注装置通常 还包括控制器和流体转移机制(如泵或阀)，用于通过内流道将液体从储 存器转移至装置出口。

纳米颗粒

可将本文所述的AHCM剂、抗癌剂(例如，本文所述的低分子量抗 癌剂、中分子量抗癌剂)或两者封装于纳米颗粒中。

通常，纳米颗粒的直径为10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、 45nm、50nm、75nm、100nm、150nm或200nm，或200-1,000nm，例如， 10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、 150nm或200nm，或20-400nm、30-400nm、50-400nm。较小的颗粒易于 更快从系统内清除。药物可包埋于纳米颗粒内部、或连接至纳米颗粒(例 如，共价连接)、或粘附至纳米颗粒。

基于脂质的纳米颗粒或基于油的纳米颗粒(如脂质体纳米颗粒和固 态脂质纳米颗粒)可用于递送本文所述的试剂。为脂质体纳米 颗粒的实例。用于递送抗癌剂的固态脂质纳米颗粒描述于Serpe等， (2004)Eur.J.Pharm.Bioparm.58：673-680以及Lu等，(20060Eur.J. Pharm.Sci.28：86-95中。基于聚合物的纳米颗粒(例如，基于PLGA的 纳米颗粒)可用于递送本文所述的试剂。这些纳米颗粒倾向于依靠可生 物降解的骨架，而治疗剂插入(与聚合物有或没有共价连接)聚合物基 质中。PLGA广泛用于聚合物纳米颗粒，参见Hu等，(2009)J.Control. Release134：55-61；Cheng等，(2007)Biomaterials28：869-876；以及 Chan等，(2009)Biomaterials30：1627-1634。PEG化的基于PLGA的 纳米颗粒也可用于递送抗癌剂，参见，例如，Danhhier等，(2009)J.Control. Release133：11-17；Gryparis等(2007)Eur.J.Pharm.Biopharm.67：1-8。 基于金属的纳米颗粒(例如基于金的纳米颗粒)也可用于递送抗癌剂。 基于蛋白质的纳米颗粒(例如，基于白蛋白的纳米颗粒)可用于递送本 文所述的试剂。例如，可将试剂结合至人白蛋白纳米颗粒。示例性的抗 癌剂/蛋白质纳米颗粒为其中，紫杉醇结合至白蛋白纳米颗 粒。

纳米颗粒可采用主动靶向、被动靶向或这两者。主动靶向可依赖于 包含与预先选定的位点(例如，实体瘤)处或其附近的目标相结合的配 体。被动靶向纳米颗粒可扩散并在感兴趣的位点处累积(例如，以过度 渗漏的微血管为特征的位点，例如在肿瘤中和炎症位点处所观察到的)

本领域知晓范围广泛的纳米颗粒。示例性的方法包括在如下文献中 描述的方法：WO2010/005726、WO2010/005723、WO2010/005721、 WO2010/121949、WO2010/0075072、WO2010/068866、WO2010/005740、 WO2006/014626、7,820,788、7,780,984，以引用的方式将上述文献的内 容整体并入本文。

本发明可由以下编号的段落中的任一项定义：

1.一种改善癌症治疗在受试者中的递送或效力的方法，所述方法包 括：

基于对改善所述癌症治疗的递送或效力的需要，对需要接受抗高血 压剂和/或胶原蛋白改性剂(“AHCM”)的受试者进行识别；以及(a)或 (b)中任一项、或(a)与(b)两者皆有：

(a)向所述受试者给予所述AHCM；或者

(b)给予所述癌症治疗，

其中，以足以改善所述癌症治疗的递送或效力的剂量给予所述 AHCM。

2.一种在受试者中对癌症进行治疗或预防的方法，所述方法包括：

基于对改善癌症治疗的递送或效力的需要，对需要接受抗高血压剂 和/或胶原蛋白改性剂(“AHCM”)的受试者进行识别；以及(a)或(b) 中任一项、或(a)与(b)两者皆有：

(a)向所述受试者给予所述AHCM；或者

(b)给予所述癌症治疗，

其中，以足以对所述癌症进行治疗或预防的剂量给予所述AHCM。

3.如段1或2所述的方法，所述方法包括下列中的一项或多项：

a)将所述AHCM、所述癌症治疗、或这两者作为流体动力学直径大 于1nm、5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、 75nm、100nm、150nm、200nm，但小于300nm的实体进行给予；

b)在癌症诊断或所述AHCM用药开始的5天、10天、30天、60 天或100天之内，未曾向所述受试者给予AHCM剂量；

c)所述受试者在给予所述AHCM之前并不是高血压、或已经患有 高血压；

d)在给予所述癌症治疗前至少1天、2天、3天或5天时给予所述 AHCM；或在给予所述癌症治疗前1周、2周、3周、4周或5周以上时 给予所述AHCM；

e)在给予所述癌症治疗前至少1天、2天、3天或5天时给予所述 AHCM；或在给予所述癌症治疗前1周、2周、3周、4周或5周以上时 给予所述AHCM，以及将所述AHCM与所述癌症治疗同时给予；或者

f)将所述AHCM在至少1小时、5小时、10小时或24小时的时间 段内连续进行给予；至少2天、5天、10天或14天的时间段内连续进行 给予；至少2周、3周、4周、5周或6周的时间段内连续进行给予；至 少2个月、3个月、4个月、5个月或6个月的时间段内连续进行给予； 或至少1年、2年、3年、4年或5年的时间段内连续进行给予。

4.如段1-3中任一项所述的方法，其中，所述AHCM选自于下列试 剂中的一种或多种：

(i)血管紧张素II受体阻断剂(AT1阻断剂)；

(ii)肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂(“RAAS拮抗剂”)；

(iii)血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂；

(iv)血小板反应素1(TSP-1)抑制剂；

(v)转化生长因子β1(TGF-β1)抑制剂；或者

(vi)结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂。

5.如段1-4中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为AT1阻断剂， 所述AT1阻断剂选自于下列试剂中的一种或多种：氯沙坦坎地沙坦甲磺酸依普沙坦EXP3174、 厄贝沙坦L158，809、奥美沙坦沙拉新、 替米沙坦缬沙坦或上述试剂的衍生物。

6.如段1-5中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦。

7.如段1-6中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为RAAS拮抗 剂，所述RAAS拮抗剂选自于下列试剂中的一种或多种：阿利吉仑 瑞米吉仑(Ro42-5892)、依那吉仑 (A-64662)、SPP635，或上述试剂的衍生物。

8.如段1-7中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为ACE抑制 剂，所述ACE抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：贝那普利 卡托普利依那普利福辛普利赖诺普利莫昔 普利培哚普利喹那普利雷米普利群多普利或上述试剂的衍生物。

9.如段1-8中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为TSP-1抑制 剂，所述TSP-1抑制剂选自于下列试剂中的一种或多种：ABT-510、 CVX-045、LSKL，或上述试剂的衍生物。

10.如段4所述的方法，其中，所述TGF-β1抑制剂选自于下列试剂 中的一种或多种：抗TGF-β1抗体或TGF-β1肽抑制剂。

11.如段4所述的方法，其中，所述CTGF抑制剂选自于下列试剂中 的一种或多种：DN-9693、FG-3019，或上述试剂的衍生物。

12.如段1-11中任一项所述的方法，其中，以足以增强所述癌症治 疗的分布或效力的量给予所述AHCM。

13.如段1-12中任一项所述的方法，其中，以使得所述癌症治疗在 所述受试者的肿瘤或肿瘤血管中引起下列一种或多种变化的剂量给予所 述AHCM：降低胶原蛋白的水平或生成、降低肿瘤纤维化、提高间质肿 瘤运输、改善肿瘤灌注或增强穿透或扩散。

14.如段1-13中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦， 并且将其以25-100mg/天的量进行给予。

15.如段1-14中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦， 并且将其以12.5mg、25mg、50mg或100mg的剂型提供。

16.如段1-15中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦， 并且将其以下列范围内的亚抗高血压剂量进行给予：0.25-17.5mg/天、 0.5-15mg/天、1.3-12mg/天、1.5-12mg/天、2-12mg/天、2-10mg/天、2-5mg/ 天、2-3mg/天、或2mg/天。

17.如段1-16中任一项所述的方法，其中，所述AHCM为氯沙坦， 并且将其以高于抗高血压用途或抗心力衰竭用途的治疗剂量标准的1.1 倍、1.5倍、1.7倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10倍以上的剂量进行给予。

18.如段1-17中任一项所述的方法，其中，将所述AHCM以如下方 式进行给予：以亚抗高血压剂量的所述AHCM进行第一疗程；随后以标 准高血压剂量或高于标准高血压剂量的所述AHCM进行第二疗程。

19.如段1-18中任一项所述的方法，其中，所述AHCM作为流体动 力学直径大于1nm、5nm、10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm、 45nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm，但小于300nm的实体进 行给予。

20.如段19所述的方法，其中，所述AHCM作为聚合物纳米颗粒或 脂质纳米颗粒进行给予。

21.如段1-20中任一项所述的方法，其中，所述癌症治疗为癌症治 疗剂，所述癌症治疗剂作为流体动力学直径大于1nm、5nm、10nm、15nm、 20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm， 但小于300nm的实体进行给予。

22.如段21所述的方法，其中，所述癌症治疗剂作为聚合物纳米颗 粒或脂质纳米颗粒进行给予。

23.如段1-22中任一项所述的方法，其中，将所述AHCM或所述癌 症治疗剂各自独立地以具有下列大小范围(以nm计)的实体提供：流 体动力学直径小于或等于1nm、或为0.1-1.0nm；流体动力学直径为 5-20nm、或5-15nm；或流体动力学直径为1nm、5nm、10nm、15nm、 20nm、25nm、30nm、35nm、45nm、50nm、75nm、100nm、150nm、200nm， 但小于300nm。

24.如段1-23中任一项所述的方法，其中，所述受试者具有下列一 种或多种情形：

(i)未患有高血压；

(ii)在所述AHCM治疗开始时，并未对高血压进行治疗；或者

(iii)具有正常血压或低血压。

25.如段1-24中任一项所述的方法，其中，在癌症诊断或所述AHCM 用药开始的5天、10天、30天、60天或100天之内，未曾向所述受试者 给予所述AHCM。

26.如段1-25中任一项所述的方法，其中，所述受试者需要、或正 在考虑进行癌症治疗。

27.如段1-26中任一项所述的方法，其中，所述方法包括如下步骤： 确定所述受试者是否患有癌症；以及针对所述确定的结果给予所述 AHCM和所述癌症治疗。

28.如段1-27中任一项所述的方法，其中，所述受试者处于实体瘤、 纤维化肿瘤患病风险中；或患有实体瘤、纤维化肿瘤。

29.如段28所述的方法，其中，所述受试者具有瘤前病变状态或癌 症易感性。

30.如段1-29中任一项所述的方法，其中，所述癌症选自于下列癌 症中的一种或多种：胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌、皮肤癌、卵巢 癌、前列腺癌、宫颈癌、胃肠癌、胃癌、头颈部癌、肾癌、或肝癌，或 上述癌症的转移病灶。

31.如段1-30中任一项所述的方法，其中，在所述癌症治疗前和/ 或与所述癌症治疗联合给予所述AHCM。

32.如段1-31中任一项所述的方法，其中，所述癌症治疗选自于抗 癌剂、手术和/或放射中的一种或多种。

33.如段1-32中任一项所述的方法，其中，在所述癌症治疗前至少 1天、2天、3天或5天时给予所述AHCM；或在所述癌症治疗前1周、 2周、3周、4周或5周以上时给予所述AHCM。

34.如段1-33中任一项所述的方法，其中，在所述受试者接受癌症 治疗的预先选定的部分时间段内维持所述AHCM。

35.如段1-34中任一项所述的方法，其中，在给予所述癌症治疗的 整个时间段内维持所述AHCM。

36.如段1-35中任一项所述的方法，其中，将所述AHCM在至少1 小时、5小时、10小时或24小时的时间段内连续进行给予；至少2天、 5天、10天或14天的时间段内连续进行给予；至少2周、3周、4周、5 周或6周的时间段内连续进行给予；至少2个月、3个月、4个月、5个 月或6个月的时间段内连续进行给予；或至少1年、2年、3年、4年或 5年的时间段内连续进行给予。

37.如段1-36中任一项所述的方法，其中，所述AHCM作为缓释制 剂进行给予。

38.如段1-37中任一项所述的方法，其中，将所述AHCM配制成用 于口服、皮下或静脉内连续递送。

39.如段1-38中任一项所述的方法，其中，所述AHCM通过皮下泵、 植入物或储库剂进行给予。

40.如段1-39中任一项所述的方法，其中，所述癌症治疗选自于下 列中的一种或多种：

(i)癌症治疗剂，所述癌症治疗剂选自于病毒癌症治疗剂、抗癌治 疗剂的脂质纳米颗粒、抗癌治疗剂的聚合物纳米颗粒、针对癌症靶标的 抗体、dsRNA试剂、反义RNA试剂或化学治疗剂；

(ii)放射；

(iii)手术；或者

(iv)(i)-(iii)的任意组合。

41.如段40所述的方法，其中，所述脂质纳米颗粒选自于聚乙二醇 化脂质体多柔比星或脂质体紫杉醇(例如，)。

42.如段40所述的方法，其中，所述化学治疗剂选自于吉西他滨、 顺铂、表柔比星、5-氟尿嘧啶、紫杉醇、奥沙利铂或亚叶酸。

43.如段40所述的方法，其中，所述针对癌症靶标的抗体选自于抗 HER-2/neu抗体、抗HER3抗体、抗VEGF抗体或抗EGFR抗体。

44.如段1-39中任一项所述的方法，其中，所述癌症治疗为酪氨酸 激酶抑制剂，所述酪氨酸激酶抑制剂选自于：舒尼替尼、厄洛替尼、吉 非替尼、索拉非尼、埃克替尼、拉帕替尼、来那替尼、凡德他尼、BIBW 2992或XL-647；或者，所述癌症治疗为抗EGFR抗体，所述抗EGFR 抗体选自于：西妥昔单抗、帕尼单抗、扎芦木单抗、尼妥珠单抗、奈昔 木单抗或马妥珠单抗。

45.如段40所述的方法，其中，所述化学治疗剂为细胞毒素剂或细 胞生长抑制剂。

46.如段40或45所述的方法，其中，所述化学治疗剂选自于：抗 微管剂、拓扑异构酶抑制剂、紫杉烷、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、烷 化剂或嵌入剂。

47.如段1-46中任一项所述的方法，其中，所述癌症治疗选自于下 列试剂中的一种或多种：抗血管生成剂、血管靶向剂或血管破裂剂。

48.如段1-47中任一项所述的方法，其中，所述AHCM或所述癌症 治疗通过全身给药给予所述受试者，所述全身给药选自于：口服给药、 胃肠外给药、皮下给药、静脉内给药、直肠给药、肌内给药、腹膜内给 药、鼻内给药、经皮给药、或通过吸入器或腔内装置给药。

49.如段1-48中任一项所述的方法，所述方法进一步包括对所述受 试者在下列一个或多个方面的变化进行监测：

肿瘤大小；

转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)或血小板 反应素1(TSP-1)中的一种或多种的水平或信号；

肿瘤胶原蛋白I水平；

纤维化的量；

间质压力；

血浆生物标记物或血清生物标记物，所述生物标记物选自于胶原蛋 白I、胶原蛋白III、胶原蛋白IV、TGF-β1、CTGF或TSP-1；

一种或多种癌症标记物的水平；

新病变出现、代谢、缺氧演化的速度；

新疾病相关症状的出现；

组织块的大小；

疾病相关疼痛的程度；

组织学分析、小叶模式和/或有丝分裂细胞存在与否；或者

肿瘤侵袭性、原发肿瘤的血管化或转移扩散。

49.一种包含纳米颗粒的药物组合物，所述纳米颗粒包含AHCM。

50.一种包含纳米颗粒的药物组合物，所述纳米颗粒包含AHCM和 癌症治疗剂。

51.如段50所述的药物组合物，其中，所述癌症治疗剂选自于病毒 癌症治疗剂、抗癌剂的脂质纳米颗粒、抗癌剂的聚合物纳米颗粒、针对 癌症靶标的抗体、dsRNA试剂、反义RNA试剂或化学治疗剂。

52.如段49-51中任一项所述的药物组合物，其中，所述纳米颗粒为 聚合物纳米颗粒或脂质纳米颗粒。

53.如段49-51中任一项所述的药物组合物，其中，将所述AHCM 配制成如下剂型：根据所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中 的治疗剂型标准配制成的剂型。

54.如段49-51中任一项所述的药物组合物，其中，将所述AHCM 配制成如下剂型：低于所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中 的治疗剂型标准的0.01倍、0.02倍、0.03倍、0.04倍、0.05倍、0.06倍、 0.07倍、0.08倍、0.09倍、0.1倍、0.15倍、0.16倍、0.2倍、0.3倍、0.4 倍、0.5倍、0.6倍、0.7倍的剂型。

55.如段49-51中任一项所述的药物组合物，其中，将所述AHCM 配制成如下剂型：高于所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中 的治疗剂型标准的1.1倍、1.5倍、1.7倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10 倍以上的剂型。

56.一种AHCM剂型，其中，将所述AHCM配制成如下剂型：低于 所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中的治疗剂型标准的0.01 倍、0.02倍、0.03倍、0.04倍、0.05倍、0.06倍、0.07倍、0.08倍、0.09 倍、0.1倍、0.15倍、0.16倍、0.2倍、0.3倍、0.4倍、0.5倍、0.6倍、 0.7倍的剂型。

57.一种AHCM剂型，其中，将所述AHCM配制成如下剂型：高于 所述AHCM在抗高血压用途或抗心力衰竭用途中的治疗剂型标准的1.1 倍、1.5倍、1.7倍、2倍、3倍、4倍、5倍或10倍以上的剂型。

58.一种使试剂向癌症的接近最优化、或使试剂向癌症的递送最优 化的方法，所述试剂例如为诊断剂或显像剂，所述方法包括：

向受试者给予抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂(“AHCM”)；以及

任选地，向所述受试者给予所述试剂，其中，所述方法包括下列中 的一项或多项：

a)所述诊断剂或显像剂的流体动力学直径大于1nm、5nm、或 为20-150nm；

b)所述试剂为放射性试剂、NMRA试剂、造影剂；或者

c)以AHCM给药对所述受试者进行治疗，其中，在给予所述 试剂之前至少2天、3天或5天时开始所述AHCM给药；或在给予 所述试剂之前1周、2周、3周、4周或5周以上时开始所述AHCM 给药。

59.一种用于对抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂(AHCM)进行鉴 定的方法或测定法，所述方法或测定法包括：

将癌细胞或癌症相关细胞与候选试剂接触；

对所述候选试剂存在或不存在时所述癌细胞内的变化进行检测，其 中，所检测的变化包括下列变化中的一种或多种：活化TGF-β的增减、 TGF-β1水平的增减、结缔组织生长因子(CTGF)水平的增减或胶原蛋 白(例如胶原蛋白I)水平的增减。

60.如段59所述的方法或测定法，其中，所述候选试剂选自于下列 试剂中的一种或多种：肾素血管紧张素醛固酮系统拮抗剂(“RAAS拮抗 剂”)、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素II受体阻断剂(AT1阻断剂)、血小板反应素1(TSP-1)抑制剂、转化生长因子β1(TGF-β1) 抑制剂或结缔组织生长因子(CTGF)抑制剂。

61.如段59或60所述的方法或测定法，其中，所述候选试剂降低 下列中的一项或多项：活化TGF-β、TGF-β1水平、结缔组织生长因子 (CTGF)水平或胶原蛋白水平。

62.如段59-61中任一项所述的方法或测定法，所述方法或测定法进 一步包括如下步骤：将治疗方法或测定法与参比值进行比较；并对治疗 值和所述参比值之间的差异进行比较。

63.如段59-62中任一项所述的方法或测定法，所述方法或测定法在 体外、体内、或两者结合进行。

64.如段59-63中任一项所述的方法或测定法，所述方法或测定法包 括通过如下方式在体外对所述候选试剂进行评价：将所述候选试剂添加 至培养基；并对条件培养基中的活化TGF-β、TGF-β1水平、结缔组织生 长因子(CTGF)水平或胶原蛋白水平的增减进行分析。

65.如段59-64中任一项所述的方法或测定法，所述方法或测定法包 括如下步骤：将所述候选试剂给予动物肿瘤模型；并对所述受试者的活 化TGF-β、TGF-β1水平、结缔组织生长因子(CTGF)水平或胶原蛋白 水平的增减进行分析。

66.一种将抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂(AHCM)单独使用或 与癌症治疗剂联合使用以对癌症进行治疗的组合物；或者，单独的、或 与癌症治疗剂联合的所述抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂AHCM在对 癌症进行治疗中的用途。

67.一种用于治疗癌症的治疗试剂盒，所述试剂盒包含：

单独的、或与癌症治疗剂联合的抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂 (AHCM)；以及

说明书。

68.一种用于诊断癌症的诊断试剂盒，所述试剂盒包含：

单独的、或与显像剂联合的抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂 (AHCM)；以及

说明书。

69.一种用于对接受抗高血压剂和/或胶原蛋白改性剂(“AHCM”) 的受试者进行选择的方法，所述方法包括：

基于对改善癌症治疗的递送或效力的需要，对需要接受所述AHCM 的受试者进行选择；以及(a)或(b)中任一项、或(a)与(b)两者 皆有：

(a)向所述受试者给予所述AHCM；或者

(b)给予所述癌症治疗，

其中，以足以改善所述癌症治疗的递送或效力的剂量给予所述 AHCM。

实施例

参考下列实施例，将更容易理解目前被概括描述的本发明，仅出于 阐明本发明的某些方面和实施方式的目的而包含所述实施例，并不意味 着限制本发明。

在下列实施例1-实施例6中，发明人对AHCM剂(例如，氯沙坦， 一种临床批准的血管紧张素II受体拮抗剂，通常用于治疗高血压)能否 增强纳米药物的穿透和效力进行了评价(例如，通过抗纤维化效果)。虽 然纳米治疗剂为癌症治疗提供了新希望，其临床效力不太大(Jain RK等， (2010)Nat Rev Clin Oncol7：653-664；Davis ME等，(2008)Nat Rev Drug  Discov7：771-782；Peer D等，(2007)Nat Nanotechnol2：751-760；以 及Torchilin VP(2005)Nat Rev Drug Discov4：145-160)。不希望受理论 约束，肿瘤中密集的胶原蛋白网络通常可降低纳米治疗剂的穿透和效力。 部分原因是因为它们的穿透尤其是在纤维化肿瘤中受到阻碍，在所述纤 维化肿瘤中，间质中的小纤维间间距阻滞了大于10纳米的颗粒的移动 (Netti PA等，(2000)Cancer Res60：2497-2503；Pluen A等，(2001) Proc Natl Acad Sci USA98：4628-4633；Ramanujan S等，(2002)Biophys  J83：1650-1660；以及Brown E等，(2003)Nat Med9：796-800)。经 FDA批准的聚乙二醇化脂质体多柔比星以及目前在进行多 种临床试验的溶瘤病毒代表了其尺寸(～100nm)阻碍了其瘤内分布和疗 效的两种纳米治疗剂(Nemunaitis J等，(2001)J Clin Oncol19：289-298)。 基质改进剂(matrix modifier)如细菌胶原蛋白酶、松弛素(relaxin)、以 及基质金属蛋白酶-1和基质金属蛋白酶-8已经用于对肿瘤中的胶原蛋白 网络或蛋白多糖网络进行改进，且已改善了瘤内(i.t.)注射的溶瘤病毒 的效力(Brown E等，(2003)Nat Med9：796-800；McKee TD等，(2006) Cancer Res66：2509-2513；Mok W等，(2007)Cancer Res67：10664-10668； Ganesh S等，(2007)CancerRes67：4399-4407；以及Kim J-H等，(2006) J Natl Cancer Inst98：1482-1493)。另外，松弛素可以改善经由肿瘤基质 的运输，但并不能促进低分子量试剂的递送(US6,719,977)。然而，这 些试剂可产生正常组织毒性(例如，细菌胶原蛋白酶)或使肿瘤发展的 风险增加(例如，松弛素、基质金属蛋白酶)。

被批准用于控制患者高血压的氯沙坦(Johnston CI(1995)Lancet 346：1403-1407)并不具有这许多种的安全风险。并且，除其抗高血压 特性外，氯沙坦还是已被证明能降低心脏和肾脏纤维化发生率的抗纤维 化剂(Habashi JP等，(2006)Science312：117-121；以及Cohn RD等， (2007)Nat Med13：204-210)。氯沙坦的抗纤维化效果部分是由如下过 程引起的：经由血管紧张素II的I型受体(AGTR1)介导的TGF-β1活 化剂(如血小板反应素1(TSP-1))下调，而对活化的转化生长因子β1 (TGF-β1)的水平进行抑制(Habashi JP等，(2006)Science312：117-121； Cohn RD等，(2007)Nat Med13：204-210；Lavoie P等，(2005)JHypertens 23：1895-1903；Chamberlain JS(2007)Nat Med13：125-126；以及Dietz  HC(2010)J Clin Invest120：403-407)。

如下所示，AHCM剂(例如，氯沙坦)抑制了癌相关成纤维细胞(由 乳腺癌活检组织中分离)的胶原蛋白I的产生。另外，AHCM剂(例如， 氯沙坦)使得在人类乳腺肿瘤、胰腺肿瘤和皮肤肿瘤的促结缔组织增生 性小鼠模型中的基质胶原蛋白发生剂量依赖性的降低。并且，AHCM剂 (例如，氯沙坦)改善了瘤内注射的溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)的分布 和疗效。此外，AHCM剂(例如，氯沙坦)还增强了静脉内注射的聚乙 二醇化脂质体多柔比星的效力。因此，AHCM剂(例如， 氯沙坦)与癌症治疗剂(例如，癌症纳米治疗剂)的联合给药可增强纳 米治疗剂在患有促结缔组织增生性肿瘤的患者中的效力。

使用对平均动脉压(MABP)具有最小影响的剂量，发明人证明了： AHCM剂(例如，氯沙坦)在四种肿瘤模型中降低了胶原蛋白I的水平， 所述四种肿瘤模型为：自发性小鼠乳腺癌(FVB MMTV PyVT)、原位 (orthotopic)胰腺腺癌(L3.6p1)、以及皮下移植的纤维肉瘤(HSTS26T) 和黑色素瘤(Mu89)。此外，发明人证明了：AHCM剂(例如，氯沙坦) 还能改善瘤内(i.t.)或静脉内(i.v.)注射的纳米颗粒的瘤内穿透。

另外，发明人评估了AHCM剂(例如，氯沙坦)能够如何影响瘤内 给药(基因治疗中向受试者给药时广泛使用的方法)的溶瘤HSV的分布 和效力(Hu JC等，(2006)Clin Cancer Res12：6737-6747；Senzer NN 等，(2009)J Clin Oncol27：5763-5771；Breitbach CJ等，(2010)Cytokine  Growth Factor Rev21：85-89)；以及如何影响静脉内给药的的效 力。如下文所示，AHCM剂(例如，氯沙坦)改善了瘤内注射的溶瘤HSV 和静脉内注射的两者的效力。瘤内(i.t.)实验的结果表明，AHCM 剂(例如，氯沙坦)可通过改善间质运输增强纳米颗粒在间质空间中的 穿透。另外，静脉内(i.v.)研究的发现表明，AHCM剂(例如，氯沙坦) 可改善全身给药的纳米治疗剂对纤维化实体瘤、甚至是对高度纤维化的 实体瘤(如胰腺腺癌)的效力。因此，AHCM剂(例如，氯沙坦，一种 经FDA批准的抗高血压药物)可用于在多种肿瘤类型中改善各种纳米治 疗剂的效力。

实施例1：氯沙坦抑制癌相关成纤维细胞(CAF)对胶原蛋白I的 合成

对氯沙坦在乳腺CAF对胶原蛋白I的产生以及TGF-β1的表达和活 化方面的影响进行了检测(图1)。氯沙坦在体外降低了癌相关成纤维细 胞中TGF-β1的活化和胶原蛋白I的产生。以10μmol/L的氯沙坦处理细 胞24小时。氯沙坦降低了活化TGF-β1水平的90％，而总TGF-β1水平 未受影响。胶原蛋白I水平存在相应的27％的降低。活化TGF-β1和胶原 蛋白I的降低为统计学显著的(学生t检验p＜0.05)。由于肿瘤内的胶原 蛋白大多由CAF产生，因此检验了氯沙坦对肿瘤中胶原蛋白含量的影响。

实施例2：氯沙坦以剂量依赖的方式减少肿瘤中的胶原蛋白I

为了对氯沙坦在瘤内胶原蛋白水平的剂量响应进行测定，腹膜内 (i.p.)注射10mg/kg/天、20mg/kg/天和60mg/kg/天的氯沙坦，然后对背 部皮肤褶皱腔室(dorsal skin fold chambers)中的HSTS26T肿瘤的纤维 状胶原蛋白进行二次谐波发生(second harmonic generation，SHG)成像 (图2A-图2B)，并对肿瘤切片进行胶原蛋白I免疫染色(图3A-图3D)。 虽然SHG信号强度可包含由胶原蛋白I和其它形成原纤维(fibril)的胶 原蛋白(例如，胶原蛋白III或胶原蛋白V)贡献的信号，胶原蛋白I在 大多数软组织中通常为主要的胶原类型(Gelse K等，(2003)Adv Drug  Deliv Rev55：1531-1546)，因此在SHG信号中作为主要来源。另外，在 人胰腺肿瘤中，胶原蛋白I是主要的纤维状胶原蛋白，而胶原蛋白V的 水平显著较低(Mollenhauer J等，(1987)Pancreas2：14-24)。20mg/kg/ 天和60mg/kg/天的氯沙坦剂量显著降低了瘤内的SHG信号强度，而 10mg/kg/天的最低剂量对SHG信号强度不具有显著影响(图2A和图 2B)。60mg/kg/天和20mg/kg/天的氯沙坦注射还在HSTS26T肿瘤中使胶 原蛋白I的免疫染色分别显著降低了65％和42％(图3)。以60mg/kg/天 的剂量进行的处理产生了最高的胶原蛋白I降低，伴随着达35mm Hg的 平均动脉压(MABP)的降低(p＜0.04；图4)。在以下实施例中，使用 20mg/kg/天的剂量(但决不限制本文所述的方法对其它剂量的使用)。氯 沙坦治疗2周后，20mg/kg/天的剂量使MABP降低了10mm Hg(图4)， 因此将SCID小鼠的MABP维持在正常范围以内(70-95mm Hg) (Kristjansen PE等，(1993)Cancer Res53：4764-4766)。并且该剂量并 未对小鼠的重量产生可检测到的影响(治疗后平均为26±1g；对照平均 为26±1g)。20mg/kg/天的剂量分别使四种肿瘤类型(FVB MMTV PyVT、 L3.6pl、HSTS26T和Mu89)中的胶原蛋白I的免疫染色降低了47％ (p＜0.05)、50％(p＜0.03)、44％(p＜0.04)和20％(p＜0.02)(图5A-图 5D)。

实施例3：氯沙坦降低肿瘤中TSP-1的表达

TSP-1是TGF-β1活化的关键调节剂，并且已经报道了氯沙坦能在 Marfan氏综合征和肌营养不良的小鼠模型中降低TSP-1表达和TGF-β1 活化(Dietz HC(2010)J Clin Invest120：403-407)。如本文所示，对匀 浆化(homogenized)的HSTS26T肿瘤中的蛋白水平的测量显示氯沙坦 并未影响总TGF-β1水平，但显著降低了TSP-1、活化TGF-β1、以及胶 原蛋白I的水平(图6)。氯沙坦还降低了HSTS26T(73％，p＜0.04)和 Mu89(24％，p＜0.03)中的TSP-1免疫染色(图7A-图7B)。在Mu89 和HSTS26T肿瘤这两者中，TSP-1的免疫染色模式(图7A-图7B)和胶 原蛋白I的免疫染色模式(图5C-图5D)均高度吻合。发明人在肿瘤边 界处检测到高水平的TSP-1和胶原蛋白I，而氯沙坦在肿瘤中心处诱导了 TSP-1和胶原蛋白I水平的明显降低(图5C、图7A)。这些数据表明胶 原蛋白I水平的降低可部分由TGF-β1活性降低导致，而所述TGF-β1活 性降低是由氯沙坦诱导的TSP-1表达降低所致。

实施例4：氯沙坦改善纳米颗粒和纳米治疗剂的瘤内分布

基于对肿瘤间质基质的在先研究(Pluen A等，(2001)Proc Natl Acad  Sci USA98：4628-4633以及Brown E等，(2003)Nat Med9：796-800)， 发明人随后设法对由氯沙坦引起的胶原含量降低是否能够改善纳米颗粒 的瘤内分布进行了测定。因此，发明人测量了在瘤内注射或静脉内注射 后，荧光聚苯乙烯纳米颗粒(直径100nm)在三种不同肿瘤类型 (HSTS26T、Mu89和L3.6p1)中的瘤内分布。在瘤内注射纳米颗粒的小 鼠中，氯沙坦改善了肿瘤中心处纳米颗粒的累积和穿透(图8A；HSTS26T  p＜0.001、Mu89p＜0.001)。相反，在对照肿瘤中心处很少有或没有纳米 颗粒累积。对照肿瘤中注射的纳米颗粒大多数见于肿瘤边界和针插入点 附近(图8A)。发明人还测定了氯沙坦对溶瘤HSV的瘤内分布的影响。 在HSTS26T和Mu89中，氯沙坦均显著提高了瘤内注射的HSV的瘤内 扩散(图8B)。这些发现显示出氯沙坦提高了大纳米颗粒的分布，同时 发明人还在HSTS26T中测定出氯沙坦提高了IgG的间质扩散(图9)和 平均间质基质的孔隙半径(由9.91±0.43nm至11.78±0.41nm，基于IgG 扩散数据计算得出)(Nugent LJ等，(1984)Cancer Res44：238-244)。

然后，发明人评估了氯沙坦对患有原位胰腺肿瘤(L3.6p1)的大鼠中 的静脉内注射纳米颗粒的瘤内分布和血管灌注的影响。在氯沙坦治疗的 肿瘤中，远离血管的微球(beads)的瘤内积累和穿透显著较高(图8C 和图10)。这些结果表明氯沙坦改善了瘤内注射和/或静脉内注射的纳米 颗粒的运输和分布。

实施例5：氯沙坦改善 和溶瘤HSV的效力

发明人随后对氯沙坦能否改善瘤内注射的溶瘤HSV和静脉内注射的 的效力进行了测定。在HSTS26T和Mu89肿瘤中对氯沙坦与 HSV的瘤内注射联合的效果进行了测定。单独的氯沙坦给药并未影响肿 瘤生长速率(图11A和图11B)。然而，当在HSV的瘤内注射前用氯沙 坦治疗动物两周的情况下，氯沙坦显著延缓了Mu89和HSTS26T肿瘤的 生长(图11A和图11B)。在用氯沙坦和HSV治疗的50％的小鼠中， HSTS26T肿瘤的体积保持稳定长达9周。对于Mu89肿瘤，用氯沙坦和 HSV治疗的小鼠在肿瘤生长方面产生延缓。然而，在Mu89肿瘤中的生 长延缓仅短暂存在，病毒注射后4周，所有肿瘤都比开始治疗时的大小 高出3倍。

为了测定氯沙坦能否提高静脉内注射的纳米治疗剂的效力，用 和氯沙坦对有原位胰腺肿瘤(L3.6p1)的小鼠进行了治疗。在肿 瘤移植四周后以及氯沙坦治疗(20mg/kg/天)开始两周后，发明人以亚 抗肿瘤剂量(即，对于癌症治疗无效的剂量，例如，不能有效抑制或阻 止肿瘤生长和/或发展的剂量)的(4mg/kg，静脉内)对小鼠进 行了治疗。7天后，单独的氯沙坦或单独的DOXIL并未影响平均肿瘤重 量(图11C)。然而，在以氯沙坦和两者进行治疗的小鼠中，肿 瘤显著小于接受单独的的小鼠的肿瘤(图11C和图11D)。

实施例6：胶原蛋白分布模式调节氯沙坦的效力

为了研究HSTS26T和Mu89对氯沙坦-HSV联合治疗的响应之间的 差异，发明人对瘤内注射HSV后21天的HSV感染和坏死模式进行了测 定。图12A和12B显示Mu89(图12A)和HSTS26T(图12B)肿瘤各 自的胶原蛋白结构之间有显著差异。不希望受理论约束，胶原蛋白结构 的这些差异改变了这些肿瘤类型中的病毒传播。在Mu89肿瘤中，胶原 蛋白纤维网络高度有序并向肿瘤中形成手指状突出(图12A和图13A)。 这些突出将肿瘤分成不同的区室，所述区室让HSV颗粒不能穿过，因此 病毒感染和产生的坏死局限于被感染的区室中(图14A)。氯沙坦治疗在 某种程度上破坏了所述胶原蛋白突出，但并未完全将其消除(图12A)。 结果，在氯沙坦治疗的Mu89肿瘤中存在一些病毒颗粒在区室之间穿越。 通过改变氯沙坦和/或HSV浓度，可对待破坏的胶原蛋白突出的数量或 程度(例如，部分或完全破坏)进行调整，因此转而对HSV颗粒在肿瘤 内的分布产生影响。相比之下，在HSTS26T肿瘤中，密集胶原蛋白网络 更加分散、更低纤维化且更少区室化(图12B和图13B)。所述密集胶原 蛋白网络似乎减慢了病毒传播，但并未完全将其阻止，导致了在该肿瘤 中增加的病毒传播和更分散的坏死模式(图14A)。

讨论

已经报道肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)在细胞外基质组分的 调节和产生中起作用(Cook KL等，(2010)Cancer Res70：8319-8328； Rodríguez-Vita J等，(2005)Circulation111：2509-2517；以及Wolf G (2006)Kidney Int70：1914-1919)。已经报道血管紧张素II通过TGF-β1 依赖性途径和非依赖性途径刺激胶原蛋白产生(Yang F等，(2009) Hypertension54：877-884)。已经报道氯沙坦及其它RAAS抑制剂可在多 种纤维化实验模型中降低胶原蛋白I和胶原蛋白III、以及基底膜胶原蛋 白IV的水平(Toblli JE等，(2002)J Urol168：1550-1555和Boffa JJ 等，(2003)JAm Soc Nephrol14：1132-1144)，并在高血压患者中逆转肾 脏和心脏纤维化(Lim DS等，(2001)Circulation103：789-791和Khalil  A等，(2000)J Urol164：186-191)。发明人在本文中利用四种不同类型 的肿瘤首次证明了氯沙坦还能在肿瘤中抑制胶原蛋白I的产生。

已经报道其它基质改进剂如细菌胶原蛋白酶、松弛素、以及基质金 属蛋白酶1和基质金属蛋白酶8能对肿瘤中的胶原蛋白网络或蛋白多糖 网络进行改进，并改善了瘤内(i.t.)注射的溶瘤病毒的效力(Brown E 等，(2003)Nat Med9：796-800；McKee TD等，(2006)Cancer Res66： 2509-2513；Mok W等，(2007)Cancer Res67：10664-10668；Ganesh S 等，(2007)Cancer Res67：4399-4407；以及Kim J-H等，(2006)J Natl  Cancer Inst98：1482-1493)。然而，这些试剂可产生正常组织毒性(例 如，细菌胶原蛋白酶)或使肿瘤发展的风险增加(例如，松弛素、基质 金属蛋白酶)。相反，氯沙坦(Johnston CI(1995)Lancet346：1403-1407) 具有有限的副作用。据报道，氯沙坦在某些肿瘤类型中降低了转移的发 生率(Arafat HA等，(2007)JAm Coll Surg204：996-1005)。

如上述实施例所示，AHCM剂(例如，氯沙坦)可降低胶原蛋白含 量，并转而改善纳米颗粒和纳米治疗剂的间质运输和瘤内分布。发明人 还发现，胶原纤微网络的格局(organization)可对纳米颗粒的分布产生 影响。这一发现由于Mu89和HSTS26T之间纤维状胶原蛋白I结构格局 的显著差异而引人注目。在Mu89肿瘤中，较厚的纤维状胶原蛋白I束围 绕于肿瘤边界，并形成手指状突出，所述突出把肿瘤块划分成独立的区 室、并将病毒感染限制于注射位点/独立区室中(图12A和图13A)。相 反，HSTS26T肿瘤具有网格状胶原蛋白结构，该结构阻碍了病毒传播但 并不将病毒颗粒局限于注射位点处(图12B和图13B)。与Mu89肿瘤相 比，HSTS26T肿瘤的较慢生长速率也能部分说明氯沙坦与HSV联合在 HSTS26T肿瘤中有增强的效力。因此，不仅胶原蛋白含量、还有胶原蛋 白网络格局都在限制肿瘤中大治疗剂的穿透方面起着重要作用。根据特 定肿瘤中胶原蛋白网络的含量和/或格局，可相应地对AHCM剂(例如， 氯沙坦)和/或癌症治疗剂(例如，HSV)的剂量、给药方法和/或给药频 率进行调整。

以细胞毒素剂进行治疗的胰腺癌患者具有很高的复发频率，且5年 生存率低于5％(Li J等，(2010)AAPS J12：223-232)。胰腺肿瘤不佳 的血管供应和较高的纤维化含量很可能在限制细胞毒素的递送和效力方 面起重要作用(Olive KP等，(2009)Science324：1457-1461)。发明人 在人胰腺癌的小鼠原位模型(L3.6p1)中证明了，氯沙坦提高了静脉内注 射的纳米颗粒的瘤内分散和血管外穿透距离。纳米颗粒增强的分布和外 渗(extravasation)表明氯沙坦不仅能改善间质运输(与纳米颗粒和病毒 的瘤内注射所示的一样)，而且还能改善跨血管的运输。当单独使用时， 氯沙坦对胰腺肿瘤的生长或所治疗的小鼠的体重没有影响。然而，与单 独使用的治疗相比，与联合的氯沙坦使肿瘤大小降低 了50％。这些发现表明氯沙坦提高了肿瘤穿透和分布，并增强了在小鼠 原位胰腺癌中静脉注射的的效力。

氯沙坦的效果并不限于间质间隙。对RAAS系统的改进也能抑制血 管生成(Fujita M等，(2005)Carcinogenesis26：271-279)或改变肿瘤 血流(Jain R等，(1984)IEEE Trans Son Ultrason31：504-526以及Zlotecki  RA等，(1993)Cancer Res53：2466-2468)。AGTRl的氯沙坦阻断也能 减少由癌细胞生成的VEGF和内皮细胞中VEGFRl的表达，从而抑制了 肿瘤血管生成和生长(Otake AH等，(2010)Cancer Chemother Pharmacol 66：79-87以及Noguchi R等，(2009)Oncol Rep22：355-360)。如本文 所示，在HSTS26T肿瘤中，氯沙坦并未影响肿瘤生长或血管密度。氯沙 坦还能降低表达AGTR1的肿瘤细胞的增殖(Rhodes DR等，(2009)Proc  Natl Acad Sci USA106：10284-10289)。发明人在人黑色素瘤Mu89中并 未发现癌细胞增殖降低(图15)或肿瘤大小的降低，所述人黑色素瘤 Mu89表达AGTR1(图16)。这些研究与其它在先研究之间的差异可能 是由于剂量不同。例如，在先研究中氯沙坦的剂量高达发明人的研究中 所使用的剂量的15倍(Otake AH等，(2010)Cancer Chemother Pharmacol 66：79-87)。发明人在本文中证明了，单独使用时对于癌症治疗不具效 果的低剂量氯沙坦可用于改善癌症治疗或抗癌剂的效力(即使处于亚治 疗水平)以治疗癌症。此外，低剂量的氯沙坦使得更能临床转化的方案 成为可能，并避免了低血压并发症。

接受RAAS拮抗剂的患者具有降低的乳腺癌和肺癌发病率(Lever AF 等，(1998)Lancet352：179-184)。已报道了不同机理来讨论RAAS拮 抗剂在以高浓度使用时的抗肿瘤特性(Ager EI等，(2008)Carcinogenesis 29：1675-1684；Lindberg H等，(2004)Acta Oncol43：142-152；Miyajima  A等，(2002)Cancer Res62：4176-4179；以及Rosenthal T等，(2009) J Hum Hypertens23：623-635)。已报道了AGTR1信号能提高基质细胞 和肿瘤细胞的增殖，并提高炎性细胞因子和趋化因子(促进癌细胞迁移 和散播)的转录(Deshayes F，Nahmias C(2005)Endocrinol Metab16： 293-299)。已报道由高浓度给予RAAS拮抗剂引起的活化TGF-β1水平的 下降能减少转移(Jakowlew SB(2006)Cancer Metastasis Rev25： 435-457)。因此，除改善抗肿瘤剂的递送外，氯沙坦还能抑制肿瘤发展 和转移。仅作为举例而言，以低剂量(例如，单独给予时对降低或预防 转移无效的剂量)给予的氯沙坦与抗转移剂(例如，以低于单独用于治 疗和/或预防转移时通常给予的剂量进行给予)联合可用于抑制肿瘤发展 和转移。

为了在癌症患者的治疗中将氯沙坦用作辅药，重要的是考虑用药和 治疗日程以及潜在的副作用。本文所示的由剂量和时间依赖性研究得出 的结果表明，在抗癌症治疗前至少两周给予氯沙坦。为了在患者中获得 最大效果，在整个抗肿瘤治疗日程之前两周开始氯沙坦治疗并在该治疗 日程期间持续所述氯沙坦治疗可能是明智的。由于已证实长期氯沙坦治 疗对于高血压患者具有有限且可管理的副作用，并已证实许多抗肿瘤剂 (例如，抗VEGF药物)会使血压升高(Ager EI等，(2008)Carcinogenesis 29：1675-1684)，延长的氯沙坦共治疗(co-therapy)可能对癌症患者有 益。在一些实施方式中，可以2mg/kg/天的氯沙坦剂量(通常用于治疗患 有Marfan氏综合征的患者)对患者进行治疗，(Brooke BS等，(2008) N Engl J Med358：2787-2795)。

虽然氯沙坦和ARB具有有限的副作用，对于患有已知肾病的患者并 不推荐氯沙坦治疗。氯沙坦可在患有肾脏微血管疾病或大血管疾病、或 充血性心力衰竭的患者中诱发肾功能不全(Sica DA等，(2005)Clin  Pharmacokinet44：797-814)。在肾功能差的患者或同时接受钾补充剂或 保钾利尿剂(potassium sparing diuretic)的患者中还可能发生高血钾症。 最后，在以氯沙坦治疗的患者中，可发生由高水平的循环血管紧张素II 引起的血管性水肿(angioedema)(Sica DA等，(2005)Clin Pharmacokinet 44：797-814)。

通常认为肿瘤耐药性在许多层面上发生，包括药物外排增加、药物 失活、由细胞凋亡来规避、以及靶通路产生变化(Longley DB等，(2005) J Pathol205：275-292)。由于氯沙坦不是抗肿瘤剂，因此在延长治疗之 后肿瘤对氯沙坦治疗的耐药性可源于其它机理。考虑到除TSP-1外， TGF-β1的活化还由不同试剂(如MMP和整合素)诱发，因此肿瘤对氯 沙坦的耐药性可由TGF-β1的活化和信号转导的变化引起。然而，已报道 在心肌梗死后的长期氯沙坦治疗与抗纤维化特性降低并无关联(Schieffer  B等，(1994)Circulation89：2273-2282)。

如实施例1-6中所示，发明人证明氯沙坦降低了肿瘤中的基质胶原 蛋白含量，并改善了通过瘤内和静脉内递送的纳米颗粒(HSV) 的穿透和疗效。氯沙坦还表现出血管活化特性和抗转移特性，这可增加 其临床应用。此外，由于氯沙坦已获得临床使用许可，它代表了用于在 癌症患者中改善纳米治疗剂的效力的安全且有效的辅药。

实施例1-6的示例性实验方案

示例性的材料和方法

在下述其它材料和方法部分中，对技术进行了更详细的说明。

简单而言，在对胶原蛋白和细胞因子水平进行测量之前，将从人乳 腺癌活检组织中分离出的CAF用氯沙坦治疗24小时。用商购的ELISA 试剂盒进行蛋白质测定法。所有动物实验均在实验动物关照和使用委员 会(the Institutional Animal Care and Use Committee)的准许下进行。以 10mg/kg/天、20mg/kg/天或60mg/kg/天的浓度腹膜内给予氯沙坦达2周。 在两周的氯沙坦治疗后，用HSV(瘤内给药)和(经尾静脉进 行静脉内给药)对小鼠进行治疗。将切下的肿瘤迅速冷冻以用于生化分 析、或于多聚甲醛中固定并包埋于石蜡或最佳切割温度复合物(optimum  cutting temperature compound，OCT)中以用于免疫组织化学。

其它材料和方法：

细胞培养

使用本领域认可的方案(例如，在Orimo A等，(2005)Cell121： 335-348中描述的方案)从人乳腺癌活检组织中分离得到CAF。将CAF 以500K细胞/孔的浓度铺于24孔板中。在以10μmol/l添加氯沙坦24小 时之前，给予细胞24小时以使其附着至所述板(Schüttert JB等，(2003) Pflugers Arch446：387-393)。治疗在低血清下完成，以降低背景胶原蛋 白水平。在24小时治疗时间结束时收集条件培养基，并对胶原蛋白水平 进行分析。

蛋白质测定法

用I型C末端胶原蛋白前肽酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒 (Quidel，San Diego，CA)和Sircol可溶胶原蛋白测定法(Biocolor Ltd.， 英国)进行胶原蛋白I的测量。使用人TGF-β1ELISA试剂盒(R&D  Systems，Minneapolis，MN)进行TGF-β1测定法。所述测定法仅对游离 形态的成熟TGF-β1进行测量。为了测量TGF-β1的总水平，用1N HCl 活化潜伏型(latent form)TGF-β1。用人TSP-1ELISA试剂盒(R&D  Systems，Minneapolis，MN)进行TSP-1测定法。

小鼠和肿瘤模型

所有实验均在实验动物关照和使用委员会的批准下完成。人软组织 肉瘤(HSTS26T)和人黑色素瘤(Mu89)肿瘤在严重联合免疫缺陷(SCID) 小鼠的腿部及背部皮肤褶皱腔室中进行皮下生长(Leunig M等，(1992) CancerRes52：6553-6560)。人胰腺腺癌细胞(L3.6PL)在SCID小鼠的 胰腺中进行原位生长。在胰腺尾部以包膜下(sub-capsular)注射一百万 个细胞来诱导L3.6PL肿瘤。在自发型FVB/N-Tg(MMTV-PyVT)634MUl/J 小鼠中监测肿瘤大小，并在肿瘤大小达到4mm-6mm的直径时，选定用 于治疗的肿瘤(Guy CT等，(1992)Mol Cell Biol12：954-961)。

氯沙坦制备和治疗

使用研钵和研杵对Cozaar(氯沙坦钾)片剂进行研磨。然后将所述 粉末溶于水中，获得2.5mg/ml的浓度。然后过滤溶液并储存于无菌容器 中。通过每日腹膜内注射给予浓度为10mg/kg/天、20mg/kg/天或60mg/kg/ 天的氯沙坦达2周(Melo LG等，(1999)Am JPhysiol277：R624-R630)。

组织收集、包埋和染色

从小鼠中收获用于免疫染色分析和定量的肿瘤，所述肿瘤于4％的多 聚甲醛中固定，并包埋于石蜡或最佳切割温度复合物(OCT)(Sakura  Finetek Torrance，CA)中。在包埋和冷冻之前，将包埋有肿瘤的OCT浸 泡于蔗糖溶液中24小时。

冷冻切片中的胶原蛋白I和TSP-1的免疫染色

将冷冻切片切成10μm切片，用于免疫组织化学和成像。依照以前 公开的方案(Znati CA等，(2003)Clin Cancer Res9：5508-5513)，使 用LF-67抗体(1∶100稀释)检测胶原蛋白I。用与小鼠交叉反应的山羊 抗人抗体(1∶50稀释)(sc-12312，Santa Cruz Biotechnology Inc.，Santa  Cruz，CA)检测TSP-1。对于胶原蛋白和TSP-1分析，随机从各载玻片 拍摄20倍放大的图像。通过测量高于阈值的像素数量来确定胶原蛋白和 TSP-1含量，所述阈值是基于分析中全部载玻片的平均像素强度值来设 定的。胶原蛋白I和血小板反应素1的免疫染色背景信号强度均较低且 均一(uniform)。发明人证实了，平均信号强度阈值导致产生对胶原蛋白 和血小板反应素1免疫染色的精确表现度，且不包括背景信号。

胶原蛋白纤维的二次谐波成像

用定制多光子激光扫描显微镜在背部腔室肿瘤中进行二次谐波成像 (SHG)(Brown E等，(2003)Nat Med9：796-800)。使用零级四分之 一波片(zero order quarter wave plate)(Newport Corporation，Irvine，CA) 将由Ti：蓝宝石激光器(Mai-Tai Broadband：Spectra-Physics，Mountain  View，CA)而来的偏振光转化为圆偏振光。使用810nm的激发波长和 405nm处检到的SHG信号。在剂量响应实验期间(15天)，用氯沙坦 (10mg/kg/天、20mg/kg/天或60mg/kg/天)或盐水对背部腔室中携有 HSTS26T肿瘤的SCID小鼠进行治疗。在每只小鼠中使用血管标记物来 对感兴趣的4个的区域进行定位并定期返回相同区域的SHG成像。用定 制的Matlab(The Math Works，Inc.，Natick，MA)代码对SHG图像进 行分析。将对SHG信号呈阳性的感兴趣区域(ROI)的分数相对于剂量 响应研究第1天(氯沙坦或盐水治疗开始之前)所得到的SHG信号量进 行归一化。

对HSV感染和纳米颗粒分布的分析

瘤内注射：用注射泵(Harvard Apparatus Standard Pump22，Holliston， Massachusetts)以4μl/min的流速灌注纳米颗粒和溶瘤HSV。发明人注入 了10ul的表达绿色荧光蛋白(GFP)的HSV(2.5×105t.u.)，或10μl的 荧光纳米颗粒(直径100μm；浓度1×1013纳米颗粒/ml)。在纳米球注射 后30min、HSV灌注后24小时切除所注射的肿瘤。以垂直于针道的角度 将切下的肿瘤切成两半，于多聚甲醛中固定并在OCT中冷冻。以垂直于 针道的角度获取全部肿瘤切片。用共聚焦显微镜(Olympus BX61WI)在 2×下对整个肿瘤切片进行成像，并将图像重组为镶嵌图案(mosaic)。 纳米球分布和GFP阳性区域(HSV感染细胞)对应于比背景信号亮的像 素分数。

静脉内注射：由尾静脉注入总体积10μl、浓度为3.6×1013纳米颗粒 /ml的纳米颗粒。24小时后注入50μl的FITC-凝集素来对功能性血管进 行鉴定。在凝集素注射后5分钟切除肿瘤，于多聚甲醛中固定并包埋于 OCT中。然后在共聚焦成像和分析前将肿瘤进行切片。通过测量比背景 信号亮的像素分数来对纳米球的分布程度进行测定。通过画出被灌注的 血管周围的轮廓(contours)并记录各轮廓中对纳米球呈阳性的像素分数， 来对纳米球的穿透进行测定。各灌注血管的轮廓延伸出30μm。发明人使 用在先描述的算法(Tong RT等，(2004)Cancer Res64：3731-3736)将 纳米球分数的图与距血管的距离拟合成指数函数并获得纳米球自各血管 的相对穿透深度。

通过光漂白后荧光恢复进行的扩散测量

将在背部皮肤皱褶腔室中植入HSTS26T肿瘤的小鼠通过静脉注射 氯沙坦(40mg/kg/天)一周进行治疗。根据之前描述的方案(Chauhan VP 等，(2009)Biophys J97：330-336)，利用定制多光子显微镜进行光漂白 后荧光恢复(FRAP)测量。将IgG标记的异硫氰酸荧光素(0.5ml；2mg/ml) 瘤内注入用作示踪剂。在注射后约10min，通过多光子FRAP(MP-FRAP) 和空间傅里叶分析FRAP(SFA-FRAP)对扩散进行测量，使用等式

D D 0 = 1 - 2.105 λ + 2.0865 λ 3 - 1.7068 λ 5 + 0.72603 λ 6 1 - 0.7585 7 λ 5 , ]]>利用SFA-FRAP数据计 算基质孔径大小，其中，D为探针分子在肿瘤中的扩散系数；D0为其在 水中的扩散系数；以及λ为探针的流体动力学半径与孔隙半径的比值 (Nugent LJ等，(1984)Microvasc Res28：270-274)。

对HSV感染、坏死和胶原蛋白结构的分析

为了测定病毒感染、坏死以及胶原蛋白结构之间的关系，在HSV注 射21天后，用多克隆HSV-1抗体(DAKO，Glostrup Denmark)或胶原 蛋白I抗体(LF-67)对连续石蜡切片进行染色。对于石蜡切片中的胶原 蛋白I染色，在以Target Retrieval Solution(pH9)(DAKO，Carpinteria， CA)进行抗原修复之前，用3％过氧化氢对载玻片进行处理。然后，在 使用1∶500稀释的胶原蛋白I一抗之前，用0.05％的胰蛋白酶对所述载玻 片进行处理。用光学显微镜对将胶原蛋白I或HSV染色的切片进行成像。

PCR分析

使用RNeasy迷你试剂盒(Qiagen，Valencia，CA)提取RNA，然后 使用RT2第一链试剂盒(SuperArray Biosciences Corporation，Frederick， MD)将其转化为cDNA。用ND-200分光光度计(Nanodrop Technologies， Wilmington，DE)对cDNA的质量和浓度进行测量。对于PCR反应，将 全部样品的cDNA标准化至1μg/μl。使用HotStarTaq Plus DNA聚合酶 (Qiagen，Valencia，CA)进行该反应。对于AGTR1引物，发明人使用 的是：正向引物-GTCCCGCCTTCGACGCACAA(SEQ ID NO：1)、反向 引物-GGGGCGGTAGGAAAGCGTGC(SEQ ID NO：2)。

Ki67染色、成像和分析

在HSV注射21天后对石蜡切片进行Ki67染色。在一抗检测之前用 Target Retrieval Solution(DAKO，Carpinteria，CA)对载玻片进行微波 处理。以2×放大对整个肿瘤切片进行成像并重组为镶嵌图案。在每一肿 瘤中随机选取二十个区域。通过人工计数对各区域中的Ki67阳性细胞分 数进行测定。

治疗和肿瘤生长延缓

原位胰腺L3.6PL肿瘤植入两周后，随机选择小鼠来进行氯沙坦或盐 水治疗。在氯沙坦(20mg/kg/天)治疗两周后，经由尾静脉来静脉灌注 亚抗肿瘤剂量的(4mg/kg)。DOXIL注射一周后，切除并测量所 述肿瘤。

病毒治疗和肿瘤生长延缓

将携有皮下HSTS26T和MU89肿瘤的Scid小鼠随机分成对照组和 氯沙坦治疗组。随后将各组(对照组和治疗组)分为HSV治疗组和非 HSV治疗组。在两周后达到60mm3的肿瘤被选定用于瘤内HSV注射。 以PBS或2.5×105转导单位(t.u.)的溶瘤HSV MGH2(由E.Antonio  Chiocca赠与，Ohio State University，Columbus，OH)的10μl瘤内注射 对所述肿瘤进行治疗。给予了两次间隔24小时的溶瘤HSV注射。使用 Harvard Apparatus Standard Pump22infusion/withdraw注射泵系统 (Holliston，Massachusetts)以4μl/min的流速进行注射。每2-3天对肿 瘤进行测量。以V＝AB2/2评价肿瘤体积，其中，V为肿瘤体积；A和B 为以卡尺测得的肿瘤的最大和最小直径。

统计

在各治疗方式中以至少6只小鼠进行全部动物实验。在每组中以至 少8只小鼠进行HSTS26T和MU89肿瘤的肿瘤生长延缓研究。所用小鼠 数量的合理性基于发明人先前研究中的功效计算(power calculations) (McKee TD等，(2006)Cancer Res66：2509-2513以及Mok W等，(2007) Cancer Res67：10664-10668)，所述研究表明发明人在每组中需要至少8 只小鼠来获得统计显著性(p＜0.05)。所有涉及两个组的统计分析均使用 学生t检验完成。p值低于0.05即认为是显著的。对于多个组，采用单 因素方差分析继以Tuskey’s post-hoc检验来测定组间的统计显著性。在 图中，统计显著性以星号(“*”)标注。

实施例7：血管紧张素阻断通过使肿瘤微环境正常化而改善药物递 送

生物医学研究的进展已经使得在临床前和临床环境中均引入了数种 全身给药的新型分子剂和纳米治疗剂(Jones，D.(2007)Nat Rev Drug  Discov6，174-175；Moghimi，S.M.等，(2005)Faseb J19，311-330)。 尽管这些新试剂作用于独特靶点(提供了针对肿瘤细胞的更高特异性或 改进的药效学特性)，然而由于肿瘤微环境的性质，使它们的效果受到其 递送的限制(Jain，R.K.(1998)Nat Med4，655-657；Sanhai，W.R.等， (2008)Nat Nanotechnol3，242-244)。生长诱发的机械力压迫并使血管 萎陷，限制了肿瘤灌注，而异常血管导致异质药物外渗。递送的第三个 决定因素(经由组织的间质运输)通过异常密集且扭曲的肿瘤间质尤其 阻碍肿瘤中的纳米药剂(Jain，R.K.&Stylianopoulos(2010)Nat Rev Clin  Oncol.139；Chauhan，V.P.等，(2009)Biophysical journal97，330-336)。 这些屏障尤其影响对患有促结缔组织增生性、纤维化肿瘤的患者的治疗 (限制了到达目标癌症细胞的药物的量，导致药效不佳)，所述肿瘤包括 胰腺癌(Olive，K.P.等，(2009)Science324，1457-1461)、结直肠癌 (Halvorsen，T.B.&Seim，E.(1989)J Clin Pathol42，162-166)、肺 癌和乳腺癌(Ronnov-Jessen，L.等，(1996)Physiol Rev76，69-125)。 目前，仅有有限的方法来克服这些纳米治疗剂和低分子量药物的递送屏 障。在之前，发明人发现松弛素可改善经由肿瘤基质的运输，但并不能 促进低分子量试剂的递送(B.Seed和R.K.Jain.“Methods to Potentiate  Cancer Therapies”，专利号US6,719,977，2004年4月13日)。

本文提供了一类FDA批准的试剂，所述试剂可使肿瘤微环境正常化， 并对低分子量和高分子量药物的递送均有改善。具体而言，发明人证明 了，血管紧张素阻断使得实体瘤(包括乳腺肿瘤和胰腺肿瘤)中的间质 基质“正常化”(图17A)。发明人对FDA批准的血管紧张素受体阻断剂 (ARB)和血管紧张素转换酶抑制剂(ACE-I)是否可经由这一机制来改 变肿瘤微环境、进而改善药物递送进行了评估。发明人还确定了，ARB 和ACE-I可给血管减压从而改善灌注(图17B-图17D)；可增加肿瘤导 水率(hydraulic conductivity)从而修复血管功能(图18B)；并可降低间 质基质密度从而提高纳米治疗剂的穿透(图18D)。这些试剂通过血管正 常化改善像氧分子一样小的分子(放射和化疗敏化剂)的递送(图18A- 图18B)；同时也通过间质基质正常化增强较大试剂的穿透(图18C-图 18D)。通过对整个肿瘤微环境的这一修复，这些试剂增强了低分子量化 学治疗剂和纳米治疗剂在乳腺癌模型和胰腺癌模型中的效果：导致肿瘤 生长下降以及动物存活延长(图19A-图19E)。发明人证明了，ARB和 ACE-I可增强治疗剂的递送，并因此对于与所有种类的抗癌剂进行联合 治疗具有广泛的适用性，所述抗癌剂包括小分子化学治疗剂、生物制剂、 以及纳米治疗。

与其它方法相比，血管紧张素阻断剂提供了许多优点。抗血管生成 治疗仅使血管正常化，并且仅被批准用于有限数量的适应症。同时，ARB 和ACE-I被FDA批准作为具有可控副作用的抗高血压剂。可使胶原蛋白 基质正常化的基质降解酶对肿瘤不具有选择性，可增强侵润和转移。ARB 和ACE-I通常在正常组织中没有与基质重塑相关的并发症，这使得其作 为抗高血压剂具有安全性。作为小分子试剂，ARB和ACE-I还可经由含 有化学治疗剂的纳米载体(例如，脂质体、纳米颗粒)递送，以增强其 定位至肿瘤，从而进一步限制毒性。抗血管生成剂(唯一经FDA批准的 增强药物向肿瘤递送的辅药)由于能减小血管壁的“孔”大小，因而不 能改善较大颗粒的递送。相反，本文提供的血管紧张素阻断剂可以改善 所有种类的抗肿瘤诊断和治疗的递送。

实施例8：对在实体瘤中降低胶原蛋白含量的抗高血压剂进行鉴定 的体外筛选

这一实施例提供了基于抗高血压(AH)剂在肿瘤中降低胶原蛋白I 水平的能力将其进行排名的测定法。

由于大多数胶原蛋白I是由癌相关成纤维细胞(CAF)产生的，本 领域技术人员可以对AH治疗后的CAF上清液中的胶原蛋白I及其分子 决定因素[活化TGF-β1、血小板反应素1(TSP-1)以及结缔组织生长因 子(CTGF)]的水平进行测量。

例如，发明人测定了，氯沙坦在体外乳腺CAF中降低了TGF-β1的 活化和胶原蛋白I的产生。以10μmol/L的氯沙坦处理细胞24小时。氯 沙坦降低了90％的活化TGF-β1水平(p＜0.05)，而总TGF-β1水平未受 影响。在胶原蛋白I水平中相应存在27％的降低(p＜0.05)(参见图1)。

示例性的实验设计：

抗高血压剂：可对任何FDA批准的血管紧张素受体阻断剂(ARB) 进行测试。这些试剂的示例性名称和剂量可以在(但不限于)下述网址 中找到：http://www.globalrph.com/druglist.htm。

虽然血管紧张素转换酶抑制剂(ACE-I)也减少了胶原蛋白，然而其 并不靶向细胞上的受体，因此发明人并未测量其对胶原蛋白I的影响。 同样可对钙通道阻断剂在胶原蛋白降低方面的效果进行评价。

细胞培养

使用先前描述的方案(Orimo A等，(2005)Cell121(3)：335-348)， 从人癌症活检组织中分离得到癌相关成纤维细胞(CAF)。应将CAF以 500K细胞/孔的浓度铺于24孔板中，并在添加抗高血压药物前，给予24 小时使所述细胞附着于所述板。例如，基于公开的方案(Schuttert JB等， (2003)Pflugers Arch446(3)：387-393)，全部氯沙坦研究在10μmol/l 下进行24小时。治疗可在低血清下完成，以降低背景胶原蛋白水平。可 在24小时治疗期结束时收集条件培养基，并对总TGF-β1、活化TGF-β1、 TSP-1、CTGF和胶原蛋白水平进行分析。

蛋白质测定法

在氯沙坦研究(Schuttert JB等，(2003)Pflugers Arch446(3)：387-393) 中，使用I型C末端胶原蛋白前肽酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒 (Quidel，San Diego，CA)和Sircol可溶胶原蛋白测定法(Biocolor Ltd.， United Kingdom)进行胶原蛋白I测量。使用人TGF-β1ELISA试剂盒(RD  Systems，Minneapolis MN)进行TGF-β1测定法。所述测定法仅对游离 形态的成熟TGF-β1进行测量。为了测量TGF-β1的总水平，用1N HCl 活化潜伏型TGF-β1。用人TSP-1ELISA试剂盒(R&D Systems， Minneapolis，MN)进行TSP-1测定法。CTGF ELISA试剂盒可由Leinco 购买(www.leinco.com)。

方案概述：

分离或购买来自乳腺癌、胰腺癌、以及结肠癌的癌相关成纤维细胞 (CAF)；

在含有血管紧张素I和ACE的培养基中共培养CAF和癌细胞；

以例如6剂量的AGTR1或ACE抑制剂处理CAF48小时；

收集上清液，并通过ELISA测量TGF-β1、结缔组织生长因子 (CTGF)、血小板反应素1、和/或胶原蛋白I。ELISA测量应当重复三次 以上。

另外的示例性测试：

a)在有限数量的肿瘤模型中体内证实体外发现。

b)对使得AH成为更有效的胶原蛋白改性剂的特征进行鉴定，以 筛选新AH。

实施例9：结合血管紧张素阻断与对替代纤维化途径的抑制来改善 肿瘤的药物递送

发明人已经发现，通过血管紧张素信号阻断而来的间质基质正常化 至少部分地通过两种机制改善药物递送：缓和肿瘤的内在压力，以改善 血管灌注；以及降低由基质直接施加于药物运输的粘弹性阻力和空间位 阻。血管紧张素信号阻断可以安全地抑制促纤维化的TGF-β和下游CTGF 通路的活化，从而产生这些变化。在一些实施方式中，将血管紧张素阻 断剂与不依赖于TGF-β和CTGF活化的促纤维化通路(包括内皮素1、 PDGF、Wnt/β-连环蛋白、IGF-1、TNF-α、以及IL-4)抑制剂搭配，可以 增强这些效果，进一步改善药物递送和效力。例如，内皮素受体阻断剂 (ERB)和PDGF抑制剂(PDGF-I)可与血管紧张素阻断剂联合使用。 ERB治疗肺动脉高压，并可用作一类癌症治疗(Nelson等，(2003)Nature  Reviews Vol.3：110-116)，例如与血管紧张素阻断剂联合。已经报道 PDGF-I在肿瘤中具有潜在的抗血管效果(Baluk等，(2005)Current  Opinion in Genetics&Development15：102-111，Andrae等，(2008)Genes &Development22：1276-1312)。已经报道内皮素阻断在肝(Binder等， (2009)Mol.Cancer Ther.8：2452-2460)、肺(Park等，(1997)Am J.Respir  Crit Care Med Vol.156：600-608)、以及心脏中通过对TGF-β合成的抑制 作用来降低纤维化发生(Ogata等，(2002)Clinical Science103(Suppl.48)： 284S-288S)；并已报道内皮素阻断在肿瘤模型中减少肿瘤发展和转移 (Nelson等，在前；Binder等，在前)。同时，已经报道PDGF抑制作用 在特发性(idiopathic)肺纤维化以及硬皮病中阻止纤维化发生 (Grimminger等，(2010)Nature Reviews Vol.9：956-970；Andrae等， (2008)Genes&Development22：1276-1312)；并且，发明人已经证实 其能够在肿瘤内降低胶原蛋白水平(数据未示出)。已经报道ERB是耐 受良好的，并在前列腺癌(James等，(2009)European Urology55： 1112-1123)和非小细胞肺癌(Chiappori等，(2008)Clin Cancer Res14： 1464-1469)中具有改善总体存活率的潜能。因此，血管紧张素阻断与内 皮素1和/或PDGF阻断联合(在仔细用药的情况下)应当对药物递送产 生累加的改善，并具有最小的额外毒性。在一些实施方式中，内皮素1 和/或PDGF阻断可以亚治疗剂量与血管紧张素阻断联合使用，后者可以 亚抗高血压剂量和/或亚抗肿瘤剂量使用，以改善药物递送和/或癌症治 疗。

等同物(EQUIVALENTS)

本领域技术人员将认识、或能够仅借助常规实验法确认本文所述发 明的特定实施方式的许多等同物。将此类等同物视为涵盖于所附权利要 求中。

序列表：

GTCCCGCCTTCGACGCACAA(SEQ ID NO：1)

GGGGCGGTAGGAAAGCGTGC(SEQ ID NO：2)