技术领域
本发明涉及中医药技术领域，尤其涉及一种用于促进股骨颈骨折愈合的 中药药物。
背景技术
股骨颈骨折为一种常见骨折，约占成人骨折的3.58％，发病率约为 1/1000，可发生于各个年龄阶段，并逐年呈增长趋势。股骨颈骨折作为一种 严重的损伤，老年人可危及生命，而年轻人的恢复由于其并发症也不容乐观， 股骨颈骨折损伤后由于其骨折断端的位置的旋转、外翻、支持带动脉系统损 伤及囊内压力的增高而影响其预后。由于股骨颈部头部解剖学及血供的特殊 性，以至于股骨颈骨折不愈合及股骨头坏死成为股骨颈骨折术后的两大并发 症，所以被称之为“尚未解决的骨折”。尽管内固定技术及术中透视设备有 了长足进步，但骨折不愈合率(15％)及股骨头坏死率(20％-30％)仍高居 不下，由于股骨颈骨折类型中Gardenin型及GardenlV所占比例约75％，并 且对于Gardenm型及GardenlV型骨折由于存在受伤时暴力作用力大、创伤 大、骨折端移位严重、复位困难等因素，故又增加了其骨折不愈合率及股骨 头坏死率。从而导致患者可能需要再次进行手术治疗，加重家庭和社会负担， 所以探寻一种即可促进骨折愈合又可降低股骨颈骨折术后股骨头坏死率的治 疗方式尤为重要。
股骨颈骨折的治疗目前主要以手术治疗为主，对于相对年轻及移位程度 不明显的骨折，闭合复位经皮空心钉固定为其主要手术方式，空心钉对股骨 颈骨折断端固定的优点有：能够维持骨折断端较强加压能力并能提供比较坚 强的固定，抗剪切及抗旋转作用也较大；手术操作相对简单，手术切口小， 对组织损伤小，经皮即可梓入螺钉；费用比其他固定方式较低，而且3枚空 心钉即可起到足够的稳定性。因此，加压螺钉可以有效治疗一般股骨颈骨折。
中医认为，暴力造成骨折后，常导致局部脉络瘀阻，气血不畅，营卫离 经，离经之血瘀滞于肌肤腠理。“气伤痛、形伤肿”，故机体可产生疼痛、 肿胀等症状，由于筋骨一体，故伤筋必动骨，根据“损伤之症，专从血论”， “肝主筋、肾主骨”，“客者除之、劳者温之”等伤科理论及骨折的三期用 药原则，活血化疲、接骨续筋、补益肝肾药物的运用可去游血、强筋骨。活 血化瘀药物有抑制血小板凝集、降低血粘度、改善微循环、促进骨修复等作 用，而补肾强骨药可促进成骨分化、骨折愈合等作用，通过经皮空心钉内固 定早期手术结合中医的辩证用药，以改善骨折断端局部血供，促进血运重建， 从而可促进骨折愈合及降低股骨头坏死率。
富含血小板血浆(platelet-richplasmaPRP)是自体源性通过全血分离而 得到的、含浓缩血小板的血装，血小板涉及骨损伤早期的应答并通过α颗粒 释放各种生长因子，生长因子通过协同作用以促进骨组织的修复和再生众所 周知，骨折的愈合在于骨折断端血运的重建，PRP中各生长因子通过协同作 用，刺激新生血管生成，使骨母细胞向成骨细胞转化，刺激断端膜内成骨和 软骨内成骨。在经皮空心钉内固定基础上，通过骨折断端及颈升动脉系统注 入PRP，以降低骨折不愈合率及股骨头坏死率。
本研究根据临床经验方，对药物进行筛选而成，本方集补肾活血益气、 接骨续筋、化瘀止痛的作用，通过临床资料总结回顾，实验研究相结合，证 实了本发明制剂具有降低骨颈骨折不愈合率及股骨头坏死率的临床效果，从 而促进股骨颈骨折的愈合和减少并发症。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种用于促进股骨颈骨折愈合的中药 药物。该药物集补肾活血益气、接骨续筋、化瘀止痛的作用，通过临床资料 总结回顾，实验研究相结合，证实了本发明制剂具有降低骨颈骨折不愈合率 及股骨头坏死率的临床效果，从而促进股骨颈骨折的愈合和减少并发症。
本发明提供一种用于促进股骨颈骨折愈合的中药药物，其原料药包括当 归、赤芍、熟地黄、川芎、桃仁、红花、枫香脂、夏天无、土鳖虫、怀牛膝、 鸡血藤、刘寄奴、桂枝、桑枝、骨碎补、川续断、三七、炒杜仲、鳖甲、炒 白术和炙甘草。
其中，所述中药药物中各原料药的重量份分别为当归10～15重量份、赤 芍10～20重量份、熟地黄20～30重量份、川芎10～15重量份、桃仁10～15重 量份、红花10～15重量份、枫香脂10～20重量份、夏天无10～15重量份、土 鳖虫10～15重量份、怀牛膝15～30重量份、鸡血藤15～30重量份、刘寄奴10～15 重量份、桂枝10～20重量份、桑枝10～15重量份、骨碎补15～25重量份、川 续断10～15重量份、三七10～15重量份、炒杜仲20～30重量份、鳖甲10～15 重量份、炒白术20～30重量份、炙甘草10～15重量份。
其中，所述中药药物中各原料药的重量份分别为当归10～15重量份、赤 芍15～20重量份、熟地黄20～25重量份、川芎10～15重量份、桃仁10～15重 量份、红花10～15重量份、枫香脂10～15重量份、夏天无10～15重量份、土 鳖虫10～15重量份、怀牛膝25～30重量份、鸡血藤25～30重量份、刘寄奴10～15 重量份、桂枝10～15重量份、桑枝10～15重量份、骨碎补20～25重量份、川 续断10～15重量份、三七10～15重量份、炒杜仲25～30重量份、鳖甲10～15 重量份、炒白术25～30重量份、炙甘草10～15重量份。
其中，所述中药药物中各原料药的重量份分别为当归15重量份、赤芍 20重量份、熟地黄25重量份、川芎15重量份、桃仁15重量份、红花15重 量份、枫香脂15重量份、夏天无10重量份、土鳖虫10重量份、怀牛膝25 重量份、鸡血藤25重量份、刘寄奴15重量份、桂枝10重量份、桑枝10重 量份、骨碎补25重量份、川续断15重量份、三七15重量份、炒杜仲30重 量份、鳖甲10重量份、炒白术30重量份、炙甘草15重量份。
其中，所述中药药物剂型可以为薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、 软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、散剂、丹剂、注射剂。
其中，所述中药药物剂型优选为口服液。
本发明还提供了上述中药药物制备成口服液时的制备方法，具体包括：
第一步，按质量称取夏天无、怀牛膝、刘寄奴、桂枝、桑枝、骨碎补、 三七、炒杜仲、炒白术和炙甘草，分别洗净，粉碎，混合在一起，加水煎煮 3次，第一次加水量为该步获得的混合物质量的4～8倍，第二次加水量为该 步获得的混合物质量的2～5倍，第三次加水量为该步获得的混合物质量的1～3 倍，煎煮液合并，过滤，浓缩除去水，干燥，粉碎，获得粉末；
第二步，按质量称取余下原料药，分别洗净，粉碎，加乙醇提取3次， 第一次用相对于该步获得的混合物质量6～8倍量的醇浓度为80％乙醇回流提 取2小时，第二次用相对于该步获得的混合物质量4～6倍量的醇浓度为60％ 乙醇回流提取2小时，第三次用相对于该步获得的混合物质量4～6倍量的醇 浓度为60％乙醇回流提取2小时，提取液合并，加入第一步制备的粉末，将 合并的提取液加热至30℃，搅拌至溶解完全，提取液滤过，回收乙醇溶剂并 浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15的浓缩液，静置，滤过，备用；
第三步，将浓缩液后的药液加入已处理好的D101大孔吸附树脂，大孔 吸附树脂是浓缩液体积的3～5倍，吸附6小时，吸附药液的大孔吸附树脂柱 用5倍柱床体积水洗后再用10倍柱床体积的50％乙醇洗脱，收集水洗脱液 和醇洗脱液，回收醇和水，浓缩至60℃相对密度为1.25～1.35的浓缩液；
第四步，取第三步获得的浓缩液100g，加入蔗糖50g、防腐剂2g，加水 定容至1000ml，灌封，辐照灭菌，包装成品，制成口服液，即得。
本发明还提供一种用于促进股骨颈骨折愈合的口服液，其原料药包括当 归、赤芍、熟地黄、川芎、桃仁、红花、枫香脂、夏天无、土鳖虫、怀牛膝、 鸡血藤、刘寄奴、桂枝、桑枝、骨碎补、川续断、三七、炒杜仲、鳖甲、炒 白术和炙甘草。
本发明的有益效果:
本发明提供一种用于促进股骨颈骨折愈合的中药药物。该药物集补肾活 血益气、接骨续筋、化瘀止痛的作用，通过临床资料总结回顾，实验研究相 结合，证实了本发明制剂具有降低骨颈骨折不愈合率及股骨头坏死率的临床 效果，从而促进股骨颈骨折的愈合和减少并发症。
具体实施方式
本发明提供了一种用于促进股骨颈骨折愈合的中药药物，其原料药包括 当归、赤芍、熟地黄、川芎、桃仁、红花、枫香脂、夏天无、土鳖虫、怀牛 膝、鸡血藤、刘寄奴、桂枝、桑枝、骨碎补、川续断、三七、炒杜仲、鳖甲、 炒白术和炙甘草。
进一步优选，所述中药药物仅由上述原料药制备而成。
中医认为，暴力造成骨折后，常导致局部脉络瘀阻，气血不畅，营卫离 经，离经之血瘀滞于肌肤腠理。“气伤痛、形伤肿”，故机体可产生疼痛、 肿胀等症状，由于筋骨一体，故伤筋必动骨，根据“损伤之症，专从血论”， “肝主筋、肾主骨”，“客者除之、劳者温之”等伤科理论及骨折的三期用 药原则，活血化疲、接骨续筋、补益肝肾药物的运用可去瘀血、强筋骨。活 血化瘀药物有抑制血小板凝集、降低血粘度、改善微循环、促进骨修复等作 用，而补肾强骨药可促进成骨分化、骨折愈合等作用，通过经皮空心钉内固 定早期手术结合中医的辩证用药，以改善骨折断端局部血供，促进血运重建， 从而可促进骨折愈合及降低股骨头坏死率。
本方基于以上的中医辨证认识，在临床经验方的基础上，筛选有效药物 组成本发明方剂，本发明方剂以土鳖虫为君药，土鳖虫具有破血逐瘀，续筋 接骨的作用，专攻跌打损伤，筋伤骨折，瘀肿疼痛，性走窜，功效极强；桃 仁、红花、当归、赤芍、熟地黄、川芎功效养血活血，化瘀止痛，本方在其 基本思路上，加入刘寄奴、枫香脂、骨碎补、夏天无、鳖甲活血化瘀疗伤药， 加强君药接骨续筋的功效，鳖甲为血肉有情之品，更能养血，诸药合用，共 为臣药；患者股骨颈骨折，必行动受限，日久易筋骨屈伸不利，故加入桂枝、 桑枝，枝着肢也，二枝共奏伸筋骨功效，川续断、炒杜仲具有补肝肾，强筋 骨，疗骨续断作用，加入炒白术，炙甘草健脾以助运化，化生气血，以助身 体恢复，诸药合用，共为佐药；加入怀牛膝引药下行，同时补肝肾，强筋骨， 以助患者恢复，加入鸡血藤，引药入血，二药合用，共为使药。
所述中药药物中各原料药的重量份分别为当归10～15重量份、赤芍10～20 重量份、熟地黄20～30重量份、川芎10～15重量份、桃仁10～15重量份、红 花10～15重量份、枫香脂10～20重量份、夏天无10～15重量份、土鳖虫10～15 重量份、怀牛膝15～30重量份、鸡血藤15～30重量份、刘寄奴10～15重量份、 桂枝10～20重量份、桑枝10～15重量份、骨碎补15～25重量份、川续断10～15 重量份、三七10～15重量份、炒杜仲20～30重量份、鳖甲10～15重量份、炒 白术20～30重量份、炙甘草10～15重量份。
进一步优选，所述中药药物中各原料药的重量份分别为当归10～15重量 份、赤芍15～20重量份、熟地黄20～25重量份、川芎10～15重量份、桃仁10～15 重量份、红花10～15重量份、枫香脂10～15重量份、夏天无10～15重量份、 土鳖虫10～15重量份、怀牛膝25～30重量份、鸡血藤25～30重量份、刘寄奴 10～15重量份、桂枝10～15重量份、桑枝10～15重量份、骨碎补20～25重量 份、川续断10～15重量份、三七10～15重量份、炒杜仲25～30重量份、鳖甲 10～15重量份、炒白术25～30重量份、炙甘草10～15重量份。
最优选，所述中药药物中各原料药的重量份分别为当归15重量份、赤芍 20重量份、熟地黄25重量份、川芎15重量份、桃仁15重量份、红花15重 量份、枫香脂15重量份、夏天无10重量份、土鳖虫10重量份、怀牛膝25 重量份、鸡血藤25重量份、刘寄奴15重量份、桂枝10重量份、桑枝10重 量份、骨碎补25重量份、川续断15重量份、三七15重量份、炒杜仲30重 量份、鳖甲10重量份、炒白术30重量份、炙甘草15重量份。
本发明提供的药物可以根据需要，添加常规辅料，制备成任何常用内服 剂型，内服剂型可以为薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口 服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、散剂、丹剂、注射剂，优选为口服液。
本发明还提供了上述中药药物制备成口服液时的制备方法，具体包括：
第一步，按质量称取夏天无、怀牛膝、刘寄奴、桂枝、桑枝、骨碎补、 三七、炒杜仲、炒白术和炙甘草，分别洗净，粉碎，混合在一起，加水煎煮 3次，第一次加水量为该步获得的混合物质量的4～8倍，第二次加水量为该 步获得的混合物质量的2～5倍，第三次加水量为该步获得的混合物质量的1～3 倍，煎煮液合并，过滤，浓缩除去水，干燥，粉碎，获得粉末；
第二步，按质量称取余下原料药，分别洗净，粉碎，加乙醇提取3次， 第一次用相对于该步获得的混合物质量6～8倍量的醇浓度为80％乙醇回流提 取2小时，第二次用相对于该步获得的混合物质量4～6倍量的醇浓度为60％ 乙醇回流提取2小时，第三次用相对于该步获得的混合物质量4～6倍量的醇 浓度为60％乙醇回流提取2小时，提取液合并，加入第一步制备的粉末，将 合并的提取液加热至30℃，搅拌至溶解完全，提取液滤过，回收乙醇溶剂并 浓缩至60℃相对密度为1.10～1.15的浓缩液，静置，滤过，备用；
第三步，将浓缩液后的药液加入已处理好的D101大孔吸附树脂，大孔 吸附树脂是浓缩液体积的3～5倍，吸附6小时，吸附药液的大孔吸附树脂柱 用5倍柱床体积水洗后再用10倍柱床体积的50％乙醇洗脱，收集水洗脱液 和醇洗脱液，回收醇和水，浓缩至60℃相对密度为1.25～1.35的浓缩液；
第四步，取第三步获得的浓缩液100g，加入蔗糖50g、防腐剂2g，加水 定容至1000ml，灌封，辐照灭菌，包装成品，制成口服液，即得。
各原料药药理如下：
当归：拉丁名AngelicaeSinensisRadix，味甘、辛，性温，入肝、心、 脾经，具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效，主治心血不足之头晕目 眩，倦怠乏力，心悸气短，血海空虚，冲任虚寒或淤血阻滞之月经不调，经 痛，产或腹痛，及其他血瘀作痛及阴虚血少肠燥之便秘等证，其能改善子宫 的血液循环、减轻盆腔充血，缓解痛经。
赤芍：味苦、微苦，归肝经，具有泻肝火，清热凉血，祛瘀止痛的功效， 主治肝火旺盛之目赤肿痛，头晕目眩，胸胁疼痛，温热病热入血分之身热舌 绛，斑疹出血，以及血瘀经闭；火热炽盛迫血妄行之吐血尿血；妇女血热之 行经过多；血行阻滞所引起的各种疼痛；血热毒盛之疮疖痈肿等证。
熟地黄：味甘、苦，性寒，归心、肝、肾经，具有清热凉血、去瘀生新， 养阴生津的功效，主治热如营分之身热口渴等真阴被劫之证；或热病后期低 热不退；慢性疾病证属阴虚内热者；肺胃蕴热之口渴引饮，消渴心烦，胃阴 受伤之口渴少津；血热妄行之便血、崩漏下血；血热毒盛之发斑紫黑等证。
桃仁：味苦、甘，性平，归心、肝、大肠经，具有活血祛瘀，润肠通便， 止咳平喘的功效，主治经闭，痛经，癓瘕痞块，跌扑损伤，肠燥便秘等证。
红花：拉丁名CarthamiFlos，性温，味辛，入、心、肝经，具有活血通 经，祛瘀止痛的功效，用于闭经，痛经，恶露不行，症瘕痞块，跌扑损伤， 疮疡肿痛等证。
枫香脂：拉丁名ResinaLiquidambaris，味辛、微苦，性平，归肺、脾经， 具有活血止痛，解毒生肌，凉血止血的功效，主治跌打损伤，痈疽疼痛，吐 血，外伤出血等证。
夏天无：拉丁名CorydalisDecumbentisRhizoma，味苦、微辛，性温， 归肝经，具有活血通络，行气止痛的功效，主治中风偏瘫，跌扑损伤， 风湿性关节炎，坐骨神经痛等证。
土鳖虫：味性寒，味咸；有小毒，归肝经，具有破瘀血，续筋骨的功 效，用于筋骨折伤，瘀血经闭，症瘕痞块等证。
怀牛膝：味苦酸，性平，入心、肝、大肠三经，具有活血散瘀，祛湿 利尿，清热解毒的功效。主治淋病，尿血，妇女经闭，症瘕，风湿关节 痛，脚气，水肿，痢疾，疟疾，白喉，痈肿，跌打损伤等证。。
鸡血藤：拉丁名spatholobicaulis，味苦、甘，性温，归肝、肾经，具有 扩张血管，补血活血，调经，舒筋活络的功效，主治血虚有淤之月经不调， 四肢疼痛不仁，腰膝酸软、疼痛等证。
刘寄奴：味苦，性温，入、归心、脾经，具有破血通经，敛疮消肿的功 效，主治经闭症瘕，胸腹胀痛，产后血瘀，跌打损伤，金疮出血，痈毒焮肿 等证。
桂枝：拉丁名cinnamomiramulus，为樟科植物肉桂干燥嫩枝，味辛、甘， 性温，归心、肺、膀胱经，具有发汗解肌，温经通脉，助阳化气，散寒止痛 的作用，用于外感风寒表证，不论有汗、无汗均可应用，亦用于风湿痹痛、 胃寒腹痛、经闭、痛经，风湿痹痛，肩臂肢节冷痛等证，痰饮证和膀胱蓄水， 心脾阳虚，水湿内停，胸胁胀满，咳逆头晕等痰饮证。
桑枝：味微苦，性平，归肝经，具有祛风湿，利关节的功效，主治风湿 痹痛，肩臂，关节酸痛麻木等证。
骨碎补：味苦，性温，入肝、肾经，具有补肾壮骨，续伤止痛的作用， 用于肾虚腰膝酸痛，下肢痿软，肝肾阴虚，虚阳上亢而致的耳聋耳鸣，牙齿 松动疼痛或牙龈出血，脾肾两虚而致久泻久痢等证。
川续断：性微温，味苦、辛，归肝经、肾经，具有补肝肾，续筋骨，调 血脉的功效。主治腰背酸痛，足膝无力，胎漏，崩漏，带下，遗精，跌打损 伤，金疮，痔漏，痈疽疮肿等证。
三七：拉丁名notoginsengradixetrhizoma，为五加科植物三七干燥根和 根茎：性温，味甘、微苦，归肝、胃经，具有止血，散瘀，消肿，止痛的作 用，主治：治吐血，咳血，衄血，便血，血痢，崩漏，症瘕，产后血晕，恶 露不下，跌扑瘀血，外伤出血，痈肿疼痛等证。
炒杜仲：味甘、微辛，性温，入肝、肾经，具有降血压、补肝肾，强 筋骨，安胎气的作用，用于肝肾亏虚、证见眩晕、腰膝酸痛、筋骨痿弱； 肾气不固、尿频或尿有余沥、阴下湿痒、阳痿、孕妇体弱、胎动不安或 腰坠痛；慢性关节疾病、骨结核、痛经、功能失调性子宫出血、慢性盆 腔炎等证。
鳖甲：味咸、性寒，归肝、肾经，具有滋肾潜阳，软坚散结的功效，主 治骨蒸劳热、疟母、胁下坚硬、腰痛，经闭症瘕等证。
炒白术：拉丁名atractylodismacrocephalaerhizoma，苦、甘，性温， 入脾、胃经，具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎的功效。用于脾胃 气虚，运化无力，食少便溏，肢软神疲，脾虚不运，水湿内停所致小便 不利，水肿，胸胁支满，脾胃气虚，胎动不安等证，
三七：为五加科植物三七干燥根和根茎，拉丁名NotoginsengRadixet Rhizoma，性温，味甘、微苦，归肝、胃经，具有止血，散瘀，消肿，止痛的 功效，主治吐血，咳血，衄血，便血，血痢，崩漏，症瘕，产后血晕，恶露 不下，跌扑瘀血，外伤出血，痈肿疼痛等证
炙甘草：味甘，性平，归十二经，有清热解毒，调和药性，祛痰止咳的 作用，并能健脾和中，缓急止痛，主要用于脾胃虚弱之腹胀纳呆，乏力，能 缓解腹中拘挛性疼痛等证。
以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式，借此对本发明如何应用 技术手段来解决技术问题，并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实 施。
实施例1口服液1
称取夏天无10g、怀牛膝25g、刘寄奴15g、桂枝10g、桑枝10g、骨碎 补25g、三七15g、炒杜仲30g、炒白术30g和炙甘草15g，分别洗净，粉碎， 混合在一起，加水煎煮3次，第一次加水量为1.1kg，第二次加水量为700g， 第三次加水量为400g，煎煮液合并，过滤，浓缩除去水，干燥，粉碎，获得 粉末，称取当归15g、赤芍20g、熟地黄25g、川芎15g、桃仁15g、红花15g、 枫香脂15g、土鳖虫10g、鸡血藤25g、川续断15g、鳖甲10g，分别洗净， 粉碎，加乙醇提取3次，第一次1.3kg的醇浓度为80％乙醇回流提取2小时， 第二次用900g的醇浓度为60％乙醇回流提取2小时，第三次用900g的醇浓 度为60％乙醇回流提取2小时，提取液合并，加入前面制备的粉末，将合并 的提取液加热至30℃，搅拌至粉末溶解完全，提取液滤过，回收乙醇溶剂并 浓缩至60℃相对密度为1.10的浓缩液，静置，滤过，将浓缩液后的药液加入 已处理好的D101大孔吸附树脂，大孔吸附树脂是浓缩液体积的4倍，吸附6 小时，吸附药液的大孔吸附树脂柱用5倍柱床体积水洗后再用10倍柱床体积 的50％乙醇洗脱，收集水洗脱液和醇洗脱液，回收醇和水，浓缩至60℃相对 密度为1.30的浓缩液，取获得的浓缩液100g，加入蔗糖50g、防腐剂2g，加 水定容至1000ml，灌封，辐照灭菌，包装成品，制成口服液，即得。
实施例2口服液2
称取夏天无10g、怀牛膝25g、刘寄奴10g、桂枝10g、桑枝10g、骨碎 补20g、三七10g、炒杜仲25g、炒白术25g和炙甘草10g，分别洗净，粉碎， 混合在一起，加水煎煮3次，第一次加水量为1kg，第二次加水量为600g， 第三次加水量为400g，煎煮液合并，过滤，浓缩除去水，干燥，粉碎，获得 粉末，称取当归10g、赤芍15g、熟地黄20g、川芎10g、桃仁10g、红花10g、 枫香脂10g、土鳖虫10g、鸡血藤25g、川续断10g、鳖甲10g，分别洗净， 粉碎，加乙醇提取3次，第一次1.2kg的醇浓度为80％乙醇回流提取2小时， 第二次用900g的醇浓度为60％乙醇回流提取2小时，第三次用900g的醇浓 度为60％乙醇回流提取2小时，提取液合并，加入前面制备的粉末，将合并 的提取液加热至30℃，搅拌至粉末溶解完全，提取液滤过，回收乙醇溶剂并 浓缩至60℃相对密度为1.10的浓缩液，静置，滤过，将浓缩液后的药液加入 已处理好的D101大孔吸附树脂，大孔吸附树脂是浓缩液体积的4倍，吸附6 小时，吸附药液的大孔吸附树脂柱用5倍柱床体积水洗后再用10倍柱床体积 的50％乙醇洗脱，收集水洗脱液和醇洗脱液，回收醇和水，浓缩至60℃相对 密度为1.30的浓缩液，取获得的浓缩液100g，加入蔗糖50g、防腐剂2g，加 水定容至1000ml，灌封，辐照灭菌，包装成品，制成口服液，即得。
实施例3口服液3
称取夏天无15g、怀牛膝30g、刘寄奴15g、桂枝15g、桑枝15g、骨碎 补25g、三七15g、炒杜仲30g、炒白术30g和炙甘草15g，分别洗净，粉碎， 混合在一起，加水煎煮3次，第一次加水量为1.1kg，第二次加水量为700g， 第三次加水量为400g，煎煮液合并，过滤，浓缩除去水，干燥，粉碎，获得 粉末，称取当归15g、赤芍20g、熟地黄25g、川芎15g、桃仁15g、红花15g、 枫香脂15g、土鳖虫15g、鸡血藤30g、川续断15g、鳖甲15g，分别洗净， 粉碎，加乙醇提取3次，第一次1.3kg的醇浓度为80％乙醇回流提取2小时， 第二次用900g的醇浓度为60％乙醇回流提取2小时，第三次用900g的醇浓 度为60％乙醇回流提取2小时，提取液合并，加入前面制备的粉末，将合并 的提取液加热至30℃，搅拌至粉末溶解完全，提取液滤过，回收乙醇溶剂并 浓缩至60℃相对密度为1.10的浓缩液，静置，滤过，将浓缩液后的药液加入 已处理好的D101大孔吸附树脂，大孔吸附树脂是浓缩液体积的4倍，吸附6 小时，吸附药液的大孔吸附树脂柱用5倍柱床体积水洗后再用10倍柱床体积 的50％乙醇洗脱，收集水洗脱液和醇洗脱液，回收醇和水，浓缩至60℃相对 密度为1.30的浓缩液，取获得的浓缩液100g，加入蔗糖50g、防腐剂2g，加 水定容至1000ml，灌封，辐照灭菌，包装成品，制成口服液，即得。
实施例4药理学急毒性试验
本发明家兔长期毒性试验
一、实验动物
实验动物为20只新西兰大白兔，月龄9～12月，体重2.5～3.0kg，雌性。 山东中医药大学附属医院实验动物中心提供。
二、实验试剂
本发明实施例1制备的口服液，浓缩至含生药浓度为2g/ml，放置于4℃ 冰箱中保存，备用。
三、实验方法
1、分组
实验用的新西兰兔先进行编号1～20号，按随机数字表法，随机分配到A、 B两组，每组10只，其中A组灌胃给药生理盐水，B组灌胃给药本发明制 剂2g/ml。
2、给药方法
A、B两组分别灌胃相应试剂6ml/次，3次/日，灌胃时间间隔4小时。 连续给药7d，停药观察3d。
3、观察指标
3.1一般情况
新西兰兔的体重、皮毛、进食、饮水情况，行为学表现，如精神状态、 呻吟、鸣叫等。
3.2脏器及病理学检测
3.2.1理化检测
在给药前，连续给药结束时，观察期结束时分别收集家兔尿液、采血收 集血液，进行理化检测，分析相应指标。
3.2.2脏器观察
实验过程中，观察有无家兔死亡，如有死亡，立即解剖，观察各脏器， 并摘取各脏器进行病理学检查；如无死亡，待观察3d后，耳缘静脉注射空气 针处死，解剖探查各脏器，并计算脏器指数，并对主要脏器进行比例学观察。
4、结果
4.1一般情况
本发明制剂给药组家兔与空白对照组家兔进行比较分析，体重变化无统 计学差异，在进食、饮水量的比较中，无明显统计学差异，行为学表现中如 精神状态等，通过肉眼观察记录，无明显统计学差异。
4.2脏器及病理学检测
4.2.1理化检测
在给药前，连续给药结束时，观察期结束时分别收集家兔尿液、采血收 集血液，进行理化检测，分析相应指标，组内比较，给药前后及观察期结束， 无明显异常，统计学无明显差异；组间比较，本发明制剂各给药组与空白对 照组比较，无明显差异。
4.2.2脏器观察
实验过程中，无家兔死亡，因此按照实验要求，待观察3d后，耳缘静脉 注射空气针处死，解剖探查各脏器，并计算脏器指数，并对主要脏器进行比 例学观察。
各组家兔在打开胸腔、腹腔后，肉眼观察，脏器排列整齐、无粘连、无 积液、无出血等，摘取各脏器并称重，计算脏器指数，进行统计分析，给药 组与空白对照组进行比较，无明显统计学差异。
5、结论
本发明中药口服液制剂家兔给药量为18g/kg/d，对应60kg成人的生药给 药量为54g/kg/d，然而60kg成人日给药量为0.5g/kg，新西兰兔给药量分别 为人的108倍，通过急性毒理实验研究观察，本发明制剂无明显急性毒副作 用，停药观察3d，无迟发毒性反应，现代药理学认为，对于药物急性毒性实 验，最大耐受量相当于人临床日用剂量100倍以上而动物无死亡，无明显毒 性反应情况出现时，该药是安全的。本发明口服液给药剂量为人的临床用药 108倍，且动物无毒性反应，可以认定，本药品临床用药是安全的。
本发明家兔长期毒性试验
一、实验动物
实验动物为40只新西兰大白兔，月龄9～12月，体重2.5～3.0kg，雌性。 山东中医药大学附属医院实验动物中心提供。
二、实验试剂
本发明实施例1制备的口服液1：浓缩至含生药浓度分别为2g/ml，1g/ml， 0.5g/ml，放置于4℃冰箱中保存，备用。
三、实验方法
1、分组
实验用的新西兰兔先进行编号1～40号，按随机数字表法，随机分配到A、 B、C、D四组，每组10只，其中A组灌胃给药生理盐水，B组灌胃给药本 发明口服液制剂低剂量0.5g/ml、C组灌胃给药本发明口服液制剂中剂量 1g/ml、灌胃给药本发明口服液制剂高剂量2g/ml。
2、给药方法
A、B、C、D四组，灌胃相应试剂3ml/次，3次/日，灌胃时间间隔4小 时。连续给药28d，停药观察7d。
3、观察指标
3.1一般情况
新西兰兔的体重、皮毛、进食、饮水情况，行为学表现，如精神状态、 呻吟、鸣叫等。
3.2脏器及病理学检测
3.2.1理化检测
在给药前，连续给药结束时，观察期结束时分别收集家兔尿液、采血收 集血液，进行理化检测，分析相应指标。
3.2.2脏器观察
实验过程中，观察有无家兔死亡，如有死亡，立即解剖，观察各脏器， 并摘取各脏器进行病理学检查；如无死亡，待观察7d后，耳缘静脉注射空气 针处死，解剖探查各脏器，并计算脏器指数，并对主要脏器进行比例学观察。
4、结果
4.1一般情况
本发明制剂给药的三组家兔与空白对照组家兔进行比较分析，体重变化 无统计学差异，在进食、饮水量的比较中，无明显统计学差异，行为学表现 中如精神状态等，通过肉眼观察记录，无明显统计学差异。
4.2脏器及病理学检测
4.2.1理化检测
在给药前，连续给药结束时，观察期结束时分别收集家兔尿液、采血收 集血液，进行理化检测，分析相应指标，组内比较，给药前后及观察期结束， 无明显异常，统计学无明显差异；组间比较，本发明制剂各给药组与空白对 照组比较，无明显差异。
4.2.2脏器观察
实验过程中，无家兔死亡，因此按照实验要求，待观察7d后，耳缘静脉 注射空气针处死，解剖探查各脏器，并计算脏器指数，并对主要脏器进行比 例学观察。
各组家兔在打开胸腔、腹腔后，肉眼观察，脏器排列整齐、无粘连、无 积液、无出血等，摘取各脏器并称重，计算脏器指数，进行统计分析，各给 药组与空白对照组进行比较，无明显统计学差异。
5、结论
本发明制剂家兔给药量分别为9g/kg/d、4.5g/kg/d、2.25g/kg/d，对应60kg 成人的生药给药量为27g/kg/d、13.5g/kg/d、6.75g/kg/d，然而60kg成人日给 药量为0.5g/kg，新西兰兔给药量分别为人的54倍、27倍、13.5倍，通过长 期给药观察，本发明制剂无明显毒副作用，无蓄积毒性，因此，临床给人用 药可以认为是安全的。
实施例5临床研究
1、研究对象来源
全部病例均来自骨科2013年2月至2013年11月份的住院病人40例。
2、诊断标准
2.1西医学上对股骨干粉碎性骨折的诊断标准参照《骨与关节损伤》一书。 其中，Winquist和Hansen按粉碎的骨块多少分成五级：
Ⅰ级：粉碎骨折有小的蝶形骨块，占骨的宽度小于25％。
Ⅱ级：蝶形骨块较大，相当于50％或是小于骨的宽度；如骨折远离近侧或 远侧的干髓端的展开部位，主要的近侧和远侧骨折块之间有很好的接触，上 述两种类型在长度和旋转上是相对稳定的。
Ⅲ级：粉碎的骨折块有一个大于50％骨的宽度，近侧和远侧骨折块在骨 皮质的连续性上，仅保留有小的骨尖，此类型骨折常在长度和旋转上是不稳 定的。
Ⅳ级：节段性的粉碎骨折，在主要的近侧和远侧的骨折块间没有骨的接 触，长度和旋转上均不稳定。
Ⅴ级：中间节段骨折块呈粉碎性，并常是开放性骨折，很不稳定。
2.2中医诊断标准(参照2005年国家中医药管理局发布的《中医病症诊断 疗效标准》拟定)，中医学上对股骨干粉碎性骨折诊断参照《中医骨伤科学》 一书。
(1)有明显的外伤史，伤后局部肿胀、疼痛、压痛、功能丧失，出现短缩、 成角或旋转畸形，有异常活动，可扣及骨擦音。
(2)严重移位的股骨下1/3骨折，在胭窝部有巨大的血肿，小腿感觉和运 动障碍，足背、胚后动脉搏动减弱或消失，末梢血液循环障碍，应考虑有血 管、神经的损伤。
(3)损伤严重者，由于剧痛和出血，早期可合并创伤性休克。
(4)粉碎骨折或多发性骨折、严重挤压伤，还可并发脂肪检塞或挤压综合 征。
(5)X线片可显示骨折的部位、类型及移位情况。
3、纳入标准
(1)凡符合上述诊断标准，闭合性股骨千骨折按Winquist和Hansen分级 属III级、IV级和V级骨折，需行手术复位内固定并植骨术的患者
(2)愿意参与整个实验过程，并签署知情同意书的患者。
4、排除标准
(1)股骨干骨折按Winquist和Hansen分级属Ⅰ级、Ⅱ级骨折。
(2)开放性骨折的患者。
(3)骨折波及到踝关节、膝关节面的患者。
(4)年龄大于70岁或小于16岁的患者。
(5)合并有严重的心脑血管疾患、精神病，无法耐受手术治疗者。
(6)妊娠及哺乳期的患者。
(7)凝血功能异常的患者。
5、病例剔除和脱落标准
(1)未按规定治疗，无法判断疗效者。
(2)治疗过程中发生意外事件而不能坚持治疗者。
(3)治疗过程中不配合治疔者。
(4)资料不全影响疗效或安全性判断者。
6、病例分组
取样本40例，分A组(单纯植骨组，n＝20)和B组(植骨+服用本发明制 剂组，n＝20)。
所有患者按入院顺序编号1～40号，应用随机数字表法随机分配到A、B 两组中。
7、分组资料
A组20例患者中男14例，女6例，年龄17岁～68岁，平均年龄35.85 岁；按Winquist和Hansen分型，III型8例，IV型10例，V型2例。B组20 例患者中，男12例，女8例，年龄16岁～69岁，平均年龄36.26岁；按Winquist 和Hansen分型，III型9例，IV型9例，V型2例。以下是两组患者的性别 年龄分布、致伤因素及骨折类型情况：两组患者的性别经X2检验和年龄经t 检验后P>0.05，具有可比性。
8、治疗方法
8.1、签署知情同意书
对符合上述纳入标准患者，告知参与本实验目的、治疗方法及可能出现 的并发症，愿意参与此研究者，填写知情同意书后，列为实验对象。
8.2、术前准备
所有受试者术前经抽血检查(包括血尿粪三大常规、肝肾功、凝血因子、 术前免疫学及乙肝两对半等)，拍片，双下肢深静脉彩超，肺功能检查(年龄 大于60岁患者)，均未见手术禁忌症，签署手术志愿书及参与本实验知情同 意书。
8.3、异种脱蛋白骨
①生产公司：天津中津生物发展有限公司。②结构成分：由牛骨制成的 异种骨组织填充材料保留了一定的成骨诱导活性成分。③生产许可证号：津 (食)药监械生产证20130518号。④产品注册号：国食药监械(准)字2004第 3460617号。
8.4、手术方法
麻醉起效后，患者取仰卧位，常规行双下肢消毒，铺巾及贴皮肤保护膜； 以骨折线为中心，取大腿远近两端处切口分别长约6cm，纵形切开皮肤、皮 下组织及阔筋膜，显露股外侧肌，纵向純性分离股外侧肌，拉钩牵开上下软 组织，显露骨折处远近两端，可触及股骨骨折断端，较大的骨折块先用螺丝 钉固定，选择合适的钢板，钻孔、丝攻，先分别于骨折远、近端的钢板螺孔 上钻孔、丝攻，再依次旋入各5枚锁定螺钉。术中C臂机透视见钢板螺丝钉 固定在位可靠，再用大量生理盐水冲洗术区，取异种脱蛋白骨植入骨折断端； 用可吸收线缝合阔筋膜张肌、筋膜层、皮下；1号线缝合皮肤；切口内留置1 条输血器引流管，缝合固定后外敷无菌敷料。
8.5、本发明实施例1制备的口服液1
本发明实施例1制备的口服液1，置于4℃冰箱中保存备用。服用时先放 置于温水中复温至20～25℃。
8.6、术后处理
所有患者术后予心电监护、去枕平卧6小时。术后及时复查血常规、肝 肾功及电解质四项。常规使用抗生素预防感染，予止痛、能量支持，予一级 护理，抬高患肢，切口更换敷料等。所有受试者再进行以下处理：
A组：患者术后未给予服用本发明实施例1制备的口服液1；
B组：患者术后第一天开始服用本发明实施例1制备的制剂口服液1， 20ml/次，2次/日，早、晚饭后半小时服，连续服用6周。
8.7、疗效评价指标
8.7.1术后第1天、3天、5天、7天、9天及12天切口换药时观察创口 反应情况，标准如下：
(1)优：局部无渗液，创口周围无红肿。
(2)良：局部少许渗液，周围轻度红肿。
(3)差：局部渗液较多，周围明显红肿。
8.7.2术后第1天、3天、5天、7天、9天及12天切口换药时观察创口 愈合情况，创口愈合等级如下：
甲级：愈合优良，即没有不良反应的初期愈合。
乙级：愈合欠佳，即愈合有缺点，但切口未化脓。
两级：切口化脓，即因化脓需要将缝合的切口缝线拆除或切口引流。
8.7.3术后患肢疼痛视觉模拟评分(visualanaloguescale，VAS)
A组和B组患者对患肢疼痛情况进行评分的时间均为手术后的第4周、 8周、12周，由同一名主治医生进行检查和评价，并且该医生对本研究完全 不知情。患肢疼痛情况采用VAS评分标准。
按患肢的疼痛情况，进行评分(0分～10分)：
(1)0分：无痛。
(2)3分以下：有轻微的疼痛，患者能忍受。
(3)4分～6分：患者疼痛并影响睡眠，尚能忍受。
(4)7分～10分：患者有渐强烈的疼痛，疼痛难忍。
8.7.4影像学评分
通过拍摄患肢正侧位X线片来比较A、B两组患者骨折端的骨痂生长情 况及骨折线是否消失，随访时间均为手术后第4周、8周及12周，拍片均由 同一名放射科医生完成。评价骨折端骨痂生长情况釆用Lane-sandhuX线评分 标准。
8.8、统计学处理方法
所得的数据通过spss15.0软件进行分析处理，数据结果均用表示，率用百分比表示，计数资料采用X2检验，计量资料采用两独立样本t检验进行分析处理，P<0.05时差异有统计学意义，P>0.05时差异无统计学意义。
9、结果
本实验共有1例研究对象治疗期间因失访导致资料不全，属剔除脱落病 例，脱落病例实验过程中及时补充。
9.1、术后一般情况：
术后创口反应情况：A组优12例，良4例，差4例；B组优18例，良 2例，差0例。创口愈合情况：A组优11例，良5例，差4例；B组优17 例，良3例，差0例。术后患者均出现患肢疼痛，经口服塞来昔布止痛药或 肌肉注射帕瑞昔布注射液后症状缓解；术后2～3天内患肢较健侧肿胀 0.5cm～1.0cm，指导行患肢股四头肌等肌肉静力收缩及膝、踝及足址屈伸活动， 并抬高患肢等处理后肿胀消退，术后10～14天切口愈合良好后拆除缝线；无 1例患者出现切口红肿、化脓、肤温升高等感染征象；所有患者髋关节、膝 关节活动正常，无并发关节内肿胀积液。
表1创口反应情况比较
表2创口愈合情况比较
9.2、疗效评价：
9.2.1患肢疼痛评价
A组和B组患者于手术后第4周、8周、12周采用疼痛视觉模拟评分(VAS 评分)方法对患肢进行评分。两组患者术后第4周、8周、12周时，与A组 相比较，患肢的疼痛视觉模拟评分结果有统计学上差异(p<0.05)。
9.2.2影像学评价
两组患者于术后第4周、8周、12周时采用Lane-SandhuX线评分标准 对患肢骨痂生长情况进行评分。术后第4周、8周、12周X线片评分结果显 示，A、B两组患者的骨折端骨痂生长情况差异有统计学意义(P<0.05)，而B 组患者的评分在各个时间点均大于A组。
10、结论
10.1、术后观察创口反应情况及愈合情况显示：本发明制剂不会影响植 骨术后创口的正常愈合，也不会发生排斥反应。
10.2、术后疼痛视觉模拟评价结果表明：本发明制剂可以改善患者术后 疼痛症状。
10.3、术后影像学结果显示：本发明制剂能增加植骨区域的骨痂量，促 进异种脱蛋白骨修复骨缺损。
实施例6动物实验研究
一、实验动物
实验动物为60只新西兰大白兔，月龄9～12月，体重2.5～3.0kg，雌性。 由山东中医药大学附属医院实验动物中心提供。
二、主要实验用品
盐酸氯胺酮：福建古田药业有限公司，国药准字：H35020148
盐酸赛拉嗪注射液(陆眠宁II)：吉林省华牧动物保健品有限公司，兽 药字(2013)070011582
盐酸利多卡因注射液：山东华鲁制药有限公司，国药准字H3702214
本发明实施例1制备的口服液1：浓缩至含生药浓度为2mg/ml，放置于 4℃冰箱中保存，备用。
三、试验方法
1、异种脱蛋白骨(deproteinizedbone，DPB)的制备
按照文献报道的方法选用6月龄的小牛下肢长骨干骺端松质骨，剔除软 组织，切割成细小条状，采用20％双氧水在37℃水浴箱中孵育，脱蛋白72h， 每24h更换双氧水1次，完成脱蛋白后，再用乙醚循环脱脂48h，制成密集 微孔的小牛脱蛋白松质骨，环氧乙烷消毒后备用。
2、动物分组
实验用的新西兰兔先进行编号1～60号，按随机数字表法，随机分配到A、 B、C、D四组，A、B、C组每组15只，D组5只。
3、动物造模
实验动物术前禁食12h，将手术器械、无菌布单及异种脱蛋白骨等相关 实验用品打包好，送至本院供应室进行高压蒸汽消毒，备齐药品及其它用具。 称重后，取耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠溶液进行全身麻醉，剂量以体重大 小而定，1mL/kg。2～3inin麻醉起效后，俯卧位固定于手术台上，配合局部 肌肉注射2％利多卡因(1mL/kg)浸润麻醉，即可达到满意的麻醉效果。用 直尺测量新西兰兔桡骨长度或者测量桡骨周径，所测得桡骨全长的10％或者 周径的3～4倍，即为制作骨缺损所需的长度。接着用8％硫化钠与日用洗衣 粉按4：1配比成溶液，以大棉棒蘸取涂抹左尺桡骨，脱毛后以清水洗净。用 4层消毒纱布包裹兔左前肢末端毛未除净处，并贴上保护膜，2％碘酊、75％ 酒精消毒三遍，铺无菌布单，以左前肢前内侧为手术切口，长度约6cm，切 口贴无菌手术保护膜。切幵皮肤、皮下组织，将肌肉拉向两侧，暴露桡骨中 下段，将挡板放置于尺桡骨之间保护尺骨，直尺测量出桡骨中下段长度约 1.5cm(相同年龄和体重的兔子，其桡骨长度的10％)确定上下截骨点，用 弯刀环形切除上下两截骨点的骨膜，采用线锯锯除1.5cm长的格骨(包括骨 膜)，造成临界性骨缺损。
A、B两组于骨缺损处植入异种脱蛋白骨，C、D两组骨缺损处未作植骨 处理，四组动物左尺烧骨处均不做固定，依次缝合筋膜、皮肤，无菌敷料包 扎切口。
4、术后处理
手术后的新西兰兔于动物实验室分笼饲养，配合肌注青霉素钠注射液 160万单位，2次/日，连续3天，预防感染发生。术后第1天，常规使用5％ 碘伏溶液消毒切口，并及时更换切口敷料，1/日，至术后8～10天切口拆线。 手术后24小时，A、C组新西兰兔给予灌服本发明实施例1制备的口服液1， 3ml/次，1次/日，晚6：00～7：00，连续服用6周；B、D组术后未给予中药 干预。
四、观察指标
1、X线片检查
四组新西兰兔于术后第4周、8周、12周拍摄左尺烧骨正位X线片，投 照距离为100cm，曝光条件为：50KV，10.085，120mA。拍片后着重观察骨 移植区骨痂阴影，骨痂生长情况及植入材料与宿主骨融合程度等。按照 Lane-SandhuX线片评分方法(见表3)评价骨愈合修复骨缺损情况。
表3Lane-SandhuX线片评分法
2、大体标本观察
术后4、8、12周，A、B、C组分别处死6只新西兰兔，D组处死1只 新西兰兔，取左尺桡骨植骨区域标本作大体观察。
3、生物力学测试
术后4、8、12周，A、B两组分别处死6只新西兰兔，行生物力学测试。 取出左桡骨，剔除表面软组织后，对标本进行包埋固定。测试温度为25℃， 湿度75％。在美国BionixM，MTX858万能材料生物力学测量实验机上进行 生物力学测定。首先，标记好各组标本，将标本固定在测试仪的夹具上。先 进行3次预加载试验，以消除标本的松弛、蠕变等影响因素。①进行轴向抗 载荷试验：缩载荷最大值预设为350N，加载速度为1mm/min，从零开始加 载至350N止，仪器自动记录标本的刚度数值。②进行扭转试验：将标本的 两端固定模具内，烧骨近端加以载荷使之产生旋转的扭力，扭转载荷预设为 3N·rn，加载速率为1.5NWs，从零幵始加载至3N止，分级加载，仪器自动 记录测定的刚度数据。
4、骨密度测量
术后4、8、n周，A、B两组新西兰兔的烧骨标本做完生物力学测试后， 用骨剪取下植骨区域包括两断端部分自体骨，用生理盐水纱布包裹后，双层 塑料袋密封，放置于冰箱中备用。进行骨密度测定时，需先将标本复温。骨 密度测定仪型号是：美国Lunar公司生产的DPX-IQ型。采用手动分析模式 测定各组标本的骨密度值(BMD)。采用统计学软件对结果进行分析。每个 标本所选定的测量区域的位置、面积均相同。
5、组织学观察
术后4、8、12周，A、B两组新西兰兔的晓骨标本先予生物力学测试， 之后测量植骨区域的骨密度值，最后对植骨区域标本做HE染色及Masson 染色，观察骨痂、新骨及胶原纤维组织生长情况。
①切取烧骨骨缺损处的标本(包括缺损两侧正常骨端0.3cm)；
②10％中性甲酸固定24h，10％硝酸甲酸溶液中脱韩，每3天更换一次脱 韩液，直至大头针可刺入骨皮质后，停止脱年丐；
③取材，将标本制成约1XIx0.3cm大小；
④分别以75％、85％、95％酒精脱水60min两次，再用无水乙醇脱水3 次；
⑤用二甲苯透明3次，每次20min；
⑥用石錯浸泡组织3次，每次60inin，浸蜡时保持蜡温维持在56～58 ℃；
⑦用同等硬度的石蜡进行包埋；
⑧沿桡骨纵轴连续石錯切片，厚度约5μm；
⑨烤片，贴于载玻片上，用烤箱进行烤片30min，温度为60～62℃；
⑩行苏木精-伊红染色(HematoxylinandEosin，HE)及Masson染色， 切片经脱水、二甲苯透明后，以中性树胶进行封固，最后在光镜下观察。
五、统计学处理
将以上所获得的各组数据，采用SPSS16.0统计学软件进行处理。各组数据以(均数±标准差)表示，采用方差分析(ANOVA)，设定P<0.05时，差异有统计学意义。
六、实验结果
1、造模后一般情况观察
动物术后3天内切口均呈轻度肿胀，2～3天后，新西兰兔左前肢即可正 常站立行走。至术后6～7天切口周围肿胀基本消失，无明显排斥反应。术后 7～10天拆除缝线，切口呈1/甲愈合。实验过程中1只新西兰兔切口发生严重 感染、化脓，分泌物呈淡黄色，经换药、扩创、引流及抗炎等处理后切口愈 合。有2只新西兰兔头颈部、腹部出现斑片状突起，局部皮肤发红，界限清 楚，涂抹复方酮康唑乳膏后，症状消失。另有1只新西兰兔出现严重腹腹泻 终死亡。死亡的动物予排除并及时补充动物的数量。
2、X线片表现
术后4周、8周、12周拍摄四组新西兰兔的左尺桡骨正位X线片，观察 骨折愈合的影像学变化。X线片检查结果肉眼所见：术后各个时间点，A组 骨折线均较B组模糊，周围骨痂阴影A组大于B组，术后12周两组的X线 片中仍可见部分脱蛋白骨残留。C、D两组仍可见骨缺损处空缺，两断端蒌 缩光滑。
统计结果显示(见表4)：C、D两组术后各个时间点X线片评分均为 0分。术后4周、8周、12周，A组与B组X线评分相比较，差异有统计学 意义(P<0.05)。A、B两组分别与C、D两组比较有明显差异(P<0.05)。 表明造模后均予植入异种脱蛋白骨，灌服本发明口服液组在骨形成、骨缺损 连接及骨塑形方面均优于没有灌服本发明口服液组。
表4lane-SandhuX线评分结果
组别 术后4周 术后8周 术后12周 A 2.50±1.134 5.25±1.157 10.50±1.201* B 1.75±0.711 4.50±0.804 6.75±0.863 C 0 0 0 D 0 0 0
*与B组比较，P<0.05
3、生物力学测试
轴向压缩刚度是指标本在轴向压缩载荷作用下抵抗轴向变形的能力大 小。本实验指的是标本轴向压缩1mm时，需压缩载荷的大小。根据X线片 所见，C、D两组术后各个时间点左晓骨骨缺损处仍空缺，远近两断端未见 纤维连接或骨性连接，故术后4、8、12周C、D两组标本未进行生物力学测 试。术后4、8、12周对A、B两组新西兰兔左晓骨的标本进行抗轴向压缩和 抗扭转刚度实验。测试结果见表5和表6。
3.1、抗轴向压缩刚度试验：
①组内比较：A、B两组数据进行组内比较，结果显示有统计学上的差 异(P<0.05)。
②组间比较：术后4、8、12周，A组与B组间比较存在明显差异(P<0.05)。
以上分析可见：抗轴向压缩刚度数值比较结果显示：A组>B组。在骨愈 合过程中A组标本的抗轴向压缩强度是逐渐增强的；而B组标本的抗轴向压 缩强度在8周前是降低的，但8周后则升高。
表5抗轴向压縮试验结果(Nm/du)
组别 术后4周 术后8周 术后12周 A 1.311±0.048 1.445±0.020* 2.048±0.050* B 0.999±0.057 0.855±0.044 1.003±0.075
*与B组比较，P<0.05
3.2、抗扭转刚度试验
①组内比较：A、B两组数据进行组内比较，结果显示差异有统计学意 义(P<0.05)。
②组间比较：术后4、8、12周，A组与B组组间比较差异有统计学意 义(P<0.05)。
以上分析可见：抗扭转刚度数值比较结果显示：A组>B组。在骨愈合过 程中A组标本的抗扭转强度是逐渐增强的；而B组标本的抗扭转刚度在8 周前是降低的，但8周后则升高。
表6抗扭转刚度试验结果(Nm/du)
组别 术后4周 术后8周 术后12周 A 0.224±0.038 0.918±0.075* 1.949±0.081* B 0.219±0.047 0.535±0.050 1.120±0.067
*与B组比较，P<0.05
4、骨密度测试
术后4、8、12周，测量A、B两组新西兰兔的植骨区域的骨密度，结果 及变化趋势如下：
4.1、组内比较：A组术后4周、12周之间比较差异有统计学意义(P<0.05)， B组相邻时间点间比较无明显差异(P>0.05)。
4.2、组间比较：A组与B组在相应时间点两两比较差异有统计学意义 (P<0.05)。术后C、D两组骨缺损处空缺，故未进行骨密度测量。
结果显示：B组术后4周、8周骨密度呈轻度降低趋势，而术后12周骨 密度则又重新升高；A组术后各时间点骨密度呈增尚趋势，但是术后8周增 幅小于术后12周，A组在术后4、8、12周的骨密度值均高于B组。表明了 植入异种脱蛋白骨后4周、8周内会发生骨密度轻度下降，而术后12周骨密 度则又增高。在植骨后给予灌服本发明中药制剂，在术后8周内可以使植入 骨密度保持在一个比较稳定的水平。
5、组织学观察
术后4、8、12周，A、B两组标本的植骨区域给予脱钙、固定等相关处 理后，行HE染色及Masson染色观察新骨形成及胶原纤维组织形成情况。
1、HE染色术后4周，A组异种脱蛋白骨与自体骨界面空隙小，界限稍 模糊，并且相互交错；B组自体骨与异种脱蛋白骨界面空隙大，界限清楚， 相互交错较少。术后8周，A组植入材料边缘模糊不清，与自体骨相互融合， 周围骨细胞成熟；B组植入材料-自体骨融合情况较A组差，界限渐模糊。术 后12周，A组骨缺损区域可见新生骨和软骨形成，骨小梁排列均匀；B组植 入材料与异种脱蛋白骨模糊不清，新生骨较少，骨小梁排列欠规则。
2、Masson染色术后4周A组新生骨量少，脱蛋白松质骨残留，孔隙内 充满纤维组织，B组未见新生骨形成，脱蛋白骨残留；术后8周，A组可见 少量类骨质位于小梁骨尖端，原脱蛋白骨胶原染色均勾，B组可见少量新骨 形成，原脱蛋白骨胶原染色不均；术后12周，A组骨块内染色较均勾，呈红 绿相间，红色骨组织染色为主，B组可见少量类骨质，胶原排列不规则。
七、结论
总之，本实验研究无论从影像学检查、生物力学测试、骨密度测量，还 是从组织学观察，结果均证实了本发明制剂具有促进异种脱蛋白骨修复骨缺 损的作用以及增强植骨区域的生物力学性能。当然，本实验只是从宏观上观 察其对异种脱蛋白骨修复骨缺损的疗效，有待于进一步从分子生物学水平甚 至是从基因水平研究本发明制剂对骨缺损修复作用的机理。但是，本实验结 果可以指导临床使用本发明制剂来促进骨折愈合。
所有上述的首要实施这一知识产权，并没有设定限制其他形式的实施这 种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息，上述内容修改， 以实现类似的执行情况。但是，所有修改或改造基于本发明新产品属于保留 的权利。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式 的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更 或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依 据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型， 仍属于本发明技术方案的保护范围。