技术领域
本发明涉及一种中药复方，具体涉及一种具有降血脂作用的中药组合物及其制备方法与应用。
背景技术
生活水平的大幅提高导致人们饮食习惯发生较大变化。同样，在血脂方面表现为：胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)等指标增高现象普遍，其中，高胆固醇血症的危害主要引起大血管的粥样斑块，进一步可以引起血管狭窄、冠状动脉阻、急性心肌梗死、脑梗死、肾动脉硬化等疾病。甘油三酯(TG)也是诱发动脉粥样硬化和冠心病的危险因素，可诱发严重的急性胰腺炎，还可引发高血压、诱发胆结石、胰腺炎、脂肪肝、老年痴呆等疾病。
体内胆固醇(CHO)必须和脂蛋白(可分为HDL和LDL)结合才能运送到机体各部位。LDL是一种运载胆固醇进入外周组织细胞的脂蛋白颗粒，能将胆固醇从肝脏运送到全身组织，HDL可以摄取血管壁内膜底层沉浸下来的LDL，将其送回肝脏代谢。在高脂血症发病过程中，LDL水平显著增高，尤其是氧化修饰的LDL(OX-LDL)过量时，携带的胆固醇便积存在动脉壁上，久了容易引起动脉硬化，是评价高脂血症的重要指标。
HDL主要是由肝脏合成，由载脂蛋白、磷脂、胆固醇和少量脂肪酸组成。HDL颗粒小，可以自由进出动脉管壁，并将其运送到肝脏，转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出。动脉造影证明HDL含量与动脉管腔狭窄程度呈显著的负相关，是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子。俗称“血管清道夫”。
心血管疾病已成为危害人类健康的主要疾病之一，每年因心血管疾病导致死亡的病例呈上升趋势，其中动脉硬化是导致心脑血管疾病，如脑动脉硬化、脑梗塞、血管性痴呆或中风等疾病的主要因素。高血脂是导致动脉硬化的重要原因。目前针对降血脂和防治动脉硬化以化学药品为主，这些药物在临床上取得了较好的疗效，可减轻病人痛苦，但是多数药物只能短暂改善动脉缺血症状，病情容易复发，且长期服用，副作用大，且不能从根本上改善动脉硬化导致的一系列症状。
中医药在治疗心脑血管疾病方面具有独特的优势，不仅能有效降低血脂，改善动脉硬化症状，恢复血管弹性，且维持时间长，不良反应小，对病人脏器损害小。但是目前的中药复方大多药味多，用量大，用药还不够严谨科学。因此，很有必要在现有技术的基础之上，研究开发一种疗效可靠，用药严谨，药味精简，用药量少，不良反应低，能有效降低血脂，恢复血管弹性的中药复方组合物。
发明内容
发明目的：本发明的目的是解决现有技术的不足，提供一种配比科学合理，用药严谨，药味精简，用药量少，不良反应低，能有效降低血脂，恢复血管弹性，防治动脉硬化的中药复方组合物。本发明另一个目的是提供该中药复方组合物的制备方法和其应用。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采取的技术方案为：
一种具有降血脂作用的中药组合物，它由大黄，黄芪和甘草制成。
作为最佳的优选方案，所述的具有降血脂作用的中药组合物，大黄，黄芪和甘草的重量比为6：5：3。
一种具有降血脂作用的药物，将中药组合物的提取物和药学上可接受的载体制备成口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂、粉针剂、滴丸、软胶囊或注射液剂型的药物。
将本发明提供的中药组合物的各原料的提取物制成口服液时,将各原料的提取物加蒸馏水溶解，过滤，调节pH值,制成口服液。
将本发明提供的中药组合物的各原料的提取物制成片剂时，把各原料和乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，整粒，然后压片制成片剂。
本发明提供的中药组合物的提取物制成胶囊剂时把各原料的提取物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
本发明提供的中药组合物的各原料的提取物制成颗粒剂时，把各原料的提取物和稀释剂乳糖或玉米淀粉、混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
本发明提供的中药组合物的各原料的提取物制成粉针剂时，把各原料的提取物冷冻干燥，杀菌，制成粉针剂。
本发明提供的中药组合物的各原料的提取物制成注射液时，取各原料的提取物加入生理盐水溶解然后加入活性碳，搅拌均匀，80℃加热30分钟，过滤，调节pH值，用垂熔玻璃漏斗或其它滤器过滤至澄明，灌装，在100至115℃灭菌30分钟制成注射液。
本发明提供的具有降血脂作用的中药组合物，依据中医降血脂理论，通过选择能显著降低高血脂大鼠血清血脂水平的大黄，根据中药配伍减毒增效原则，以健脾益气、活血化瘀法治疗高血脂的中医理论为指导，采用补中益气的黄芪与大黄配伍，并辅以能健脾和中、清火解毒的甘草，一方面制大黄苦寒攻下之性，助其泻火解毒之功，另一方面增黄芪补中益气之力，调和诸药，共奏健脾益气，活血化瘀，清热通便之效的三味中药制成，整方用药精简。
为了更好的发挥疗效，本发明通过大量实验筛选大黄，黄芪和甘草的最佳用量配比。
用量配比筛选试验：
1.1实验动物与饲料
小鼠，昆明种，96只，雄性，清洁级，体重18～22g，南京中医药大学实验动物中心提供，许可证：SCXK(沪)2007-0005。
高脂饲料配方：78.8％基础饲料、1％胆固醇、10％蛋黄粉、10％猪油、0.2％胆盐。
1.2药物及试剂
药材：黄芪，购自于安徽协和成药业饮片有限公司，批号：14100701(山西)；熟大黄，购自于安徽大别山中药饮片有限公司，批号：140402(青海)；甘草，购自于北京本草方源药业有限公司，批号：20141118(甘肃)。
阳性对照药：血脂康胶囊，北京北大维信生物科技有限公司生产(批号：20140805)。
低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，威特曼生物科技(南京)有限公司，批号：ZDM14316；高密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒，威特曼生物科技(南京)有限公司，批号：ZGM15009；总胆固醇检测试剂盒，威特曼生物科技(南京)有限公司，批号：ZGM15103；甘油三酯检测试剂盒，威特曼生物科技(南京)有限公司，批号：ZGM15105；
1.3仪器
TD5001C型电子天平(天津天门衡基仪器有限公司)、FA2004型电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)、98-I-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)、HH-4型数显电子恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)、RE-2000A型旋转蒸发器(南京科尔仪器设备有限公司)、LDZ5-2型低速自动平衡离心机(北京医用离心机厂)。
1.4方法与结果
1.4.1药物制备
根据中国中医药数据库，确定大黄的三个剂量为6g/60kg·d、9g/60kg·d、12g/60kg·d，黄芪的三个剂量为10g/60kg·d、20g/60kg·d、30g/60kg·d，甘草三个剂量为3g/60kg·d、6g/60kg·d、9g/60kg·d。根据人与小鼠剂量换算关系(1:12)，故高血脂模型药效学实验中大黄的三个剂量为12mg·10g-1·d-1，18mg·10g-1·d-1，24mg·10g-1·d-1、黄芪的三个剂量为20mg·10g-1·d-1，40mg·10g-1·d-1，60mg·10g-1·d-1，甘草的三个剂量为6mg·10g-1·d-1、12mg·10g-1·d-1、18mg·10g-1·d-1。阳性对照药血脂康胶囊剂，剂量采用1.2g·60kg-1·d-1，故实验小鼠应用剂量为2.4mg·10g-1·d-1。
设计表1-1、表2-2，进行正交设计优化，依据表1-2，将三种不同比例的药物加8倍量水，浸泡30分钟后，煎煮至沸腾，保持微沸20分钟，过滤，保留滤液，滤渣再加8倍量水，再次煎煮至沸腾，保持微沸20分钟，过滤，合并滤液，减压浓缩至所需量。
表1-1 正交设计水平因素安排表
表1-2 正交试验安排L9(34)
1.4.2高脂小鼠模型建立及处理
1.4.2.1模型制备及组别设计：
造模，采用高脂饲料喂养建立高血脂小鼠模型。取雄性小鼠96只，体重23±3g，基础饲料适应性喂养1周后，按等重法，平均分为12组：正常对照组、高脂模型组、1-9号不同配比中药组合物组、阳性对照组(8只/组)。正常对照组小鼠基础饲料喂养，其余11组均饲喂高脂饲料，每组正常给水。
1.4.2.2给药方案
正常对照组组及模型组小鼠灌胃蒸馏水，给药组9组均按正交设计表2给予不同配方中药组合物的水煎液，阳性对照组灌胃血脂康的水溶液，连续灌胃4周。灌胃期间自由饮水和进食，每周称量记录小鼠体重1次。小鼠灌胃量0.1ml/10g为给药量。
1.4.2.3指标检测
第28天灌胃结束后，12h内禁食不禁水，称重，眼眶取血，3500r/min离心15min分离血清，取上清液，检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平。
1.4.2.4统计处理
使用SPSS 15.0统计软件，计量数据以表示，采用方差分析进行组间比较，P<0.05差异具有统计学意义。见表2。
表2 各组对小鼠血脂水平的影响(n＝3，)
注：##P<0.01：compared with normal group；**P<0.01,*P<0.05：compared with model group,HDL：
高密度脂蛋白，LDL：低密度脂蛋白
1.4.3实验结果
通过高血脂症小鼠模型不同用量配比的中药组合物的水煎液药效学实验，检验其水煎液对胆固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、高密度蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)4项指标的作用，分析表2，9组不同用量配比的中药组合物对TG的影响无统计学意义，与模型组比较，依据HDL、LDL指标，4、5、6三组中药复方组合物有显著性差异(P＜0.01)，依据CHO指标，2、3、4、6组有极显著差异(P＜0.05)，1、7、8、9三组对CHO、HDL-C、LDL-C影响差异无统计学意义。
在本实验研究中，通过比较，可以看出HDL与LDL是主要影响降血脂药效的主要因素。本研究采用的高血脂模型制备方法，通过指标比较可判断出通过造模均可显著增加小鼠血清CHO水平，伴随着LDL水平显著增高，同时，HDL水平也有增高趋势，但对TG水平影响较小，与正常小鼠比较，无显著差异。在给予不同配方的双黄胶囊后，以第2，3，4，6组小鼠血清CHO水平降低，此外，第2，6组还能降低血清LDL水平，虽然4，5组小鼠血清中HDL水平显著增高，但同时血清LDL水平也显著增加。与模型组相比，4，5组的HDL、LDL上升值过多，依据HDL颗粒越小，LDL颗粒越多越有利降脂，效果越明显，但LDL不宜过量增高导致动脉粥样硬化。故最终优选第6组为最佳的中药组合物配方，即大黄：黄芪：甘草的重量配比为6:5:3。
以上9个不同配比的中药组合物中有效成分含量分析
2.1仪器
Shimadzu LC-20AD高效液相色谱系统(包括在线脱气机，自动进样器SIL-20A，紫外-可见光检测器SPD-20A和柱温箱CTO-20A，岛津LC-Labsolusion工作站)等仪器(日本岛津公司)、FA1104N型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)、TGL-16G型高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。
2.2试剂
试剂：芦荟大黄素标准品(中国药品生物制品检定所，批号：MUST-13030701)、大黄酸标准品(中国药品生物制品检定所，批号：MUST-13022715)、大黄素标准品(中国药品生物制品检定所，批号：MUST-13031210)、大黄酚标准品(中国药品生物制品检定所，批号：MUST-14031711)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品(中国药品生物制品鉴定所，批号：G-003-13-419)、甘草酸铵标准品(中国药品生物制品检定所，批号：G-003-130405)、甘草苷标准品(中国药品生物制品检定所，批号：G-009-130424)；乙腈、甲醇为色谱纯，0.1％甲酸为分析纯，二次蒸馏水。
2.3方法与结果
2.3.1色谱条件
MERCK-C18(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱。梯度洗脱程序：0～8min乙腈体积5％～20％，8～25min乙腈体积20％～25％，25～40min乙腈体积25％～30％，40～45min乙腈体积30％～70％，45～55min乙腈体积70％～85％，55～60min乙腈体积85％；流速1.0mL·min-1；柱温35℃，检测波长254nm，进样量10μL。
2.3.2溶液制备
2.3.2.1标准品溶液制备
分别精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品6.98mg、芦荟大黄素标准品7.02mg、大黄酚标准品5.96mg、大黄素标准品6.97mg、大黄酸标准品7.01mg、甘草酸铵标准品7.06mg、甘草苷标准品7.07mg，用色谱纯甲醇溶解，定容于10ml的容量瓶中，制成7份各单一成分标准品溶液。精密量取各标准品溶液各1ml置于同一个10ml容量瓶中，加入色谱级甲醇稀释置刻度得混合标准液A，进样量10μL。在上述色谱条件下进样，见图1标准品混合液的高效液相色谱图。图中峰1：毛蕊异黄酮葡萄糖苷，峰2：甘草苷，峰3：甘草酸铵，峰4：大黄酚，峰5：芦荟大黄素，峰6：大黄酸，峰7：大黄素。
2.3.2.2供试品溶液制备
分别精密量取9个组中药组合物的水煎液10ml，加入同体积乙醇，震荡摇匀，静置，4500r/min离心，取上清液，即得到9份所需供试品溶液。
2.3.2.3样品有效含量测定
取各组样品，按照供试品溶液制备的方法分别制成供试品溶液，按照上述色谱条件下，进样。(进样前需过0.45μm微孔滤膜)。
2.3.3结果
(1)测定峰面积，根据外标法及稀释倍数计算各组有效成分含量，列出表3-1。
表3-1 9组不同配比中药组合物有效成分实际浓度(mg/ml)
(2)根据2010版药典规定大黄、黄芪、甘草的有效成分含量规定及本试验中各组各味中药的理论剂量与给药量计算得出各有效成分的理论浓度值。作表3-2。
表3-2 9组不同配比中药组合物有效成分理论浓度(mg/ml)
注：按干燥品计算，大黄含芦荟大黄素(C15H10O5)、大黄酸(C15H8Q6)、大黄素(C15H10O5)、大黄酚(C15H10O4)和大黄素甲醚(C16H18O5)的总量不得少于1.5％；黄芪含毛蕊异黄酮葡萄糖总量不得少于0.02％；甘草中甘草苷不得少于0.5％，甘草酸不得少于2.0％。
根据高效液相法检测法及外标法，得出各组各有效成分的浓度比较图，根据毛蕊异黄酮葡萄糖苷浓度及总蒽醌浓度比较，最高三组为3、6、8，且6＞3＞8；根据甘草苷浓度则为6＞3＞9；根据甘草酸铵则为4＞3＞6。综合比较，6组为有效成分含量最多的中药组合物组。进一步表明，本发明提供的中药组合物中大黄：黄芪：甘草的重量配比6:5:3为最优配比。
本发明所述的具有降血脂作用的药物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)取大黄，黄芪和甘草，加入药材重量8～16倍量的水煎煮或回流提取2～3次，每次1～2小时，合并提取液，浓缩得浸膏；
(2)取步骤(1)得到的浸膏与药学上可接受的载体制备成口服液、颗粒剂、胶囊剂、片剂、粉针剂、滴丸、软胶囊或注射液剂型的药物。
本发明所述的具有降血脂作用的中药组合物在制备降血脂药物中的应用。
本发明所述的具有降血脂作用的中药组合物在制备治疗动脉硬化药物中的应用。
本发明所述的具有降血脂作用的中药组合物在制备防治血栓疾病药物中的应用。
本发明所述的具有降血脂作用的中药组合物在制备防治脂肪肝药物中的应用。
有益效果：本发明根据辨证论治的中医药理论，通过大量实验筛选出具有明显降低胆固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、高密度蛋白胆固醇(HDL-C)功效的中药组合物，并通过大量实验筛选三味药的最佳配比，本发明提供的中药组合物用药严谨，科学合理，可用于防治动脉硬化，血栓性疾病和脂肪肝，并且本发明中药组合物有效成分明确，副作用小，用药安全可靠。
附图说明
图1为标准品混合液的高效液相色谱图
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
实施例1
1.一种具有降血脂作用的中药组合物，它由大黄24g，黄芪20g和甘草12g制成。
2.本发明所述的具有降血脂作用的药物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)取大黄24g，黄芪20g和甘草12g，加入药材重量16倍量的水煎煮提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得浸膏；
(2)取步骤(1)得到的浸膏与载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。(批号：001)
实施例2
1.一种具有降血脂作用的中药组合物，它由大黄12g，黄芪40g和甘草18g制成。
2.本发明所述的具有降血脂作用的药物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)取大黄12g，黄芪40g和甘草18g，加入药材重量12倍量的水回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得浸膏；
(2)取步骤(1)得到的浸膏，加蒸馏水溶解，过滤，调节pH值,制成口服液。(批号：002)
实施例3
1.一种具有降血脂作用的中药组合物，它由大黄18g，黄芪6g和甘草6g制成。
2.本发明所述的具有降血脂作用的药物的制备方法，其包括以下步骤：
(1)取大黄18g，黄芪60g和甘草6g，加入药材重量10倍量的水回流提取3次，每次2小时，合并提取液，浓缩得浸膏；
(2)取步骤(1)得到的浸膏，加入稀释剂环糊精或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。(批号：003)
实施例4
取实施例1步骤(1)得到的浸膏和步骤(2)得到的干浸膏冷冻干燥，杀菌，制成粉针剂。(批号：004)
实施例5 临床研究
选取60例高血脂患者，服用本发明实施例1制备得到的中药复方组合物一个月后，60例患者的胆固醇(CHO)、甘油三脂(TG)、高密度蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低，有效率为99％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。