技术领域
本发明属于中药领域，尤其是一种具有抗癌功效的组合物及其制备方法。
背景技术
与传统的肿瘤治疗相比，中医肿瘤治疗的最大特点在于它不但具有良好的特异性，而且克服了药物达到肿瘤组织的不足和肿瘤耐药性等问题。而我国传统的中医药因其抗肿瘤效应、放化疗增敏以及减轻放化疗毒副方面独具效果而越来越受到人们的重视。
中药具有“天然组合化学库”之称，作用机制可能是“多靶作用”，即多种成分以低于它们某一单体治疗剂量进入人体后，有选择地反复作用于某种疾病的多个直接靶点和间接靶点，从而达到治疗疾病的目的。中医药与手术、放疗、化疗等局部杀灭方法最大的不同是强调整体调节，充分调动机体的防御及免疫监视机制，发挥多层次、多环节、多靶点的综合调节作用，从整体调节机体脏腑、经络、阴阳、气血功能，做到“正气内守”，通过自身调节，“泻其有余，补其不足”，达到“阴阳平复”。中药的这种调节作用有可能抑制肿瘤及肿瘤术后亢进的促血管生成因子，恢复其与抑制因子之间的平衡，抑制肿瘤血管生成，从而有助于减少肿瘤组织局部血供，通过缺血、缺氧等饥饿方式限制肿瘤的增殖并阻断其入血扩散的途径，消除术后残留癌细胞生存及转移的环境，消灭残存的癌细胞，防止肿瘤的复发和转移。此外，中药的不良反应相对小，无骨髓毒性，在用药上可保持一定的连续性，在抑制肿瘤血管生成，防止和控制肿瘤转移方面有较大优势。
现在中医大都忽略中药汤药的煎煮。中药煎煮也是衔接中药材和治疗患者疾病的重要中间环节，如清代徐灵胎曰：“煎药之法，最宜深讲，药之效不效，全在乎此。”中药汤药煎煮不规范的现象在临床实践中普遍存在，而且不同的中药药方所需要的煎煮条件不同，主要影响条件有容器，溶媒，时间，火候等。中药煎煮质量不仅影响疗效，更影响传统中医药学优势的发挥。
中药煎煮是需要丰富经验才能很好地掌握，因此本发明避免了将中药做成传统的组合物由病人自己煎服，而是做成了组合物，方便病人服用，保证了疗效。
本发明提供的组合物遵循群臣佐使的配伍原则，地瓜生津止渴，排脓补中为君；金果榄清热解毒，利咽止痛，油茶叶收敛止血解毒，黍米益气补中，除烦解渴共为臣；牛扁祛风止痛，丹皮清热凉血，柳絮解毒消痈，桃核仁活血化瘀共为佐；羌活，桔梗两药协同，祛一身之风寒湿邪，宣肺通气，增强止痛，共为使药。本方多选性味温和兼有和理作用的药物。
发明内容
本发明是一种具有抗癌功效的组合物及其制备方法。本发明通过原料的炮制工艺的改进，使药的比例的调整以及制备方法的改进，提高了组合物的抗癌功效。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
一种具有抗癌功效的组合物，其特征在于，由下述以重量份计的原料制备而成：地瓜块20-30份、金果榄5-10份、油茶叶5-10份、黍米5-10份、牛扁3-6份、丹皮6-9份、柳絮3-10份、桃核仁7-15份、使药3-20份；
所述的使药为羌活和桔梗中的任意一种或两种任意比例组合物。
优选地，所述的使药为羌活：桔梗质量比为1:(2-3)的混合物。
优选地，所述的地瓜块为生地瓜块，熟地瓜块和发酵地瓜块中的任意一种。
优选地，所述的发酵地瓜块的炮制方法如下：
(1)将地瓜去皮，切成体积为1-10cm3的小块；
(2)灭菌，加入嗜酸乳杆菌溶液；
(3)在35-40℃下发酵20-30小时，从溶液中取出小块，烘干，得到发酵地瓜块。
制备上述的具有抗癌功效的组合物的方法，具体步骤如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、金果榄、使药加入容器中，再加入上述原料干重5-10倍的溶剂，常压下加热至80-90℃煎15-25分钟后，用100-300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过100-300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过100-300目筛，得到黍米粉；
(4)将地瓜块研磨成细粉，过100-300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉混合均匀后浸没在滤液中10-24小时后冷冻干燥，即得具有抗癌功效的组合物。
优选地，所述的溶剂为水、0.5-3％的乙酸水溶液、0.5-7％的乙酸乙酯水溶液中的任意一种。
具体地，本发明使用的地瓜为旋花科番薯属，拉丁学名为Ipomoea batatas，品种为小白花2191，产自河北张家口；
黍米为禾本科植物Panicum miliaceum L.植物的种子，产自黑龙江五常；
油茶叶为山茶科植物Camellia oleifera Abel.植物的叶片，产自广东惠东；
柳絮为杨柳植物Salix babylonica L.的带毛种子，产自上海嘉定；
牛扁为毛茛科植物Aconitum barbatum Pers.var.puberulum Ledeb.的根，金果榄为防己科植物Tinospora capillipes Gagnep.的干燥块根、丹皮为毛茛科植物Paeonia suffruticosa Andr.干燥根皮，羌活为伞形科植物Notopterygium incisum Ting ex H.T.Chang的干燥根，桔梗为桔梗科植物桔梗Platycodon grandiflorus(Jacq.)A.Dc.的干燥根，桃核仁为蔷薇科植物Prunus persica(L.)Batsch的干燥成熟种子，上述组分均购自安徽亳州。
本发明所用的生地瓜制备方法如下：将新鲜地瓜去皮，切成体积为1-10cm3的小块，得到生地瓜块。
本发明所用的熟地瓜块块制备方法如下：
(1)将新鲜地瓜去皮，切成体积为1-10cm3的小块；
(2)用90-100℃的水煮15-20分钟，从溶液中取出小块，干燥，得到熟地瓜块。
本发明所用的嗜酸乳杆菌为Lactobacillus acidophilus，购自北京中科质检生物技术有限公司，产品编号为CICC-6074，使用前存储在-35℃的环境中；
本发明所述嗜酸乳杆菌溶液的制备方法如下：
将新鲜的嗜酸乳杆菌培养物加入到20mL pH＝7.0的无菌磷酸盐缓冲液中即得，使嗜酸乳杆菌溶液得活菌数为(2.0-3.0)×108cfu/mL。
本发明使用的无菌磷酸缓冲液(pH＝7.0)购自美国英杰生命技术有限公司；
本发明使用的乙酸乙酯，CAS号：141-78-6；乙酸，CAS号：64-19-7；均购自萨恩化学技术(上海)有限公司。
本发明中所述的灭菌使用的设备为德国Systec公司生产的HX-650柜式灭菌器。
本发明中用于研磨的设备为曲阜文轩机械设备有限公司生产的WX-M高效粮食研磨机。
本发明中用于混合的设备为双龙集团有限公司生产的DSH-4型锥形混合机。
本发明提供的具有抗癌功效的组合物具有较好的抗癌活性，含有丰富的具有抗癌作用的天然产物，对肿瘤细胞株具有抑制作用。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，以下实施例仅仅是用来解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种具有抗癌功效的组合物，由下列原料制备而成：生地瓜块30g、金果榄6g、油茶叶8g、黍米10g、牛扁3g、丹皮7g、柳絮6g、桃核仁12g、羌活7g；
生地瓜块的制备方法如下：
将新鲜地瓜去皮，切成体积为8cm3的立方体小块，得到生地瓜块。
具有抗癌功效的组合物制备方法如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、金果榄、羌活混合得到混合料，将混合料加入容器中，再加入混合料重量10倍的水，常压下加热至90℃煎20分钟后，用300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过300目筛，得到黍米粉；
(4)将生地瓜块研磨成细粉，过300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉使用混合机混合10分钟后浸没在滤液中24小时后进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得具有抗癌功效的组合物。
实施例2
一种具有抗癌功效的组合物，由下列原料制备而成：生地瓜块30g、金果榄6g、油茶叶8g、黍米10g、牛扁3g、丹皮7g、柳絮6g、桃核仁12g、羌活7g；
生地瓜块的制备方法如下：
将新鲜地瓜去皮，切成体积为8cm3的立方体小块，得到生地瓜块。
具有抗癌功效的组合物制备方法如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、金果榄、羌活混合得到混合料，将混合料加入容器中，再加入混合料重量10倍的2％乙酸水溶液，常压下加热至90℃煎20分钟后，用300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过300目筛，得到黍米粉；
(4)将生地瓜块研磨成细粉，过300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉使用混合机混合10分钟后浸没在滤液中24小时后进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得具有抗癌功效的组合物。
实施例3
一种具有抗癌功效的组合物，由下列原料制备而成：生地瓜块30g、金果榄6g、油茶叶8g、黍米10g、牛扁3g、丹皮7g、柳絮6g、桃核仁12g、羌活7g；
生地瓜块的制备方法如下：
将新鲜地瓜去皮，切成体积为8cm3的立方体小块，得到生地瓜块。
具有抗癌功效的组合物制备方法如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、金果榄、羌活混合得到混合料，将混合料加入容器中，再加入混合料重量10倍的5％乙酸乙酯水溶液，常压下加热至90℃煎20分钟后，用300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过300目筛，得到黍米粉；
(4)将生地瓜块研磨成细粉，过300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉使用混合机混合10分钟后浸没在滤液中24小时后进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得具有抗癌功效的组合物。
实施例4
一种具有抗癌功效的组合物，由下列原料制备而成：生地瓜块30g、金果榄6g、油茶叶8g、黍米10g、牛扁3g、丹皮7g、柳絮6g、桃核仁12g、金果榄、桔梗7g；
生地瓜的制备方法如下：
将新鲜地瓜去皮，切成体积为8cm3的立方体小块，得到生地瓜块。
具有抗癌功效的组合物制备方法如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、桔梗混合得到混合料，将混合料加入容器中，再加入混合料重量10倍的5％乙酸乙酯水溶液，常压下加热至90℃煎20分钟后，用300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过300目筛，得到黍米粉；
(4)将生地瓜块研磨成细粉，过300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉使用混合机混合10分钟后浸没在滤液中24小时后进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得具有抗癌功效的组合物。
实施例5
一种具有抗癌功效的组合物，由下列原料制备而成：生地瓜块30g、金果榄6g、油茶叶8g、黍米10g、牛扁3g、丹皮7g、柳絮6g、桃核仁12g、羌活2g、桔梗5g；
生地瓜的制备方法如下：
将新鲜地瓜去皮，切成体积为8cm3的立方体小块，得到生地瓜块。
具有抗癌功效的组合物制备方法如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、羌活、金果榄、桔梗混合得到混合料，将混合料加入容器中，再加入混合料重量10倍的5％乙酸乙酯水溶液，常压下加热至90℃煎20分钟后，用300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过300目筛，得到黍米粉；
(4)将生地瓜块研磨成细粉，过300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉使用混合机混合10分钟后浸没在滤液中24小时后进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得具有抗癌功效的组合物。
实施例6
一种具有抗癌功效的组合物，由下列原料制备而成：熟地瓜块30g、金果榄6g、油茶叶8g、黍米10g、牛扁3g、丹皮7g、柳絮6g、金果榄、桃核仁12g、羌活2g、桔梗5g；
熟地瓜块的制备方法如下：
(1)将新鲜地瓜去皮，切成体积为8cm3的立方体小块；
(2)将切块地瓜用95℃的水煮20分钟，从水中取出小块，在80℃下干燥5小时，得到熟地瓜块。
具有抗癌功效的组合物制备方法如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、羌活、桔梗混合得到混合料，将混合料加入容器中，再加入混合料重量10倍的5％乙酸乙酯水溶液，常压下加热至90℃煎20分钟后，用300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过300目筛，得到黍米粉；
(4)将熟地瓜块研磨成细粉，过300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉使用混合机混合10分钟后浸没在滤液中24小时后进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得具有抗癌功效的组合物。
实施例7
一种具有抗癌功效的组合物，由下列原料制备而成：发酵地瓜块30g、金果榄6g、油茶叶8g、黍米10g、牛扁3g、丹皮7g、柳絮6g、桃核仁12g、金果榄、羌活2g、桔梗5g；
发酵地瓜块的炮制方法如下：
(1)将新鲜地瓜去皮，切成体积为8cm3的立方体小块；
(2)将切块地瓜用灭菌柜在120℃/3bar下灭菌25分钟，加入嗜酸乳杆菌溶液，所述切块地瓜与嗜酸乳杆菌溶液的质量比为1:10；
所述嗜酸乳杆菌溶液的制备方法如下：
将新鲜的20mL嗜酸乳杆菌培养物加入到20mL pH＝7.0的无菌磷酸盐缓冲液中即得，嗜酸乳杆菌溶液的活菌数为2.83×108cfu/mL。
(3)在37℃下发酵24小时，从溶液中取出小块，80℃下干燥5小时，得到发酵地瓜块。
具有抗癌功效的组合物制备方法如下：
(1)将油茶叶、牛扁、丹皮、柳絮、羌活、金果榄、桔梗混合得到混合料，将混合料加入容器中，再加入混合料重量10倍的5％乙酸乙酯水溶液，常压下加热至90℃煎20分钟后，用300目纱布过滤，得到滤液；
(2)将核桃仁研磨成细粉，过300目筛，得到核桃仁粉；
(3)将黍米研磨成细粉，过300目筛，得到黍米粉；
(4)将发酵地瓜块研磨成细粉，过300目筛，得到地瓜粉；
(5)将核桃仁粉、黍米粉、地瓜粉使用混合机混合10分钟后浸没在滤液中24小时后进行真空冷冻干燥，所述真空冷冻干燥的条件为设定预冻温度为-25℃，当样品温度降到设定温度后保持2h，设定升华温度为10℃，解析温度为36℃，绝对压强为25pa，干燥时间为24h，即得具有抗癌功效的组合物。
测试例1
活性物质含量检测
现代医学证明了一些酚类，脂肪酸和植物甾醇具有抗氧化性，具有积极的抗癌作用。因此测定本发明提供的抗癌组合物中上述物质的含量可以有效评定其抗癌功效。
测试方法：取10g根据实施例1-6制备的组合物，加入20mL 60℃的甲醇，浸取三次，每次20分钟，合并三次浸取液，用真空离心蒸发器(30℃，10mbar)除去甲醇，得到干燥的提取物，向干燥的提取物加入20mL丙酮，除去沉淀，收集上清液，用真空离心蒸发器(30℃，10mbar)除去丙酮，得到可用于测试的亲水提取物。
取10g根据实施例1-6制备的组合物，加入20mL 60℃的正己烷和乙酸乙酯混合物(50:50，v/v)，浸取三次，每次20分钟，合并三次浸取液，用真空离心蒸发器(30℃，10mbar)除去溶剂，得到干燥的提取物，向干燥的提取物加入20mL丙酮，除去沉淀，收集上清液，用真空离心蒸发器(30℃，10mbar)除去丙酮，得到可用于测试的亲脂提取物。
亲水成分通过HPLC检测，HPLC为岛津牌Nexera UHPLC超高效液相色谱，色谱柱为a121反向色谱柱(C18,250×4.6mm，5μm)，流动相A为1％的乙酸水溶液，流动相B为乙腈，流速0.8mL/min，检测波长320nm，梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：0-100min，溶液B 0％-100％，100-110min，溶液B 100％-0％。先检测标准样品，绘制标准曲线，再检测待测样品，计算浓度。
亲脂成分通过GC检测，GC为安捷伦7890B气相色谱仪，色谱柱为Supelco SP2380色谱柱(30m×0.25mm)，向1mL亲脂提取物中加入含有C17:0内标(100μg/mL)的正己烷，旋干正己烷，加入2mL BCl3,60℃水浴30min，加入1mL正己烷和1mL水猝灭，分离上层正己烷，用无水硫酸钠固体干燥5min，转移至GC瓶中，测样。初始柱温80℃，程序升温15℃/min，最高280℃，最高温度保留30min。氮气为载气，流速恒定为1.5mL/min。
植物甾醇通过GC检测，GC为安捷伦7890B气相色谱仪，色谱柱为DB-5色谱柱(60m×0.25mm)，初始柱温为200℃，程序升温10℃/min，最高温度为280℃，最高温度保留62min。氮气为载气，流速恒定为1.5mL/min。
具体结果如表1所示。
表1有效成分含量(mg/100g)
通过上表可知，含有发酵地瓜的组合物(实施例7)中各类有效成分均为最高，当组合物中成分为熟地瓜(实施例6)时，大部分有效成分含量均较生地瓜(实施例1-5)时高，但是脂类物质含量明显比含有生地瓜的组合物的含量低。当组分均含有生地瓜时，使用乙酸乙酯水溶液作为溶剂(实施例3-5)会有更多的有效成分，而使用乙酸水溶液作为溶剂(实施例2)的时候有效成分和用水做溶剂(实施例1)差不多。使药的差别在有效成分地检测中并没有显著区别。
测试例2
肿瘤细胞抑制率
采用SRB法测定实施例1-6对MCF-7和PC-12细胞株的抑制率，实验环境温度为37℃，实验时间为24小时。具体实验步骤参考《SRB法检测大鼠原发肝癌细胞、骨髓间充质干细胞和HepG2细胞的抗肿瘤药物敏感差异》(《第四军医大学学报》,2007,28(12):1069-1070.)一文。
具体结果如表2所示。
表2对肿瘤细胞株的抑制作用
由上表可知本发明提供的组合物至少对MCF-7和PC-12两类细胞株有抑制作用。其中溶剂使用乙酸乙酯水溶液(实施例3)较使用水(实施例1)有更好的抑制效果，但是溶剂使用乙酸水溶液(实施例2)稍好于水做溶剂(实施例1)，远不如乙酸乙酯做溶剂(实施例3)，当使药单独使用桔梗(实施例4)或羌活(实施例3)时并没有明显差别，但是出人意料的时当两者复配使用时(实施例5)有着更好的抑制率，其中的机理仍有待进一步探究，配方中使用熟地瓜(实施例6)的效果好于生地瓜，而使用发酵地瓜(实施例7)的效果又优于熟地瓜，对肿瘤细胞株的抑制率最高可达到87.0％。