技术领域
本发明涉及一种枣树叶有效成份的提取方法，具体涉及一种枣树叶水溶性有效成分的提取方法以及提取所得的枣树叶提取物，属于植物有效成分提取技术领域。
背景技术
枣树叶为鼠李科植物枣的叶片，本属约有100种，主要分布在亚洲和美洲的热带和亚热带，我国有18种。本草纲目中记载，大枣叶具有药用价值，可以用于治疗小儿发热、疮疖、烂脚、烫火伤等症。现代研究表明，枣树叶中含有生物碱、黄酮、皂苷、三萜烯酸、维生素、蛋白质、矿物质元素等成分，是一种很好的保健品，也是一种很好的药用原料。
目前，对枣树叶的研究大多是将其制成保健茶，因为枣树叶中含有多种对人体有益的成分，因此枣树叶茶具有很好的镇定、养心安神、抗惊厥、补充维生素、降脂、降血压、补肝胆、益肝气、除虚烦等作用，还可加快烧伤引起的皮肤损害的恢复，提高人体免疫力。但是，对于枣树叶中有效成分的提取的报道较少。
发明内容
本发明提供了一种枣树叶有效成分的提取方法，该方法简便易行，原料低廉，来源广泛，成本低，能够充分提取枣树叶中有效成分。
本发明还提供了采用上述方法得到的枣树叶有效成分——枣树叶水提物。
本发明技术方案如下：
一种枣树叶有效成分的提取方法，该方法包括以下步骤：
（1）将新鲜的枣树叶用水洗净，然后向枣树叶中均匀撒入氯化钠，对枣树叶进行捻揉，使氯化钠渗入枣树叶中；
（2）捻揉后将枣树叶在40-50℃下微波烘干，至水分低于10%；
（3）烘干后，将枣树叶先在-15℃冷冻5-10min，再在-5℃冷冻20-30min；
（4）将冷冻的枣树叶放入带有冷凝器的加热容器中，压实，加水至水位没过枣树叶；
（5）先在50-60℃保温0.5-1h，然后加热煮沸，收集馏出成分，当水位降至接近枣树叶位置时再加水至初始位置，继续收集馏出成分，水位降至接近枣树叶位置时停止，所得馏出成分即为枣树叶水提物。
上述方法中，所用枣树叶可以是各个品种的枣树的叶子，例如酸枣、冬枣等。
上述方法中，所述捻揉是指用外力作用至枣树叶，将枣树叶进行揉、搓，使枣树叶与氯化钠充分接触，通过捻揉可以使氯化钠更好的渗入枣树叶内。揉捻可以手工完成，也可以采用捻揉机械设备完成。
上述步骤（1）中，水洗后无需晾干即可加入氯化钠进行揉捻。
上述步骤（1）中，枣树叶与氯化钠的质量比为1:0.5-0.8。
上述步骤（1）中，加入氯化钠后，对枣树叶捻揉10-15min即可。
水洗后在枣树叶表面会残留有部分水分，另外，捻揉完后枣树叶表面也会有汁冒出。这部分水的存在会影响后期的冷冻效果，因此在捻揉后先进行微波烘干，再进行冷冻。微波功率可以为5-15kw，烘干至水分低于10%再进行冷冻处理较好。
上述步骤（4）中，在提取时可以加入少量柠檬酸钠，柠檬酸钠的用量为枣树叶质量的2-5%。柠檬酸钠与氯化钠的组合可以提高有效成分的含量。
上述步骤（4）中，加水至没过枣树叶10-20cm为宜。
上述步骤（5）中，水位降至没过枣树叶2-4cm时再加入水。
上述步骤（5）中，整个过程在氮气气氛下进行。
按照上述枣树叶有效成分的提取方法所得的枣树叶水提物也在本发明保护范围之内。
上述所得枣树叶水提物为水状液体，该枣树叶水提物经验证具有较好的镇静、安神、抗炎的作用。
本发明以枣树叶为原料，采用简单的水煮蒸馏的方法提取枣树叶中的有效成分，为枣树叶的药用有效成份的研究提供了一种简单易行、清洁高效的制备方法。在提取时，本发明采用加盐揉捻-微波烘干-低温冷冻的前处理手段，既保证了有效成分的损失，又提高了有效成分的含量，使所得产品效果更好。经试验验证，本发明所得枣树叶水提物具有很好的镇静、安神、抗炎效果，具有很好的应用前景。
附图说明
图1枣树叶提取设备的示意图。
图中，1、物料托架，2、反应釜，3、冷凝器，4、冷凝盘管，5、导管。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进行详细的说明。
本发明提取有效成分时，可以选用普通的可加热的反应容器，也可以使用下述本发明自行设置的提取装置，该提取装置如图1所示，包括反应釜（即加热容器）2和冷凝器3，反应釜内底部设有物料托架1，冷凝器内设有螺旋状的冷凝盘管4，反应釜上连接一导管5，导管一端与反应釜顶部连通，另一端与冷凝器顶部连通，导管与冷凝器相连的一端向下倾斜，且导管向下倾斜0-30°。
上述装置中，反应釜的供热设施可以是炭火、木材等一次能源加热，也可以采用导热油、电、蒸汽加热，农、工皆宜，使用便捷，可以简便的实现有效成分的提取和分离。
实施例1
本发明提取步骤如下：
1、收集新鲜的枣树叶，用水清洗干净，沥干水后按照枣树叶：氯化钠1:0.6的质量比将氯化钠均匀的撒在枣树叶上，撒完后对枣树叶进行捻揉10-15min，使氯化钠渗入枣树叶中；
2、捻揉后，将枣树叶进行微波烘干，微波功率为10kw，烘干温度为45℃，烘干至枣树叶水分低于10%为止；
3、烘干后，将枣树叶先在-15℃冷冻8min，再在-5℃冷冻25min；
4、冷冻后的枣树叶直接放入带有冷凝器的加热容器（反应釜）内，压实，使枣树叶紧密的位于加热容器中，压好枣树叶后，加水至没过枣树叶10-20cm，一般15cm左右；
5、加水后，对加热容器通氮气，将容器内的空气全部置换掉，并在氮气的气氛下开始对容器进行加热，先升温至55℃，保温反应0.5-1h，然后继续升温至沸腾，维持沸腾状态，开始收集馏出成分；待加热容器内水位降至没过枣树叶2-4cm时向加热容器内补充水至原始位置（没过枣树叶10-20cm），继续加热蒸煮并收集馏出成分，水位再次降至接近枣树叶位置时停止，把两次收集的馏出成分合并，即为枣树叶水提物。
实施例2
本发明提取步骤如下：
1、收集新鲜的枣树叶，用水清洗干净，沥干水后按照枣树叶：氯化钠1:0.5的质量比将氯化钠均匀的撒在枣树叶上，撒完后对枣树叶进行捻揉10-15min，使氯化钠渗入枣树叶中；
2、捻揉后，将枣树叶进行微波烘干，微波功率为15kw，烘干温度为50℃，烘干至枣树叶水分低于10%为止；
3、烘干后，将枣树叶先在-15℃冷冻10min，再在-5℃冷冻20min；
4、冷冻后的枣树叶直接放入带有冷凝器的加热容器（反应釜）内，压实，使枣树叶紧密的位于加热容器中，压好枣树叶后，加水至没过枣树叶10-20cm，一般15cm左右；
5、加水后，对加热容器通氮气，将容器内的空气全部置换掉，并在氮气的气氛下开始对容器进行加热，先升温至50℃，保温反应0.5-1h，然后继续升温至沸腾，维持沸腾状态，开始收集馏出成分；待加热容器内水位降至没过枣树叶2-4cm时向加热容器内补充水至原始位置（没过枣树叶10-20cm），继续加热蒸煮并收集馏出成分，水位再次降至接近枣树叶位置时停止，把两次收集的馏出成分合并，即为枣树叶水提物。
实施例3
本发明提取步骤如下：
1、收集新鲜的枣树叶，用水清洗干净，沥干水后按照枣树叶：氯化钠1:0.8的质量比将氯化钠均匀的撒在枣树叶上，撒完后对枣树叶进行捻揉10-15min，使氯化钠渗入枣树叶中；
2、捻揉后，将枣树叶进行微波烘干，微波功率为5kw，烘干温度为40℃，烘干至枣树叶水分低于10%为止；
3、烘干后，将枣树叶先在-15℃冷冻5min，再在-5℃冷冻30min；
4、冷冻后的枣树叶直接放入带有冷凝器的加热容器（反应釜）内，压实，使枣树叶紧密的位于加热容器中，压好枣树叶后，加水至没过枣树叶10-20cm，一般15cm左右；
5、加水后，对加热容器通氮气，将容器内的空气全部置换掉，并在氮气的气氛下开始对容器进行加热，先升温至60℃，保温反应0.5-1h，然后继续升温至沸腾，维持沸腾状态，开始收集馏出成分；待加热容器内水位降至没过枣树叶2-4cm时向加热容器内补充水至原始位置（没过枣树叶10-20cm），继续加热蒸煮并收集馏出成分，水位再次降至接近枣树叶位置时停止，把两次收集的馏出成分合并，即为枣树叶水提物。
实施例4
本发明提取步骤如下：
1、收集新鲜的枣树叶，用水清洗干净，沥干水后按照枣树叶：氯化钠1:0.6的质量比将氯化钠均匀的撒在枣树叶上，撒完后对枣树叶进行捻揉10-15min，使氯化钠渗入枣树叶中；
2、捻揉后，将枣树叶进行微波烘干，微波功率为10kw，烘干温度为45℃，烘干至枣树叶水分低于10%为止；
3、烘干后，将枣树叶先在-15℃冷冻8min，再在-5℃冷冻25min；
4、冷冻后的枣树叶直接放入带有冷凝器的加热容器（反应釜）内，压实，使枣树叶紧密的位于加热容器中，压好枣树叶后，取枣树叶质量2-5%的柠檬酸钠，用水溶解后加入加热容器内，然后补充水至没过枣树叶10-20cm，一般15cm左右；
5、加水后，对加热容器通氮气，将容器内的空气全部置换掉，并在氮气的气氛下开始对容器进行加热，先升温至55℃，保温反应0.5-1h，然后继续升温至沸腾，维持沸腾状态，开始收集馏出成分；待加热容器内水位降至没过枣树叶2-4cm时向加热容器内补充水至原始位置（没过枣树叶10-20cm），继续加热蒸煮并收集馏出成分，水位再次降至接近枣树叶位置时停止，把两次收集的馏出成分合并，即为枣树叶水提物。
对比例
本发明提取步骤如下：
1、收集新鲜的枣树叶，用水清洗干净，进行微波烘干，微波功率为10kw，烘干温度为45℃，烘干至枣树叶水分低于10%为止；
2、烘干后，将枣树叶先在-15℃冷冻8min，再在-5℃冷冻25min；
3、冷冻后的枣树叶直接放入带有冷凝器的加热容器（反应釜）内，压实，使枣树叶紧密的位于加热容器中，压好枣树叶后，加水至没过枣树叶10-20cm，一般15cm左右；
4、加水后，对加热容器通氮气，将容器内的空气全部置换掉，并在氮气的气氛下开始对容器进行加热，先升温至55℃，保温反应0.5-1h，然后继续升温至沸腾，维持沸腾状态，开始收集馏出成分；待加热容器内水位降至没过枣树叶2-4cm时向加热容器内补充水至原始位置（没过枣树叶10-20cm），继续加热蒸煮并收集馏出成分，水位再次降至接近枣树叶位置时停止，把两次收集的馏出成分合并，即为枣树叶水提物。
一、对枣树叶水提物抗炎作用的研究
采用二甲苯所致的小鼠耳肿胀炎症模型对枣树叶水提物的抗炎效果进行研究，二甲苯具有较强的致炎作用，涂抹在小鼠的耳廓可引起耳部皮肤毛细血管扩张，血管通透性增高，继而引起耳肿胀，通过观察枣树叶水提物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的程度的影响，可以反映枣树叶水提物的抗炎效果。
、实验方法：
选取48只昆明种小鼠，随机分为4组，其中一组为模型对照组，其他三组为实验组。实验开始时，实验组小鼠分别给予实施例1、4和对比例的枣树叶水提物，给药量为1g/kg，给药途径为灌胃，1次/天，连续7天。同时，模型对照组给予等体积蒸馏水作为对照。于第7天药后1h用100％的二甲苯涂于小鼠右耳0.02mL/只致炎(正反面分别为0.01mL)，左耳不做任何处理。致炎1h后处死小鼠，用直径8mm的打孔器将小鼠左右耳取下相同部位和相同面积的耳片并称重，计算肿胀度和抑制率。
肿胀度（mg）=右耳片重量-左耳片重量
抑制率（%）=（模型对照组平均肿胀度-实验组平均肿胀度）/模型对照组平均肿胀度×100%
2、实验结果
各组小鼠耳肿胀情况见下表1，从表1可以看出，各组小鼠给予二甲苯后右耳片与左耳片比较，重量明显增加，证明耳肿胀炎症模型造模成功。与模型对照组相比，各实验组小鼠右耳片重量及耳肿胀度均有减轻，表现出很好的肿胀抑制率，且有显著差异，说明本发明枣树叶水提物有较好的抗炎效果，且综合来看实施例4的枣树叶水提物的效果最好。
二、对枣树叶水提物镇静、安眠作用的研究
1、镇静作用实验方法
1.1选择体重18-22g的昆明种小鼠40只，雌雄均匀，随机平均分为4组，一组为对照组，三组为实验组。实验组小鼠分别用实施例1、4和对比例的枣树叶水提物进行灌胃，给药量为1g/kg，每天一次，连续5天，同时对照组灌胃等体积的生理盐水作为对照。于末次给药30min后，用小鼠活动记录仪测定各组小鼠10min内的活动次数，计算活动抑制率。
抑制率（%）=（对照组自由活动次数-实验组自由活动次数）/对照组自由活动次数。
1.2各组小鼠活动次数见下表2，从表中可以看出，本发明枣树叶水提物有明显的抑制小鼠自发活动的作用。
2、安眠作用实验方法
2.1选择体重18-22g的昆明种小鼠40只，雌雄均匀，随机平均分为4组，一组为对照组，三组为实验组。实验组小鼠分别用实施例1、4和对比例的枣树叶水提物进行灌胃，给药量为1g/kg，每天一次，连续5天，同时对照组灌胃等体积的生理盐水作为对照。于末次给药30min后，各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠50mg/kg，以翻正消失至恢复为睡眠持续时间。
2.2各组小鼠睡眠时间见下表3，从表中可以可出，本发明枣树叶水提物能延长戊巴比妥钠的睡眠时间。