人参皂苷RG2在制备预防和治疗心律失常产品中的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810970997.1 (22)申请日 2018.08.24 (71)申请人 东北师范大学 地址 130024 吉林省长春市南关区人民大 街5268号 (72)发明人 周义发 崔思思 勾东霞 张梦珊 原野 胡晨星 王浩 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 代理人 关畅 白艳 (51)Int.Cl. A61K 31/704(2006.01) A61P 9/06(2006.01) A61P 3/06(2006.01) A23L 33/105(201。

2、6.01) (54)发明名称 人参皂苷Rg2在制备预防和治疗心律失常产 品中的应用 (57)摘要 本发明公开了人参皂苷Rg2在制备预防和治 疗心律失常产品中的应用。 本发明提供了人参皂 苷Rg2在如下1)-6)中任一中的应用： 1)制备预防 或治疗动物或人心律失常产品； 2)制备降低动物 或人恶性心律失常的发生率产品； 3)制备调节动 物或人脂质代谢的产品； 4)预防或治疗动物或人 心律失常； 5)降低动物或人恶性心律失常的发生 率； 6)调节动物或人脂质代谢。 本发明研究人参 皂苷Rg2在动物(小鼠和大鼠)模型中的急性和亚 慢性口服毒性和潜在的抗心律失常作用， 研究结 果表明， 人参皂苷Rg。

3、2具有较低的口服毒性， 并可 能用于预防和治疗心律失常。 权利要求书1页 说明书12页 附图4页 CN 108938655 A 2018.12.07 CN 108938655 A 1.人参皂苷Rg2在如下1)-6)中任一中的应用： 1)制备预防或治疗动物或人心律失常产品； 2)制备降低动物或人恶性心律失常的发生率产品； 3)制备调节动物或人脂质代谢的产品； 4)预防或治疗动物或人心律失常； 5)降低动物或人恶性心律失常的发生率； 6)调节动物或人脂质代谢。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述调节动物脂质代谢体现在降低总胆固 醇量。 3.根据权利要求1或2所述的应用， 其特征在于。

4、： 所述动物为啮齿类、 兔、 犬、 猪、 猫或非 人灵长类哺乳动物。 4.根据权利要求1-3中任一所述的应用， 其特征在于： 所述人参皂苷Rg2为单一构型人 参皂苷C-20(S)Rg2、 单一构型人参皂苷C-20(R)Rg2或混合构型C-20(SR)Rg2。 5.根据权利要求1-4中任一所述的应用， 其特征在于： ； 所述产品为药物、 食品、 保健品或试剂盒。 6.一种产品， 其活性成分为人参皂苷Rg2； 所述产品具有如下1)-4)中任一种功能： 1)预防或治疗动物或人心律失常； 2)降低动物或人恶性心律失常的发生率； 3)调节动物或人脂质代谢。 7.一种抗或抑制人或动物心律失常的方法， 将人。

5、参皂苷Rg2或权利要求6所述的产品给 药人或动物， 实现抗或抑制人或动物心律失常。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于： 所述给药途径为口服、 静脉注射、 肌肉注 射、 皮下、 舌下、 粘膜、 经皮等途径。 9.根据权利要求6所述的产品或权利要求7或8所述的方法， 其特征在于： 所述动物为啮 齿类、 兔、 犬、 猪、 猫或非人灵长类哺乳动物。 10.根据权利要求6所述的产品或权利要求权利要求7或8所述的方法， 其特征在于： 所 述人参皂苷Rg2为单一构型人参皂苷C-20(S)Rg2、 单一构型人参皂苷C-20(R)Rg2或混合构 型C-20(SR)Rg2。 权 利 要 求 书 1/1 。

6、页 2 CN 108938655 A 2 人参皂苷Rg2在制备预防和治疗心律失常产品中的应用 技术领域 0001 本发明属于医药技术领域， 尤其涉及人参皂苷Rg2在制备预防和治疗心律失常产 品中的应用。 背景技术 0002 心血管疾病严重威胁人类健康， 是造成发达国家和发展中国家人口死亡的主要原 因。 心律失常是心血管疾病的最常见表现， 其发生率和死亡率均位居心血管疾病前列。 心律 失常是由于心脏活动的起源和(或)传导障碍导致心脏搏动的频率和(或)节律异常。 恶性心 律失常如室性心动过速、 心室颤动等， 可致猝死， 亦可持续累积心脏而致衰竭。 目前， 临床上 使用的抗心律失常药物主要包括I类钠。

7、离子通道阻滞剂(如奎尼丁， 利多卡因等)、 II类 受 体阻断剂(如普萘洛尔等)、 III类延长动作时长药物(如胺碘酮等) 和IV类钙离子阻断剂 (如维拉帕米等)。 但是， 这些药物通常安全治疗窗较窄， 不良反应多， 长期使用会抑制心脏 功能， 并且存在潜在的致心律失常风险， 增加患者死亡率。 因此， 开发新型毒副作用更小的 抗心律失常药物， 预防猝死的发生， 降低毒性和不良反应发生率， 是防治心律失常亟待解决 的难题。 0003 人参对心血管系统具有广泛的药理活性， 其主要药效成分是人参皂苷。 现代药理 学研究证明， 人参皂苷对多种心血管疾病有显著治疗作用， 包括抗氧化、 改善血流动力学、 。

8、调节血管功能、 抗血栓形成、 保护心肌缺血再灌注等， 在临床使用中表现出毒性低、 不良反 应较少等优势。 目前， 已有超过50种人参皂苷单体被成功分离， 各种皂苷单体的化学结构不 同， 其活性也不尽相同。 人参皂苷Rg2是一种达玛烷原人参三醇型稀有皂苷， 在人参中含量 极低， 现已能够通过生物转化等方法获得大量Rg2供药理学研究使用。 发明内容 0004 本发明一个目的是提供人参皂苷Rg2的用途。 0005 本发明提供了人参皂苷Rg2在如下1)-6)中任一中的应用： 0006 1)制备预防或治疗动物或人心律失常产品； 0007 2)制备降低动物或人恶性心律失常的发生率产品； 0008 3)制备。

9、调节动物或人脂质代谢的产品； 0009 4)预防或治疗动物或人心律失常； 0010 5)降低动物或人恶性心律失常的发生率； 0011 6)调节动物或人脂质代谢。 0012 上述应用中， 所述调节动物脂质代谢体现在降低总胆固醇量； 0013 上述预防或治疗动物或人心律失常为抗或抑制动物或人心律失常。 0014 上述心律失常体现在缓慢性心律失常和快速性心律失常。 0015 在本实施例中， 心律失常通过如下数据体现： 在氯化钙诱导的大鼠心律失常和乌 头碱诱导的小鼠心律失常模型上， 人参皂苷Rg2能够延缓心律失常的发生时间， 缩短心律失 说 明 书 1/12 页 3 CN 108938655 A 3 。

10、常的持续时间， 降低死亡率和恶性心率失常发生率， 降低PQ间期和QT间期时间。 0016 上述恶性心率失常发生率体现在室性心动过速、 心室颤动、 恶性室性早搏和房室 传导阻滞等， 在本实施例中， 恶性心率失常发生率通过如下数据体现： 人参皂苷Rg2能够降 低氯化钙诱发的大鼠或乌头碱诱发的小鼠室性心动过速、 心室颤动、 室性早搏和房室传导 阻滞的发生率。 0017 上述应用中， 动物为啮齿类、 兔、 犬、 猪、 猫或非人灵长类哺乳动物等。 0018 上述应用中， 所述人参皂苷Rg2为单一构型人参皂苷C-20(S)Rg2、 单一构型人参皂 苷 C-20(R)Rg2或混合构型C-20(SR)Rg2。。

11、 0019 上述应用中， 所述人参皂苷Rg2的纯度大于等于95， 具体为98。 0020 上述应用中， 所述产品为药物、 食品、 保健品或试剂盒。 0021 本发明另一个目的是提供一种产品。 0022 本发明提供的产品， 其活性成分为人参皂苷Rg2； 0023 所述产品具有如下1)-4)中任一种功能： 0024 1)预防或治疗动物或人心律失常； 0025 2)降低动物或人恶性心律失常的发生率； 0026 3)调节动物或人脂质代谢。 0027 本发明还提供了一种抗或抑制动物心律失常的方法， 该方法包括如下步骤： 将人 参皂苷Rg2或上述的产品给药动物， 实现抗或抑制动物心律失常。 0028 上述。

12、方法中， 所述给药途径为口服、 静脉注射、 肌肉注射、 皮下、 舌下、 粘膜、 经皮等 途径。 0029 上述中， 所述动物为啮齿类、 兔、 犬、 猪、 猫或非人灵长类哺乳动物等。 0030 上述中， 所述人参皂苷Rg2为单一构型人参皂苷C-20(S)Rg2、 单一构型人参皂苷 C-20(R)Rg2或混合构型C-20(SR)Rg2。 0031 在实施例中， 混合构型C-20(SR)Rg2为C-20(S)和C-20(R)型人参皂苷Rg2质量比为 4:1的混合物。 0032 本研究的目的是评估人参皂苷Rg2在动物(小鼠和大鼠)模型中的急性和亚慢性的 口服毒性和潜在的抗心律失常作用。 在急性口服毒性。

13、实验中， 采用最大给药量实验法,以 10g/kg的剂量给予小鼠灌胃， 观察14天恢复期内小鼠的体重、 进食量、 一般外观表现、 中毒 症状与死亡数； 在慢性口服毒性实验中， 以1.75、 3.5和5g/kg/d三个剂量给大鼠连续灌胃28 天， 试验期间观察动物的外观及行为情况， 包括各剂量组的动物体重、 进食量、 血常规、 血生 化指标、 脏器重量比值。 结果表明在急性口服毒性实验中， 未见动物有中毒症状， 无动物死 亡， 外观表现未见异常； 在慢性口服毒性实验中， 实验期间动物的体征正常， 各剂量组的动 物体重、 进食量、 血常规指标、 血生化指标和脏器重量与对照组比较， 总体无明显差异， 。

14、但高 剂量组(5g/kg/d)总胆固醇量显著下降， 凝血酶原时间显著延长， 提示人参皂苷Rg2可能调 节脂质代谢， 并具有潜在的抗凝血作用。 人参皂苷Rg2 在氯化钙和乌头碱诱导的心律失常 模型中表现出抗心律失常作用。 人参皂苷Rg2(80 mg/kg/d)预处理两周后， 可缩短大鼠或小 鼠心律失常的持续时间， 降低死亡率， 降低包括室性早搏、 室性心动过速、 心室颤动和房室 传导阻滞等恶性心律失常的发生率。 研究结果表明， 人参皂苷Rg2具有较低的口服毒性， 并 可能用于预防和治疗心律失常。 说 明 书 2/12 页 4 CN 108938655 A 4 附图说明 0033 图1为急性毒性实。

15、验中， 单次灌胃给予人参皂苷C-20(S)Rg2后， 14天内小鼠体重 (A) 和食物消耗量(B)的变化。 0034 图2为慢性毒性实验中， 连续28天灌胃给予低剂量(1.75g/kg/d)、 中剂量(3.5 g/ kg/d)、 高剂量(5g/kg/d)的人参皂苷C-20(S)Rg2后， 大鼠血清生化指标的变化。 0035 图3为对照组(0.5CMC-Na溶液)及人参皂苷C-20(S)Rg2高剂量组(5g/kg/d) 的 雄性和雌性大鼠大体解剖图； 处死后， (A)肝脏， (B)胰腺， (C)肺， (D)脾， (E) 肾上腺， (F)肾， (G)胸腺， (H)心脏， (I)雌性大鼠的大脑， (。

16、J)卵巢和(K)雄性大鼠睾丸分别从对照组和高剂 量组大鼠中分离。 0036 图4为人参皂苷C-20(S)Rg2高剂量组(5g/kg/d)大鼠离体肺、 肝、 脾、 肾和心脏的苏 木精-伊红染色组织切片。 0037 图5为人参皂苷Rg2抗氯化钙诱导大鼠心律失常实验中对照组、 维拉帕米阳性药组 和人参皂苷C-20(S)Rg2给药组的代表性心电图； 每个图示代表0.425s心电图样本， 记录注 射氯化钙后10s， 30s， 1min， 5min， 10min， 15min和20min的代表性心电图。 0038 图6为人参皂苷Rg2抗乌头碱诱导小鼠心律失常实验中对照组、 胺碘酮阳性药组和 人参皂苷C-2。

17、0(S)Rg2给药组的代表性心电图； 每个图示代表0.425s心电图样本， 记录注射 乌头碱后10s， 30s， 1min， 5min， 10min， 15min和20min的代表性心电图。 具体实施方式 0039 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明， 均为常规方法。 0040 下述实施例中所用的材料、 试剂等， 如无特殊说明， 均可从商业途径得到。 0041 下述实施例中人参皂苷Rg2化学结构式如下式1所示， 可以合成也可以商购， 本实 施例中是按照如下文献记载方法以人参茎叶总皂苷为原料进行微生物转化得到混合型 C- 20(SR)Rg2， 经分离纯化后分别获得人参皂苷C-20(S)Rg。

18、2和C-20(R)Rg2单体(式1A和 1B)： Simple and efficient preparation of ginsenoside(S)-Rg2 from ginsenoside Re by biotransformation with Cellulosimicrobium sp.21， BIOCATAL BIOTRANSFOR， 33卷， 51- 60 页， 纯度为98： 说 明 书 3/12 页 5 CN 108938655 A 5 0042 0043 戊巴比妥钠购自Melk&Co.公司(Kenilworth， NJ， 美国)。 维拉帕米盐酸盐购于中央 制药有限公司(中国天津。

19、)。 胺碘酮购自赛诺菲制药有限公司(中国杭州)。 乌头碱由士兰科 技有限公司(中国天津)提供。 羧甲基纤维素钠(CMC-Na)购自阿拉丁生化技术有限公司(中 国上海)。 所有其他试剂购自Sigma Aldrich(St.Louis， MO， 美国)。 0044 动物实验符合中华人民共和国卫生部动物管理规定， 并经东北师范大学动物护理 与使用委员会批准。 昆明小鼠和Sprague Dawley(SD)大鼠购自辽宁长生生物技术有限公 司， 所有动物均置于标准环境下(温度202， 湿度5020， 光暗循环12/12小时)， 用 标准颗粒饲料和蒸馏水饲养。 0045 下述实施例中的结果以xSD表示。 。

20、使用SPSS23(IBM， Armonk， 美国)两组数据间使 用t检验评估统计学意义。 0046 实施例1、 人参皂苷Rg2在制备预防和治疗心律失常产品中的应用 0047 1、 人参皂苷C-20(S)Rg2的单剂量给药口服急性毒性研究 0048 本研究参考 化学药物急性毒性试验指导原则 (HGPT2-1)中最大给药量法进行 实验。 20只健康昆明小鼠(20g， 4周龄， 雌雄各半)随机分为两组： 人参皂苷C-20(S)Rg2 治疗 组和对照组。 所有小鼠实验前适应期为一周， 在给药前12小时禁食。 0049 人参皂苷C-20(S)Rg2混悬液： 人参皂苷C-20(S)Rg2混悬于0.5(质量。

21、分数)CMC- Na 水溶液中， C-20(S)Rg2浓度为1g/mL。 0050 小鼠灌胃给药的C-20(S)Rg2混悬液的最大体积为10mL/kg。 0051 人参皂苷C-20(S)Rg2处理组： 每只小鼠按照每kg体重给药10mL人参皂苷C-20(S) Rg2混悬液， 最大口服给药剂量为10g/kg； 0052 对照组： 每只小鼠按照每kg体重给药等体积的0.5CMC-Na水溶液。 0053 在给药后， 观察所有实验鼠毒性反应， 在前6h内给予特别注意， 记录14d内每日体 重、 食物消耗量和死亡率的变化。 0054 使用最大给药量法评估急性口服毒性， 其中人参皂苷C-20(S)Rg2单。

22、次灌胃的最大 可行给药剂量为10g/kg。 在恢复期的14d内， 每天记录体重、 食物消耗量、 毒性症状和死亡 说 明 书 4/12 页 6 CN 108938655 A 6 率。 在整个研究过程中， 未出现小鼠死亡和其他毒性迹象。 结果如图1所示， 对照组和人参皂 苷C-20(S)Rg2处理组小鼠的体重随时间逐渐增加， 体重与食物消耗量在各组间无显著差 异。 第14d处死的小鼠， 大体解剖后未发现任何解剖学改变(器官或组织)。 结果表明， 人参皂 苷C-20(S)Rg2在单次单剂量给药时对小鼠的急性毒性较低， LD50大于10g/kg。 0055 2、 人参皂苷C-20(S)Rg2的口服亚慢。

23、性毒性研究 0056 根据OECD指南的第407条原则进行连续28d给药的口服亚慢性毒性试验。 将40 只 SD大鼠(200g， 8周龄)随机分为4组： 人参皂苷C-20(S)Rg2低、 中、 高剂量组和对照组。 每组10 只大鼠(雌雄各半)。 0057 人参皂苷C-20(S)Rg2低剂量组(1.75g/kg/d)： 连续28d灌胃给予大鼠剂量1.75g/ kg/d 的C-20(S)Rg2混悬液； 0058 人参皂苷C-20(S)Rg2中剂量组(3.5g/kg/d)： 连续28d灌胃给予大鼠剂量3.5g/kg/ d 的C-20(S)Rg2混悬液； 0059 人参皂苷C-20(S)Rg2高剂量组。

24、(5g/kg/d)： 连续28d灌胃给予大鼠剂量5g/kg/d的 C-20(S)Rg2混悬液； 0060 对照组： 连续28d灌胃给予大鼠等体积的0.5CMC-Na水溶液。 0061 在第28d， 每组处死6只大鼠(雌雄各半)， 剩余大鼠恢复2周， 并于第42d处死。 在研 究期间记录体重和食物消耗量， 观察临床症状， 检测血液学和血清生化指标。 大体解剖后， 用光学显微镜观察苏木精-伊红(H&E)染色的高剂量组和对照组大鼠离体脏器的组织病理 学变化。 0062 1)体重变化、 死亡率和动物行为观察 0063 人参皂苷C-20(S)Rg2低、 中、 高剂量组和对照组大鼠在实验期间均存活， 死亡。

25、率为 0。 各实验组的大鼠均未观察到异常行为学变化。 表1中显示了各实验组大鼠6周内的体重变 化。 实验期内雄性和雌性大鼠的体重随着时间的推移逐渐增加， 各实验组间无显著性差异。 0064 表1.人参皂苷C-20(S)Rg2连续给药28天对大鼠体重的影响 (xs， n6， 从第0周 到第4周； n2， 从恢复周1到2周) 说 明 书 5/12 页 7 CN 108938655 A 7 0065 0066 2)血常规与血生化指标 0067 第28d末次给药后， 从大鼠腹主动脉采集血液样本进行血液学检查和血清生化指 标测定。 如表2所示， 人参皂苷C-20(S)Rg2低、 中和高剂量组大鼠多数血液。

26、学指标， 包括红细 胞计数(RBC)、 血小板计数(PLT)、 白细胞计数(WBC)、 淋巴细胞计数(LYM)、 多形核中性粒细 胞(PMN)、 红细胞压积(HCT)、 平均红细胞体积(MCV)、 血红蛋白 (HGB)和平均红细胞血红蛋 白浓度(MCHC)， 与对照组相比均无统计学差异。 高剂量组凝血酶原时间(PT)显著高于对照 组(p0.05)。 0068 表2.人参皂苷C-20(S)Rg2连续给药28天对大鼠血常规的影响(xs,n6) 0069 0070 RBC， 红细胞计数； PLT， 血小板计数； WBC， 白细胞计数； LYM， 淋巴细胞计数； PMN， 多 形核中性白细胞； HCT。

27、， 红细胞压积； MCV， 红细胞平均体积； HGB， 血红蛋白； MCHC， 平均血红蛋 白浓度； PT， 凝血酶原时间， *代表与对照组相比具有显著性差异(p0.05)。 说 明 书 6/12 页 8 CN 108938655 A 8 0071 血液生化指标检测结果如图2所示。 与对照组相比， 人参皂苷C-20(S)Rg2低、 中和 高剂量组大鼠的甘油三酯(TG)、 总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)无统计学差异， 但是高剂量组总 胆固醇(TC)水平显著降低(p0.05， 图2A)； 丙氨酸氨基转移酶(ALT)、 天冬氨酸转氨酶 (AST)和碱性磷酸酶(ALP)均无显著性差异(图2B)； 血。

28、尿素氮(BUN)、 肌酐(CRA)和离子浓度 (如钾、 钠和氯化物)均无异常变化(图2C和2D)。 结果表明， 连续28天灌胃给予人参皂苷C-20 (S)Rg2(小于等于5g/kg/d)对大鼠肝肾功能和电解质平衡影响较小， 高剂量人参皂苷Rg2可 能通过降低总胆固醇含量起到调节血脂代谢的作用。 0072 3)脏器重量与病理学检验 0073 在第28天末次给药后， 每组取6只大鼠(雌雄各半)进行解剖评估。 分离对照组和高 剂量Rg2组的肝、 胰、 肺、 脾、 肾、 心、 脑、 肾上腺、 胸腺、 睾丸、 卵巢、 子宫等主要脏器。 如图3所 示， 在人参皂苷C-20(S)Rg2高剂量组中， 未观察到。

29、上述器官出现任何病变。 各实验组之间， 主要脏器的平均重量(表3)无统计学差异。 图4显示了肺、 肝、 脾、 肾和心脏的H&E染色组织切 片， 均未观察明显的组织学变化。 结果表明， 连续28 天灌胃给予小于等于5g/kg/d的人参皂 苷C-20(S)Rg2， 对大鼠无明显的亚慢性毒性反应。 0074 表3.人参皂苷Rg2连续灌胃给药28天对大鼠各脏器质量的影响(xs,n6) 0075 0076 说 明 书 7/12 页 9 CN 108938655 A 9 0077 3、 人参皂苷Rg2的抗心律失常作用 0078 为了评价人参皂苷Rg2的抗心律失常活性， 选择了两种药物诱导的心律失常模型， 。

30、分别为静脉注射氯化钙诱导的大鼠心律失常和乌头碱诱导的小鼠心律失常。 在诱发心律失 常前， 每组给予一定剂量的C-20(S)、 C-20(R)单一构型或C-20(SR)混合构型的人参皂苷 Rg2、 阳性药物、 溶媒羧甲基纤维素钠(CMC-Na)水溶液连续灌胃14d。 0079 3.1氯化钙诱导的大鼠心律失常 0080 48只SD大鼠随机分为6组， 每组雌雄各半： 0081 (1)对照组为0.5CMC-Na水溶液： 连续14d给予大鼠(2mL体积/200g体重) 0.5 CMC-Na水溶液； 0082 (2)阳性对照组给予维拉帕米(30mg/kg/d)： 连续14d给予大鼠剂量30mg/kg/d 。

31、维 拉帕米溶液(维拉帕米混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为3mg/mL)； 0083 (3)人参皂苷C-20(S)Rg2组： 设低、 中、 高实验组， 连续14d分别给予大鼠剂量为8、 40和80mg/kg/d的C-20(S)Rg2混悬液(C-20(S)Rg2混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度分别为 0.8、 4和8/mL)； 0084 (4)人参皂苷C-20(R)Rg2组： 连续14d给予大鼠剂量80mg/kg/d的C-20(R)Rg2 混悬 液(C-20(R)Rg2混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为8/mL)； 0085 (5)人参皂苷C-20(SR)Rg2组： 连续14d。

32、给予大鼠剂量80mg/kg/d的C-20(SR)Rg2 混 悬液(C-20(SR)Rg2混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为8mg/mL， 其中C-20(S)和 C-20(R)型 人参皂苷Rg2质量比为4:1)。 0086 (6)人参茎叶总皂苷组： 连续14d给予大鼠剂量80mg/kg/d的总皂苷混悬液(总皂苷 (吉林省宏久生物科技股份有限公司)混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为8 mg/mL)。 0087 在第14d给药1h后， 用戊巴比妥钠(50mg/kg， i.p)麻醉大鼠。 用PowerLab系统 (AD instrument， 澳大利亚)监测每只大鼠的标准II导联心电图。 。

33、此后， 在10s内将10的氯化钙 水溶液(100mg/kg)迅速注入大鼠舌下静脉， 诱发心律失常。 20min内心律失常的时间和持续 时间和各组的死亡率用于评价抗心律失常作用。 统计室性早搏 (Ventricular premature beat,VP)、 室性心动过速(Ventricular tachycardia ,VT)、 室性纤颤 (Ventdcular fibrillation,VF)和传导阻滞(Arioventricular block,AVB)的发生率。 0088 人参皂苷Rg2对氯化钙诱发大鼠心律失常的预防和治疗作用如表4、 表5和图5所 示。 对照组静脉注氯化钙后心律失常发生。

34、时间约为8s， 持续时间达1000s以上， 死亡率为 50。 对照组中VP、 VT、 VF和AVB的发生率分别为50、 67.7、 83.3和83.3 (表4)。 钙离 子抑制剂维拉帕米通过减少心律失常持续时间(120s， p0.01， 与对照组相比)， 降低死亡 率(16.7)和恶性心律失常发生率， 起到显著的抗氯化钙诱导心律失常的作用。 在人参皂 苷C-20(S)Rg2给药组， 低剂量和中剂量组(8和40mg/kg/d)大鼠心律失常的持续时间和死亡 率， 与对照组相比均无统计学差异， 但是恶性心律失常VF 和VP的发生率显著降低。 当给予 高剂量人参皂苷C-20(S)Rg2(80mg/kg。

35、/d)时， 心律失常持续时间减少到620s， 与对照组相比 有显著性差异(p0.05)， 死亡率显著降低至 16.7， VP、 VF和AVB的发生率分别降至0、 16.7和50， 与维拉帕米预处理组相似。 人参皂苷C-20(S)Rg2高剂量组存活的大鼠在注 射氯化钙后20min内均可恢复窦性心律 (图5)。 从心率和心电图间期统计结果可知(表5)， 舌下注射氯化钙后20min内， 对照组大鼠的心率呈先变快后减慢的趋势， 与0min相比， PQ间 说 明 书 8/12 页 10 CN 108938655 A 10 期和QT间期时间显著延长， 说明房室传导速度变慢， 心室除极和复极变慢， 易引发猝。

36、死。 维 拉帕米能够抑制氯化钙引起的心率变快， 缩短氯化钙引起的QT间期延长， 但是维拉帕米预 处理14d会导致正常大鼠的心率减慢， QT间期延长(0min)， 易产生房室传导障碍， 引发缓慢 性心律失常， 不适合作为预防性药物长期使用。 与对照组相比， 中、 高剂量的人参皂苷C-20 (S)Rg2 预处理能够在一定程度上缩短氯化钙引起的PQ间期延长， 显著缩短氯化钙引起的 QT 间期延长(*， p0.05， 与对照组相同时间点比较)， 使大鼠在20min内恢复窦性心律。 此 外， 连续14天预处理不会改变正常大鼠的心率、 PQ间期、 QT间期和QRS间期时间 (0min)， 说 明人参皂苷R。

37、g2在80mg/kg剂量下未产生明显的致心律失常作用， 适合作为低毒性的预防性 药物使用。 0089 为了考察不同构型的人参皂苷Rg2的抗氯化钙诱导心律失常作用， 连续14天灌胃 给予大鼠80mg/kg/d的C-20(R)Rg2或C-20(SR)Rg2。 由表4和表5可知， C-20(R)Rg2 和C-20 (SR)Rg2均能在一定程度上延长氯化钙诱导大鼠心律失常的发生时间。 显著缩短心律失常 持续时间， 并能降低动物的死亡率和恶性心律失常的发生率， 治疗效果与高剂量C-20(S) Rg2组(80mg/kg/d)相比无统计学差异。 为了比较Rg2和人参茎叶总皂苷的疗效差异， 给予大 鼠80mg。

38、/kg/d的人参茎叶总皂苷。 结果发现， 人参茎叶总皂苷虽然也能缩短心律失常的持续 时间， 降低VP、 VT、 VF和AVB的发生率， 在一定程度上缩短 PQ间期和QT间期， 但是心律失常持 续时间与对照组相比无统计学差异， 治疗效果没有人参皂苷Rg2高剂量组显著(表4和表5)。 结果表明， 单一构型人参皂苷C-20(S)Rg2、 C-20(R)Rg2或混合构型C-20(SR)Rg2均具有抗 氯化钙诱导大鼠心律失常的作用， 且其治疗效果优于人参茎叶总皂苷。 0090 表4.人参皂苷Rg2对氯化钙诱导的大鼠心律失常的治疗作用(xs,n6) 0091 0092 药物效应表现为统计心律失常发作时间、。

39、 心律失常持续时间、 死亡率， 以及室性早 搏(VP)、 心动过速(VT)、 心室颤动(VF)和房室传导阻滞(AVB)的发生率， *代表与对照组相比 具有显著性差异(p0.05)。 0093 表5.人参皂苷Rg2对氯化钙诱导心律失常大鼠心电图心率和间期的影响(xs,n 3-5) 说 明 书 9/12 页 11 CN 108938655 A 11 0094 0095 *代表与同组0min相比具有显著性差异(p0.05)， 代表与对照组相同时间点相 比具有显著性差异(p0.05) 0096 3.2乌头碱诱导的小鼠心律失常 0097 40只小鼠随机分为5组， 每组雌雄各半： 0098 (1)对照组为。

40、0.5CMC-Na水溶液： 连续14d灌胃给予小鼠0.5CMC-Na水溶液(给 药体积随体重变化， 约为0.2mL体积/20g体重)； 0099 (2)阳性对照组给予胺碘酮(60mg/kg/d)： 连续14d灌胃给予小鼠剂量60mg/kg/d胺 碘酮溶液(胺碘酮混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为6mg/mL)； 0100 (3)人参皂苷C-20(S)Rg2组： 连续14d灌胃给予小鼠剂量为40、 80和160mg/kg/d的 C-20(S)Rg2混悬液(C-20(S)Rg2混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为0.8、 4和8/mL)； 0101 (4)人参皂苷C-20(R)Rg2组：。

41、 连续14d灌胃给予小鼠剂量80mg/kg/d的C-20(R)Rg2 混悬液(C-20(R)Rg2混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为8mg/mL)； 0102 (5)人参皂苷C-20(SR)Rg2组： 连续14d灌胃给予小鼠剂量80mg/kg/d的C-20(SR) Rg2 混悬液(C-20(SR)Rg2混悬于0.5CMC-Na水溶液， 浓度为8mg/mL)。 。 0103 末次给药1h后， 用戊巴比妥钠(50mg/kg， i.p)麻醉小鼠， 监测II导联心电图。 然后， 说 明 书 10/12 页 12 CN 108938655 A 12 将 50mg/kg乌头碱迅速注入小鼠尾静脉， 诱。

42、发心律失常， 统计心律失常发生时间、 持续时 间、 VP、 VF、 VT和AVB发生率， 比较各组小鼠的心率和心电图PQ、 QRS和QT间期。 0104 人参皂苷Rg2对乌头碱引起的心律失常的治疗作用， 以及不同实验组的代表性心 电图如表 6、 表7和图6所示。 对照组静脉注射乌头碱后， 促进快钠通道开放， 加速钠离子内 流， 引起多源性异位心律失常。 对照组心律失常发生率平均为17s， 持续时间超过1100s， VP、 VT、 VF 和AVB发生率、 动物死亡率均大于62.5。 给予阳性药胺碘酮后， 小鼠心律失常的持 续时间显著缩短到628s(p0.01)， 降低死亡率至12.5， VF和A。

43、VB发生率分别降至12.5 和25， 抗心律失常作用显著。 但是， 连续14d胺碘酮预处理， 显著延长了正常小鼠心电图的 QT间期 (0min， 表8)， 存在潜在的致心律失常毒副作用。 在人参皂苷C-20(S)Rg2低、 中和高 剂量组 (40、 80和160mg/kg/d)中， 抗心律失常作用不呈剂量依赖性。 低剂量C-20(S)Rg2虽 然能够有效降低小鼠死亡率， 但是心律失常持续时间与对照组相比无显著性差异， 并且不 能有效预防恶性心律失常的发生； 中剂量组小鼠心律失常的持续时间显著缩短至748s(p 0.05)， 心律失常的持续时间延长至58s， 与胺碘酮缩短心律失常持续时间的作用无。

44、显著性 差异， 同时有效降低了VF和AVB发生率(37.5和50)； 高剂量C-20(S)Rg2虽能降低VF (37.5)和AVB(25) 的发生率， 但是不能缩短小鼠心律失常持续时间， 且增加了动物死 亡率。 心电图(图6)显示， 多数对照组小鼠在注射乌头碱后20min内死亡， 而胺碘酮组和中剂 量C-20(S)Rg2组存活的小鼠可以在乌头碱注射20min后内恢复窦性心律。 心率和心电图间 期分析结果(表8)显示， 对照组小鼠在乌头碱注射20min后， QT间期明显延长； 中剂量组小鼠 在乌头碱注射20min后， 能够逆转乌头碱引起的QT间期延长。 当灌胃给予小鼠80mg/kg/d的 C-2。

45、0(R)Rg2或C-20(SR)Rg2 时， 均能起到抗乌头碱诱导心律失常的作用， 且其治疗效果与 中剂量C-20(S)Rg2组(80mg/kg/d) 相比无显著性差异。 结果表明， 单一构型人参皂苷C-20 (S)Rg2、 C-20(R)Rg2或混合构型 C-20(SR)Rg2均具有抗乌头碱诱导小鼠心律失常的作用。 0105 表6人参皂苷Rg2对乌头碱诱导的小鼠心律失常的治疗作用(xs,n8) 0106 0107 药物效应表现为统计心律失常发作时间、 心律失常持续时间、 死亡率， 以及室性早 搏(VP)、 心动过速(VT)、 心室颤动(VF)和房室传导阻滞(AVB)的发生率， *代表与对照组。

46、相比 具有显著性差异(p0.05)。 0108 表7.人参皂苷Rg2对乌头碱诱导心律失常小鼠心电图心率和间期的影响(xs,n 3-7) 说 明 书 11/12 页 13 CN 108938655 A 13 0109 0110 *代表与同组0min相比具有显著性差异(p0.05)， 代表与对照组相同时间点相 比具有显著性差异(p0.05)。 说 明 书 12/12 页 14 CN 108938655 A 14 图1 说 明 书 附 图 1/4 页 15 CN 108938655 A 15 图2 说 明 书 附 图 2/4 页 16 CN 108938655 A 16 图3 图4 说 明 书 附 图 3/4 页 17 CN 108938655 A 17 图5 图6 说 明 书 附 图 4/4 页 18 CN 108938655 A 18 。