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1、(10)申请公布号 CN 102526379 A (43)申请公布日 2012.07.04 CN 102526379 A *CN102526379A* (21)申请号 201010608330.0 (22)申请日 2010.12.23 A61K 36/888(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 125/00(2006.01) A61K 127/00(2006.01) A61K 131/00(2006.01) A61K 135/00(2006.01) (71)申请人 上海张江中药现代制剂技术工程研 究中心 地址 201203 上海市蔡伦路 781 号 423 室 。
2、(72)发明人 郑向炜 王源 冯怡 阮克锋 (54) 发明名称 一种抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法 (57) 摘要 本 发 明 是 一 种 抗 癌 新 药 尖 尾 芋 提 取 物 的 制 备 方 法，它 以 植 物 尖 尾 芋 (Alocasia eucullatta(Dour)Schott) 为原料， 制成可以治 疗癌症的活性提取物。 采用溶剂提取法、 溶剂萃取 法、 树脂吸附法、 正相柱层析法、 反相柱层析法、 凝 胶层析法等工艺中的一种或者多种工艺， 并结合 浓缩干燥、 冷冻干燥、 喷雾干燥等常用干燥方法制 备成尖尾芋提取物， 将制成的尖尾芋提取物作为 抗癌活性成分在癌症治疗中进行应用。。
3、 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 2 页 1/1 页 2 1. 一种抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法， 其特征在于 ： 以植物尖尾芋 (Alocasia eucullatta(Dour)Schott) 为原料， 采用溶剂提取法、 溶剂萃取法， 树脂吸附法、 正相柱层析 法、 反相柱层析法等工艺中的一种或者多种工艺， 并结合浓缩干燥、 冷冻干燥、 喷雾干燥常 用干燥方法制备成尖尾芋提取物， 将制成的尖尾芋提取物作为抗癌活性成分， 使之在癌症 治疗中进行应用。 2. 一种如权利要求 1。
4、 所述的抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法， 其特征在于 ： 植物原 料尖尾芋(Alocasia eucullatta(Dour)Schott)可以是根茎， 也可以是枝叶、 果实等全草的 任一部位， 原料可以是新鲜采集的， 也可以是经过炮制的。 3. 一种如权利要求 1 所述的抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法， 其特征在于 ： 作为抗 癌活性成分的尖尾芋提取物包括其中所含的各种类型的有机酸、 二苯乙烯、 二苯乙烯苷、 甾 体皂甙类化合物以及其它骨架类型的化合物。 4. 一种如权利要求 1 所述的抗癌新药尖尾芋提取物制备方法， 其特征在于 ： 所采用的 溶剂提取法中， 可选用水、 甲醇、 乙醇、 正丁。
5、醇或者其它低级脂肪醇中的一种溶媒， 在室温下 浸润提取或者用超声波振荡仪超声振荡提取， 或者在加热状态下浸润提取或回流提取， 提 取次数可以是一次， 也可以是多次。 5. 一种如权利要求 1 所述的抗癌新药尖尾芋提取物制备方法， 其特征在于 ： 所采用的 溶剂萃取法中， 可将经水或者低级脂肪醇中的一种溶媒或者混合溶媒提取并经所获得的提 取物混悬于水中， 用正丁醇或含水正丁醇直接进行萃取， 或者经低极性溶媒 ( 如石油醚、 二 氯甲烷、 三氯甲烷等中的一种或多种 ) 脱脂后， 再用正丁醇或含水正丁辞进行萃取， 萃取次 数可以是一次， 也可以是多次。 6. 一种如权利要求 1 所述的抗癌新药尖尾芋。
6、提取物的制备方法， 其特征在于 ： 所采用 的树脂吸附法中， 树脂可选用 D-101 型吸附树脂， XAD-2 型吸附树脂或者 CHP-20P 型吸附树 脂以及其它类型的吸附树脂， 洗脱溶媒用水、 甲醇、 乙醇、 丙酮、 含水甲醇、 含水乙醇或者含 水丙酮中的一种或多种， 洗脱时可以等浓度洗脱， 也可以梯度洗脱。 7. 一种如权利要求 1 所述的抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法， 其特征在于 ： 所采用 的正相柱层析法中， 可选用常压或加压硅胶柱层析或者氧化铝柱层析， 所用柱填料可选柱 层析用硅胶或氧化铝， 或者薄层层析用硅胶或氧化铝， 洗脱可选用苯 / 丙酮、 二氯甲烷 / 丙 酮、 苯 / 。
7、甲醇、 二氯甲烷 / 甲醇、 三氯甲烷 / 甲醇 . 乙酸乙酯 / 甲醇， 苯 / 丙酮 / 水、 二氯甲 烷 / 丙酮 / 水、 三氯甲烷 / 丙酮 / 水、 二氯甲烷 / 甲醇 / 水、 三氯甲烷 / 甲醇 / 水或者乙酸 乙酯 / 甲醇 / 水等溶媒中的一种或者多种， 洗脱时可以等浓度洗脱， 也可以梯度洗脱。 8. 一种如权利要求 1 所述的抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法， 其特征在于 ： 所采用 的反相柱层析法， 可选用常压或加压反相柱层析， 所用柱填料可选十八烷基键合相 (ODS) 或八烷基键合相， 洗脱剂用含水甲醇或含水乙腈， 洗脱时可以等浓度洗脱， 也可以梯度洗 脱。 权 利 要。
8、 求 书 CN 102526379 A 2 1/2 页 3 一种抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法 0001 本发明涉及医药技术领域， 确切地说它是抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法。 0002 尖尾芋 (Alocasia eucullatta(Dour)Schott) 为天南星科植物假海芋的根茎， 生 于山涧阴湿处， 或树旁沟边、 河边。 分布于广东、 广西、 四川等地。 该植物能清热、 解毒、 活血、 消肿， 治疔疮、 痈肿、 丹毒， 跌打损伤， 慢性气管炎、 钩端螺旋体病等疾病。迄今为止， 对尖尾 芋的研究很少， 多见于一般药效学报道。 有关尖尾芋的抗癌药理活性很少报道， 仅见侯学文 从中分离得。
9、到一个凝集素， 其对肺腺癌细胞株 P18 仅有很少杀伤能力。癌症是当今社会发 病率高、 死亡率高的一种顽痰， 目前尚无治愈率较高的药物的报道。 本发明人在寻找中草药 抗癌活性成分过程中， 发现尖尾芋提取物具有很好的抗肿瘤活性， 并且从中获得多个具有 抗癌活性的二苯乙烯、 二苯乙烯苷、 脑苷类化合物等多种骨架类型的化合物。 0003 本发明的目的在于提供一种抗癌新药尖尾芋提取物的制备方法， 其工艺简单实 用， 为尖尾芋的应用提供了广泛的途径。 0004 本发明的目的是通过如下方案实现的 ： 以尖尾芋 (Alocasia eucullatta (Dour) Schott)为原料， 采用溶剂提取法.。
10、溶剂萃取法.树脂吸附法， 正相柱层析法、 反相柱层析法 等工艺中的一种或者多种工艺， 并结舍浓缩干燥、 冷冻干燥， 喷雾干燥等常用干燥方法制备 成尖尾芋总提取物， 将制成的尖尾芋总提取物作为抗癌活性成分用于治疗多种癌症。 0005 本发明的优点是 ： 尖尾芋提取物工艺简单实用， 抗癌疗效好， 并且无毒副作用。为 尖尾芋应用提供了广泛的途径。 0006 下面结合实施例对本发明做进一步详细地描述。 实施例 ： 0007 1. 溶剂提取法 / 溶剂萃取法全用提取制备尖尾芋提取物 0008 1.2kg用50乙醇在90下回流， 合并提取液， 浓缩得到130g乙醇提取物。 将乙 醇提取物混悬于水中， 用乙。
11、酸乙酯萃取， 经浓缩干燥即可得到尖尾芋提取物， 收率为1.2。 0009 2. 溶剂提取法 / 树脂吸附法合用提取制备尖尾芋提取物 0010 尖尾芋 1.0kg 用 80乙醇在 90下回流， 合并提取液， 浓缩得到 13Og 乙醇提取 物。乙醇提取物上 D-101 型吸附树脂柱， 先用水、 5乙醇 / 水洗脱以除去色素和杂质， 而后 用 60乙醇 / 水洗脱。其中 60乙醇 / 水洗脱部分减压浓缩除乙醇， 再经冷冻干燥可得到 尖尾芋提取物， 收率为 1.0。 0011 3. 尖尾芋提取物的体外抑瘤实验 0012 3.1 细胞株、 试剂及仪器 0013 人宫颈癌 Hela 细胞株购自中科院细胞库。
12、 ； DMEM 培养液， Gibco 产品 ； 胎牛血清， Gibco 产品 ； 胰蛋白酶， Gibco 产品 ； DMSO 溶液， sigma 公司 ； 96 孔板， Corning 公司 ； Revco 3000 培养箱， Thermo 公司 ； Multishkan MK3 酶标仪， Thermo 公司。 0014 3.2 肿瘤细胞培养方法 0015 人宫颈癌 Hela 细胞株用含 10胎牛血清的 DMEM 培养液培养， 培养条件为 37， 5 CO2浓度及饱和湿度。当细胞生长至对数生长期时， 用 25胰酶消化细胞， 洗涤吹散细 说 明 书 CN 102526379 A 3 2/2 页 。
13、4 胞稀释至 106/ml， 每孔 100L 接种于 96 孔板， 以备 MTT 实验。 0016 3.3 细胞增殖实验 (MTT 法 ) 0017 尖尾芋提取物溶于 DMSO 溶液， 取含 1 DMSO 的尖尾芋提取物溶液， 用含 10胎牛 血清的 DMEM 溶液配成浓度分别为 100、 50、 20、 2g/mL 的尖尾芋提取物溶液， 每孔 100L 接种于 96 孔板， 混匀， 使尖尾芋提取物每孔终浓度分别达到 50、 25、 10、 1g/mL， 放入培养 箱继续培养 16、 32、 48h。每孔加入 5mg/mLMTT 溶液 5L， 继续培养 5h， 测定各孔吸光度。以 不加任何处理的培养细胞为空白对照， 以单用培养细胞作为阴性对照。每个浓度梯度均设 置 12 个平行组， 分别计算细胞抑制率。按照以下公式计算抑制率 ： 0018 抑制率 1-( 实验组吸光度平均值 / 对照组吸光度平均值 )100 0019 结果见表 1 0020 表 1 尖尾芋提取物对 Hela 细胞体外增殖的抑制作用 0021 0022 t 检验， *p 0.05， *p 0.01 0023 结果表明 ： 不同浓度， 不同培养时间的尖尾芋提取物可显著抑制人宫颈癌 Hela 细 胞的增殖， 提示其可能有一定的抗癌效果。 说 明 书 CN 102526379 A 4 。