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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610980274.0 (22)申请日 2016.11.08 (71)申请人 江西益盟科技有限公司 地址 338000 江西省新余市渝水区下村工 业基地 (72)发明人 刘冠环 刘冠中 张雪东 (74)专利代理机构 深圳市硕法知识产权代理事 务所(普通合伙) 44321 代理人 李晓阳 (51)Int.Cl. A61K 35/747(2015.01) A61K 47/42(2017.01) A61P 15/02(2006.01) A61K 35/744(2015.01) (。
2、54)发明名称 治疗阴道炎的乳酸菌组合物及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种治疗阴道炎的乳酸菌组 合物， 包括乳酸菌组合核， 所述乳酸菌组合核外 包裹有包被层； 所述包被层包括重量份数的成 份： 低聚异麦芽糖3050、 蛋白物质3050、 蔓越 莓果粉510、 硝酸纤维素510； 所述乳酸菌组 合核由如下重量份数的菌株组成： 唾液乳杆菌30 40、 罗伊氏乳杆菌2030、 鼠李糖乳杆菌10 20、 嗜酸乳酸菌1020。 本发明还公开了其制备 方法。 本发明具有显著治疗阴道炎且无任何毒副 作用的优点。 权利要求书1页 说明书5页 CN 106852939 A 2017.06.16 CN 。
3、106852939 A 1.一种治疗阴道炎的乳酸菌组合物， 其特征在于： 包括乳酸菌组合核， 所述乳酸菌组合 核外包裹有包被层； 所述包被层包括重量份数的成份： 低聚异麦芽糖3050、 蛋白物质30 50、 蔓越莓果粉510、 硝酸纤维素510； 所述乳酸菌组合核由如下重量份数的菌株组成： 唾液乳杆菌3040、 罗伊氏乳杆菌2030、 鼠李糖乳杆菌1020、 嗜酸乳酸菌1020。 2.根据权利要求1所述的乳酸菌组合物， 其特征在于： 所述乳酸菌组合物中唾液乳杆菌 的含量为107109cuf/g、 罗伊氏乳杆菌的含量为106108cuf/g、 鼠李糖乳杆菌的含量为106 107cuf/g、 嗜酸。
4、乳酸菌的含量为106107cuf/g。 3.根据权利要求1所述的乳酸菌组合物， 其特征在于： 所述乳酸菌组合核中唾液乳杆 菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳酸菌分别经过耐猪胆盐、 耐酸筛选的， 能耐0.3 的猪胆盐及pH为2.5的酸性环境。 4.根据权利要求1所述的乳酸菌组合物， 其特征在于： 所述唾液乳杆菌为AP-32菌株， 保 藏编号CCTCC NO： M2011127； 所述罗伊氏乳杆菌为TE-33菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011126； 所述鼠李糖乳杆菌为CT-53菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011129； 所述嗜酸乳杆菌 为F-1菌株， 保藏编号CC。
5、TCC NO： M2011124。 5.根据权利要求1所述的乳酸菌组合物， 其特征在于： 所述蛋白物质为酪蛋白和乳铁蛋 白层， 其中酪蛋白和乳铁蛋白的重量比为1-5： 1-5。 6.一种治疗阴道炎的乳酸菌组合物的制备方法， 其特征在于包括如下步骤： (1)将唾液乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌、 嗜酸乳酸菌分别以1ml/100ml的接种 量接种至培养基中， 在3545下， 培养1224h， 得到活化的乳杆菌菌种； (2)将活化的四种菌种以重量份数： 唾液乳杆菌3040、 罗伊氏乳杆菌2030、 鼠李糖 乳杆菌1020、 嗜酸乳酸菌1020混合后， 再将混合菌种以1ml/100ml的接种量。
6、接种至培养 液中， 在3545下， 培养1012h后， 离心取沉淀， 在410下保温610h后， 均质， 得到组合菌； (3)将重量份数的： 低聚异麦芽糖3050、 蛋白物质3050、 蔓越莓果粉510、 硝酸纤 维素510加水充分混合成包被液， 将组合菌加入包被液混和均匀； (4)将混和均匀的液体滴加到氯化钙溶液中固化， 过滤后真空冻干12h得到乳酸菌组合 物。 7.根据权利要求6所述的制备方法， 其特征在于： 所述乳酸菌组合物中唾液乳杆菌的含 量为107109cuf/g、 罗伊氏乳杆菌的含量为106108cuf/g、 鼠李糖乳杆菌的含量为106 107cuf/g、 嗜酸乳酸菌的含量为106。
7、107cuf/g。 8.根据权利要求6所述的制备方法， 其特征在于： 所述唾液乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李 糖乳杆菌和嗜酸乳酸菌在活化前分别经过耐猪胆盐、 耐酸筛选的， 能耐0.3的猪胆盐及pH 为2.5的酸性环境。 9.根据权利要求6所述的制备方法， 其特征在于： 所述唾液乳杆菌为AP-32菌株， 保藏编 号CCTCC NO： M2011127； 所述罗伊氏乳杆菌为TE-33菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011126； 所 述鼠李糖乳杆菌为CT-53菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011129； 所述嗜酸乳杆菌为F-1菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011124。。
8、 10.根据权利要求6所述的制备方法， 其特征在于： 所述蛋白物质为酪蛋白和乳铁蛋白 层， 其中酪蛋白和乳铁蛋白的重量比为1-5： 1-5。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106852939 A 2 治疗阴道炎的乳酸菌组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及益生菌， 尤其是涉及一种具有显著治疗阴道炎且无任何毒副作用的治 疗阴道炎的乳酸菌组合物及其制备方法。 背景技术 0002 阴道炎即阴道炎症。 正常健康妇女阴道由于解剖组织的特点对病原体的侵入有自 然防御功能。 如阴道口的闭合， 阴道前后壁紧贴， 阴道上皮细胞在雌激素的影响下的增生和 表层细胞角化， 阴道酸碱度保持平衡，。
9、 使适应碱性的病原体的繁殖受到抑制， 而颈管黏液呈 碱性， 当阴道的自然防御功能受到破坏时， 病原体易于侵入， 会导致阴道炎症。 阴道炎的发 生存在多种原因， 但主要原因是菌群失调引起的。 正常寄生于健康妇女阴道菌群中， 乳杆菌 占优势， 阴道乳杆菌对维持阴道正常菌群起着关键作用。 阴道上皮的糖原经乳杆菌的作用 分解为乳酸， 使阴道局部呈弱酸环境。 下列情况有可能影响阴道生态系统的平衡： 性激 素： 如月经期前后雌激素水平降低， 导致阴道内pH上升有利于厌氧菌的生长。 某些杀精子 的避孕药膏对乳杆菌有毒性作用。 药物： 许多种药物如广谱抗生素可杀灭或抑制乳杆菌 而影响阴道内的环境。 感染； 如。
10、妇女性乱， 感染了STD等， 可干扰阴道内原有菌群而导致失 调。 目前， 医院多采用西医抗生素治疗， 但效果不是很满意， 容易复发， 给患者带来很大的痛 苦。 因此， 开发一种疗效好、 不易复发并且毒副作用低的治疗方法是现有技术亟待解决的技 术问题。 发明内容 0003 为克服现有技术的缺点， 本发明目的在于提供一种具有显著治疗阴道炎且无任何 毒副作用的治疗阴道炎的乳酸菌组合物及其制备方法。 0004 本发明通过以下技术措施实现的， 一种治疗阴道炎的乳酸菌组合物， 包括乳酸菌 组合核， 所述乳酸菌组合核外包裹有包被层； 所述包被层包括重量份数的成份： 低聚异麦芽 糖3050、 蛋白物质3050。
11、、 蔓越莓果粉510、 硝酸纤维素510； 所述乳酸菌组合核由如 下重量份数的菌株组成： 唾液乳杆菌3040、 罗伊氏乳杆菌2030、 鼠李糖乳杆菌1020、 嗜酸乳酸菌1020。 0005 作为一种优选方式， 所述乳酸菌组合物中唾液乳杆菌的含量为107109cuf/g、 罗 伊氏乳杆菌的含量为106108cuf/g、 鼠李糖乳杆菌的含量为106107cuf/g、 嗜酸乳酸菌的 含量为106107cuf/g。 0006 作为一种优选方式， 所述乳酸菌组合核中唾液乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆 菌和嗜酸乳酸菌分别经过耐猪胆盐、 耐酸筛选的， 能耐0.3的猪胆盐及pH为2.5的酸性环 境。 。
12、0007 作为一种优选方式， 所述罗伊氏乳杆菌为GL-104菌株， 所述唾液乳杆菌为AP-32菌 株， 保藏编号CCTCC NO： M2011127； 所述罗伊氏乳杆菌为TE-33菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011126； 所述鼠李糖乳杆菌为CT-53菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011129； 所述嗜酸乳杆菌 说 明 书 1/5 页 3 CN 106852939 A 3 为F-1菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011124。 0008 作为一种优选方式， 所述蛋白物质为酪蛋白和乳铁蛋白层， 其中酪蛋白和乳铁蛋 白的重量比为1-5： 1-5。 0009 本发明还一。
13、种治疗阴道炎的乳酸菌组合物的制备方法， 包括如下步骤： 0010 (1)将唾液乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌、 嗜酸乳酸菌分别以1ml/100ml的 接种量接种至培养基中， 在3545下， 培养1224h， 得到活化的乳杆菌菌种； 0011 (2)将活化的四种菌种以重量份数： 唾液乳杆菌3040、 罗伊氏乳杆菌2030、 鼠 李糖乳杆菌1020、 嗜酸乳酸菌1020混合后， 再将混合菌种以1ml/100ml的接种量接种至 培养液中， 在3545下， 培养1012h后， 离心取沉淀， 在410下保温610h后， 均 质， 得到组合菌； 0012 (3)将重量份数的： 低聚异麦芽糖3050。
14、、 蛋白物质3050、 蔓越莓果粉510、 硝 酸纤维素510加水充分混合成包被液， 将组合菌加入包被液混和均匀； 0013 (4)将混和均匀的液体滴加到氯化钙溶液中固化， 过滤后真空冻干12h得到乳酸菌 组合物。 0014 作为一种优选方式， 所述乳酸菌组合物中唾液乳杆菌的含量为107109cuf/g、 罗 伊氏乳杆菌的含量为106108cuf/g、 鼠李糖乳杆菌的含量为106107cuf/g、 嗜酸乳酸菌的 含量为106107cuf/g。 0015 作为一种优选方式， 所述唾液乳杆菌、 罗伊氏乳杆菌、 鼠李糖乳杆菌和嗜酸乳酸菌 在活化前分别经过耐猪胆盐、 耐酸筛选的， 能耐0.3的猪胆盐及。
15、pH为2.5的酸性环境。 0016 作为一种优选方式， 所述唾液乳杆菌为AP-32菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011127； 所述罗伊氏乳杆菌为TE-33菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011126； 所述鼠李糖乳杆菌为CT-53 菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011129； 所述嗜酸乳杆菌为F-1菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011124。 0017 作为一种优选方式， 所述蛋白物质为酪蛋白和乳铁蛋白层， 其中酪蛋白和乳铁蛋 白的重量比为1-5： 1-5。 0018 本发明具有显著治疗阴道炎的效果， 且因为是益生菌类产品， 对人体没有任何毒 副作用。 。
16、具体实施方式 0019 下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。 0020 实施例1 0021 (1)菌种活化 0022 筛选出耐0.3猪胆盐、 耐PH为2.5的酸性环境的唾液乳杆菌AP-32菌株， 保藏编号 CCTCC NO： M2011127； 罗伊氏乳杆菌TE-33菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011126； 鼠李糖乳杆 菌CT-53菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011129； 嗜酸乳杆菌F-1菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011124。 将筛选出的四种菌分别以1ml/100ml的接种量接种至MRS培养基中， 在45下， 培 养12h， 得到活化的乳杆菌菌种。
17、； 0023 其中， MRS培养基的配方为： 在1000mL蒸馏水中加入10g蛋白胨、 8g牛肉浸粉、 20g葡 萄糖、 4g酵母浸膏、 0.05g四水硫酸锰、 1mL吐温80、 2g磷酸氢二钾、 5g乙酸钠、 0.2g硫酸镁、 2g 说 明 书 2/5 页 4 CN 106852939 A 4 柠檬酸二铵； 0024 (2)制备组合菌 0025 将活化的四种菌种以重量份数： 唾液乳杆菌30g、 罗伊氏乳杆菌20g、 鼠李糖乳杆菌 10g、 嗜酸乳酸菌10g混合后， 再将混合菌种以1ml/100ml的接种量接种至培养液中， 在45 下， 培养10h后， 以6000r/min， 在5下， 离心1。
18、5min， 取沉淀物， 在4下保温6h后， 均质， 得到 组合菌； 0026 (3)制备包被组合菌 0027 将以下重量的： 低聚异麦芽糖30g、 酪蛋白15g、 乳铁蛋白15g、 硝酸纤维素5g加水 1000ml充分混合成包被液， 将组合菌加入包被液混和均匀； 0028 (4)制备乳酸菌组合物 0029 将混和均匀的液体滴加到氯化钙溶液中固化， 过滤后真空冻干12h得到乳酸菌组 合物。 在乳酸菌组合物中唾液乳杆菌的含量为107109cuf/g、 罗伊氏乳杆菌的含量为106 108cuf/g、 鼠李糖乳杆菌的含量为106107cuf/g、 嗜酸乳酸菌的含量为106107cuf/g。 0030 。
19、实施例2 0031 筛选出耐0.3猪胆盐、 耐PH为2.5的酸性环境的唾液乳杆菌AP-32菌株， 保藏编号 CCTCC NO： M2011127； 罗伊氏乳杆菌TE-33菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011126； 鼠李糖乳杆 菌CT-53菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011129； 嗜酸乳杆菌F-1菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011124。 将筛选出的四种菌分别以1ml/100ml的接种量接种至MRS培养基中， 在35下， 培 养24h， 得到活化的乳杆菌菌种； 0032 其中， MRS培养基的配方为： 在1000mL蒸馏水中加入10g蛋白胨、 8g牛肉浸粉、。
20、 20g葡 萄糖、 5g酵母浸膏、 0.06g四水硫酸锰、 1mL吐温80、 2g磷酸氢二钾、 5g乙酸钠、 0.2g硫酸镁、 2g 柠檬酸二铵； 0033 (2)制备组合菌 0034 将活化的四种菌种以重量份数： 唾液乳杆菌40g、 罗伊氏乳杆菌30g、 鼠李糖乳杆菌 20g、 嗜酸乳酸菌20g混合后， 再将混合菌种以1ml/100ml的接种量接种至培养液中， 在35 下， 培养12h后， 以4500r/min， 在10下， 离心20min， 取沉淀物， 在10下保温10h后， 均质， 得到组合菌； 0035 (3)制备包被组合菌 0036 将以下重量的： 低聚异麦芽糖50g、 酪蛋白35g。
21、、 乳铁蛋白35g、 硝酸纤维素10g加水 1000ml充分混合成包被液， 将组合菌加入包被液混和均匀； 0037 (4)制备乳酸菌组合物 0038 将混和均匀的液体滴加到氯化钙溶液中固化， 过滤后真空冻干12h得到乳酸菌组 合物。 在乳酸菌组合物中唾液乳杆菌的含量为107109cuf/g、 罗伊氏乳杆菌的含量为106 108cuf/g、 鼠李糖乳杆菌的含量为106107cuf/g、 嗜酸乳酸菌的含量为106107cuf/g。 0039 实施例3 0040 筛选出耐0.3猪胆盐、 耐PH为2.5的酸性环境的唾液乳杆菌AP-32菌株， 保藏编号 CCTCC NO： M2011127； 罗伊氏乳杆。
22、菌TE-33菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011126； 鼠李糖乳杆 菌CT-53菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011129； 嗜酸乳杆菌F-1菌株， 保藏编号CCTCC NO： M2011124。 将筛选出的四种菌分别以1ml/100ml的接种量接种至MRS培养基中， 在42下， 培 说 明 书 3/5 页 5 CN 106852939 A 5 养13h， 得到活化的乳杆菌菌种； 0041 其中， MRS培养基的配方为： 在1000mL蒸馏水中加入10g蛋白胨、 8g牛肉浸粉、 20g葡 萄糖、 4g酵母浸膏、 0.05g四水硫酸锰、 1mL吐温80、 2g磷酸氢二钾、 。
23、5g乙酸钠、 0.2g硫酸镁、 2g 柠檬酸二铵； 0042 (2)制备组合菌 0043 将活化的四种菌种以重量份数： 唾液乳杆菌35g、 罗伊氏乳杆菌23g、 鼠李糖乳杆菌 15g、 嗜酸乳酸菌15g混合后， 再将混合菌种以1ml/100ml的接种量接种至培养液中， 在42 下， 培养11h后， 以7000r/min， 在5下， 离心10min， 取沉淀物， 在4下保温10h后， 均质， 得 到组合菌； 0044 (3)制备包被组合菌 0045 将重量份数的： 低聚异麦芽糖35g、 酪蛋白20g、 乳铁蛋白20g、 硝酸纤维素6g加水 1000ml充分混合成包被液， 将组合菌加入包被液混和均。
24、匀； 0046 (4)制备乳酸菌组合物冻干粉 0047 将混和均匀的液体滴加到氯化钙溶液中固化， 过滤后真空冻干12h得到乳酸菌组 合物冻干粉。 在乳酸菌组合物冻干粉中唾液乳杆菌的含量为107109cuf/g、 罗伊氏乳杆菌 的含量为106108cuf/g、 鼠李糖乳杆菌的含量为106107cuf/g、 嗜酸乳酸菌的含量为106 107cuf/g。 0048 下面通过临床试验用于进一步说明本发明。 0049 1、 临床观察 0050 利用本发明乳酸菌组合物冻干粉(按照实施例1方法制备)治疗患者共240例， 均经 妇科检查确诊， 其年龄2048岁， 平均33岁。 随机分为两组， 对照组120例，。
25、 治疗组120例。 0051 2、 药物选择 0052 对照组采用口服康妇炎胶囊(神州制药)， 0.4g/粒， 一次3粒， 一日2次， 连续服用30 天； 0053 治疗组选本发明乳酸菌组合物冻干粉(按照实施例1方法制备)， 一个疗程(30天一 疗程)， 1.5g/袋， 一日二次， 每次2袋， 开水冲服。 0054 3、 诊断标准 0055 阴道分泌物增多， 外阴瘙痒、 灼痛， 可伴有尿频、 尿痛及性交痛； 妇科检查发现阴道 分泌物增多， 阴道粘膜充血或可见散在出血斑点， 阴道后穹隆有多量白带， 呈灰黄色或黄绿 色脓性分泌物， 有时呈泡沫状或白色稠厚凝乳或豆渣样， 外阴可见水肿、 抓痕、 地图。
26、样红斑； 阴道分泌物化验检查发现滴虫或假丝酵母菌的芽孢及菌丝。 0056 4、 疗效评定标准 0057 治愈： 治疗结束后， 临床症状完全消失； 0058 有效： 治疗结束后， 临床症状部分消失， 病情基本缓解； 0059 无效： 治疗结束后， 临床症状基本没有改观， 病情缓解不明显。 0060 具体治疗结果见下表： 0061 组别治疗人数治愈有效无效总有效率 对照组12032394959.2 说 明 书 4/5 页 6 CN 106852939 A 6 治疗组1207542397.5 0062 结论： 治疗组的治愈率为45， 有效率为90， 远远高于对照组。 0063 典型病例 0064 病。
27、例1： 李某某， 50岁。 主诉： 外阴瘙痒已1年多， 伴有尿频、 尿痛及性交痛， 服用西药 半年多， 复发两次。 检查发现， 阴道分泌物增多， 阴道后穹隆有多量白带， 阴道分泌物化验检 查发现滴虫。 服用本发明乳酸菌组合物冻干粉(按照实施例1方法制备)， 一个疗程， 一日二 次， 每次2袋， 开水冲服， 连续10天后， 症状消失， 继续使用20天巩固稳定治疗效果； 随访一年 未见复发。 0065 病例2： 王某， 22岁， 主诉： 外阴瘙痒、 灼痛， 阴道分泌物增多， 妇科检查发现阴道后 穹隆有大量稠厚凝乳样白带， 阴道分泌物检查可见假丝酵母菌的菌丝， 确诊为诊霉菌性阴 道炎。 服用本发明乳酸菌组合物冻干粉(按照实施例1方法制备)， 一个疗程， 一日二次， 每次 2袋， 开水冲服， 连续15天后， 症状消失， 继续使用15天巩固稳定治疗效果； 随访半年未见复 发。 0066 以上是对本发明治疗阴道炎的乳酸菌组合物及其制备方法进行了阐述， 用于帮助 理解本发明， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制， 任何未背离本发明原理下所 作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之 内。 说 明 书 5/5 页 7 CN 106852939 A 7 。