本发明涉及一种抗生素生产发酵方法，特别是一种返入艮他霉素C1a硫酸小诺霉素发酵法。 目前，采用的硫酸小诺霉素发酵法，发酵单位较低，一般在1000单位/毫升左右，并且发酵副产品艮他霉素C1a（GMC1a）占发酵单位40%左右，对人体毒性大，利用率低，尚无有效利用途径。
本发明的目的就是要提供一种返入艮他霉素C1a硫酸小诺霉素发酵法，它能有效地提高硫酸小诺霉素的发酵单位，使发酵副产物艮他霉素C1a（GMC1a）利用率增高。
本发明的目的是这样实现的：返入艮他霉素C1a硫酸小诺霉素发酵法，包括下列发酵工艺过程：沙土管保藏、斜面孢子培养、种液培养、发酵培养。在发酵培养至72小时，培养温度为32±1℃，发酵液PH为6.8-8.0时，在无菌条件下，向发酵培养液中加入艮他霉素C1a（GMC1a），再继续发酵至146小时。加入艮他霉素C1a（GMC1a）后，发酵液的PH值调升为7.5-8.0，发酵培养温度为32±1℃。
本发明由于采用在发酵中途返入发酵副产物艮他霉素C1a（GMC1a），所以，使硫酸小诺霉素（SGM）的发酵单位每毫升含量上升48-69%;同时，又由于艮他霉素C1a（GMC1a）本身是硫酸小诺霉素发酵的副产物，所以，将其回收利用，提高了艮他霉素C1a（GMC1a）的利用价值。本发明还具有操作方便，生产成本低廉等优点。
本发明的具体方法由以下的实施例给出。
返入艮他霉素C1a硫酸小诺霉素发酵法的工艺流程为：
沙土管→F1斜面 (生化培养箱)/(37℃，192小时) F2斜面
(生化培养箱)/(37℃，192小时) 成熟的斜面 (挖块)/(接种) 种子培养基
(摇床培养PH7.2（消前）)/(37℃，40-44小时) 种液 (移入)/(10%的接种量) 发酵培养基
(摇床培养PH8.0（消前）)/(35℃，48小时) 发酵液 (摇床培养PH7.2-7.4)/(32℃，至72小时) 加入艮他霉素C1a（GMC1a） (摇床培养PH7.5-8.0)/(32℃，至146小时) 发酵结束
具体操作步骤如下所述：（实验室上摇床，摇床型号为ZP-96型，转速230转/分钟，使用300毫升大口三角瓶）。
1、将培养成熟的菌种棘孢小单孢菌JRIM-401突变株，斜面挖块接入已灭菌的种子培养基中，上摇床，培养温度为37℃，时间为40-44小时;
2、培养成熟的种液，按10%的接种量，移入已灭菌后的发酵培养基中，培养时间0-48小时，温度为35℃，当培养时间为48小时，温度降为32℃，培养至72小时时，在培养温度32℃，发酵液PH值7.2-7.4时，在无菌条件下，向发酵培养基中加入一定量的艮他霉素C1a（GMC1a），然后，将发酵液PH值调升为7.5-8.0，发酵培养温度32℃不变，（测发酵液PH值用精密试纸6.4-8.0）;
3、发酵培养至146小时时结束发酵，然后用6N硫酸溶液酸化至发酵液PH为2.0（测量PH值用精密试纸0.5-5.0），静置30分钟后，用漏斗滤纸过滤，取滤液测发酵效价组份。
组份鉴定菌为枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501，纸层分析，点样量为0.4微升。
效价鉴定菌为短小芽孢杆菌CMCC（B）63202，稀释样品5单位/毫升。
实施例：
摇床ZP-96型，转速230转/分钟，使用300毫升大口锥形瓶上摇床培养，种子瓶基础料30毫升，发酵基础料27毫升，无菌处理，处理瓶数24瓶，对照瓶数24瓶，PH值测定用精密试纸6.4-8.0，过滤用滤纸、漏斗。
1、将经过冷藏的菌种斜面挖块接种于灭菌后地种子培养基中，培养温度37℃，培养时间41小时;
2、将种液按10%接种量移入发酵培养基中，摇床培养，0-48小时温度为35℃，48小时后降至32℃，72小时加入艮他霉素C1a（GMC1a）750单位/毫升，加入前PH为7.2-7.5，加入后上升PH至7.5-7.7;
3、146小时结束发酵，发酵液用6N硫酸溶液酸化至PH为2.0，静置30分钟，过滤，取滤液，测结果如下：
发酵采用菌种为棘孢小单孢菌JRIM-401突变株。
硫酸小诺霉素（SGM）发酵单位的提高幅度的大小由返入艮他霉素C1a的量、返入时间和发酵控制条件所决定。
培养基成份见下表：
斜面培养基（无盐水配制）种子培养基（自来水配制）发酵培养基（自来水配制）品名 含量（％g/ml)品名 含量(%g/ml)品名 含量（％g/ml)可溶性淀粉 1.0普通淀粉 1.0普通淀粉 4.0麸皮 1.7黄豆饼粉 1.5黄豆饼粉 3.5硫酸镁 0.05玉米粉 2.0玉米粉 1.5硝酸钾 0.1鱼粉 0.5鱼粉 0.2氯化钠 0.05葡萄糖 0.1萄葡糖 0.5天冬素 0.002硝酸钾 0.05蛋白胨 0.2磷酸氢二钾 0.03碳酸钙 0.4硝酸钾 0.01碳酸钙 0.1PH 7.2(消前)硫酸镁 0.05琼脂 1.8氯化钴 16微克／毫升PH 7.5（消前）碳酸钙 0.4PH 8.0(消前）