《一种皱皮木瓜提取物、组合物及用途.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种皱皮木瓜提取物、组合物及用途.pdf（14页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610899003.2 (22)申请日 2016.10.14 (71)申请人 三峡大学 地址 443002 湖北省宜昌市大学路8号 (72)发明人 汪鋆植 叶红 张琳 贺海波 王爱玲 吕慧芳 余海立 张宏岐 苏香萍 (74)专利代理机构 宜昌市三峡专利事务所 42103 代理人 蒋悦 (51)Int.Cl. A61K 36/732(2006.01) A61P 19/06(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A23L 19/00(2016.01) A23。
2、L 33/105(2016.01) (54)发明名称 一种皱皮木瓜提取物、 组合物及用途 (57)摘要 本发明提供一种皱皮木瓜提取物及组合物， 实时的皱皮木瓜提取物为皱皮木瓜醇提物， 其组 合物为皱皮木瓜与硫磺菌醇提物、 或皱皮木瓜与 硫磺菌与芹菜醇提物。 本发明中硫磺菌提取物具 有黄嘌呤氧化酶有抑制作用， 可调节尿酸代谢， 从而防治高尿酸血症和痛风。 皱皮木瓜， 硫磺菌； 皱皮木瓜， 硫磺菌， 芹菜组合可增强黄嘌呤氧化 酶有抑制， 调节尿酸代谢作用。 权利要求书1页 说明书11页 附图1页 CN 106511528 A 2017.03.22 CN 106511528 A 1.一种皱皮木瓜提取。
3、物及组合物， 其特征在于， 皱皮木瓜提取物为皱皮木瓜醇提物， 其 组合物为皱皮木瓜与硫磺菌醇提物、 或皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物。 2.权利要求1所述的皱皮木瓜提取物及组合物， 其特征在于， 所述的皱皮木瓜提取物为 皱皮木瓜在60-80下烘干后粉碎并过20-100目， 50-95%乙醇回流提取， 减压浓缩， 30-60 真空干燥后即得皱皮木瓜醇提物。 3.权利要求1所述的皱皮木瓜提取物及组合物， 其特征在于， 所述的皱皮木瓜与硫磺菌 醇提物为皱皮木瓜与硫磺菌丝体分别在60-80下烘干后粉碎并过20-100目， 50-95%乙醇 回流提取三次， 每次加6-15倍量 （w/w） 的乙醇， 合并滤。
4、液， 减压浓缩， 30-60真空干燥后即 得皱皮木瓜与硫磺菌醇提物； 其中， 皱皮木瓜与硫磺菌丝体的质量比为1： 0.1-0.5。 4.权利要求3所述的皱皮木瓜提取物及组合物， 其特征在于， 皱皮木瓜与硫磺菌丝体的 质量比为1： 0.2。 5.权利要求1所述的皱皮木瓜提取物及组合物， 其特征在于， 所述的皱皮木瓜与硫磺菌 与芹菜醇提物为皱皮木瓜、 硫磺菌丝体、 芹菜分别在60-80下烘干后粉碎并过20-100目， 50-95%乙醇回流提取三次， 每次加6-15倍量 （w/w） 的乙醇， 合并滤液， 减压浓缩， 30-60真 空干燥后即得皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物； 其中， 皱皮木瓜、 硫磺菌。
5、丝体、 芹菜的质量 比为1： 0.1-0.3： 0.4-0.8。 6.权利要求5所述的皱皮木瓜提取物及组合物， 其特征在于， 皱皮木瓜、 硫磺菌丝体、 芹 菜的质量比为1： 0.2： 0.5。 7.权利要求3-6任意一项所述的皱皮木瓜提取物及组合物， 其特征在于， 所述的硫磺菌 丝体的制备方法如下： 液体培养基的制备： 按15： 15： 2： 100的比例分别称取葡萄糖、 黄豆粉、 KH2PO4、 皱皮木瓜， 先将皱皮木瓜用适量沸水煮30 min， 纱布过滤， 皱皮木瓜残渣再加水过滤一次， 取滤液加葡 萄糖、 黄豆粉、 KH2PO4并加水定容到1000 mL， 充分溶解后， 分装于500 mL。
6、三角瓶中， 装量为 200 mL， 1.15 Mpa 121蒸气下灭菌20分钟后取出， 冷却后贮存备用； 菌体活化： 将保存于-4试管斜面上备用的硫磺菌菌株按无菌操作接入事先准备好的 PDA平板中， 在28恒温室里培养3-7天； 扩大培养： 按无菌操作将已培养好的硫磺菌菌株接入已做好的液体培养基中， 接种300 瓶， 在25条件下静置培养60天， 培养结束后用双层纱布过滤， 得到硫磺菌菌丝体。 8.权利要求1-7任意一项所述的皱皮木瓜提取物及组合物在制备抑制体外对黄嘌呤氧 化酶活性的药物上的应用。 9.权利要求1-7任意一项所述的皱皮木瓜提取物及组合物在制备治疗高尿酸血症的药 物上的应用。 1。
7、0.权利要求1-7任意一项所述的皱皮木瓜提取物及组合物在制备治疗急性通风关节 炎的药物上的应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106511528 A 2 一种皱皮木瓜提取物、 组合物及用途 技术领域 0001 本发明提供一种皱皮木瓜提取物及组合物， 具体为皱皮木瓜提取物为皱皮木瓜醇 提物， 其组合物为皱皮木瓜与硫磺菌醇提物、 或皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物。 属于食 品、 制药领域。 背景技术 0002 皱皮皱皮木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai的干 燥成熟果实,主产于湖北省长阳土家族自治县， 是我省著名的食药两用品。 具有舒。
8、筋活络、 和胃化湿的功效,用于治疗腰酸腿痛、 风湿性关节炎、 四肢转筋、 大吐泻、 脚气水肿等疾病。 还具有抗炎、 抑菌、 降脂、 抗等多种作用。 皱皮木瓜不仅具有独特的药用价值， 还具有良好的 营养、 保健作用。 其营养价值不亚于弥猴桃， 民间有 “杏一益、 梨二益、 皱皮木瓜百益” 之说， 具有很好的开发价值。 皱皮木瓜含大量有机酸、 维生素、 多种蛋白酶和大量黄酮、 皂苷类化 合物。 不仅被广泛用于生产皱皮木瓜丸、 风络痛片、 皱皮木瓜酒等多种中成药， 还用于生产 皱皮木瓜护肤品、 皱皮木瓜香皂、 洗面奶、 沐浴露等化妆洗浴用品， 同时也是生产皱皮木瓜 片、 饮料等一系列保健食品的原料。。
9、 0003 已有文献报导木瓜组成中药复方治疗高尿酸血症和痛风， 其作用主要从抗炎机制 进行研究。 我们证明木瓜、 硫磺菌通过抑制黄嘌呤氧化酶活性， 达到防治高尿酸血症和痛风 的作用。 首次从食品角度为防治高尿酸血症和痛风提供了木瓜功能性食品。 形成了皱皮木 瓜与硫磺菌、 或皱皮木瓜与硫磺菌及芹菜防治高尿酸血症和痛风的组合物。 发现硫磺菌醇 提物可通过抑制黄嘌呤氧化酶活性， 用于防治高尿酸血症和痛风。 发明内容 0004 皱皮皱皮木瓜(湖北省宜昌市长阳土家族自治县)， 芹菜(市售)， 硫磺菌来源(供试 菌种硫磺菌由三峡大学湖北省天然产物重点实验室分离并保藏)。 0005 所用皱皮木瓜为蔷薇科植物。
10、贴梗海棠(Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai)的 干燥成熟果实； 硫磺菌为多孔菌科真菌硫磺菌(Laetiporus sulphureus(Fr.)Murrill)的 菌丝体或子实体； 芹菜为属伞形科植物芹菜(Apium graveolens L.)的茎叶。 0006 本发明提供一种皱皮木瓜提取物及组合物， 皱皮木瓜提取物为皱皮木瓜醇提物， 其组合物为皱皮木瓜与硫磺菌醇提物、 或皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物。 0007 所述的皱皮木瓜提取物为皱皮木瓜在60-80下烘干后粉碎并过20-100目， 50- 95乙醇回流提取， 减压浓缩， 30-60真空干燥后即得皱皮木瓜。
11、醇提物。 0008 所述的皱皮木瓜与硫磺菌醇提物为皱皮木瓜与硫磺菌丝体分别在60-80下烘干 后粉碎并过20-100目， 50-95乙醇回流提取三次， 每次加6-15倍量(w/w)的乙醇， 合并滤 液， 减压浓缩， 30-60真空干燥后即得皱皮木瓜与硫磺菌醇提物； 其中， 皱皮木瓜与硫磺菌 丝体的质量比为1： 0.1-0.5， 进一步优选为皱皮木瓜与硫磺菌丝体的质量比为1： 0.2。 0009 所述的皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物为皱皮木瓜、 硫磺菌丝体、 芹菜分别在60- 说 明 书 1/11 页 3 CN 106511528 A 3 80下烘干后粉碎并过20-100目， 50-95乙醇回流提。
12、取三次， 每次加6-15倍量(w/w)的 乙醇， 合并滤液， 减压浓缩， 30-60真空干燥后即得皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物； 其 中， 皱皮木瓜、 硫磺菌丝体、 芹菜的质量比为1： 0.1-0.3： 0.4-0.8。 进一步优选为皱皮木瓜、 硫磺菌丝体、 芹菜的质量比为1： 0.2： 0.5。 0010 所述的硫磺菌丝体的制备方法如下： 0011 液体培养基的制备： 按15： 15： 2： 100的比例分别称取葡萄糖、 黄豆粉、 KH2PO4、 皱皮 木瓜， 先将皱皮木瓜用适量沸水煮30min， 纱布过滤， 皱皮木瓜残渣再加水过滤一次， 取滤液 加葡萄糖、 黄豆粉、 KH2PO4并加水定容。
13、到1000mL， 充分溶解后， 分装于500mL三角瓶中， 装量为 200mL， 1.15Mpa 121蒸气下灭菌20分钟后取出， 冷却后贮存备用； 0012 菌体活化： 将保存于-4试管斜面上备用的硫磺菌菌株按无菌操作接入事先准备 好的PDA平板中， 在28恒温室里培养3-7天； 0013 扩大培养： 按无菌操作将已培养好的硫磺菌菌株接入已做好的液体培养基中， 接 种300瓶， 在25条件下静置培养60天， 培养结束后用双层纱布过滤， 得到硫磺菌菌丝体。 0014 本发明将所述的皱皮木瓜提取物及组合物在制备抑制体外对黄嘌呤氧化酶活性 的药物上的应用。 0015 本发明将所述的皱皮木瓜提取物及。
14、组合物在制备治疗高尿酸血症的药物上的应 用。 0016 本发明将所述的皱皮木瓜提取物及组合物在制备治疗急性通风关节炎的药物上 的应用。 附图说明 0017 图1为齿孔酸高效液相色谱图。 具体实施方式 0018 动物与细胞株 昆明雄性SPF级小鼠， 体质量20g-25g， 由三峡大学实验动物中心提 供。 0019 动物生产许可证号为： SYXK(鄂)2011-0012。 在恒温(242)、 光照周期12h:12h 环境中饲养1周后实验， 实验动物设施使用许可证号： SYXK(鄂)2011-0061， 动物生产许可证 号为： SCXK(鄂)2011-0012。 0020 Sprague-Dawle。
15、y雄性SPF级大鼠， 体质量200g20g， 由三峡大学实验动物中心提 供。 动物生产许可证号为： SYXK(鄂)2011-0012。 在恒温(242)、 光照周期12h:12h环境中 饲养1周后实验， 实验动物设施使用许可证号： SYXK(鄂)2011-0061。 0021 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)购自中国典型培养物保藏中心细胞库， 由本实验室传 代保藏。 0022 试剂 0023 黄嘌呤(Sigma)， 氧嗪酸钾(阿拉丁)， 酵母浸粉(安琪酵母)， 别嘌醇(世贸天阶)， 黄 嘌呤氧化酶、 尿酸(UA)试剂盒、 黄嘌呤氧化酶(XOD)试剂盒(南京建成)， 其它试剂为分析纯， 尿酸(上海。
16、源叶)， 吲哚美辛(Sigma)， DMEM粉(美国Gibco司产品， 应用液中另加1.8g碳酸氢 钠)， 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)、 二甲基亚砜(DMSO)(Sigma)， 青 说 明 书 2/11 页 4 CN 106511528 A 4 霉素、 链霉素(华北制药股份有限公司),进口新生胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限 公司)， 大鼠白介素1(IL-1 )及肿瘤坏死因子- (TNF- )ELISA检测试剂盒(达科为生物技术 有限公司)， 其它为分析纯。 0024 仪器 0025 超净工作台(苏州净化设备厂)， 立式压力蒸汽灭菌锅(日本HIRAY。
17、AMA)， JA2003型 电子分析天平(上海天平仪器厂)， infinite 200酶标仪(瑞士Tecan公司)， 5415D微型台式 高速离心机(德国Eppendof公司)， pH计(上海仪电科学)， 超纯水仪(艾科浦公司)， -80超 低温冰箱(海尔集团)， 真空冷冻干燥机(美国LABCONCO公司)， YLS-7B足爪足趾容量测定仪 (上海欣软信息科技有限公司)， 96孔板(美国Corning公司)， KX41型倒置显微镜(Olympus)， 3111CO2培养箱(美国Thermo)。 0026 药品处理及微晶尿酸钠(MSU)制备 0027 硫磺菌： 液体培养基的制备按15:15:2:。
18、100的比例分别称取葡萄糖、 黄豆粉、 KH2PO4、 皱皮木瓜， 先将皱皮木瓜用适量沸水煮30min， 纱布过滤， 皱皮木瓜残渣再加水过滤 一次， 取滤液加葡萄糖、 黄豆粉、 KH2PO4并加水定容到1000mL。 充分溶解后， 分装于500mL三角 瓶中， 装量为200mL， 1.15Mpa蒸气(121)灭菌20分钟左右后取出， 冷却后贮存备用； 菌体活 化将保存于-4试管斜面上备用的硫磺菌菌株按无菌操作接入事先准备好的PDA平板中， 在恒温室里培养(28)3天； 扩大培养按无菌操作将已培养好的硫磺菌菌株接入已做好的 液体培养基中， 接种300瓶。 在25条件下静置培养60天， 培养结束后。
19、用双层纱布过滤， 得到 硫磺菌菌丝体。 0028 齿孔酸： 硫磺菌菌丝体95乙醇回流提取， 减压浓缩除去溶剂， 即为粗提物， 经乙 醇-水重结晶及正相硅胶柱层析石油醚： 乙酸乙酯(3:1)分离纯化， 得齿孔酸， 经HPLC分析齿 孔酸纯度95， 如图1。 0029 所述的皱皮木瓜提取物为皱皮木瓜在60-80下烘干后粉碎并过20-100目， 95 乙醇回流提取， 减压浓缩， 30-60真空干燥后即得皱皮木瓜醇提物。 0030 所述的皱皮木瓜与硫磺菌醇提物为皱皮木瓜与硫磺菌丝体分别在60-80下烘干 后粉碎并过20-100目， 95乙醇回流提取三次， 每次加6-15倍量(w/w)的乙醇， 合并滤液。
20、， 减 压浓缩， 30-60真空干燥后即得皱皮木瓜与硫磺菌醇提物； 其中， 皱皮木瓜与硫磺菌丝体 的质量比为1： 0.2。 0031 所述的皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物为皱皮木瓜、 硫磺菌丝体、 芹菜分别在60- 80下烘干后粉碎并过20-100目， 95乙醇回流提取三次， 每次加6-15倍量(w/w)的乙醇， 合并滤液， 减压浓缩， 30-60真空干燥后即得皱皮木瓜与硫磺菌与芹菜醇提物； 其中， 皱皮 木瓜、 硫磺菌丝体、 芹菜的质量比为1： 0.2： 0.5。 0032 微晶尿酸钠(MSU)制备： 无菌条件下， 1g尿酸溶解于97mL煮沸的蒸馏水， 加入3mL 1M NaOH助溶， 于60。
21、调节pH值为8.9， 4冰箱保存24h， 过滤， 蒸馏水洗涤， 烘干， 得微晶尿 酸钠。 0033 药物体外对黄嘌呤氧化酶活性抑制作用 0034 溶剂的配制 缓冲液:准确称取KH2PO4、 K2HPO43H2O、 EDTA-2Na， 超纯水溶解， 配制 0.2mol/L(pH7.50)的磷酸盐缓冲液。 底物溶液配制:准确称取黄嘌呤， 超纯水溶解， 制得 1.5mmol/L储备液， 临用前稀释成不同浓度的黄嘌呤溶液。 酶液配制:缓冲液配制成0.16U的 说 明 书 3/11 页 5 CN 106511528 A 5 XOD储备液， 临用前取适量酶储备液用缓冲液稀释成不同浓度的工作酶液， 实验过程。
22、中将工 作酶液置于冰水浴保存。 供试药物配制:体外实验， 精密称取适量样品， 二甲基亚砜： 无水甲 醇(1:9)制成不同浓度。 0035 药物对黄嘌呤氧化酶活力的影响 黄嘌呤氧化酶在适宜条件下能催化黄嘌呤生成 尿酸,尿酸在295nm处有特征吸收峰。 酶反应初速度一定， 记录每分钟295nm处吸光度的增加 可以计算黄嘌呤氧化酶酶活(dA/min)。 将样品及空白溶液(磷酸缓冲液)100 L、 浓度为 0.04U/mL黄嘌呤氧化酶液50 l， 依次加入96孔板， 37孵育3min， 加入浓度为0.48mmol/L黄 嘌呤溶液启动反应， 在295nm波长下每隔15s读数一次， 记录吸光度A， 共计5。
23、min。 计算抑制 率： 抑制率()(dA/dt)空白-(dA/dt)样品/(dA/dt)空白100。 其中(dA/dt)空白为空 白组的反应速率， (dA/dt)样品为样品组反应速率。 本试验以别嘌呤醇作为阳性对照,配制 不同浓度的样品进行试验， 并计算药物对黄嘌呤氧化酶活性的抑制率。 0036 药物对高尿酸血症的影响 0037 高尿酸血症动物模型建立 0038 分组66只雄性昆明小鼠随机分成11组： 空白组、 高尿酸血症模型组、 别嘌呤醇组 (5mg/kg)、 齿孔酸低剂量组(80mg/kg)、 齿孔酸高剂量组(160mg/kg)、 皱皮木瓜醇提物低 (80mg/kg)、 皱皮木瓜醇提物高。
24、(160mg/kg)、 皱皮木瓜&硫磺菌醇提物低(80mg/kg)、 皱皮木 瓜&硫磺菌醇提物高(160mg/kg)、 皱皮木瓜&硫磺菌&芹菜醇提物低(80mg/kg)、 皱皮木瓜&硫 磺菌&芹菜醇提物高(160mg/kg)， 其中皱皮木瓜&硫磺菌醇提物组二者醇提物为1:0.2， 皱皮 木瓜&硫磺菌&芹菜醇提物组三者醇提物比例为1:0.2:0.5， 精密称取适量样品， 0.5的羧 甲基纤维素钠溶液(CMC-Na)配制成所需浓度的混悬液， 灌胃给药。 0039 造模及给药方式 灌胃给药， 给药体积为： 10mL/kg， 每组6只。 每天1次， 连续7天， 空 白组和模型组大鼠均给予相应体积的0.。
25、5CMC-Na， 第8天开始造模， 给药1小时后造模， 除 空白组给予生理盐水外， 其他各组均灌胃给予21g/kg酵母， 250mg/kg氧嗪酸钾造模， 连续5 天。 实验小鼠处死前12小时禁食不禁水， 第12天造模1小时后， 眼球取血， 血液室温静置1小 时， 3000r/min离心15分钟， 分离血清。 取各组小鼠肝脏组织， -80冰箱保存。 0040 肝脏、 肾脏指数计算 分别称量各组小鼠体重， 眼球取血后， 解剖取肝脏、 肾脏并称 重， 计算指数： 肝脏/肾脏指数()(内脏重量/体重)100 0041 药物对高尿酸血症动物模型血尿酸(UA)、 血XOD、 肝脏XOD的影响 按照南京建成。
26、生 物工程研究所的试剂盒说明书操作， 检测各组血清中尿酸、 黄嘌呤氧化酶活性。 实验时， 各 组小鼠取50mg肝脏用玻璃匀浆器按组织： 生理盐水1:9的比例， 在冰浴中研磨， 即得肝脏 组织匀浆， 20000r/m离心15min， 取上清， 测定肝脏黄嘌呤氧化酶活性。 0042 药物对急性痛风细胞模型的影响 0043 细胞培养常用试剂及药物配制 DMEM培养液： 取DMEM粉末培养基一包， 加950mL三 蒸水， 加入5mL 100U/mL的青霉素和链霉素， 混匀， 溶解后定容到1000mL， 经0.22 m滤膜真空 过滤除菌， 分装， 4保存， 用时加入10进口胎牛血清。 PBS缓冲溶液： 。
27、称取氯化钠8g， 磷酸 二氢钾0.2g， 磷酸氢二钠1 .42g和氯化钾0.2g， 加入900mL三蒸水， 充分溶解后定容到 1000mL， 121灭菌30min， 4保存。 MTT溶液： 精确称MTT粉末0.25g， 加入50mLPBS中， 充分溶 解， 经0.22 m滤膜真空过滤除菌， 分装， 4避光保存。 齿孔酸和吲哚美辛储备液： 准确称取 齿孔酸10.0mg， 加入40 LDMSO， 再加入40 L无水乙醇和20 L乙酸乙酯， 混匀震荡溶解； 准确 说 明 书 4/11 页 6 CN 106511528 A 6 称吲哚美辛10.0mg， 加入40 LDMSO， 再加入60 L无菌水， 。
28、混匀震荡溶解。 在超净工作台内， 用 0.22 m滤膜将储备液过滤除菌， 室温保存， 使用时用含10血清的培养基稀释到目标浓度。 使DMSO和无水乙醇于细胞培养液中的终浓度分别保持小于0.1和1。 0044 急性痛风细胞模型建立 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)， 贴壁生长， 用DMEM培养基于 37、 5CO2、 饱和湿度条件下的细胞培养箱中无菌培养。 培养液为含10NBS、 100U/mL青 霉素和100U/mL链霉素的完全DMEM细胞培养基， 细胞单层长到培养瓶80时传代。 急性痛风 细胞模型建立培养细胞按1105个/mL的密度种植于96孔培养板中， 加入终浓度为100 g/ mL MSU。
29、,37， 5CO2培养箱中培养24h， 建立急性痛风细胞模型。 0045 药物对急性痛风细胞模型影响 四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)： 建立急 性痛风细胞模型， 将不同的浓度药物样品， 加入到96孔培养板中， 每个浓度梯度设6个复孔， 并设置空白孔(含细胞的培养液+MTT+DMSO)、 高剂量药物孔(含细胞的培养液+100 g/mL药 物+MTT+DMSO)、 中剂量药物孔(含细胞的培养液+50 g/mL药物+MTT+DMSO)、 低剂量药物孔 (含细胞的培养液+25 g/mL药物+MTT+DMSO)及调零孔(培养液+MTT+DMSO)。 继续培养48h后， MTT试剂(5mg/mL。
30、)显色， 酶标仪490nm波长下测其OD值。 0046 药物对急性痛风性关节炎大鼠模型的影响 0047 急性痛风性关节炎模型的构建与给药方式 0048 66只雄性昆明小鼠随机分成11组： 空白组、 高尿酸血症模型组、 吲哚美辛组(3mg/ kg)、 齿孔酸低剂量组(40mg/kg)、 齿孔酸高剂量组(80mg/kg)、 皱皮木瓜醇提物低(40mg/ kg)、 皱皮木瓜醇提物高(80mg/kg)、 皱皮木瓜&硫磺菌醇提物低(40mg/kg)、 皱皮木瓜&硫磺 菌醇提物高(80mg/kg)、 皱皮木瓜&硫磺菌&芹菜醇提物低(40mg/kg)、 皱皮木瓜&硫磺菌&芹 菜醇提物高(80mg/kg)， 。
31、其中皱皮木瓜&硫磺菌醇提物组二者醇提物为1:0.2， 皱皮木瓜&硫 磺菌&芹菜醇提物组三者醇提物比例为1:0.2:0.5， 精密称取适量样品， 0.5的羧甲基纤维 素钠溶液(CMC-Na)配制成所需浓度的混悬液， 灌胃给药。 连续给药7天， 在第5天给药后2小 时， MSU(生理盐水混悬)10mg/只注射进入大鼠右后肢关节腔， 0.05mL/只， 进针点为右后肢 足内踝后缘， 针向胫跗关节腔， 进针点为右后肢踝关节外侧后缘， 针口斜面朝前上方与胫骨 成45 夹角穿向踝关节腔， 以关节囊对侧鼓起为注入标准， 同时正常组给予同等体积的生理 盐水。 0049 药物对急性痛风性关节炎模型足肿胀影响 造。
32、模后4h， 用足容积法测取右后肢小 腿踝关节同一部位体积(取均值)， 计算肿胀率。 0050 肿胀率(致炎后足肿胀-致炎前足肿胀)/致炎前足肿胀100 0051 药物对急性痛风性关节炎大鼠模型血尿酸(UA)、 血XOD、 肝脏XOD的影响 按照南京 建成生物工程研究所的试剂盒说明书操作， 检测各组血清中尿酸、 黄嘌呤氧化酶活性。 实验 时， 各组小鼠取50mg肝脏用玻璃匀浆器按组织： 生理盐水1:9的比例， 在冰浴中研磨， 即得 肝脏组织匀浆， 20000r/m离心15min， 取上清， 测定肝脏黄嘌呤氧化酶活性。 0052 药物体外对黄嘌呤氧化酶抑制作用 0053 别嘌呤醇对黄嘌呤氧化酶有抑。
33、制作用， 其IC50为12.44 g/mL， 与文献所述相近， 齿 孔酸、 硫磺菌醇提物、 皱皮木瓜醇提物、 皱皮木瓜&硫磺菌醇提物、 皱皮木瓜&硫磺菌&芹菜醇 提物对黄嘌呤氧化酶活性均有抑制作用， 其IC50分别为201.31 g/mL， 319.45 g/mL， 181.29 g/mL， 82.59 g/mL， 见表1。 说 明 书 5/11 页 7 CN 106511528 A 7 0054表1药物黄嘌呤氧化酶活性的影响 0055 0056 药物对高尿酸血症动物模型的影响 0057 药物对高尿酸血症动物模型肝脏、 肾脏指数的影响 高尿酸血症模型组与空白对 照组比， 肝脏指数、 肾脏指数均。
34、升高， 且有显著性差异(P0.01)， 别嘌呤醇和各样品组均降 低高尿酸血症动物模型肝脏指数， 与模型组相比差异有显著性(P0.01或P0.05)， 见表2。 0058表2药物对高尿酸血症动物模型肝脏、 肾脏指数的影响 0059 说 明 书 6/11 页 8 CN 106511528 A 8 0060 0061 注： *与模型组相比P0.05； *与模型组相比P0.01 0062 药物对高尿酸血症动物模型血尿酸(UA)、 血XOD、 肝脏XOD的影响 高尿酸血症模型 组与空白对照组比， 血尿酸、 血XOD、 肝脏XOD升高， 有显著性差异(P0.01)， 别嘌呤醇和各样 品组均降低血尿酸、 血。
35、XOD、 肝脏XOD水平， 与模型组相比差异有显著性(P0.01或P0.05)， 见表3。 0063表3药物对高尿酸血症动物模型血清UA、 血清XOD、 肝脏XOD的影响 0064 说 明 书 7/11 页 9 CN 106511528 A 9 0065 0066 注： *与模型组相比P0.05； *与模型组相比P0.01 0067 药物对急性痛风细胞模型的影响 0068 用噻唑蓝法(MTT)测定实验后剩余HUVEC细胞活力， 如图所示。 MTT检测MSU刺激48h 后各组细胞OD值， 计算细胞活力： 细胞活力各组细胞OD值/空白组100。 0069表4药物对对急性痛风细胞模型的影响 说 明 。
36、书 8/11 页 10 CN 106511528 A 10 0070 0071 药物对急性痛风性关节炎动物模型的影响 0072 药物对急性痛风性关节炎动物模型足肿胀的影响 MSU造模后4h， 足肿胀达到最高 峰， 检测此时各组动物右后足肿胀， 计算足肿胀度。 0073表5药物对急性痛风性关节炎动物模型足肿胀影响 说 明 书 9/11 页 11 CN 106511528 A 11 0074 0075 注： *与模型组相比P0.05； *与模型组相比P0.01 0076 药物对急性痛风性关节炎动物模型血尿酸(UA)、 血XOD、 肝脏XOD的影响 急性痛风 性关节炎模型组与空白对照组比， 血尿酸、 血XOD、 肝脏XOD升高， 有显著性差异(P0.01)， 别 嘌呤醇和各样品组均降低血尿酸、 血XOD、 肝脏XOD水平， 与模型组相比差异有显著性(P 0.01或P0.05)， 见表6。 0077表6药物对高尿酸血症动物模型血清UA、 血清XOD、 肝脏XOD的影响 说 明 书 10/11 页 12 CN 106511528 A 12 0078 0079 注： *与模型组相比P0.05； *与模型组相比P0.01。 说 明 书 11/11 页 13 CN 106511528 A 13 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 14 CN 106511528 A 14 。