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1、(10)申请公布号 CN 102119937 A (43)申请公布日 2011.07.13 CN 102119937 A *CN102119937A* (21)申请号 201110048560.0 (22)申请日 2011.03.01 A61K 35/64(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 通化卫京药业股份有限公司 地址 134000 吉林省通化市长流大街 16 号 (72)发明人 曾英姿 王洪飞 周立运 (74)专利代理机构 北京华科联合专利事务所 11130 代理人 王为 (54) 发明名称 蝎毒注射液在治疗癌症中的应用 (57) 摘要 本发明属于药。
2、物领域， 涉及一种注射用制剂， 具体涉及一种蝎毒注射液在治疗和预防癌症方面 的应用。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 6 页 CN 102119942 A1/1 页 2 1. 蝎毒注射液在制备治疗癌症的药物中的应用。 2. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于， 所述癌症包括 ： 鼻咽癌， 肺癌， 胃癌， 肝癌， 白血病， 乳腺癌， 食管癌， 直肠癌， 宫颈癌， 脑肿瘤。 3. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于， 所述蝎毒注射液能够抑制肿瘤细胞生长， 提高放疗疗效， 减轻放疗毒副作用， 提高机体的免。
3、疫功能， 保护和增强造血机能， 改善机体 一般状况， 从而提高患者的生存质量， 达到延长生存期的目的。 4. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于， 所述蝎毒注射液采用肌肉注射， 每日 1 2 次， 每次 10 20g， 全日剂量一般不超过 40g， 7 10 天为一疗程。 5.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述蝎毒注射液由东亚钳蝎毒素和0.9 Nacl 生理盐水配置而成。 6. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于， 所述蝎毒注射液以每安瓿含溶液 1ml 计， 内含蝎毒蛋白 102ug。 7. 根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于， 所述蝎毒注射液的制备方法包括。
4、以下步 骤 ： 提取毒素 ： 将待提毒蝎子置无菌、 温度为 16-20工作室内， 采用电脉冲器对蝎子进行 电脉冲刺激， 使蝎子将体内毒液排出 ； 在无菌条件下过滤， 0以下低温干燥， 得白色或微黄 色粉末即为蝎毒原料 ； 置密闭瓶中于 -20以下低温室中保存备用 ； 配置溶液 ： 在无菌、 0以下低温条件下将蝎毒原料按 0.5mg/ml 浓度溶于生理盐水中， 成原液， 用0.2um除菌膜除菌过滤， 按10ug/ml的蛋白浓度在无菌条件下就爱那个原液用灭 菌生理盐水进行稀释， 并按 1ml/ 瓶分装于安瓿内， 封口即可。 权 利 要 求 书 CN 102119937 A CN 102119942。
5、 A1/6 页 3 蝎毒注射液在治疗癌症中的应用 技术领域 0001 本发明属于药物领域， 涉及一种注射用制剂， 具体涉及一种蝎毒注射液在治疗和 预防癌症方面的应用。 背景技术 0002 蝎毒注射液由东亚钳蝎毒素和生理盐水配置而成。蝎毒注射液为水针剂， 为无色 澄清液体。蝎毒注射液的具体制备方法可以参考中国专利 CN1192908。蝎毒注射液属于现 有产品， 能够在医院或者药店购买到。 0003 目前， 蝎毒注射液主要用于治疗 ： 1、 神经疼痛 ： 枕大神经痛、 肩臂痛、 坐骨神经痛、 三叉神经痛、 周围神经痛及带状疱疹性神经痛等到 ； 2、 癌症疼痛 ： 各种晚期癌症非手术治 疗疼痛患者 。
6、； 3、 关节疼痛 ： 骨关节病和肩周炎等。4、 术后疼痛 ： 用于骨科、 普通外科、 妇科等 中等以上手术后镇痛， 于手术麻醉期过后出现疼痛者 ； 应用范围优势顺序 ： 神经疼痛癌 症疼痛关节疼痛术后疼痛。 0004 长期以来， 人们把蝎毒注射液主要用作治疗身体疼痛， 取得了较好的效果。 发明人 在经过不断的研究后意外的发现， 蝎毒注射液还可以用作治疗和预防癌症。 通过治疗后， 使 得患者的生存质量在治疗中得以提高。 发明内容 0005 本发明的目的在于提供蝎毒注射液在用于制备治疗癌症的药物中的应用。 0006 本发明所述癌症包括 ： 鼻咽癌， 肺癌， 胃癌， 肝癌， 白血病， 乳腺癌， 食。
7、管癌， 直肠癌， 宫颈癌， 脑肿瘤等。 0007 本发明所述蝎毒注射液由东亚钳蝎毒素和 0.9 Nacl 生理盐水配置而成。 0008 本发明所述蝎毒注射液的制备方法包括以下步骤 ： 0009 (1) 提取毒素 ： 0010 将待提毒蝎子置无菌、 温度为 16-20工作室内， 采用电脉冲器对蝎子进行电脉冲 刺激， 使蝎子将体内毒液排出 ； 在无菌条件下过滤， 0以下低温干燥， 得白色或微黄色粉末 即为蝎毒原料 ； 置密闭瓶中于 -20以下低温室中保存备用 ； 0011 (2) 配置溶液 ： 0012 在无菌、 0以下低温条件下将蝎毒原料按 0.5mg/ml 浓度溶于生理盐水中， 成原 液， 用。
8、0.2um除菌膜除菌过滤， 按10ug/ml的蛋白浓度在无菌条件下就爱那个原液用灭菌生 理盐水进行稀释， 并按 1ml/ 瓶分装于安瓿内， 封口即可。 0013 本发明所述蝎毒注射液以每安瓿含溶液 1ml 计， 内含蝎毒蛋白 102ug。 0014 本发明所述蝎毒注射液采用肌肉注射， 每日 1 2 次， 每次 10 20g， 全日剂量 一般不超过 40g， 7 10 天为一疗程。 0015 通过以下试验进一步说明本发明的有益效果。 0016 药理、 临床试验材料 ： 说 明 书 CN 102119937 A CN 102119942 A2/6 页 4 0017 蝎毒注射液对肿瘤细胞生长的抑制作。
9、用 0018 1 材料 0019 1.1 主要试剂和仪器 0020 蝎毒注射液， 由通化卫京药业股份有限公司提供， 批号 20020819 ； RPMI1640 培养 基 ： Gibco 产品 ； 胎牛血清 ： Hyclone 产品 ； MTT、 DMSO、 胰蛋白酶 ： 均为 Sigma 产品。恒温 CO2 培养箱 ： 德国Heraeus公司 ； 倒置生物显微镜 ： 日本OLYMPUS ； 高速低温离心机 ： Sigma公司 ； AKTA explorer100 蛋白纯化仪 ： Amershampharmacia 公司 ； 酶联免疫检测仪 ： 美国 BIO-RAD 公司。 0021 1.2 。
10、细胞株 0022 人低分化鼻咽癌CNE-2Z细胞、 肺癌A549细胞、 人低分化胃腺癌细胞BGC-823、 人肝 癌细胞SMMC-7721、 人红白血病K562及K562/ADM细胞株、 食管癌CaEs-17细胞， 直肠癌细胞 Colo320， 宫颈癌 Hela 细胞， 脑肿瘤干细胞 BTSC 均由中国药科大学新药筛选中心提供。 0023 1.3 实验方法 0024 (1) 细胞培养 ： 以上细胞 ( 除 BTSC 外 ) 于含 10小牛血清的 RPMI 1640 培养液 中 ( 含 100U/mL 青霉素和链霉素 ) 培养， BTSC 于 DMEM/F12 培养基 ( 添加 bFGF 和 E。
11、GF) 中 培养。K562 及 K562/ADM 细胞每 2 3 天传代 1 次 ； CNE-2Z、 A549、 BGC-823 和 SMMC-7721、 CaEs-17、 Colo320、 Hela、 BTSC 细胞生长呈 80左右融合状态时， 采用胰酶消化的方法消 化分离细胞， 用 RPMI1640 培养液制备单细胞悬液并调整合适的细胞浓度， 分瓶传代， 置于 37、 体积分数为 5 CO2的湿化环境中培养， 实验时用对数生长期细胞。 0025 (2) 实验分组 ： 蝎毒注射液分为 3 个浓度组， 终浓度依次为 1、 10 和 100mg/L ； 阳性 对照组 A549、 BGC-823、。
12、 K562 及 K562/ADM、 CaEs-17、 Hela 各加入 0.1mg/L 的 C-DDP ； CNE-2Z、 SMMC-7721、 Colo320、 BTSC 中加入 MMC0.1mg/L ； 空白对照组 (control) 仅加入相应容量的 生理盐水。 0026 (3)测定结果 ： 蝎毒注射液分别处理10种肿瘤细胞48h， 细胞处理方法及结果判定 方法均按常规方法进行。 0027 1.4 数据处理 0028 数据以 xs 表示， 采用 SPSS 软件进行 t 检验。 0029 2 结果 0030 细胞抑制率的测定 0031 结果显示不同浓度 (1、 10、 100mg/L) 的。
13、蝎毒注射液处理肿瘤细胞 48h， 使各种肿 瘤细胞代谢 MTT 的能力降低， 显示出明显的细胞毒性反应， 与对照组比较差异有显著性 (P 0.05 或 P 0.01)( 表 1)。其中 A549 细胞和 K562 及 K562/ADM 细胞、 CaEs-17 细胞、 Hela 细胞还显示较好的剂量 - 效应关系。 0032 说 明 书 CN 102119937 A CN 102119942 A3/6 页 5 0033 实验结果表明， 蝎毒注射液处理细胞后， 细胞的生存能力受到影响， 表现为活细胞 减少， 代谢 MTT 的能力降低。粗毒对肿瘤细胞的作用明显， 对 A549 细胞、 K562 及 。
14、K562/ADM 细胞、 CaEs-17 细胞、 Hela 细胞较为敏感， 并呈现出明显的剂量依赖关系。 0034 蝎毒注射液治疗中晚期癌症患者的临床研究 0035 1 资料与方法 0036 1.1 病例资料选择同期中晚期恶性肿瘤患者 168 例， 全部病例均经病理或细胞学 确诊， 活动状态 karnofsky 评分总分 60 分 ； 预计生存时间 3 个月。其中男性 95 例， 女 性 73 例， 年龄 29 78 岁， 中位年龄 51.8 岁。肺癌 26 例， 乳腺癌 43 例， 鼻咽癌 55 例， 食管 癌 18 例， 直肠癌 9 例， 宫颈癌 11 例， 脑肿瘤 6 例。 0037 将。
15、全部病例随机分为 ： 治疗组 ( 蝎毒注射液加放疗 )82 例 ； 对照组 ( 单纯放 疗 )86 例。 0038 1.2 治疗方法 0039 治疗组采用蝎毒注射液 20g/ml， 1 次 /d， 肌注， 连续用药 7 周， 配合常规放疗， 不 再给予任何免疫增加剂。放疗应用 Co60 及深部 X 线常规放射剂量， 10Gy/ 次， 5 次 / 周， 总 剂量为 50 70Gy。 0040 1.3 观察指标及疗效判定 0041 观察指标包括治疗中、 后期患者的生存质量卡氏评分情况， 治疗前后外周血白细 胞、 免疫功能指标(T细胞亚群)的变化， 肿瘤退缩情况(依据WHO关于实体瘤客观疗效通用 指。
16、标判定 ) ： CR( 完全缓解 )， 可见肿瘤消退超过 4 周 ； PR( 部分缓解 )， 肿瘤缩小 50 以上 ； SD( 稳定 )， 肿瘤缩小不足 50 ； PD( 进展 )， 肿瘤增大 25以上或出现新病灶， 其中有效率为 PR+CR。 0042 1.4 统计学方法 说 明 书 CN 102119937 A CN 102119942 A4/6 页 6 0043 采用 SPSS 统计软件对数据进行 u 检验和 x2检验。 0044 2 结果 0045 2.1 治疗中、 后期生存质量卡氏评分的比较见表 1。 0046 表 1 治疗中、 后期生存质量卡氏评分的比较 0047 0048 004。
17、9 经用蝎毒注射液配合治疗后患者生存质量明显改善， 特别是在减轻疼痛方面效果 明显。而对照组改善不明显， 还有下降趋势。经统计学处理， 两组患者生存质量卡氏评分在 治疗中、 后期差异有显著性 (P 0.05)。 0050 2.2 治疗前后外周血白细胞计数变化见表 2。 0051 表 2 治疗前后外周血白细胞计数变化 0052 组别 治疗前 治疗后 P 治疗组 4.571.25 6.752.06 0.05 对照组 4.620.98 2.810.63 0.05 P 0.05 0.01 0053 两组白细胞计数治疗前比较差异无显著性(P0.05)。 治疗后两组比较差异有显 著性 (P 0.01)。对。
18、照组的白细胞计数在治疗后明显减少， 与治疗前比较差异有显著性 (P 0.05) ： 治疗组加用蝎毒注射液治疗后， 白细胞计数比治疗前明显升高 (P 0.05)。 0054 2.3 治疗前后 T 细胞亚群检测比较见表 3。 0055 表 3 治疗前后 T 细胞亚群检测比较 0056 说 明 书 CN 102119937 A CN 102119942 A5/6 页 7 0057 从表 3 可知两组患者的免疫功能指标 (T 细胞亚群 ) 在治疗前差异无显著性 (P 0.05)， 治疗后复查显示治疗组的 T 细胞亚群数目均升高或稳定， 而对照组 T 细胞亚群均下 降， 两组治疗后免疫指标比较， 差异有。
19、显著性 (P 0.05)。 0058 2.4 治疗后肿瘤退缩情况对比见表 4。 0059 表 4 治疗后肿瘤退缩情况对比 0060 0061 从表 4 可知治疗组的有效率 (65.8 ) 高于对照组 (44.2 )， 差异有显著性 (P 0.01)。 0062 3 讨论 0063 对同期的中晚期肿瘤患者用蝎毒注射液治疗后进行临床对比研究， 结果显示用蝎 毒注射液配合放疗的治疗组肿瘤退缩总有效率为 65.8， 对照组为 44.2， 两组比较差异 有显著性。治疗组的白细胞计数在治疗后无明显改变或有升高， 而对照组随着放疗的进行 而持续下降， 两组比较异有显著性。同时， 治疗组患者机体的一般情况、 。
20、生存质量在治疗中 得以提高。 综上所述， 蝎毒注射液可抑制肿瘤细胞生长， 提高放疗疗效， 减轻放疗毒副作用， 提高机体的免疫功能， 保护和增强造血机能， 改善机体一般状况， 从而提高患者的生存质 量， 达到延长生存期的目的， 值得在临床上应用并进一步研究。 具体实施方式 0064 通过以下具体实施例对本发明作进一步说明， 但不作为对本发明的限制。 0065 实施例 1、 蝎毒注射液 0066 本发明所述蝎毒注射液的制备方法包括以下步骤 ： 0067 (1) 提取毒素 ： 0068 将待提毒蝎子置无菌、 温度为 16-20工作室内， 采用电脉冲器对蝎子进行电脉冲 刺激， 使蝎子将体内毒液排出 ； 在无菌条件下过滤， 0以下低温干燥， 得白色或微黄色粉末 即为蝎毒原料 ； 置密闭瓶中于 -20以下低温室中保存备用 ； 说 明 书 CN 102119937 A CN 102119942 A6/6 页 8 0069 (2) 配置溶液 ： 0070 在无菌、 0以下低温条件下将蝎毒原料按 0.5mg/ml 浓度溶于生理盐水中， 成原 液， 用0.2um除菌膜除菌过滤， 按10ug/ml的蛋白浓度在无菌条件下就爱那个原液用灭菌生 理盐水进行稀释， 并按 1ml/ 瓶分装于安瓿内， 封口即可。 说 明 书 CN 102119937 A 。