技术领域
本发明是一种中药复方制剂的质量控制方法，属于中药的技术领域。
背景技术
心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均是当今世界最常见和危 害最大的疾病之一，在许多国家已成为人口死亡的主要原因之一；据调查，近 年来的发病率有逐年增高趋势，而且中、青年患者不断增加，心脑缺血性疾病 已成为危害我国人民健康的常见病、多发病；为了达到防治目的，许多发明人 及药品企业对其做了大量的研究工作。药物制剂必须要在保证产品质量稳定可 控安全的基础之上，才能不断的更新发展，为了更好的控制该制剂的质量，保 证用药的安全性，更好的指导生产，使工艺控制更加严格合理，使消费者能全 面认识产品质地，需要研究、控制该中药复方制剂质量的方法；目前，在相关 药物制剂中，一般仅以野黄芩苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为 检测指标，但是它根本不能全面反应产品的质量，仅以此用来控制中药复方制 剂的质量不是十分合理；如果用别的指标进行控制，由于没有现成的检测方案、 检测条件等等，所以比较难于实施。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的中药复方制剂的质量控制方法。这种方法 向相关的生产、检测机构提供了检测的指标、检测的手段、技术方法等等，以 便更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全性，能够更好的指导生产，使生 产工艺控制更加严格合理，使消费者能全面认识产品质地。
该中药复方制剂的药味组成及配比如下(按重量份)：
方案一：
三七 1～99重量份 灯盏细辛 99～1重量份
方案二：
三七 1～99重量份 灯盏细辛提取物 30～0.1重量份
方案三：
三七提取物 0.1～30重量份 灯盏细辛 99～1重量份
方案四：
三七提取物 0.1～30重量份 灯盏细辛提取物 30～0.1重量份
方案五：
三七总皂苷 0.1～30重量份 灯盏细辛总黄酮 30～0.1重量份
上述中药复方制剂的剂型为注射剂或口服制剂；其中注射剂包括：直接用于 注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注 射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制备的注射用无菌粉末或无菌块状 物；口服制剂包括片剂、分散片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸 剂、微丸剂、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、口服液体制剂、凝胶剂、 煎膏剂、浸膏剂和膜剂。临床上用于治疗冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、 老年性痴呆、肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病。
本发明是这样构成的：
中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于：该方法包括以下全部或部分 内容：
(1)指纹图谱测试，包括以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱和以三七成 分特征为主的指纹图谱中的一种或两种；
(2)灯盏细辛对照药材、三七对照药材、野黄芩苷、三七皂苷R1、人参皂 苷Rg1和人参皂苷Rb1中全部或部分成分的鉴别测试方法；
(3)野黄芩苷、总黄酮、总皂苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷 Rb1中全部或部分成分的含量测试方法。
所述的以灯盏细辛、三七制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于： 该方法采用液相色谱法测试以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱和以三七成分 特征为主的指纹图谱中的一种或两种：
a、采用液相色谱法测试以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：
(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂适量，加水或甲醇或乙醇溶 解或稀释，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：取野黄芩苷，用甲醇或乙醇溶解，定容至合适浓 度，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为0.5 ％～100％乙腈溶液或甲醇：0.005mol/L～5mol/L磷酸二氢钠溶液或 0.005mol/L～5mol/L磷酸二氢钾溶液或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或 0.005％～5％磷酸溶液，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为 190-400nm范围内的一个或几个，柱温在20～60℃范围内；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以灯盏细辛成分特征为主 的指纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标 准指纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰 的相对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以灯盏细辛、白芍 或赤芍成分特征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；
(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下 列要求中的部分或全部：
I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为 0.80～1.00；
II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间的相对偏差不得超过±20％。
b、采用液相色谱法测试以三七成分特征为主的指纹图谱：
(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇或水稀 释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：取适量三七药材中的主要活性成分对照品，包括 人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种，用水或甲醇或乙醇溶解， 定容至合适浓度，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈 或甲醇∶水或0.1％～5％冰醋酸或0.1％～5％甲酸或0.005％～5％磷酸溶液， 梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min、检测波长为190-400nm范围内的一个或几 个或蒸发光散射检测器检测，柱温在20～60℃范围内；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以三七成分特征为主的指 纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指 纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相 对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～30个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以三七成分特征为 主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；
(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下 列要求中的部分或全部：
I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.80～ 1.00；
II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的10％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间的相对偏差不得超过±20％。
所述的以灯盏细辛、三七制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于： 该方法采用液相色谱法测试以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱和以三七成分 特征为主的指纹图谱中的一种或两种：
a、采用液相色谱法测定以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：
(1)供试品溶液的制备：精密称取待测中药复方制剂适量，加水制成每1ml 含1mg的溶液，摇匀，即得；
(2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加甲醇制成每1ml含 0.15mg的溶液，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为80 ％乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至80分钟， 流动相A的比例由15％升至70％，流动相B的比例由85％升至30％；流速为 1.0ml/min，检测波长为230±2nm，柱温为40℃；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以灯盏细辛成分特征为主 的标准指纹图谱的测试手段；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl， 注入液相色谱仪，依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹 图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对 保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以灯盏细辛特征为 主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；
(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下 列要求中的部分或全部：
I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～ 1.00；
II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间的相对偏差不得超过±10％。
b、采用液相色谱法测试以三七成分特征为主的指纹图谱：
(1)供试品溶液的制备：取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇或水稀 释至合适浓度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml 含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈∶ 水，梯度洗脱，，溶剂比例为从0分钟至12分钟，乙腈的比例为15％，从14分 钟至45分钟，乙腈的比例为从15％升至30％，从45分钟至60分钟，乙腈的 比例为从30％升至80％，流速为1ml/min、检测波长203±2nm，柱温30℃；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以三成分特征为主的指纹 图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹 图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对 保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为待测中药复方制剂中以三七成分特征为 主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；
(6)将待测中药复方制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合下 列要求中的部分或全部：
I.计算待测中药复方制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为0.90～ 1.00；
II.待测中药复方制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的5％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间的相对偏差不得超过±10％。
所述的以灯盏细辛、三七制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于： 所述中药复方制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：
a、中药复方制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色谱鉴别 方法：
取待测中药复方制剂适量，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过或 离心，取滤液或上清液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷对 照品中的一种或两种制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细 辛对照药材，加醋酸乙酯或乙醇或甲醇或正丁醇提取，滤过，滤液挥干，残渣 用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照 品，加甲醇或乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色 谱法试验，吸取上述供试品溶液和灯盏细辛对照药材溶液、野黄芩苷对照品溶 液的一种或两种各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄层板或硅胶H薄层板或硅 胶GF254薄层板或聚酰胺薄膜上，以醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水或甲醇 0.2～60∶0.2～10∶0.3～20或苯或甲苯-醋酸乙酯或甲酸乙酯-甲酸或乙酸-水 1～30∶0.5～15∶0.05～5∶0.01～3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.3 ％～10％三氯化铝乙醇或0.3～10％三氯化铝甲醇溶液或0.3～10％三氯化铁乙 醇溶液，置日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视或105℃烘1～15分钟后置 日光下或紫外光灯365nm或254nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱 及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色斑点；
b、中药复方制剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：
取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇或流动相或水溶解或稀释至合适浓 度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇 溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰 醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95 ％～5％或甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈-0.005 moL/L～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱系统为 流动相，检测波长为200～410nm；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留时 间一致的色谱峰；
c、中药复方制剂中三七、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种 或几种的薄层色谱鉴别方法：
取待测中药复方制剂适量，用正丁醇或乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷提 取，滤过，滤液作为供试品溶液；另取三七对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷 Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种，制备对照溶液；三七对照药材溶液的制备： 取三七对照药材适量，加三氯甲烷或二氯甲烷或乙醚回流提取，弃去三氯甲烷 或二氯甲烷或乙醚液，残渣加水饱和正丁醇或醋酸乙酯提取，提取液加氨试液， 分取上层，蒸干，残渣用甲醇或乙醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的 制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种对照品，分 别加甲醇或乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附 录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各1～30μl，分别点于同一硅胶G薄 层板或硅胶H薄层板或硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯或甲酸乙酯- 甲醇-水5～40∶10～100∶5～50∶0.2～3010℃以下放置的下层溶液或正丁醇- 醋酸乙酯或甲酸乙酯-水1～10∶0.2～2∶1～15的上层为展开剂，展开，取出， 晾干，喷以5～50％硫酸乙醇试剂或50％硫酸试剂，80℃～160℃烘至斑点显色 清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色 谱及对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点，阴性无干扰；
d、中药复方制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种 的液相色谱鉴别：
取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加水或甲醇或流动相或乙醇至刻度， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷 Re、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色 谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键 合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸 水溶液或0.5％～5％甲酸溶液5％～40％∶95％～60％为流动相，梯度洗脱，流 速为0.5～2.0ml/min，检测波长为190～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检 测器检测，柱温在20～60℃范围内；供试品色谱中，应具与对照品色谱有保留 时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
所述的以灯盏细辛、三七制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于： 所述中药复方制剂的鉴别方法包括以下中的一种或几种：
a、中药复方制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色谱鉴别 方法：
取待测中药复方制剂适量，加甲醇提取，离心，取上清液作为供试品溶液； 另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的一种或几种制备对照溶液；灯盏细辛对 照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加醋酸乙酯提取，滤过，滤液挥干， 残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩苷对照品， 加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色谱法试验， 吸取上述溶液各3μl，分别以条状带点于同一聚酰胺膜上，以甲醇-醋酸乙酯- 甲酸7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试 品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的条斑；
b、中药复方制剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：
取待测中药复方制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取 续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液 相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50 ％∶50％为流动相，检测波长为335nm；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留 时间一致的色谱峰；
c、中药复方制剂中三七、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种 或几种的薄层色谱鉴别方法：
取待测中药复方制剂适量，用正丁醇提取，滤过，滤液作为供试品溶液；另 取红参或人参对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或 几种，制备对照药材溶液；三七对照药材溶液的制备：取三七对照药材适量， 加三氯甲烷回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣加水饱和正丁醇提取，提取液加 氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液 的制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种对照品， 分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药典附录公 开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的下层溶液为 展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点显色清晰， 分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰；
d、中药复方制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种 的液相色谱鉴别：
取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤 过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、三七皂苷R1中的 一种或几种对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至15 分钟，乙腈的比例为20％，从15分钟至21分钟，乙腈的比例由20％上升至40 ％，从21分钟至25分钟，乙腈的比例为20％；流速为1.0ml/min，检测波长 203nm，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰， 阴性无干扰。
所述的以灯盏细辛、三七制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于： 所述中药复方制剂含量的测试方法应包括以下中的一种或几种：
a、中药复方制剂中野黄芩苷的含量测定：
取待测中药复方制剂适量，加甲醇或乙醇或流动相或水溶解或稀释至合适浓 度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇 溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷 键合硅胶或二烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈-水或0.05％～10％冰 醋酸水溶液或0.05％～10％甲酸水溶液或0.01％～5％磷酸水溶液5％～95％∶95 ％～5％或甲醇或乙腈-四氢呋喃-0.01％～5％磷酸水溶液或乙腈 -0.005moL/L～0.3moL/L磷酸二氢钠(1～99％磷酸调pH＝2.0～5.0)梯度洗脱 系统为流动相，检测波长为200～410nm；以外标一点法或标准曲线法进行计算， 各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于 2mg；
b、中药复方制剂中总黄酮的含量测定：
取待测中药复方制剂适量，用甲醇或水溶解并稀释至合适浓度，摇匀，作为 供试品溶液；以野黄芩苷作为对照品，同法制得对照品溶液；以随行溶剂为空 白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在335±10nm的波长处测定吸收度， 以外标一点法或标准曲线法进行计算；或取待测中药复方制剂适量，加水溶解 并稀释至合适浓度，摇匀，精密量取适量，置量瓶中，加50％甲醇或水1～25ml， 加5％亚硝酸钠溶液0.3～1ml，摇匀，放置6分钟，加10％硝酸铝溶液0.3～ 1ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4～10ml，再加50％甲醇或水至刻度， 摇匀，作为供试品溶液；以芦丁或野黄芩苷作为对照品，同法制得对照品溶液； 以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在500±10nm处测 定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，各制剂以相当于每日用成品 量为单位量，每单位量含总黄酮的限度以芦丁或野黄芩苷计，不得少于5mg；
c、中药复方制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种 的含量测定：
取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加水或甲醇或流动相或乙醇至刻度， 摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷 Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色 谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶或二烷基硅烷键 合硅胶为填充剂，甲醇或乙腈-水或0.5％～5％冰醋酸水溶液或0.02％～5％磷酸 水溶液或0.5％～5％甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速为0.5～2.0ml/min， 检测波长为190～410nm范围内的一个或几个或蒸发光检测器检测，柱温在20～ 60℃范围内；以外标法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每 日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或几项：
(1)每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于2.5mg；
(2)每单位量含人参皂苷Rb1的限度不得少于3.5mg；
(3)每单位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.25mg；
每单位量含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总和的限度不得少于 6mg；
d、中药复方制剂中总皂苷的含量测定：
取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇 匀，精密量取适量，置量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加1％～50％香草醛 -冰醋酸溶液0.1～10ml，高氯酸0.1～15ml，摇匀，30～80℃水浴上加热3～ 50分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为 供试品溶液，以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或三七皂苷R1为对照品，同法制得 对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在 547±10nm的波长处测定吸收度，以外标一点法或标准曲线法进行计算，待测中 药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1或人参皂苷Rb1或三七皂苷R1计，不得少于10mg。
所述的以灯盏细辛、三七制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在 于：所述中药复方制剂含量的测试方法是以下一种或几种方法：
a、中药复方制剂中野黄芩苷的含量测定：
取待测中药复方制剂适量，加甲醇溶解或稀释至合适浓度，摇匀，滤过，取 续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液 相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50 ％∶50％为流动相，检测波长为335nm；以外标一点进行计算，各制剂以相当于 每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于4mg；
b、中药复方制剂中总黄酮的含量测定：
取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加甲醇适量使溶解并定至刻度，摇匀， 精密量取1ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液；以野 黄芩苷作为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，照分光光度法， 在335nm的波长处测定吸收度，以外标一点法进行计算，各制剂以相当于每日 用成品量为单位量，每单位量含总黄酮的限度以野黄芩苷计，不得少于10mg；
c、中药复方制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种 的含量测定：
取待测中药复方制剂适量，置量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤 过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中 的一种或几种对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基 硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至 15分钟，乙腈的比例为20％，从15分钟至21分钟，乙腈的比例由20％上升至 40％，从21分钟至25分钟，乙腈的比例为20％；流速为1.0ml/min，检测波 长203nm，柱温为30℃；以外标法或标准曲线法进行计算，待测中药复方制剂 以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或几项：
(1)每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于5mg；
(2)每单位量含人参皂苷Rb1的限度不得少于7mg；
(3)每单位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；
(4)每单位量含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总和的限度不 得少于12mg；
d、中药复方制剂中总皂苷的含量测定：
取待测药物适量，置10ml量瓶中，加蒸馏水适量使溶解并定至刻度，摇匀， 精密量取0.6，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰 醋酸溶液0.5ml，高氯酸2.0ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出，立即 以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以人参 皂苷Rg1为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药典附 录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标一点法进行计算， 待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷以人参 皂苷Rg1计，不得少于20mg。
所述的以灯盏细辛、三七制成的中药复方制剂的质量控制方法，其特征在于： 所述中药复方制剂的含量测定结果，按照重量百分比计算，野黄芩苷、总黄酮、 总皂苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1中的全部或部分物质的总含 量占制剂中扣除辅料和水分外的总固体量的25％以上。
与现有技术相比，本发明能更加完善的控制以灯盏细辛、三七制成的中药 复方制剂的质量。中药成分复杂，如果只用其中一、两种成分来说明其内在质 量，具有一定的片面性，更无法判断其药效的指标成分。因此本申请人制定了 以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱和以三七成分特征为主的指纹图谱、鉴别 和含量测定来全面控制中药复方制剂的质量。但是由于中药复方制剂中的各药 材之间所含的化学成分复杂，对指纹图谱的制定、鉴别和含量测定造成干扰， 导致鉴别、含量测定和各部分指纹图谱特征不稳定，所以必须控制流动相、展 开剂等色谱条件，才能得到良好的薄层色谱、含测条件和指纹图谱。也就是说， 由于处方中各成分相互之间的干扰影响，导致中药复方制剂中灯盏细辛、三七 部分的指纹图谱特征峰发生改变，而只有采用本发明的条件，才能得到理想的 薄层色谱、含测条件和指纹图谱。
通过实验证明，本发明质量控制方法对以灯盏细辛、三七制成的中药复方 制剂产品的质量控制更为有效，方法精密度、稳定性均较高。
实验例1以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱的制备
a、实验仪器、试剂及样品：
对照品：野黄芩苷：中国药品生物制品检定所
b、色谱条件与系统适应性实验：
1.色谱柱的选择：
研究过程中，选用了常规的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱， 分别试用了Inertsil ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)Kromasil C18(200mm×4.6mm， 5μm)、Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)三种牌号的色谱柱，结果显示三 种牌号的色谱柱均可达到较好的分离效果，其中Diamonsil C18色谱柱分离效果 最好，柱效最高，可以达到70000(以参照物野黄芩苷计算)。故最终选用 Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5μm)为实验研究柱。
2.流动相的选择：
研究过程中分别考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)， (3)乙腈-水(梯度洗脱)(4)流动相A为80％乙腈，流动相B为0.1％磷酸 溶液，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至80分钟，流动相A的比例由15％升至 70％，流动相B的比例由85％升至30％四种流动相系统。结果显示流动相(1) 条件下，峰形较差，1小时内出峰较少，仍有不少组分滞留在后出峰；流动相(2) 流动相条件下，峰形较差，分离不好；(3)条件下，峰拖尾严重，出峰不完全； 流动相(4)条件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而最终被选用。
3.检测波长的确定：
研究中在流动相A为80％乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度洗脱流动 相条件下，分别考察了在不同波段典型波长230、254、270、300下的色谱峰情 况，结果表明，230nm检测时能兼顾各成分色谱峰的峰度、分离度和基线，故选 择230nm为本品指纹图谱检测波长。
4.仪器、色谱柱及积分参数：
4.1仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的LC-10Avp 高效液相色谱仪，WML-2010色谱工作站。色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm， 5μm)；柱温40℃，流速1.0ml/min。
4.2积分参数：峰宽：10；斜率：100；最小峰面积：50000。如此设定可以 避免一些很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％)的计算，同时保 证与参照物的相关性。
5.供试品溶液的制备：
精密称取本品适量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
6.参照物溶液的制备：
精密称取野黄芩苷适量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为参照物 溶液。
7.指纹图谱及技术参数：
根据10批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较， 相似度均在0.90～1.00之间。
实验例2以三七成分特征为主的指纹图谱
a、实验仪器、试剂及样品：
对照品：人参皂苷Rg1：中国药品生物制品检定所
b、色谱条件与系统适应性实验：
1.色谱柱的选择：
研究过程中，选用了常规的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱， 分别试用了Zorbax、Inertsil ODS-3、Diamonsil ODS(均为C18，4.6mm×200mm， 5μm)三种牌号的色谱柱，结果显示三种牌号的色谱柱均可达到较好的分离效 果，其中Diamonsil ODS色谱柱分离效果最好，柱效最高，可以达到5400(以 参照物人参皂苷Rg1计算)。故最终选用Diamonsil ODS色谱柱(4.6mm×200mm，5 μm)为实验研究柱。
2.流动相的选择：
研究过程中分别考察了(1)甲醇-水(20∶80)，(2)乙腈-水(10∶90)， (3)乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(梯度洗脱)(4)乙腈-水(梯度洗脱) (梯度洗脱体积配比为从0分钟至12分钟，乙腈的比例为15％，从14分钟至 45分钟，乙腈的比例为从15％升至30％，从45分钟至60分钟，乙腈的比例为 从30％升至80％)四种流动相系统。结果显示流动相(1)条件下，峰形较差， 1小时内出峰较少，仍有不少组分滞留在后出峰；流动相(2)流动相条件下， 峰形较差，分离不好；(3)条件下，峰拖尾严重，出峰不完全；流动相(4)条 件下，峰形较好，出峰完全且分布均匀，故而最终被选用。
3.检测波长的确定：
研究中在乙腈-水(梯度洗脱)流动相条件下，分别考察了在不同波段典型波 长203、210、230、254下的色谱峰情况，结果显示，在203nm下色谱峰较多， 峰形较好，故最终选用203nm±2作为检测波长。
4.仪器、色谱柱及积分参数：
4.1仪器参数：选用了液相色谱分析领域主流配置和性能良好的Agilent 1100系列高效液相色谱仪，Chemstation色谱工作站。色谱柱为Diamonsil ODS (4.6mm×200mm，5μm)；柱温40℃，流速1.0ml/min。
4.2积分参数：Slope Sensitivity：1，peak width：0.05，最小峰面积为参 照物(S)峰峰面积的5％，最小峰高为S峰峰高的5％。如此设定可以避免一些 很小面积的色谱峰(单峰面积占总峰面积小于0.5％)的计算，同时保证与参照 物的相关性。
5.供试品溶液的制备：
精密称取本品适量，加水制成每1ml含50mg的溶液，即得。
6.参照物溶液的制备：
人参皂苷Rg1为三七主要活性成分之一，其积分面积在指纹图谱中所占比例 较大且较稳定，同时兼顾中间体和药材的研究，因此选定人参皂苷Rg1作为参照 物。
7.指纹图谱及技术参数：
根据10批样品制定标准指纹图谱，将供试品指纹图谱与标准指纹图谱比较，相 似度均在0.90～1.00之间。
实验例3中药复方制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的薄层色 谱鉴别方法：
为了突出灯盏细辛的特征，选择了灯盏细辛对照药材、野黄芩苷作为其特 征，但是由于药材中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分，普通条 件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下薄层板和展开条件对野黄芩 苷进行了展开： 条件 问题 正己烷-苯-甲酸乙酯-甲酸(5-5-10-4)硅胶H薄层板 醋酸乙酯-苯-乙酸(5-4-3)硅胶H薄层板 醋酸乙酯-苯-甲酸(5-4-3)硅胶G薄层板 氯仿-醋酸乙酯-甲醇(7-2-4)硅胶GF254薄层板 甲苯-醋酸乙酯(8-1)硅胶H薄层板 甲醇-醋酸乙酯-甲酸(10-5-0.5)硅胶G薄层板 甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1)聚酰胺膜 对照品展开至前沿 对照品未分开，阴性有干扰 对照品未分开，阴性有干扰 对照品未分开，阴性有干扰 对照品未分开，阴性有干扰 对照品展开至前沿 分离清晰，Rf值适中阴性无干 扰
经过筛选，确定了以聚酰胺膜为固定相，以甲醇-醋酸乙酯-甲酸(7-2-1) 为展开剂，在此条件下，野黄芩苷的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无 干扰。
实验例4中药复方制剂中野黄芩苷的液相色谱鉴别方法：
为了突出灯盏细辛的特征，除了薄层鉴别方法以外，选择了野黄芩苷作为 其特征成分，但是由于药材中存在较多与野黄芩苷结构相近、极性相似的成分， 普通条件难以达到质量控制的要求，因此我们筛选了以下色谱柱和流动相对野 黄芩苷进行了分离：
条件 问题 甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(80∶20)八烷基硅烷键合硅 胶 乙腈-0.05mol/L磷酸氢二钠(40∶60)十八烷基硅烷键合 硅胶 甲醇-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸氢二钠(20∶10∶70)十 八烷基硅烷键合硅胶 乙腈-四氢呋喃-0.05mol/L磷酸氢二钠(20∶10∶70)十 八烷基硅烷键合硅胶 甲醇-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷 基硅烷键合硅胶 乙腈-四氢呋喃-1％冰醋酸水溶液(20∶10∶70)十八烷 基硅烷键合硅胶 甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)十八烷基硅烷键合硅胶 出峰时间过快 阴性有干扰 阴性有干扰 峰形不太对称 阴性有干扰 峰形不太对称 保留时间适中，峰行尖锐，对称， 阴性无干扰
经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，甲醇-0.1％磷酸水溶 液(50∶50)为流动相，在此条件下，野黄芩苷保留时间适中，峰行尖锐，对 称，阴性无干扰。
实验例5中药复方制剂人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的薄层色 谱鉴别方法：
为了突出三七的特征，选择了人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1作 为其特征斑点，但是由于药材中存在较多与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七 皂苷R1结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此 我们筛选了以下薄层板和展开条件对麦冬进行了展开：
条件 问题 氯仿-甲酸乙酯-水(20∶60∶10)10℃以下放置的下层溶 液硅胶G薄层板 正丁醇-甲酸乙酯-甲醇(10-1-5)硅胶H薄层板 氯仿-甲酸乙酯-甲酸-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置 的下层溶液硅胶G薄层板 氯仿-醋酸乙酯-甲酸-水(10∶40∶15∶5)10℃以下放置 的下层溶液硅胶G薄层板 正丁醇-甲酸乙酯-甲醇(5-1-1-5)硅胶G薄层板 正丁醇-甲酸乙酯-乙醇(2-1.5-0.5)硅胶H薄层板 确定条件：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10 ℃以下放置的下层溶液硅胶G薄层板 对照品展开至前沿 对照品展开至前沿 对照品未分开，阴性有干扰 对照品未分开，阴性有干扰 对照品未分开，阴性有干扰 对照品未分开，阴性有干扰 分离清晰，Rf值适中阴性无干扰
经过筛选，确定了以硅胶G薄层板为固定相，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水 (15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，在此条件下，人参皂 苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的Rf值适中，和其它斑点分离清晰，阴性无 干扰。
实验例6中药复方制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的液相 色谱鉴别方法：
为了突出三七的特征，选择了人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1作 为其特征成分，但是由于药材中存在较多与人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七 皂苷R1结构相近、极性相似的成分，普通条件难以达到质量控制的要求，因此 我们筛选了以下色谱柱和流动相对人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1进 行了分离：
条件 问题 甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠(70∶30)十八烷基硅烷键合硅 胶 乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠(55∶45)十八烷基硅烷键合硅 胶 甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(80∶20)八烷基硅烷键合硅胶 甲醇-0.05mol/L磷酸氢二钠(80∶20)十八烷基硅烷键合硅 胶 乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾(90∶10)八烷基硅烷键合硅胶 甲醇-0.02mol/L磷酸二氢钾(85∶15)十八烷基硅烷键合硅 胶 乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至15分 钟，乙腈的比例为20％，从15分钟至21分钟，乙腈的比例 由20％上升至40％，从21分钟至25分钟，乙腈的比例为20 ％十八烷基硅烷键合硅胶 出峰时间过快 出峰时间过快 阴性有干扰 阴性有干扰 阴性有干扰 阴性有干扰 保留时间适中，峰行尖锐， 对称，阴性无干扰
经过筛选，确定了以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，乙腈-水为流动相， 梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至15分钟，乙腈的比例为20％，从15分钟至 21分钟，乙腈的比例由20％上升至40％，从21分钟至25分钟，乙腈的比例为 20％，在此条件下，人人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1保留时间适中， 峰行尖锐，对称，阴性无干扰。
实验例7中药复方制剂中野黄芩苷含量测定
1仪器与试药
1.1主要仪器：
高效液相色谱仪 LC-2010AHT SHIMADZU
紫外/可见分光光度仪 TU-1810SPC 北京普析通用仪器有限公司
电子分析天平 BP211D SARTORIUS
超声波清洗机 KQ250DB 昆山市超声仪器有限公司
1.2试药：
野黄芩苷 中国药品生物制品检定所
甲醇 分析纯 北京化工厂
乙腈 色谱纯 迪马公司
磷酸 分析纯 北京化学试剂公司
2野黄芩苷 由中国药品生物制品检定所提供野黄芩苷，经高效液相色谱 法(归一化法)测定纯度为96.40％，符合含量测定用对照品要求(在测定中， 按照96.40％的纯度进行折算)。
3检测波长的选择 取野黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml 含0.0463mg的溶液，在190～400nm波长范围内扫描。结果表明，野黄芩苷在 284nm及335nm处有最大吸收，根据《卫生部药品标准中药成方制剂》相关品种 并结合文献报道，选择335nm作为野黄芩苷含量测定的检测波长。
4色谱条件
色谱仪：SHIMADZU LC-2010AHT；
色谱柱：Diamonsil ODS 250mm×4.6mm 5μm；
流动相：甲醇-0.1％磷酸水溶液(50∶50)；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
进样量：10μl；
检测波长：335nm。
对照品溶液的制备 精密称取野黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含 0.05mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约 0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHz) 5min，取出，放至室温，加甲醇定至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过， 取续滤液作为供试品溶液。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱 仪，测定，即得。
根据上述色谱条件得到野黄芩苷对照品、供试品色谱图，其理论板数n均 大于2000，野黄芩苷色谱峰与相近峰分离清晰完全，分离度均大于1.5，溶剂 无干扰。
5提取时间的选择 取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约 0.25g(共3份)，精密称定，分置25ml量瓶中，加甲醇适量，分别超声处理(功 率250W，频率33KHz)5、10、20min，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀， 用微孔滤膜(0.45μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定， 即得。
提取时间考察 提取时间(min) 含量(mg/瓶) 5 10 20 2.607 2.594 2.611
结果表明，超声处理5min即可提取完全。
6线性关系考察 精密量取野黄芩苷对照品溶液(C＝0.978mg/ml)0.0、0.2、 0.4、0.6、0.8、1.0ml，分置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别从 中精密吸取10μl，注入液相色谱仪，照高效液相色谱法(中国药典2000年版 一部附录VID)测定。以峰面积为纵坐标，野黄芩苷的量(μg)为横坐标作 图，绘制标准曲线。
野黄芩苷标准曲线测定结果 编号 野黄芩苷量(μg) 折算后(μg) 峰面积 1 2 3 4 5 6 0.0000 0.1956 0.3912 0.5868 0.7824 0.9780 0.0000 0.1886 0.3771 0.5657 0.7542 0.9428 0 603722 1224078 1835374 2505678 3038182
回归方程：Y＝3259091.50x-1830.06
相关系数：γ＝0.9999
结果表明：野黄芩苷在0.1886μg～0.9428μg范围内线性良好。
经计算，野黄芩苷的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定野黄芩苷的 含量。
7精密度实验 精密吸取野黄芩苷对照品溶液(0.0489mg/ml)10μl，注 入液相色谱仪，测定5次，考察对照品溶液精密度，测定结果见下表。
精密度试验 试验次数 1 2 3 4 5 平均值 RSD(％) 峰面积 1572015 1570202 1566206 1559384 1557017 1564965 0.42
结果表明，对照品溶液精密度良好。
8稳定性实验
8.1对照品溶液的稳定性实验 精密吸取野黄芩苷对照品溶液 (0.0489mg/ml)10μl，注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，分别在0、2、4、8、 24小时进样测定。
对照品溶液稳定性试验 时间(h) 0 2 4 8 24 平均值 RSD(％) 峰面积 1572015 1570202 1566206 1559384 1557017 1564965 0.42
结果表明，对照品溶液24小时内稳定性良好。
8.2供试品溶液的稳定性实验精密吸取供试品溶液10μl，注入液相色 谱仪，分别在0、2、4、8、24小时进样测定。
供试品溶液稳定性实验 时间(h) 0 2 4 8 24 均值 RSD 含量(mg/瓶) 2.613 2.589 2.618 2.624 2.607 2.610 0.51
结果表明，供试品溶液24小时内稳定性良好。
9重复性实验 取本品，按正文供试品溶液的制备和测定法项下进行操 作。
重复性实验 编号 1 2 3 4 5 平均值 RSD(％) 含量(mg/瓶) 2.615 2.624 2.681 2.579 2.646 2.629 1.44
10加样回收率实验 采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物， 混匀，从中取约0.13g(共6份)，精密称定，分置25ml量瓶中，分别精密加入 野黄芩苷对照品溶液(C＝0.6782mg/ml)1.0ml，加甲醇适量超声处理(功率250W， 频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，精密吸取续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
中药复方制剂中野黄芩苷的含量为：4.958mg/g。
加样回收率实验 编号 供试品称样 量(g) 供试品中纯品 量(mg) 野黄芩苷加入量 (mg) 折算后 (mg) 测量值 (mg) 回收率 (％) 1 2 3 4 5 6 0.12507 0.13158 0.12496 0.13075 0.12693 0.12559 0.6201 0.6524 0.6196 0.6483 0.6293 0.6227 0.6782 0.6782 0.6782 0.6782 0.6782 0.6782 0.6538 0.6538 0.6538 0.6538 0.6538 0.6538 1.258 1.297 1.267 1.290 1.268 1.254 97.55 98.64 99.03 98.21 97.76 96.59
平均回收率＝97.96％，RSD＝0.88％
11样品含量测定 取本品三批样品，按照正文供试品溶液的制备和测定 法项下的操作。
野黄芩苷含量测定 批号 野黄芩苷含量(mg/瓶) 1 2 3 2.518 2.497 2.715
实验例8中药复方制剂中总黄酮含量测定
1仪器与试药
(1)主要仪器：
紫外分光光度计 TU-1810SPC 北京普析通用仪器有限责任公司
电子分析天平 BP211D SARTORIUS
超声波清洗机 KQ250DB 昆山市超声仪器有限公司
(2)试药：
芦丁 中国药品生物制品检定所(批号：0080-9705)
乙醇 分析纯 阿托兹精细化工有限公司
硝酸铝 分析纯 天津市化学试剂三厂
亚硝酸钠 分析纯 天津市化学试剂三厂
氢氧化钠 分析纯 天津市北方化玻购销中心
2检测波长的选择 取芦丁对照品，按正文对照品溶液的制备方法进行操 作，获得对照品溶液。取中药复方制剂，按正文测定法中供试品溶液的制备方 法进行操作，获得供试品溶液。吸取芦丁对照品溶液，供试品溶液，按正文总 黄酮测定项下拟定的方法，在400～800nm波长范围内进行扫描，结果表明，对 照品溶液与供试品溶液均在510nm有最大吸收，溶剂无干扰，因此选择510nm 作为分光光度法测定中药复方制剂中总黄酮含量的检测波长。
3对照品溶液的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品 20mg，置100ml量瓶中，加60％乙醇溶液适量超声处理(功率250W，频率33KHz) 使溶解，取出，放至室温，加60％乙醇溶液至刻度，摇匀，精密量取25ml，置 50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.1mg)。
4供试品溶液的制备 取装量差异项下本品，取内容物，混匀，取约0.25g， 置25ml量瓶中，加60％乙醇溶液适量超声处理(功率250W，频率33KHz)使溶 解，取出，放至室温，加60％乙醇溶液至刻度，摇匀，即得。
5测定法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各3.0ml，分置10ml量瓶中， 各加30％乙醇溶液使成5.0ml，精密加亚硝酸钠溶液(1→20)0.3ml摇匀，放 置6分钟，再加硝酸铝溶液(1→10)0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠 试液4.0ml，再加水至刻度，摇匀，放置15分钟，以随行溶剂为空白，照分光 光度法(中国药典2000年版一部附录VB)，在510nm的波长处分别测定吸收 度，计算，即得。
6标准曲线的制备 精密量取芦丁对照品溶液(C＝0.1064mg/ml)0.0ml， 1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，分置10ml量瓶中，分别加30％乙醇溶 液使成5.0ml，精密加亚硝酸钠溶液(1→20)0.3ml，摇匀，放置6分钟，再加 硝酸铝溶液(1→10)0.3ml，摇匀，放置6分钟，加氢氧化钠试液4.0ml，再加 水至刻度，摇匀，放置15分钟，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典 2000年版一部附录VB)，在510nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标， 浓度(mg/ml)为横坐标做图，绘制标准曲线。
总黄酮标准曲线测定结果 编号 芦丁浓度(mg/ml) 吸收度 1 2 3 4 5 6 0.000 0.0110 0.0210 0.0320 0.0430 0.0530 0.000 0.119 0.226 0.343 0.468 0.572
回归方程：Y＝10.818x-0.0005；
相关系数：γ＝0.9999；
结果表明：芦丁在0.0110～0.0530mg/ml范围内线性良好。
经计算，芦丁的标准曲线过原点，因此选用外标一点法测定总黄酮的含量。
7精密度试验 精密吸取芦丁对照品溶液(浓度：0.1064mg/ml)3.0ml， 置10ml量瓶中，按正文测定法项下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml” 起，依法操作，在510nm的波长处测定吸收度，测定5次。
精密度试验 编号 1 2 3 4 5 均值 RSD(％) 吸收度 0.343 0.343 0.342 0.340 0.337 0.341 0.75
结果表明，对照品溶液精密度良好。
8稳定性试验
8.1对照品溶液稳定性试验 精密吸取芦丁对照品溶液(浓度： 0.1064mg/ml)3.0ml，置10ml量瓶中，按正文测定法项下的方法，自“加30 ％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波长处测定吸收度，分别在 0、5、10、15、30分钟重复测定一次。
对照品溶液稳定性试验 时间(min) 0 5 10 15 30 均值 RSD(％) 吸收度 0.343 0.343 0.342 0.340 0.337 0.341 0.75
结果表明，对照品溶液稳定性良好。
8.2供试品溶液稳定性试验 精密吸取供试品溶液1.0ml，置10ml量瓶中， 按正文测定法项下的方法，自“加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作， 在510nm的波长处测定吸收度，分别在0、5、10、15、30min测定吸收度。
供试品溶液稳定性试验 时间(min) 0 5 10 15 30 均值 RSD(％) 含量(mg/瓶) 6.428 6.323 6.304 6.412 6.409 0.375 0.90
结果表明，供试品溶液在30min内稳定性良好。
9重复性试验 取本品，按正文供试品溶液的制备和测定法项下进行操 作。
重复性试验 时间(min) 0 5 10 15 30 均值 RSD(％) 含量(mg/瓶) 6.411 6.502 6.395 6.329 6.437 6.415 0.98
结果表明，重复性良好。
10加样回收率试验 采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物， 混匀，取0.13g(共6份)，精密称定，分置25ml量瓶中，精密称取经120℃减 压干燥至恒重的芦丁对照品26.34mg，置25ml量瓶中，加60％乙醇适量超声处 理使溶解，取出，放至室温，用60％乙醇定至刻度，摇匀，精密量取1.5ml(共 6份)，分置上述25ml量瓶中，加60％乙醇溶液适量超声处理(功率250W，频 率33KHz)使溶解，取出，放至室温，用60％乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤 过，精密量取续滤液3.0ml，分置10ml量瓶中，照正文测定法项下的方法，自 “加30％乙醇溶液使成5.0ml”起，依法操作，在510nm的波长处测定吸收度， 计算，即得。
中药复方制剂中总黄酮的含量为：12.18mg/g。
加样回收率试验 编号 供试品 称样量(g) 供试品中总黄酮 含量(mg) 芦丁加入量 (mg) 测量值 (mg) 回收率 (％) 1 2 3 4 5 6 0.12664 0.13507 0.12908 0.13012 0.12297 0.12663 1.5425 1.6452 1.5722 1.5849 1.4978 1.5424 1.5804 1.5804 1.5804 1.5804 1.5804 1.5804 3.104 3.186 3.099 3.136 3.063 3.085 98.81 97.49 96.58 98.15 99.03 97.64
平均回收率＝97.95％，RSD＝0.93％。
11样品的含量测定 取本品三批样品，按照正文供试品溶液的制备和测 定法项下的操作，测定样品含量。
总黄酮的含量测定 批号 总黄酮含量(mg/瓶) 1 2 3 6.554 6.613 6.708
实验例9 中药复方制剂中总皂苷含量测定
1仪器、试药
1.1仪器：普析通 TU-1810SPC 紫外/可见分光光度仪
SARTORIUS BP211D 电子分析天平
1.2试药：香草醛 分析纯 天津市光复精细化工研究所
甲醇 色谱纯 J.T.Baker
冰醋酸 分析纯 上海试剂一厂
高氯酸 分析纯 天津市鑫源化工厂
纯净水 娃哈哈
2方法与结果
2.1检测波长的选择 精密称取人参皂苷Rg15.14mg，置100ml量瓶中，加 适量甲醇超声处理(功率250W，频率33KHz)使溶解，加甲醇至刻度，摇匀， 精密量取1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香 草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取 出，立即在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，在700～400nm 波长范围内进行扫描，结果表明，黄芪甲苷在547nm处有最大吸收，空白无干 扰，因此选择547nm为分光光度法测定中药复方制剂中总皂苷的检测波长。
2.2对照品溶液的制备 人参皂苷Rg15mg，加甲醇制成每1ml含0.05mg的 溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备 取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取 约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率 33KHZ)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置 10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml， 高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却 2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国 药典2000年版一部附录VA)，在547nm的波长处测定吸收度。以外标一点法计 算，即得。
3线性关系的考察 精密称取人参皂苷Rg1对照品5.03mg，置100ml量瓶 中，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHZ)使溶解，取出，放至室温， 加甲醇至刻度，摇匀，精密量取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ml，分置10ml具塞 试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高氯 酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2分 钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，照分光光度法(中国药典 2000年版一部附录VA)，在547nm的波长处测定吸收度。以吸收度为纵坐标， 黄芪甲苷的量(μg)为横坐标，绘制标准曲线。
回归方程Y＝0.0062X+0.0047；r＝0.9999
人参皂苷Rg1在20.12～100.6μg范围线性良好。
人参皂苷Rg1标准曲线测定数据 编号 人参皂苷Rg1(μg) 吸收度 1 2 3 4 5 20.12 40.24 60.36 80.48 100.6 0.127 0.255 0.377 0.502 0.624
3精密度试验 精密量取对照品溶液(0.0503mg/ml)1.2ml，置10ml具 塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋酸溶液0.2ml，高 氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即在冰水浴中冷却2 分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，按正文测定法项下操作， 连续测定5次。
精密度实验 编号 1 2 3 4 5 X平均 RSD％ 吸光度 0.376 0.374 0.378 0.377 0.379 0.377 0.51
5稳定性试验
5.1对照品溶液的稳定性试验精密量取对照品溶液(0.0503mg/ml) 1.2ml，置10ml具塞试管中，水浴蒸干溶剂，取出，精密加入5％香草醛-冰醋 酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即 在冰水浴中冷却2分钟，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，以随行溶剂为空白，按正 文测定法项下操作，分别在0、10、20、40、60分钟时测定。
对照品溶液稳定性实验 时间(min) 0 10 20 40 60 均值 RSD％ 吸光度 0.375 0.368 0.381 0.374 0.372 0.374 1.27
5.2供试品溶液的稳定性实验 取本品装量差异项下本品，取内容物，研 细，从中取约50mg，按正文测定法项下进行操作，分别在0、10、20、40、60 分钟时测定。
供试品溶液稳定性实验 时间(min) 0 10 20 40 60 均值 RSD％ 含量(mg/瓶) 12.16 12.61 12.49 12.59 12.58 12.49 1.51
6重复性试验 取本品装量差异项下本品，取内容物，研细，从中取约50mg (共5份)，按正文测定法项下进行操作。
重复性实验 编号 1 2 3 4 5 X平均 RSD％ 含量(mg/瓶) 12.84 12.91 12.72 12.94 12.84 12.85 0.66
7回收率试验 采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物，研细， 从中取约25mg(共5份)，精密称定，分置25ml量瓶中；精密量取人参皂苷Rg1对照品溶液(0.642mg/ml)1ml(共5份)，精密称定，分置上述25ml量瓶中， 加水适量使溶解并定至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml具塞试管中，按正 文测定法项下进行操作，以随行溶剂为空白，依法测定吸收度，按外标一点法 计算，即得。
中药复方制剂中总皂苷的含量：24.41mg/g
加样回收率实验 编号 供试品称量 (mg) 供试品中总皂 苷量(mg) 人参皂苷Rg1加 入量(mg) 测量值 (mg) 回收率 (％) 1 2 3 4 5 24.71 25.94 26.88 27.19 26.55 0.6032 0.6332 0.6561 0.6637 0.6481 0.642 0.642 0.642 0.642 0.642 1.238 1.259 1.272 1.284 1.271 98.81 97.46 95.93 96.68 97.03
平均回收率＝97.18％ RSD＝1.10％
8三批中试样品含量测定
取本品样品三批，按正文所述方法处理。
三批样品含量测定结果 批号 总皂苷(mg/瓶) 1 2 3 13.34 12.96 13.15
实验例10 中药复方制剂中三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1含量 测定
1仪器与试药
1.1仪器：
Alltech UVIS-201高效液相色谱仪，Alltech HPLC system工作站(美国)
KQ250B超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)
ZK-30ABX电热真空干燥箱(北京中兴伟业仪器公司)
Mettler AE240电子天平(上海梅特勒公司)
1.2试药：
三七皂苷R1：中国药品生物制品检定所
人参皂苷Rg1：中国药品生物制品检定所
人参皂苷Rb1：中国药品生物制品检定所
所用甲醇、乙腈均为色谱纯，均购于德国Merck公司
水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。
2色谱条件
色谱柱：Diamonsil(TM)C18，5μm；250×4.6mm；
流动相：乙腈-水为流动相，梯度洗脱；
梯度洗脱系统 时间(min) 乙腈(％) 水(％) 0 15 21 25 20 40 20 20 80 60 80 80
流速：1ml/min，两次进样间隔平衡时间：3min；
检测波长：203nm；
柱温：30℃；
进样量：10μl
理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于3000。
检测波长的选择 三七皂苷R1，人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1，均在203nm 波长处有最大吸收，因此选用203nm作为本品的检测波长。
3对照品溶液的制备 取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品适 量，精密称定，分别加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人参皂苷Rg11.42mg 和人参皂苷Rb12.14mg的溶液，作为贮备液；再分别吸取上述溶液各1ml，置同 一5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每ml含三七皂苷R10.124mg、人参 皂苷Rg10.284mg和人参皂苷Rb10.428mg的对照品溶液。
4供试品溶液的制备 取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中精密称 取2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声处理(功率250W，频率33KHz) 使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过， 取续滤液作为供试品溶液。
5阴性供试品溶液的制备 照本品处方称取除三七外的其它成分，按本品制 备工艺制成阴性供试品。精密称取2.40572g，照供试品溶液的制备项下方法制 备，作为阴性供试品溶液。
6系统适用性试验 根据上述色谱条件得到三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人 参皂苷Rb1、混合对照品、样品、阴性色谱图，理论板数n大于3000，样品中各 对照品峰与相近峰分离清晰完全，分离度大于1.5，阴性无干扰。
7线性关系的考察 取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品适 量，精密称定，分别加甲醇制成每ml含三七皂苷R10.62mg、人参皂苷Rg11.42mg 和人参皂苷Rb12.14mg的溶液，作为贮备液；精密量取前述对照品贮备液各0.2， 0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml，分置5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别从 中精密吸取10μl，依次注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，进样量(μg) 为横坐标做图，绘制标准曲线。
回归方程为：三七皂苷R1：Y＝208361.76X-1972.29 r＝0.9995；
人参皂苷Rg1：Y＝293933.01X-13982.75 r＝0.9994；
人参皂苷Rb1：Y＝192503.18X-9202.56 r＝0.9993。
结果表明：三七皂苷R1在0.248-2.480μg范围内线性关系良好；
人参皂苷Rg1在0.568-5.680μg范围内线性关系良好；
人参皂苷Rb1在0.856-8.560μg范围内线性关系良好。
线性关系试验测定结果 三七皂苷R1X(μg) 峰面积 0.248 50263 0.496 100526 0.992 200106 1.488 305920 1.984 413269 2.480 511633 人参皂苷Rg1X(μg) 峰面积 0.568 160211 1.136 319838 2.272 652866 3.408 984424 4.544 1298968 5.680 1675375 人参皂苷Rb1X(μg) 峰面积 0.856 160162 1.712 338350 3.424 629600 5.136 961552 6.848 1313361 8.560 1650024
8精密度试验 取对照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、人参皂苷 Rg10.284mg/ml和人参皂苷Rb10.428mg/ml)，连续测定5次，考察对照品溶液精 密度。
精密度试验 试验次数 1 2 3 4 5 均值 RSD(％) 三七皂苷R1峰面积 人参皂苷Rg1峰面积 人参皂苷Rb1峰面积 246053 742870 799153 251946 744876 790713 245960 746459 774498 249961 741460 797000 248515 737323 784495 248487 742598 789172 1.03 0.47 1.27
9稳定性试验
9.1对照品溶液稳定性试验 取对照品混合溶液(三七皂苷R10.124mg/ml、 人参皂苷Rg10.284mg/ml和人参皂苷Rb10.428mg/ml)，分别在0、2、6、10、 24小时进样测定，考察对照品溶液稳定性。
对照品溶液的稳定性试验 时间(h) 0 2 6 10 24 均值 RSD(％) 三七皂苷R1峰面积 人参皂苷Rg1峰面积 人参皂苷Rb1峰面积 251645 751539 791325 250980 744648 794487 249983 752846 793693 256897 760121 787720 255921 745537 789215 253085 750938 791288 1.22 0.83 0.36
9.2供试品溶液的稳定性试验 取装量差异项下本品，取内容物，混匀， 从中精密称取2.48425g，，按正文供试品溶液制备下进行操作，分别在0、2、6、 10、24小时进样测定。
稳定性试验 时间(h) 0 2 6 10 24 均值 RSD(％) 三七皂苷R1(mg/瓶) 人参皂苷Rg1(mg/瓶) 人参皂苷Rb1(mg/瓶) 0.6504 3.424 4.439 0.6347 3.469 4.516 0.6449 3.451 4.489 0.6517 3.357 4.606 0.6432 3.408 4.582 0.6450 3.422 4.526 1.05 1.26 1.51
结果表明：供试品溶液在24小时内基本稳定。
10重复性试验 取装量差异项下本品，取内容物，混匀，从中取约2.5g (共5份)，按正文测定法供试品溶液制备和测定项下进行操作。
重复性试验 编号 1 2 3 4 5 均值 RSD(％) 三七皂苷R1(mg/瓶) 人参皂苷Rg1(mg/瓶) 人参皂苷Rb1(mg/瓶) 0.6601 3.502 4.403 0.6508 3.479 4.507 0.6547 3.603 4.462 0.6493 3.554 4.443 0.6542 3.528 4.385 0.6538 3.533 4.440 0.64 1.36 1.09
结果表明，本法重复性较好。
11、加样回收率试验 采用加样回收法，取装量差异项下本品，取内容物， 混匀，从中取约1.25g(共5份)，分别置50ml量瓶中，另精密量取混合对照品 溶液4ml(其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的浓度为：0.385mg/ml、 1.694mg/ml、2.403mg/ml)，加甲醇适量超声处理(功率250W，频率33KHz)使 溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过， 精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
经测定已知中药复方制剂中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含 量分别是1.242、6.711、8.434mg/g。
三七皂苷R1加样回收率试验 编号 供试品称量 (g) 供试品中纯品 量(mg) 纯品加入量 (mg) 测量值 (mg) 回收率 (％) 1 2 3 4 5 1.22413 1.23369 1.23085 1.24004 1.23639 1.5204 1.5322 1.5287 1.5401 1.5356 1.540 1.540 1.540 1.540 1.540 3.026 3.023 3.040 3.050 3.037 97.76 96.83 98.12 98.04 97.49
平均回收率＝97.65％；RSD＝0.53％。
人参苷Rg1加样回收率试验 编号 供试品称量 (g) 供试品中纯品 量(mg) 纯品加入量 (mg) 测量值 (mg) 回收率 (％) 1 2 3 4 5 1.22413 1.23369 1.23085 1.24004 1.23639 8.2151 8.2793 8.2602 8.3219 8.2974 6.776 6.776 6.776 6.776 6.776 14.839 14.929 14.815 14.964 15.014 97.75 98.13 96.74 98.03 99.12
平均回收率＝97.95％；RSD＝0.87％。
人参苷Rb1加样回收率试验 编号 供试品称量 (g) 供试品中纯品 量(mg) 纯品加入量 (mg) 测量值 (mg) 回收率 (％) 1 2 3 4 5 1.22413 1.23369 1.23085 1.24004 1.23639 10.32 10.40 10.38 10.46 10.43 9.612 9.612 9.612 9.612 9.612 19.758 19.924 19.798 19.717 19.862 98.15 99.03 97.97 96.32 98.15
平均回收率＝97.92％；RSD＝1.01％。
12三批中试样品含量测定
取本品样品三批，按正文所述方法处理。
三批样品含量测定结果 批号 三七皂苷R1 (mg/瓶) 人参苷Rg1 (mg/瓶) 人参苷Rb1 (mg/瓶) 总皂苷 (mg/瓶) 1 2 3 0.6702 0.6915 0.6532 3.267 3.504 3.387 4.452 4.503 4.401 8.389 8.699 8.441
实验例1采用液相色谱法测定以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱：
(1)供试品溶液的制备：精密称取本发明组方粉针制剂适量，加水制成每 1ml含1mg的溶液，摇匀，即得；
(2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加甲醇制成每1ml含 0.15mg的溶液，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为80 ％乙腈，流动相B为0.1％磷酸溶液，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至80分钟， 流动相A的比例由15％升至70％，流动相B的比例由85％升至30％；流速为 1.0ml/min，检测波长为230±2nm，柱温为40℃；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以灯盏细辛成分特征为主 的标准指纹图谱的测试手段；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl， 注入液相色谱仪，依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹 图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对 保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为本发明组方粉针制剂中以灯盏细辛特征 为主的指纹图谱的测试手段，制备本发明组方粉针制剂的指纹图谱；
(6)将本发明组方粉针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合 下列要求中的部分或全部：
I.计算本发明组方粉针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为 0.90～1.00；
II.本发明组方粉针制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的 5％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。
实验例2采用液相色谱法测试以三七成分特征为主的指纹图谱：
(1)供试品溶液的制备：精密称取本发明组方粉针制剂适量，加水制成每 1ml含50mg的溶液，摇匀，即得；
(2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml 含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈∶ 水，梯度洗脱，，溶剂比例为从0分钟至12分钟，乙腈的比例为15％，从14分 钟至45分钟，乙腈的比例为从15％升至30％，从45分钟至60分钟，乙腈的 比例为从30％升至80％，流速为1ml/min、检测波长203±2nm，柱温30℃；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以三七成分特征为主的指 纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指 纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相 对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为本发明组方粉针制剂中以三七成分特征 为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；
(6)将本发明组方粉针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符合 下列要求中的部分或全部：
I.计算本发明组方粉针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为 0.90～1.00；
II.本发明组方粉针制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的 5％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。
实验例3本发明组方粉针制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的 薄层色谱鉴别方法
取本发明组方粉针制剂2g，加甲醇10ml提取，离心，取上清液作为供试品 溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的一种或几种制备对照溶液；灯盏 细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加醋酸乙酯提取，滤过，滤 液挥干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩 苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色 谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别以条状带点于同一聚酰胺膜上，以甲醇- 醋酸乙酯-甲酸7∶2∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇 溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的条斑。
实验例4本发明组方粉针制剂野黄芩苷的液相色谱鉴别方法
取本发明组方粉针制剂0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超 声处理(功率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇定至刻度， 摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对 照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm； 供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。
实验例5本发明组方粉针制剂中三七、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七 皂苷R1中一种或几种的薄层色谱鉴别方法
取本发明组方粉针制剂3g，用正丁醇10ml提取，滤过，滤液作为供试品溶 液；另取红参或人参对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的 一种或几种，制备对照药材溶液；三七对照药材溶液的制备：取三七对照药材 适量，加三氯甲烷回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣加水饱和正丁醇提取，提 取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液； 对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或几 种对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国 药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-水15∶40∶22∶10在10℃以下放置的 下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑 点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照 药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
实验例6本发明组方粉针制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种的液相色谱鉴别
取本发明组方粉针制剂2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声处理(功 率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微 孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷 Re、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂 比例为从0分钟至15分钟，乙腈的比例为20％，从15分钟至21分钟，乙腈的 比例由20％上升至40％，从21分钟至25分钟，乙腈的比例为20％；流速为 1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有 保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
实验例7本发明组方粉针制剂野黄芩苷的含量测定
取本发明组方粉针制剂0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超 声处理(功率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇定至刻度， 摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对 照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，甲醇-0.1％磷酸水溶液50％∶50％为流动相，检测波长为335nm； 以外标一点进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野 黄芩苷的限度不得少于4mg。
实验例8本发明组方粉针制剂中总黄酮的含量测定
本发明组方粉针制剂0.25g，置25ml量瓶中，加60％乙醇溶液适量超声处 理(功率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至室温，加60％乙醇溶液至刻 度，摇匀作为供试品溶液；以野黄芩苷作为对照品，同法制得对照品溶液。以 随行溶剂为空白，照分光光度法，在335nm的波长处测定吸收度，以外标一点 法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总黄酮的限 度以野黄芩苷计，不得少于10mg。
实验例9本发明组方粉针制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种的含量测定
取本发明组方粉针制剂2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声处理(功 率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微 孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷 Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，溶剂 比例为从0分钟至15分钟，乙腈的比例为20％，从15分钟至21分钟，乙腈的 比例由20％上升至40％，从21分钟至25分钟，乙腈的比例为20％；流速为 1.0ml/min，检测波长203nm，柱温为30℃；以外标法或标准曲线法进行计算， 待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或 几项：
(1)每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于5mg；
(2)每单位量含人参皂苷Rb1的限度不得少于7mg；
(3)每单位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；
(4)每单位量含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总和的限度不 得少于12mg。
实验例10本发明组方粉针制剂中总皂苷的含量测定
取本发明组方粉针制剂50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超声 处理(功率250W，频率33KHZ)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇 匀，精密量取2.5ml，置25ml量瓶中，水浴蒸干，立即取出，精密加5％香草 醛-冰醋酸溶液1.25ml，高氯酸5ml，摇匀，60℃水浴上加热15分钟，取出， 立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻度，摇匀，作为供试品溶液，以 人参皂苷Rg1为对照品，同法制得对照品溶液。以随行溶剂为空白，采用中国药 典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处测定吸收度，以外标一点法进行 计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总皂苷 以人参皂苷Rg1计，不得少于20mg。
实验例11采用液相色谱法测定以灯盏细辛成分特征为主的指纹图谱
(1)供试品溶液的制备：取本发明组方小水针制剂作为供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：精密称取野黄芩苷适量，加乙制成每1ml含0.15mg 的溶液，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相A为80 ％甲醇，流动相B为1％冰醋酸溶液，梯度洗脱，溶剂比例从0分钟至80分钟， 流动相A的比例由15％升至70％，流动相B的比例由85％升至30％；流速为 1.0ml/min，检测波长为230±2nm，柱温为40℃；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以灯盏细辛成分特征为主 的标准指纹图谱的测试手段；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl， 注入液相色谱仪，依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指纹 图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相对 保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为本发明组方小水针制剂中以灯盏细辛特 征为主的指纹图谱的测试手段，制备本发明组方小水针制剂的指纹图谱；
(6)将本发明组方小水针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符 合下列要求中的部分或全部：
I.计算本发明组方小水针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为 0.90～1.00；
II.本发明组方小水针制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的 5％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。
实验例12采用液相色谱法测试以三七成分特征为主的指纹图谱
(1)供试品溶液的制备：取本发明组方小水针制剂作为供试品溶液；
(2)参照物溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1适量，加甲醇制成每1ml 含0.3mg的溶液，作为参照物溶液；
(3)色谱条件：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填料：流动相为乙腈∶ 1％冰醋酸溶液，梯度洗脱，，溶剂比例为从0分钟至12分钟，乙腈的比例为15 ％，从14分钟至45分钟，乙腈的比例为从15％升至30％，从45分钟至60分 钟，乙腈的比例为从30％升至80％，流速为1ml/min、检测波长203±2nm，柱 温30℃；
(4)标准指纹图谱的制定：以上述方法作为制定以三七成分特征为主的指 纹图谱的测试手段；依据10批或10批以上供试品所测得的图谱，制定标准指 纹图谱，以确定的参照物色谱峰的保留时间为基准，计算其它共有色谱峰的相 对保留时间，所述标准指纹图谱中，共有峰有3～20个；
(5)以(1)～(3)所述方法作为本发明组方小水针制剂中以三七成分特 征为主的指纹图谱的测试手段，制备待测样品的指纹图谱；
(6)将本发明组方小水针制剂的指纹图谱与上述标准指纹图谱对比，应符 合下列要求中的部分或全部：
I.计算本发明组方小水针制剂的指纹图谱与标准指纹图谱的相似度，应为 0.90～1.00；
II.本发明组方小水针制剂指纹图谱中，非共有峰面积不得超过总峰面积的 5％；
III.除参照物色谱峰之外的其他共有色谱峰与参照物色谱峰的相对保留时 间与标准指纹图谱相比，相对偏差不得超过±10％。
实验例13本发明组方小水针制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种 的薄层色谱鉴别方法
取本发明组方小水针制剂10ml，水浴蒸干，残渣加乙醇10ml提取，离心， 取上清液作为供试品溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的一种或几种 制备对照溶液；灯盏细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加三氯 甲烷提取，滤过，滤液挥干，残渣用乙醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶 液的制备：取野黄芩苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药 典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别以条状带点于同一 聚酰胺膜上，以乙醇-甲酸乙酯-醋酸8∶2∶2为展开剂，展开，取出，晾干， 喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相 应的位置上，显相同颜色的条斑。
实验例14本发明组方小水针制剂野黄芩苷的液相色谱鉴别方法
取本发明组方小水针制剂10ml，置25ml量瓶中，加乙醇适量超声处理(功 率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加乙醇定至刻度，摇匀，用微 孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇 或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂，乙腈-1％冰醋酸水溶液45％∶55％为流动相，检测波长为335nm；供试品色 谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。
实验例15本发明组方小水针制剂中三七、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三 七皂苷R1中一种或几种的薄层色谱鉴别方法
取本发明组方小水针制剂30ml，用正丁醇10ml提取，滤过，滤液作为供试 品溶液；另取红参或人参对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种，制备对照药材溶液；三七对照药材溶液的制备：取三七对照 药材适量，加二氯甲烷回流提取，弃去二氯甲烷液，残渣加醋酸乙酯提取，提 取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液； 对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或几 种对照品，分别加乙制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国药 典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄 层板上，以二氯甲烷-加酸乙酯-甲醇-水22∶45∶10∶15在10℃以下放置的下 层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑点 显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药 材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
实验例16本发明组方小水针制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷 R1中一种或几种的液相色谱鉴别
取本发明组方小水针制剂25ml，置50ml量瓶中，加乙醇至刻度，取出，放 至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供 试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的 乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂， 乙腈-1％冰醋酸为流动相，梯度洗脱，溶剂比例为从0分钟至15分钟，乙腈的 比例为20％，从15分钟至21分钟，乙腈的比例由20％上升至40％，从21分 钟至25分钟，乙腈的比例为20％；流速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温 在30℃；供试品色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干 扰。
实验例17本发明组方小水针制剂野黄芩苷的含量测定
取本发明组方小水针制剂作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液为 对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-1％冰 醋酸水溶液55％∶45％为流动相，检测波长为335nm；以外标一点进行计算， 各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野黄芩苷的限度不得少于 4mg。
实验例18本发明组方小水针制剂中总黄酮的含量测定
本取本发明组方小水针制剂作为供试品溶液；以野黄芩苷对照品的甲醇溶液 作为对照品溶液。以随行溶剂为空白，照分光光度法，在335nm的波长处测定 吸收度，以外标一点法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每 单位量含总黄酮的限度以野黄芩苷计，不得少于10mg。
实验例19本发明组方小水针制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷 R1中一种或几种的含量测定
取本发明组方小水针制剂25ml，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用 微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂 苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-1％冰醋酸为流动相，梯度洗 脱，溶剂比例为从0分钟至15分钟，乙腈的比例为20％，从15分钟至21分钟， 乙腈的比例由20％上升至40％，从21分钟至25分钟，乙腈的比例为20％；流 速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温为30℃；以外标法或标准曲线法进行计 算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一 项或几项：
(1)每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于5mg；
(2)每单位量含人参皂苷Rb1的限度不得少于7mg；
(3)每单位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；
(4)每单位量含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总和的限度不 得少于12mg。
实验例20本发明组方小水针制剂中总皂苷的含量测定
取本发明组方小水针制剂50ml，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解并定量转移 置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取2.5ml，置25ml量瓶中，水浴 蒸干，立即取出，精密加5％香草醛-冰醋酸溶液1.25ml，高氯酸5ml，摇匀， 60℃水浴上加热15分钟，取出，立即以冰水浴或流水冷却，精密加冰醋酸至刻 度，摇匀，作为供试品溶液，以人参皂苷Rg1为对照品，同法制得对照品溶液。 以随行溶剂为空白，采用中国药典附录公开的分光光度法，在547nm的波长处 测定吸收度，以外标一点法进行计算，待测中药复方制剂以相当于每日用成品 量为单位量，每单位量含总皂苷以人参皂苷Rg1计，不得少于20mg。
实验例21本发明组方胶囊制剂中灯盏细辛药材、野黄芩苷中一种或几种的 薄层色谱鉴别方法
取本发明组方胶囊制剂2g，加甲醇10ml提取，离心，取上清液作为供试品 溶液；另取灯盏细辛对照药材、野黄芩苷中的一种或几种制备对照溶液；灯盏 细辛对照药材溶液的制备：取灯盏细辛对照药材，加甲酸乙酯提取，滤过，滤 液挥干，残渣用甲醇溶解，作为对照药材溶液；对照品溶液的制备：取野黄芩 苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液；采用中国药典附录公开的薄层色 谱法试验，吸取上述溶液各3μl，分别以条状带点于同一聚酰胺膜上，以甲醇- 醋酸乙酯-甲酸6∶4∶2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇 溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同 颜色的条斑。
实验例22本发明组方胶囊制剂野黄芩苷的液相色谱鉴别方法
取本发明组方胶囊制剂0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加乙醇适量超 声处理(功率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇定至刻度， 摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对 照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂，乙腈-1％甲酸水溶液48％∶52％为流动相，检测波长为335nm；供试品 色谱中，具与对照品色谱有保留时间一致的色谱峰。
实验例23本发明组方胶囊制剂中三七、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七 皂苷R1中一种或几种的薄层色谱鉴别方法
取本发明组方胶囊制剂3g，用醋酸乙酯10ml提取，滤过，滤液作为供试品 溶液；另取红参或人参对照药材、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中 的一种或几种，制备对照药材溶液；三七对照药材溶液的制备：取三七对照药 材适量，加三氯甲烷回流提取，弃去三氯甲烷液，残渣加水饱和正丁醇提取， 提取液加氨试液，分取上层，蒸干，残渣用甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液； 对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中的一种或几 种对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；采用中国 药典附录公开的薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以二氯甲烷-醋酸乙酯-乙醇-水14∶30∶10∶15在10℃以下放置的 下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇试剂，105℃烘至斑 点显色清晰，分别置日光及紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照 药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。
实验例24本发明组方胶囊制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种的液相色谱鉴别
取本发明组方胶囊制剂2.5g，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声处理(功 率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至室温，加甲醇至刻度，摇匀，用微 孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷 Re、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈-0.2％磷酸为流动相，梯度洗 脱，溶剂比例为从0分钟至15分钟，乙腈的比例为30％，从15分钟至30分钟， 乙腈的比例由30％上升至40％，从30分钟至50分钟，乙腈的比例为20％；流 速为1.0ml/min，检测波长203nm，柱温在30℃；供试品色谱中，具与对照品色 谱有保留时间一致的色谱峰，阴性无干扰。
实验例25本发明组方胶囊制剂野黄芩苷的含量测定
取本发明组方胶囊制剂0.25g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇适量超 声处理(功率250W，频率33KHz)5min，取出，放至室温，加甲醇定至刻度， 摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以野黄芩苷对 照品的甲醇或乙醇溶液为对照，采用液相色谱法，色谱柱用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，乙腈-0.4％磷酸水溶液46％∶54％为流动相，检测波长为335nm； 以外标一点进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含野 黄芩苷的限度不得少于4mg。
实验例26本发明组方胶囊制剂中总黄酮的含量测定
本发明组方胶囊制剂0.25g，置25ml量瓶中，加80％乙醇溶液适量超声处 理(功率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至室温，加80％乙醇溶液至刻 度，摇匀作为供试品溶液；以野黄芩苷作为对照品，同法制得对照品溶液。以 随行溶剂为空白，照分光光度法，在335nm的波长处测定吸收度，以外标一点 法进行计算，各制剂以相当于每日用成品量为单位量，每单位量含总黄酮的限 度以野黄芩苷计，不得少于10mg。
实验例27本发明组方胶囊制剂中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1中一种或几种的含量测定
取本发明组方胶囊制剂2.5g，置50ml量瓶中，加乙醇40ml，超声处理(功 率250W，频率33KHz)使溶解，取出，放至室温，加乙醇至刻度，摇匀，用微 孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液；以人参皂苷Rg1、人参皂苷 Rb1、三七皂苷R1中的一种或几种对照品的甲醇溶液为对照，采用液相色谱法， 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水为流动相，梯度洗脱，溶剂 比例为从0分钟至15分钟，甲醇的比例为25％，从15分钟至30分钟，甲醇的 比例由25％上升至38％，从30分钟至35分钟，甲醇的比例为20％；流速为 1.0ml/min，检测波长203nm，柱温为30℃；以外标法或标准曲线法进行计算， 待测中药复方制剂以相当于每日用成品量为单位量，含量限度应为以下一项或 几项：
(1)每单位量含人参皂苷Rg1的限度不得少于5mg；
(2)每单位量含人参皂苷Rb1的限度不得少于7mg；
(3)每单位量含三七皂苷R1的限度不得少于0.5mg；
(4)每单位量含人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总和的限度不 得少于12mg。