取代苯化合物
相关申请
本申请要求2011年4月13日提交的美国临时申请61/474825和2011年7月8日提交的美国临时申请61/505676的优先权，其全部内容通过引用结合到本文中。
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背景技术
在真核细胞中，DNA被组蛋白包裹形成染色质。染色质有序结构的变化会引起相关基因转录的改变。染色质结构变化（并因此转录）的控制通过对组蛋白的共价修饰来调节，最显著的是对其N-端尾部的修饰。这些修饰通常认为是表观的，因为它们会导致基因表达的遗传变化，但不影响DNA本身的序列。对氨基酸侧链的共价修饰（例如甲基化、乙酰化、磷酸化和泛素化）是由酶介导的。向组蛋白上的特定氨基酸位点选择性加入甲基基团被一类独特的酶、即被称为组蛋白甲基化转移酶（HMT）的作用所控制。
对转录调控背后的生化系统的精心策划的收集必须进行严格控制，以便优化地进行细胞生长和分化。当这些控制被负责DNA和组蛋白修饰的酶的异常表达和/或活性破坏时，就产生了疾病。例如在人类癌症中，有越来越多的证据表明，异常表达的表观遗传酶活性有助于与癌症关联的不受控制的细胞增殖以及其他癌症相关的表型，如增强的细胞迁移和入侵。除癌症之外，有越来越多的证据表明表观遗传酶在一些其他的人类疾病中起到作用，包括新陈代谢疾病（如糖尿病）、炎性疾病（如克罗恩病）、神经退行性疾病（如阿尔茨海默氏病）和心血管疾病。因此，选择性地调节表观遗传酶的异常行为可为一系列疾病的治疗带来 希望。
已知Polycomb家族(PcG)和trithorax家族(trxG)蛋白质是细胞记忆系统的一部分（参阅如Francis et al.(2001)Nat Rev Mol Cell Biol2:409-21和Simon et al.(2002)Curr Opin Genet Dev12:210-8）。通常情况下，PcG蛋白质是维持“关闭状态”的转录抑制因子，而trxG蛋白质是维持“开启状态”的转录活化因子。由于PcG蛋白质和trxG蛋白质的家族成员中包含内在组蛋白甲基化转移酶(HMTase)活性，因此PcG蛋白质和trxG蛋白质可以通过核心组蛋白的甲基化而参与细胞记忆（参阅如Beisel et al.(2002)Nature419:857-62；Cao et al.(2002)Science298:1039-43；Czermin et al.(2002)Cell111:185-96；Kuzmichev et al.(2002)Genes Dev16:2893-905；Milne et al.(2002)Mol Cell10:1107-17；Muller et al.(2002)Cell111:197-208和Nakamura et al.(2002)Mol Cell10:1119-28.）。
生化和遗传学研究已经提供证据表明，果蝇PcG蛋白质以至少两种不同的蛋白质复合物来起作用，即Polycomb抑制复合物1(PRC1)和ESC-E(Z)复合物（也被称为Polycomb抑制复合物2(PRC2)）。可参阅Otte et al.(2003)Curr Opin GenetDev13:448-54。对果蝇的研究已经证明了ESC-E(Z)/EED-EZH2（即PRC2）复合物具有内在组蛋白甲基转移酶活性。尽管被不同基团分离的复合物的组成都略有不同，但它们通常都包含EED、EZH2、SUZ12和RbAp48或其果蝇同源染色体。而在美国专利7563589中公开了一个仅包含EED、EZH2和SUZ12的再造复合物为组蛋白H3的赖氨酸27保留组蛋白甲基化转移酶活性。
在组成PRC2复合物的各种蛋白质中，EZH2(Enhancer of Zeste Homolog2)是催化亚基。EZH2的催化位点又出现在SET结构域内，其为发现于少数染色质相关的蛋白中的高度保守的序列基元（以Su(var)3-9来命名，Enhancer ofZeste,Trithorax），包括Trithorax家族和Polycomb家族的成员。除了组蛋白H3-K79甲基转移酶DOT1，其它所有已知的组蛋白赖氨酸甲基转移酶都含有SET结构域。
除了同源盒基因（Hox）沉默外，PRC2介导的组蛋白H3-K27甲基化已经表明参与了X染色体灭活（Plath et al.(2003)Science300:131-5；Silva et al.(2003)DevCell4:481-95）。向Xi上募集PRC2复合物以及随后在组蛋白H3-K27上的三甲基化发生在X染色体灭活的起始阶段，且依赖于Xist RNA。此外，发现EZH2和其相关的组蛋白H3-K27甲基化转移酶活性区别地标记多能性的上胚层细胞和分化的滋养外胚层，并与EZH2在保持多能性上胚层细胞的表观遗传修饰模式中 的作用相一致，EZH2的Cre重组酶介导的删除导致细胞中组蛋白H3-K27甲基化的损失（Erhardt et al.(2003)Development130:4235-48）。另外，对前列腺癌和乳腺癌的细胞系和组织的研究显示了EZH2和SUZ12的水平与这些癌症的侵入力之间存在密切的联系，表明PRC2复合物的功能紊乱可能会导致癌症（Bracken et al.(2003)EMBO J22:5323-35;Kirmizis et al.(2003)Mol Cancer Ther2:113-21;Kleeret al.(2003)Proc Natl Acad Sci USA100:11606-11;Varambally et al.(2002)Nature419:624-9）。
最近有报道称，EZH2的酪氨酸641（Y641C，Y641F，Y641N，Y641S和Y641H；有时也称为Y646C，Y646F，Y646N，Y646S和Y646H）的体细胞突变与滤泡性淋巴瘤(FL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的生发中心B细胞样(GCB)的亚型有关（Morin et al.(2010)Nat Genet42:181-5）。在任何情况下，发现突变的EZH2基因的出现都是杂合的，在突变样品中通过转录组测序显示检测到野生型和突变体等位基因的表达。还证明的是，EZH2基因的所有突变类型都可以结合到多蛋白PRC2复合物中，但是所生成的复合物不能催化缩氨酸底物的H3-K27等效残基的甲基化作用。因此，得出的结论是，EZH2的Tyr641处的与疾病相关的变化导致了关于EZH2催化的H3-K27甲基化的功能缺失。
发明内容
一方面，本发明提供了如下所示的式(I)的取代苯化合物或其药学上可接受的盐或酯。
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在该式中：
X1是N或CR11；
X2是N或CR13；
X3是N或C，且当X3是N时，R6不存在；
Z是NR7R8、OR7、S(O)aR7或CR7R8R14，其中a为0、1或2；
R1、R5、R9和R10各自独立为H或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基；
R2、R3和R4各自独立为–Q1-T1，其中Q1为键或是任选地被一个或多个选自下列组的取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T1选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、叠氮基或RS1，其中RS1选自C1-C3烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C(O)O-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，且RS1任选地被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、氧代、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂环芳基；
R6选自氢、卤素、氰基、叠氮基、ORa、-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-S(O)bRa、-S(O)bNRaRb或RS2，其中RS2选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或4-12元杂环烷基；b是0、1或2；Ra和Rb各自独立为氢或RS3，其中RS3选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂环芳基；或Ra和Rb，连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷基环；RS2、RS3以及由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q2-T2取代，其中Q2为键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基；T2选自氢、卤素、氰基、-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-C(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)ORc、-S(O)2Rc、-S(O)2NRcRd或RS4，其中Rc和Rd各自独立选自H或RS5，其中RS4和RS5各自独立选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂芳基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷基环，RS4、RS5以及由Rc和Rd形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q3-T3取代， 其中Q3是键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T3选自卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五元或六元杂芳基、ORe、COORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf，Re和Rf各自独立选自氢或C1-C6烷基，或–Q3-T3为氧代；或–Q2-T2为氧代；
R7是–Q4-T4，其中Q4为键、C1-C4烷基连接体或C2-C4烯基连接体，每个连接体任选地被下列取代基取代：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T4选自氢、卤素、氰基、NRgRh、-ORg、-C(O)Rg、-C(O)ORg、-C(O)NRgRh、-C(O)NRgORh、-NRgC(O)Rh、-S(O)2Rg或RS6，其中Rg和Rh各自独立地选自氢或RS7，RS6和RS7各自独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-14元杂环烷基或者五或六元杂芳基，RS6和RS7可任选地被一个或多个–Q5-T5取代，其中Q5是键、羰基、C(O)NRk、NRkC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rk是氢或C1-C6烷基，T5选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)qRq，其中q为0、1或2，Rq选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，T5任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，当T5是氢、卤素、羟基或氰基时除外；或–Q5-T5是氧代；
R8、R11、R12和R13均各自独立选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、RS8、ORS8或COORS8，其中RS8选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基、氨基、单-C1-C6烷基氨基或双-C1-C6烷基氨基，RS8任选地被选自下列组的一或多个取代基取代：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基和双-C1-C6烷基氨基；或R7和R8连同它们所连接的接的氮原子一起形成含0-2个额外杂原子的4-12杂环烷基环，或R7和R8连同它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基或含1-3个杂原子的4-12元杂环烷基环，所述的由R7和R8形成的4-12元杂环烷基环或C3-C8环烷基任选地被一个或多个–Q6-T6取代，其中Q6是键、羰基、C(O)NRm、NRmC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rm为氢或C1-C6烷基，T6选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、 氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)pRp，其中p是0、1或2，Rp选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基，T6任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基，当T6为氢、卤素、羟基或氰基时除外；或–Q6-T6为氧代；以及
R14不存在或为氢或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基；
条件是，所述化合物不包括
N-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺、
N,N'-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-1,3-亚苯基)二乙酰胺、
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-特戊酰基氨基苯甲酰胺、
3-(3,4-二羟基-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯-7-磺酰胺基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺、
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺、
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺、
3-烯丙基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4,5-二甲氧基苯甲酰胺、
4-(2-氨基-2-氧代乙氧基)-3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二羟基吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基苯甲酰胺、
3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-羟基-5-甲氧基苯甲酰胺，或
3-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基-4-丙氧基苯甲酰胺。
另一方面，本发明涉及如上文所述式(I)的取代苯化合物或其药学上可接受的盐或酯，其中
X1是N或CR11；
X2是N或CR13；
X3是N或C，且当X3是N时，R6不存在；
Z是NR7R8、OR7、S(O)aR7或CR7R8R14，其中a为0、1或2；
R1、R5、R9和R10各自独立为H或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基；
R2、R3和R4各自独立为–Q1-T1，其中Q1为键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T1选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、叠氮基或RS1，其中RS1选自C1-C3烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C(O)O-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，且RS1任选地被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、氧代、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂环芳基；
R6选自氢、卤素、氰基、叠氮基、-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-S(O)bRa、-S(O)bNRaRb或RS2，其中RS2选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或4-12元杂环烷基，其中b是0、1或2，Ra和Rb各自独立为氢或RS3，且RS3选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂环芳基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷基环；RS2、RS3以及由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q2-T2取代，其中Q2为键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T2选自氢、卤素、氰基、-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-C(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)ORc、-S(O)2Rc、-S(O)2NRcRd或RS4，其中Rc和Rd各自独立选自H或RS5，RS4和RS5各自独立选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂芳基，或Rc和Rd连同它们 所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷基环，RS4、RS5以及由Rc和Rd形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q3-T3取代，其中Q3是键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T3选自下列组：卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五元或六元杂芳基、ORe、COORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf，Re和Rf各自独立地选自氢或C1-C6烷基，或–Q3-T3为氧代；或–Q2-T2为氧代；
R7是–Q4-T4，其中Q4为键、C1-C4烷基连接体或C2-C4烯基连接体，每个连接体任选地被下列取代基取代：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T4选自氢、卤素、氰基、NRgRh、-ORg、-C(O)Rg、-C(O)ORg、-C(O)NRgRh、-C(O)NRgORh、-NRgC(O)Rh、-S(O)2Rg或RS6，其中Rg和Rh各自独立地选自氢或RS7，RS6和RS7各自独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-14元杂环烷基或者五或六元杂芳基，RS6和RS7各自任选地被一个或多个–Q5-T5取代，其中Q5选自键、羰基、C(O)NRk、NRkC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rk是氢或C1-C6烷基，T5选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)qRq，其中q为0、1或2，Rq选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，T5任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，T5是氢、卤素、羟基或氰基的情况除外；或–Q5-T5是氧代；条件是(i)当Z是NR7R8时R7不是C(O)Rg或-S(O)2Rg；(ii)当Z是OR7时R7不是C1-C6烷基，以及(iii)R7不是氢；
R8、R11、R12和R13各自独立选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、RS8、ORS8或COORS8，其中RS8选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基、氨基、单-C1-C6烷基氨基或双-C1-C6烷基氨基，且RS8任选地被选自下列组的一或多个取代基取代：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基和双-C1-C6烷基氨基；或R7和R8连同它们所连接的氮原子一起形成含0-2个额外杂原子的4-12杂环烷基环，或R7和R8连同它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基或含1-3个杂原子的4-12 元杂环烷基环，所述的由R7和R8形成的4-12元杂环烷基环或C3-C8环烷基各自任选地被一个或多个–Q6-T6取代，其中Q6选自键、羰基、C(O)NRm、NRmC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rm为氢或C1-C6烷基，且T6选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)pRp，其中p是0、1或2，Rp选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，并且T6任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基，T6为氢、卤素、羟基或氰基的情况除外；或–Q6-T6为氧代；以及
R14不存在或选自氢或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基。
式(I)的化合物的一个子集包括式(Ia)的化合物。
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式(I)的化合物的另一个子集包括式(Ib)、(Ic)或(Id)的化合物。
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式(I)的化合物的其它子集还包括式(Ie)、(II)或(IIA)的化合物。
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式(I)、(Ia)、(Ib)、(Ic)、(Id)、(Ie)、(II)和(IIA)的化合物可包含一个或多个下列特征：
X1是CR11且X2是CR13。
X1是CR11且X2是N。
X1是N且X2是CR13。
X1是N且X2是N。
Z是NR7R8。
Z是CR7R8R14。
Z是OR7。
Z是S(O)aR7，其中a是0、1或2。
Z是SR7。
R6选自卤素、C1-C3烷基、C2-C6烯基、C3-C6环烷基、醛基或-C(O)Ra，其中Ra是C1-C6烷基或4-12元（例如4-7元）杂环烷基。
R6是任选地被一个或多个–Q2-T2取代的4–12元（例如4-7元）杂环烷基，其中–Q2-T2是氧代或Q2是键，并且T2选自C1-C6烷基、-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-S(O)2Rc或任选地被一个或多个–Q3-T3取代的4-12元（例如4-7元）杂环烷基。
–Q2-T2不是氢。
Q3是键或C1-C3烷基连接体，并且T3选自C1-C3烷基、ORe、-S(O)2Re或-NReRf。
R6选自哌啶基、2,2,6,6-四甲基哌啶基、1,2,3,6-四氢哌啶基、2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基或吡咯烷基。
R6选自氟、溴或氯。
R7不是氢。
R7是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-14元（例如4-7元）杂环烷基，每个任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
R7选自哌啶基、四氢吡喃基、硫代环己烷基、氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-3'-酮-4-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃[3,4-b]吡啶]-7'酮-4-基、3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃[3,4-c]吡啶]-3'-酮-4-基、1-氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮-8-基、环丁基、环戊基或环己基，每一个R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
T5选自氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基或4-12元（例如4-7元）杂环烷基。
Q5是键，且T5选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-12元（例如4-7元）杂环烷基。
Q5是键，且T5选自氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基或双-C1-C6烷基氨基，T5任选被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷基。
Q5选自羰基、硫酰基或NHC(O)，且T5选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-12元（例如4-7元）杂环烷基。
Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是氢或C6-C10芳基。
Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是C3-C8环烷基，4-12元（例如4-7元）杂环烷基或S(O)qRq。
R11是氢。
R7是环戊基或环己基，每一个任选被一个–Q5-T5取代。
Q5是NHC(O)并且T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
R7是异丙基。
R2和R4是各自独立为任选被C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基。
R2和R4各自是甲基。
R1是氢。
R12是氢、甲基、乙基、乙烯基或卤素。
R12是甲基。
R12是乙基。
R12是乙烯基。
R8是氢、甲基或乙基。
R8是甲基。
R8是乙基。
R8是乙烯基或丙烯基。
R8是4-12元（例如4-7元）杂环烷基，如哌啶基或四氢吡喃基。
Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的原子形成选自下列组的环：哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、2-氧代-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基和环己烯基，每一个Z任选被一个–Q6-T6取代。
R13是氢或甲基。
R13是氢。
R3是氢。
Z是NR7R8、OR7或S(O)aR7；R1是氢或任选被一个或多个选自下列组的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基和C6-C10芳基；R2和R4各自独立地为–Q1-T1，其中Q1是键或任选被一个或多个选自卤素和羟基取代的C1-C3烷基连接体，并且T1选自氢、卤素或叠氮基；R3是氢或卤素；R5是氢或C1-C6烷基；R6是氢、卤素、氰基、叠氮基、ORa、-NRaRb、-C(O)NRaRb、-S(O)bRa或RS2；其中RS2是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或4-12元杂环烷基，其中Ra和Rb各自独立选自氢、C1-C6烷基或4-12杂环烷基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子形成含0或1个额外的杂原子的4-12元杂环烷基环；Ra、RS2和所述由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷基环各自任选地被一个或多个-Q2-T2取代，其中Q2是键或C1-C3烷基连接体，T2选自氢、卤素、-ORc、-NRcRd、-C(O)ORc或C1-C6烷基，其中Rc和Rd各自独立为氢或C1-C6烷基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子形成含0或1个额外的杂原子的、任选地被C1-C6烷基取代的4-12元杂环烷基环；R7是–Q4-T4，其中Q4是键或C1-C4 烷基连接体，T4选自氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、C(O)-C1-6烷基、C(O)-C3-6环烷基或4-14元杂环烷基，每一个T4任选地被一个或多个–Q5-T5取代；R8是氢、任选地被卤素或羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基；或R7和R8连同它们所连接的氮原子形成含0-2个额外的杂原子的4-12元杂环烷基环，且所述由R7和R8形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q6-T6取代；R12是卤素、C1-C6烷氧基或任选地被卤素或C2-C6烯基取代的C1-C6烷基。
R1是氢或任选地被选自羟基、C1-C6烷氧基和C6-C10芳基的取代基所取代一次或多次的C1-C6烷基；R7是–Q4-T4，其中Q4是键或C1-C4烷基连接体，T4选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、C(O)-C1-C6烷基、C(O)-C3-C6环烷基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基和氧杂环丁烷基，每一个T4各自独立地被一个或多个下列取代基取代：氧代和–Q5-T5；R8是氢或C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基或C3-C8环烷基；R12选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基或C1-C6烷氧基。
Z是NR7R8或SR7；R6选自氢、卤素、氰基、ORa、-C(O)NRaRb、-S(O)2Ra或RS2；其中RS2是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或4-12元杂环烷基，且其中Ra和Rb各自独立为氢或C1-C6烷基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子形成含0或1个额外的杂原子的4-12元杂环烷基环；RS2和所述的由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷基环各自任选地被1个或多个-Q2-T2取代；其中Q2是键或C1-C3烷基连接体，T2选自氢、卤素、-ORc、-NRcRd、-C(O)OC1-C6烷基或C1-C6烷基，其中Rc和Rd各自独立为氢或C1-C6烷基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子形成含0或1个额外的杂原子和含0或1个C1-C6烷基取代基的4-12元杂环烷基环；R7选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基和氧杂环丁烷基，每一个任选地被一个或多个独立地选自氧代和–Q5-T5的取代基取代；R12是卤素或C1-C6烷基。
R2、R4和R12各自独立为C1-C6烷基，且R5是氢。
R7选自环己基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基、1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-4-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃[3,4-b]吡啶]-4- 基、3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃[3,4-c]吡啶]-4-基或1-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基，每一个R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
Z选自哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚烷-5-基，1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基和环己烯基，每一个Z任选地被一个–Q6-T6取代。
R6是卤素时，Z是S(O)aR7，其中a是0、1或2，R7是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基，并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
R6是卤素时，Z是OR7，其中R7是任选地被一个或多个–Q5-T5取代4-7元的杂环烷基。
R6是-S(O)bRa或叠氮基，其中b是0、1或2，Ra是C1-C6烷基或C3-C8环烷基；Z是NR7R8，其中R7是C3-C8环烷基或4-14元杂环烷基，每一个R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代；R8是氢或C1-C6烷基。
R6是卤素时，Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11元杂环烷基环或C3-C8环烷基，每一个任选地被一个或多个–Q6-T6取代。
U是氧、硫、N-Q5-T5或CH-Q5-T5。
n是0、1或2。
R12是氯、溴或甲基。
一个或多个–Q5-T5是氧代。
U是CH-Q5-T5且n是0。
一个或多个–Q6-T6是氧代。
Q6是键或羰基，T6是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包含一种或多种药学上可接受的载体和一种或多种选自本文描述的任意一种结构式的化合物，以及N-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺、N，N'-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-1,3-亚苯基)二乙酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-特戊酰氨基苯甲酰胺、3-(3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯-7-磺酰胺基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,4,5 三甲氧基苯甲酰胺、3-烯丙基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4,5-二甲氧基苯甲酰胺、4-(2-氨基-2-氧代乙氧基)-3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基苯甲酰胺、3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-羟基-5-甲氧基苯甲酰胺和3-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基-4-丙氧基苯甲酰胺。
本发明另一方面提供一种治疗或预防癌症的方法。该方法包括向需要治疗的受试者给予治疗有效量的一种或多种选自本文所描述的任意结构式的化合物，以及N-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺、N,N'-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-1,3-亚苯基)二乙酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-特戊酰氨基苯甲酰胺、3-(3,4-二氢-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯-7-磺酰胺基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基))苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基))-3,5-二甲氧基苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基))-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺、3-烯丙基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基))-4,5-二甲氧基苯甲酰胺、4-(2-氨基-2-氧代乙氧基)-3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基苯甲酰胺，3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-羟基-5-甲氧基苯甲酰胺和3-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基-4-丙氧基苯甲酰胺。
除非另有说明，有关治疗方法的任何描述包括化合物在用于提供如说明书中所描述的这种治疗或预防方法的用途，以及化合物在制备用于治疗或预防这样的疾病的药物中的用途。所述治疗包括治疗人类或非人类的动物，包括啮齿动物和其他疾病模型。
例如，本方法包括向患有异常的H3-K27甲基化的癌症受试者给予治疗有效剂量的一个或多个本文所描述的结构式的化合物的步骤，其中该化合物抑制EZH2的组蛋白甲基转移酶活性，从而治疗癌症。异常的H3-K27甲基化的例子可包括在癌细胞染色质内的H3-K27二甲基化或三甲基化的全面增长和/或改变的分布。
例如，所述癌症选自下列组的癌症：其过表达EZH2或其它PRC2亚基，包含H3-K27脱甲基酶例如UTX中的失去功能的突变，或过表达能够增加和/或去 本土化EZH2活性的附属蛋白，如PHF19/PCL3（参阅Sneeringer et al.Proc NatlAcad Sci USA107(49):20980-5,2010）。
例如，本方法包括向患有EZH2过表达的癌症受试者给予治疗有效剂量的一种或多种本文所描述的结构式的化合物的步骤，其中该化合物抑制EZH2的组蛋白甲基化酶活性，从而治疗癌症。
例如，本方法包括向患有带有H3-K27脱甲基酶UTX失去功能的突变的癌症受试者给予治疗有效剂量的一种或多种本文所描述的结构式的化合物的步骤，其中该化合物抑制EZH2的组蛋白甲基化酶活性，从而治疗癌症。
例如，本方法包括向过表达PRC2的附属组成（如PHF19/PCL3）的癌症受试者给予治疗有效剂量的一种或多种本文所描述的结构式的化合物的步骤，其中该化合物抑制EZH2的组蛋白甲基化转移酶活性，从而治疗癌症。
在又一方面中，本发明涉及调节野生型EZH2的活性的方法，所述野生型EZH2是PRC2复合物中的可催化组蛋白H3上的赖氨酸27(H3-K27)的单基化至三甲基化的催化亚基。例如，本发明涉及在细胞内抑制EZH2活性的方法。该方法可在体内或体外进行。
在又一个方面，本发明涉及一种抑制受试者中H3-K27向三甲基化H3-K27转化的方法。本方法包括向受试者给予治疗有效剂量的一种或多种本文所描述的结构式的化合物，以抑制EZH2的组蛋白甲基化转移酶活性，从而抑制受试者体内的H3-K27向三甲基化H3-K27的转化。
例如，本方法包括向表达EZH2的Y641突变体的癌症受试者给予治疗有效剂量的一种或多种本文所描述的结构式的化合物的步骤，其中该化合物抑制EZH2的组蛋白甲基化转移酶活性，从而治疗癌症。
例如，所述癌症选自滤泡性淋巴癌和生发中心B细胞样(GCB)亚型的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。例如，该癌症是淋巴瘤、白血病或黑色素瘤。优选地，淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤或弥漫性大B细胞淋巴瘤。或者，白血病是慢性髓性白血病(CML)、急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病或混合谱系白血病。
癌前疾病是骨髓增生异常综合症（MDS，原名叫白血病前期）。
例如，癌症是一种血液癌症。
例如，本方法包括向表达EZH2的Y641突变体的癌症受试者给予治疗有效剂量的一种或多种本文所描述的结构式的化合物的步骤，其中该化合物选择地抑制EZH2的Y641突变体的组蛋白甲基化转移酶活性，从而治疗癌症。
例如，该方法进一步包括进行用来检测来自于癌症受试者的含有癌细胞的样品中的EZH2的Y641突变体的试验的步骤。
在又一方面，本发明涉及调节野生型和突变型组蛋白甲基化转移酶EZH2的活性的方法，所述野生型EZH2是可催化组蛋白H3上的赖氨酸27(H3-K27)的单甲基化至三甲基化的PRC2复合物的催化亚基。例如，本发明涉及抑制细胞内EZH2的某些突变体形式的活性的方法。所述EZH2的突变体形式包括另一个氨基酸残基对野生型EZH2的酪氨酸641（Y641，也称Tyr641）的替换。该方法包括使细胞与有效剂量的一种或多种本文描述的任何一个结构式化合物接触。所述方法可以在体内或体外进行。
本发明的又一方面涉及抑制受试者体内的H3-K27向三甲基化H3-K27转化的方法。所述方法包括向表达EZH2的Y641突变体的受试者给予治疗有效剂量一种或多种本文描述的任何一个式的化合物，以抑制EZH2的组蛋白甲基化转移酶的活性，从而抑制受试者体内的H3-K27向三甲基化的H3-K27的转化。例如，被抑制的组蛋白甲基化转移酶活性是EZH2的Y641突变体的活性。例如，本发明化合物选择性地抑制EZH2的Y641突变体的组蛋白甲基化转移酶活性。例如，所述EZH2的Y641突变体选自下列组：Y641C、Y641F、Y641H、Y641N和Y641S。
抑制受试者体内的H3-K27向三甲基化H3-K27转化的方法同样可以包括在向表达EZH2的Y641突变体的受试者给予治疗有效剂量的一种或多种本文描述的任何一种式的化合物之前，对来自受试者的样本进行用来检测EZH2的Y641突变体的测试。例如，进行测试来检测EZH2的Y641突变体包括检测编码EZH2的Y641突变体的核酸的全基因组测序或目标区域测序。例如，进行测试来检测EZH2的Y641突变体包括使样品与一种特异结合具有EZH2的Y641突变体的特征的多肽或其片段的抗体接触。例如，进行测试来检测EZH2的Y641突变体包括使样品在非常严格的条件下与核酸探针接触，该核酸探针与编码具有EZH2的Y641突变体特征的多肽或其片段的核酸杂合。
进一步地，本发明还涉及一种识别EZH2的Y641突变体的抑制剂的方法。该方法包括步骤：使EZH2的一个孤立的Y641突变体与组蛋白底物、甲基基团 供体和测试化合物结合，其中所述组蛋白底物包括选自下列组的H3-K27形式：未甲基化的H3-K27、单甲基化的H3-K27、二甲基化的H3-K27和它们的任意组合；以及进行用来检测组蛋白底物中的H3-K27的甲基化（例如三甲基化的H3-K27的形成)的测试，从而当在测试化合物存在下的H3-K27的甲基化（例如三甲基化的H3-K27的形成）少于在测试化合物不存在时的H3-K27的甲基化（例如三甲基化的H3-K27的形成）时，识别该测试化合物作为EZH2的Y641突变体的抑制剂。
在一个实施例中，进行用来检测组蛋白底物中的H3-K27的甲基化的测试包括测量标记的甲基基团的结合。
在一个实施例中，标记的甲基基团是同位素标记的甲基基团。
在一个实施例中，进行用来检测组蛋白底物中的H3-K27的甲基化的测试包括使组蛋白底物与特异性结合在三甲基化的H3-K27上的抗体接触。
识别EZH2的Y641突变体的选择性抑制剂的方法同样在本发明范围内。本方法包括步骤：使EZH2的孤立的Y641突变体同组蛋白底物、甲基基团供体和测试化合物结合，其中所述组蛋白底物包括选自下列组的H3-K27形式：单甲基化的H3-K27、双甲基化的H3-K27以及单甲基化的H3-K27和双甲基化的H3-K27的组合，从而形成测试混合物；使孤立的野生型EZH2同组蛋白底物、甲基基团供体和测试化合物结合，其中所述组蛋白底物包括选自下列组的H3-K27形式：单甲基化的H3-K27、双甲基化的H3-K27以及单甲基化的H3-K27和双甲基化的H3-K27的组合，从而形成对照混合物；进行用来检测每个测试混合物和对照混合物中组蛋白底物的三甲基化的测试；计算(a)用EZH2的Y641突变体和测试化合物的三甲基化(M+)与(b)用EZH2的Y641突变体而没有测试化合物的三甲基化(M-)的比值；计算(c)用野生型EZH2和测试化合物的三甲基化(WT+)与用(d)野生型EZH2而没有测试化合物的三甲基化(WT-)的比值；对比比值(a)/(b)与比值(c)/(d)；当比值(a)/(b)小于比值(c)/(d)时，识别该测试化合物作为EZH2的Y641突变体的选择性抑制剂。
本发明进一步提供了识别作为可用一种或多种本发明化合物来治疗的候选者的受试者的方法。所述方法包括步骤：进行用来检测来自于受试者的样本中的EZH2的Y641突变体的测试；以及识别作为可用一种或多种本发明的化合物来治 疗的表达EZH2的Y641突变体的候选者的受试者，其中该化合物抑制EZH2的组蛋白甲基化转移酶活性。
本发明又一方面涉及一种抑制H3-K27向三甲基化H3-K27转化的方法。所述方法包括使EZH2的Y641突变体与蛋白底物接触的步骤，所述组蛋白底物包含H3-K27和有效剂量的本发明的化合物，其中所述化合物抑制EZH2的组蛋白甲基化转移酶活性，从而抑制H3-K27向三甲基化H3-K27的转化。
进一步地，本文所述化合物或方法可用于研究（例如研究表观遗传酶）和其他非治疗的用途。
除非另外特别说明，否则本文所述的所有的技术和科学术语均指本发明所属领域普通技术人员所通常理解的含义。在说明书中，除非上下文清楚地规定，否则单数形式也包括复数。虽然本文所述方法和材料的类似或等同替代物也可以应用在本发明的实践或检测中，但是下文只描述适宜的方法和材料。本文提到的所有的出版物、专利申请、专利和其它参考文献均通过引用而并入本文中。本文所引用的文献并不认为是本发明的现有技术。如有冲突，以本说明书包括定义为准。此外，本文所述材料、方法和实施例仅意图说明本发明而非限制本发明。
通过下面的详细描述和权利要求，本发明的其它特征和优点将变得显而易见。
附图说明
图1（A）是细胞计数（即细胞数量）作为时间的函数的理想图，其显示了细胞对数生长期期间的指数增殖。
图1（B）是对于图（A）中数据的ln（细胞计数）作为时间的函数的理想图。
图2是显示了在抗恶性细胞增生化合物存在下的两相细胞生长曲线的图，对于抗恶性细胞增生化合物在其对细胞生长的作用实现之前有延迟。该化合物在标记为“作用开始”的时间点开始影响细胞生长。实心圆表示对于没有用化合物处理的载剂（或溶剂）对照样品的理想化数据。其他符号表示对于以不同浓度的化合物（即药物）处理的细胞的两相生长曲线。
图3是对于（A）细胞抑制化合物和（B）细胞毒性化合物的kp作为化合物浓度的函数的重制图，显示了对细胞毒剂的LCC的绘图测定。注意：对细胞抑制化合物（图A），kp值永远不能降到低于零。
图4是显示了以化合物222处理了超过27天的WSU-DLCL2异种移植小鼠的肿瘤生长的图示。
图5是显示了来源于以化合物222或载剂处理了27天的小鼠的WSU-DLCL2肿瘤中的局部H3K27me3甲基化的图示。
具体实施方式
本发明提供了新颖的取代苯化合物、制备该化合物的合成方法、包含它们的药物组合物以及该化合物的各种用途。
1.取代苯化合物
本发明提供式(I)的化合物：
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在该式中：
X1是N或CR11；
X2是N或CR13；
X3是N或C，且当X3是N时，R6不存在；
Z是NR7R8、OR7、S(O)aR7或CR7R8R14，其中a为0、1或2；
R1、R5、R9和R10各自独立为H或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12 元杂环烷基和五或六元杂芳基；
R2、R3和R4各自独立为–Q1-T1，其中Q1为键或是任选地被一个或多个选自下列组的取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T1选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、叠氮基或RS1，其中RS1选自C1-C3烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C(O)O-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，且RS1任选地被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、氧代、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂环芳基；
R6选自氢、卤素、氰基、叠氮基、ORa、-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-S(O)bRa、-S(O)bNRaRb或RS2，其中RS2选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或4-12元杂环烷基；b是0、1或2；Ra和Rb各自独立为氢或RS3，其中RS3选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂环芳基；或Ra和Rb，连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷基环；RS2、RS3以及由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q2-T2取代，其中Q2为键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基；T2选自氢、卤素、氰基、-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-C(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)ORc、-S(O)2Rc、-S(O)2NRcRd或RS4，其中Rc和Rd各自独立选自H或RS5，其中RS4和RS5各自独立选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂芳基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷基环，RS4、RS5以及由Rc和Rd形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q3-T3取代，其中Q3是键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T3选自卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五元或六元杂芳基、ORe、COORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf，Re和Rf各自独立选自氢或C1-C6烷基，或–Q3-T3为氧代；或–Q2-T2为氧代；
R7是–Q4-T4，其中Q4为键、C1-C4烷基连接体或C2-C4烯基连接体，每个连 接体任选地被下列取代基取代：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T4选自氢、卤素、氰基、NRgRh、-ORg、-C(O)Rg、-C(O)ORg、-C(O)NRgRh、-C(O)NRgORh、-NRgC(O)Rh、-S(O)2Rg或RS6，其中Rg和Rh各自独立地选自氢或RS7，RS6和RS7各自独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-14元杂环烷基或者五或六元杂芳基，RS6和RS7可任选地被一个或多个–Q5-T5取代，其中Q5是键、羰基、C(O)NRk、NRkC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rk是氢或C1-C6烷基，T5选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)qRq，其中q为0、1或2，Rq选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，T5任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，当T5是氢、卤素、羟基或氰基时除外；或–Q5-T5是氧代；
R8、R11、R12和R13均各自独立选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、RS8、ORS8或COORS8，其中RS8选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基、氨基、单-C1-C6烷基氨基或双-C1-C6烷基氨基，RS8任选地被选自下列组的一或多个取代基取代：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基和双-C1-C6烷基氨基；或R7和R8连同它们所连接的接的氮原子一起形成含0-2个额外杂原子的4-12杂环烷基环，或R7和R8连同它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基或含1-3个杂原子的4-12元杂环烷基环，所述的由R7和R8形成的4-12元杂环烷基环或C3-C8环烷基任选地被一个或多个–Q6-T6取代，其中Q6是键、羰基、C(O)NRm、NRmC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rm为氢或C1-C6烷基，T6选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)pRp，其中p是0、1或2，Rp选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基，T6任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳 基，当T6为氢、卤素、羟基或氰基时除外；或–Q6-T6为氧代；以及
R14不存在或为氢或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基；
条件是，所述化合物不是
N-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺、N,N'-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-1,3-亚苯基)二乙酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-特戊酰基氨基苯甲酰胺、3-(3,4-二羟基-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯-7-磺酰胺基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二羟基吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺、3-烯丙基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4,5-二甲氧基苯甲酰胺、4-(2-氨基-2-氧代乙氧基)-3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基苯甲酰胺、3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-羟基-5-甲氧基苯甲酰胺或3-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基-4-丙氧基苯甲酰胺。
例如，X1是CR11且X2是CR13。
例如，X1是CR11且X2是N。
例如，X1是N且X2是CR13。
例如，X1是N且X2是N。
例如，X3是碳。
例如，X3是N，R6不存在。
例如，Z是NR7R8。
例如，Z是CR7R8R14。
例如，Z是OR7。
例如，Z是S(O)aR7，其中a是0、1或2。
例如，Z是SR7。
例如，R6是氢。
例如，R6是卤素（如氟、氯、溴、碘）。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的C1-C3烷基。
例如，R6是三氟甲基。
例如，R6是C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C6环烷基，每一个任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是乙烯基。
例如，R6是乙炔基。
例如，R6是被一个或多个–Q2-T2取代的乙炔基，其中Q2是键或C1-C3烷基连接体，且T2是C1-C6烷基、C3-C6环烷基或任选被一个或多个–Q3-T3取代的4-7元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R6是叠氮基。
例如，R6是氰基。
例如，R6是醛基。
例如，R6是ORa或-C(O)Ra。
例如，Ra是C1-C6烷基或4-7元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），所述Ra任选地被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、 1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R6是哌啶基、2,2,6,6-四甲基哌啶基、1,2,3,6-四羟基哌啶基、2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四羟基哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基或吡咯烷基，其中每一个任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的4-7元杂环烷基，并且–Q2-T2是氧代或Q2是键且T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-S(O)2Rc、C1-C6烷基或4-7元杂环烷基，当Rc或Rd不是氢时，每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，R6是-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-SRa、-S(O)2Ra或-S(O)2NRaRb。
例如，Ra和Rb各自独立为氢、C1-C6烷基或任选被一个或多个–Q2-T2取代的C3-C8环烷基。
例如，Ra和Rb其中之一为氢。
例如，Ra和Rb连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个除氮以外的额外杂原子的4-7元杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），并且所述环任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，–Q2-T2不是氢。
例如，–Q2-T2是氧代。
例如，Q2是键。
例如，Q2是未取代的C1-C3烷基连接体。
例如，T2是C1-C6烷基或C6-C10芳基，每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，T2是未被取代或被取代的直链C1-C6或支链C3-C6烷基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基。
例如，T2是苯基。
例如，T2是卤素（如氟、氯、溴、碘）。
例如，T2是任选被一个或多个–Q3-T3取代的4-7元杂环烷基（如,氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc或-S(O)2Rc。
例如，Rc是C1-C6烷基或4-7元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），任选地被一个或多个–Q3-T3取代的。
例如，Rc和Rd各自独立为氢或任选被一个或多个–Q3-T3取代的C1-C6烷基。
例如，Rc是氢。
例如，Rd是氢。
例如，Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个除氮以外的额外杂原子的4-7元杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），并且所述环任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，Q2是键并且T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-S(O)2Rc、C1-C6烷基或4-7元杂环烷基，当Rc或Rd不为氢时，每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，–Q3-T3是氧代。
例如，T2是4-7元杂环烷基或C3-C8环烷基，并且一个或多个–Q3-T3是氧代。
例如，Q3是键或未被取代或被取代的C1-C3烷基连接体。
例如，T3选自氢、卤素、4-7元杂环烷基、C1-C3烷基、ORe、COORe、-S(O)2Re、–NReRf或-C(O)NReRf。
例如，Rd和Re其中之一为氢。
例如，Q3是键或C1-C3烷基连接体，T3选自C1-C3烷基、卤素、ORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf。
例如，Q3是键或C1-C3烷基连接体，T3选自C1-C3烷基、ORe、-S(O)2Re或-NReRf。
例如，Re是氢。
例如，Rf是氢。
例如，R7不是氢。
例如，R7是-C(O)Rg。
例如，R7是-C(O)Rg，其中Rg是C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基、C3-C8环烷基。
例如，R7是被一个或多个–Q5-T5取代的C6-C10芳基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的苯基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的C1-C6烷基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的C3-C8环烷基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的4-7元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R7是8-14元杂环烷基，比如1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基（例如1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基）、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基（例如1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基）、1-氧杂螺[4.5]癸烷基（例如1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基或1-氧杂螺[4.5]癸烷-2-酮-8-基）、1-氮杂螺[4.5]癸烷基（例如1-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基或1-氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮-8-基）、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基（例如3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-4-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-3'-酮-4-基）、7'H- 螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基（例如7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-4-基或7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-7'-酮-4-基）或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基（例如3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-4-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-3'-酮-4-基），每一个任选被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5.取代的五或六元杂环烷基。
例如，R7是异丙基。
例如，R7是吡咯烷基、哌啶基、四氢吡喃基、环戊基或环己基、环庚基，每一个任选被一个–Q5-T5取代。
例如，R7是环戊基或环己基，每一个任选被一个–Q5-T5取代。
例如，Q5是NHC(O)，T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
例如，–Q5-T5是氧代。
例如，T4是4-7元杂环烷基或C3-C8环烷基或C6-C10芳基，并且一个或多个–Q5-T5是氧代。
例如，R7是1-氧化-四氢-2H-噻喃基或1,1-二氧化-四氢-2H-噻喃基。
例如，R7是环己酮基，例如环己酮-4-基。
例如，T5是氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基或4-7元杂环烷基。
例如，Q5是键，T5是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Q5是键，T5是五或六元杂芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基，T5任选被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷基。
例如，Q5是羰基、硫酰基或NHC(O)；且T5是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，并任选被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C3-C8环烷基取代。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是氢或C6-C10芳基。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是C3-C8环烷基、4-7元杂环烷基或S(O)qRq。
例如，R6是卤素（例如氟、氯、溴、碘）并且Z是S(O)aR7，其中a是0、1或2，R7选自C1-C6烷基（例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基或叔丁基）、C3-C8环烷基（例如环戊基、环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R6是卤素（例如氟、氯、溴、碘），并且Z是OR7，其中R7是4-14元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R11是氢。
例如，R2和R4各自独立为氢或任选被氨基、叠氮基、卤素、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷基。
例如，R2和R4各自独立为任选被C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基。
例如，R2和R4各自为甲基。
例如，R1是氢。
例如，R1是任选被叠氮基、卤素、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷基。
例如，R12是氢、甲基、乙基、乙烯基或卤素。
例如，R12是甲基。
例如，R12是乙基或丙烯基。
例如，R12是甲氧基。
例如，R12是乙烯基。
例如，R8是氢、甲基、乙基或乙烯基。
例如，R8是甲基。
例如，R8是乙基。
例如，R8是丙基。
例如，R8是乙烯基或丙烯基。
例如，R8是被一个或多个下列组的取代基取代的C1-C6烷基：卤素（例如氟、氯、溴、碘）、羟基或C1-C6烷氧基。
例如，R8是4-7元任选被取代的杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R8是哌啶基。
例如，R8是4-7元任选被取代的杂环烷基，且R7是–Q4-T4，其中Q4是键或C1-C4烷基连接体，T4是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11元杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基等）或C3-C8环烷基，每一个任选被一个或多个–Q6-T6取代。
例如，所述由R7和R8形成的环选自下列组：氮杂环庚烷基、吡唑烷基、哌嗪基、吗啉基、哌嗪基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基和环己烯基，每一个任选被一个–Q6-T6取代。
例如，Z是1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基-8-基、吡咯烷-2,5-二酮-1-基或哌啶-2,6-二酮-1-基。
例如，一个或多个–Q6-T6是氧代。
例如，T6是氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-7元杂环烷基。
例如，Q6是键，T6是C1-C6烷基，C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Q6是羰基、硫酰基或NHC(O)；并且T6选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，T6是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，每一个任选被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C3-C8环烷基取代。
例如，Q6是C1-C3烷基连接体且T6是氢或C6-C10芳基。
例如，Q6是C1-C3烷基连接体且T6是C3-C8环烷基、4-7元杂环烷基或S(O)pRp。
例如，Rp和Rq各自独立为C1-C6烷基。
例如，R6是-S(O)bRa或叠氮基，其中b是0、1或2，并且Ra是C1-C6烷基或C3-C8环烷基；且Z是NR7R8，其中R7是C3-C8环烷基（例如环戊基，环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），每一个任选地被一个或多个–Q5-T5取代；并且R8是氢或C1-C6烷基（例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基或叔丁基）。
例如，R6是卤素（例如氟、氯、溴和碘），并且Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二 氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基、吡唑啉-2,5-二酮-1-基，哌啶-2，6-二酮-1-基等）或C3-C8环烷基，每一个任选被一个或多个–Q6-T6取代。
例如，R13是氢或甲基。
例如，R13是氢。
例如，R3是氢。
例如，R5、R9和R10均为氢。
另一方面，本发明的特征是提供上述式(I)的取代苯化合物或其药学上可接受的盐或酯，其中
X1是N或CR11；
X2是N或CR13；
X3是N或C，且当X3是N时，R6不存在。
Z是NR7R8、OR7、S(O)aR7或CR7R8R14，其中a是0、1或2;
R1、R5、R9和R10各自独立为H或任选被一个或多个选自下组的取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基；
R2、R3和R4各自独立为–Q1-T1，其中Q1为键或任选被选自卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基连接体，T1选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、叠氮基或RS1，其中RS1选自C1-C3烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C(O)O-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，且RS1任选地被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、氧代、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂环芳基；
R6选自氢、卤素、氰基、叠氮基、ORa、-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-S(O)bRa、-S(O)bNRaRb或RS2，其中RS2选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或4-12元杂环烷基；b是0、1或2，Ra和Rb各自 独立为氢或RS3，其中RS3选自C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C6-C10芳基，4-12元杂环烷基或者五元或六元杂环芳基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷环；每一个RS2、RS3以及所述Ra和Rb形成的4-12元杂环烷环任选地被一个或多个–Q2-T2取代，其中Q2为键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T2选自氢、卤素、氰基、-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-C(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)ORc、-S(O)2Rc、-S(O)2NRcRd或RS4，其中Rc和Rd各自独立选自氢或RS5，其中RS4和RS5，各自独立选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂芳基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷环，RS4、RS5以及由Rc和Rd形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q3-T3取代，其中Q3是键或是任选地被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T3选自卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五元或六元杂芳基、ORe、COORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf，Re和Rf各自独立地选自氢或C1-C6烷基，或–Q3-T3为氧代；或–Q2-T2为氧代；
R7是–Q4-T4，其中Q4为键、C1-C4烷基连接体或C2-C4烯基连接体，每个连接体任选地被下列取代基取代：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T4选自氢、卤素、氰基、NRgRh、-ORg、-C(O)Rg、-C(O)ORg、-C(O)NRgRh、-C(O)NRgORh、-NRgC(O)Rh、-S(O)2Rg或RS6，其中Rg和Rh各自独立地选自氢或RS7，RS6和RS7各自独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，RS6和RS7可任选被一个或多个–Q5-T5取代，其中Q5是键、羰基、C(O)NRk、NRkC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rk是氢或C1-C6烷基，T5选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)qRq，其中q为0、1或2，Rq选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，T5任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，当T5是氢、卤 素、羟基或氰基时除外；或–Q5-T5是氧代；假设(i)当Z是NR7R8时，R7不是C(O)Rg或-S(O)2Rg；(ii)当Z是OR7时，R7不是C1-C6烷基以及(iii)R7不是氢；
R8、R11、R12和R13各自独立选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、RS8、ORS8或COORS8，其中RS8选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基、氨基、单-C1-C6烷基氨基或双-C1-C6烷基氨基，且RS8任选被选自下列组的一或多个取代基取代：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基和双-C1-C6烷基氨基；或R7和R8连同它们所连接的氮原子一起形成含0-2个额外杂原子的4-12杂环烷基环，或R7和R8同它们所连接的碳原子一起形成C3-C8环烷基或一个含1-3个额外杂原子的4-12元杂环烷基环，每一个所述的R7和R8形成的4-12元杂环烷基环或C3-C8环烷基任选被一个或多个–Q6-T6取代，其中Q6是键、羰基、C(O)NRm、NRmC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rm为氢或C1-C6烷基，T6选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)pRp，其中p是0、1或2，且Rp选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基，并且T6任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，T6是氢、卤素、羟基或氰基时情况除外；或–Q6-T6为氧代；并且
R14选自不存在、氢或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基。
例如，X1是CR11且X2是CR13。
例如，X1是CR11且X2是N。
例如，X1是N且X2是CR13。
例如，X1是N且X2是N。
例如，X3是碳。
例如，X3是N且R6不存在。
例如，Z是NR7R8。
例如，Z是CR7R8R14。
例如，Z是OR7。
例如，Z是S(O)aR7，其中a是0、1或2。
例如，Z是SR7。
例如，R6是氢。
例如，R6是卤素（如氟、氯、溴、碘）。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的C1-C3烷基。
例如，R6是三氟甲基。
例如，R6是C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C6环烷基，每一个任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是乙烯基。
例如，R6是乙炔基。
例如，R6是被一个或多个–Q2-T2取代的乙炔基，其中Q2是键或C1-C3烷基连接体，且T2是C1-C6烷基、C3-C6环烷基或4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基和吗啉基等）其任选地被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，R6是叠氮基。
例如，R6是氰基。
例如，R6是醛基。
例如，R6是-C(O)Ra。
例如，Ra是C1-C6烷基或4-7元杂环烷基(例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺 [3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等)，其任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的4-7元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R6是哌啶基、2,2,6,6-四甲基哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基或吡咯烷基，其中每一个任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的4-7元杂环烷基，并且–Q2-T2是氧代或Q2是键，且T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-S(O)2Rc、C1-C6烷基或4-7元杂环烷基，当Rc或Rd不是氢时，其中每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，R6是-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-SRa、-S(O)2Ra或-S(O)2NRaRb。
例如，Ra和Rb各自独立为氢、C1-C6烷基或任选被一个或多个–Q2-T2取代的C3-C8环烷基。
例如，Ra和Rb其中之一为氢。
例如，Ra和Rb连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个除氮原子以外的额外杂原子的4-7元杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），并且所述环任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，–Q2-T2不是氢。
例如，–Q2-T2是氧代。
例如，Q2是键。
例如，Q2是未取代的C1-C3烷基连接体。
例如，T2是C1-C6烷基或C6-C10芳基，每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，T2是未被取代或被取代的直链C1-C6或支链C3-C6烷基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基。
例如，T2是苯基。
例如，T2是卤素（如氟、氯、溴、碘）。
例如，T2是任选被一个或多个–Q3-T3取代的4-7元杂环烷基（如,氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc或-S(O)2Rc。
例如，Rc是任选被一个或多个–Q3-T3取代的4-7元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，Rc和Rd各自独立为氢或任选被一个或多个–Q3-T3取代的C1-C6烷基。
例如，Rc是氢。
例如，Rd是氢。
例如，Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个除氮以外的额外杂原子的4-7元杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等)，并且所述环任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，Q2是键，并且T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-S(O)2Rc、C1-C6烷基或4-7元杂环烷基，当Rc或Rd不为氢时其中每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，–Q3-T3是氧代。
例如，T2是4-7元杂环烷基或C3-C8环烷基，并且一个或多个–Q3-T3是氧代。
例如，Q3是键或未被取代或被取代的C1-C3烷基连接体。
例如，T3是氢、卤素、4-7元杂环烷基、C1-C3烷基、ORe、COORe、-S(O)2Re、–NReRf或-C(O)NReRf。
例如，Rd和Re其中之一为氢。
例如，Q3是键或C1-C3烷基连接体，T3选自C1-C3烷基、卤素、ORe、-S(O)2Re、-NReRf、和-C(O)NReRf。
例如，Q3是键或C1-C3烷基连接体，T3选自C1-C3烷基、ORe、-S(O)2Re或-NReRf。
例如，Re是氢。
例如，Rf是氢。
例如，R7不是氢。
例如，R7是-C(O)Rg。
例如，R7是-C(O)Rg，其中Rg是C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基、C3-C8环烷基。
例如，R7是被一个或多个–Q5-T5取代的C6-C10芳基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的苯基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的C1-C6烷基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的C3-C8环烷基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的4-7元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R7是8-14元杂环烷基，比如1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基（例如1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基）、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基（例如1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基）、1-氧杂螺[4.5]癸烷基（例如1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基或1-氧杂螺[4.5]癸烷-2-酮-8-基）、1-氮杂螺[4.5]癸烷基（例如1-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基或1-氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮-8-基）、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基（例如3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-4-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-3'-酮-4-基）、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基（例如7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-4-基或7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-7'-酮-4-基）或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基（例如3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-4-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-3'-酮-4-基），每一个任选被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5.取代的五或六元杂环烷基。
例如，R7是异丙基。
例如，R7是吡咯烷基、哌啶基、四氢吡喃基、环戊基或环己基、环庚基，每一个任选被一个–Q5-T5取代。
例如，R7是环戊基或环己基，每一个任选被一个–Q5-T5取代。
例如，Q5是NHC(O)，T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
例如，–Q5-T5是氧代。
例如，T4是4-7元杂环烷基或C3-C8环烷基或C6-C10芳基并且一个或多个–Q5-T5是氧代。
例如，R7是1-氧化-四氢-2H-噻喃基或1,1-二氧化-四氢-2H-噻喃基。
例如，R7是环己酮基，例如环己酮-4-基。
例如，T5是氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基或4-7元杂环烷基。
例如，Q5是键，T5是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Q5是键，T5是五或六元杂芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基，T5任选被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷基。
例如，Q5是羰基、硫酰基或NHC(O)；且T5是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，每一个任选被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C3-C8环烷基取代。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是氢或C6-C10芳基。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是C3-C8环烷基，4-7元杂环烷基或S(O)qRq。
例如，R6是卤素（例如氟、氯、溴、碘）并且Z是S(O)aR7，其中a是0，1或2，R7选自C1-C6烷基（例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基或叔丁基），C3-C8环烷基（例如环戊基、环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R6是卤素（例如氟、氯、溴、碘），并且Z是OR7，其中R7是4-14元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R11是氢。
例如，R2和R4各自独立为氢或任选被氨基、叠氮基、卤素、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷基。
例如，R2和R4各自独立为任选被C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基。
例如，R2和R4均为甲基。
例如，R1是氢。
例如，R1是氢或任选被叠氮基、卤素、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷基。
例如，R12是氢、甲基、乙基、乙烯基或卤素。
例如，R12是乙基或丙烯基。
例如，R12是甲氧基。
例如，R12是乙烯基。
例如，R8是氢、甲基、乙基或乙烯基。
例如，R8是甲基。
例如，R8是乙基。
例如，R8是丙基。
例如，R8是乙烯基或丙烯基。
例如，R8是任选被一个或多个下列组的取代基取代的C1-C6烷基：卤素（例如氟、氯、溴、碘）、羟基或C1-C6烷氧基。
例如，R8是4-7元任选被取代的杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R8是哌啶基。
例如，R8是4-7元任选被取代的杂环烷基，且R7是–Q4-T4，其中Q4是键或C1-C4烷基连接体，T4是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺 [3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基等）或C3-C8环烷基，每一个任选被一个或多个–Q6-T6取代。
例如，所述由R7和R8形成的环选自下列组：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基和环己烯基，每一个任选被一个–Q6-T6取代。
例如，Z是1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基-8-基、吡咯烷-2,5-二酮-1-基或哌啶-2,6-二酮-1-基。
例如，一个或多个–Q6-T6是氧代。
例如，T6是氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-7元杂环烷基。
例如，Q6是键，T6是C1-C6烷基，C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Q6是羰基、硫酰基或NHC(O)，并且T6选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，T6是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，每一个任选被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C3-C8环烷基取代。
例如，Q6是C1-C3烷基连接体且T6是氢或C6-C10芳基。
例如，Q6是C1-C3烷基连接体且T6是C3-C8环烷基、4-7元杂环烷基或S(O)pRp。
例如，Rp和Rq各自独立为C1-C6烷基。
例如，R6是-S(O)bRa或叠氮基，其中b是0、1或2，并且Ra是C1-C6烷基或C3-C8环烷基；且Z是NR7R8，其中R7是C3-C8环烷基（例如环戊基、环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），每一个任选地被一个或多个–Q5-T5取代；并且R8是氢或C1-C6烷基（例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基或叔丁基）。
例如，R6是卤素（例如氟、氯、溴和碘），并且Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11杂环烷基环（例如氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基、吡咯烷-2,5-二酮-1-基，哌啶-2，6-二酮-1-基等）或C3-C8环烷基，每一个任选被一个或多个–Q6-T6取代。
例如，R13是氢或甲基。
例如，R13是氢。
例如，R3是氢。
例如，R5、R9和R10均为氢。
本发明提供式(Ia)的化合物：
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或其药学上可接受的盐或酯，其中
X1是N或CR11；
X2是N或CR13；
X3是N或C，且当X3是N时，R6不存在；
Z是NR7R8、OR7、S(O)aR7或CR7R8R14，其中a是0、1或2；
R1和R5各自独立为H或任选被一个或多个选自下列组的取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6 烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基；
R2、R3和R4各自独立为–Q1-T1，其中Q1为键或任选被一个或多个选自卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基连接体，T1选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、叠氮基或RS1，其中RS1选自C1-C3烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6烷氧基、C(O)O-C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，且RS1任选地被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、氧代、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂环芳基；
R6选自氢、卤素、氰基、叠氮基、ORa、-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-S(O)bRa、-S(O)bNRaRb或RS2，其中RS2选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或4-12元杂环烷基，b是0、1或2，Ra和Rb各自独立为氢或RS3，其中RS3选自C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C6-C10芳基，4-12元杂环烷基或者五元或六元杂环芳基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷环；每一个RS2、RS3以及所述由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷环任选地被一个或多个–Q2-T2取代，其中Q2为键或是任选被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T2选自氢、卤素、氰基、-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-C(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)ORc、-S(O)2Rc、-S(O)2NRcRd或RS4，其中Rc和Rd各自独立为氢或RS5，其中RS4和RS5各自独立地选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂芳基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷环，每一个RS4、RS5以及所述由Rc和Rd形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q3-T3取代，其中Q3是键或是任选被选自卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基连接体，T3选自下列组的取代基：卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五元或六元杂芳基、ORe、COORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf，每一个Re和Rf各自独立为氢或C1-C6烷基，或–Q3-T3为氧代；或–Q2-T2为氧代；或者
R6选自氢、卤素、氰基、叠氮基、-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、 -NRbC(O)Ra、-S(O)bRa、-S(O)bNRaRb或RS2，其中RS2选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基或4-12元杂环烷基，b是0、1或2，Ra和Rb各自独立为氢或RS3，其中RS3选自C1-C6烷基，C2-C6烯基，C2-C6炔基，C3-C8环烷基，C6-C10芳基，4-12元杂环烷基或者五元或六元杂环芳基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷环；每一个RS2、RS3以及所述由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷环任选地被一个或多个–Q2-T2取代，其中Q2为键或是任选被下列取代基取代的C1-C3烷基连接体：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T2选自氢、卤素、氰基、-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-C(O)NRcRd、-NRdC(O)Rc、-NRdC(O)ORc、-S(O)2Rc、-S(O)2NRcRd或RS4，其中Rc和Rd各自独立为氢或RS5，其中RS4和RS5各自独立地选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五元或六元杂芳基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷环，每一个RS4、RS5以及所述由Rc和Rd形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q3-T3取代，其中Q3是键或是任选被选自卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基的取代基取代的C1-C3烷基连接体，T3选自下列组的取代基：卤素、氰基、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五元或六元杂芳基、ORe、COORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf，每一个Re和Rf各自独立为氢或C1-C6烷基，或–Q3-T3为氧代；或–Q2-T2为氧代；
R7是–Q4-T4，其中Q4为键、C1-C4烷基连接体或C2-C4烯基连接体，每个连接体任选被下列取代基取代：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T4选自氢、卤素、氰基、NRgRh、-ORg、-C(O)Rg、-C(O)ORg、-C(O)NRgRh、-C(O)NRgORh、-NRgC(O)Rh、-S(O)2Rg或RS6，其中Rg和Rh各自独立地选自氢或RS7，RS6和RS7各自独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-14元杂环烷基或者五或六元杂芳基，RS6和RS7各自任选被一个或多个–Q5-T5取代，其中Q5是键、羰基、C(O)NRk、NRkC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rk是氢或C1-C6烷基，T5选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)qRq，其中q为0、1或2且Rq选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，T5任选被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷 基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，T5是氢、卤素、羟基或氰基时的情况除外；或–Q5-T5是氧代；或
R7是–Q4-T4，其中Q4为键、C1-C4烷基连接体或C2-C4烯基连接体，每个连接体任选被下列取代基取代：卤素、氰基、羟基或C1-C6烷氧基，T4选自氢、卤素、氰基、NRgRh、-ORg、-C(O)Rg、-C(O)ORg、-C(O)NRgRh、-C(O)NRgORh、-NRgC(O)Rh、-S(O)2Rg或RS6，其中Rg和Rh各自独立地选自氢或RS7，RS6和RS7各自独立地选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，RS6和RS7各自任选被一个或多个–Q5-T5取代，其中Q5是键、羰基、C(O)NRk、NRkC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rk是氢或C1-C6烷基，T5选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)qRq，其中q为0、1或2且Rq选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基或者五或六元杂芳基，T5任选被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，T5是氢、卤素、羟基或氰基时情况除外；或–Q5-T5是氧代；条件是(i)当Z是NR7R8时，R7不是C(O)Rg或-S(O)2Rg；(ii)当Z是OR7时，R7不是C1-C6烷基，以及(iii)R7不是氢；
R8、R11、R12和R13各自独立地选自氢、卤素、羟基、羧基、氰基、RS8、ORS8或COORS8，其中RS8选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基、氨基、单-C1-C6烷基氨基或双-C1-C6烷基氨基，且RS8任选被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基和双-C1-C6烷基氨基；或R7和R8连同它们所连接的氮原子一起构成一个含0-2个额外杂原子的4-12元杂环烷基环，或R7和R8连同它们所连接的碳原子一起构成一个C3-C8环烷基或一个含1-3个杂原子的4-12元杂环烷基环，每一个所述的由R7和R8形成的4-12元杂环烷基环或C3-C8环烷基任选被一个或多个–Q6-T6取代，其中Q6是键、羰基、C(O)NRm、NRmC(O)、硫酰基或C1-C3烷基连接体，Rm为氢或C1-C6烷基，T6选自氢、卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷 基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基或S(O)pRp，其中p是0、1或2，且Rp选自C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基，并且T6任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代：卤素、C1-C6烷基、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基，T6是氢、卤素、羟基或氰基时的情况除外；或–Q6-T6为氧代；并且
R14不存在或为氢或任选地被选自下列组的一个或多个取代基取代的C1-C6烷基：卤素、羟基、羧基、C(O)O-C1-C6烷基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-12元杂环烷基和五或六元杂芳基；
条件是，所述化合物不是
N-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)呋喃-2-甲酰胺、N,N'-(5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-1,3-亚苯基)二乙酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-特戊酰基氨基苯甲酰胺、3-(3,4-二羟基-2H-苯并[b][1,4]二氧杂环庚烯-7-磺酰胺基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二羟基吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,5-二甲氧基苯甲酰胺、N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3,4,5-三甲氧基苯甲酰胺、3-烯丙基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4,5-二甲氧基苯甲酰胺、4-(2-氨基-2-氧代乙氧基)-3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基苯甲酰胺、3-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-羟基-5-甲氧基苯甲酰胺或3-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-甲氧基-4-丙氧基苯甲酰胺。
例如，X1是CR11且X2是CR13。
例如，X1是CR11且X2是氮。
例如，X1是N且X2是CR13。
例如，X1是N且X2是N。
例如，X3是C。
例如，X3是N且R6不存在。
例如，Z是NR7R8。
例如，Z是CR7R8R14。
例如，Z是OR7。
例如，Z是S(O)aR7，其中a是0、1或2。
例如，Z是SR7。
例如，R6是氢。
例如，R6是卤素（如氟、氯、溴、碘）。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的C1-C3烷基。
例如，R6是三氟甲基。
例如，R6是C2-C6烯基、C2-C6炔基或C3-C6环烷基，每一个任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是乙烯基。
例如，R6是乙炔基。
例如，R6是被一个或多个–Q2-T2取代的乙炔基，其中Q2是键或C1-C3烷基连接体，且T2是C1-C6烷基、C3-C6环烷基或任选被一个或多个–Q3-T3取代的4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R6是叠氮基。
例如，R6是氰基。
例如，R6是醛基。
例如，R6是ORa或-C(O)Ra。
例如，Ra是C1-C6烷基或4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），其任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R6是哌啶基、2,2,6,6-四甲基哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基或吡咯烷基，其中每一个任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，R6是任选被一个或多个–Q2-T2取代的4-7元杂环烷基，并且–Q2-T2是氧代或Q2是键，且T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-S(O)2Rc、C1-C6烷基或4-7元杂环烷基，当Rc或Rd不是氢时，每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，R6是-NRaRb、-C(O)Ra、-C(O)ORa、-C(O)NRaRb、-NRbC(O)Ra、-SRa、-S(O)2Ra或-S(O)2NRaRb。
例如，Ra和Rb各自独立为氢、C1-C6烷基或任选被一个或多个–Q2-T2取代的C3-C8环烷基。
例如，Ra和Rb其中之一为氢。
例如，Ra和Rb连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个除氮以外额外杂原子的4-7元杂环烷基环（如，氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），并且所述环任选被一个或多个–Q2-T2取代。
例如，–Q2-T2不是H。
例如，–Q2-T2是氧代。
例如，Q2是键。
例如，Q2是未取代的C1-C3烷基连接体。
例如，T2是C1-C6烷基或C6-C10芳基，每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，T2是未被取代或被取代的直链C1-C6烷基或支链C3-C6烷基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基和正己基。
例如，T2是苯基。
例如，T2是卤素（如氟、氯、溴、碘）。
例如，T2是任选被一个或多个–Q3-T3取代的4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc或-S(O)2Rc。
例如，Rc是任选被一个或多个–Q3-T3取代的C1-C6烷基或4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，Rc和Rd各自独立为氢或任选被一个或多个–Q3-T3取代的C1-C6烷基。
例如，Rc是H。
例如，Rd是H。
例如，Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个除氮原子以外的额外杂原子的4-7元杂环烷基环（如，氮杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等），并且所述环任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，Q2是键，并且T2是-ORc、-NRcRd、-C(O)Rc、-C(O)ORc、-S(O)2Rc、C1-C6烷基或4-7元杂环烷基，当Rc或Rd不为氢时，其中每一个任选被一个或多个–Q3-T3取代。
例如，–Q3-T3是氧代。
例如，T2是4-7元杂环烷基或C3-C8环烷基，并且一个或多个–Q3-T3是氧代。
例如，Q3是键或未被取代或被取代的C1-C3烷基连接体。
例如，T3是氢、卤素、4-7元杂环烷基、C1-C3烷基、ORe、COORe、-S(O)2Re、–NReRf或-C(O)NReRf。
例如，Rd和Re其中之一为氢。
例如，Q3是键或C1-C3烷基连接体，T3选自C1-C3烷基、卤素、ORe、-S(O)2Re、-NReRf和-C(O)NReRf。
例如，Q3是键或C1-C3烷基连接体，T3选自C1-C3烷基、ORe、-S(O)2Re或-NReRf。
例如，Re是氢。
例如，Rf是氢。
例如，R7不是氢。
例如，R7是-C(O)Rg。
例如，R7是-C(O)Rg，其中Rg是C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基、C3-C8环烷基。
例如，R7是被一个或多个–Q5-T5取代的C6-C10芳基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的苯基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的C1-C6烷基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的C3-C8环烷基。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5取代的4-7元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R7是8-14元杂环烷基，比如1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基（如，1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基）、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基（如，1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基）、1-氧杂螺[4.5]癸烷基（如，1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基或1-氧杂螺[4.5]癸烷-2-酮-8-基）、1-氮杂螺[4.5]癸烷基（如，1-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基或1-氮杂螺[4.5]癸烷-2-酮-8-基）、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基（如，3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-4-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-3'-酮-4-基）、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基（如，7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-4-基或7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-7'-酮-4-基）或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基（如，3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-4-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-3'-酮-4-基），每一个任选被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R7是任选被一个或多个–Q5-T5.取代的五或六元杂环烷基。
例如，R7是异丙基。
例如，R7是吡咯烷基、哌啶基、四氢吡喃基、环戊基或环己基、环庚基，每一个任选被一个–Q5-T5取代。
例如，R7是环戊基或环己基，每一个任选被一个–Q5-T5取代。
例如，Q5是NHC(O)，T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
例如，–Q5-T5是氧代。
例如，T4是4-7元杂环烷基或C3-C8环烷基或C6-C10芳基，并且一个或多个–Q5-T5是氧代。
例如，R7是1-氧化-四氢-2H-噻喃基或1,1-二氧化-四氢-2H-噻喃基。
例如，R7是环己酮基，例如环己酮-4-基。
例如，T5是氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基或4-7元杂环烷基。
例如，Q5是键，T5是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Q5是键，T5是五或六元杂芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基，T5任选被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、C1-C6烷氧基或C3-C8环烷基。
例如，Q5是羰基、硫酰基或NHC(O)；且T5是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，每一个任选被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C3-C8环烷基取代。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是氢或C6-C10芳基。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是C3-C8环烷基，4-7元杂环烷基或S(O)qRq。
例如，R6是卤素（如，氟、氯、溴、碘），并且Z是S(O)aR7，其中a是0，1或2，R7选自C1-C6烷基（如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基或叔丁基），C3-C8环烷基（如，环戊基、环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R6是卤素（如，氟、氯、溴、碘），并且Z是OR7，其中R7是4-14元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R11是氢。
例如，R2和R4各自独立为氢，或任选被氨基、叠氮基、卤素、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷基。
例如，R2和R4各自独立为任选被C1-C6烷氧基取代的C1-C3烷基。
例如，R2和R4均为甲基。
例如，R1是氢。
例如，R1是任选被叠氮基、卤素、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C6-C10芳基取代的C1-C6烷基。
例如，R12是氢、甲基、乙基、乙烯基或卤素。
例如，R12是甲基。
例如，R12是乙基或丙烯基。
例如，R12是甲氧基。
例如，R12是乙烯基。
例如，R8是氢、甲基、乙基或乙烯基。
例如，R8是甲基。
例如，R8是乙基。
例如，R8是丙基。
例如，R8是乙烯基或丙烯基。
例如，R8是任选被一个或多个下列组的取代基取代的C1-C6烷基：卤素（如，氟、氯、溴）、羟基或C1-C6烷氧基。
例如，R8是4-7元任选被取代的杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基等）。
例如，R8是哌啶基。
例如，R8是4-7元任选被取代的杂环烷基，且R7是–Q4-T4，其中Q4是键或C1-C4烷基连接体，T4是氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11杂环烷基环（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、 2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基和吗啉基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基等）或C3-C8环烷基，每一个任选被一个或多个–Q6-T6取代。
例如，所述由R7和R8形成的环选自下列组：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基和环己烯基，每一个任选被一个–Q6-T6取代。
例如，Z是1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基-8-基，吡咯烷-2,5-二酮-1-基或哌啶-2,6-二酮-1-基。
例如，一个或多个–Q6-T6是氧代。
例如，T6是氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、4-7元杂环烷基。
例如，Q6是键，T6是C1-C6烷基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，Q6是羰基、硫酰基或NHC(O)；并且T6选自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基。
例如，T6是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基，每一个任选被卤素、羟基、氰基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基或C3-C8环烷基取代。
例如，Q6是C1-C3烷基连接体且T6是氢或C6-C10芳基。
例如，Q6是C1-C3烷基连接体且T6是C3-C8环烷基、4-7元杂环烷基或S(O)pRp。
例如，Rp和Rq各自独立为C1-C6烷基。
例如，R6是-S(O)bRa或叠氮基，其中b是0、1或2，并且Ra是C1-C6烷基或C3-C8环烷基；且Z是NR7R8，其中R7是C3-C8环烷基（如，环戊基、环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等)，每一个任选地被一个或多个–Q5-T5取 代；并且R8是氢或C1-C6烷基（如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基或叔丁基）。
例如，R6是卤素（如，氟、氯、溴和碘），并且Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11杂环烷基环（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基、吡咯烷-2,5-二酮-1-基，哌啶-2，6-二酮-1-基等）或C3-C8环烷基，每一个任选被一个或多个–Q6-T6取代。
例如，R13是氢或甲基。
例如，R13是氢。
例如，R3是氢。
例如，R5、R9和R10均为氢。
式(I)的化合物的其它子集包括式(Ib)、(Ic)或(Id)的化合物或其药学上可接受的盐或酯，其中Z、X2、X3、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R11和R12如本文对式(I)所定义的一样。
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式(I)的化合物的另一个子集是式(Ie)的化合物：
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其中
Z是NR7R8、OR7或S(O)aR7；
R1为氢或任选被一个或多个选自下列组的取代基取代的C1-C6烷基：羟基、C1-C6烷氧基、氨基、单-C1-C6烷基氨基、双-C1-C6烷基氨基和C6-C10芳基；
R2和R4各自独立为–Q1-T1，其中Q1为键或任选被一个或多个卤素和羟基的取代基取代的C1-C3烷基连接体，T1选自氢、卤素或叠氮基；
R3是氢或卤素；
R5是氢或C1-C6烷基；
R6是氢、卤素、氰基、叠氮基、ORa、-NRaRb、-C(O)NRaRb、-S(O)bRa或RS2；其中RS2是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或4-12元杂环烷基，且其中Ra和Rb各自独立选自氢、C1-C6烷基或4-12元杂环烷基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子形成含0或1个额外杂原子的4-12元杂环烷基环；Ra、RS2和所述由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷基环各自任选地被一个或多个–Q2-T2取代，其中Q2 是键或C1-C3烷基连接体，T2选自氢、卤素、-ORc、-NRcRd、-C(O)ORc或C1-C6烷基，其中Rc和Rd各自独立为氢或C1-C6烷基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子一起形成含0或1个额外杂原子的、任选被C1-C6烷基取代的4-12元杂环烷基环；
R7是–Q4-T4，其中Q4是键或C1-C4烷基连接体，T4选自氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、C(O)-C1-6烷基、C(O)-C3-6环烷基或4-14元杂环烷基，每一个T4任选地被一个或多个–Q5-T5取代；
R8是氢、任选地被卤素或羟基或C1-C6烷氧基取代的C1-C6烷基、C2-C6烯基、C3-C8环烷基或4-7元杂环烷基；或R7和R8连同它们所连接的氮原子形成含0-2个额外的杂原子的4-12元杂环烷基环，且所述由R7和R8形成的4-12元杂环烷基环任选地被一个或多个–Q6-T6取代；以及
R12是卤素、C1-C6烷氧基或任选地被卤素或C2-C6烯基取代的C1-C6烷基。
除了本发明化合物的以上所述的特征（如适用）之外，式(Ie)的化合物还可以包括一个或多个以下特征：
例如，R1是氢或任选被选自羟基、C1-C6烷氧基和C6-C10芳基的取代基所取代一次或多次的C1-C6烷基；R7是–Q4-T4，其中Q4是键或C1-C4烷基连接体，T4选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、C6-C10芳基、C(O)-C1-C6烷基、C(O)-C3-C6环烷基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基和氧杂环丁烷基，每一个T4各自独立地被一个或多个下列取代基取代：氧代和–Q5-T5；R8是氢或C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C2-C6烯基或C3-C8环烷基；以及R12选自卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基或C1-C6烷氧基。
例如，Z是NR7R8或SR7；
R6选自氢、卤素、氰基、ORa、-C(O)NRaRb、-S(O)2Ra或RS2；其中RS2是C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基或4-12元杂环烷基，且其中Ra和Rb各自独立为氢或C1-C6烷基；或Ra和Rb连同它们所连接的氮原子形成含0或1个额外的杂原子的4-12元杂环烷基环；RS2和所述的由Ra和Rb形成的4-12元杂环烷基环各自任选地被一个或多个-Q2-T2取代；其中Q2是键或C1-C3烷基连接体，T2选自氢、卤素、-ORc、-NRcRd、-C(O)OC1-C6烷基或C1-C6烷基，其中Rc和Rd各自独立为氢或C1-C6烷基，或Rc和Rd连同它们所连接的氮原子形成含0或1个额外的杂原子和含0或1个C1-C6烷基取代基的4-12元杂环烷基环；
R7选自C1-C6烷基、C3-C8环烷基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基和氧杂环丁烷基，每一个任选地被一个或多个独立地选自氧代和–Q5-T5的取代基取代；以及R12是卤素或C1-C6烷基。
例如，R2、R4和R12各自独立为C1-C6烷基，且R5为氢。
例如，R7是环己基、二氢吡喃基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吡咯烷基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-8-基、1-氧杂螺[4.5]癸烷-8-基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-4-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃[3,4-b]吡啶]-4-基、3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃[3,4-c]吡啶]-4-基或1-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基，每一个R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，Z选自哌啶基、吗啉基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基和环己烯基，每一个Z任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R6是卤素（如，氟、氯、溴、碘）且Z是S(O)aR7，其中a是0、1或2，R7选自C1-C6烷基（如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基或叔丁基）、C3-C8环烷基（如，环戊基、环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R6是卤素（如，氟、氯、溴、碘）且Z是OR7，其中R7是4-14元杂环烷基(如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'- 异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等），并且R7任选地被一个或多个–Q5-T5取代。
例如，R6是-S(O)bRa或叠氮基，其中b是0、1或2，并且Ra是C1-C6烷基或C3-C8环烷基；且Z是NR7R8，其中R7是C3-C8环烷基（如，环戊基、环己基或环庚基）或4-14元杂环烷基（如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1,5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基或3'H-螺[环己烷-1,1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等)，每一个任选地被一个或多个–Q5-T5取代；并且R8是氢或C1-C6烷基（如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基或叔丁基）。
例如，R6是卤素（如，氟、氯、溴和碘）且Z是NR7R8或CR7R8R14，其中R7和R8连同它们所连接的原子一起形成含1-3个杂原子的4-11杂环烷基环(如，氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、1,2,3,6-四氢吡啶基、哌嗪基、四氢-2H-吡喃基、3,6-二氢-2H-吡喃基、四氢-2H-噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、吗啉基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基、吡咯烷-2,5-二酮-1-基，哌啶-2，6-二酮-1-基等)或C3-C8环烷基，每一个任选被一个或多个–Q6-T6取代。
式(I)的化合物的另一个子集是式(II)的化合物或其药学上可接受的盐或酯，其中R6、R7、R8和R12如本文所定义。
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式(I)的化合物的还有一个子集是式(IIA)的化合物或其药学上可接受的盐或酯，
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其中n是0、1或2；U是氧、硫、N-Q5-T5或CH-Q5-T5；R12是氯、溴或甲基；且R6、R7、R8、Q5和T5如本文所定义。
除了本发明的化合物的以上所述的特征（如适用）之外，式(II)或(IIA)化合物还可以包括一个或多个以下特征：
例如，Q5是键，且T5选自氢、C1-C6烷基、C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基、五或六元杂芳基、氨基、单-C1-C6烷基氨基或双-C1-C6烷基氨基，T5任选被一个或多个选自下列组的取代基取代：卤素、羟基、C1-C6烷氧基、或C3-C8环烷基。
例如，Q5是羰基、硫酰基或NHC(O)；且T5是C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C3-C8环烷基或4-12元杂环烷基。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是氢或C6-C10芳基。
例如，Q5是C1-C3烷基连接体，且T5是C3-C8环烷基、4-12元杂环烷基或S(O)qRq。
例如，Q5是NHC(O)，T5是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
例如，一个或多个–Q5-T5是氧代。
例如，U是CH-Q5-T5且n是0。
例如，一个或多个–Q6-T6是氧代。
例如，Q6是键或羰基，且T6是C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
式(I)的化合物还有一个子集是式(III)的化合物或其药学上可接受的盐或酯，
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其中，R7是一个环内含一个氮原子的4-6元杂环烷基且被一个或两个甲基或一个异丙基取代；R3是氢或氟；R4是甲基、乙基、正丙基、异丙基或三氟甲基，R6是三氟甲基、氯或氟，假设当R4是甲基时，（1）R6是三氟甲基，或（2）R3是氟，或（3）R6是三氟甲基且R3是氟，或（4）R6是氟或氯，且R7是只含一个氮原子且被两个甲基取代的六元杂环烷基。
除了本发明的化合物的以上所述的特征（如适用）之外，式(III)的化合物还可以包括一个或多个以下特征：
例如，R7是在环中有且只有一个杂原子并且该杂原子为氮原子的4-6元杂环烷基。
例如，除一个或两个甲基或一个异丙基之外，R7不再被其他取代基进一步取代。
例如，R7是![]()
或![]()
例如，R7是![]()
或![]()
例如，R7是![]()
本发明的代表性化合物列在表1中。在下表中，每次出现的![]()
应理解为![]()
表1
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*化合物58/59，60/61，107/108和416/417的顺反立体化学任意分配。
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MS-样品的质谱。其可以以正或负离子的模式以及包括M，M+1，M+23，(M+Na)和M-1的潜在离子来记录。
本文所使用的“烷基”、“C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基”或“C1-C6烷基”旨在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直链（线性）的饱和脂肪族烃基和C3、C4、C5或C6支链的饱和脂肪族烃基。例如，C1-C6烷基旨在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基基团。烷基的例子包括主链具有1-6个碳原子的部分，例如，但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基或正己基。
在某些实施例中，直链或支链的烷基具有6个或更少碳原子（例如，直链的C1-C6或支链的C3-C6），在另一个实施例中，直链或支链的烷基具有4个或更少碳原子。
本文所使用的“环烷基”是指具有3-30个碳原子（例如，C3-C10）的饱和或不饱和的非芳族烃单环或多环（如稠环、桥环或螺环）)体系。环烷基的例子包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、环戊烯基、环己烯基、环庚烯基和金刚烷基。除非另有明确说明，否则术语“杂环烷基”是指饱和或不饱和非芳族3-8元单环、7-12元双环（稠环、桥环或螺环）或具有一个或多个杂原子（如氧原子、氮原子、硫原子或硒原子）的11-14元三环（稠环、桥环或螺环）体系。杂环烷基团的例子包括但不限于哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、二氧六环基、四氢呋喃基、异二氢吲哚基、二氢吲哚基、咪唑烷基、吡唑烷基，恶唑烷基、异恶唑烷基、三唑烷基、四氢呋喃基、环氧乙烷基、氮杂环丁烷基、 氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、1,2,3,6-四氢吡啶基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、吡喃基、吗啉基、四氢噻喃基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧杂氮杂环庚烷基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷基、1,4-二氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷基、1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氧杂螺[4.5]癸烷基、1-氮杂螺[4.5]癸烷基、3'H-螺[环己烷-1,1'-异苯并呋喃]-基、7'H-螺[环己烷-1，5'-呋喃并[3,4-b]吡啶]-基，3'H-螺[环己烷-1，1'-呋喃并[3,4-c]吡啶]-基等。
术语“任选取代的烷基”是指未取代的烷基或烃主链上一个或多个碳原子上的一个或多个氢原子被指定的取代基取代的烷基。所述取代基可以包括例如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合(phosphonato)、次膦酸根合(phosphinato)、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基）、酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基）、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基，或芳族或杂芳族片段。
“芳基烷基”或“芳烷基”片段是指芳基取代的烷基（例如，苯基甲基（苄基））。“烷基芳基”片段是指烷基取代的芳基（例如，甲基苯基）。
本文所述“烷基连接体”旨在包括C1、C2、C3、C4、C5或C6直链(线型的)饱和的二价脂肪族烃基团和C3、C4、C5或C6支链的饱和的脂肪族烃基团。例如，C1-C6烷基连接体包括C1、C2、C3、C4、C5或C6烷基连接体。烷基连接体的例子包括，具有一至六个碳原子的部分，例如但不限于甲基(-CH2-)、乙基(-CH2CH2-)、正丙基(-CH2CH2CH2-)、异丙基(-CHCH3CH2-)、正丁基(-CH2CH2CH2CH2-)、仲丁基(-CHCH3CH2CH2-)、异丁基(-C(CH3)2CH2-)、正戊基(-CH2CH2CH2CH2CH2-)、仲戊基(-CHCH3CH2CH2CH2-)或正己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-)。
“烯基”包括不饱和脂肪族基团，其长度和可能的取代方面类似于上述烷基，但是其包含至少一个双键。例如，术语“烯基”包括直链的烯基基团（例如，乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基）和支链的烯基。在某些实施例中，直链或支链的烯基基团在其主链上具有6个或 更少的碳原子数（例如，直链的C2-C6、支链的C3-C6）。术语“C2-C6”包括含有2-6个碳原子的烯基基团。术语“C3-C6”包括具有3-6个碳原子的烯基基团。
术语“任选取代的烯基”是指未取代的烯基或在一个或多个烃主链碳原子上的一个或多个氢原子被指定的取代基取代的烯基。所述取代基可以包括例如烷基，烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、次膦酸根合、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基）、酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基）、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、杂环基、烷基芳基，或芳族或杂芳族片段。
“炔基”包括不饱和脂肪族基团，其长度和可能的取代方面类似于上述烷基，但是其至少包含一个三键。例如，“炔基”包括直链的炔基基团（例如，乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基、庚炔基、辛炔基、壬炔基、癸炔基）和支链炔基。在某些实施例中，直链或支链的炔基基团在其主链上具有6个或更少的碳原子数（例如，直链的C2-C6，支链的C3-C6）。术语“C2-C6”包括含有2-6个碳原子的炔基基团。术语“C3-C6”包括含有3-6个碳原子的炔基基团。
术语“任选取代的炔基”是指未取代的炔基或一个或多个烃主链碳原子上的一个或多个氢原子被指定的取代基取代的炔基。所述取代基可以包括例如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、次膦酸根合、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基）、酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基）、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基，磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基，或芳族或杂芳族片段。
其他任选取代部分（例如任选取代的环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基）包括未被取代的部分和具有一个或多个指定取代基的部分。例如，取代的杂环烷基 包括被一个或多个烷基取代的杂环烷基，如2,2,6,6-四甲基-哌啶基和2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢吡啶基。
“芳基”包括具有芳香性的基团，包括“共轭的”或多环体系，所述多环体系含有至少一个芳香环且在其环形结构中不含任何杂原子。其实例包括苯基、苄基、1,2,3,4-四氢萘基等。
“杂芳基”是指如上所定义的芳基，只是在环结构中具有1-4个杂原子，其还可以被称为“芳杂环”或“杂芳族化合物”。如本文所使用的，术语“杂芳基”是指包括稳定的5、6或7元单环或7、8、9、10、11或12元由碳原子和一个或多个杂原子构成的双环芳族杂环，例如1或1-2或1-3或1-4或1-5或1-6个杂原子，或者例如1、2、3、4、5或6个杂原子，所述杂原子独立地选自氮、氧和硫。氮原子可以被取代或不被取代（即，N或NR，其中R是氢或是如本文定义的其它取代基）。氮和硫杂原子可任选被氧化（即，N→O和S(O)p，其中p=1或2）。但是应当注意的是，芳族杂环中硫和氧原子的总数不超过1。
杂芳基基团的例子包括吡咯、呋喃、噻吩、噻唑、异噻唑、咪唑、三唑、四唑、吡唑、恶唑、异恶唑、吡啶、吡嗪、哒嗪、嘧啶等。
此外，术语“芳基”和“杂芳基”包括多环芳基和杂芳基基团，例如，三环、双环，例如，萘、苯并恶唑、苯并二恶唑、苯并噻唑、苯并咪唑、苯并噻吩、亚甲二氧基苯基、喹啉、异喹啉、萘啶基、吲哚、苯并呋喃、嘌呤、苯并呋喃、脱氮嘌呤、吲哚嗪。
在多环芳族环中，尽管所有的环都可以是芳族的（例如，喹啉），但是只有一个环必须是芳族的（例如，2,3-二氢吲哚）。第二环可以是稠合的或桥连的。
环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基环可以在一个或多个环位置（例如，成环碳原子或杂原子，如氮原子）被取代基取代，所述取代基如上文所述，例如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、烷基氨基羰基、芳基烷基氨基羰基、烯基氨基碳酰基、烷基羰基、芳基羰基、芳基烷基、烯基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷硫基羰基、磷酸酯、膦酸根合、次膦酸根合、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基）、酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基）、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、 三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基，或芳族或杂芳族片段。芳基和杂芳基基团也可以与非芳族的脂环族环或杂环稠合或桥连，以形成一个多环体系（例如，四氢化萘，亚甲基二氧基苯基）。
本文所使用的“碳环”或“碳环基环”是指包括任何稳定的具有特定数目碳原子的单环、双环或三环，其中任何一个都可以是饱和的、不饱和的或芳族的。碳环包括环烷基和芳基。例如，C3-C14碳环是指包括具有3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个碳原子的单环、双环或三环。碳环的例子包括，但不限于环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环庚烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛基、环辛烯基、环辛二烯基、芴基、苯基、萘基、二氢化茚基、金刚烷基和四氢萘基。桥环同样包括在碳环的定义中，包括例如[3.3.0]二环辛烷、[4.3.0]二环壬烷、[4.4.0]二环癸烷和[2.2.2]二环辛烷。一个或多个碳原子连接两个不相邻的碳原子时会形成桥环。在一个实施例中，桥环是1个或2个碳原子。应当注意的是，一个桥总是将单环转换为三环。当环被桥接时，列举用于该环的取代基也可以存在于桥上。稠环（例如，萘基、四氢萘基）和螺环也包括在内。
本文所使用的“杂环”或“杂环基”包括包含至少一个环杂原子（例如，氮原子、氧原子或硫原子）的任何环结构（饱和的、不饱和的或芳族的）。杂环包括杂环烷基和杂芳基。杂环的例子包括，但不限于吗啉、吡咯烷、四氢噻吩、哌啶、哌嗪、氧杂环丁烷、吡喃、四氢吡喃、氮杂环丁烷和四氢呋喃。
杂环基团的实例包括，但不限于吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基（benzothiofuranyl）、苯并噻吩基、苯并恶唑基、苯并恶唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱基（furazanyl）、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基，1H-吲唑基、假吲哚基（indolenyl）、二氢吲哚基、中氮茚基（indolizinyl）、吲哚基、3H-吲哚基、靛红基（isatinoyl）、异苯并呋喃基、异苯并二氢吡喃基（isochromanyl）、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基（naphthyridinyl）、八氢异喹啉基、恶二唑基（oxadiazolyl）、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、1,2,4-恶二唑 5(4H)-酮、恶唑烷基、恶唑基、羟吲哚基（oxindolyl）、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基（phenanthrolinyl）、吩嗪基、吩噻嗪基、酚黄素基（phenoxathinyl）、吩恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基（pyridinyl）、吡啶基（pyridyl）、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基。
本文所使用的术语“取代的”是指指定原子上的任何一个或多个氢原子被选自指定组的取代基取代，条件是所述指定原子不超过正常价态，并且取代的结果是产生稳定的化合物。当取代基是氧代或酮基（即，=O）时，那么原子上的2个氢原子被取代。酮取代基在芳香环上不存在。本文所使用的环双键是在两个相邻的环原子（例如，C=C，C=N或N=N）之间形成的双键。“稳定的化合物”和“稳定的结构”是指能够足够强健地从反应混合物中分离至有效的纯度并配制成有效的治疗剂的化合物。
当取代基所连的化学键与连接环中的两个原子的一个键交叉时，则这样的取代基可以同环上的任何原子键连。当列出的取代基没有表明其原子通过哪一个原子键将该取代基连到给定通式的化合物的其余部分时，则该取代基可以通过该结构式中的任何原子键连。取代基和/或变量的组合是允许的，条件是这种组合能够产生稳定的化合物。
当任何变量（例如，R1）在化合物的任何成分或结构式中出现一次以上时，其在每一种情况下出现的定义是各自独立的。因此，例如如果一个基团显示了被0-2个R1取代，则该基团可以任选被多达两个R1取代，并且R1在每一种情况下独立地选自R1的定义。此外，取代基和/或变量的组合是允许的，条件是这种组合能够产生稳定的化合物。
术语“含羟基的”或“羟基”包括含-OH或-O-的基团。
本文所使用的“卤”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘。术语“全卤代的”通常指所有的氢原子都被卤原子取代的片段。术语“卤代烷基”或“卤代烷氧基” 指的是一个或多个卤素原子取代的烷基或烷氧基。
术语“羰基”包括含有通过双键与氧原子连接的碳原子的化合物和片段。含有羰基的片段的例子包括但不限于醛、酮、羧酸、酰胺、酯、酸酐等。
术语“羧基”是指-COOH或其C1-C6烷基酯。
“酰基”包括含有酰基(R-C(O)-)或羰基的片段。“取代的酰基”包括其中一个或多个氢原子被例如下列取代基取代的酰基，所述取代基包括烷基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、次膦酸根合、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基）、酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基）、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、芳硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族或杂芳族基团。
“芳酰基”包括含有键连到羰基基团上的芳基或杂芳基的片段。芳酰基的例子包括苯基羧基、萘羧基等。
“烷氧基烷基”、“烷基氨基烷基”和“硫代烷氧基烷基”包括如上所述的烷基基团，其中氧原子、氮原子或硫原子取代一个或多个烃主链上的碳原子。
术语“烷氧”或“烷氧基”包括与氧原子共价键连的取代和未取代的烷基、烯基和炔基基团。烷氧基团或烷氧基的例子包括，但不限于甲氧基、乙氧基、异丙氧基、丙氧基、丁氧基和戊氧基。取代烷氧基团的例子包括卤代烷氧基。烷氧基团可以被下列取代基取代，如烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、磷酸酯、膦酸根合、次膦酸根合、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基），酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基）、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基甲基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族或杂芳族基团。卤素取代的烷氧基团的例子包括，但不限于一氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、一氯甲氧基、二氯甲氧基、三氯甲氧基。
术语“醚”或“烷氧”包括含有键连到两个碳原子或杂原子上的氧的化合物或片段。例如，该术语包括“烷氧基烷基”，是指共价键连到与烷基基团共价键连的氧原子上的烷基、烯基或炔基基团。
术语“酯”包括含有键连到与羰基上的碳键连的氧原子上的碳原子或杂原子的化合物或片段。术语“酯”包括烷氧羰基基团，如甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、丁氧羰基、戊氧羰基等。
术语“硫代烷基”包括包含与硫原子键连的烷基基团的化合物或片段。所述硫代烷基可以被下列取代基取代，如烷基、烯基、炔基、卤素、羟基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、烷氧基羰氧基、芳氧基羰氧基、羧酸酯、羧酸、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、烷硫基羰基、烷氧基、氨基（包括烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基和烷基芳基氨基）、酰氨基（包括烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基）、脒基、亚氨基、巯基、烷硫基、芳硫基、硫代羧酸酯、硫酸酯、烷基亚磺酰基、磺酸基、氨磺酰基、磺酰氨基、硝基、三氟甲基、氰基、叠氮基、杂环基、烷基芳基或芳族或杂芳族片段。
术语“硫代羰基”或“硫代羧基”包括包含通过双键与硫原子键连的碳原子的化合物和片段。
术语“硫醚”包括含有与两个碳原子或杂原子键连的硫原子的片段。硫醚的例子包括，但不限于烷硫烷基、烷硫烯基、烷硫炔基。术语“烷硫烷基”包括具有与和烷基基团键连的硫原子键连的烷基、烯基或炔基的片段。类似地，术语“硫代烯基”指其中烷基、烯基或炔基与共价键连至烯基基团的硫原子键连的片段；“硫代炔基”指其中烷基、烯基或炔基与共价键连至炔基基团的硫原子键连的片段。
本文所使用的“胺”或“氨基”是指未取代的或取代的-NH2。“烷基氨基”包括其中-NH2的氮原子同至少一个烷基基团键连的化合物的基团。烷基氨基的例子包括苄基氨基、甲氨基、乙氨基、苯乙基氨基等。“二烷基氨基”包括其中-NH2的氮原子同至少两个额外的烷基基团键连的基团。二烷基氨基的例子包括，但不限于二甲基氨基和二乙基氨基。“芳氨基”和“二芳氨基”包括其中氮原子同至少一个或两个芳基分别键连的基团。“氨基芳基”和“氨基芳氧基”指氨基取代的芳基、芳氧基。“烷基芳基氨基”、“烷基氨基芳基”或“芳基氨基烷基”是 指同至少一个烷基基团和至少一个芳基基团键连的氨基。“烷基氨基烷基”是指同氮原子键连的烷基、烯基或炔基基团，所述氮原子还与烷基键连。“酰氨基”包括其中氮原子与酰基基团键连的基团。酰氨基的例子包括，但不限于烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、氨基甲酰基和脲基。
术语“酰胺基”或“氨基羧基”包括包含与羰基或硫代羰基基团的碳键连的氮原子的化合物或基团。该术语包括“烷氨基羧基”基团，所述烷氨基羧基包括与羰基或硫代羰基的碳键连的氨基键连的烷基、烯基或炔基基团的基团。该术语还包括“芳基氨基羧基”基团，所述芳基氨基羧基包括与和羰基或硫代羰基的碳键连的氨基键连的芳基或杂芳基片段的片段。术语“烷基氨基羧基”、“烯基氨基羧基”、“炔基氨基羧基”和“芳基氨基羧基”包括其中烷基、烯基、炔基和芳基分别与又和羰基的碳键连的氮原子键连的片段。酰胺可以被取代基如直链烷基、支链烷基、环烷基、芳基、杂芳基或杂环取代。酰胺基团上的取代基可被进一步取代。
本发明中含氮原子的化合物可以通过用氧化剂（例如，间氯过氧苯甲酸(mCPBA)和/或过氧化氢）处理而转化成N-氧化物，以得到本发明中的其它化合物。因此，所有本文所示的和所要求保护的含氮化合物在价态和结构允许的情况下都应考虑为包括本文所示的化合物和其N-氧化物衍生物（它可以指定为N→O或N+-O-）。此外，在其他情况下，本发明化合物中的氮原子可以被转换为N-羟基或N-烷氧基化合物。例如，N-羟基化合物可以通过氧化剂氧化母体胺来制备，所述氧化剂例如为间氯过氧苯甲酸。因此，所有本文所示的和所要求保护的含氮化合物在价态和结构允许的情况下都应考虑为包括本文所示的化合物和其N-羟基衍生物(即N-OH）和N-烷氧基衍生物（即，N-OR，其中R是取代或未取代的C1-C6烷基，C1-C6烯基，C1-C6炔基，3-14元碳环或3-14元杂环）。
在本说明书中，在某些情况下为了方便，化合物的结构式表示某一个异构体，但本发明包括所有的异构体，如几何异构体、基于不对称碳的光学异构体、立体异构体、互变异构体等，应当理解，不是所有的同分异构体都可以具有相同水平的活性。此外，结构式表示的化合物可能存在同质多晶现象。值得注意的是，化合物的任何晶体形式、晶体形式的混合物或无水物或水合物都包括在本发明的范围内。此外，通过本发明化合物在体内的降解产生的所谓的代谢产物也包括在本发明的范围内。
“异构现象”是指化合物具有相同的分子式，但原子的键连顺序或原子空间排列不同。原子空间排列不同的异构体称为“立体异构体”。彼此间为非镜像关系的立体异构体称为“非对映异构体”，彼此为非重叠镜像关系的立体异构体称为“对映体”或有时称为光学异构体。含有等量的相反手性的单个对映体的混合物称为“外消旋混合物”。
与四个不同的取代基键连的碳原子称为“手性中心”。
“手性异构体”是指具有至少一个手性中心的化合物。具有一个以上手性中心的化合物可以作为一个单独的非对映异构体或作为非对映异构体的混合物存在，所述混合物被称为“非对映体混合物”。当存在一个手性中心时，立体异构体可以通过手性中心的绝对构型(R或S)进行表征。绝对构型是指与手性中心连接的取代基在空间的排列。所考虑的与手性中心连接的取代基的位次排列顺序符合Cahn-Ingold-Prelog顺序规则(Cahn et al.,Angew.Chem.Inter.Edit.1966,5,385;errata511;Cahn et al.,Angew.Chem.1966,78,413;Cahn and Ingold,J.Chem.Soc.1951(London),612;Cahn et al.,Experientia1956,12,81;Cahn,J.Chem.Educ.1964,41,116)。
“几何异构体”是指阻碍双键或环烷基连接体(例如，1,3-环丁基)旋转而存在的非对映体异构体。根据Cahn-Ingold-Prelog顺序规则，这些构型在名称上的区别在于前缀顺-和反-，或Z和E，这表示基团是在分子中的双键的同侧或异侧。
应当理解，本发明的化合物可以描述为不同的手性异构体或几何异构体。还应当理解的是，当化合物具有手性异构体或几何异构体的形式时，所有的异构体形式都应包括在本发明的范围内，并且该化合物的命名不排除任何化学异构体形式，当然，不是所有的异构体都可能具有相同水平的活性。
此外，在本发明中所讨论的结构和其他化合物包括其所有的阿托异构体，容易理解，并不是所有的阿托异构体都可能具有相同水平的活性。“阿托异构体”是立体异构体的一种类型，其中两种异构体的原子的空间排列不同。阿托异构体的存在归功于由阻碍大基团围绕中心键旋转而引起的受限制的旋转。这样的阿托异构体一般以混合物形式存在，然而作为色谱技术的最新进展的结果，已经能够在选定的情形下对两个阿托异构体的混合物进行分离。
“互变异构体”是两种或多种结构异构体中的一个，所述结构异构体以均衡的状态存在，并且易于从一种异构形式转换到另一种异构形式。这种转换的结果 导致氢原子的形式迁移，并伴随着相邻共轭双键的转换。互变异构体作为溶液中的互变异构体组的混合物而存在。在可能发生互变异构化的溶液中，互变异构体的化学平衡是能够达到的。互变异构体的确切比例取决于几个因素，包括温度、溶剂和pH值。互变异构体可以通过互变异构化进行相互转化的概念称为互变现象。
在各类可能的互变异构中，通常可以观察到两种类型。在酮-烯醇互变异构现象中会发生电子和氢原子的同时迁移。环-链互变异构现象的发生是糖链分子中的醛基(-CHO)与同一分子中的一个羟基(-OH)反应而使其具有如葡萄糖所展示的环（环状）形式的结果。
常见的互变异构体对是：酮-烯醇、酰胺-腈、内酰胺-内酰亚胺、杂环中的酰胺-亚胺酸的互变异构现象（例如在诸如鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶的核酸碱基中）、亚胺-烯胺和烯胺-烯胺。酮-烯醇平衡的一个例子是吡啶-2(1H)-酮和相应的吡啶-2-醇之间，如下图所示：
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应当理解的是，本发明的化合物可以描述为不同的互变异构体。还应当理解的是，当化合物具有互变异构形式时，所有的互变异构体形式都应包括在本发明的范围内，并且该化合物的命名不排除任何互变异构体形式。应理解，某些互变异构体可能比其他互变异构体具有更高水平的活性。
术语“晶体多晶型”、“多晶型”或“晶体形式”是指其中化合物（或它的盐或溶剂化物）可以以不同的晶体堆积排列形式结晶的晶体结构，所有的晶体结构都具有相同的元素组成。不同晶型通常具有不同的X-射线衍射图、红外光谱、熔点、密度、硬度、晶体形状、光学和电学性质、稳定性和溶解性。重结晶溶剂、结晶速率、储存温度以及其他因素可能会导致一种晶体形式占主导地位。化合物的晶体多晶型物可通过在不同的条件下的结晶化来制得。
本文描述的任何结构式的化合物包括化合物本身及其盐、溶剂化物和前体药物（如果适用）。例如，阴离子和取代苯化合物上带正电荷的基团（例如，氨基） 之间可以形成盐。适合的阴离子包括氯离子、溴离子、碘离子、硫酸根离子、硫酸氢根离子、氨基磺酸根离子、硝酸根离子、磷酸根离子、柠檬酸根离子、甲磺酸根离子、三氟乙酸根离子、谷氨酸根离子、葡糖醛酸根离子、戊二酸根离子、苹果酸根离子、马来酸根离子、琥珀酸根离子、富马酸根离子、酒石酸根离子、甲苯磺酸根离子、水杨酸根离子、乳酸根离子、萘磺酸根离子和乙酸根离子（例如，三氟乙酸根离子）。术语“药学上可接受的阴离子”是指适于形成药学上可接受的盐的阴离子。同样地，阳离子与取代苯化合物上带负电荷的基团（例如，羧酸酯基）之间也可以形成盐。适合的阳离子包括钠离子、钾离子、镁离子、钙离子和铵离子，如四甲基铵离子。取代苯化合物还包括那些含有季氮原子的盐。
前体药物的例子包括酯和其他药学上可接受的衍生物，其在向受试者给药后能够提供有活性的取代苯化合物。
另外，本发明的化合物，例如该化合物的盐，可以以水合或未水合的（无水物）的形式或结合其它溶剂分子作为溶剂化物存在。水合物的非限制性实例包括一水合物、二水合物等。溶剂化物的非限制性实例包括乙醇溶剂化物、丙酮溶剂化物等。
“溶剂化物”是指含有化学计量或非化学计量的量的溶剂的溶剂加成形式。一些化合物倾向于在晶体固体状态中捕获固定摩尔比的溶剂分子，从而形成溶剂化物。如果溶剂是水，所形成的溶剂化物是水合物；如果溶剂是醇，所形成的溶剂化物是醇化物。一个或多个水分子与一分子的物质的结合形成水合物，其中水保持其分子状态H2O。
本文所使用的术语“类似物”指在结构上类似于另一个但组成略有不同（如用不同元素的原子替换一个原子或在存在特定的官能团的情况下，或用一个官能团替换另一个官能团）的化合物。因此，类似物是在功能和形态方面而不是在结构或来源方面与参照化合物类似或相当的化合物。
本文所定义的术语“衍生物”是指有共同的母核结构并被本文所述的各种基团取代的化合物。例如，由式（I）表示的所有化合物都是取代苯化合物，并且具有式（I）作为共同的母核。
术语“生物电子等排体”是指原子或原子团与大致相似的另一原子或原子团交换所产生的化合物。生物电子等排替换的目的是创造出具有与母体化合物相似的生物学特性的新化合物。生物电子等排替换可以基于物理化学或拓扑学。羧 酸生物电子等排体的例子包括，但不限于酰基磺酰亚胺、四唑类、磺酸酯和膦酸酯。参阅如Patani and LaVoie,Chem.Rev.96,3147-3176,1996。
另外，本发明旨在包括在本发明化合物中所出现的原子的所有同位素。同位素包括原子序数相同，但质量数不同的原子。作为一般的例子（但不限于此），氢的同位素包括氚和氘，碳的同位素包括C-13与C-14。
2.取代苯化合物的合成
本发明提供本文所描述的任意结构式的化合物的合成方法。本发明还提供了本发明公开的多种化合物的、根据实施例中所示的反应方案的详细的合成方法。
在整个描述中，其中组合物被描述为具有、包括或包含特定的成分时，可以预计所述组合物也基本由或由所述成分组成。同样地，当方法或过程被描述为具有、包括或包含特定的处理步骤时，所述过程或方法也基本上由或由所述处理步骤组成。此外，应当理解的是，只要本发明仍然是可实施的，那么执行某些操作的步骤或顺序不是十分重要的。此外，两个或以上的步骤或操作可以同时进行。
本发明的合成方法可以容许很多种官能团，因此可以使用多种取代的起始原料。该方法通常在整个过程的结尾或接近结尾时提供所需的最终化合物，然而在某些情况下可能期望将该化合物进一步转换成其药学上可接受的盐、酯或前体药物。
本发明的化合物可以以使用市售的起始原料、文献中已知的化合物或来自易制备的中间体，通过采用本领域技术人员已知的或者根据本文的技术启示对本领域技术人员变得显而易见的标准合成方法和步骤的多种方式来制备。制备有机分子以及官能团转换和操作的标准合成方法及步骤可以从相关的科技文献或该领域的标准教科书中得到。虽然并不限于任何一个或几个来源，作为参考引入本文的经典文本，如Smith,M.B.,March,J.,March’s Advanced OrganicChemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,5th edition,John Wiley & Sons:New York,2001;Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups in OrganicSynthesis,3rd edition,John Wiley & Sons:New York,1999;R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989);L.Fieser and M. Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；以及L.Paquette,ed.,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,JohnWiley and Sons(1995)是有用的，并且是本领域技术人员公知的有机合成的公认的参考教科书，它们通过引用结合于本文中。以下有关合成方法的描述旨在说明而不是限制用于制备本发明化合物的一般步骤。
本发明的化合物可以很方便地通过本领域技术人员熟悉的各种方法来制备。具有本文所描述的任何一个结构式的本发明的化合物可以根据以下反应方案1-10所示的步骤，从市售的起始原料或可以用文献步骤制备的起始原料来制备。除非另有明确说明，否则在反应方案1-10中Z和R基团（例如R1、R2、R3、R4、R6、R7、R8和R12）为如本文所描述的任何结构式中的定义。
本领域的技术人员将会注意到，在本文所描述的反应顺序和合成反应方案中，某些步骤的顺序可以改变，如保护基的引入和去除。
本领域的技术人员将认识到，某些基团在反应条件下可能需要用保护基来保护。保护基也可用来区分分子中相似的官能团。保护基名单以及如何引入和去除这些基团的方法可以参阅Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups inOrganic Synthesis,3rd edition,John Wiley & Sons:New York,1999。
优选的保护基包括，但不限于：
对于羟基部分：TBS、苄基、四氢吡喃基，乙酰基；
对于羧酸：苄基酯、甲酯、乙酯、烯丙基酯；
对于胺：Cbz、BOC、DMB；
对于二醇：乙酰基（2个）TBS（2个），或者（两个羟基)一起形成缩丙酮；
对于硫醇：乙酰基；
对于苯并咪唑类：SEM、苄基、PMB、DMB；
对于醛：二烷基缩醛类，如二甲氧基乙缩醛或二乙基乙酰基。
在本文中所描述的反应反应方案中可以产生多个立体异构体。当没有指明任何特定的立体异构体时，可以理解为是指可以从反应中产生的所有可能的立体异构体。本领域的技术人员将认识到，可以将该反应进行优化以优先得到一种异构体，或者可以设计出新的反应方案以产生单一的异构体。如果产生的是混合物，也可以使用如制备型薄层色谱、制备型HPLC、制备手性HPLC或制备型SFC技术来分离异构体。
在整个说明书中使用了下列缩写词，其定义如下：
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反应方案1
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反应方案1显示了根据利用成熟化学设计的一般反应路线来合成苯类似物，其中Z=-N(R7)(R8)。将取代硝基苯甲酸（其中有许多可以商购获得，或者可以通过硝化适当的取代苯甲酸或其他本领域技术人员已知的化学方法制备）在适当的温度（如60℃）下，在适当的碱（如碳酸钠）存在下，在极性溶剂（如二甲基甲酰胺）中用碘甲烷处理，可以将其转化为它们的甲酯（步骤1）。通过使用适当的还原剂（如铁），在酸（如氯化铵）的存在下，在适当的温度（如80℃），在质子溶剂（如乙醇）中，硝基可以被还原为氨基（步骤2）。在适当的溶剂（如甲醇）中，在适当的还原剂（如氰基硼氢化钠）和催化的酸（如乙酸）的存在下，可以通过对合适的R7-酮或R7-醛还原胺化来引入R7。各种R8基团可以通过在适当的温度（如80℃）下，在适当的极性溶剂（如乙腈）中，在温和碱（如碳酸铯）存在下，使用R8-LG烷基化反应来引入，其中LG是离去基团（如碘）（步骤4）。备选的是，R8基团还可以通过在适当的溶剂（如甲醇）中，在适当的还原剂（如氰基硼氢化钠）和催化的酸（如乙酸）存在下对相应的R8-酮或R8-醛的还原胺化来引入。酯基可以通过标准两步法转换为酰胺。所述酯在极性溶剂（如乙醇）中通过使用合适的碱（如氢氧化钠）可以水解成相应的酸（步骤5）。将所述酸再进行标准酰胺偶联反应，于是将合适的胺随同在合适的溶剂（如DMSO）中的合适的酰胺偶联试剂（如PYBOP）一起加入，产生所需的酰胺（步骤6）。
反应方案2
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根据R6取代基的性质，可以采用进一步的化学修饰将R6取代基转换成另一种R6取代基。所述修饰的代表性的例子可以包括氢化、保护基团去除之后再进行附加的酰胺偶联反应、钯催化偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。例如，如果R6是溴，可以之后通过标准过渡金属基方法引入另一种R6取代基，该方法依赖于一个离去基团（如溴）作为连接点。
在反应方案2所描述的一个这样的方法中，通过碳-碳键连接的非芳族R6取代基可以通过化合物（其中R6为Br）的Suzuki反应引入，其中所述化合物同合适的不饱和非芳族硼酸酯衍生物（例如烯烃类的硼酸酯衍生物，如乙烯4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷）在温和碱和钯催化剂存在下，在极性溶剂（如二氧六环/水）中在加热条件下发生Suzuki反应得到所需的新的R6取代基。根据不同R6取代基的性质，可以采用进一步的化学修饰将不饱和的R6取代基转化为另一种R6取代基。所述化学修饰的代表性的例子可以包括加氢、保护基团除去之后再进行附加的酰胺偶联反应、钯催化偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。例如，在不饱和非芳族R6基被引入的情况中，通过氢化对R6基的进一步修饰可以得到相应的饱和R6基团（例如，将乙烯基转化为乙基）。在其中所引入的R6基团已经保护氨基功能的情况下，进一步的修饰包括脱保护以得到胺，所得到的胺可在随后的步骤中通过如形成酰胺或还原胺化反应进行进一步修饰。
在反应方案3所描述的另一个方法中，通过碳-碳键连接的非芳族R6取代基可通过化合物（其中R6为Br）的Sonogashira反应来引入，并任选地之后对所引入的炔基进行进一步修饰。在Sonogashira反应中，在温和碱、铜催化剂和钯催化剂存在下，在有机溶剂（如甲苯）中加热条件下，化合物（其中R6为Br）与末端炔烃衍生物偶联。反应的结果是溴基被炔基取代。可对所得的其中溴取代基为 炔基的化合物进行后续的合适的修饰，以生成另一种R6取代基。所述化学修饰的代表性的例子可以包括加氢、保护基团除去之后再进行附加的酰胺偶联反应、钯催化偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。
反应方案3
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另一种方法中，通过碳-碳键连接的非芳族R6取代基可通过溴原子化合物（其中R6为Br）的其它取代反应来制备，并任选地之后对所引入的R6取代基进行进一步修饰。所述取代反应的例子包括使用锌试剂的偶联反应，如氰化反应和Negishi反应。在氰化反应中，化合物（其中R6为Br）可同氰化锌在标准的钯催化剂催化的反应条件下得到化合物（其中R6=CN）。这种化合物中的氰基可以被进一步修饰为其他的R6基团。这样的氰基修饰包括：i还原为胺，所述胺随后可通过酰基化或烷基化转化为酰胺，ii还原为醛，所述醛可经还原胺化反应得到相应的衍生物。在Negishi反应中，可用烷基碘（如N-叔丁氧羰基-3-碘代氮杂环丁烷）制备的烷基锌试剂在钯或镍催化剂存在下同化合物（其中R6为Br）进行偶联。在所得的产物中，所引入的R6基团可以在后续步骤中通过R6基团的进一步修饰（例如脱保护、形成酰胺或烷基化）转换成另一种基团。
具有R6取代基的化合物（其中R6取代基为通过氮-碳键与其连接的氨基）可以通过化合物（其中R6为Br）的Buchwald偶联反应来引入，随后R6取代基可任选进行修饰，如反应方案4所述。在Buchwald反应中，化合物（其中R6为Br）在钯催化剂（例如Pd(dba)2/BINAP）和碱（例如碳酸铯）的存在下，在有机溶剂（如甲苯）中在加热条件下，用伯胺或仲胺（如哌嗪-1-甲酸叔丁酯）处理。Buchwald偶联产物可进行后续的适当修饰，以产生另一种R6取代基。所述修饰的例子包括保护基团的去除、酰胺偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。
反应方案4
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具有R6取代基的化合物（其中R6取代基为通过硫-碳键与其连接的烷硫基）可通过化合物（其中R6为Br）与硫醇在钯催化剂和弱碱（如DIPEA）存在下，在溶剂中加热条件下的偶联反应制备得到。所述偶联产物硫化物可进行后续的适当修饰，以得到另外的R6取代基。所述修饰的例子包括硫的氧化反应得到亚砜和砜、保护基的去除、酰胺偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。
在反应方案1的一般合成方法的修饰中，根据R7取代基的性质，反应方案1中步骤6之后的进一步化学修饰可以用于将R7取代基转换成另一种R7取代基。例如，R7中包含的被保护的氨基基团可以进行脱保护反应（例如，Boc基团裂解）以得到游离的氨基基团。可以对所得的游离的氨基基团进行还原胺化反应或烷基化反应，以得到取代的胺。
反应方案5显示了吡啶酰胺化合物的一般合成方法。开始先将3-溴-6-氯吡啶甲酸甲酯氧化为N-氧化物，然后用三氯氧磷氯化所得N-氧化物，得到3-溴-4,6-二氯吡啶甲酸甲酯。所述4-氯基团可以选择性地被不同的单和二烷基胺取代，所述单和二烷基胺取代还可以包含功能的或被保护的官能团，所述被保护的官能团可在后期脱掉保护基。所述3-溴基团可被保留或任选通过合适的取代反应和进一步的官能团修饰而转换成另一种R12的基团。所述反应包括钯催化剂催化的偶联反应。例如，3-溴基团可通过Stille反应用四甲基锡转换为R12=甲基的基团。酯水解后通过酰胺与适当的3-（氨基甲基）-吡啶-2-酮的偶联生成吡啶酰胺化合物（其中R6是氯基团）。氯基团可任选被在最后一步或者步骤6酯水解之前的合适的取代反应转换为另一个R6基团。所述取代反应的例子包括直接的或钯催化剂催 化的氰化反应和氨化反应。类似化合物（其中R12是氯）可以以类似方式从3,4,6-三氯吡啶-2-羧酸甲酯制备。
反应方案5
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用于反应方案1中的酰胺偶联反应的3-(氨基甲基)-吡啶-2(1H)-酮中间体的一般合成方法如反应方案6所示。在一种方法中，二酮在适当的试剂（如哌啶乙酸酯）存在下，在极性溶剂中（如乙醇）与2-氰基乙酰胺缩合，生成氰基吡啶酮（步骤9）。在另一种方法中，当R3是氢时，合适的取代炔基酮在适当的试剂（如哌啶乙酸酯）存在下，在极性溶剂中（如乙醇）与2-氰基乙酰胺缩合，生成氰基吡啶酮（步骤11）。氰基可以在适当条件下被还原，例如，在催化剂雷尼镍存在下，在极性溶剂中（如铵在甲醇中）被氢化还原生成胺（步骤10）。
反应方案6
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另外，根据R2、R3或R4基团的性质，可采用进一步的化学修饰将它们各自独立地转换为另外的取代基。所述化学修饰的代表性例子可以包括加氢、除去保护基后进行额外的酰胺偶联反应、钯催化偶联反应、还原胺化反应、烷基化反应。
反应方案7提供了基于2-取代的（取代基为R12基）3-氨基-5-溴-苯甲酸甲酯为起始原料的反应方案1的一般合成反应方案的另一个版本。这些起始原料又可以由市售获得或通过2-取代苯甲酸的硝化制备得到的2-取代的3-硝基-苯甲酸来制备。因此，用合适的试剂如1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮来溴化2-取代的-3-硝基-苯甲酸，产生适当的2-取代的3-硝基-5-溴-苯甲酸。然后依次进行各种酯化反应和之后的硝基还原反应，以从2-取代的3-硝基-5-溴-苯甲酸制备2-取代的-3-氨基-5-溴-苯甲酸甲酯起始原料。
反应方案7
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如反应方案7所示，在步骤1中，R7基团可以通过用合适的R7-酮或R7-醛， 在适当的还原剂（如氰基硼氢化钠）和催化的酸（如乙酸）的存在下，在合适的溶剂（如甲醇）中的还原胺化反应从2-取代-3-氨基-5-溴苯甲酸甲酯中引入。同样地，R8基团可以通过用合适的R8-酮或R8-醛，在适当的还原剂（如氰基硼氢化钠）和催化的酸（如乙酸）的存在下，在合适的溶剂（如甲醇）中的还原胺化反应而在步骤2中引入。或者，各种R8基团可以通过使用R8-LG，在温和碱（如碳酸铯）的存在下，在适当的极性溶剂中（如乙腈），在适当的温度下（如80℃）的烷基化反应来引入，其中LG是离去基团（如碘）。在步骤3中，通过钯催化的偶联反应可以引入除溴以外的R6基团。所述R6基团和方法的例子在上文中已描述。例如胺可以通过Buchwald反应引入，不饱和基团可以通过Suzuki或Sonogashiri反应引入。R6取代基可以进行随后的适当的修饰，以得到另一种R6取代基。所述修饰的代表性例子可以包括加氢（如使不饱和基团饱和）、除去保护基后进行额外的酰胺偶联反应、钯催化偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。在步骤4中，酯基可在极性溶剂（如乙醇）中用适当的碱(如氢氧化钠)水解成相应的酸。在步骤5中，可以对所述酸进行标准的酰胺偶联反应，于是适当的3-(氨基甲基)-吡啶-2-酮在合适的溶剂（如DMSO）中随同合适的酰胺偶合试剂(例如PYBOP)一起被加入，得到所需的酰胺。根据R7取代基的性质，反应方案4中的步骤5之后的进一步化学修饰可以用于将R7取代基转换成另一种R7取代基。例如，R7中包含的被保护的氨基可以通过脱保护反应（例如，Boc基团裂解）得到游离的氨基基团。可以对所得的游离的氨基基团进行还原胺化反应或烷基化反应，以得到取代的胺。
以下的反应方案8显示了2-单烷氨基和2-双烷氨基-3,6-二取代-异烟酰胺的一般合成方法，其中3-取代基对应于R12，而6-取代基对应于R6。在步骤1中，3-取代基可以通过Epsztain J.et al.Tetrahedron,1991,v.47,1697-16708中所描述的方法引入，所述方法将2-氯异烟酰苯胺用正丁基锂金属化，然后再用烷基碘（如甲基碘）或醛或其他亲电子基团将其捕获。
反应方案8
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上述捕集试剂产生带有官能团的取代基时，所述官能团可以被屏蔽或转换为与后续化学步骤相兼容的另一个官能团。在步骤2中，酰苯胺在标准的酸性条件下水解，然后在标准条件下合成甲酯，例如所示的在碘甲烷和碱存在条件下生成了相应的2-氯-3-取代异烟酸甲酯。在步骤4中，通过R7NH2单烷基胺与2-氯-3-取代的异烟酸甲酯的Buchwald偶联反应可以引入烷基氨基基团。不同的2-氯吡啶体系中的该反应在化学文献中已有先例。在针对二烷基氨基化合物的一个可选步骤5中，R8基团可以通过用R8-酮或R8-醛，在适当的还原剂（如氰基硼氢化钠）和催化的酸（如乙酸）的存在下，在合适的溶剂（如甲醇）中的还原胺化反应来引入。或者，各种R8基团可以通过使用R8-LG，在温和碱（如碳酸铯）的存在下，在适当的极性溶剂中（如乙腈），在适当的温度下（如80℃）的烷基化反应引入，其中LG是离去基团（如碘）。在步骤6中，氧化成N-氧化物然后用三氯氧磷氯化，可以得到6-氯-2-单或二烷基氨基-3-取代的异烟酸甲酯。在步骤7中，酯基可在极性溶剂中（如乙醇）用适当的碱(如氢氧化钠)水解成相应的酸。在步骤8中，可以对所述酸进行标准的酰胺偶联反应，于是将适当的取代的3-(氨基甲基)-吡啶-2-酮随同在合适的溶剂中(如DMSO)的合适的酰胺偶合试剂(PYBOP)一起加入，反应得到所需的酰胺。在步骤9中，氯基团可任选被在最后一步或者步骤6酯水解之前的合适的取代反应转换为另一个R6基团。所述取代反应的例子包括直接的 或钯催化剂催化的氰化反应和氨化反应。可对R6取代基进行后续的适当的修饰，以生成另一种R6取代基。所述修饰的代表性例子可以包括加氢（如使不饱和基团饱和）、除去保护基后进行额外的酰胺偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。根据不同的R7取代基的性质，可采用进一步的修饰将R7取代基转换成另一种的R7取代基。例如，R7中包含的被保护的氨基可以通过脱保护（例如，Boc基团裂解）得到游离的氨基基团。所得的游离的氨基基团可以进行还原胺化反应或烷基化反应，以得到取代的胺。
反应方案9
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反应方案9描绘了根据利用成熟的化学设计的一般反应路线合成苯类似物的方法，其中Z为硫、亚砜或砜基团。起始于取代的苯甲酸（如5-氯-2-甲基苯甲酸），使用标准条件硝化，如用浓硫酸和浓硝酸处理，可以得到硝基类似物。所得到的酸可与烷基化剂（如甲基碘）在碱（如碳酸钠）的存在下，在极性溶剂中（如 DMF）进行酯化反应。通过使用例如铁和氯化铵，在质子溶剂（如乙醇）中，加热至例如80℃的条件下，可以将硝基还原为氨基。得到的苯胺可用CuBr2和亚硝酸叔丁基酯在溶剂（如乙腈）中处理而进行Sandmeyer反应转换成溴代物。使用钯源（例如醋酸钯）与配体（如Xanthphos），在碱（如N，N-二异丙基乙胺）存在下，在1,4-二氧六环中，任选加热至例如100℃的温度下，可以实现硫醇与溴代物的钯催化偶联。使用水溶碱（如NaOH水溶液）可以将所述酯水解。使用标准的氨基和酸偶联的条件（如在DMSO中的PyBOP），可以将由此产生的酸于适当的取代的3-(氨基甲基)-吡啶-2-酮（如反应方案9中所描述的3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮）进行偶联。通过使用在溶剂（如二氯甲烷）中的适当当量的氧化剂（如m-CPBA），可以将得到的硫醚氧化为相应的亚砜或砜。R6氯基团可在一个额外的步骤10中或在步骤5之后或在酰胺偶联之前被替换为另一种R6基团。可替换的R6基团的例子包括可以通过使用钯偶联如Buchwald反应而并入以得到胺基团（如吗啉基）的取代基。R6取代基可随后进行适当的修饰，以生成另一种R6取代基。所述修饰的代表性例子包括除去保护基后进行额外的酰胺偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。
反应方案10
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反应方案10描述了根据利用成熟的化学的一般反应路线合成改性的苯类似物的方法，其中Z为醚基。起始于取代的苯胺（如3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯），用Sandmeyer反应条件，如用含水酸（如50％硫酸水溶液）中的NaNO2 水溶液处理，可以将该苯胺转化成酚。使用烷基化剂（如4-甲基苯磺酸四氢-2H-吡喃-4-基酯）在适当的碱(如碳酸铯)的存在下，在极性溶剂(如DMF)中，并任选加热至例如80℃的温度，可将所得苯酚化合物进行烷基化。用水溶碱（如NaOH水溶液）可以将所述酯水解。使用标准的氨基和酸偶联的条件（如在DMSO中的PyBOP），可以将由此产生的酸与适当的取代的3-(氨基甲基)-吡啶-2-酮进行偶联。R6氯基团在步骤5之后或之前的额外的酰胺偶联反应中被替换为另一种R6基团。可替换的R6基团的例子包括可以通过使用钯偶联如Buchwald反应而并入，以得到胺基团（如吗啉基）的取代基。R6取代基可随后进行适当的修饰以生成另一种R6取代基。所述修饰的代表性例子可以包括除去保护基后进行额外的酰胺偶联反应、还原胺化反应或烷基化反应。
本领域技术人员将认识到，在上述的反应方案中，其中许多步骤的顺序是可以互换的。
3.治疗方法
本发明的化合物可抑制EZH2或其突变体的组蛋白甲基转移酶活性，因此，本发明还提供了治疗症状和疾病的方法，所述方法可以通过调节组蛋白或其他蛋白质的甲基化状态来影响治疗过程，其中所述甲基化状态至少部分被EZH2的活性所介导。在本发明的一个方面，本文所公开的某些化合物是用于治疗或预防某些症状和疾病的候选药物。组蛋白甲基化状态的调节又可以影响被甲基化激活的靶基因和/或被甲基化抑制的靶基因的表达水平。所述方法包括向需要这种治疗的受试者给予治疗有效剂量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物、溶剂化物或立体异构体。
EZH2介导的蛋白质甲基化参与的疾病可以是癌症或癌前状态。本发明进一步提供了本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物在治疗癌症或癌前期中的用途，其中可以通过调节组蛋白或其他蛋白质的甲基化状态来影响治疗过程，或在用于治疗这类癌症或癌前期的有用的药物的制备中的用途。可治疗的示例性癌症包括淋巴瘤，包括非霍奇金淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤（FL）和弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）；黑色素瘤；白血病，包括慢性粒细胞白血病（CML）。示例性的癌前病症包括骨髓增生异常综合征（MDS，以前称为白血病前期）。
本发明还提供了免受EZH2介导的蛋白质甲基化参与的疾病的方法，其中向需要治疗的受试者给予治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前药、代谢物、多晶型物或溶剂化物。所述疾病可以是癌症，如其中EZH2介导的蛋白质甲基化起作用的癌症。本发明还提供了本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物、溶剂化物或立体异构体的用于制备预防细胞增殖性障碍的有用药物的用途，所述细胞增殖性障碍至少部分地与EZH2介导的蛋白质甲基化相关。
本发明化合物可以或可能用来调节蛋白（如组蛋白）的甲基化，例如调节组蛋白甲基转移酶或组蛋白去甲基化酶的活性。至少部分本发明化合物可用于在体内或体外调节蛋白的甲基化。已有报道称，组蛋白甲基化参与癌症中的某些基因的异常表达和非神经元细胞中的神经元基因的基因沉默。至少部分本文所述的化合物是适合治疗这些疾病的候选药物，即将甲基化降低或恢复到对应正常细胞的大致水平。
作为甲基化调节器的化合物可以或可能用于调节细胞增殖。例如，在某些情况下，使用减少甲基化的药物可减少细胞的过度增殖，而使用增加甲基化的药物可能会激发不足的细胞增殖。因此，可被本发明的化合物治疗的疾病可包括过度增殖性疾病，如良性细胞生长和恶性细胞生长。
本文使用的“需要治疗的受试者”是指患EZH2介导的蛋白甲基化参与的疾病的受试者，或相对于大多数人具有患此疾病的高风险的受试者。需要治疗的受试者可以有一个癌前状态。优选地，需要治疗的受试者有癌症。所述“受试者”包括哺乳动物。所述哺乳动物可以是如人类或适当的非人类的哺乳动物，如灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、牛、马、山羊、骆驼、羊或猪。所述受试者也可以是鸟或家禽。在一个实施例中，所述哺乳动物是人。
本文使用的术语“细胞增殖性障碍”指的是细胞的不受控制的或异常的生长，或两者兼而有之的状况，所述状况会导致可能是或可能不是癌性的有害的症状或疾病。可使用本发明的化合物来治疗的示例性的细胞增殖性障碍包括各种细胞分裂不受控制的状况。示例性的细胞增殖性障碍包括，但不限于肿瘤、良性肿瘤、恶性肿瘤、癌前状态、原位肿瘤、包膜肿瘤、转移瘤、液体瘤、实体瘤、免疫性肿瘤、血液肿瘤、癌症、癌、白血病、淋巴瘤、肉瘤和迅速分裂的细胞。本文中使用的术语“迅速分裂的细胞”被定义为分裂速率超过或大于同一组织中 相邻的或并列的细胞的所期望的或观察到的分裂速率的任何细胞。细胞增殖性障碍包括初癌或癌前状态。细胞增殖性障碍包括癌症。本文提供的方法和用途可以或可能用于治疗或缓解癌症的症状，或用于识别用于上述目的的合适的候选人。术语“癌症”包括实体瘤以及血液肿瘤和/或恶性肿瘤。“初癌细胞”或“癌前细胞”是一种表现出作为初癌或癌前状态的细胞增殖障碍的细胞。“癌症细胞”或“癌细胞”是表现出作为癌症的增殖性障碍的细胞。可以使用任何可再现的测量手段识别癌细胞或癌前期细胞。通过组织样本（如活检样本）的组织学分类或分级可以识别癌细胞或癌前期细胞。通过使用合适的分子标记物可以识别癌细胞或癌前期细胞。
可使用一个或多个本发明的化合物来治疗的示例性非癌性状况或病症包括，但不限于类风湿关节炎、炎症、自身免疫性疾病、淋巴组织增生、肢端肥大症、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风及其他关节炎、败血症、败血性休克、内毒素休克、革兰氏阴性败血症、中毒性休克综合征、哮喘、成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病、慢性肺部炎症、炎症性肠道疾病、克罗恩病、牛皮癣、湿疹、溃疡性结肠炎、胰腺纤维化、肝纤维化、急性和慢性肾脏疾病、肠易激综合征、麻痹性痴呆（pyresis）、再狭窄、脑型疟疾、中风和缺血性损伤、神经损伤、阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏病、帕金森氏病、急性和慢性疼痛、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、慢性心脏衰竭、急性冠脉综合征、恶病质、疟疾、麻风病、利什曼病、莱姆病、赖特综合征、急性滑膜炎、肌肉退化、滑囊炎、肌腱炎、腱鞘炎、突出或破裂或脱出的椎间盘盘综合征、血栓症、再狭窄、矽肺、肺肉瘤病、骨吸收性疾病（如骨质疏松症）、移植物抗宿主反应、多发性硬化症、红斑狼疮、纤维肌痛症、艾滋病和其它病毒性疾病（如带状疱疹、单纯疱疹病毒I或II、流感病毒和巨细胞病毒）、糖尿病。
可使用一个或多个本发明的化合物来治疗的示例性癌症包括，但不限于肾上腺皮质癌、AIDS相关的癌症、AIDS相关的淋巴瘤、肛门癌、肛门直肠癌、肛管癌、阑尾癌、儿童小脑星形细胞瘤、儿童大脑星形细胞瘤、基底细胞癌、皮肤癌（非黑色素瘤）、胆道癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、泌尿膀胱癌、骨和关节恶性肿瘤、骨肉瘤恶性纤维组织细胞瘤、脑癌、脑肿瘤、脑干胶质瘤、小脑星形细胞瘤、大脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤、室管膜瘤、髓母细胞瘤、幕上原始神经外胚层肿瘤、视觉通路和下丘脑胶质瘤、乳腺癌、支气管腺瘤/类癌瘤、类癌肿瘤、 胃肠道癌症，神经系统癌症、神经系统淋巴瘤、中枢神经系统癌症、中枢神经系统淋巴瘤、子宫颈癌、儿童期癌症、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、慢性骨髓及外骨髓增殖性疾病、结肠癌、大肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、淋巴肿瘤、蕈样真菌病、塞泽里综合症、子宫内膜癌、食道癌、颅外生殖细胞瘤、性腺外生殖细胞肿瘤、肝外胆管癌、眼肿瘤、眼内黑色素瘤、视网膜母细胞瘤、胆囊癌、胃（胃部）癌、胃肠道类癌瘤、胃肠道间质瘤（GIST）、生殖细胞肿瘤、卵巢生殖细胞肿瘤、妊娠滋养细胞肿瘤神经胶质瘤、头颈部癌、肝细胞（肝脏）癌、霍奇金淋巴瘤、下咽癌、眼内黑色素瘤、眼癌、胰岛细胞瘤（内分泌胰脏）、卡波氏肉瘤、肾癌（kidney cancer）、肾癌（renal cancer）、喉癌、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病、毛细胞白血病、唇癌、口腔癌、肝癌、肺癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、艾滋病相关的淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、Waldenstram巨球蛋白血症、髓母细胞瘤、黑色素瘤、眼内（眼睛）黑色素瘤、默克尔细胞癌、恶性间皮瘤、间皮瘤、转移性鳞状颈部癌、口腔癌、舌癌、多发性内分泌腺瘤综合征、蕈样真菌病、骨髓增生异常综合征、骨髓增生异常/骨髓及外骨髓增殖性疾病、慢性骨髓性白血病、急性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤、慢性骨髓及外骨髓增殖性疾病，鼻咽癌、神经母细胞瘤、口腔癌（oral cancer）、口腔癌（oral cavity cancer）、口咽癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢低恶性潜在的肿瘤、胰腺癌、胰岛细胞胰腺癌、鼻窦和鼻腔癌、甲状旁腺癌、阴茎癌、咽癌、嗜铬细胞瘤、松果体母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤、垂体瘤、浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤、胸膜肺胚细胞瘤、前列腺癌、直肠癌、肾盂和输尿管移行细胞癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、唾液腺肿瘤、尤文氏肉瘤家族、卡波济氏肉瘤、软组织肉瘤、子宫癌、子宫肉瘤、皮肤癌（非黑色素瘤）、皮肤癌（黑色素瘤）、默克尔细胞皮肤癌、小肠肿瘤、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃（胃部的）癌、幕上原始神经外胚层肿瘤、睾丸癌、咽喉癌、胸腺瘤、胸腺瘤和胸腺癌、甲状腺癌、肾盂和输尿管等泌尿器官移行细胞癌、妊娠滋养层细胞肿瘤、尿道癌、子宫内膜癌、子宫肉瘤、子宫体癌、阴道癌、外阴癌、肾母细胞瘤。
“血液系统的细胞增殖障碍”是一种涉及血液系统细胞的细胞增殖障碍。血液系统的细胞增殖障碍包括淋巴瘤、白血病、髓系肿瘤、肥大细胞瘤、骨髓增生异常、良性单克隆丙种球蛋白病、淋巴瘤样肉芽肿、淋巴瘤样丘疹病、红细胞增 多症、慢性粒细胞白血病、病因不明的髓样化生、原发性血小板增多症。血液系统细胞增殖障碍包括血液系统细胞的增生、异型增生和化生。一方面，本发明的组合物可用于治疗癌症，所述癌症包括本发明所述血液癌症或血液细胞增殖性障碍，或用于识别用于上述目的的合适的候选人。本发明所述血液癌症包括多发性骨髓瘤、淋巴瘤（包括霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、儿童淋巴瘤、淋巴细胞和皮肤原发的淋巴瘤），白血病（包括儿童白血病、多毛细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、肥大细胞性白血病），髓系肿瘤和肥大细胞肿瘤。
“肺细胞增殖性障碍”是一种涉及肺细胞的细胞增殖性疾病。肺细胞增殖性障碍可以包括影响肺细胞的所有形式的细胞增殖性疾病。肺细胞增殖性障碍可包括肺癌、肺部初癌或癌前状态、肺部良性肿瘤或病变、肺部恶性肿瘤或病变，以及肺部以外的身体的其它组织和器官中的转移病灶。一方面，本发明的组合物可用于治疗肺癌或肺细胞增殖性障碍，或用于识别用于上述目的合适的候选者。肺癌可以包括恶性肺肿瘤、原位癌、典型类癌瘤和非典型类癌瘤。肺癌可以包括小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌(NSCLC)、鳞状细胞癌、腺癌、小细胞癌、大细胞癌、腺细胞癌、间皮瘤。肺癌可以包括“疤痕癌”、细支气管肺泡癌、巨细胞癌、梭形细胞癌、大细胞神经内分泌癌。肺癌可以包括具有组织学和超微结构异质性（例如，混合细胞型）的肺部肿瘤。
肺细胞增殖性障碍可以包括影响肺细胞的所有形式的细胞增殖性障碍。肺细胞增生性障碍包括肺癌、肺癌前状态。肺细胞增殖性障碍可以包括肺的增生、化生、异型增生。肺细胞增生性障碍可以包括石棉诱导的增生、鳞状上皮化生、良性反应性间皮化生。肺细胞增殖性障碍可以包括复层鳞状上皮替换柱状上皮、粘膜异型增生。暴露于吸入性有害环境物质（如香烟烟雾和石棉）的个体会增加患肺细胞增生性障碍的风险。会使个体更易患肺细胞增殖性障碍的在先的肺部疾病包括坏死性肺疾病、硬皮病、类风湿疾病、结节病、间质性肺炎、肺结核、反复性肺炎、特发性肺纤维化、肉芽肿、石棉沉着病、纤维化性肺泡炎、霍奇金病。
“结肠细胞增殖性障碍”是一种涉及结肠细胞的细胞增殖性疾病。一方面，本发明的组合物可用于治疗结肠癌或结肠细胞增殖性障碍，或用于识别用于这样的目的合适的候选人。结肠癌可以包括各种形式的结肠癌。结肠癌可以包括偶发性和遗传性结肠癌。结肠癌可以包括恶性结肠肿瘤、原位癌、典型类癌肿瘤和不 典型类癌肿瘤。结肠癌可以包括腺癌、鳞状细胞癌、腺细胞癌。结肠癌可以与遗传性综合征相关，所述遗传性综合征包括遗传性非息肉病性结肠直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、加德纳氏综合征、黑斑息肉综合征、Turcot综合征（又名“胶质瘤息肉病综合征”）、幼年性息肉病。结肠癌可由遗传性综合征引起，所述遗传性综合征包括遗传性非息肉病性结肠直肠癌、家族性腺瘤性息肉病、加德纳氏综合征、黑斑息肉综合征、Turcot综合征、幼年性息肉病。
结肠细胞增殖性障碍可以包括影响结肠细胞的所有形式的细胞增殖性障碍。结肠细胞增殖性障碍可以包括结肠癌、结肠癌前状态、结肠腺瘤性息肉病、结肠异时性病变。结肠细胞增殖性障碍可以包括腺瘤。结肠细胞增殖性障碍可以用结肠细胞的增生、化生和异型增生表征。可使个体更易患结肠细胞增生性障碍的在先所患的结肠疾病可以包括在先的结肠癌。会使个体更易患结肠细胞增生性的当前疾病障碍可以包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。结肠细胞增殖性障碍与基因突变相关，所述基因突变包括p53、ras、FAP和DCC的基因突变。由于存在选自包括p53、ras、FAP和DCC的基因突变，个体患结肠细胞增殖性障碍的风险升高。
“胰腺细胞增殖性障碍”是一种涉及胰腺细胞的细胞增殖性障碍。胰腺细胞增殖性障碍可以包括影响胰腺细胞的所有形式的细胞增殖性障碍。胰腺细胞增殖性障碍包括胰腺癌、胰腺癌初癌或癌前状态、胰腺增生、胰腺的异型增生、胰腺良性肿瘤或病变、胰腺恶性肿瘤或病变，以及在胰腺以外的身体的其它组织和器官中的转移病灶。胰腺癌包括所有形式的胰腺癌。胰腺癌可以包括导管腺癌、腺鳞癌、多形性巨细胞癌、粘液腺癌、破骨细胞样巨细胞癌、粘液性囊腺癌、腺泡细胞癌、未分类的大细胞癌、小细胞癌、胰母细胞瘤、乳头状肿瘤、粘液性囊腺瘤、乳头状囊性肿瘤、浆液性囊腺瘤。胰腺癌还包括具有组织学和超微结构的异质性（例如，混合细胞型）的胰腺肿瘤。
“前列腺细胞增殖性障碍”是一种涉及前列腺细胞的细胞增殖性障碍。前列腺的细胞增殖性障碍可以包括影响前列腺细胞的所有形式的细胞增殖性障碍。前列腺细胞增殖性障碍包括前列腺初癌或癌前状态、前列腺良性肿瘤或病变、前列腺恶性肿瘤或病变，以及在前列腺以外的身体的其它组织和器官中的转移病灶。前列腺细胞增殖性障碍可以包括前列腺的增生、化生和异型增生。
“皮肤细胞增殖性障碍”是一种涉及皮肤细胞的细胞增殖性障碍。皮肤细胞增殖性障碍可以包括影响皮肤细胞的所有形式的细胞增殖性障碍。皮肤细胞增殖 性障碍可以包括皮肤初癌或癌前状态、皮肤良性肿瘤或病变、黑色素瘤、皮肤的恶性黑色素瘤或其他恶性肿瘤或病变，以及在皮肤以外的身体的其它组织和器官中的转移病灶。皮肤细胞增殖性障碍可以包括皮肤的增生、化生和异型增生。
“卵巢细胞增殖性障碍”是一种涉及卵巢细胞的细胞增殖性障碍。卵巢细胞增殖性障碍可以包括影响卵巢细胞的所有形式的细胞增殖性障碍。卵巢细胞增殖性障碍可以包括卵巢初癌或癌前状态、卵巢良性肿瘤或病变、卵巢癌、卵巢恶性肿瘤或病变，以及在卵巢以外的身体的其它组织和器官中的转移病灶。卵巢细胞增殖性障碍可以包括卵巢的增生、化生和异型增生。
“乳房细胞增殖性障碍”是一种涉及乳房细胞的细胞增殖性障碍。乳房细胞增殖性障碍可以包括影响乳腺细胞的所有形式的细胞增殖性障碍。乳房细胞增殖性障碍可以包括乳腺癌、乳腺初癌或癌前状态、乳房良性肿瘤或病变、乳腺恶性增生或病变，以及在乳房以外的身体的其它组织和器官中的转移病灶。乳腺细胞增殖性障碍可以包括乳腺的增生、化生和异型增生。
乳房细胞增殖性障碍可以是乳房的一种癌前状态。本发明的组合物可用于治疗的乳房的癌前状态。乳房的癌前状态可以包括非典型乳腺增生、导管原位癌（DCIS）、导管内癌、小叶原位癌（LCIS）、小叶瘤、乳房的0阶段或0级增长或病变（例如0阶段或0级别乳腺癌，或原位癌）。乳房的癌前状态可根据被美国癌症联合委员会（AJCC）认可的TNM分期表来分期，其中原发肿瘤（T）被指定为T0或Tis期；区域淋巴结（N）被指定为N0期；以及远处转移（M）被指定为M0期。
乳房细胞增殖性障碍可以是乳腺癌。一方面，本发明的组合物可用于治疗乳腺癌，或用于识别用于这样的目的的合适的候选人。乳腺癌可包括各种形式的乳腺癌。乳腺癌包括各种形式的乳房癌症。乳腺癌可以包括原发性乳腺上皮癌。乳腺癌可以包括其中乳房被其他肿瘤如淋巴瘤、肉瘤或黑色素牵涉的乳房癌。乳腺癌可以包括乳房的癌、乳房导管癌、乳房小叶癌，乳房未分化癌、乳腺叶状囊肉瘤、乳房血管肉瘤和原发性乳腺淋巴瘤癌。乳腺癌可以包括I期、II期、IIIA期、IIIB期、IIIC期和IV期乳腺癌。乳房导管癌可以包括侵入性癌、带有主要的导管内成分的原位侵入性导管癌、炎性乳腺癌，以及具有选自粉刺、粘液（胶体）、骨髓、淋巴细胞浸润骨髓、乳头状、硬癌、管状的组织学类型的乳房导管癌。乳房小叶癌包括带有主要的原位成分的侵入性小叶癌、侵入性小叶癌和浸润性小叶 癌。乳腺癌可以包括派杰氏病（Paget’s disease）、导管内癌合并派杰氏病和侵入性导管癌合并派杰氏病。乳腺癌可以包括具有组织学和超微结构的异质性（例如，混合细胞型）的乳腺肿瘤。
本发明中的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可用于治疗乳腺癌，或用于识别用于这样的目的的候选人。要治疗的乳腺癌可以包括家族性乳腺癌。要治疗的乳腺癌可以包括散发性乳腺癌。要治疗的乳腺癌可能会出现于男性受试者。要治疗的乳腺癌可能会出现于女性受试者。要治疗的乳腺癌可能会出现于绝经前的女性受试者或绝经后的女性受试者。要治疗的乳腺癌可能出现于年龄等于或大于30岁的受试者，或小于30岁的受试者。要治疗的乳腺癌可能出现于年龄等于或大于50岁的受试者，或小于50岁的受试者。要治疗的乳腺癌可能出现于年龄等于或大于70岁的受试者，或小于70岁的受试者。
可将要治疗的乳腺癌分类，以识别BRCA1，BRCA2或p53的家族性突变或自发性突变。可将要治疗的乳腺癌分类为具有HER2/neu基因扩增的、HER2/neu过度表达的或具有低、中、高水平的HER2/neu表达的。可将要治疗的乳腺癌根据选自雌激素受体（ER），孕酮受体（PR），人表皮生长因子受体-2、Ki-67、CA15-3、CA27-29和c-Met的标记物来分类。可将要治疗的乳腺癌分类为未知ER的、富含ER的或缺乏ER的乳腺癌。可将要治疗的乳腺癌分类为ER阴性或ER阳性的乳腺癌。乳腺癌的ER分类可以通过任何具有重复性的方法来施行。乳腺癌的ER分类可以按Onkologie27:175-179(2004)中的规定来施行。可将要治疗的乳腺癌分类为未知PR的、富含PR的或缺乏PR的乳腺癌。可将要治疗的乳腺癌分型为PR阴性或PR阳性的乳腺癌。可将要治疗的乳腺癌分型为受体阳性或受体阴性的乳腺癌。可将要治疗的乳腺癌根据CA15-3或CA27-29或两者的升高的血液水平来分类。
要治疗的乳腺癌可以包括乳房的局部肿瘤。要治疗的乳腺癌可包括与阴性的前哨淋巴结(SLN)活检相关的乳房肿瘤。要治疗的乳腺癌可包括与阳性的前哨淋巴结(SLN)活检相关的乳房肿瘤。要治疗的乳腺癌可包括与一个或多个阳性的腋淋巴结相关的乳房肿瘤，其中腋窝淋巴结已经被采用任何适用的方法来分期。要治疗的乳腺癌可以包括已被分类为有淋巴结阴性的状态（例如，淋巴结阴性）或淋巴结阳性的状态（例如，淋巴结阳性）的乳房肿瘤。要治疗的乳腺癌可以包括 已转移到身体其他位置的乳房肿瘤。要治疗的乳腺癌可以包括已转移到选自骨、肺、肝或脑的位置的乳房肿瘤。可将要治疗的乳腺癌根据选自转移的、局部的、区域的、局部区域的、局部晚期的、远处的、多中心的、双侧的、同侧的、对侧的、初诊的、复发的、不宜动手术的特性的进行分类。
本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可施用于相对于大多数人有上升的患乳腺癌风险的受试者，以治疗或预防乳房细胞增殖性障碍，或治疗或预防乳腺癌，或者用来识别用于这样的目的的适合的候选人。相对于大多数人有上升的患乳腺癌风险的受试者是有乳腺癌家族史或个人史的女性受试者。相对于大多数人有上升的患乳腺癌风险的受试者有BRCA1或BRCA2或两者兼而有之的生殖细胞系或自发性突变的女性受试者。相对于大多数人有上升的患乳腺癌风险的受试者有乳腺癌的家族史和BRCA1或BRCA2或两者兼而有之的生殖细胞系或自发性突变的女性受试者。相对于大多数人有上升的患乳腺癌风险的受试者是大于30岁、大于40岁、大于50岁、大于60岁、大于70岁、大于80岁或大于90岁的女性受试者。相对于大多数人有上升的患乳腺癌风险的受试者是患有非典型乳腺增生、原位导管癌（DCIS）、导管内癌、小叶型原位癌(LCIS)、小叶瘤或乳房的0阶段生长或病变（例如，0阶段或0级乳腺癌或原位癌）。
要治疗的乳腺癌可以根据Scarff-Bloom-Richardson分级系统进行组织学分级，其中乳腺肿瘤已经被指定为有丝分裂分数为1、2或3；核多型性分数为1、2或3；小管形成分数为1、2或3；以及Scarff-Bloom-Richardson总分为3和9之间。要治疗的乳腺癌可以根据乳腺癌治疗国际共识专家组指定肿瘤级别，所述级别选自1级、1-2级、2级、2-3级或3级。
要治疗的癌症可以根据美国癌症联合委员会(AJCC)TNM分期系统进行分期，肿瘤(T)已被指定为TX、T1、T1mic、T1a、T1b、T1c、T2、T3、T4、T4a、T4b、T4c或T4d期；区域淋巴结(N)已被指定为NX、N0、N1、N2、N2a、N2b、N3、N3a、N3b或N3c期；远处转移(M)可以被指定为MX、M0或M1期。要治疗的癌症可以根据美国癌症联合委员会(AJCC)分期为I期、IIA期、IIB期、IIIA期、IIIB期、IIIC期或IV期。要治疗的癌症可以根据AJCC分级分为GX级（例如，等级无法进行评估）、1级、2级、3级或4级。要治疗的癌症可以根据AJCC病理分类(PN)进行分期，其中包括PNX、PN0、PN0(I-)、PN0(1+)、PN0(mol-)、 PN0(mol+)、PN1、PN1(mi)、PN1a、PN1b、PN1c、PN2、pN2a、pN2b、PN3、pN3a、pN3b或pN3c。
要治疗的癌症可以包括已经被确定为小于或等于约2厘米直径的肿瘤。待治疗的癌症可以包括已被确定为约2至约5厘米直径的肿瘤。待治疗的癌症可以包括已经被确定为大于或等于大约3厘米直径的肿瘤。待治疗的癌症可以包括已被确定为大于5厘米直径的肿瘤。待治疗的癌症可以根据微观形貌分类为良好分化的、中等分化的、不良分化的或未分化的。待治疗的癌症可以以被处理可以根据有丝分裂计数（例如，细胞分裂量）或细胞核的多型性（例如，细胞的改变）来分类。待治疗的癌症可以根据微观形貌分类为与坏死面积（例如，正在死亡或退化的细胞的面积）相关。待治疗的癌症可以分类为具有异常核型、具有异常的染色体数目或具有一个或多个外观异常的染色体。待治疗的癌症可分类为非整倍体、三倍体、四倍体或具有改变的倍性。待治疗的癌症可以分类为具有染色体易位，或整个染色体的缺失或重复，或一部分染色体删除、复制或扩增的区域。待治疗的癌症可以通过DNA细胞分析术、流式细胞分析术、图像细胞分析术来评价。待治疗的癌症可以分类为在细胞分裂的合成期（例如在细胞分裂的S期）具有10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%，或90%的细胞。待治疗的癌症可以分类成具有低的S期细胞比率或高的S期细胞比率。
如本文所述的“正常细胞”是不能被归类为“细胞增殖性障碍”的一部分的细胞。正常细胞缺乏可能会导致不必要的病症或疾病的发展的不受管制的生长或不正常的生长，或缺乏此两者。优选地，正常细胞具有正常运行的细胞周期检查点控制机制。
如本文所述的“接触细胞”是指其中物质的化合物或其它组合物与细胞直接接触或者足够近以诱导所期望的细胞中的生物效应的状态。
本文所使用的“候选化合物”是指本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物，所述本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物已经或将被在一个或多个体外或体内生物测试中进行检测，以确定该化合物是否在细胞、组织、系统、动物或人类中可能引起研究者或临床医生所寻求的所需的生物学或医学反应。候选化合物是指本发明中的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物。所述生物学或医学反应可以是癌症的治疗。所述生物学或医学反应 可以是细胞增殖性障碍的治疗或预防。生物学反应或效果还可以包括发生在体外或在动物模型中的细胞增殖或生长的变化，以及在体外可观察到的其他生物学变化。体外或体内生物测试可以包括但不限于酶的活性测试、电泳迁移率变动分析测试、报告基因测试、体外细胞存活率测试和本文所描述的测试。
本文所使用的“单药治疗”是指向需要的受试者给予单一的活性的或治疗的化合物的给药。优选地，单药治疗包括治疗上有效剂量的活性化合物给药。例如，用本发明中的一种化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、类似物或衍生物对需要治疗癌症的受试者进行癌症单药治疗。单药治疗可与联合治疗相比，所述联合治疗为多个活性化合物的组合联合给药，优选在组合中每个成分均以治疗有效剂量存在。应用本发明中的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物进行的单药治疗在诱导所需的生物效应方面可能比联合治疗更为有效。
本文所使用的“治疗中”或“治疗”描述了为对抗疾病、病症或紊乱的目的对患者的管理和护理，并包括向其给药本发明的化合物或其药学上可接受盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物，以减轻疾病、病症或紊乱的症状或并发症，或消除疾病、病症或紊乱。术语“治疗”还可以包括体外的细胞或动物模型的治疗。
本发明中的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物，也可以或可能用于预防有关的疾病、病症或紊乱，或用于识别用于这样的目的的合适的候选人。本文使用的“预防中”或“预防”描述了减少或消除这样的疾病、病症或紊乱的症状或并发症的发作。
本文所使用的术语“缓解”是为了描述一个过程，经过该过程一种疾病的体征或症状的严重程度降低。重要的是，所述体征或症状可缓解而没有消除。本发明的药物组合物的给药可以或可能导致疾病的症状或体征的消除，然而，消除不是必需的。有效剂量应该被期望能减轻症状或体征的严重程度。例如，诸如癌症的疾病，它可以发生在多个位置，如果在多个位置中的至少一个位置中的癌症的严重程度减轻了，那么它的体征或症状就缓解了。
本文所使用的术语“严重程度”是为了描述癌症从癌前或良性状态转化成恶性状态的潜力。作为另选或附加，严重程度用于描述癌症的阶段，例如，根据TNM分期系统（被国际抗癌联盟（UICC）和美国癌症联合委员会（AJCC）所接 受）或其他本领域认可的方法。癌症的阶段是指癌症的基于各种因素的范围或严重程度，所述因素例如为原发肿瘤的位置、肿瘤大小、肿瘤数目、淋巴结转移（进入淋巴结的癌症的扩散）。作为另选或附加，严重程度是通过本领域公认的方法来描述肿瘤的分级（见美国国家癌症研究所，www.cancer.gov）。肿瘤分级是用来依据显微镜下看到的癌细胞的异常程度以及该肿瘤可能的生长和扩散的快速程度来为癌细胞分类的体系。确定肿瘤级别时会考虑许多因素，包括细胞的结构和增长方式。用于确定肿瘤级别的具体因素随癌症类型的不同而不同。严重程度还描述了组织学分级，也称为分化，这是指相同的组织类型中有多少类似于正常细胞的肿瘤细胞（见美国国家癌症研究所，www.cancer.gov）。此外，严重程度描述了细胞核级别，所述细胞核级别是指肿瘤细胞中的细胞核的大小和形状，以及正在分裂的肿瘤细胞的百分比（参见，美国国家癌症研究所，www.cancer.gov）。
严重程度还可以描述肿瘤已经分泌生长因子、降解细胞外基质、变为血管化、失去与并列组织的附着力或转移的程度。此外，严重程度可以形容原发肿瘤已经转移到的位置的数量。最后，严重程度可以包括不同类型和位置的肿瘤的治疗的难度。例如，不能手术的肿瘤、有更多通道进入到全身多个系统的那些肿瘤（血液学和免疫学肿瘤）和那些最能抵抗传统治疗方法的肿瘤被认为是最严重的。在这些情况下，延长受试者的寿命和/或减轻疼痛、减少癌变细胞的比例或将细胞限制在一个系统内，以及改善癌症分期/肿瘤分级/组织学分级/细胞核级别被认为是缓解癌症的症状或体征。
本文所使用的术语“症状”被定义为疾病、病、受伤或身体某部分不正常的表现。症状能被经历所述症状的人感觉或注意到，但可能不容易被其他人注意到。其他人被定义为非卫生保健专业人员。
本文所使用的术语“体征”也被定义为身体某部分不正常的表现。但体征可以由医生、护士或其他卫生保健人员发现。
癌症是可能会导致几乎任何体征或症状的一组疾病。症状和体征将取决于癌症的位置、癌症的大小以及其影响附近器官或组织的程度。如果癌细胞扩散（转移），那么症状可能会出现在身体的不同部位。
随着癌症的生长，其开始压迫附近的器官、血管和神经。这种压力导致癌症的一些症状和体征。如果癌症是在一个关键的区域，如脑的某些部位，即使是最小的肿瘤也能导致早期症状。
但有时癌症起始于除非癌症已经变得相当大，否则不会引起任何症状的地方。例如，胰腺的癌症通常不会生长到大得足以从身体的外部感觉到。有些胰腺癌不引起症状，直到它们开始在附近的神经周围生长（这会导致背痛）。其他的在胆管周围生长，这会阻止胆汁的流动，因此导致皮肤泛黄，称为黄疸。到胰腺癌导致这些体征或症状的时候，通常已经到了晚期。
癌症也可能会造成如发烧、疲劳或体重减轻的症状。这可能是因为癌症细胞利用了身体的能量供应或释放了改变人体新陈代谢的物质。或者，癌症可能会导致免疫系统以产生这些症状的方式反应。
有时，癌症细胞释放物质到血液中，引起通常不被认为是癌症导致的症状。例如，一些胰腺癌可以释放引起血液凝块在腿部静脉发展的物质。有些肺癌会产生影响血钙水平的激素样物质，从而影响神经和肌肉并导致虚弱和头晕。
癌症存在几个当癌症细胞的各种亚型存在时会产生的症状或体征。大多数癌症患者会在某一段时间伴随着疾病而体重减轻。不明原因的（非故意的）减重10磅或更多可能是癌症的第一个体征，特别是胰腺癌、胃癌、食道癌或肺癌。
发烧常常伴随着癌症，但更经常出现在疾病晚期。几乎所有的癌症患者会在某一段时间内会发烧，特别是如果癌症或其治疗影响免疫系统，从而使得身体更难以对抗感染。在很少的情况下，发烧可能是癌症的早期体征，如白血病或淋巴瘤。
随着癌症的进展，疲劳成为一个重要的症状。然而在诸如白血病的癌症中，或者如果癌症正引起一个持续的失血、如在某些结肠或胃癌中，那么它可能发生于癌症早期。
疼痛可能是某些癌症如骨肿瘤或睾丸癌的早期症状。但最常见的是，疼痛是癌症晚期的一种症状。
伴随皮肤癌（见下一节），一些内部的癌症可引起可见的皮肤体征。这些变化包括皮肤看起来较暗（色素沉着）、黄色（黄疸）或红色（红斑）、瘙痒或过度毛发生长。
作为另选或附加，肿瘤亚型存在特定的体征或症状。排便习惯或膀胱功能的变化可能表明癌症。长期便秘、腹泻或大便的大小的变化可能是结肠癌的一个体征。排尿疼痛、尿中带血或膀胱功能的变化（如更加频繁或更加不频繁的排尿），可能与膀胱或前列腺癌有关。
皮肤状况的变化或新的皮肤状况的出现可能预示癌症。皮肤癌可能会流血，看起来像不愈合的疮。持久的的嘴疮可能是口腔癌，尤其是在吸烟、咀嚼烟草或经常喝酒的患者中。阴茎或阴道上的溃疡可能是感染或早期癌症的体征。
不寻常的出血或排泄可能预示癌症。不寻常的出血可以发生在癌症早期或晚期。唾液（痰）带血可能是肺癌的一个体征。便血（或暗或黑便）可能是结肠癌或直肠癌的一个体征。子宫颈或子宫内膜（子宫的内层）的癌症可以引起阴道出血。尿中带血可能是膀胱或肾脏癌的体征。来自乳头的血性溢液可能是乳腺癌的一个标志。
乳房或其他身体部位增厚或有肿块可能表明癌症的存在。许多癌症可以通过主要是在乳房、睾丸、淋巴结（腺）、身体的软组织处的皮肤察觉。肿块或增厚可能是癌症的早期或晚期体征。任何肿块或增厚可以是癌症的征兆，特别是新形成的或已经长到一定的大小。
消化不良或吞咽困难可能预示癌症。尽管这些症状通常有其他原因，但是消化不良或吞咽困难问题可能是食道癌、胃癌、或咽（喉）癌的体征。
疣或痣的近期变化可能预示癌症。任何疣、痣或雀斑的颜色、大小或形状的变化或失去其明确的边界表明癌症的潜在发展。例如，皮肤的病变可能是黑色素瘤。
持续咳嗽或声音嘶哑可能预示癌症。咳嗽不消失可能是肺癌的一个标志。声音嘶哑可能是喉部（喉头）或甲状腺癌的一个体征。
虽然上面列出的症状和体征在癌症中比较常见，但是还有许多其它不常见的症状和体征这里没有列出。
所述癌症治疗可能或可以导致肿瘤尺寸变小。肿瘤尺寸变小也可以被称为“肿瘤衰退”。优选地，在治疗后，相对于治疗前肿瘤尺寸将减小5%或以上；更优选地，肿瘤尺寸减小10%或以上；更优选地，减小20%或以上；更优选地，减小30%或以上；更优选的是，减小40%或以上；更优选的是，减小50%或以上；最优选的，减小大于75%或以上。肿瘤的大小可通过任何可再现的测量手段测量。肿瘤的尺寸可通过其直径测量。
癌症治疗可能或可以导致肿瘤体积减小。优选地，在治疗后，相对于治疗之前肿瘤体积将减少5%或更大；更优选的是，肿瘤体积减小10%或以上；更优选地，减少20%或以上；更优选地，减少30%或以上；更优选的是，减少40%或以 上；更优选的是，减少50%或以上；最优选的，大于75%或更大的减少。肿瘤的体积可通过任何可再现的测量手段测量。
癌症治疗可能或可以导致肿瘤数目减少。优选的是经过治疗，相对于治疗之前肿瘤数目将减少5%或更多；更优选地是肿瘤数目减少10%或更多；更优选地，减少20%或更多；更优选地，减少30%或更多；更优选地，减少40%或更多；更优选的是，减少50%或更多；最优选的是，减少大于75%。肿瘤数目可通过任何可再现的测量手段测量。肿瘤的数量可以通过对肉眼可见的或特定的放大倍率下的肿瘤进行计数来测量。优选地，所述特定的放大倍率为2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或50倍。
癌症治疗可能或可以导致在远离原发肿瘤部位的其他组织或器官的转移灶的数量减少。优选的是，经过治疗，相对于治疗之前转移灶的数目将减少5%或更多；更优选地，转移灶的数量减少了10%或更多；更优选地，减少了20%或更多；更优选的是，减少了30%或更多；更优选的是，减少了40%或更多；更优选的是，减少了50%或更多；最优选的是，减少大于75%。转移灶的数目可通过任何可再现的测量手段测量。转移灶的数目可通过对肉眼可见的或特定的放大倍率下的转移灶进行计数来测量。优选地，所述指定的放大倍率为2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或50倍。
癌症治疗可能或可以导致接受治疗的受试者群体同仅接受载体的群体相比，平均生存期增加。优选地，平均生存期将增加超过30天；更优选超过60天；更优选超过90天；最优选超过120天。群体的平均生存期的增加可由任何可再现的测量手段测量。群体的平均生存期的增加可例如通过计算用活性化合物开始治疗后的群体的平均存活时间来测量。群体的平均生存期的增加也可例如通过计算采用活性化合物进行第一轮治疗结束后的群体的平均存活时间来测量。
癌症治疗可能或可以导致接受治疗的受试者群体同未接受治疗的受试者群体相比，平均生存期增加。优选地，平均生存期将增加超过30天；更优选超过60天；更优选超过90天；最优选超过120天。群体的平均生存期的增加可由任何可再现的测量手段测量。群体的平均生存期的增加可例如通过计算群体用活性化合物开始治疗后的平均存活时间来测量。群体的平均生存期的增加也可例如通过计算群体采用活性化合物进行第一轮治疗结束后的平均存活时间来测量。
癌症治疗可能或可以导致接受治疗的受试者群体同采用非本发明的化合物 或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、类似物或衍生物的药物进行单药治疗的受试者群体相比，平均生存期增加。优选地，平均生存期将增加将超过30天；更优选地，增加将超过60天；更优选地，增加将超过90天；最优选地，增加将超过120天。群体的平均生存期的增加可由任何可再现的测量手段测量。群体的平均生存期的增加可例如通过计算群体用活性化合物开始治疗后的平均存活时间来测量。群体的平均生存期的增加也可例如通过计算群体采用活性化合物进行第一轮治疗结束后的平均存活时间来测量。
癌症治疗可能或可以导致接受治疗的受试者群体同仅接收载体的受试者群体相比，死亡率降低。癌症治疗可能或可以导致治疗的受试者群体受试者同未接受治疗的受试者群体相比，死亡率降低。癌症治疗可能或可以导致接受治疗的受试者群体同采用非本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、类似物或衍生物的药物进行单药治疗的受试者群体相比，死亡率降低。优选地，死亡率减少将超过2%；更优选地，减少将超过5%；更优选地，减少将超过10%；最优选地，减少将超过25%。接受所述治疗的受试者群体死亡率的减少可由任何可再现的测量手段测量。群体死亡率的减少可例如通过计算用活性化合物开始治疗后每单位时间与疾病相关的平均死亡人数来测量。群体死亡率的减少也可以例如通过计算用活性化合物完成第一轮治疗后每单位时间与疾病相关的平均死亡人数来测量。
癌症治疗可能或可以导致肿瘤的生长速度降低。优选地，在治疗后，相对于治疗之前肿瘤的生长速度将降低至少5%；更优选地，肿瘤的生长速度将降低至少10%；更优选地，将降低至少20%；更优选地，降低至少30%；更优选地，将降低至少40%；更优选地，将降低至少50%；更优选地，将降低至少50%；更优选地，将降低至少75%。测量肿瘤的生长速率可由任何可再现的测量手段测量。根据每单位时间肿瘤直径的变化，可以测量肿瘤的生长速度。
癌症治疗可能或可以导致肿瘤再生减少。优选地，在治疗后，肿瘤再生将少于5%；更优选地，肿瘤再生将少于10%；更优选地，肿瘤再生将少于20%；更优选地，肿瘤再生将少于30%；更优选地，肿瘤再生将少于40%；更优选地，肿瘤再生将少于50%；甚至更优选地，肿瘤再生将少于50%；最优选地，肿瘤再生将少于75%。肿瘤生长可由任何可再现的测量手段测量。肿瘤再生可以通过例如测量经过治疗后先前肿瘤收缩后的肿瘤直径的增加来测量。肿瘤治疗结束后肿瘤 复发失败表明肿瘤再生的减少。
对细胞增殖性障碍的治疗或预防可能或可以导致细胞增殖率降低。优选地，在治疗后，细胞增殖率将降低至少5%；更优选地，将降低至少10%；更优选地，将降低至少20%；更优选地，将降低至少30%；更优选地，将降低至少40%；更优选地，将降低至少50%；甚至更优选地，将降低至少50%；最优选地，将降低至少75%。细胞增殖率可由任何可再现的测量手段测量。细胞增殖率可通过例如测量每单位时间组织样本中分裂的细胞数量来测量。
对细胞增殖性障碍的治疗或预防可能或可以导致增殖细胞比例减少。优选地，在治疗后，增殖细胞比例将减少至少5%；更优选地，将减少至少10%；更优选地，将减少至少20%；更优选地，将减少至少30%；更优选地，将减少至少40%；更优选地，将减少至少50%；甚至更优选地，将减少至少50%；最优选地，将减少至少75%。增殖细胞比例可由任何可再现的测量手段测量。优选地，增殖细胞比例通过例如量化组织样本中分裂细胞数目与非分裂细胞的数量相对量来测量。增殖细胞比例可以等同于有丝分裂指数。
对细胞增殖性障碍的治疗或预防可能或可以导致细胞增殖区域尺寸减小。优选地，在治疗后，相对于治疗之前细胞增殖区域的尺寸将减小至少5%；更优选地，将减小至少10%；更优选地，将减小至少20%；更优选地，将减小至少30%；更优选地，将减小至少40%；更优选地，将减小至少50%；甚至更优选地，将减小至少50%；更优选地，将减小至少75%。细胞增殖区域的尺寸可由任何可再现的测量手段测量。细胞增殖区域的尺寸可以以细胞增殖区域的直径或宽度来测量。
对细胞增殖性障碍的治疗或预防可能或可以导致具有异常外观或形态的细胞数目或比例减少。优选地，在治疗后，相对于治疗之前具有异常形态的细胞数量将减少至少5%；更优选地，将被减少至少10%；更优选地，将减少至少20%；更优选地，将减少至少30%；更优选地，将减少至少40%；更优选地，将减少至少50%；甚至更优选的是，将减少至少50%；以及最优选地，将减少至少75%。细胞的异常外观或形态可由任何可再现的测量手段测量。异常的细胞形态可以通过例如使用倒置的组织培养显微镜来显微镜测量。细胞形态异常可以表现为核多型性的形式。
本文所使用的术语“选择性地”是指在一个群体中比在另一个群体中倾向 于发生的频率更高。比较的群体可以是细胞群。本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可能或可以选择性地作用于癌症或癌症前期的细胞，但不包括正常细胞。本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可能或可以选择性地作用来调节一个分子靶标（例如，靶蛋白甲基转移酶），但不显著调节另一种分子靶标（例如，非靶蛋白甲基转移酶）。本发明还提供了一种选择性地抑制酶（如蛋白甲基转移酶）活性的方法。优选地，如果事件发生于群体A的频率大于发生于群体B的2倍，那么相对于群体B，事件选择性地发生于群体A。如果相对于群体B五倍以上更频繁地发生于群体A，那么事件是选择性地发生。如果相对于群体B十倍以上更频繁地发生于群体A，那么事件是选择性地发生；更优选地，五十倍以上；甚至更优选地，一百倍以上；最优选地，相对于群体B一千倍以上更频繁地发生于群体A。例如，如果与正常细胞相比细胞凋亡两倍以上更频繁地发生于肿瘤细胞，那么可以说细胞凋亡选择性地发生在癌细胞中。
本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可能或可以调节分子靶标（例如，靶蛋白甲基转移酶）的活性。调节是指刺激或抑制分子靶标的活性。优选地，如果刺激或抑制了相对于只是缺少所述化合物存在的相同条件下的分子靶标的活性的至少两倍的分子靶标的活性，那么本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物调节了分子靶标的活性。更优选地，如果刺激或抑制了相对于缺少所述化合物存在的相同条件下的分子靶标的活性的至少5倍、至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍的分子靶标的活性，那么本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物调节了分子靶点的活性。分子靶标的活性可由任何可再现的测量手段测量。分子靶标的活性可在体外或体内测定。例如，分子靶标的活性可以通过酶活性测定方法或DNA结合分析法在体外测定，或者分子靶标的活性可通过测定报告基因的表达在体内测定。
如果所述化合物的加入没有刺激或抑制相对于只是缺少所述化合物存在的相同条件下的分子靶标活性的10％以上的分子靶标活性，那么本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物没有显著调节分子靶标的活性。
本文所使用的术语“同工酶选择性的”是指相比同一种酶的第二种异构体 优先抑制或刺激所述酶的第一种异构体（例如，相比蛋白甲基转移酶的β-异构体优先抑制或刺激其α-异构体）。优选地，本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物表明所需剂量上最小值为四倍差，优选十倍的差，更优选为五十倍差来实现生物效应。优选地，本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物表明了整个抑制范围的这种差别，并且所述差别体现在对于感兴趣的分子靶标的IC50值，即50％抑制。
对细胞或有需要的受试者给药本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可能或可以导致所感兴趣的蛋白甲基转移酶的活性的调节（即，刺激或抑制）。
本发明提供评价本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物，代谢物、多晶型物或溶剂化物的生物活性的方法，或识别作为EZH2的Y641突变体的抑制剂的测试化合物的方法。在一个实施例中，所述方法包括使孤立的EZH2基因Y641突变体同组蛋白底物、甲基供体（如S-腺苷甲硫氨酸（SAM））和测试化合物结合，其中所述组蛋白底物包括选自非甲基化、单甲基化的H3-K27、二甲基化的H3-K27和它们的任意组合的H3-K27形式；进行试验以检测组蛋白底物中的H3-K27的甲基化，从而当在测试化合物存在下的H3-K27的甲基化少于在其不存在下的H3-K27的甲基化时识别测试化合物作为EZH2基因Y641突变体的抑制剂。可以选择用于检测H3-K27的甲基化的试验来测量甲基化的速率、甲基化的程度或甲基化的速率和程度。
EZH2基因Y641突变体以PRC2复合物或其功能等同物形式被分离。本文所使用的术语“分离”是指基本上与其它成分分离，带有所述其他成分的复合物由于存在于自然界中而被发现。化合物可以被分离而不必被纯化。在一个实施例中，EZH2基因突变体作为EZH2基因Y641突变体同EED和SUZ12的复合物被分离。在另一个实施例中，EZH2基因突变体作为EZH2基因Y641突变体同EED、SUZ12和RbAp48的复合物被分离。在适当的条件下，PRC2复合物或其功能等同物具有组蛋白H3-K27的甲基转移酶活性。在一个实施例中，该复合物由重组表达成分多肽组成，例如，EZH2、EED、SUZ12，含或不含RBAP48。
分离的EZH2基因Y641突变体与组蛋白底物相结合。组蛋白底物包括任何合适来源的可以作为EZH2底物的组蛋白多肽或其片段。在一个实施例中，组蛋白底物包括从受试者分离的组蛋白。可以使用任何合适的方法从受试者的细胞分 离该组蛋白；所述方法为本领域普通技术人员所公知，不需要在此进一步指定（参阅如Fang et al.(2004)Methods Enzymol377:213-26）。根据下面的实施例，在一个实施例中，组蛋白底物为核小体。根据下面的实施例，在一个实施例中，组蛋白底物为禽鸟类（鸡）红细胞的核小体。
所提供的组蛋白底物可能包括组蛋白修饰状态的掺合物，包括通过用H3-K27甲基化特异性抗体的免疫印迹法来判断的H3-K27甲基化的各种状态。在一个实施例中，所提供的组蛋白底物是纯化的全长组蛋白H3。这种纯化的全长组蛋白H3可提供为H3-K27的甲基化状态的均匀的制剂，或提供为H3-K27的甲基化的各种状态的混合物。涉及H3-K27甲基化状态的孤立的组蛋白H3的均匀制剂可以部分地通过经过装有适合的H3-K27甲基化状态的特异性抗体的免疫亲和性柱来制备，或者通过使用包覆有适合的H3-K27甲基化状态的特异性抗体的磁珠的免疫沉淀反应来制备。作为另选或附加，可以H3-K27的甲基化状态可以表征为施行该试验的一部分。例如，起始原料组蛋白底物可能被表征为含有50%％未甲基化的H3-K27、40%单甲基化的H3-K27、10%二甲基化的H3-K27和0%三甲基化的H3-K27。
在一个实施例中，组蛋白底物包括肽库或含有一个或多个同组蛋白H3相关的氨基酸序列的合适的肽，特别是包括包含H3-K27的序列。例如，在一个实施例中，组蛋白底物是肽片段，该片段对应组蛋白H3的氨基酸残基21-44。肽库或肽可以通过根据本领域公知的技术的肽合成法来制备，并且任选被修饰以掺入任何所需的与H3-K27对应的赖氨酸的甲基化程度。如下面的实施例中所描述的，这些肽也可以被修饰以掺入适用于执行下游检测的标记物（如生物素）。在一个实施例中，该标记物被附加到肽的氨基(N)末端。在一个实施例中，该标记物被附加到肽的羧基(C)末端。
可以通过使用任何合适的方法来检测H3-K27的甲基化。在一个实施例中，甲基供体源包括用可检测的标记物标记的甲基基团。在一个实施例中，可检测的标记物为同位素标记物，例如氚。其他类型的标签可以包括例如荧光标记物。
可以通过使用任何合适的方法检测三甲基化H3-K27的形成。例如，对三甲基化H3-K27的形成的检测可以通过使用用来检测掺入的标记的甲基基团的测试方法来完成，诸如上述，任选与色谱或其他方法结合来按大小分离标记产品，例如聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、毛细管电泳(CE)或高压液相色谱(HPLC)。作为另 选或附加，可以通过使用对三甲基化H3-K27具有特异性的抗体来检测三甲基化H3-K27的形成。
可以通过使用任何合适的方法来检测单甲基化的H3-K27向二甲基化的H3-K27的转化。在一个实施例中，使用单甲基化H3-K27和二甲基化的H3-K27的特异性抗体来测定所述转化。例如，通过使用合适的单甲基化H3-K27和二甲基化H3-K27的特异性抗体可以确定单甲基化H3-K27和二甲基化H3-K27的起始量或浓度。结合酶、底物、甲基供体和测试化合物之后，通过使用合适的单甲基化H3-K27和二甲基化H3-K27的特异性抗体可以确定由此产生的单甲基化H3-K27和二甲基化H3-K27的量或浓度。然后可以对起始的和由此产生的单甲基化H3-K27和二甲基化H3-K27的量或浓度进行比较。作为另选或附加，起始的以及由此产生的单甲基化H3-K27和二甲基化H3-K27的量或浓度可以同作为阴性对照的相应的浓度量相比较。阴性对照反应中没有测试剂检测，可以平行地运行或作为历史对照。这种对照反应的结果可以任选从相应的之前的反应结果中减去或与上述所做的对比结合。
因为在相同的测试中二甲基化形式的H3-K27可以进一步甲基化，所以单甲基化H3-K27的量或浓度的降低可能不会出现直接对应于二甲基化H3-K27的增加。然而在这种情况下，单甲基化H3-K27的量或浓度的减少本身可能会被认为反映了单甲基化H3-K27向二甲基化H3-K27的转化。
可以通过使用任何合适的方法来检测二甲基化的H3-K27向三甲基化的H3-K27的转化。在一个实施例中，使用二甲基化H3-K27和三甲基化的H3-K27的特异性抗体来测定所述转化。例如，通过使用合适的二甲基化H3-K27和三甲基化H3-K27的特异性抗体可以确定二甲基化H3-K27和三甲基化H3-K27的起始量或浓度。结合酶、底物、测试化合物之后，通过使用合适的二甲基化H3-K27和三甲基化H3-K27的特异性抗体可以确定由此产生的二甲基化H3-K27和三甲基化H3-K27的量或浓度。然后可以对起始的和由此产生的二甲基化H3-K27和三甲基化H3-K27的量或浓度进行比较。作为另选或附加，起始的以及由此产生的二甲基化H3-K27和三甲基化H3-K27的量或浓度可以同来自阴性对照的相应的浓度量相比较。阴性对照反应中没有测试剂检测，可以平行运行或作为历史对照。这种对照反应的结果可以任选从相应的之前的反应结果中减去或与上述所做对比结合。
如果测试化合物存在时的H3-K27甲基化少于测试化合物不存在时的H3-K27甲基化，则测试剂被鉴定为EZH2基因Y641突变体的抑制剂。在一个实施例中，当在测试化合物存在下生成的三甲基化H3-K27少于在测试化合物不存在时生成的三甲基化H3-K27时，测试剂被鉴定为EZH2基因Y641突变体的抑制剂。
本发明还提供了一种识别EZH2基因Y641突变体的选择性抑制剂的方法。在一个实施方案中，所述方法包括使孤立的EZH2基因Y641突变体同组蛋白底物、甲基供体（如SAM）和测试化合物结合，其中所述组蛋白底物包括选自单甲基化H3-K27、二甲基化H3-K27和单甲基化H3-K27与二甲基化H3-K27的组合的H3-K27形式，从而形成测试混合物；使孤立的野生型EZH2同组蛋白底物、甲基供体（如SAM）和测试化合物结合，其中所述组蛋白底物包括选自下列形式的H3-K27：单甲基化H3-K27、双甲基化H3-K27以及单甲基化H3-K27和双甲基化H3-K27的组合，从而形成对照混合物；进行测试以检测在每种测试混合物和对照混合物中的组蛋白底物的三甲基化；计算(a)用EZH2的Y641突变体和测试化合物的三甲基化(M+)与(b)用EZH2的Y641突变体而没有测试化合物的三甲基化(M-)的比值；计算(c)用野生型EZH2和测试化合物的三甲基化(WT+)与用(d)野生型EZH2而没有测试化合物的三甲基化(WT-)的比值；对比比值(a)/(b)与(c)/(d)；当比值(a)/(b)小于(c)/(d)时，识别测试化合物作为EZH2的Y641突变体的选择性抑制剂。在一个实施例中，该方法进一步包括针对测试混合物和对照混合物两者或两者之一的情况考虑不含测试化合物的阴性对照。
在一些实验中使用免疫试剂，如抗体和抗原。在某些试验中荧光反应可以用来测量酶的活性。本文使用的“荧光反应”是指由于分子吸收了能量较高的入射光子而导致所述分子再发射光子的过程。用于评估本发明所公开化合物生物活性的具体方法在实施例中描述。
向细胞或需要治疗的受试者给药以本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物，可能或可以导致对细胞内靶标（例如，底物）活性的调节（即，刺激或抑制）。可以用本发明的化合物调节的几种细胞内靶标包括，但不限于蛋白甲基转移酶。
激活是指使物质组合物（例如，蛋白质或核酸）处于适合实现所需的生物功能的状态。能够被激活的物质组合物也有未激活的状态。激活的物质组合物可能具有抑制或刺激的生物功能，或两者兼而有之。
提高是指物质组合物（例如，蛋白质或核酸）的期望的生物活性的增加。通过增加物质组合物的浓度可能会发生这种提高。
本文使用的“细胞周期检查点途径”是指细胞周期检查点调节机制中涉及的生化途径。细胞周期检查点途径可以具有对包括细胞周期检查点的一个或多个功能有刺激或抑制的效果，或两者兼而有之。细胞周期检查点途径由至少两种物质组合物组成，优选的是蛋白质，所述的两种物质都有助于细胞周期检查点的调节机制。通过激活细胞周期检查点途径的一个或多个组成成员，可将细胞周期检查点途径激活。优选地，细胞周期检查点途径是生化信号通路。
本文使用的“细胞周期检查点调节剂”是指可以至少部分作用于细胞周期检查点调节机制的物质组合物。一个细胞周期检查点调节剂可以对包括细胞周期检查点的一个或多个功能有刺激或抑制的效果，或两者兼而有之。细胞周期检查点调节剂可以是蛋白质或不是蛋白质。
对癌症或细胞增殖性障碍的治疗可能或可以导致或者可能导致细胞死亡，优选地，细胞死亡会导致细胞群中至少10%的细胞数减少。更优选地，细胞死亡意味着减少至少20%；更优选地，减少至少30%；更优选地，减少至少40%；更优选地，减少了至少50%；最优选地，减少至少75%。细胞群中的细胞数目可由任何可再现的测量手段测量。在细胞群中的细胞数目可以通过荧光激活细胞分类（FACS）、免疫荧光显微镜和光学显微镜测量。测量细胞死亡的方法如Li et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.100(5):2674-8,2003所示。在一个方面中，细胞死亡以凋亡形式发生。
优选地，有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物对正常细胞没有显著的细胞毒性。如果给药以治疗有效量的化合物在正常细胞中诱导细胞死亡不超过10%，则治疗有效量的所述化合物对正常细胞没有显著的细胞毒性。如果给药以治疗有效量的化合物在正常细胞中诱导细胞死亡不超过10%，则治疗有效量的所述化合物对正常细胞的生存力没有显著影响。在一个方面中，细胞死亡以凋亡形式发生。
细胞与本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物相接触可能或可以选择性地诱导或激活癌细胞中的细胞死亡。向需要治疗的受试者给药以本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物，可能或可以选择性地诱导或激活癌细胞中的细胞死亡。细 胞与本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物相接触可能或可以选择性地诱导一个或多个受细胞增殖性疾病影响的细胞的细胞死亡。优选地，向需要治疗的受试者给药以本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可选择性地诱导一个或多个受细胞增殖性疾病影响的细胞的细胞死亡。
本发明的一个方面涉及一种通过向需要的受试者给药以本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物来治疗或预防癌症（例如可以通过调节EZH2介导的蛋白甲基化影响这一过程）的方法。所述给药以本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物会导致一个或多个下列结果：通过在细胞周期中的一个或多个阶段（例如，G1、G1/S、G2/M）的细胞积累、细胞衰老的诱导或肿瘤细胞分化的促进来预防癌细胞增殖；通过细胞毒性作用促进癌细胞中的细胞死亡、坏死或凋亡，而不造成显著的正常细胞中的细胞死亡，在动物中的抗肿瘤活性的治疗指数至少为2。如本文所使用的，“治疗指数”是最大耐受剂量除以有效剂量。本发明还涉及用于识别治疗或预防癌症的合适的候选人的方法。
对于本文讨论的公知技术或等效技术的详细描述，本领域的普通技术人员可以参考通用参考文本。所述参考文本包括Ausubel et al.,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley and Sons,Inc.(2005);Sambrook et al.,MolecularCloning,A Laboratory Manual(3rd edition),Cold Spring Harbor Press,Cold SpringHarbor,New York(2000);Coligan et al.,Current Protocols in Immunology,JohnWiley & Sons,N.Y.;Enna et al.,Current Protocols in Pharmacology,John Wiley &Sons,N.Y.;Fingl et al.,The Pharmacological Basis of Therapeutics(1975),Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,PA,18th edition(1990)。当然，这些文本在制造或应用本发明的一个方面时可被提及。
如本文所使用的，“联合治疗”或“共同治疗”包括用本发明的化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物，以及至少一种第二剂进行给药，所述第二剂是特定的治疗方案的一部分，所述治疗方案的目的是提供这些治疗剂共同作用所产生的有益效果。所述有益效果包括，但不限于由治疗剂的联合所产生的药代动力学或药效的共同作用。这些治疗剂的联合给药一般是通过确定的周期(通常为分钟、小时、天或者星期，这取决于所选择的组合)进 行的。“联合治疗”可以，但通常不试图包括下述的给药方式，即将两种或更多种这些治疗剂作为单独的单药治疗方案的一部分进行给药而偶然地并且随意地产生了本发明的联合作用。
“联合治疗”试图既包括以顺序方式给药以这些治疗剂，也就是说其中各治疗剂的给药是在不同时间进行的，也包括以基本上同时的方式给药以这些治疗剂或者所述治疗剂中的至少两种。基本上同时的给药可以例如通过向受试者给药以具有固定比例的各治疗剂的单一胶囊或者通过给药以多种各治疗剂的单独胶囊而实现。各治疗剂的顺序或者基本上同时的给药可能会受到任何适当途径的影响，所述途径包括但不限于口服途径、静脉途径、肌内注射途径和通过粘膜组织的直接吸收。治疗剂可以通过相同或不同的途径给药。例如，联合治疗所选择的第一治疗剂可以通过静脉注射进行给药，而联合治疗的另一个治疗剂可以进行口服给药。可选地，例如，所有的治疗剂均可以通过口服进行给药或通过静脉注射进行给药。治疗剂的给药顺序并不是十分关键。
“联合治疗”还包括将上述治疗剂的给药进一步与其它生物活性成分和非药物疗法（如手术或放射治疗）结合。在联合治疗还包括非药物治疗的情况中，所述非药物治疗可以在任何合适的时期进行，只要能够获得来自治疗剂和非药物治疗联合共同作用的有益效果。例如，在一个恰当的例子中，当给予了治疗剂而暂时地停止了非药物治疗，也许是几天或者甚至是几周时，仍然能够获得有益的效果。
本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、类似物或衍生物可以同第二化疗药物联合给药。第二化疗药物（也称为抗肿瘤剂或抗增殖剂）可以是烷基化剂、抗生素、抗代谢药、解毒剂、干扰素、多克隆或单克隆抗体、EGFR抑制剂、HER2抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、激素、有丝分裂抑制剂、MTOR抑制剂、多激酶抑制剂、丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、VEGF/VEGFR抑制剂、紫杉类或紫杉烷类衍生物、芳香酶抑制剂、蒽环类药物、微管靶向药物、拓扑异构酶毒物药物、分子靶向或酶（如激酶或蛋白甲基转移酶）的抑制剂、胞苷类似物药物或在www.cancer.org/docroot/cdg/cdg_0.asp所列的任何化疗剂、抗肿瘤或抗增殖剂。
示例性的烷基化剂包括，但不限于环磷酰胺（Cytoxan；Neosar）、丁酸氮芥（Leukeran）、美法仑（Alkeran）、卡莫司汀（BiCNU）、白消安（Busulfex）、 洛莫司汀（CeeNU）、氮烯咪胺（DTIC-Dome）、奥沙利铂（Eloxatin）、卡莫司汀（Gliadel）、异环磷酰胺（Ifex）、氮芥（Mustargen）、白消安（Myleran）、卡铂（Paraplatin）、顺铂（CDDP；Platinol）、替莫唑胺（Temodar）、噻替哌（Thioplex）、苯达莫司汀（Treanda）或链脲佐菌素(Zanosar)。
示例性抗生素包括，但不限于多柔比星（阿霉素）、多柔比星脂质体（Doxil）、米托蒽醌（诺肖林）、博莱霉素（Blenoxane）、柔红霉素（Cerubidine）、柔红霉素脂质体（DaunoXome）、放线菌素D（Cosmegen）、表柔比星（Ellence）、伊达比星（Idamycin）、普卡霉素（Mithracin）、丝裂霉素（Mutamycin）、喷司他丁（Nipent）或戊柔比星（VALSTAR）。
示例性的抗代谢物包括，但不限于氟尿嘧啶（Adrucil)、卡培他滨（Xeloda）、羟基脲（Hydrea）、巯基嘌呤（Purinethol）、培美曲塞（Alimta）、氟达拉滨（Fludara）、奈拉滨（Arranon）、克拉屈滨（Cladribine Novaplus）、氯法拉滨（Clolar）、阿糖胞苷（Cytosar-U）、地西他滨（Dacogen）、阿糖胞苷脂质体（DepoCyt）、羟基脲（Droxia）、普拉曲沙（Folotyn）、氟尿苷（FUDR）、吉西他滨（Gemzar）、克拉屈滨(Leustatin)、氟达拉滨（Oforta）、氨甲喋呤（MTX；Rheumatrex）、氨甲喋呤（Trexall）、硫鸟嘌呤（Tabloid）、TS-1或阿糖胞苷（Tarabine PFS）。
示例性的解毒剂包括，但不限于氨磷汀（Ethyol）或美司钠（Mesnex）。
示例性的干扰素包括，但不限于干扰素α-2b（Intron A）或干扰素α-2a（Roferon-A）。
示例性的多克隆或单克隆抗体包括，但不限于曲妥珠单抗（Herceptin）、木单抗（Arzerra）、贝伐单抗（Avastin）、利妥昔单抗（Rituxan）、西妥昔单抗（Erbitux）、帕尼单抗（Vectibix）、托西莫单抗/碘131托西莫单抗（Bexxar）、阿仑单抗（Campath）、替伊莫单抗（Zevalin、In-111、Y-90Zevalin）、吉妥单抗（Mylotarg）、依库丽单抗（Soliris）或德尼单抗。
示例性的EGFR抑制剂包括，但不限于吉非替尼(Iressa)、拉帕替尼(Tykerb)、西妥昔单抗(Erbitux)、埃罗替尼(Tarceva)、帕尼单抗(Vectibix)、PKI-166、卡拉替尼(CI-1033)、马妥珠单抗(Emd7200)或EKB-569。
示例性的HER2抑制剂包括，但不限于曲妥珠单抗(Herceptin)、拉帕替尼(Tykerb)或AC-480。
组蛋白去乙酰化酶抑制剂包括，但不限于伏立诺他(Zolinza)。
示例性的激素包括，但不限于他莫昔芬(Soltamox、Nolvadex)、雷洛昔芬(Evista)、甲地孕酮(Megace)、亮丙瑞林(Lupron、Lupron Depot、Eligard、Viadur)、氟维司群(Faslodex)、来曲唑(Femara)、曲普瑞林(Trelstar LA、Trelstar Depot)、依西美坦(Aromasin)、戈舍瑞林(Zoladex)、比卡鲁胺(Casodex)、阿那曲唑(Arimidex)、氟甲睾酮(Androxy、Halotestin)、甲羟孕酮(Provera、Depo-Provera)、雌氮芥(Emcyt)、氟他米特(Eulexin)、托瑞米芬(Fareston)、地加瑞克(Firmagon)、尼鲁米特(Nilandron)、阿巴瑞克(Plenaxis)或睾内酯(Teslac)。
示例性的有丝分裂抑制剂包括，但不限于紫杉醇(Taxol、Onxol、Abraxane)、多西他赛(Taxotere)、长春新碱(Oncovin、Vincasar PFS)、长春花碱(Velban)、依托泊苷(Toposar、Etopophos、VePesid)、替尼泊苷(Vumon）、伊沙匹隆(Ixempra)、噻氨酯哒唑、埃博霉素、长春瑞滨(Navelbine)、喜树碱(CPT）、伊立替康(Camptosar)、托泊替康(Hycamtin)、安吖啶或片螺素D(LAM-D)。
示例性的MTOR抑制剂包括，但不限于依维莫司(Afinitor)或西罗莫司脂化物(Torisel)、西罗莫司、药雷帕霉素或AP23573。
示例性的多激酶抑制剂包括，但不限于索拉菲尼(Nexavar)、舒尼替尼(Sutent)、BIBW2992、E7080、Zd6474、PKC-412、莫特塞尼或AP24534。
示例性的丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂包括，但不限于鲁伯斯塔、依立卢/盐酸法舒地尔、夫拉平度、Seliciclib(CYC202、Roscovitrine)、SNS-032(BMS-387032)、Pkc412、苔藓抑素、KAI-9803、SF1126、VX-680、Azd1152、Arry-142886(AZD-6244)、SCIO-469、GW681323、CC-401、CEP-1347或PD332991。
示例性的酪氨酸激酶抑制剂包括，但不限于厄洛替尼（特罗凯）、吉非替尼（易瑞沙）、伊马替尼（格列卫）、索拉非尼（多吉美）、舒尼替尼（索坦）、曲妥珠单抗（赫赛汀）、贝伐单抗（阿瓦斯丁）、利妥昔单抗（Rituxan）、拉帕替尼（Tykerb）、西妥昔单抗（爱必妥）、帕尼单抗（维克替比）、依维莫司（癌伏妥）、阿仑单抗（坎帕斯）、吉妥单抗（米罗他）、西罗莫司脂化物（特癌适）、帕唑帕尼(Votrient)、达沙替尼（Sprycel）、利妥昔单抗（Rituxan）、尼洛替尼（Tasigna）、瓦他拉尼（Ptk787、ZK222584）、CEP-701、SU5614、MLN518、XL999、VX-322、Azd0530、BMS-354825、SKI-606CP-690、AG-490、WHI-P154、WHI-P131、AC-220或AMG888。
示例性的VEGF/VEGFR抑制剂包括，但不限于贝伐单抗（阿瓦斯丁）、索拉非尼（多吉美）、舒尼替尼（索坦）、兰尼单抗、哌加他尼钠或凡德替尼。
示例性的微管靶向药物包括，但不限于紫杉醇、多西紫杉醇、长春新碱、长春碱、诺考达唑、埃坡霉素和长春瑞滨。
示例性的拓扑异构酶毒物药物包括，但不限于替尼泊甙、依托泊苷、亚德里亚霉素、喜树碱、柔红霉素、更生霉素、米托蒽醌、安吖啶、表柔比星和伊达比星。
示例性的紫杉烷类或紫杉烷衍生物包括，但不限于紫杉醇和多西紫杉醇。
示例性的一般化疗药物、抗肿瘤剂、抗增殖剂包括，但不限于六甲蜜胺（Hexalen）、异维甲酸（Accutane、Amnesteem、Claravis、Sotret）、维甲酸（Vesanoid）、阿扎胞苷（Vidaza）、硼替佐米（万珂）、天冬酰胺酶（Elspar）、左旋咪唑（Ergamisol）、米托坦（Lysodren）、丙卡巴肼（Matulane）、培门冬酶（Oncaspar）、地尼白介素（Ontak）、卟吩姆钠（Photofrin）、阿地白介素（Proleukin）、来那度胺（Revlimid）、贝沙罗汀（Ergamisol、Targretin）、沙利度胺（Thalomid）、西罗莫司脂化物（特癌适）、三氧化二砷（Trisenox）、维替泊芬（Visudyne）、含羞草碱（Leucenol）（1M替加氟-0.4M的5-氯-2,4-二羟基嘧啶-1M的氧嗪酸钾）或洛伐他汀。
在另一个方面中，第二化疗剂可以是细胞因子如G-CSF（粒细胞集落刺激因子）。在另一个方面，本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、类似物或衍生物都可以与放射疗法组合给药。放射治疗也可与本发明化合物和本文描述的作为多剂治疗的一部分的另一种化疗剂联合给药。在又一个方面中，本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、类似物或衍生物可与标准联合化疗组合相结合给药，所述标准联合化疗组合例如为（但并不限于）CMF（环磷酰胺，甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶）、CAF（环磷酰胺、阿霉素、5-氟尿嘧啶）、AC（阿霉素和环磷酰胺）、FEC（5-氟尿嘧啶、表柔比星和环磷酰胺）、ACT或ATC（阿霉素、环磷酰胺和紫杉醇）、利妥昔单抗、希罗达（卡培他滨）、顺铂（CDDP）、卡铂、TS-1（替加氟、吉莫斯特和otastat钾的摩尔比为1:0.4:1）、喜树=11（CPT-11、伊立替康或CamptosarTM）、CHOP（环磷酰胺、羟基柔红霉素、长春新碱和强的松或强的松龙）、R-CHOP（利妥昔单抗、环磷酰胺、羟基柔红霉素、长春新碱、强的松或强的松龙）或CMFP（环磷酰胺、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶和强的松）。
在优选的实施方案中，本发明化合物或其药学上可接受的盐、前体药物、代谢物、多晶型物或溶剂化物可以和酶的抑制剂（如受体或非受体激酶）一起给药。所述受体和非受体激酶例如是酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶。所述激酶抑制剂是小分子、聚核酸、多肽或抗体。
示例性的激酶抑制剂包括，但不限于贝伐珠单抗（靶向VEGF）、BIBW2992（靶向EGFR和Erb2）、西妥昔单抗/爱必妥（靶向Erb1）、伊马替尼/格列卫（靶向Bcr-Abl）、曲妥珠单抗（靶向Erb2）、吉非替尼/易瑞沙（靶向EGFR）、兰尼单抗（靶向VEGF）、哌加他尼钠（靶向VEGF）、厄洛替尼/特罗凯（靶向Erb1）、尼洛替尼（靶向Bcr-Abl）、拉帕替尼（靶向Erb1、Erb2/Her2）、GW-572016/二甲苯磺酸拉帕替尼（靶向HER2/Erb2）、帕尼单抗/维克替比（靶向EGFR）、凡德替尼（靶向RET/VEGFR）、E7080（多个靶标，包括RET和VEGFR）、赫赛汀（靶向HER2/Erb2）、PKI-166（靶向EGFR）、卡奈替尼/CI-1033（靶向EGFR）、舒尼替尼/SU-11464/索坦（靶向EGFR和FLT3）、吗妥珠单抗/Emd7200（靶向EGFR）、EKB-569（靶向EGFR）、Zd6474（靶向EGFR和VEGFR、PKC-412（靶向VEGR和FLT3）、瓦他拉尼/Ptk787/ZK222584（靶向VEGR）、CEP-701（靶向FLT3）、SU5614（靶向FLT3）、MLN518（靶向FLT3）、XL999（靶向FLT3）、VX-322（靶向FLT3）、Azd0530（靶向SRC）、BMS-354825（靶向SRC）、SKI-606（靶向SRC）、CP-690（靶向JAK）、AG-490（靶向JAK）、WHI-P154（靶向JAK）、WHI-P131（靶向JAK）、索拉非尼/多吉美（靶向RAF激酶、VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3、PDGFR-β、KIT、FLT-3和RET）、达沙替尼/Sprycel（靶向BCR/ABL和SRC）、AC-220（靶向Flt3）、AC-480（靶向所有的HER蛋白质，“panHER”）、二磷酸莫特塞尼（靶向VEGF1-3、PDGFR和c-kit）、狄诺塞麦（靶向RANKL，抑制SRC）、AMG888（靶向HER3）、AP24534（多个靶标，包括Flt3）。
示例性的丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂包括，但不限于西罗莫司（靶向mTOR/FRAP1）、雷帕霉素（靶向mTOR）、Certican/依维莫司（靶向mTOR/FRAP1）、AP23573（靶向mTOR/FRAP1）、依立卢/盐酸法舒地尔（靶向RHO）、夫拉平度（靶向CDK）、Seliciclib/CYC202/Roscovitrine（靶向CDK）、SNS-032/BMS-387032（靶向CDK）、鲁伯斯塔（靶向PKC）、Pkc412（靶向PKC）、苔藓抑素（靶向PKC）、KAI-9803（靶向PKC）、SF1126（PI3K的靶向）、VX-680（针对极 光激酶）、Azd1152（靶向极光激酶）、Arry-142886/AZD-6244（靶向MAP/MEK）、SCIO-469（靶向MAP/MEK）、GW681323（靶向MAP/MEK）、CC-401（靶向JNK）、CEP-1347（靶向JNK）、PD332991（靶向CDK）。
EZH2介导的蛋白甲基化参与的障碍是一种神经系统疾病。因此，本发明的化合物也可用于神经系统疾病的治疗或研究，如癫痫症、精神分裂症、双相情感障碍或其他心理和/或精神疾病、神经病、骨骼肌萎缩、神经退行性疾病（如神经变性疾病）。神经退行性疾病的例子包括：阿尔茨海默氏症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)和帕金森氏病。另一类的神经变性疾病包括至少部分地由聚集的聚谷氨酰胺引起的疾病。这类疾病包括：亨廷顿氏病、脊髓延髓肌肉萎缩（SBMA或肯尼迪疾病）、齿状核红核苍白球路易体萎缩(DRPLA)、脊髓小脑性共济失调1(SCA1)、脊髓小脑性共济失调2(SCA2）、马查多-约瑟夫病(MJD、SCA3)、脊髓小脑性共济失调6(SCA6)、脊髓小脑性共济失调7(SCA7)、脊髓小脑性共济失调12(SCA12)。
其中EZH2基因介导的表观遗传甲基化起到了重要作用的任何其他疾病可以用本文所述的化合物和方法治疗或预防，或者可以用本文所述化合物研究这些疾病和其潜在的治疗方法。
4.药物组合物
本发明还提供了药物组合物，所述组合物包括本文所述的任何结构式的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂或载体的组合。
“药物组合物”是以适于给药予受试者的形式含有本发明化合物的制剂。在一个实施方案中，药物组合物是散装的或单位剂型。所述单位剂型是多种形式中的任意一种，所述多种形式包括例如胶囊、IV包、片、气雾剂吸入器上的单泵，或者瓶。单位剂量组合物中的活性成分（例如，所公开化合物或其盐、水合物、溶剂化物或异构体的制剂）的量是有效量，并且所述量是根据所涉及的具体治疗而改变。本领域技术人员会理解，有时必须根据患者的年龄和病况对剂量进行常规的改变。剂量还取决于给药途径。能够想到许多途径，包括口服、肺、直肠、肠胃外、透皮、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、吸入、颊、舌下、胸膜内、囊内和鼻内等等。本发明化合物的局部或透皮给药剂型包括粉末、喷雾、膏剂、糊剂、乳膏剂、洗液、凝胶、溶液、贴剂和吸入剂。在一个实施方案中，将活性化合物 在无菌条件下与药学上可接受的载体以及任何所需要的防腐剂、缓冲剂或者推进剂进行混合。
本文使用的术语“药学上可接受的”是指那些化合物、阴离子、阳离子、材料、组合物、载体和/或剂型在可靠的医学判断的范围之内适合用于接触人类和动物的组织，而没有过多的毒性、放射性、过敏性反应或其它问题或并发症，与合理的利益/风险比相称。
“药学上可接受的赋形剂”是指在制备药物组合物中有用的赋形剂，所述药物组合物通常是安全、无毒并且不具有生物学上或其他不良的特性，所述赋形剂包括在兽药和人类药物应用中可接受的赋形剂。在本说明书和权利要求书中所用的“药学上可接受的赋形剂”包括一个和多个此类赋形剂。
本发明的药物组合物根据其拟定的给药途径配制。给药途径的例子包括肠胃外给药，例如静脉内、皮内、皮下、口服（例如，吸入）、透皮（局部）和粘膜给药。用于肠胃外、真皮内、皮下应用的溶液或悬浮液可以包括下列组分：无菌稀释剂，例如注射用水、生理盐水溶液、固定油，聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂，例如苄基醇或对羟苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐以及渗透压调节剂，例如氯化钠或葡萄糖。pH值可以用酸或碱（如盐酸或氢氧化钠）调节。肠道外制剂可封装在安瓿、玻璃或塑料制成的一次性注射器或多剂量小瓶中。
本发明的化合物或药物组合物可以用于通过目前许多公知的用于化疗治疗的方法向受试者给药。例如，用于治疗癌症，本发明的化合物可被直接注射到肿瘤内、注射到血液或体腔中或口服或使用贴剂通过皮肤来应用。所选择的剂量应该是足以构成有效治疗，但也不能过高而导致不可接受的副作用。治疗期间和治疗后一段合理时间内最好应密切监测病人的疾病状态（如癌症、癌前期等）和健康状态。
本文使用的术语“治疗有效量”是指用于治疗、减轻或预防可识别的疾病或病症或表现出可检测的治疗或抑制效果的药剂的量。所述效果可通过本领域中已知的任何测定方法检测。对于受试者的精确的有效量将取决于受试者的体重、身高和健康状况；病症的性质和程度；选择给药的治疗方法或共同疗法。给定的情况下的治疗有效量可以通过技术人员的常规实验和临床医师的判断确定。在一个 优选的方面，待治疗的疾病或病症是癌症。在另一个方面，待治疗的疾病或病症是一种细胞增殖性障碍。
任何化合物的治疗有效量可以在例如肿瘤细胞的细胞培养实验中或在动物模型（通常为大鼠、小鼠、兔、狗、猪）中初步估算。动物模型也可以用来确定合适的浓度范围和给药途径。然后，这些信息可以用来确定对人类给药的有用剂量和途径。治疗/预防的疗效和毒性可以通过细胞培养或实验动物中的标准药学步骤确定，例如，ED50（在50％的群体中的治疗有效剂量）和LD50（50％的群体中的致死剂量）来确定。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，其可以表示为LD50/ED50的比率。表现出大的治疗指数的药物组合物是首选。根据所采用的剂型、患者的敏感性和给药途径，剂量可在此范围内变化。
调整剂量和给药方式以提供足够的活性剂水平或维持所需的效果。需要考虑的因素包括疾病状态的严重程度、患者的综合健康状况、年龄、体重和受试者的性别、饮食、给药时间和频率、药物组合、反应灵敏度和对治疗的耐受/响应。长效药物组合物可以每3到4天、每星期或每两周给药一次，这取决于特定药物的半衰期和清除率。
含有本发明的活性化合物的药物组合物通常可按现有技术公知的方式制备，例如，通过常规的混合、溶解、制粒、制糖衣丸、磨细、乳化、封装、包埋或冻干来制备。药物组合物可以以使用一种或多种生理学可接受的载体的常规方式来进行制备，所述载体包含便于将所述活性化合物加工成可药用的制剂的赋形剂和/或助剂。当然，适合的制剂取决于所选择的给药途径。
适于注射用的药物组合物包括无菌水溶液（水溶性的）或用于临时配制无菌注射溶液或分散体的分散体和无菌粉末。对于静脉内给药，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、聚氧乙烯蓖麻油（巴斯夫，帕西帕尼，新泽西）或磷酸盐缓冲盐水（PBS）。在所有情况下，所述药物组合物必须是无菌的并且应该是存在易注射性能的可流动程度。所述药物组合物在制造和贮存条件下必须是稳定的，并且必须防止微生物（如细菌和真菌）的污染作用。载体可以是溶剂或分散介质，例如包括水、乙醇、多元醇（例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等）或其合适的混合物。适当流动性可例如通过使用诸如卵磷脂的涂层，通过在分散体的情况下维持所需颗粒大小以及通过使用表面活性剂来保持。对微生物作用的预防可以通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、 硫柳汞等来实现。在许多情况下，组合物中优选包括等渗剂，例如糖、多元醇（如甘露醇、山梨糖醇）和氯化钠。可以通过在组合物中包括可延迟吸收的试剂（例如，单硬脂酸铝和明胶）来延长可注射组合物的吸收。
可通过在合适的溶剂中加入需要量的活性化合物以及根据需要加入上述列举的成分中的一种或其组合，随后过滤灭菌来制备无菌注射液。一般情况下，通过将活性化合物加入到无菌载体中制备分散剂，所述无菌载体包含基本的分散介质和所需的选自上述所列举成分的成分。用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，所述方法得到的是含活性成分和来自于其先前无菌过滤的溶液中的任何额外所需成分的粉末。
口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用的药学上可接受的载体。它们可以被封装在明胶胶囊中或压成片剂。为口服治疗给药，活性化合物可加入赋形剂中，并以片剂、锭剂或胶囊形式使用。还可以使用液态载体制备用作漱口药的口服组合物，其中在液态载体中的化合物口用嗽口，然后吐出或吞咽。可包含药学上相容的结合剂和/或佐剂材料作为所述组合物的一部分。片剂，丸剂，胶囊，锭剂等可以包含任何以下成分或类似性质的化合物：结合剂（如微晶纤维素，西黄蓍胶或明胶）、赋形剂（如淀粉或乳糖）、崩解剂（如藻酸、Primogel或玉米淀粉）、润滑剂（如硬脂酸镁或Sterotes）、助流剂（如胶态二氧化硅）、甜味剂（如蔗糖或糖精）或调味剂（如薄荷、水杨酸甲酯或橙味剂）。
对于用吸入法给药，化合物通过来自于加压容器或分配器中的气溶胶喷雾剂的形式来传递，其中包含适宜的推进剂，例如气体（如二氧化碳）或雾化剂。
也可以通过粘膜或透皮手段进行全身给药。对于经粘膜或透皮给药，在制剂中使用适于用来渗入屏障的渗透剂。这样的渗透剂通常是本领域已知的，并例如对于粘膜给药，包括清洁剂、胆盐和夫西地酸衍生物。粘膜给药可以通过使用喷鼻剂或栓剂实现。对于透皮给药，将活性化合物配制成在本领域中通常已知的软膏、油膏、凝胶或霜剂。
活性化合物可以与药学上可接受的载体一起制备，所述载体将保护化合物避免其在体内快速消除，例如控释制剂，包括植入物和微胶囊化的运输系统。可以使用可生物降解的、生物可相容的聚合物，如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。对于本领域技术人员来说，制备这些制剂的方法是公知的。所用材料也可以通过商购从阿尔扎公司和Nova Pharmaceuticals公司获得。 脂质体悬浮液（包括靶向感染细胞对病毒抗原单克隆抗体的脂质体）也可以用作药学上可接受的载体。这些都可以根据本领域技术人员已知的方法制备，例如专利号为4522811的美国专利中公开的方法。
配制为了便于给药和剂量均匀的单位剂量形式的口服或肠胃外的组合物尤其有利。本文所用的单位剂量形式指适合作为接受治疗的患者的单一剂量的物理分散单位，每一单位含有经计算的与所需药物载体联合能产生所需治疗效果的预定量的活性化合物。本发明的单位剂型的规格取决并直接依赖于活性化合物的独特特征及所要达到的特定的治疗效果。
在治疗上的应用中，根据本发明使用的药物组合物的剂量根据药剂、年龄、体重和接受治疗的病人的临床状况、实施该治疗的临床医生或从业人员的经验和判断而不同，还有其他因素会影响选定的剂量。通常，所述剂量应足以导致肿瘤的生长的减慢，优选消退，并优选导致癌症的完全消退。剂量范围可以从每天每千克体重约0.01毫克到每天每千克体重约5000毫克。在优选的方面中，剂量范围可以从每天每千克体重约1毫克到每天每千克体重约1000毫克。在一个方面，本发明的剂量将在约0.1毫克/天到约50克/天、约0.1毫克/天至约25克/天、约0.1毫克/天至约10克/天、约0.1毫克/天至约3克/天、约0.1毫克/天至约1克/天的范围内，以单一的、分开的或连续的剂量（剂量根据病人的体重（千克）、身体表面面积（平方米）和年龄调整）方式给药。药剂的有效量是指提供了被临床医生或其他有资格的观察者注意到的客观的可辨认的改善。例如，在患者体内的肿瘤消退可以参考肿瘤直径来测量。一个肿瘤的直径减小表示消退。消退也表明了治疗停止后肿瘤复发的失败。本文所使用的术语“剂量有效方式”是指活性化合物在患者或细胞中产生所需的生物效应的量。
药物组合物可以同给药说明书一起包含在容器、包装或分配器中。
本发明的化合物能够进一步形成盐。所有这些形式均考虑在所述要求保护的发明范围内。
本文使用的“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的衍生物，其中母体化合物通过制造其酸或碱的盐而被修饰。药学上可接受的盐的例子包括，但不限于碱性残基（如胺）的无机酸盐或有机酸盐、酸性残基（如羧酸）的碱金属盐或有机盐，等等。所述药学上可接受的盐包括例如由无毒的无机酸或有机酸形成的常规的无毒性的盐或母体化合物形成的季铵盐。例如，所述常规的无毒性的盐包括， 但不限于那些衍生自无机酸或有机酸的盐，所述无机酸或有机酸选自2-乙酰氧基苯甲酸、2-羟基乙磺酸、乙酸、抗坏血酸、苯磺酸、苯甲酸、碳酸氢根、碳酸、柠檬酸、依地酸、乙烷二磺酸、1,2-乙烷磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、乙醇酰对氨苯基砷酸（glycollyarsanilic）、己基间苯二酚酸（hexylresorcinic）、海巴明（hydrabamic）、氢溴酸、盐酸、氢碘酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂基磺酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、萘磺酸（napsylic）、硝酸、草酸、双羟萘酸、泛酸、苯乙酸、磷酸、多聚半乳糖醛酸、丙酸、水杨酸、硬脂酸、碱式乙酸（subacetic）、琥珀酸、氨基磺酸、磺胺酸、硫酸、单宁酸、酒石酸、甲苯磺酸，以及常用的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、精氨酸等。
药学上可接受的盐的其他例子包括己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环-[2.2.2]-辛-2-烯-1-羧酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、粘康酸等。本发明还包括当母体化合物中存在的酸性质子被金属离子（例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子）取代时形成的盐；或当母体化合物与有机碱配合时形成的盐，所述有机碱例如为乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。在盐的形式中，可以理解的是化合物对该盐的阳离子或阴离子的比例可为1：1，或1：1以外的任意的比例，例如，3：1、2：1、1：2或1：3。
应当理解的是，所有引用的药学上可接受的盐包括相同的盐的如本文所定义的溶剂加成形式（溶剂化物）或晶体形式（多晶型物）。
本发明的化合物也可以以酯的形式来制备，例如药学上可接受的酯。例如，化合物的羧酸官能团可以被转换成其相应的酯，例如甲酯、乙酯或其它酯。此外，化合物中的醇羟基可以被转换成其相应的酯，例如乙酸酯、丙酸酯或其它酯。
本发明的化合物也可以以前药的形式来制备，例如药学上可接受的前体药物。术语“前体药物”和“前药”本文中可互换使用，是指在体内释放活性母体药物的任何化合物。由于已知前药可以提高药品的许多可取的品质（例如，溶解度、生物利用度、制造等），所以本发明的化合物可以前药的形式来输送。因此，本发明意在覆盖本发明要求保护的化合物的前药、其输送方法以及包含它们的组合物。“前药”意在包括任何共价键合的载体，当所述前药给药于受试者时所述载体在体内释放本发明中的活性母体药物。本发明中的前药通过对化合物中存在 的官能团进行修饰的方式来制备，所述修饰在常规操作中或在体内裂解为母体化合物。前药包括本发明的化合物，其中，羟基、氨基、巯基、羧基或羰基键连到可在体内裂解分别形成游离羟基、游离氨基、游离巯基、游离羧基或游离羰基的任何基团。
前药的例子包括，但不限于本发明化合物中的羟基官能团的酯（例如，乙酸酯、二烷基氨基乙酸酯、甲酸酯、磷酸酯、硫酸酯和苯甲酸酯衍生物）和氨基甲酸酯类（例如，N,N-二甲基氨基羰基），羧基官能团的酯（如乙酯、吗啉乙醇酯），N-酰基衍生物（例如，N-乙酰基），氨基官能团的N-曼尼希碱、席夫碱和烯胺酮，酮和醛官能团的肟类、缩醛、缩酮和烯醇酯等等（参阅Bundegaard,H.,Design ofProdrugs,p1-92,Elesevier,New York-Oxford(1985)）。
所述化合物或其药学上可接受的盐、酯或前药经口服、鼻内、经皮、肺、吸入、颊、舌下、腹膜内、皮下、肌肉、静脉、直肠、胸腔内、鞘内和肠道外给药。在一个实施方案中，所述化合物经口服给药。本领域技术人员将认识到某些给药途径的优点。
利用所述化合物的给药方案根据多种因素选择，包括患者的品种、物种、年龄、体重、性别和病情；需治疗的疾病的严重程度；给药途径；病人的肾肝功能，以及使用的具体化合物或其盐。本领域普通技术的医生或兽医可以很容易地确定和规定所需药物的有效量来防止、对抗或阻止病情的发展。
本发明公开的化合物的制剂和给药技术可以参阅Remington:the Science andPractice of Pharmacy,19th edition,Mack Publishing Co.,Easton,PA(1995)。在一个实施方案中，本文所描述的化合物和其药学上可接受的盐与其药学上可接受的载体或稀释剂结合用于制备药物。合适的药学上可接受的载体包括惰性固体填充剂或稀释剂、无菌水溶液或有机溶液。所述化合物将以足以提供本文描述范围内的所需剂量存在于所述药物组合物中。
除非另有说明，否则本文所使用的百分比和比率均以重量计。本发明的其它特征和优点在不同的实施例中变得显而易见。所提供的实施例说明可用于实施本发明的不同的组分和方法。这些实施例并不限制所要求保护的发明。基于本发明的公开内容，本领域技术人员可以识别和采用可用于实施本发明的其他组分和方法。
本文描述的合成反应方案中，为简单起见化合物可以用一个特定的构型来绘 制。所述特定的构型不被解释为将本发明限制为一种或另一种异构体、互变异构体、结构异构体或立体异构体的，其也不排除异构体、互变异构体、结构异构体或立体异构体的混合物，但是，应理解，一个给定的异构体、互变异构体、结构异构体或立体异构体比另一种异构体、互变异构体、结构异构体或立体异构体可能具有较高的活性水平。
通过上述方法进行设计、选择和/或优化的化合物，一旦产生，其特征可以采用本领域技术人员已知的多种试验来表征，以确定该化合物是否具有生物活性。例如，分子可以通过常规的试验来表征，以确定它们是否具有预测的活性、结合活性和/或结合特异性，所述试验包括，但不限于下文描述的试验。
此外，高通量筛选可以用于加快使用所述检测的分析。因此，通过使用在本领域中已知的技术迅速地筛选本文所描述的分子的活性成为可能。高通量筛选的一般方法的描述可参阅例如Devlin(1998)High Throughput Screening,MarcelDekker和专利号为5763263的美国专利。高通量检测方法可以使用一个或多个不同的检测技术，包括但不限于下文描述的那些技术。
本文所引用的所有出版物和专利文件通过引用结合到本文中，每一个出版物和专利文件是专门地、单独地被引入本文作为参考。对出版物和专利文件的引用并非承认其是本发明任何有关的现有技术，也非承认其与本发明的内容或日期相同。本发明已经通过书面描述的方式进行描述，本技术领域的技术人员将认识到，本发明可以在各种实施方案中实行，前面的描述和下面的实施例是为了说明而不是限制后面的权利要求。
实施例
通用实验
NMR
除非另有声明，否则使用CDCl3来取得1H-NMR（核磁共振）波谱，并用瓦里安（Varian）或牛津仪器（Oxford instruments）磁体（500MHz）仪器在400或500MHz下记载。所指的多重性是s为单峰，d为双重峰，t为三重峰，q为四重峰，quint为五重峰，sxt为六重峰，m为多重峰，dd为双二重峰，dt为双三重峰；br表示宽单峰信号。
LCMS和HPLC
岛津（Shimadzu）LC-Q、岛津LCMS-2010EV或Waters Acquity超高效液相色谱。HPCL：通过岛津SPD-20A，用150×4.5mm YMC ODS-M80柱或150×4.6mm YMC-Pack Pro C18柱，以1.0ml/min分析产品。
流动相是MeCN：H2O=3：2（包含0.3%SDS和0.05%H3PO4）。
0.05%TFA的水溶液，0.05%TFA的乙腈溶液（初始梯度为20%，然后在三分钟内0.05%TFA/MeCN达到浓度为95%，保持0.5分钟，在3.51到4.50分钟然后0.05%TFA/MeCN浓度为20%）。
可选地，液相色谱质谱联用法（LCMS）使用了两种不同方法：最常用的一种是高pH法（METCR1600），另一种用于更加标准的化合物（METCR1416）。
0.1%甲酸水溶液-流动相“A”0.1%甲酸乙腈溶液-流动相“B”利用了WatersAtlantis dC18,2.1mm×100mm，3μm柱，流速=0.6ml/min，柱温=40℃；时间（分钟）%B0.00分钟5%B。5.0分钟100%B，5.4分钟100%B和0.42分钟5%B。
3.5分钟方法是指Atlantis dC18，2.1mm×50mm,3μm柱，在40℃下流速为1ml/min。流动相A0.1%甲酸（aq），流动相B0.1%甲酸（MeCN），进样3μL，梯度0分钟（5%有机的），2.5分钟（100%有机的），2.7分钟（100%有机的），2.71分钟（5%有机的），3.5分钟（5%有机的）。
7.0分钟方法是指Atlantis dC18，2.1mm×100mm,3μm柱，在40℃下流速为0.6ml/min。流动相A0.1%甲酸（aq），流动相B0.1%甲酸（MeCN），进样3μL，梯度0分钟（5%有机的），5分钟（100%有机的），5.4分钟（100%有机的），5.42分钟（5%有机的），7分钟（5%有机的）。
3.5分钟方法和7分钟方法都在MS18岛津LCMS-2010EV或MS19岛津LCMS-2010EV系统上实行，它们利用LC-20AB泵和SPD-M20A PDA检测器。
使用带有3100质量检测器的Waters自动纯化系统通过HPLC/MS来纯化产物。
还可在岛津LC-2010CHT上进行HPLC分析，其在室温下使用YMC ODS-A，C18，（150×4.6×5μm）柱，流速为1.4ml/min。使用10μl的进样量，通过UV/PDA来检测。流动相A是0.05%TFA的水溶液，流动相B是0.05%TFA的乙腈溶液，初始梯度程序为8分钟内5%B-95%B，保持1.5分钟，在9.51-12分钟B浓度为 0.5%。稀释液是流动相。
其他
在Biotage Isolera（第四代）上施行自动快速柱层析。10g SNAP柱，流速为12ml/min，或25g SNAP柱，流速为25ml/min，在254nm和280nm检测。
根据在实验步骤中描述的条件可在ThalesNano![]()
上施行选择腈还原反应。
用于吡啶酮胺合成的一般步骤
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向氰基化合物（1eq.）的MeOH溶液中加入催化量的雷尼镍（Raney Nickel）和氨溶液。混合物在室温和氢气（气球压力）下搅拌1小时。反应完成时，通过硅藻土床过滤混合物，用MeOH洗涤。滤液在减压下浓缩，以得到所要的胺。此步骤可用于在实施例中描述的多种R基团。通常，氰基吡啶可从市场上的供应商处购得，或者可通过本领域一般技术人员所知的方法合成。
起始原料或中间体的合成
3-氨甲基-6-甲基-4-丙基-1,2-二氢吡啶-2-酮HCl盐
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向t-BuOK（20.0g，179mmol）和氰基乙酰胺（16.5g，196mmol）的DMSO（300mL）搅拌溶液中加入(3E)-3-庚烯-2-酮（20.0g，178mmol）。反应混合物在23℃下搅拌30分钟，然后向反应混合物中加入额外的t-BuOK（60.0g，712mmol）。反应混合物放置在氧气气氛下，搅拌16小时。然后用氩气净化反应混合物，冷却至0℃。混合物用HCl水溶液稀释，收集产生的沉淀物。用水洗涤固 体并干燥，以得到6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（15.0g，产率为47%）。
向6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（15.0g，85.1mmol）的甲醇（600ml）和浓盐酸（15ml）搅拌溶液中加入Pd(OH)2（15.0g）。混合物在H2气氛下搅拌48小时。过滤反应混合物，在真空中浓缩滤液。向残余物中加入乙醇，收集沉淀物并干燥，以得到标题化合物（13.0g，产率为60%），其为白色固体。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;11.86(br.s.,1H),6.00(s,1H),3.78(q,J=5.5Hz,2H),3.61(br.s.,2H),2.46(m,2H),2.17(s,3H),1.50(sxt,J=7.4Hz,2H),0.91(t,J=7.4Hz,3H)。
6-甲基-2-氧代-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
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在N2气氛下，向2-氰基乙酰胺（35.1g，417mmol）和t-BuOK（42.5g，379mmol）的DMSO（631ml）溶液中加入5-甲基-3-己烯-2-酮（50.0ml，379mmol）。在23℃下搅拌混合物30分钟，然后加入额外的t-BuOK（127g，1137mmol）。用O2气体置换N2气体，在23℃和氧气下搅拌混合物45小时。将混合物冷却至0℃，用H2O（200ml）和HCl（5N，227ml，缓慢加入）稀释。在0℃下搅拌混合物15分钟，用布氏漏斗过滤固体。固体用H2O（1500ml）洗涤，用热风（55℃，16h）干燥，以得到6-甲基-2-氧代-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（26.6g，产率为40%）。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.14ppm(s,1H),3.25-3.29(m,1H),2.45(s,3H),1.26(d,J=6.8Hz,6H);LC-MS:m/z177.1[M+1],198.9[M+23]。
3-(氨甲基)-6-甲基-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-2-酮HCl盐
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在N2气氛下，向6-甲基-2-氧代-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（5.00g，28.4mmol）的MeOH（400ml）和HCl（8.8ml，12M）溶液中加入10%Pd(OH)2 （5.17g，3.68mmol）。用H2气体置换N2气体，在23℃和氢气下搅拌混合物24小时。用N2气体置换H2气体，将混合物通过硅藻土过滤，用MeOH洗涤并浓缩。将残余物和EtOH-TBME一起磨碎，用布氏漏斗收集固体并真空干燥，以得到标题化合物（6.15g，100%）。1H-NMR（400MHz,DMSO-d6）：δppm11.9(br-s,1H),8.03(br-s,2H),6.12(s,1H),3.82-3.84(m,2H),3.08-3.12(m,1H),2.19(s,3H),1.12(d,J=6.8Hz,6H)。
6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
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向2-氰基乙酰胺（14.0g，166mmol）和三氟乙酰丙酮（20.0ml，166mmol）的H2O（332ml）溶液中加入K2CO3（6.60g，47.9mmol）。在23℃搅拌混合物15小时。用布氏漏斗过滤沉淀的固体，用冰冷H2O洗涤，用热风（60℃，16h）干燥，以得到标题化合物（17.6g，52%）。H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm2.38(s,3H),6.66(s,1H)。
3-(氨甲基)-6-甲基-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-2-酮HCl盐
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在N2气氛下，向6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（400mg，1.98mmol）的MeOH（19.8ml）和HCl（436μl，12M）溶液中加入10%Pd(OH)2（361g，0.257mmol）。用H2气体置换N2气体，在23℃和氢气条件下搅拌混合物18小时。用N2气体置换H2气体。用硅藻土过滤混合物，用MeOH洗涤并浓缩。将残余物在MeOH-Et2O中磨碎，用布氏漏斗收集，在真空中干燥，以得到标题化合物（433mg，100%）。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δppm2.31(s,3H),3.88(s,2H),6.43(s,1H)。
5-氟-4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
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向6-甲基-2-氧代-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（225mg，1.277mmol）的MeCN（6ml）搅拌溶液中加入Selectfluor氟试剂（620mg，1.75mmol）。反应混合物在50℃搅拌3小时。冷却至23℃后，将反应混合物在真空中浓缩。用柱层析（50%到100%EtOAc-庚烷）纯化残余物，以得到标题化合物（90mg，36%）。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.39(m,1H),2.44(d,J=3.1Hz,3H),1.41(dd,J=7.0,3.1Hz,6H);LCMS E-S(M+H)=195.2。
5-氟-6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
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用与为5-氟-4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（20%产率）描述的相同的方式来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.80(dt,J=7.9,1.9Hz2H),2.31(d,J=2.1Hz,3H),1.73(tq,J=7.4，7.4Hz,2H),1.06(t,J=7.3Hz,3H);LCMS E-S(M+H)=195.2。
5-氟-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
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用与为5-氟-4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（15%产率）描述的相同的方式来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm2.46(d,J=3.1Hz,3H),2.44(d,J=7.4,3.1Hz,3H);LCMS E-S(M+H)=167.2。
3-(氨甲基)-5-氟-4-异丙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮
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将100mL烧瓶中的5-氟-4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（100mg，0.515mmol）溶解于MeOH（6mL）和2mL氨水（2mL，25%）的混合物中。在室温下使用H-Cube以Raney-Ni作为催化剂实施还原反应3-4小时。反应结束时（通过TLC监控），在减压条件下浓缩反应物，以得到作为灰色固体的标题化合物（90mg，90%）。1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm4.04(s,2H),3.22（m，1H）,2.24(d,J=3.4Hz,3H),1.32（dd，J=7.0,1.8Hz,6H）;LCMS E-S(M+H)=199.2。
3-(氨甲基)-5-氟-6-甲基-4-丙基吡啶-2(1H)-酮
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用与为3-(氨甲基)-5-氟-4-异丙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮（92%产率）描述的相同的方式来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.76(s,2H),2.61(dt,J=7.2,1.8Hz,2H)，2.31（d,J=2.8Hz,3H）,1.57（tq,J=7.6,7.6Hz,2H）,1.00（t,J=7.3Hz,3H);LCMS E-S(M+H)=199.2。
3-(氨甲基)-5-氟-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮
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用与对3-(氨甲基)-5-氟-4-异丙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮（92%产率）描述的相同的方式来制备标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm3.79(s,2H),2.29(d，J=3.3Hz,3H)，2.24（d，J=2.1Hz，3H）;LCMS E-S(M+H)=171.2。
2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸
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在0℃下，向2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸（2.00g，9.80mmol）的H2SO4（20mL，12N）搅拌溶液中加入HNO3（2mL，12N）。搅拌3小时后，加入水，收集得到的沉淀。用水洗涤固体并干燥，以得到作为白色固体的标题化合物(1.90g，76%产率）。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm;8.43(s,1H),8.15(s,1H），2.77（s，3H）;MS（ES）[M-H]247.8。
2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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向2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)甲苯酸（21.0g，84.3mmol）的DMF（200mL）溶液中加入碳酸钾（35.0g，253mmol）和碘甲烷（24.0g，169mmol）。在60℃下搅拌化合物，搅拌6小时后将混合物冷却至23℃并过滤。在真空中浓缩滤液，将残余物溶解在EtOAc和水中。用EtOAc（2×250mL）萃取水相，并在真空中浓缩合并的有机层。通过柱层析（SiO2庚烷-EtOAc=4/1）纯化残余物，以得到标题化合物（20.0g，90%产率）。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm);8.27(s,1H),8.11（s,1H）,3.99（s,3H）,2.71（s,3H）;MS（ES）[M-H]261.9。
3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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向2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（20.0g，76.0mmol）的MeOH（400ml）搅拌溶液中加入Pd(OH)2（2.00g）。反应混合物在氢气气氛下搅拌3小时。用氮气净化后，过滤混合物，在真空中浓缩滤液，以得到作为橙色固体的标题化合物（10.2g，58%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.47(brs,1H),7.01 （d，J=2.0Hz，1H），3.92（m，2H），3.91（s，3H），2.39（s，3H）。
4-{[3-(甲氧基羰基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
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对CH2Cl2（120mL）和AcOH（6mL）中的3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（6.00g，25.7mmol）的搅拌溶液中加入N-Boc哌啶酮（6.70g，33.4mmol）和三乙酰氧基硼氢化钠（13.6g，64.3mmol）。在23℃下搅拌反应混合物20小时。加入饱和NaHCO3，分离混合物。用CH2Cl2（3×50mL）萃取水层，在真空中浓缩合并的有机层。用硅胶柱层析（SiO2庚烷/EtOAc=4/1）纯化残余物，以得到标题化合物（10.6g，98%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.37(s,1H),6.88（s，1H），4.05（m，2H），3.90（s，3H）,3.01（m,3H），2.32（s，3H），1.71（m，2H），1.48-1.61（m，2H），1.45（s，9H）；MS（ES）[M-H]415.1。
4-{乙基[3-(甲氧基羰基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向4-{[3-(甲氧基羰基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（10.6g，25.4mmol)的CH2Cl2（200mL）和AcOH（10mL）搅拌溶液中加入乙醛（2.80g，63.5mmol）和三乙酰氧基硼氢化钠（13.4g，63.5mmol）。在23℃下搅拌反应混合物24小时。然后加入饱和NaHCO3，分离混合物。用CH2Cl2（3×50mL）萃取水层，在真空中浓缩合并的有机层。用硅胶柱层析（SiO2庚烷/EtOAc=5/1）纯化残余物，以得到油状的标题化合物（4.50g，40%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.82(br.s.,1H),7.45（d，J=1.6Hz，1H），3.96-4.18（m， 2H），3.92（s，3H），3.08（q，J=7.0Hz，2H），2.89（tt，J=11.0，3.7Hz，1H），2.69（m，2H），2.55（s，3H），1.73（m，2H），1.49-1.56（m，2H），1.45（s，9H），0.86（t，J=7.0Hz，3H）；MS（ES）[M+Na]467.0。
3-[乙基(哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯TFA盐
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向4-{乙基[3-(甲氧基羰基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（4.50g，10.1mmol）的CH2Cl2（50mL）搅拌溶液中加入TFA（5mL）。在室温下搅拌反应混合物18小时。然后在真空中浓缩反应混合物，以得到作为粗产物的标题化合物（7.70g）。
3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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向3-[乙基(哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯TFA盐（粗原料，5.30g，12.0mmol）的CH2Cl2（150mL）和AcOH（10mL）搅拌溶液中加入甲醛（15mL，44%水溶液）和三乙酰氧基硼氢化钠（6.40g，30.0mmol）。在23℃下搅拌反应混合物2.5天。然后加入饱和NaHCO3，分离混合物。用CH2Cl2（3×50mL）萃取水层，在真空中浓缩合并的有机层。用硅胶柱层析（NH-SiO2庚烷/EtOAc=2/1）纯化残余物，以得到油状的标题化合物（1.20g，28%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.81(br.s.,1H),7.45（d，J=2.0Hz，1H），3.92（s，3H），3.10（q，J=7.0Hz，2H），2.83（m，2H），2.66-2.77（m，1H），2.54（s，3H），2.24（s，3H），1.84-1.94（m，2H），1.63-1.78（m，4H），0.86 （t，J=7.0Hz，3H）；MS（ES）[M+H]359.1。
3-{乙基[1-(丙烷-2-基)哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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向3-[乙基(哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯TFA盐（粗原料，1.30g，3.36mmol）的CH2Cl2（20mL）和AcOH（5mL）搅拌溶液中加入丙酮（590mg，10.1mmol）和三乙酰氧基硼氢化钠（1.80g，8.40mmol）。在23℃下搅拌反应混合物6天，然后加入饱和NaHCO3，分离混合物。用CH2Cl2（3×30mL）萃取水层，在真空中浓缩合并的有机层。用硅胶柱层析（NH-SiO2庚烷/乙酸乙酯=5/1）纯化残余物，以得到油状的标题化合物（220mg，17%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.79(br.s.,1H),7.44（d，J=1.6Hz，1H），3.91（s，3H），3.10（q，J=7.0Hz，2H），2.86（m，2H），2.61-2.75（m，2H），2.53（s，3H），2.06（m，2H），1.70-1.80（m，2H），1.58-1.69（m，2H），1.00（s×2,6H），0.84（t，J=7.0Hz，3H）；MS（ES）[M+H]387.2。
3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸
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向3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（700mg，1.95mmol）的甲醇（15mL）搅拌溶液中加入NaOH水溶液（5M，590μl，2.93mmol）。在50℃下搅拌反应混合物3小时。冷却至23℃后，向混合物中加入HCl（2M）。将混合物酸化到pH值为5，并在真空中浓缩，以得到作为粗产物的标题化合物（1.26g）。
遵循与制备3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸同样 的方法，由3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯和3-氧杂氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯制备了下列标题化合物。
3((3-(甲酯基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.49(s,1H),6.60（s，1H），4.39（dd，J=7.2Hz，8.8Hz，2H），4.26（m，1H），4.19（br，d，J=5.6Hz，1H），3.93（s，3H），3.78（m，2H），2.41（s，3H），1.47（s，9H）。
3-(乙基(3-(甲氧基羰基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.86(s,1H),7.20（s，1H），4.15（m，1H），3.99（dd，J=8.4Hz，J=8.4Hz，2H），3.94（s，3H），3.65（br，2H），3.00（q，J=7.2Hz，2H），2.60（s，3H），1.43（s，9H），0.90（t，J=6.8Hz，3H）；MS（ES）（M+1）417.41。
3-(氮杂环丁烷-3-基(乙基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.89(s,1H),7.20（s，1H），4.39（m，1H），3.94（s，3H），3.87（m，2H），3.68（br，2H），2.99（q，J=6.8Hz，2H），2.64（s，3H），0.92（t，J=6.8Hz，3H）；MS（ES）（M+1）317.32。
3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.83(s,1H),7.24（s，1H），4.03（m，1H），3.94（s，3H），3.60（br，dd，J=7.2,7.2Hz，2H），2.94（q，J=7.6Hz，2H），2.72（br，t，J=6.8Hz，2H），2.59（s，3H），2.33（s，3H），0.90（t，J=7.2Hz，3H）；MS（ES）（M+1）331.09。
3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm7.83(s,1H),7.37（s，1H），4.44（br，1H），3.86（br，2H），3.33（s，2H），3.04（q，J=6.8Hz，2H），3.03（s，3H），2.64（s，3H），0.90（t，J=7.2Hz，3H）；MS（ES）（M+1）317.32。
3-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm7.05（d，J=2.0Hz，1H），6.48（d，J=2.0Hz，1H），4.31（dd，J=7.2,7.8Hz，2H），4.26-4.21（m，1H），3.87（s，3H），3.82（dd，J=4.4，8.3Hz，2H），2.29（s，3H），1.45（s，9H）。
3-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm7.57（d，J=2.0Hz，1H），7.18（d，J=2.0Hz，1H），4.19-4.14（m，1H），3.98（dd，J=8.0,7.5Hz，2H），3.89（s，3H），3.62-3.56（br，2H），2.98（q，J=6.7Hz，2H），2.49（s，3H），1.42（s，9H），0.88（t，J=7.2Hz，3H）。
5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm7.53（d，J=2.0Hz，1H），7.17（d，J=2.0Hz，1H），4.01（m，1H），3.89（s，3H），3.57（dd，J=6.5,8.0Hz，2H），2.93（q，J=7.5Hz，2H），2.83（bt，J=7.0Hz，2H），2.49（s，3H），2.33（s，3H），0.90（t，J=7.0Hz，3H）；LCMS(M+H)=297.30。
3-{乙基[1-(丙烷-2-基)哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸
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向3-{乙基[1-(丙烷-2-基)哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（220mg，0.569mmol）的甲醇（4mL）搅拌溶液中加入NaOH水溶液（5M，170μl，0.854mmol）。在50℃下搅拌反应混合物2小时。冷却至23℃后，往混合物中加入HCl（2M）。将混合物酸化到pH值为5，在真空中浓缩，以得到作为粗产物的标题化合物（510mg）。
3-{[(2R*，6R*)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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在0℃下，向3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（400mg，1.72mmol）的THF（15mL）和TFA（491μL）搅拌溶液中加入(2R,6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-酮（410mg，1.89mmol）。在60℃和氮气气氛下搅拌混合物1小时。然后将混合物在冰浴中冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠（765mg，3.43mmol）。在23℃下搅拌反应混合物2小时。然后在0℃下加入NaHCO3水溶液，直到pH值为8-9，用乙酸乙酯萃取内容物。用MgSO4干燥有机层并过滤。在真空下将滤液浓缩。用硅胶柱层析（NH-SiO2庚烷/乙酸乙酯=3/1）纯化残余物，以得到无色油状的标题化合物（278mg，37%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.21-7.40（m，6H），6.90（s，1H），3.95（d，J=14.0Hz，1H），3.90（s，3H），3.60-3.73（m，2H），3.46（d，J=14.0Hz，1H），3.08-3.12（m，1H），2.98-3.03（m，1H），2.30（s，3H），2.02-2.08（m，1H），1.83-1.88（m，1H），1.52-1.60（m，1H），1.17-1.26（m，1H），1.11（d，J=6.8Hz，3H），1.13（d，J=6.4Hz，3H）。
3-{[(2R*，6S*)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（非对映异构体混合物）
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在0℃下，向MS3A（1.0g）、3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（350mg，1.50mmol）和(2R,6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-酮（359mg，1.65mmol）的混合物的氯仿（10mL）搅拌溶液中加入醋酸（500μL），在室温下搅拌7小时。 在0℃下，向反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠（670mg，3.00mmol）。在23℃下搅拌反应混合物1.5小时。然后用NaHCO3水溶液淬灭反应混合物，直到pH值为8-9。通过硅藻土过滤除去MS![]()
用乙酸乙酯萃取内容物，用MgSO4干燥并过滤，在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（庚烷/乙酸乙酯=5/1到3/1）纯化残余物。收集目标部分并在真空中浓缩。通过硅胶柱层析（NH-SiO2；庚烷/乙酸乙酯=5/1）纯化残余物，以得到浅黄色油状的标题化合物（223mg，62%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.40-7.21（m，6H），6.85（s，1H），4.00-3.95（m，1H），3.91（s，3H），3.88（d，2H），3.84-3.76（m，1H），2.83-2.73（m，2H），2.25（s，3H），1.83-1.69（m，4H），1.13（d，J=6.4Hz，6H）。
3-{[(2R*，6R*)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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在0℃下，向3-{[(2R，6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（278mg，0.640mmol）的CH2Cl2（5mL）和AcOH（500μL）搅拌溶液中加入乙醛（359mg，6.40mmol）和三乙酰氧基硼氢化钠（428mg，1.92mmol）。在23℃下搅拌反应混合物7小时。然后用NaHCO3水溶液淬灭反应混合物，直到pH值为8-9。用乙酸乙酯萃取内容物，用MgSO4干燥并过滤。在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（NH-SiO2；庚烷/乙酸乙酯=5/1）纯化残余物，以得到浅黄色油状的标题化合物（236mg，80%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.79（s，1H），7.43（s，1H），7.21-7.36（m，5H），3.92（s，3H），3.87（d，J=14.0Hz，1H），3.38（d，J=14.0Hz，1H），3.04-3.15（m，4H），2.73-2.80（m，1H），2.53（s，3H），1.76-1.82（m，1H），1.51-1.63（m，2H)，1.34-1.42（m，1H），1.06（d，J=6.0Hz，3H），0.93（d，J=6.8Hz，3H），0.86（t，J=6.8Hz，3H）。
3-{[(2R*，6S*)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-2-甲基-5-(三氟甲 基)苯甲酸甲酯（非对映异构体混合物）
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在0℃下，向3-{[(2R，6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（223mg，0.513mmol）的氯仿（4mL）和醋酸（500μL）搅拌溶液中加入乙醛（1.0ml），并搅拌30分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠（343mg，1.54mmol）。在23℃下搅拌反应混合物4小时。然后用NaHCO3水溶液淬灭反应混合物，直到pH8-9。用乙酸乙酯萃取内容物。用盐水洗涤有机层。用MgSO4干燥有机层并过滤。在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱层析（庚烷/乙酸乙酯=4/1到1/2）纯化残余物，以得到无色油状的标题化合物（105.5mg，44%产率）。MS（ES）[M+H]463.3。
3-{[(2R*,4S*,6R*)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向3-{[(2R，6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（236mg，0.510mmol）的乙醇（5mL）搅拌溶液中加入NaOH水溶液（5M，269μl，1.02mmol）。在80℃下搅拌反应混合物2小时。冷却至室温后，在真空中浓缩反应混合物，并在减压条件下干燥，以得到粗制羧酸钠盐。
向粗制羧酸钠盐和3-(氨甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮HCl盐（125mg，0.664mmol）的DMSO（5mL）搅拌溶液中加入PyBOP（398mg，0.766mmol）和Hunig碱（445μl，2.55mmol）。在23℃下搅拌反应混合物19小时。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。用水（两次）和盐水洗涤有机层。用MgSO4干燥有机层并过滤。在真空中浓缩合并的有机层。通过硅胶柱层析（NH-SiO2； 乙酸乙酯/MeOH=50/1到8/1）纯化残余物，以得到白色无定形状的标题化合物（267mg，90%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.14-7.36（m，8H），5.94（s，1H），4.53-4.56（m，2H），3.85（d，J=14.0Hz，1H），3.58（d，J=14.0Hz，1H），3.02-3.14（m，4H），2.72-2.80（m，1H），2.40（s，3H），2.32（s，3H），2.21（s，3H），1.32-1.82（m，4H），1.05（d，J=6.4Hz，3H），0.92（d，J=6.8Hz，3H），0.84（t，J=6.8Hz，3H）。
3-{[(2R*,4R*,6S*)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向3-{[(2R，6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（106mg，0.228mmol）的乙醇（2.0mL）搅拌溶液中加入NaOH水溶液（5M，91.2μl，0.456mmol）。在80℃下搅拌反应混合物1.5小时。冷却至室温后，在真空中去除溶剂，并在减压条件下干燥。向此残余物和3-(氨甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮HCl盐（55.9mg，0.297mmol）的DMSO（2mL）搅拌溶液中加入Hunig碱（199μl，1.14mmol）和PyBOP（178mg，0.342mmol）。室温下搅拌反应混合物4小时。用水淬灭反应混合物。用乙酸乙酯萃取内容物。用水（两次）和盐水洗涤有机层。用MgSO4干燥有机层并过滤。在真空中浓缩滤液。通过硅胶柱层析（NH-SiO2，乙酸乙酯/MeOH=50/1到40/1）纯化残余物，以得到无色油状的标题化合物（35.6mg，27%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.34-7.08（m，7H），5.96（s，1H），4.54（d，J=6.0Hz，2H），3.81（s，2H），3.53（m，1H），2.99-2.91（m，2H），2.81（m，2H），2.41（s，3H），2.24（s，3H），2.20（s，3H），1.82-1.47（m，4H），1.00（d，J=6.4Hz，6H），0.81（t，J=6.8Hz，3H）；MS（ES）[M+H]583.0。
4-{[5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1.40g，7.04mmol）的CH2Cl2（30mL）和AcOH（2.50g，42.2mmol）搅拌溶液中加入N-Boc哌啶酮（1.96g，9.85mmol）和三乙酰氧基硼氢化钠（4.40g，21.1mmol）。在23℃下搅拌反应混合物18小时，然后加入饱和的NaHCO3，分离混合物。用CH2Cl2（3×20mL）萃取水层，在真空中浓缩合并的有机层。用硅胶柱层析（SiO2庚烷/乙酸乙酯=10/1到1/1）纯化残余物，以得到油状的标题化合物（2.4g，89%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.09（s，1H），6.69（s，1H），4.05（m，2H），3.88（s，3H），3.63（m，1H），3.42（m，1H），2.97（m，2H），2.23（s，3H），2.05（m，2H），1.45（s，9H），1.27（m，2H）。
4-{[5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲苯基](乙基)氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向4-{[5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（2.40g，6.28mmol）的二氯甲烷（50mL）和醋酸（1.8mL）搅拌溶液中加入乙醛（830μl，12.6mmol）和三乙酰氧基硼氢化钠（4.00g，18.8mmol）。室温下搅拌反应混合物18小时。然后加入NaHCO3水溶液，分离混合物。用二氯甲烷萃取水层。在真空中浓缩合并的有机层。用硅胶柱层析（SiO2庚烷/乙酸乙酯=10/1）纯化残余物，以得到油状的标题化合物（2.40g，89%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.56（s，1H），7.21（d，J=1.6Hz，1H），4.04（m，2H），3.89（s，3H），3.02（q，J=7.0Hz，2H），2.88（m，1H），2.68（m，2H），2.44（s，3H），1.71（m，2H），1.48-1.61（m，2H），1.45（s，9H），0.83-0.89（t，J=7.0Hz，3H）；MS（ES）[M+Na]433.0。
5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯
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向4-{乙基[3-(甲氧基羰基)-2-甲苯-5-氯代苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（2.20g，5.35mmol）的二氯甲烷（20mL）搅拌溶液中加入TFA（4mL）。室温下搅拌反应混合物2小时。然后在真空中浓缩反应混合物，以得到作为粗产物的TFA盐。
在0℃下，向TFA盐的THF（20mL）和醋酸（305μl）搅拌溶液中加入甲醛（3mL，44%水溶液）和三乙酰氧基硼氢化钠（3.40g，16.1mmol）。在23℃下搅拌反应混合物19小时，然后加入饱和的NaHCO3，分离混合物。用EtOAc（50mL）萃取水层，用盐水洗涤合并的有机层，用Na2SO4干燥并过滤，在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（NH-SiO2，庚烷/乙酸乙酯=1/1）纯化残余物，以得到油状的标题化合物（1.54g，89%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.54（d，J=2.4Hz，1H），7.21（d，J=2.4Hz，1H），3.89（s，3H），3.07（q，J=6.8Hz，2H），2.81-2.85（m，2H），2.66-2.70（m，1H），2.44（s，3H），2.24（s，3H），1.86-1.93（m，2H），1.65-1.75（m，4H），0.86（t，J=6.8Hz，3H）。
5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸
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向5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯（1.06g，3.26mmol）的甲醇（10mL）搅拌溶液中加入NaOH水溶液（5M，780μl，3.92mmol）。在50℃下搅拌反应混合物18小时，冷却至23℃后，向混合物中加入HCl（2M，2mL），混合物被酸化至pH值为5，并在真空中浓缩，以得到作为粗产物（1.80g）的标题化合物。
3-{[(2R,6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向3-氨基-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯（520mg，2.84mmol）的THF（20mL）和TFA（813μl）搅拌溶液中加入(2R,6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-酮（679mg，3.12mmol）。在60℃、氮气气氛下搅拌混合物1小时。然后将混合物在冰浴中冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠（1.27g，5.68mmol）。室温下搅拌反应混合物2小时。然后在0℃加入NaHCO3水溶液，直到pH值为8-9，用乙酸乙酯萃取内容物。用MgSO4干燥有机层并过滤。在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（NH-SiO2，庚烷/乙酸乙酯=5/1）纯化残余物，以得到无色油状的标题化合物（331mg，30%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.35-7.39（m，2H），7.27-7.30（m，2H），7.21-7.26（m，1H），6.76（dd，J=2.4,9.2Hz，1H），6.45（dd，J=2.4,11.2Hz，1H），3.94（d，J=14.4Hz，1H），3.87（s，3H），3.58-3.65（m，2H），3.46（d，J=14.4Hz，1H），3.06-3.12（m，1H），2.94-3.01（m，1H），2.21（s，3H），2.02-2.07（m，1H），1.82-1.89（m，1H），1.15-1.22（m，1H），1.12（d，J=6.0Hz，3H），1.09（d，J=7.2Hz，3H）。
3-{[(2R,4R,6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向3-氨基-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯（171mg，0.931mmol）的氯仿（6mL）和AcOH（266μl）搅拌溶液中加入(2R，6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-酮（212mg，0.980mmol）和MS3A（500mg）。在室温、氮气气氛下搅拌混合物2小时。然后将混合物在冰浴中冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠（415mg，1.86mmol）。室温下搅拌反应混合物5小时。然后在0℃加入NaHCO3水溶液，直到pH值为8-9，用乙酸乙酯萃取内容物。用MgSO4干燥有机层并过滤。 在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（1.SiO2，庚烷/乙酸乙酯=5/1到3/1，2.NH-SiO2，庚烷/乙酸乙酯=5/1，3.NH-SiO2，庚烷/乙酸乙酯=10/1到6/1）纯化残余物，以得到无色油状的标题化合物（85.0mg，24%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.38-7.20（m，5H），6.77（dd，J=2.4,9.2Hz，1H），6.40（dd，J=2.4，11.6Hz，1H），3.95-3.90（m，1H），3.88（s，3H），3.87（s，2H），2.84-2.74（m，2H），2.16（s，3H），1.81-1.66（m，4H），1.11（d，J=6.0Hz，6H）。
3-{[(2R，6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向3-{[(2R,6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯（269mg，0.701mmol）的二氯甲烷（5mL）和醋酸（500μl）搅拌溶液中加入乙醛（124mg，2.80mmol）和三乙酰氧基硼氢化钠（469mg，2.10mmol）。在室温下搅拌反应混合物12小时。然后反应混合物用NaHCO3水溶液淬灭至pH8-9。用乙酸乙酯萃取内容物。用MgSO4干燥有机层并过滤。在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（NH-SiO2，庚烷/乙酸乙酯=5/1）纯化残余物，以得到浅黄色油状的标题化合物（277mg，96%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.19-7.36（m，6H），6.97（dd，J=2.4，10.4Hz，1H），3.89（s，3H），3.86（d，J=10.4Hz，1H），3.39（d，J=10.4Hz，1H），3.02-3.10（m，4H），2.74-2.80（m，1H），2.43（s，3H），1.74-1.82（m，1H），1.51-1.63（m，2H），1.32-1.40（m，1H），1.05（d，J=6.4Hz，3H），0.93（d，J=7.2Hz，3H），0.86（t，J=6.8Hz，3H）；MS（ES）[M+H]413.0。
3-{[(2R,4R,6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯
![]()
在0℃下，向3-{[(2R,4R,6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基]氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯（84.9mg，0.221mmol）和乙醛（124mg，2.21mmol）的氯仿（2mL）搅拌溶液中加入醋酸（200μl），并在23℃下搅拌1小时。在0℃下往反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠（148mg，0.662mmol）。在室温下搅拌反应混合物3.5小时。在0℃下往反应混合物中加入![]()
（200mg）和乙醛（500μl），在室温下搅拌25分钟。在0℃下向反应混合物中加入三乙酰氧基硼氢化钠（148mg，0.662mmol），并在室温下搅拌12小时。然后反应混合物用饱和NaHCO3淬灭至pH值为8-9。用EtOAc萃取内容物。用盐水洗涤有机层。用MgSO4干燥有机层并过滤。在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（NH-SiO2，庚烷/乙酸乙酯=5/1）纯化残余物，以得到无色油状的标题化合物（48.5mg，53%产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.36-7.19（m，6H），6.96（dd，J=2.8,9.6Hz，1H），3.90（s，3H），3.82（s，2H），3.44（m，1H），2.98-2.91（m，2H），2.88-2.87（m，2H），2.31（s，3H），1.82-1.70（m，2H），1.57-1.47（m，2H），0.99（d，J=6.4Hz，6H），0.83（t，J=6.8Hz，3H）。
3-{[(2R,6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-5-氟代-2-甲基苯甲酰胺
![]()
向3-{[(2R，6R)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯（277mg，0.672mmol）的乙醇（5mL）搅拌溶液中加入NaOH水溶液（5M，269μl，1.35mmol）。在80℃下搅拌反应混合物2小时。冷却至室温后，将反应混合物在真空中浓缩并在减压下干燥，以得到粗制羧酸钠盐。
向粗制羧酸钠盐和3-(氨甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮HCl盐（165mg， 0.874mmol）的DMSO（5mL）搅拌溶液中加入PyBOP（525mg，1.01mmol）和Hunig碱（586μl，3.36mmol）。在23℃下搅拌反应混合物5小时。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取。用水（2×10mL）和盐水（1×10mL）洗涤有机层。用MgSO4干燥有机层并过滤，在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（NH-SiO2，乙酸乙酯至乙酸乙酯/MeOH=50/1到8/1）纯化残余物，以得到作为白色固体的标题化合物（378mg，定量产率）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm；7.20-7.38（m，5H），7.02-7.10（m，1H），6.80-6.84（m，1H），6.73-6.78（m，1H），5.93（s，1H），4.51（d，J=6.0Hz，2H），3.85（d，J=10.0Hz，1H），3.38（d，J=10.0Hz，1H），3.01-3.05（m，4H），2.67-2.81（m，1H），2.40（s，3H），2.23（s，3H），1.52-1.83（m，3H），1.32-1.39（m，1H），1.05（d，J=6.4Hz，3H），0.93（d，J=6.8Hz，3H），0.84（t，J=6.8Hz，3H）。
3-{[(2R,4R,6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-5-氟代-2-甲基苯甲酰胺
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向3-{[(2R,4R,6S)-1-苯甲基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酸甲酯（48.5mg，0.118mmol）的乙醇（1.5mL）搅拌溶液中加入NaOH水溶液（5M，47.0μl，0.235mmol）。在80℃下搅拌反应混合物1.5小时。冷却至室温后，在真空中去除溶剂，并在减压条件下干燥。往DMSO（1mL）中的该残余物和3-(氨甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮HCl盐（28.8mg，0.153mmol）的搅拌溶液中加入PyBOP（91.8mg，0.176mmol）和Hunig碱（102μl，0.588mmol）。在23℃下搅拌反应混合物13.5小时。用水淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯萃取混合物。用水（2×10mL）和盐水（1×10mL）洗涤有机层。用MgSO4干燥有机层并过滤，在真空中浓缩滤液。用硅胶柱层析（NH-SiO2，乙酸乙酯/MeOH=50/1到8/1）纯化残余物，以得到作为白色固体的标题化合物（50.1mg，79%产率）。MS(ES)[M+H]533.3。
实施例1：合成化合物1：5-溴-3-(环戊基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.5g，1.75mmol）的乙腈（10mL）搅拌溶液中加入CS2CO3（1.02g，2.63mmol）和碘甲烷（1.45g，3.5mmol）。在80℃下搅拌所得的反应混合物4小时。完成时，在减压下除去溶剂，将残余物溶解于水中，并用乙酸乙酯萃取。通过硅胶柱层析纯化所得的原料粗品，以得到所需的化合物产品（0.39g），无需进一步纯化。
步骤2：合成5-溴-3-(环戊基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1当量）的乙醇（5mL）搅 拌溶液中加入NaOH水溶液（1当量），在60℃下搅拌反应4小时。完成时，在减压下除去乙醇，用1N HCl酸化残余物至pH值为6。用10%MeOH/DCM萃取水相。用硫酸钠干燥合并的有机层，在减压下除去溶剂，得到纯酸（产率50-60%）。向该酸（1当量）的DMSO（1.5mL）溶液中加入PyBOP（1.5当量），室温下搅拌反应物15分钟。然后加入3-(氨甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2当量），搅拌反应物过夜。完成时，加入水，过滤得到的固体沉淀并用水洗涤。然后用乙腈搅拌该固体10分钟，重新过滤以得到纯净的目标分子（产率50-60%）。LCMS：446.15（M+1）+；HPLC：94.48%（@254nm）（Rt；5.257）；1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ11.47（s，1H），8.20（t，1H，J=4.8Hz），7.25（s，1H），7.04（s，1H），5.85（s，1H），4.23（d，2H，J=4.8Hz），3.37-3.45（m，1H），2.49（3H合并于溶剂峰），2.17（s，3H），2.13（s，3H），2.10（s，3H），1.53-1.67（m，4H），1.38-1.50（m，4H）。
实施例2：合成化合物2：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下，向2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276.2mmol）的浓H2SO4（200mL）搅拌溶液中分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，151.8mmol），在室温下搅拌反应物料5小时。完成时，将反应物料倒入冰冷水中，过滤沉淀的固体，用水洗涤得到的残余物，并在真空下干燥，以得到用于进一步反应的所需的化合物（71.7g，99.9%）。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-硝基甲苯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1103mmol）的DMF（150mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626.63g，4415mmol）。得到的反应物料在60℃下加热8小时。完成时，过滤沉淀的固体，用乙醚洗涤残余物（5次）。将合并的有机层干燥，在减压下浓缩，以得到用于进一步反应的所需的化合物（302g，99%）。
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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在搅拌下，向5-溴-2-甲基-3-硝基甲苯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）搅拌溶液中加入铁粉（93.3g，1636mmol）和溶解于水（750mL）中的氯化铵（150g，2777mmol）。得到的反应物料在80℃下加热7小时。完成时，通过硅藻土过滤反应物料，同时用水和乙酸乙酯洗涤，滤液用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥，在减压下浓缩，得到所需的化合物。
步骤4：4-((5-溴-3-(甲氧基羰基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向上述粗制3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（5g，20.57mmol）和4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯（8.2g，41.15mmol）的甲醇（50mL）搅拌溶液中加入醋酸（1.2g，20.57mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后在0℃下加入氰基硼氢化钠（1.55g，24.6mmol），室温下搅拌反应过夜。完成时，在减压下去除溶剂，并用柱层析纯化粗原料，以得到化合物5（5g，57%）。
步骤5：4-((5-溴-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向4-((5-溴-3-(甲氧基羰基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（3g，7.06mmol）的乙腈（25mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（4.57g，14.11mmol）和碘甲烷（5g，35.2mmol）；得到的反应物料在80℃下加热7小时。完成时，将反应物料冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（2.5g，81%）。
步骤6：4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向4-((5-溴-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（2g，4.69mmol）的MeOH（20mL）溶液中加入NaOH（0.37g，9.38mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，减压除去乙醇，用稀HCl酸化直到pH值为6，并用柠檬酸调至pH值为4。使用乙酸乙酯实施萃取。将合并的有机层干燥浓缩，产生单独的酸（1.7g，90%）。
然后将此酸（1.7g，4.22mmol）溶解到DMSO（10mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（1.42g，9.38mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后加入PYBOP（3.66g，7.04mmol），继续搅拌过夜。完成后，将反应物料倒入冰中以得到固体，将其过滤并用乙腈洗涤，然后通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（1.3g，50%）。
步骤7：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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向4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（1.3g，2.39mmol）的DCM（10mL）搅 拌溶液冷却至0℃，并向其加入TFA（2mL）。反应物料在室温下搅拌1小时。完成时，将反应浓缩至干燥。用碳酸氢钠水溶液将残余物碱化至pH值为8，然后用20%MeOH/DCM萃取水层。将合并的有机层用硫酸钠干燥并浓缩，以得到所需的化合物（0.9g，85%）。LCMS:461.15(M+1)+;HPLC:98.52%(@254nm)(Rt;4.673;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.22(t,1H),7.19(s,1H),7.01(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4Hz),2.91(d,2H,J=11.6Hz),2.78(bs,1H),2.55(s,3H),2.32-2.35(m,2H),2.18(s,3H),2.10(s,6H),1.44-1.50(m,4H)。
实施例3：合成化合物3：5-氯-3-(环己基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下，向冷却的浓H2SO4（27mL）中逐份地加入5-氯-2-甲基苯甲酸（4g，23.39mmol）。10分钟后，在-10℃下逐滴加入硝化混合物{将浓HNO3（3.3g，52.68mmol）和浓H2SO4（4.4mL）混合来制备}。在-10℃下搅拌得到的反应物料30分钟。完成时，将反应混合物倒入冰冷水中，过滤沉淀的固体，用水洗涤并在真空下干燥，以得到所需的化合物（4.95g，99%）。
步骤2：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g，31.25mmol）的DMF（33mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（13.23g，125.18mmol）和碘甲烷（17.77g，125.2mmol）。将得到的反应物在60℃下加热4小时。完成时，向反应物中加入水，用DCM进行萃取。将合并的有机层干燥，在减压下浓缩并通过硅胶（60-120目）柱层析来纯化，得到所需的化合物（6g，83%）。
步骤3：3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6g，26.13mmol）的乙醇（60mL）搅拌溶液中边搅拌边加入铁粉（11.88g，208.4mmol）和溶解于水（60mL）中的氯化铵（6g，112.1mmol）。将得到的反应物在80℃下加热1小时。完成时，向反应物料中加入水，将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯萃取滤液。用水洗涤合并的有机层并干燥，在减压下浓缩，得到所需的化合物。
步骤4：5-氯-3-(环己基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，5.025mmol）和环己酮（0.739g，7.75mmol）的甲醇（10mL）搅拌溶液中加入乙酸（0.301g，5.02mmol），在室温下搅拌反应3小时。加入氰基硼氢化钠（390mg，0.00621mmol），搅拌反应过夜。完成时，减压去除溶剂，并通过柱层析纯化原料粗品，以得到所需的化合物（1.4g，被环己酮污染）。
步骤5：5-氯-3-(环己基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（6）：
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向5-氯-3-(环己基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.4g，0.0049摩尔）的乙腈（10mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（3.2g，0.0099摩尔）和碘甲烷（3.5g，0.0024摩尔）；在80℃下加热得到的反应物13小时。完成时，将反应物冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（800 mg，55%）。
步骤6：5-氯-3-(环己基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向化合物6（0.8g，2.71mmol）的EtOH（5mL）溶液中加入NaOH（0.16g，4.06mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下除去乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。干燥、浓缩合并的有机层，得到单独的酸（0.7g，91%）。
然后将该酸（0.7g，2.49mmol）溶解到DMSO（2mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.752g，4.98mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（1.9g，3.73mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应物倒入冰中以得到固体，将其过滤，用乙腈洗涤，然后柱纯化，以提供标题化合物（0.250g，25%）。
LCMS:416.35(M+1)+;HPLC:99.01%(@254nm)(Rt;5.408;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.20(t,1H,J=4.8Hz),7.05(d,1H,J=2Hz),6.88(d,1H,J=2Hz),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.8Hz),2.70(m,1H),2.56(s,3H),2.18(s,3H),2.12(s,3H),2.10(s,3H),1.75-1.35(m,7H),1.25-1.05(m,3H)。
实施例4：合成化合物4：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(1-特戊酰哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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在室温下，向5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺（0.05g，0.112mmol）的DMF（2mL）搅拌溶液中加入EDCI.HCl（0.064g，0.336mmol）、HOBt（0.03g，0.22mmol）、三乙胺（0.03g，0.336mmol）和特戊酸（0.023g，0.224mmol），并在相同温度下搅拌18小时。完成时，加入水，并用10%MeOH/DCM萃取。干燥、浓缩合并的有机层，得到原料粗品；然后将其通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（0.03g，56%）。LCMS:545.20(M+1)+;HPLC:98.60%(@254nm)(Rt;6.355;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.20(t,1H,J=4.4Hz),7.25(d,1H,J=2.8Hz),7.05(d,1H,J=1.2Hz),5.85(s,1H),4.23-4.25(m,4H),3.00(m,1H),2.76(t,2H,J=12.4Hz),2.54(s,3H),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.62-1.65(m,2H),1.42-1.48(m,2H),1.18(s,9H)。
实施例5：合成化合物5：5-溴-3-(环戊基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2,-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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向2-甲基-3-硝基苯甲酸（15g，82.80mmol）的浓H2SO4（60mL）混合物中加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（13.07g，45.71mmol），在室温下搅拌反应混合物5小时。然后将反应混合物缓慢倒入400mL冰冷水中。过滤沉淀出的固体，洗涤，并在真空下干燥所需的化合物（21g，98.22%）。
步骤2：3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（16g，61.54mmol）的DMF（160mL）搅拌溶液中加入碘甲烷（35.72g，248mmol）和碳酸钠（26.28g，248mmol）。在60℃下搅拌反应物料8小时。完成时，过滤反应物料，用乙酸乙酯洗涤无机固体残余物。在真空下浓缩合并的滤液直至干燥。将残余物重新溶解于乙酸乙酯中，并用5%碳酸氢钠溶液（700mL）洗涤，然后用5M HCl溶液（300mL）洗涤。有机层最后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩，以得到所需的化合物（16g，95%）。
步骤3：3-氨基-5-溴苯甲酸乙酯
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向3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯（17g，62.04mmol）的乙醇（85mL）搅拌溶液中加入NH4Cl溶液（17g在85mL水中，317.8mmol），然后加入铁粉（27.82g，498.12mmol）。在90℃下搅拌得到的反应物料1小时。完成时，过滤反应物料，并浓缩滤液直至干燥以得到固体，将其溶解于饱和碳酸氢钠溶液。用乙酸乙酯（3×50mL）萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层并浓缩，以得到所需的化合物（15g，99.14%）。
步骤4：3-溴-5-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯
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向3-氨基-5-溴苯甲酸乙酯（2g，8.73mmol）和环戊酮（2.2g，26.1mmol）的甲醇（20mL）搅拌溶液中加入醋酸（1.04g，17.4mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（1.37g，21.83mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，并通过柱层析纯化原料粗品，以得到所需的化合物（1.6g，61%）。
步骤5：5-溴-3-(环戊基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向3-溴-5-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（0.3g，0.96mmol）的DMF（5mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（0.628g，1.92mmol）和碘乙烷（0.748g，4.8mmol）；在80℃下加热得到的反应物料24小时。完成时，将反应物冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（0.150g，46%）。
步骤6：5-溴-3-(环戊基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-溴-3-(环戊基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.170g，0.75mmol）的EtOH（10mL）溶液中加入NaOH（0.03g，0.75mmol）水溶液，并在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除乙醇，使用稀HCl酸化至pH值为6。用乙酸乙酯进行萃取。干燥、浓缩合并的有机层，得到单独的酸（0.15g，92.59%）。
然后将该酸（0.15g，0.461mmol）溶解在DMSO（5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.14g，0.923mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.35g，0.692mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应物料倒入冰中以得到固体，将其过滤并用乙腈洗涤，然后通过HPLC纯化，以提供作为TFA盐的标题化合物（0.050g，24%）。LCMS:460.10 (M+1)+;HPLC:99.22%(@254nm)(Rt;5.115;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.24(s,1H),7.32(s,1H),7.09(s,1H),5.86(s,1H),4.24(d,2H,J=4.8Hz),3.47-3.48(m,1H),2.96(m,2H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.33-1.63(m,8H),0.78(t,3H,J=6.4Hz)。
实施例6：合成化合物7：5-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸的合成
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在-10℃下，分批将5-氯-2-甲基苯甲酸（4g，23.4mmol）加入冷却的浓H2SO4（27mL）中，并搅拌10分钟。在-10℃下逐滴加入硝化混合物{将浓HNO3（3.3g，52.68mmol）和浓H2SO4（4.4mL）混合来制备}。在-10℃下搅拌得到的混合物30分钟。完成时，将反应混合物倒入冰冷水中，通过过滤收集固体，用水洗涤并在真空条件下干燥，以得到5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（4.95g，99%）。
步骤2：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯的合成
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向用类似上述的方法制备的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g,31.3mmol）的DMF（33mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（13.2g，125mmol）和碘甲烷（17.8g， 125mmol）。在60℃下加热得到的化合物4小时。完成时，往混合物中加入水，使用DCM进行萃取。干燥合并的有机层，在减压条件下浓缩，并通过硅胶柱层析纯化，以得到5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6g，83.6%）。
步骤3：3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6g，26.1mmol）的乙醇（60mL）搅拌溶液中加入铁粉（11.9g，208mmol）和溶解于水（60mL）中的氯化铵（6g，112mmol）。在80℃下加热得到的混合物1小时。完成时，向混合物中加入水，通过硅藻土过滤反应混合物，并用乙酸乙酯萃取滤液。用水洗涤合并的有机层，干燥，并在减压条件下浓缩，以得到3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯。
步骤4：5-氯-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向3-氨基-5-氯-2-甲基-苯甲酸甲酯（1g，5.0mmol）和环戊酮（2.1g，25.0mmol）的甲醇（10mL）搅拌溶液中加入醋酸（0.6g，5.0mmol），在室温下搅拌混合物3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.78g，12.5mmol），反应搅拌过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，通过硅胶柱层析纯化粗原料，以得5-氯-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.2g，89%）。
步骤5：5-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向5-氯-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.5g，1.86mmol）的乙腈（5mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（1.22g，3.7mmol）和碘甲烷（1.32g，9.33mmol）。在80℃下加热得到的混合物12小时。完成时，将混合物冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到5-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.5g，95%）。
步骤6：5-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺的合成
向5-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.5g，1.77mmol）的MeOH（5mL）溶液中加入NaOH（0.106g，2.66mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除甲醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层得到单独的酸（0.4g，84%）。
然后将该酸溶解在DMSO（0.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.114g，0.74mmol）。在室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.29g，0.56mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将混合物倒入冰中以得到固体，将其过滤，用乙腈洗涤，然后柱纯化，以提供5-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（100mg，66%）。LCMS:402.15(M+1)+;HPLC:96.46%(@254nm)(Rt;5.289;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.19(t,1H,J=4.8Hz),7.13(d,1H,J=2Hz),6.91(d,1H,J=2Hz),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=5.2Hz),3.41-3.45(m,1H),2.50(3H合并于溶剂峰),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.38-1.67(m,8H)。
实施例7：合成化合物8：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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步骤1：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下逐份地向冷却的浓H2SO4（27mL）中加入5-氯-2-甲基苯甲酸（4g，23.39mmol）。10分钟后，在-10℃下逐滴加入硝化混合物{将浓HNO3（3.3g，52.68mmol）和浓H2SO4（4.4mL）混合来制备}。在-10℃下搅拌得到的反应物30分钟。完成时，将反应混合物倒入冰冷水中，过滤沉淀的固体，用水洗涤，在真空中干燥，以得到所需的化合物（4.95g，99%）。
步骤2：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g，31.25mmol）的DMF（33mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（13.23g，125.18mmol）和碘甲烷（17.77g，125.2mmol）。在60℃下加热得到的反应物料4小时。完成时，向反应物料中加入水，并用DCM实行萃取。干燥合并的有机层，在减压条件下浓缩，并通过硅胶柱层析（60-120目）纯化，以得到所需的化合物（6g，84%）。
步骤3：3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6g，26.13mmol）的乙醇（60mL）搅拌溶液中边搅拌边加入铁粉（11.88g，208.4mmol）和溶解于水（60mL）的氯化铵（6g，112.1mmol）。在80℃下加热得到的反应物料1小时。完成时，往反应物料中加入水，反应混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯萃取滤液。用水洗涤合并的有机层，干燥，在减压条件下浓缩，得到所需的化合物。
步骤4：4-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（6g，30.15mmol）和4-氧代哌啶-1-羧酸 叔丁酯（29g，150mmol）的甲醇（10mL）搅拌溶液中加入醋酸（1.8g，30.1mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（4.7g，75.3mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，通过柱层析纯化原料粗品，以得到所需的化合物（4g，30%）。
步骤5：4-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向4-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（4g，9.09mmol）的乙腈（50mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（5.9g，18.09mmol）和碘甲烷（6.95g，48.94mmol）；在80℃下加热得到的反应物料12小时。完成时，将反应物料冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（2.2g，53%）。
步骤6：4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向4-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.5g，1.26mmol）的MeOH（5mL）溶液中加入NaOH（0.75g，1.86mmol）水溶液，并在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层以得到单独的酸（0.4g，84%）。
然后将该酸（0.4g，1.04mmol）溶解于DMSO（1mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.316g，2.09mmol）。在室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.816g，1.56mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应物料倒入冰中以得到固体，将其过滤，用乙腈洗涤，然后柱纯化，以提供所需的化合物（0.225g，41%）。
步骤7：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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将4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.2g，0.632mmol）的DCM（5mL）溶液冷却至0℃，并向其中加入TFA（0.15mL）。室温下搅拌反应物1小时。完成时，浓缩反应至干燥。通过溶剂洗涤纯化残余物，以得到作为其TFA盐的所需的化合物（0.14g，53%）。LCMS:417.25(M+1)+;HPLC:96.16%(@254nm)(Rt;4.677;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.49(bs,1H),8.20(t,1H),8.18(bs,1H),7.19(s,1H),6.96(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,2H,J=4.4Hz),3.25(d,2H,J=12Hz),3.08(m,1H),2.88(bs,2H),2.56(s,3H),2.18(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,3H),1.76(bs,4H)。
实施例8：合成化合物10：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸的合成
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在室温下，向2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276mmol）的浓H2SO4（200mL）搅拌溶液中逐份加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，152mmol），在室温下继续搅拌5小时。完成时，将混合物倒入冰冷水中，过滤得到的固体，用水洗涤，在真空条件下干燥，以得到5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（71.7g，99.9%）。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯的合成
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向用类似上述的方法制备的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1103mmol）的DMF（150mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626.6g，4415mmol）。在60℃下加热得到的化合物8小时。完成时，通过过滤去除固体，用乙醚洗涤残余物（5次）。干燥合并的有机层，在减压条件下浓缩，以得到5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（302g，99%）。
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）搅拌溶液中加入铁粉（93.3g，1636mmol）和在水（750mL）中的氯化铵（150g，2777mmol）溶液。在80℃下加热得到的混合物7小时。完成时，通过硅藻土过滤混合物；用水和乙酸乙酯洗涤硅藻土，用乙酸乙酯萃取滤液。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层，以得到3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯。
步骤4：5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯的合成
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向3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（2g，8.23mmol）和二氢-2H-吡喃-4(3)-酮（1.06g，10.6mmol）的甲醇（20mL）搅拌溶液中加入醋酸（0.5g，8.23mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后在0℃下加入氰基硼氢化钠（0.622g，9.87mmol），室温下搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，并通过柱层析纯化原料 粗品，以得到5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（1.6g，61%）。
步骤5：5-溴-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.4g，1.26mmol）的乙腈（15mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（0.79g，2.44mmol）和碘甲烷（0.86g，6.11mmol）；在80℃下加热得到的混合物7小时。完成时，将混合物冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到5-溴-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.33g，80%）。
步骤6：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺的合成
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向化合物6（0.8g，2.4mmol）的MeOH（20mL）溶液中加入NaOH（0.19g，4.89mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。干燥、浓缩合并的有机层以得到单独的酸（0.70g，92%）。
然后将该酸（0.7g，2.24mmol）溶解于DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.74g，4.89mmol）。在室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（1.9g，3.6mmol），继续搅拌过夜。完成后，将混合物倒入冰中以得到固体。过滤固体，用乙腈洗涤，然后通过柱层析纯化，以得到5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺（0.53g，54%）。LCMS:462.23(M+1)+;HPLC:98.57%(@254nm)(Rt;5.276;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%,保持1.5分钟, 9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.20(t,1H,J=4.8Hz),7.24(d,1H,J=2Hz),7.04(d,1H,J=2Hz),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.8Hz),3.84(d,2H,J=10.8Hz),3.22-3.28(m,2H),2.96(m,1H),2.56(s,3H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.52-1.61(m,4H)。
实施例9：合成化合物13：2,5-二氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺
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步骤1：2,5-二氯-3-硝基苯甲酸的合成：
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在-10℃下，向冷却的浓H2SO4（50mL）中分批加入2,5-二氯苯甲酸（5g，26.2mmol）。10分钟后，在-10℃下逐滴加入硝化混合物{将浓HNO3（2.5mL）和浓H2SO4（10mL）混合来制备}。在-10℃下搅拌得到的反应混合物2小时。完成时，将反应混合物倒入冰冷水中，固体沉淀出来。通过过滤收集该固体，用水洗涤，并在真空下干燥，以得到2,5-二氯-3-硝基苯甲酸（3.4g，65%）。
步骤2：2,5-二氯-3-硝基苯甲酸甲酯的合成：
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向2,5-二氯-3-硝基苯甲酸（3.2g，13.67mmol）的DMF（30mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（4.3g，40.56mmol）和碘甲烷（9.7g，68.30mmol）。在60℃下加热反应混合物18小时。完成时，向反应混合物中加入水，用DCM萃取产物。在减压条件下干燥、浓缩合并的有机层以得到2,5-二氯-3-硝基苯甲酸甲酯（3g，90%）。
步骤3：3-氨基-2,5-二氯苯甲酸甲酯的合成：
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向2,5-二氯-3-硝基苯甲酸甲酯（3.3g，13.1mmol）的乙醇（20mL）搅拌溶液中加入铁粉（7g，82.35mmol）和溶解于水（20mL）中的氯化铵（3.5g，64.81mmol）。在80℃下加热反应混合物3小时。完成时，向反应混合物加入水，通过硅藻土过滤来去除固体。用乙酸乙酯萃取滤液。用水洗涤合并的有机层，干燥，在减压条件下浓缩，以得到3-氨基-2,5-二氯苯甲酸甲酯（2.5g，66%）。
步骤4：2,5-二氯-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯的合成：
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向3-氨基-2,5-二氯苯甲酸甲酯（2,5g，11.5mmol）和环戊酮（4.8g，57.1mmol）的甲醇（5mL）搅拌溶液中加入醋酸（0.6g，11.3mmol），在室温下继续搅拌3小时。然后加入氰基硼氢化钠（1.4g，22.2mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，通过柱层析纯化产物，以得到2,5-二氯-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（0.275g，8%）。
步骤5：2,5-二氯-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯的合成：
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向2,5-二氯-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（0.275g，0.958mmol）的乙腈（5mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（0.622g，1.9mmol）和碘甲烷（0.689g，4.78mmol）。在80℃下加热反应混合物18小时。完成时，将反应冷却至室温并过滤。用乙酸乙酯洗涤残余物，并浓缩滤液，以得到2,5-二氯-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.27g，93%）。
步骤6：2,5-二氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺的合成
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向2,5-二氯-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.25g，0.83mmol）的MeOH（5mL）溶液中加入NaOH（0.50g，1.24mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除甲醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取产物。干燥并浓缩合并的有机层，以得到所需的酸（0.21g，88%）。
然后将该酸（0.21g，0.755mmol）溶解在DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.3g，1.97mmol）。在室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.757g，1.45mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应混合物倒入冰中以得到固体。过滤固体，用乙腈洗涤。通过制备型HPLC将化合物进一步纯化，以得到作为TFA盐的2,5-二氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺（0.1g，36%）。LCMS:422.10(M+1)+;HPLC:97.58%(@254nm)(Rt;6.973;方法:柱:YMCODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.35(t,1H),7.23(s,1H),6.98(s,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.66(m,1H),2.59(s,3H),2.18(s,3H),2.10(s,3H),1.70(bs,2H),1.61(bs,2H),1.48(bs,4H)。
实施例10：合成化合物14：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺
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化合物14
步骤1：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下逐份地向冷却的浓H2SO4（27mL）中加入2-甲基-3-硝基苯甲酸（4g，23.39mmol）。10分钟后，在-10℃下逐滴加入硝化混合物{将浓HNO3（3.3g，52.68mmol）和浓H2SO4（4.4mL）混合来制备}。在-10℃下搅拌得到的反应物料30分钟。完成时，将反应混合物倒入冰冷水中，过滤沉淀的固体，用水洗涤并在真空下干燥，得到所需的化合物（4.95g，99%）。
步骤2：5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g，31.25mmol）的DMF（33mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（13.23g，125.18mmol）和碘甲烷（17.77g，125.2mmol）。在60℃下加热得到的反应物料4小时。完成时，向反应物料中加入水，并用DCM实行萃取。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层，通过硅胶柱层析（60-120目）纯化，以得到所需的化合物（6g，84%）。
步骤3：3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6g，26.13mmol）的乙醇（60mL）搅拌溶液中边搅拌边加入铁粉（11.88g，208.4mmol）和溶解于水（60mL）中的氯化铵（6g，112.1mmol）。在80℃下加热得到的反应物料1小时。完成时，向反应物料中加入水，通过硅藻土过滤反应混合物，用乙酸乙酯萃取滤液。用水洗涤合并的有机层，干燥，在减压条件下浓缩，以得到照现状使用的所需的化合物。
步骤4：5-氯-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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向3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，5.025mmol）和二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮（753mg，7.537mmol）的甲醇（10mL）搅拌溶液中加入醋酸（301mg，5.025mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（373mg，6.03mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，并通过柱层析纯化原料粗品，以得到所需的化合物（700mg，49%）。
步骤5：5-氯-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（700mg，2.473mmol）的乙腈（10mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（1.61g，4.946mmol）和碘甲烷（1.82g，0.8ml，12.36mmol）；在80℃下加热得到的反应物13小时。完成时，将反应物料冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（480mg，65%）。
步骤6：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺
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向5-氯-2-甲基-3-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.48g，1.616mmol）的EtOH（2mL）溶液中加入NaOH（96mg，2.424mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层以得到单独的酸（0.4g，87%）。
然后将该酸（0.4g，1.41mmol）溶解于DMSO（1mL）中，并向其中加入 3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.429g，2.82mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（1.10g，2.12mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应物料倒入冰中以得到固体，将其过滤，用乙腈洗涤，然后柱纯化，以提供标题化合物（0.17g，29%）：LCMS:418.25(M+1)+;HPLC:97.72%(@254nm)(Rt;5.022;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.48(s,1H),8.21(t,1H,J=4.4Hz),7.13(s,1H),6.92(s,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.84(d,2H,J=10.8Hz),3.25(t,2H,J=11.2Hz),2.96(m,1H),2.56(s,3H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.65-1.52(m,4H)。
实施例11：合成化合物15：(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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步骤1：5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（5g，20.6mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（5.6g，26.7mmol）的甲醇（50mL）搅拌溶液中加入醋酸（1.2g，20.6mmol），室温下搅拌混合物3小时。然后加入氰基硼氢化钠（1.6g，26.7mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，并通过柱层析纯化产物，以得到化合物5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（3g，33.3%）。
步骤2：5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.5g，4.6mmol）的乙腈（15mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（2.63g，8.1mmol）和碘甲烷（2.86g，20.32mmol）。在80℃下加热混合物7小时。完成时，将反应冷却至室温，过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物。浓缩滤液以得到5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.5g）。
步骤3：(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯的合成
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向5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.5g，3.3mmol）的MeOH（20mL）溶液中加入NaOH（0.26g，6.62mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除甲醇，用稀HCl酸化混合物至pH值为6，并用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取产物。干燥、浓缩合并的有机层以得到所需的酸（1.33g，92%）。
然后将该酸（1.3g，2.96mmol）溶解在DMSO（10mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.34g，2.2mmol）。在室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.88g，1.7mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将混合物倒入冰中以得到固体。过滤固体，用乙腈洗涤，然后通过柱层析纯化，以得到(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.5g，26%）。LCMS:575.80(M+1)+;HPLC:99.99%(@254nm)(Rt;6.094,7.065[非对映异构体的混合物];方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水 溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.20(d,1H,J=3.6Hz),7.21(s,1H),7.18(s,1H),7.01(s,1H),6.66(d,1H,J=7.2Hz),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=3.2Hz),3.44(bs,1H),3.15(bs,1H),2.55-2.66(m,3H),2.18(s,3H),2.10(s,6H),1.76-1.79(m,2H),1.51-1.63(m,3H),1.36-1.38(m,11H),1.07-1.16(m,1H)。
实施例12：合成化合物16：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下，向2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276.2mmol）的浓H2SO4（200mL）搅拌溶液中逐份加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，151.8mmol），在室温下搅拌反应物料5小时。完成时，将反应物料倒入冰冷水中，过滤沉淀的固体，用水洗涤得到的残余物，并在真空下干燥，得到所需的化合物（71.7g，100%）。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1103mmol）的DMF（150mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626.63g，4415mmol）。在60℃下加热得到的反应物料8小时。完成时，过滤沉淀的固体，用乙醚洗涤残余 物（5次）。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层，得到所需的粗制化合物（302g，99%），其不需要进一步纯化就使用。
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基甲苯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）搅拌溶液中边搅拌边加入铁粉（93.3g，1636mmol）和溶解于水（750mL）中的氯化铵（150g，2777mmol）。在80℃下加热得到的反应物7小时。完成时，通过硅藻土过滤反应物料，同时用水和乙酸乙酯洗涤，用乙酸乙酯萃取滤液。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层，得到照现状进一步使用的所需的化合物。
步骤4：5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（0.3g，1.33mmol）和环戊酮（0.56g，6.6mmol）的甲醇（3mL）搅拌溶液中加入醋酸（0.159g，2.6mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.208g，3.3mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，原料粗品照现状使用于下一步中。
步骤5：5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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将5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，3.22mmol）、Cs2CO3（2.10g，6.45mmol）和碘甲烷（2.3g，16.12mmol）的乙腈（15mL）溶液在80℃下加热14小时。起始原料完全耗尽后，过滤反应混合物。浓缩滤液，并通过柱层析纯化得到的残余物，以提供所需的化合物（0.9g，86%）。
步骤6：5-溴-3-(环戊基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.9g，2.76mmol）的EtOH（9mL）和水（2.2mL）溶液中加入NaOH水溶液（0.166g，4.15mmol），在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层来得到单独的酸（0.85g，98%）。
然后将该酸（0.85g，2.73mmol）溶解于DMSO（10mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.83g，5.46mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（2.13g，4.09mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应物料倒入冰中以得到固体，将其过滤，先用乙腈再用乙醚洗涤，以得到所需的化合物（0.450g，37%）。
步骤7：4-(3-(环戊基(甲基)氨基)-5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯
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向5-溴-3-(环戊基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（1.0g，2.24mmol）和硼酸（0.833g，2.69mmol）的二氧六环（20mL）脱气溶液中加入Pd(PPh3)4（0.260g，0.224mmol，0.1eq），再用氩气净化溶液20分钟。向反应混合物中加入在1mL水中的Na2CO3（0.857，8.08mmol）水溶液，再用氩气净化反应混合物20分钟。反应在100℃下加热90分钟。然后将反应混合物冷却至室温，然后倒入冷水中，用二氯甲烷萃取。通过柱层析纯化粗制化合物以提供所需的化合物（0.900g，64%）。
步骤8：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺
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向4-(3-(环戊基(甲基)氨基)-5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基苯基)-5,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯（0.800g，1.45mmol）的DCM搅拌溶液中加入TFA（3mL），在室温下搅拌反应混合物2小时。完成时，将反应浓缩至干燥。用碳酸氢钠水溶液碱化残余物至pH值为8，用20%MeOH/DCM萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机层并浓缩以得到原料粗品，将该原料粗品通过制备型HPLC纯化，以得到所需的化合物（0.620g，95%）。
步骤9：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺
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将3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺（0.100g，0.223mmol）溶解于甲醇（5mL）中，冷却至0℃，加入福尔马林（0.067g，0.19mL，2.23mmol）。在同样温度下搅拌得到的反应物30分钟。把氰基硼氢化钠（0.041g，0.66mmol）加入到上述反应物料中，在室温下搅拌4小时。完成后，在减压条件下去除溶剂，并向残余物中加入水，用DCM实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层，并通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（0.065g，63%）：LCMS:463.40(M+1)+;HPLC:98.79%(@254nm)(Rt;3.911;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.43(s,1H),8.04(t,1H,J=4.8Hz),7.17(s,1H),6.95(s,1H),6.07(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=4.8Hz),3.45(m,1H),2.98(bs,2H),2.53(m,2H),2.42(bs,2H),2.26(s,3H),2.18(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,3H), 1.67(m,2H),1.59(m,2H),1.49(m,2H),1.40(m,2H)。
实施例13：合成化合物17：3-((1-乙酰基哌啶-4-基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺（0.2g，0.447mmol）溶解于DMSO（2mL）中，向其中加入醋酸（0.054g，0.896mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.342g，0.672mmol），继续搅拌过夜。结束后，将反应物料倒入冰中，并用10%MeOH/DCM进行萃取。干燥、浓缩合并的有机层以得到原料粗品，然后将其通过硅胶柱层析（100-200目）纯化，以得到所需的化合物（0.15g，17%）。LCMS:503.20(M+1)+;HPLC:96.06%(@254nm)(Rt;5.143;方法:柱:YMCODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.48(s,1H),8.21(t,1H,J=4.8Hz),7.23(d,1H,J=1.6Hz),7.04(d,1H,J=1.6Hz),5.85(s,1H),4.32(d,1H,J=12.4Hz),4.23(d,2H,J=4.8Hz),3.77(d,1H,J=13.2Hz),2.98(t,2H,J=11.2Hz),2.54(s,3H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.97(s,3H),1.53-1.60(m,4H),1.38-1.41(m,1H)。
实施例14：合成化合物18：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(1-甲基哌啶-4-基)苯甲酰胺
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向3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(1-甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺（0.045g，0.097mmol）的乙醇溶液中加入10%Pd/C，在膨胀压力的H2下搅拌反应。起始原料完全耗尽后，通过硅藻土过滤反应混合物。浓缩滤液，在乙腈中磨碎并过滤，以提供所需的化合物（0.030g，66%）：LCMS:465.40(M+1)+;HPLC:95.39%(@254nm)(Rt;3.884;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.44(s,1H),7.98(t,1H),7.00(s,1H),6.77(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=4.4Hz),3.42(m,1H),2.84(d,2H,J=11.2Hz),2.47(s,3H),2.37(m,1H),2.18(s,6H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.93(t,2H,J=10.8Hz),1.70-1.55(m,8H),1.48(m,2H),1.38(m,2H)。
实施例15：合成化合物20：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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步骤1：2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸的合成
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在-10℃下，向冷却的浓H2SO4（27mL）中逐份加入2-甲基-5-(三氟甲基)苯 甲酸（4g，19.6mmol）。10分钟后，在-10℃下逐滴加入硝化混合物{将浓HNO3（2.77g，44.44mmol）和浓H2SO4（3.6mL）混合来制备}。在-10℃下搅拌得到的溶液30分钟。完成时，将反应混合物倒入冰冷水中。过滤固体，用水洗涤并在真空下干燥，以得到2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸（4.95g，99%）。
步骤2：2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的合成
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向2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸（1g，4.01mmol）的DMF（3mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（0.63g，6.02mmol）和碘甲烷（1.14g，8.03mmol）。在60℃下加热得到的混合物4小时。完成时，向反应中加入水，用DCM萃取产物。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层，并通过硅胶柱层析纯化，以得到2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（1g，95.2%）。
步骤3：3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的合成
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向2-甲基-3-硝基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（5.6g，20.97mmol）的乙醇（40mL）搅拌溶液中加入铁粉（4.67g，85.16mmol）和溶解于水（30mL）中的氯化铵（5.6g，104.6mmol）。在80℃下加热得到的混合物1小时。完成时，向反应中加入水，通过硅藻土过滤混合物。用乙酸乙酯萃取滤液。然后干燥，在减压条件下浓缩合并的有机层，以得到3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。
步骤4：3-(环戊基氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的合成
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向3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（2.5g，10.7mmol）和环戊酮（4.5g，53.49mmol）的甲醇（25mL）搅拌溶液中加入醋酸（1.98g，21.44mmol）。3小时后，加入氰基硼氢化钠（1.68g，24.3mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，通过柱层析纯化原料粗品，以得到3-(环戊基氨基)-2-甲 基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（1.8g，55.9%）。
步骤5：3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯的合成
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向3-(环戊基氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（1.6g，5.38mmol）的乙腈（25mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（3.5g，10.7mmol）和碘甲烷（3.8g，26.8mmol）。在80℃下加热混合物8小时。完成时，将反应冷却至室温并过滤。用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，以得到3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯。
步骤6：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的合成
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向3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（2g，6.34mmol）的MeOH（20mL）溶液中加入NaOH（0.762g，15.4mmol）水溶液，60℃下搅拌混合物1小时。反应完成后，在减压条件下去除甲醇，用稀HCl酸化残余物至pH值为6，并用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取产物。干燥并浓缩合并的有机层以得到所需的酸（1.5g，78%）。
然后将该酸（0.5g，1.69mmol）溶解于DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.505g，3.32mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后加入PYBOP（1.29g，2.49mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将混合物倒入冰中以得到固体。过滤固体，并先用乙腈再用乙醚洗涤，以提供化合物3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺（100mg，14%）。分析数据：LCMS:436.20(M+1)+;HPLC:89.22%(@254nm)(Rt;6.094;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量: 10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.30(t,1H),7.37(s,1H),7.18(s,1H),5.86(s,1H),4.26(d,2H,J=4.4Hz),3.51(m,1H),2.53(s,3H),2.25(s,3H),2.19(s,3H),2.10(s,3H),1.41-1.69(m,8H)。
实施例16：化合物21的合成：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：3-氨基-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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在0℃下，向3-氨基-2-甲基苯甲酸（5g，33.1mmol）的甲醇（50mL）搅拌溶液中加入浓H2SO4（5mL），并在70℃下加热该混合物22小时。完成时，在减压条件下去除甲醇，然后加入饱和碳酸氢钠溶液，用10%MeOH/DCM萃取产物。干燥、浓缩合并的有机层以生产3-氨基-2-甲基苯甲酸甲酯（5g，91%）。
步骤2：3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向3-氨基-2-甲基苯甲酸甲酯（2g，12.1mmol）和环戊酮（5g，60.6mmol）的甲醇（20mL）搅拌溶液中加入醋酸（0.72g，12.12mmol），室温下搅拌反应3小时。加入氰基硼氢化钠（1.13g，18.2mmol），反应搅拌过夜。完成时，减压条件下去除溶剂，通过柱层析纯化产物以得到3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（2.2g，78%）。
步骤3：3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的合成
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向3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（2.2g，9.44mmol）的乙腈（20mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（6.13g，18.8mmol）和碘甲烷（6.7g，47.2mmol）。在80℃下加热得到的混合物12小时。完成时，将混合物冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤。浓缩滤液，然后通过柱层析纯化以得到3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（2g，85%）。
步骤4：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺的合成
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向3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（2g，8.09mmol）的MeOH（20mL）溶液中加入NaOH（0.48g，12.14mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除甲醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层以得到想要的酸（1.3g，69%）。
然后将该酸（0.3g，1.28mmol）溶解于DMSO（5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.39g，2.5mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.99g，1.92mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将混合物倒入冰中以得到固体，将其过滤，用乙腈洗涤，然后柱纯化，以提供3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.020g，4%）。
分析数据：LCMS:368.15(M+1)+;HPLC:99.49%(@254nm)(Rt;4.186;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6, 400MHz)δ11.43(s,1H),8.00(t,1H,J=4Hz),7.09-7.16(m,2H),6.90(d,1H,J=6.8Hz),5.84(s,1H),4.25(d,2H,J=5.2Hz),3.41(t,1H,J=6.8Hz),2.47(s,3H),2.18(d,6H,J=4.4Hz),2.10(s,3H),1.58-1.67(m,4H),1.37-1.52(m,4H)。
实施例17：化合物23的合成：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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将5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺（0.08g，0.192mmol）溶解于甲醇（5mL）中，并冷却至0℃，加入福尔马林（0.028g，0.965mmol）。同样温度下搅拌得到的反应物料30分钟。向上述反应物中加入氰基硼氢化钠（0.023g，0.38mmol），室温下搅拌4小时。完成后，减压条件下去除溶剂，向残余物中加入水，用DCM实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层，并通过柱层析纯化来得到所需的化合物（0.02g，24%）：LCMS:431.25(M+1)+;HPLC:98.80%(@254nm)(Rt;4.757;方法:柱:YMCODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.20(t,1H),7.15(d,1H,J=1.2Hz),6.94(d,1H,J=2Hz),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=4.8Hz),3.05(bs,2H),2.88(bs,1H),2.55(s,3H),2.44(bs,2H),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.68(bs,4H)。
实施例18：合成化合物25：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下，向2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276.2mmol）的浓H2SO4（200mL）搅拌溶液中逐份加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，151.8mmol），室温下搅拌反应物5小时。完成时，反应物倒入冰冷水中，过滤沉淀的固体，用水洗涤得到的残余物，真空下干燥，以得到所需的化合物（71.7g，100%）。
5-溴-2-甲基-3-硝基甲基苯的合成
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1103mmol）的DMF（150mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626.63g，4415mmol）。在60℃下加热得到的反应物8小时。完成时，将沉淀的固体过滤，用乙醚洗涤残余物（5次）。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层，得到所需的粗制化合物（302g，99%）。
步骤2：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基甲苯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）搅拌溶液中边搅拌边加入铁粉（93.3g，1636mmol）和溶解于水（750mL）的氯化铵（150g，2777mmol）。在80℃下加热得到的反应物料7小时。完成时，通过硅藻土过滤反应物料，同时用水和乙酸乙酯洗涤，用乙酸乙酯萃取滤液。干燥、在减压条 件下浓缩合并的有机层，得到所需的化合物。
步骤3：5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（0.3g，1.33mmol）和环戊酮（0.56g，6.6mmol）的甲醇（3mL）搅拌溶液中加入醋酸（0.159g，2.6mmol），室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.208g，3.3mmol），搅拌反应过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂以得到所需的化合物。
步骤4：5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.7g，2.25mmol）的乙腈（15mL）搅拌溶液中加入碳酸铯（1.47g，4.50mmol）和碘甲烷（1.6g，11.26mmol）；在80℃下加热得到的反应物料7小时。完成时，将反应物料冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后通过柱层析纯化，以得到所需的化合物（0.6g，82%）。
步骤5：5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯的MeOH（1.5mL）溶液中加入NaOH（0.11g，2.75mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在 减压条件下去除乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层以得到单独的酸（0.5g，87%）。
然后将该酸（0.5g，1.60mmol）溶解于DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.49g，3.22mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（1.25g，2.41mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应物倒入冰中以得到固体，将其过滤，并先用乙腈再用乙醚洗涤，以提供所需的化合物（0.315g，44%）。
步骤6：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯甲酰胺
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用氩气净化5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（1当量）、(2,2,6,6-四甲基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)硼酸（1.2当量）和Pd(PPh3)4（0.1当量）的1,4-二氧六环（4mL）溶液10分钟。然后，向其中加入2M Na2CO3溶液（3.6当量），再用氩气净化10分钟。在100℃下搅拌反应混合物2小时。反应完成后，向其中加入水，用DCM实行萃取。用水洗涤合并的有机层，用无水Na2SO4干燥，并过滤、在减压条件下浓缩，以得到原料粗品，其用制备型HPLC纯化，以得到作为其TFA盐的所需的化合物（0.045,23%）。LCMS:505.39(M+1)+;HPLC:99.95%(@254nm)(Rt;4.091;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(MeOD,400MHz)δ7.70(s,1H),7.46(s,1H),6.21(s,1H),6.13(s,1H),4.48(s,2H),4.23(bs,1H),3.14(s,3H),2.69(s,2H),2.42(s,3H),2.39(s,3H),2.24(s,3H),1.92(,2H),1.81(m,2H),1.67(m,4H),1.60(s,6H),1.53(s,6H)。
实施例19：合成化合物26：(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3- 基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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向2-甲基-3-硝基苯甲酸（15g，82.80mmol）的浓H2SO4（60mL）混合物中加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（13.07g，45.71mmol），室温下搅拌反应混合物5小时。反应完成后，将反应混合物缓慢倒入冰冷水（400mL）中。通过过滤收集沉淀物以得到所需的化合物（21g，98.22%）。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（16g，61.54mmol）的DMF（160mL）搅拌溶液中加入碘甲烷（35.72g，248mmol）和碳酸钠（26.28g，248mmol）。在60℃下搅拌得到的反应物料8小时。完成时，将反应物料过滤，用乙酸乙酯洗涤无机固体残余物。在真空下浓缩合并的滤液直至干燥。在乙酸乙酯中重新溶解残余物，并用5%碳酸氢钠溶液（700mL）洗涤，然后用5M HCl溶液（300mL）洗涤。最后用盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以得到所需的化合物（16g，94.50%）。
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（17g，62.04mmol）的乙醇（85mL）搅拌溶液中加入NH4Cl溶液（85mL水中17g，317.8mmol），然后加入铁粉（27.82 g，498.11mmol）。在90℃下搅拌得到的反应物料1小时。完成时，过滤反应物，浓缩滤液直至干燥以得到固体，将该固体溶解至饱和的碳酸氢钠溶液中。用乙酸乙酯萃取水层。用硫酸钠干燥并浓缩合并的有机层，以得到所需的化合物4（15g，99%）。
步骤4：5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（5g，20.57mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（5.67g，26.74mmol）的甲醇（50mL）搅拌溶液中加入醋酸（1.2g，20.57mmol），室温下搅拌反应4小时。然后加入氰基硼氢化钠（1.68g，26.74mmol），搅拌反应18小时。完成时，在减压条件下去除溶剂；加入水，用DCM萃取。干燥、浓缩合并的有机层，并通过硅胶柱层析纯化（100-200目）以得到所需的化合物（3g，33%）。
步骤5：(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.5g，3.41mmol）的MeOH（20mL）溶液中加入NaOH（0.247g，6.83mmol）水溶液，60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用DCM实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层来得到单独的酸（1.28g，89%）。
然后将该酸（1.28g，3.01mmol）溶解于DMSO（10mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（1.03g，6.83mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（2.6g，5.12mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，将反应物料倒入冰中，用5%MeOH/DCM萃取。干燥、浓缩合并的有 机层以得到粗制固体，其通过柱层析纯化以得到所需的化合物（0.75g，45%）。LCMS:561.15(M+1)+;HPLC:99.99%(@254nm)(Rt;6.876,7.080[非对映异构体的混合物];方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.44(s,1H),8.07(t,1H,J=4.8Hz),6.77(d,1H,J=7.6Hz),6.66(s,1H),6.51-6.54(m,1H),5.84(s,1H),4.71(d,1H,J=7.6Hz),4.21-4.22(m,2H),3.44(bs,1H),3.19(bs,1H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.93-2.03(m,5H),1.78(s,1H),1.56-1.72(m,3H),1.37(s,9H),1.26-1.31(m,2H)。
实施例20：合成化合物28：5-溴-3-(环己基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下，向2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276.2mmol）的浓H2SO4（200mL）搅拌溶液中逐份加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，151.8mmol），室温下搅拌反应物5小时。完成时，将反应物料倒入冰冷水中，过滤沉淀的固体，用水洗涤得到的残余物并在真空下干燥，以得到所需的化合物（71.7g，100%）。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-硝基甲基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1103mmol）的DMF（150mL）搅拌溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626.63g，4415mmol）。在60℃下加热得到的反应物料8小时。完成时，过滤沉淀的固体，用乙醚洗涤残余物（5次）。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层，以得到所需的化合物（302g，99%）。
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基甲基苯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）搅拌溶液中边搅拌边加入铁粉（93.3g，1636mmol）和溶解于水（750mL）中的氯化铵（150g，2777mmol）。在80℃下加热得到的反应物料7小时。完成时，通过硅藻土过滤反应物，同时用水和乙酸乙酯洗涤，用乙酸乙酯萃取滤液。干燥、在减压条件下浓缩合并的有机层以得到所需的化合物，其直接用于下一步中。
步骤4：5-溴-3-(环己基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（0.3g，1.33mmol）和环己酮（0.64g，6.6mmol）的甲醇（3mL）搅拌溶液中加入醋酸（0.159g，2.6mmol），室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.208g，3.3mmol），反应搅拌过夜。完成时，在减压条件下去除溶剂，并直接用于下一步中。
步骤5：5-溴-3-(环己基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-溴-3-(环己基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.2g，0.61mmol）的MeOH（5mL）溶液中加入NaOH（0.049g，1.23mmol）水溶液，在60℃下搅拌1小时。反应完成后，在减压条件下去除乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调节至pH值为4。用乙酸乙酯实行萃取。干燥、浓缩合并的有机层来得到单独的酸（0.17g，89%）。
然后将该酸（0.17g，0.54mmol）溶解于DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.099g，0.65mmol）。室温下搅拌反应混合物15分钟，然后向其中加入PYBOP（0.42g，0.817mmol），继续搅拌过夜。反应完成后，反应物倒入冰中以得到固体，通过制备型HPLC将其纯化以提供作为其TFA盐的所需的化合物（0.042g，15%）。LCMS:446.16(M+1)+;HPLC:99.85%(@254nm)(Rt;6.918;方法:柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:8分钟内5%B至95%B,保持1.5分钟,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.08(s,1H),6.66(s,1H),6.51(d,1H,J=0.8Hz),5.84(s,1H),4.70(s,1H),4.21(d,2H,J=4.4Hz),3.24(s,1H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.94(s,3H),1.88(d,2H,J=10Hz),1.69-1.72(m,3H),1.22-1.36(m,5H)。
实施例21：合成化合物30：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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化合物30
步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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室温下，向搅拌后的2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276.2mmol）的浓硫酸（200mL）溶液中分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑二烷酮（43.4g，151.8mmol），将反应混合物在室温下搅拌5小时。反应结束后，反应混合物加入到冰水中，将析出的固体过滤，用水洗涤所得残余物，真空干燥后得到需要的化合物（71.7g，99.9%），所得化合物可用于下一步反应。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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室温下，向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1103mmol）的DMF（150mL）溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626.63g，4415mmol）。所得反应混合物在60℃下加热8小时。反应结束后，过滤固体沉淀物，残余物用乙醚洗涤（5次）。对合并的有机层进行干燥和减压浓缩，得到所需的化合物（302g，99%）。
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）溶液中在搅拌下加入溶于水（750mL）中的氯化铵（150g，2777mmol）和铁粉（93.3g，1636mmol）。所得反应混合物在80℃下加热7小时。反应结束后，反应混合物通过硅藻土过滤，并用水和乙酸乙酯洗涤，滤液用乙酸乙酯萃取。对合并的有机相层进行干燥和减压浓缩，得到所需化合物。
步骤4：5-溴-2-甲基-3-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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室温下，向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（2g，8.23mmol）和1-甲基哌啶-4-酮（1.86g，16.46mmol）的甲醇（20mL）溶液中加入醋酸（0.5g，8.23mmol），并在室温下搅拌3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.622g，9.87mmol）并搅拌反应过夜。反应结束后，减压除去溶剂，粗品经柱层析纯化后得到所需化合物（0.9g，33%）。
步骤5：5-溴-2-甲基-3-(甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-((1-甲基哌啶-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.6g，1.76mmol）的乙腈（15mL）溶液中加入碳酸铯（1.14g，3.52mmol）和碘甲烷（1.2g，8.8mmol）；所得反应混合物在80℃下加热7小时。反应结束后，反应混合物冷却到室温并过滤，残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩后经柱层析纯化而得到所需化合物（0.5g，80%）。
步骤6：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)苯甲酰胺
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向5-溴-2-甲基-3-(甲基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.5g，1.4mmol）的甲醇（20mL）溶液中加入NaOH（0.11g，2.75mmol）水溶液，60℃下搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀盐酸将pH值调至6，再用柠檬酸将pH值调至4。残余物用乙酸乙酯萃取。对合并的有机层进行干燥和浓缩，得到单独的酸（0.42g，90%）。
将所得到的酸（0.5g，0.974mmol）溶于DMSO（3mL），并加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.45g，2.8mmol）。反应混合物室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（1.1g，2.1mmol），然后继续搅拌过夜。反应结束后，反应混合物加到冰中得到固体，将固体过滤，用乙腈洗涤，之后进行柱层析纯化以得到所需化合物（0.2g，30%）。LCMS:475.02(M+1)+;HPLC:94.25%(@254nm)(Rt;4.570;方法：色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A;0.05%TFA的水溶液/流动相B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃,流速:1.4mL/min;梯度:0-8min.5%B-95%B，保持1.5min，9.51-12min.5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.13(t,1H,J=4.8Hz),6.78(d,1H,J=0.8Hz),6.60(d,1H,J=1.6Hz),5.85(s,1H),4.94(d,1H,J=8.8Hz),4.22(d,2H,J=4.8Hz),3.62-3.64(m,1H),3.37-3.46(m,3H),3.11(s,3H),3.09(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,3H),1.99-2.09(m,2H),1.98(s,3H),1.86-1.93(m,2H)。
实施例22：合成化合物31：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-3-(异丙基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（1equiv.)的甲醇（5mL）溶液中加入丙酮（5equiv.）和醋酸（2equiv），反应混合物在室温下搅拌2小时。在0℃加入NaBH3CN（3equiv.)。所得反应混合物继续在室温下搅拌16小时。反应 结束后，将溶剂蒸发，向残余物中加入水，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，得到的粗品（产率80-90%），其无需进一步纯化而可直接用于下一步反应。
步骤2：合成5-溴-3-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-3-(异丙基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.5g，1.75mmol）的乙腈（10mL）溶液中加入Cs2CO3(1.02g，2.63mmol）和碘甲烷（1.45g，3.5mmol）。将所得反应混合物在80℃搅拌4小时。反应结束后，减压除去溶剂，将残余残余物溶于水，并用乙酸乙酯萃取。所得粗品经硅胶柱层析纯化后得到所需的化合物（0.39g），无需进一步纯化。
步骤3：5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-溴-3-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1equiv.)的乙醇（5mL）溶液中加入NaOH（1equiv.）水溶液，并在60℃加热4小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用1N盐酸酸化至pH值为6。水相用10%MeOH/DCM萃取，用无水硫酸钠干燥合并后的有机相，减压除去溶剂得到纯净的酸（产率为50-60%）。向所得酸（1equiv.)的DMSO（1.5mL）溶液中加入PYBOP（1.5equiv.)，在室温下搅拌15分钟后，加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2equiv.)，反应搅拌过夜。反应结束后，加入水，将所得固体沉淀过滤，用水洗涤。然后所得固体在乙腈中搅拌10分钟后，再一次过滤，以得到纯净的所需分子（产率为50-60%）。LCMS:420.15(M+1)+;HPLC:93.04%(@254nm)(Rt;4.791);1H NMR (DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.19(t,1H,J=4.8Hz),7.14(d,1H,J=1.6Hz),7.00(d,1H,J=1.2Hz),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4.4Hz),3.16-3.20(m,1H),2.52(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,6H),1.01(d,6H,J=6.4Hz)。
实施例23：合成化合物32：5-溴-N-((4,6-二氢-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸酯
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步骤1：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
向2-甲基-3-硝基苯甲酸（15g，82.80mmol）的浓硫酸（60mL）溶液中加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑二烷酮（13.07g，45.71mmol），反应混合物在室温下搅拌5小时。反应结束后，将反应混合物慢慢加到冰冷水中（400mL）。将析出的固体过滤，在真空中干燥，以得到所需化合物（21g，98%）。
步骤2：5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（16g，61.54mmol）的DMF（160mL）溶液中加入碘甲烷（35.72g，248mmol）和碳酸钠（26.28g，248mmol）。所得反应物料在60℃搅拌8小时。将反应物料过滤，用乙酸乙酯洗涤无机固体残余物。将合并的滤液在减压下浓缩直至干燥。将残余物溶于乙酸乙酯，依次用5%碳酸氢钠水溶液（700mL），5M盐酸溶液（300mL）洗涤。有机相最后用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并浓缩，得到所需化合物（16g，95%）。
步骤3：3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（17g，62.04mmol）的乙醇（85mL）溶液中加入溶解于水（85mL）中的NH4Cl（17g，317.8mmol）后，再加入铁粉（27.82g，498.11mmol）。将所得的反应物料在90℃搅拌1小时。反应结束后，将反应物料过滤，将滤液浓缩至干燥以获得固体，然后将该固体溶解于饱和碳酸氢钠水溶液。用乙酸乙酯萃取水层，用无水硫酸钠干燥并浓缩合并的有机相，得到所需化合物（15g，99%）。
步骤4：5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（2g，8.23mmol）和四氢吡喃-4-酮（1.06g，10.66mmol）的甲醇（20mL）溶液中，加入醋酸（0.5g，8.23mmol），并在室温下搅拌反应18小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.62g，9.83mmol），并搅拌反应3小时。反应结束后，减压除去溶剂，加入水，并用二氯甲烷萃取，干燥，浓缩合并的有机相，并用硅胶柱层析（100-200目）纯化，以得到所需化合物（1.6g，62%）。
步骤5：5-溴-N-((4,6-二氢-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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将氢氧化钠（0.146g，3.66mmol）水溶液加入到5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.6g，1.88mmol）的甲醇（8mL）溶液中，并在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去甲醇，并用稀盐酸酸化至pH值为6，再 用柠檬酸酸化至pH值为4。用二氯甲烷萃取，干燥浓缩合并的有机相，得到单独的酸（0.515g，90%）。
然后将所得酸（0.515g，1.67mmol）溶解到DMSO（3mL）中，并加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.50g，3.3mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（1g，1.98mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料倒入冰中，并用5%MeOH/DCM萃取。干燥，浓缩合并的有机相，并通过柱层析纯化，以得到所需化合物（0.30g，37%）。LCMS:447.84(M+1)+;HPLC:99.78%(@254nm)(Rt;5.753;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min.5%B-95%B,保持1.5min，9.51-12min.5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.09(t,1H,J=4.8Hz),6.76(s,1H),6.53(d,1H,J=1.6Hz),5.84(s,1H),4.82(d,1H,J=8Hz),4.42(d,2H,J=4.8Hz),3.85(d,2H,J=11.2Hz),3.37-3.53(m,3H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.95(s,3H),1.81(d,2H,J=12.8Hz),1.44-1.54(m,2H)。
实施例24：合成化合物33：5-溴-3-(环戊基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（1equiv.)的甲醇（5mL）溶液中加入环戊酮（5equiv.）和醋酸（2equiv.)，反应混合物在室温下搅拌2小时。然后在0℃加入NaBH3CN（3equiv.)。得到的反应混合物继续在室温下搅拌16小时。反应结束后，蒸掉溶剂，并向残留物中加入水，然后乙酸乙酯用萃取。用无水硫酸钠干燥并浓缩合并的有机相，以得到粗产品（产率80-90%），其无需进一步纯化而直接用于下一步反应。
步骤2：合成5-溴-3-(环戊基氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1equiv.)的乙醇（5mL）溶液中加入NaOH（1equiv.）水溶液，在60℃搅拌反应4小时。结束时，减压除去乙醇，残留物用1N盐酸酸化至pH值为6。用10%MeOH/DCM萃取水相。无水硫酸钠干燥合并的有机相，减压除去溶剂，得到纯净的酸（产率50-60%）。向所得酸（1equiv.)的DMSO（1.5mL）溶液中加入PYBOP（1.5equiv.)，并在室温下搅拌15分钟。然后加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2equiv.)，并搅拌反应过夜。结束时，加入水，将产生的沉淀物过滤并用水洗涤。然后将固体在乙腈中搅拌10分钟后再次过滤，以得到纯净的目标分子（产率50-60%）。LCMS:432.10(M+1)+;HPLC:97.15%(@254nm)(Rt;6.834);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.09(t,1H,J=4.4&5.2Hz),6.65(d,1H,J=1.6Hz),6.54(d,1H,J=1.6Hz),5.84(s,1H),4.85(d,1H,J=6Hz),4.22(d,2H,J=5.2Hz),3.73(m,1H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.95(s,3H),1.91(m2H),1.70-1.62(m,2H),1.60-1.45(m,4H)。
实施例25：合成化合物36：5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基苯甲酰胺
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步骤1：5-溴-2,4-二甲基苯甲酸
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在0℃下，向搅拌后的氢氧化钠（60g)的水（1152mL）溶液中逐滴滴加溴素(36mL），反应混合物在同一温度下搅拌45分钟。在0℃下，将2,4-二甲基苯甲酸（12g，79.9mmol）分批加入到上述反应混合物中，并在室温下搅拌反应3小时。反应结束后(TLC)，反应混合物用浓盐酸酸化，固体通过布氏漏斗过滤，用水洗涤，干燥，得到所需化合物（12g，65%），其无需进一步纯化即可使用。
步骤2：5-溴-2,4-二甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下，将5-溴-2,4-二甲基苯甲酸（12g，52.17mmol）分批加入冷却的浓硫酸（48mL）中。10分钟后，在-10℃下逐滴滴加硝化混合物{混合浓硝酸（6mL）与浓硫酸（24mL）来制备}。在-10℃下搅拌反应物料30分钟。结束时，将反应混合物倒入冰水中，过滤固体沉淀物，用水洗涤，在真空中干燥，得到所需化合物（13g，91%）。
步骤3：3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2,4-二甲基-3-硝基苯甲酸（13g，47.44mmol）的DMF（120mL）溶液中加入碳酸钠（15g，142.2mmol）和碘甲烷（4.4ml，71.16mmol）。 反应物料在60℃加热8小时。结束时，向反应物料中加水，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用饱和碳酸氢钠和5N盐酸洗涤，用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到所需化合物（12.9g，86%）。
步骤4：3-氨基-5-溴-2,4-二甲基苯甲酸甲酯
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在搅拌下，向搅拌后的3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯（12.9g，44.79mmol）的乙醇（65mL）溶液中加入溶解于水（65mL）中的氯化铵（13g，223.95mmol）溶液和铁粉（20g，358.33mmol）。产生的反应物料在80℃加热1小时。结束时，将反应混合物通过硅藻土床层过滤，用乙醇洗涤硅藻土床层，滤液用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥，减压浓缩后得到所需化合物（11.0g，95%）。
步骤5：5-溴-3-(环戊基氨基)-2,4-二甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2,4-二甲基苯甲酸甲酯（1.4g，5.42mmol）和环戊酮（2.4ml，27.13mmol）的甲醇（20mL）溶液中加入醋酸（0.650g，10.84mmol），反应在室温下搅拌3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.85g，13.56mmol），搅拌反应过夜。结束时，除去溶剂，残余物加入水，并用乙酸乙酯萃取化合物。收集合并的有机相，用Na2SO4干燥，减压浓缩，并经柱层析纯化粗原料，得到所需化合物（1.2g，68%）。
步骤6：5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2,4-二甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-3-(环戊基氨基)-2,4-二甲基苯甲酸甲酯（0.3g，1.07mmol）的DMF（5mL）溶液中加入碳酸铯（0.697g，2.14mmol）和碘乙烷（0.3ml， 5.38mmol）；反应物料在80℃加热12小时。结束时，将反应物料冷却至室温，过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，将滤液浓缩后经柱层析纯化，以得到所需化合物（0.3g，82%）。
步骤7：5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2,4-二甲基苯甲酰胺
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将NaOH（0.022g，0.553mmol）水溶液加入到5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2,4-二甲基苯甲酸甲酯（0.125g，0.368mmol）的EtOH（10mL）/H2O(1mL）溶液中，在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，并用稀盐酸酸化至pH值为6。用乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，以得到单独的酸（0.1g，84.03%）。
然后将所得酸（0.1g，0.308mmol）溶解在DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.07g，0.462mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.320g，0.616mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料加入到冰中以产生的固体，过滤该固体，并用乙腈洗涤，然后经HPLC纯化得到标题化合物（0.018g，12.7%）的三氟乙酸盐。LCMS:460.10(M+1)+;HPLC:98.10%(@254nm)(Rt;8.291;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.18(t,1H,J=4.4Hz),7.20(s,1H),5.85(s,1H),4.26(d,2H,J=4.8Hz),3.51-3.52(m,1H),2.64(s,3H),2.30(s,3H),2.17(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.48-1.59(m,6H),1.31-1.32(m,2H)。
实施例26：合成化合物48：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(N-甲基环戊甲酰氨基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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搅拌下，将5-氯-2-甲基苯甲酸（20g，0.117mmol）分批加入搅拌后的冰冷的(-10℃至-15℃)的浓硫酸（136mL）中。在-10℃至-15℃下逐滴滴入硝化混合物[浓硫酸（22mL）和浓硝酸（11.05mL）]，所得反应混合物允许搅拌30分钟。将所得沉淀过滤，干燥。将固体溶解于乙酸乙酯中，干燥（Na2SO4），浓缩，以得到所需白色固体产物（23.6g，93%）。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在室温下，向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（23.5g，0.109mmol）的DMF（120mL）溶液中加入碳酸钠（46.21,0.436mmol）和碘甲烷（27.2ml，0.43mmol）。反应混合物在60℃加热3小时。起始原料完全耗尽后，将反应混合物过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物。减压浓缩滤液，用柱层析纯化粗产品，得到所需化合物（16g，64%），该化合物为稠油状，静置时固化。
步骤3：合成3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在搅拌下，向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（16g，69mmol）的乙醇（160mL）溶液中加入溶解于水（160mL）中的氯化铵（16g，53.4mmol）溶液和铁粉（31.2g，55.85mmol）。将反应混合物在80℃加热1小时。结束时，加入水，并通过硅藻土过滤反应混合物。滤液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到所需化合物（12.10g，86%），无需进一步纯化。
步骤4：合成5-氯-3-(环戊甲酰氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（0.4g，2.0mmol）的吡啶(2mL）溶液中加入环戊基甲酰氯（0.39ml，3.00mmol）。反应混合物在室温下搅拌2小时。起使原料完全消耗后，用冰水淬灭反应。将产生的沉淀物过滤，得到所需产品（0.5g，84%）。
步骤5：合成5-氯-2-甲基-3-(N-甲基环戊甲酰氨基)苯甲酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的5-氯-3-(环戊烷甲酰氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.3g，1.01mmol）的DMF溶液中加入氢化钠（0.060g，0.0015mmol），反应混合物允许搅拌15分钟。然后加入碘甲烷（0.32ml，0.50mmol），所得反应混合物在室温下搅拌。起始原料完全消耗后，加水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用盐水洗涤，干燥（Na2SO4），浓缩。所得粗化合物用于下一步反应。
步骤6：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(N-甲基环戊甲酰氨基)苯甲酰胺
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将NaOH（0.077g，1.94mmol）水溶液加入到5-氯-2-甲基-3-(N-甲基环戊甲酰氨基)苯甲酸甲酯（0.4g，1.2mmol）的乙醇/水（4:1，15mL）溶液中，在65℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，然后用1N盐酸酸化。反应混合物用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的有机相，干燥，浓缩，得到单独的酸（0.35g，91%）。
然后将所得酸（0.3g，0.10mmol）溶解在DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.309g，0.20mmol）。将反应混合物在室温下搅拌15分钟后，加入PYBOP（0.826g，0.155mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物加入到冰中以产生固体，将该固体过滤并用乙腈洗涤。用制备HPLC施行最后的纯化，得到所需产品的三氟乙酸盐（0.120g，27%）。
LCMS:430.20(M+1)+;HPLC:99.79%(@254nm)(Rt;6.086);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.55(bs,1H),8.43(t,1H),7.46(s,1H),7.29(s,1H),5.87(s,1H),4.25(s,2H),3.01(s,3H),2.35(m,1H),2.19(s,3H),2.10(s,3H),2.06(s,3H),1.70-1.45(m,6H),1.35(m,2H)。
实施例27：合成化合物49：3-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将(2-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯（0.2g，4.2mmol）的二氯甲烷（5mL）溶液冷却至0℃，然后向其中加入TFA（1mL）。反应混合物在室温下搅拌1小时。结束时，将反应浓缩至干燥。其中一半的原料经溶剂洗涤纯化得到纯净的3-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺的三氟乙酸盐（0.060g，76%）。
LCMS:377.15(M+1)+;HPLC:97.57%(@254nm)(Rt;4.611);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.21(t,1H),7.69(bs,3H),7.16(s,1H),6.97(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,2H,J=4.4Hz),3.07(t,2H),2.96(m,2H),2.59(s,3H),2.18(s,6H),2.10(s,3H)。
剩下的原料用碳酸氢钠水溶液碱化至pH值为8，水相用20%MeOH/DCM萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，浓缩，得到作为游离碱的所需化合物（0.075g），其用于下一步反应。
实施例28：合成化合物50：(2-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
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步骤1：合成3-((2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，4.6mmol）和(2-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯（1.4g，8.8mmol）的甲醇（10mL）溶液中加入醋酸（0.027g，4.6mmol），并在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.352g，4.68 mmol）并搅拌过夜。反应结束时，减压除去溶剂，粗原料经柱层析纯化后得到所需产品（0.62g，38%）。
步骤2：合成3-((2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-((2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（0.5g，1.46mmol）的乙腈（10mL）溶液中加入碳酸铯（0.95g，2.92mmol）和碘甲烷（1g，7.3mmol），反应混合物在80℃加热12小时。反应结束后，将反应混合物冷却至室温，然后过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，浓缩滤液，然后经柱层析纯化，得到得到所需产品（0.325g，62%）。
步骤3：合成(2-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
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将NaOH（0.071g，1.79mmol）水溶液加入到3-((2-((叔丁氧羰基)氨基)乙基)(甲基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（0.425g，1.19mmol）的甲醇（5mL）溶液中，并在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去甲醇，残余物用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取，干燥并浓缩合并的有机相，得到单独的酸（0.34g，84%）。
将所得酸（0.34g，0.99mmol）溶解于DMSO（1.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.300g，1.98mmol）。所得反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.77g，1.48mmol），并继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物倒入冰中以产生固体，将固体过滤并用乙腈洗涤，然 后柱层析纯化，得到(2-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯（0.27g，58%）。
LCMS:477.25(M+1)+;HPLC:97.92%(@254nm)(Rt;6.229);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.17(t,1H),7.07(s,1H),6.88(s,1H),6.78(bs,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.07(t,2H),2.84(t,2H),2.62(s,3H),2.17(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.35(s,9H)。
实施例29：合成化合物51：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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将3-((2-氨基乙基)(甲基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.075g，0.199mmol）溶解于甲醇（5mL）并冷却至0℃，加入甲醛（0.056g，1.86mmol）。反应混合物在相同温度下搅拌30分钟，然后加入氰基硼氢化钠（0.023g，0.366mmol），并在室温下搅拌4小时。反应结束后，减压除去溶剂，加水，并用二氯甲烷萃取。干燥，浓缩合并的有机相，并柱层析纯化，得到5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((2-(二甲基氨基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.040g，50%）。LCMS:405.25(M+1)+;HPLC:89.93%(@254nm)(Rt;4.634);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.21(s,1H),7.08(s,1H),5.85(s,1H),4.24(bs,2H),2.91(t,2H),2.63(s,3H),2.33-2.35(m,2H),2.11-2.18(m,15H)。
实施例30：合成化合物52：3-(烯丙基(环戊基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(烯丙基(环戊基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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将5-氯-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.2g，4.46mmol）溶于DMF（12mL）中，并冷却至0℃。10分钟后加入NaH（0.21g，8.92mmol），并加入烯丙基溴（1.07g，8.9mmol）。反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在80℃加热18小时。用冰水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取。干燥，浓缩合并的有机相，得到3-(烯丙基(环戊基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯粗品（0.4g，29.4%）。
步骤2：3-(烯丙基(环戊基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺的合成
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将氢氧化钠（0.078g，1.95mmol）水溶液加入到3-(烯丙基(环戊基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（0.4g，1.30mmol）的甲醇（5mL）溶液中，并在60℃下搅拌1小时。反应结束后，减压除去甲醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠 檬酸将pH值调至4。用乙酸乙酯萃取，浓缩合并有机相，得到单独的酸（0.37g，97.6%）。
将所得酸（0.25g，0.85mmol）溶解到DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.259g，1.74mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.66g，1.27mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物倒入冰中以获得固体，将该固体过滤并用乙腈洗涤，然后经柱层析纯化，得到所需的3-(烯丙基(环戊基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.175g，48%）。
LCMS:428.30(M+1)+;HPLC:96.37%(@254nm)(Rt;6.357);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.21(t,1H),7.16(s,1H),6.92(s,1H),5.85(s,1H),5.63-5.69(m,1H),4.98(m,2H),4.23(d,2H,J=4Hz),3.54(d,2H,J=5.6Hz),3.46-3.50(m,1H),2.18(s,3H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.67(m,2H),1.59(m,2H),1.47(m,2H),1.36(m,2H)。
实施例31：合成化合物53：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5溴-2-甲基苯甲酸甲酯（3g，13.3mmol）和环戊酮（5.6g，66mmol）的甲醇（30mL）溶液中加入醋酸（1.59g，26.6mmol），在室温 下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（2.08g，29.4mmol），搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品无需进一步纯化即可使用。
步骤2：合成5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.6g，5.38mmol）的乙腈（20mL）溶液中加入碳酸铯（3.5g，10.73mmol）和碘甲烷（3.87g，27.25mmol），产生的反应混合物80℃加热12小时。结束时，将反应混合物冷却至室温，过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩后柱层析纯化，得到所需化合物（1.6g，95%）。
步骤3：合成4-(3-(环戊基(甲基)氨基)-5-(甲氧基羰基)-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
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向5-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，3.07mmol）、哌嗪-1-羧酸叔丁酯（0.85g，4.61mmol）和Cs2CO3（0.5g，1.53mmol）的甲苯（25mL）溶液通入氩气10分钟。然后，向其中加入Pd2(dba)3（0.31g，0.307mmol）和BINAP（0.038g，0.061mmol），继续通入氩气10分钟。反应混合物在100℃搅拌8小时。结束后，加入水，用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，减压浓缩，以得到粗品，该粗品经柱层析纯化得到标题化合物（0.44g，33.3%）。
步骤4：合成4-(3-(环戊基(甲基)氨基)-5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯
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将NaOH（0.061g，1.53mmol）水溶液加入到4-(3-(环戊基(甲基)氨基)-5-(甲氧基羰基)-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯（0.44g，1.02mmol）的MeOH（10mL）溶液中，在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去甲醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。干燥，浓缩合并的有机相，得到单独的酸（0.3g，70%）。
然后将所得酸（0.3g，0.71mmol）溶解到DMSO（3mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.215g，1.43mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.56g，1.07mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物加入到冰中以产生固体，将该固体过滤，依次用乙腈和乙醚洗涤后得到4-(3-(环戊基(甲基)氨基)-5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯（0.30g，75.7%）。
步骤5：合成3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺
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将搅拌后的4-(3-(环戊基(甲基)氨基)-5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯（0.30,0.54mmol）的DCM（10mL）溶液冷却至0℃，并向其中加入TFA（3mL）。反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，将混合物浓缩至干燥。所得粗产品的一半通过溶剂洗涤纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.01g，8.33%）。
LCMS:452.39(M+1)+;HPLC:83.92%(@254nm)(Rt;3.825);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.71(s,2H),7.98(s,1H),6.79(s,1H),6.55(s,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=3.2Hz),3.46(1H在溶剂峰中),3.22-3.26(m,8H),2.50(3H并入溶剂峰中),2.18(s,3H),2.10(s,6H),1.41-1.67(m,8H)。
另外一半粗产品用碳酸氢钠水溶液碱化至pH值为8，再用20%MeOH/DCM萃取水层。用硫酸钠干燥合并的有机相，然后浓缩，得到作为游离碱的标题化合物。
实施例32：合成化合物54：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺
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将3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(哌嗪-1-基)苯甲酰胺（游离碱）（0.100g，0.223mmol）溶于甲醇（5mL）并冷却至0℃，然后加入福尔马林（0.033g，1.1ml，2.23mmol）。反应混合物在相同温度下搅拌30分钟。将氰基硼氢化钠（0.013g，0.22mmol）加入到上述反应混合物中，并在室温下搅拌4小时。结束后，减压除去溶剂，向残余物中加水，用二氯甲烷萃取。将合并的有机相干燥，浓缩，柱层析纯化，得到所需的3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(4-甲基哌嗪-1-基)苯甲酰胺（0.037g，36%）。
LCMS:466.40(M+1)+;HPLC:99.18%(@254nm)(Rt;3.871);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),7.94(t,1H),6.71(s,1H),6.48(s,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=3.2Hz),3.39-3.43(m,1H),3.07(bs,4H),2.46(s,3H),2.31(s,3H),2.18(s,3H),2.10(s,3H),2.08(s,3H),1.66(m,2H),1.59(m,2H),1.39-1.48(m,4H)。
实施例33：合成化合物55：5-氯-3-(环己基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(环己基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，5.02mmol）和环己酮（2.45g，25mmol）的甲醇（10mL）溶液中加入醋酸（0.3g，5.02mmol），室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.63g，10.05mmol）并搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品经柱层析纯化得到5-氯-3-(环己基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.2g，89.92%）。
步骤2：合成5-氯-3-(环己基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(环己基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.2g，4.3mmol）的无水DMF（15mL）溶液中加入碳酸铯（2.78g，8.5mmol）和碘乙烷（3.35g，21.47mmol）。产生的反应混合物在80℃反应18小时。结束时，将反应混合物冷却至室温并过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物。将滤液浓缩，柱层析纯化得到5-氯-3-(环己基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.25g，22.7%）。
步骤3：合成5-氯-3-(环己基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将NaOH（0.065g，1.61mmol）水溶液加入到5-氯-3-(环己基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.25g，0.809mmol）的乙醇（5mL）溶液中，并在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯实施萃取。干燥，浓缩合并的有机相，得到单独的酸（0.22g，92%）。
然后将所得酸（0.22g，0.745mmol）溶解到DMSO（2mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.246g，1.49mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.58g，1.11mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将混合物加入到冰中以产生固体，将该固体过滤并用乙腈洗涤。经柱层析进行最终的纯化，得到5-氯-3-(环己基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.200g，46.6%）。LCMS:430.20(M+1)+;HPLC:92.49%(@254nm)(Rt;5.264);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.21(t,1H),7.12(s,1H),6.91(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4.4Hz),3.01-3.03(m,2H),2.64-2.66(m,1H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.68(m,4H),1.51-1.53(m,1H),1.07-1.34(m,5H),0.78(t,3H,J=6.8Hz)。
实施例34：合成化合物56：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，5.02mmol）和四氢吡喃-4-酮（2.5g，25mmol）的甲醇（10mL）溶液中加入醋酸（0.3g，5.02mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.63g，10.05mmol），搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品经柱层析纯化得到5-氯-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.5g，35.5%）。
步骤2：合成5-氯-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（0.5g，1.76mmol）的无水CAN(15mL）溶液中加入碳酸铯（1.2g，3.68mmol）和碘乙烷（2.7g，17.3mmol），产生的反应混合物在80℃搅拌反应18小时。结束时，将混合物冷却至室温，过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物。将滤液浓缩并经柱层析纯化得到所需的5-氯-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.180g，34%）。
步骤3：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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将NaOH（0.05g，1.22mmol）水溶液加入到5-氯-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.18g，0.608mmol）的EtOH（5mL）溶液中，在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。干燥并浓缩合并的有机相后得到单独的酸（0.15g，87%）。
将所得酸（0.15g，0.530mmol）溶解到DMSO（1mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.160g，1.06mmol）。将反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.413g，0.79mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物加入到冰中，用10%MeOH/DCM进行萃取。干燥，浓缩合并有机相，并经硅胶柱层析纯化得到5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.100g，43.88%）。LCMS:432.25(M+1)+;HPLC:90.46%(@254nm)(Rt;4.833);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.22(t,1H),7.19(s,1H),6.96(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4Hz),3.81(d,2H,J=10Hz),3.20-3.21(m,2H),2.94-3.02(m,3H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.48-1.61(m,4H),0.78(t,3H,J=6.4Hz)。
实施例35：合成化合物57：5-氯-3-(环庚基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(环庚基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，5.02mmol）和环庚酮（2.81g，25mmol）的甲醇（10mL）溶液中加入醋酸（0.3g，5.02mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.65g，10.05mmol），搅拌过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品经柱层析纯化得到5-氯-3-(环庚基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.8g，56.2%）。
步骤2：合成5-氯-3-(环庚基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(环庚基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.8g，2.70mmol）的无水DMF（10mL）溶液中加入碳酸铯（1.76g，5.4mmol）和碘乙烷（2.11g，13.5mmol），产生的反应混合物在80℃加热18小时。结束时，将混合物冷却至室温，过滤，用乙酸乙酯洗涤残余物，滤液浓缩后经柱层析纯化得到所需的5-氯-3-(环庚基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.220g，25%）。
步骤3：合成5-氯-3-(环庚基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将NaOH（0.04g，1.02mmol）水溶液加入到5-氯-3-(环庚基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.22g，0.68mmol）的EtOH（5mL）溶液中，在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。合并的有机相经干燥，浓缩得到单独的酸（0.18g，85%）。
然后将所得酸（0.18g，0.585mmol）溶解到DMSO（1.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.177g，1.16mmol）。将反应混合 物在室温下搅拌15分钟后向其中加入PYBOP（0.45g，0.87mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物加入到冰中以获得固体，将该固体过滤并用乙腈洗涤，经柱层析纯化得到5-氯-3-(环庚基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.100g，38.7%）。LCMS:444.25(M+1)+;HPLC:89.74%(@254nm)(Rt;5.933);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.21(t,1H),7.07(s,1H),6.88(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4Hz),3.02-3.03(m,2H),2.77(bs,1H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.76(m,2H),1.59-1.62(m,4H),1.46(m,4H),1.28(m,2H),0.78(t,3H,J=6Hz)。
实施例36：合成化合物58：顺式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下，向搅拌后的2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276.2mmol）的浓硫酸（200mL）溶液中分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，151.8mmol），反应物料在室温下搅拌5小时。结束时，将反应混合物加入到冰水中，将析出的固体过滤，残余物用水洗涤，并在真空下干燥，得到用于后续步骤的所需化合物（71.7g，100%）。
步骤2：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1103mmol）的DMF（150mL）溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626.63g，4415mmol）。反应混合物在60℃加热8小时。结束时，将析出的固体过滤，用乙醚洗涤（5次）残余物。合并的有机相经干燥，减压浓缩得到用于后续步骤的所需化合物（302g，99%）。
步骤3：合成3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）溶液中加入溶解于水（750mL）中的氯化铵（150g，2777mmol）和铁粉（93.3g，1636mmol）。将产生的反应混合物在80℃加热7小时。结束时，将反应物料通过硅藻土过滤，同时用水和乙酸乙酯洗涤，用乙酸乙酯萃取滤液。干燥，减压浓缩合并的有机相，得到所需化合物，其无需进一步纯化便可以直接用于后续步骤。
步骤4：合成顺式和反式5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（5g，20.57mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（5.6g，26.7mmol）的甲醇（50mL）溶液中加入醋酸（1.2g，20.57mmol），在室温下搅拌反应8小时。然后在0℃加入氰基硼氢化钠（1.6g，26.74mmol）并搅拌过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品经两次柱层析纯化（洗脱剂:乙酸乙酯/己烷）得到极性较小的顺式异构体（4g,44%）和纯净的极性较大的反式异构体（3g，33%）。
步骤5：合成顺式5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（4g，9.09mmol）的顺式异构体混合物的乙腈（50mL）溶液中加入碳酸铯（5.9g，18.18mmol）和碘甲烷（6.45g，45.45mmol）。产生的反应混合物在80℃加热7小时。结束时，将反应混合物冷却至室温后过滤，残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩后得到粗化合物，然后将该粗化合物经柱层析纯化，得到所需化合物（1.4g，34%）。
步骤6：合成顺式(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将NaOH（0.23g，5.72mmol）水溶液加入到顺式5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.3g，2.86mmol）的MeOH（20mL）溶液中，然后在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去甲醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。合并有机相经干燥，浓缩得到单独的酸（1.13g，90.1%）。
将所得酸（1.13g，2.57mmol）溶解到DMSO（10mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.87g，5.72mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（2.23g，4.28mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料加入到冰中以产生固体，将该固体过滤，用乙腈洗涤后经柱层析纯化得到所需化合物（0.8g，49%）。
步骤7：合成顺式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将搅拌后的顺式(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.8g，1.39mmol）的DCM（25mL）溶液冷却至0℃，然后向其中加入TFA（5mL）。反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，将混合物浓缩至干燥。残余物用碳酸氢钠水溶液碱化至pH值为8，水层用20%MeOH/DCM萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到所需化合物（600mg，产率91%）。LCMS:475.15(M+1)+;HPLC%95.88(@254nm)(Rt;4.832;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL;柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.22(t,1H),7.20(s,1H),7.01(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=3.6Hz),2.82-2.86(m,2H),2.53(s,3H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.82-1.84(m,2H),1.34-1.44(m,6H)。
将100mg的顺式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（游离碱)溶解于氯化氢的甲醇溶液（5mL）中，并在室温下搅拌1小时。成盐结束时，减压除去溶剂，所得到的固体用乙醚洗涤纯化得到相应的盐酸盐。
盐酸盐的分析数据:LCMS:475.20(M+1)+;HPLC%96.09(@254nm)(Rt;4.818;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL;柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.51(s,1H),8.28(t,1H),8.08(s,3H),7.31(s,1H),7.08(s,1H),5.90(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.05-3.13(m,2H),2.54(s,3H),2.19(s,6H),2.12(s,3H),1.83(m,2H),1.66(m,2H),1.59-1.60(m,2H),1.46(m,2H)。
实施例37：合成化合物59：反式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成反式5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的反式5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（3g，6.81mmol）的乙腈（40mL）溶液中加入碳酸铯（4.4g，13.62mmol）和碘甲烷（4.83g，34.05mmol），产生的反应混合物在80℃加热7小时。结束时，将反应混合物冷却至室温，过滤，残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩后得到粗化合物，然后该粗化合物经柱层析纯化得到所需化合物（1.3g，43%）。
步骤2：合成反式(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将NaOH（0.23g，5.72mmol）水溶液加入到反式5-溴-3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.3g，2.86mmol）的MeOH（20mL）溶液中，并在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀盐酸酸化至 pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。混合物用乙酸乙酯进行萃取。合并的有机相经干燥，过滤，浓缩得到单独的酸（1g，83%）。
将所得酸（1g，2.27mmol）溶解到DMSO（5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.65g，4.54mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（1.7g，3.4mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料加入到冰中以获得固体，将该固体过滤并用乙腈洗涤，然后经柱层析纯化得到所需化合物（0.7g，54%）。
步骤3：合成反式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将搅拌后的反式(4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(甲基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.7g，1.21mmol）的DCM（8mL）溶液冷却至0℃，然后加入TFA（2.5mL）。反应物料在室温下搅拌1小时。结束时，将反应浓缩至干燥。残余物用碳酸氢钠水溶液碱化至pH值为8，水层用20%MeOH/DCM萃取。合并的有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗品，然后该粗品通过用溶剂洗涤来进一步纯化得到所需化合物（0.5g，86%）。LCMS:475.20(M+1)+;HPLC%92.35(@254nm)(Rt;4.416;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL;柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B，保持1.5min，9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.21(t,1H),7.18(s,1H),7.01(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H),2.63-2.66(m,2H),2.55(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,6H),1.79-1.82(m,2H),1.60(m,2H),1.46-1.49(m,2H),1.06-1.09(m,2H)。
将100mg的反式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（游离碱)溶于氯化氢的甲醇（5mL）溶液中，在室温下搅拌1小时。成盐结束时，减压除去溶剂，所得到的固体用乙醚 洗涤纯化得到相应的盐酸盐。盐酸盐的分析数据:LCMS:475.20(M+1)+;HPLC%91.40(@254nm)(Rt;4.408;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B，保持1.5min，9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.51(s,1H),8.28(t,1H),8.06(s,3H),7.31(s,1H),7.08(s,1H),5.89(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),2.92(bs,1H),2.62-2.91(m,4H),2.19(s,3H),2.13(s,3H),2.11(s,3H),1.97(d,2H,J=10.8Hz),1.70(m,2H),1.53-1.56(m,2H),1.31-1.34(m,2H)。
实施例38：合成化合物60：顺式3-((4-乙酰氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在室温下，向搅拌后的顺式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（游离碱）（0.225,0.474mmol）的DMF（3mL）溶液中加入EDCI.HCl(0.138g，0.718mmol）、HOBt(0.064g，0.47mmol）、三乙胺（0.1g，0.99mmol）和醋酸（0.057g，0.949mmol），并在相同温度下搅拌18小时。结束时，加水，用10%MeOH/DCM萃取。合并有机相经干燥，浓缩后得到粗品，然后该粗品经柱层析纯化得到所需化合物（0.17g，72%）。LCMS:517.25(M+1)+;HPLC%95.83(@254nm)(Rt;4.894;方法:柱子:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B，保持1.5min，9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.22(t,1H),7.76(d,1H,J=7.2Hz),7.23(s,1H),7.03(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=3.6Hz),3.71(bs,1H),2.89(m,1H),2.53(s,3H),2.18(s,3H), 2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.81(s,3H),1.74-1.76(m,2H),1.53(m,2H),1.39(m,4H)。
实施例39：合成化合物61：反式3-((4-乙酰氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在室温下，向搅拌后的反式3-((4-氨基环己基)(甲基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.225,0.474mmol）的DMF（3mL）溶液中加入EDCI.HCl(0.138g，0.718mmol）、HOBt(0.064g，0.47mmol）、三乙胺（0.1g，0.99mmol）和醋酸（0.057g，0.949mmol），并在相同温度下搅拌18小时。结束时，加水，用10%MeOH/DCM萃取。合并有机相经干燥，浓缩后得到粗品；然后该粗品经柱层析纯化得到所需化合物（0.13g，53%）。
LCMS:517.20(M+1)+;HPLC%93.92(@254nm)(Rt;4.713;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.20(t,1H),7.65(d,1H,J=7.6Hz),7.18(s,1H),7.01(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=3.6Hz),3.42-3.44(m,1H),2.68-2.71(m,1H),2.56(s,3H),2.18(s,3H),2.10(s,6H),1.77-1.80(m,2H),1.74(s,3H),1.62-1.65(m,2H),1.46-1.54(m,2H),1.07-1.23(m,2H)。
实施例40：合成化合物62：2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺
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步骤1：2-溴-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的2-溴-3-硝基苯甲酸甲酯（3g，12.19mmol）的DMF（33mL）溶液中加入碳酸钠（5.16g，48.67mmol）和碘甲烷（6.92g，48.67mmol）。产生的所得反应混合物60℃加热4小时。结束时，向混合物加水，用DCM进行萃取。合并的有机相经干燥，减压浓缩得到2-溴-3-硝基苯甲酸甲酯（4g，粗品)。
步骤2：合成3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯
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在搅拌下，向搅拌后的2-溴-3-硝基苯甲酸甲酯（4g，15.38mmol）的乙醇（20mL）溶液中加入溶解于水（20mL）中的氯化铵（4g，74.07mmol）和铁粉（6.88g，123mmol）。所得反应混合物80℃加热1小时。结束时，向混合物加水，通过硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水和碳酸氢钠溶液洗涤，干燥，减压浓缩，得到所需的3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯（3g，85%），其使用时无需进一步纯化。
步骤3：合成2-溴-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯（3g，13.0mmol）和环戊酮（5.4g，64.28mmol）的甲醇（20mL）溶液中加入醋酸（1.56g，26mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（2g，31.7mmol），搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品经柱层析纯化得到2-溴-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（1.4g，36%）。
步骤4：合成2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的2-溴-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（1.4g，4.69mmol）的乙腈（10mL）溶液中加入碳酸铯（3g，9.2mmol）和碘甲烷（3.38g，23.3mmol），产生的反应混合物在80℃加热12小时。结束时，将混合物冷却至室温后过滤，残余物用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩后经柱层析纯化得到2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（1.1g，75%）。
步骤5：合成2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺
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将NaOH（0.064g，1.6mmol）水溶液加入到2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.25g，0.801mmol）的MeOH（5mL）溶液中，在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去甲醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取。合并有机相经干燥，浓缩得到单独的酸（0.2g，84%）。
将所得酸（0.2g，0.67mmol）溶解到DMSO（1.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.204g，1.34mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.516g，1.00mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将混合物加入到冰中以产生的固体，将该固体过滤，用乙腈洗涤。通过制备HPLC进行最终的纯化，得到2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺的三氟乙酸盐（0.02g，6.89%）。LCMS:432.10(M+1)+;HPLC%96.05(@254nm)(Rt;4.908);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.21(t,1H),7.26-7.29(m,2H),6.94(d,1H,J=8Hz),5.86(s,1H),4.25(d,2H),3.59(m,1H),2.56(s,3H),2.19(s,3H),2.10(s,3H),1.61-1.67(m,4H),1.46(bs,4H)。
实施例41：合成化合物63：3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-乙烯基苯甲酰胺
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步骤1：合成2-溴-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的2-溴-3-硝基苯甲酸（3g，12.19mmol）的DMF（30mL）溶液中加入碳酸钠（5.16g，48.6mmol）和碘甲烷（6.92g，48.7mmol）。将产生的反应混合物在60℃加热8小时。结束时，将析出的固体过滤，残余物用乙酸乙酯洗涤（5次）。合并有机相经干燥，减压浓缩得到所需粗品2-溴-3-硝基苯甲酸甲酯（4g，99%），其无需进一步纯化而使用
步骤2：合成3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯
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在搅拌下，向搅拌后的上述粗品2-溴-3-硝基苯甲酸甲酯（4g，15.38mmol）的乙醇（20mL）溶液中加入溶解在水（20mL）中的氯化铵（4g，74.0mmol）和铁粉（6.87g，123mmol）。将产生的反应混合物在80℃加热7小时。结束时，反应混合物通过硅藻土过滤，同时用水和乙酸乙酯洗涤，滤液用乙酸乙酯萃取。合并的有机相经干燥，减压浓缩得到所需粗产品（3g）。
步骤3：合成2-溴-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-2-溴苯甲酸甲酯（3g，13.01mmol）和环戊酮（5.6g，66mmol）的甲醇（30mL）溶液中加入醋酸（1.59g，26.6mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（2.08g，29.4mmol），混合物搅拌过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品经柱层析纯化得到2-溴-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（1.4g，36%）。
步骤4：合成2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的2-溴-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（1.4g，4.69mmol）的乙腈（20mL）溶液中加入碳酸铯（3.0g，9.2mmol）和碘甲烷（3.38g，23.4mmol），产生的反应混合物在80℃加热12小时。结束时，将混合物冷却至室温后过滤，残余物用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩，然后经柱层析纯化得到所需的2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（1.1g，75%）。
步骤5：合成3-(环戊基(甲基)氨基)-2-乙烯基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的2-溴-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（1equiv.）和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼烷（1.2equiv.)的二氧六环/水混合物（5mL+1mL）的溶液中加入Na2CO3(3.6equiv.)，向溶液中通入氩气15分钟。然后，加入Pd(PPh3)4(0.1equiv.)，通入氩气10分钟。反应混合物100℃加热2小时。结束时，反应混合物用水稀释，并用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机相经Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到粗品，该粗品经硅胶柱层析纯化得到所需的3-(环戊基(甲基)氨基)-2-乙烯基苯甲酸甲酯。
步骤6：合成3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-乙烯基苯甲酰胺
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向搅拌后的3-(环戊基(甲基)氨基)-2-乙烯基苯甲酸甲酯（1equiv.)的乙醇（10mL）溶液中加入NaOH（1.5equiv溶解在10mL水中)水（)溶液，在60℃搅拌反 应4小时。结束时，减压除去甲醇，残余物用1N HCl酸化至pH值为6。将沉淀过滤，用水洗涤，干燥，得到纯净的相应的酸。
向该单独的酸（1equiv.)的DMSO（10mL）溶液中加入PYBOP（1.5equiv.)，在室温下搅拌反应15分钟。然后加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2equiv.)，搅拌反应过夜。结束时，加水，将产生的固体过滤，用水洗涤。所得到的固体在乙腈溶液中搅拌10分钟，并再次过滤，以得到3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-乙烯基苯甲酰胺，其经制备HPLC纯化得到三氟乙酸盐（0.045g，10.39%）。LCMS:380.25(M+1)+;HPLC%98.00(@254nm)(Rt;4.323);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.51(s,1H),8.01(s,1H),7.25(bs,2H),6.81-6.88(m,2H),5.85(s,1H),5.49(d,1H,J=18Hz),5.40(bs,1H),4.34(3H merged in solvent peak),4.19(d,3H,J=4.8Hz),2.17(s,3H),2.10(s,3H),1.61(m,4H),1.47(bs,4H)。
实施例42：合成化合物64：5-氯-3-(环戊基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下，将5-氯-2-甲基苯甲酸（4g，23.39mmol）分多批加入到冷却的浓硫酸（27mL）中。10分钟后，在-10℃下，逐滴滴加硝化混合物[通过混合浓硝酸（3.3g，52.68mmol）与浓硫酸（4.4mL）来制备]。将产生的反应混合物在-10℃搅拌30分钟。结束时，将反应混合物加到冰冷水中，将所产生的固体过滤，用水洗涤并真空干燥，得到所需的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（4.95g，99%）。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g，31.25mmol）的DMF（33mL）溶液中加入碳酸钠（13.23g，125.18mmol）和碘甲烷（17.77g，125.2mmol）。产生的反应混合物在60℃加热4小时。结束时，加水，用DCM萃取。将合并的有机相干燥，减压浓缩，硅胶柱层析纯化(60-120目)，得到5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6g，83.65%）。
步骤3：合成3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在搅拌下，向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6g，26.13mmol）的乙醇（60mL）溶液中加入溶解于水（60mL）中的氯化铵（6g，112.1mmol）和铁粉（11.88g，208.4mmol）。将产生的反应混合物在80℃加热1小时。结束时，向混合物加水，通过硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯，其无需进一步纯化便可使用。
步骤4：合成5-氯-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1g，5.02mmol）和环戊酮（2.1g，25mmol）的甲醇（10mL）溶液中加入醋酸（0.3g，5.02mmol），室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（0.37g，5.90mmol），并搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品经柱层析纯化得到5-氯-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.62g，46.2%）。
步骤5：合成5-氯-3-(环戊基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(环戊基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.62g，2.32mmol）的无水DMF（10mL）溶液中加入碳酸铯（3.78g，11.6mmol）和碘乙烷（5.43g，34.8mmol），所得反应物料在80℃加热18小时。结束时，将反应混合物冷却至室温后过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩，柱层析纯化得到所需的5-氯-3-(环戊基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.101g，15%）。
步骤6：合成5-氯-3-(环戊基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将NaOH（0.1g，2.5mmol）水溶液加入到5-氯-3-(环戊基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.5g，1.69mmol）的EtOH（10mL）溶液中并60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯施行萃取，将合并的有机相干燥，浓缩后得到单独的酸（0.41g，86%）。
将所得酸（0.10g，0.355mmol）溶解到DMSO（1.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.104g，0.77mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后向其中加入PYBOP（0.277g，0.533mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将混合物加入到冰中，将产生的固体过滤，用乙腈洗涤，再用额外的溶剂洗涤，以得到5-氯-3-(环戊基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.107g，72%）。LCMS:416.25(M+1)+;HPLC%91.83(@254nm)(Rt;5.021);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.21(t, 1H),7.19(s,1H),6.95(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4Hz),3.45(t,1H),2.94-2.96(m,2H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.58-1.64(m,4H),1.47(m,2H),1.32(m,2H),0.77(t,3H,J=6.8Hz)。
实施例43：合成化合物19：5-溴-2-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-氯-3-硝基苯甲酸：
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在-10℃下，将5-溴-2-氯苯甲酸（5g，27.3mmol）分小批加入到冷却的浓硫酸（20mL）中。10分钟后，在-10℃下逐滴加入硝化混合物{通过混合浓硝酸（2.5mL）和浓硫酸（10mL）来制备}。在-10℃下搅拌反应混合物30分钟。结束时，将反应混合物加入到冰冷水中，通过过滤收集固体。所得固体用水洗涤，并在真空中干燥，得到5-溴-2-氯-3-硝基苯甲酸（3.6g，60.5%）。
步骤2：合成5-溴-2-氯-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-氯-3-硝基苯甲酸（3.6g，12.9mmol）的DMF（40mL）溶液中加入碳酸钠（4.1g，38.6mmol）和碘甲烷（4ml，64.3mmol）。将反应混合物在60℃加热8小时。结束时，向反应混合物加水，用乙酸乙酯萃取产品。合并的有机相用饱和碳酸氢钠溶液和5N HCl洗涤。将有机相干燥，减压浓缩得到5-溴-2-氯-3-硝基苯甲酸甲酯（3.4g，89.9%）。
步骤3：合成3-氨基-5-溴-2-氯苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-氯-3-硝基苯甲酸甲酯（3.4g，11.6mmol）的乙醇（19mL）溶液中加入溶解于水（30mL）中的氯化铵（3.4g，57.8mmol）和铁粉（5.16g，92.5mmol）。反应混合物在80℃加热1小时。结束时，将反应混合物通过硅藻土过滤，用乙醇和乙酸乙酯洗涤。滤液用乙酸乙酯萃取，合并的有机相用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到3-氨基-5-溴-2-氯苯甲酸甲酯（2.8g，92.1%）。
步骤4：合成5-溴-2-氯-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-氯苯甲酸甲酯（2.8g，10.6mmol）和环戊酮（4.47g，53.2mmol）的甲醇（20mL）溶液中加入醋酸（1.3ml，21.2mmol），在室温下搅拌反应3小时。然后加入氰基硼氢化钠（1.7g，26.6mmol），搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，产品经柱层析纯化得到5-溴-2-氯-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（0.5g，14.2%）。
步骤5：合成5-溴-2-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-氯-3-(环戊基氨基)苯甲酸甲酯（0.550g，1.65mmol）的乙腈（20mL）溶液中加入碳酸铯（1.08g，3.31mmol）和碘甲烷（1.17g，8.25mmol）。反应混合物在80℃加热12小时。结束时，将反应混合物冷却至室温后过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液浓缩后经柱层析纯化得到5-溴-2-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.350g，61%）。
步骤6：合成5-溴-2-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺
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将NaOH（0.06g，1.52mmol）水溶液加入到5-溴-2-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.350g，1.01mmol）的乙醇（4mL）和水（1mL）溶液中，并在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取产物。合并的有机相经干燥，浓缩得到所需的酸（0.266g，79.4%）。
将所得酸（0.265g，0.80mmol）溶解到DMSO（3mL），并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.243g，1.60mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.624g，1.20mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物加入到冰中以产生固体。将固体过滤并用乙腈洗涤后，经柱层析和制备HPLC纯化后得到5-溴-2-氯-3-(环戊基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺（0.012g，3.22%）。
分析数据:LCMS:466.05(M+1)+;HPLC:99.28%(@254nm)(Rt;6.917;方法:柱子:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(CD3OD,400MHz)δ7.42(d,1H,J=2Hz),7.24(d,1H,J=1.6Hz),6.16(s,1H),4.66(s,2H),3.71(m,1H),2.70(s,3H),2.37(s,3H),2.25(s,3H),1.79(m,2H),1.70(m,2H),1.56(m,4H)。
实施例44：合成化合物91、92、97、98、102、104、105、117-123、126、127、137、144、157、191、192、205-209、212、213、222、243-245、268、269、273、276-279、282-287、290、301、302、306、308-311、313、315、319-322、328、332-336、339、340、344、347-349、356、386、387、389、390和392-417
化合物91、92、97、98、102、104、105、117-123、126、127、137、144、157、191、192、205-209、212、213、222、243-245、268、269、273、276-279、 282-287、290、301、302、306、308-311、313、315、319-322、328、332-336、339、340、344、347-349、356、386、387、389、390和392-417用下述方法合成。
化合物91:3-(烯丙基(哌啶-4-基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下，将5-氯-2-甲基苯甲酸（4.0g，23mmol）分批加入冷却的浓硫酸（27mL）中。10分钟后，逐滴滴加硝化混合物{由浓硝酸（3.3g，52mmol）和浓硫酸（4.4mL）组成}。在-10℃下搅拌混合物30分钟后，加到冰冷水中。将固体沉淀过滤，用水洗涤，在真空中干燥，得到标题化合物（4.95g，99%）。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g，31.3mmol）的DMF（33mL）溶液中加入碳酸钠（13.23g，125mmol）和碘甲烷（17.77g，125mmol）。混合物在60℃加热4小时。结束时，向反应物料中加水，用DCM施行萃取。将合并的有机相干燥，减压浓缩后经硅胶柱层析纯化得到标题化合物（6.0g，83%）。
步骤3：合成3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在搅拌下，向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6.0g，26mmol）的乙醇（60mL）溶液加入溶解于水（60mL）中的氯化铵（6.0g，110mmol）和铁粉（11.9g，208mmol）。混合物在80℃加热1小时。结束时，加入水，通过硅藻土过滤反应混合物。滤液用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥，减压浓缩得到标题化合物，其无需进一步纯化即可使用。
步骤4：合成4-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.0g，25mmol）和4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯（25.3g，127mmol）的甲醇（50mL）溶液中加入醋酸（1.5g，25mmol），在室温下搅拌反应8小时。然后在0℃加入氰基硼氢化钠（1.89g，30.1mmol），在室温下搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗品柱层析纯化得到标题化合物（5.0g，52%）。
步骤5：合成4-(烯丙基(5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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在0℃下，向搅拌后的4-((5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.70g，1.82mmol）的DMF（7mL）溶液中加入NaH(0.052g，2.19mmol）。搅拌20分钟后，加入3-溴丙-1-烯(0.44g，3.64mmol），混合物在80℃加热15h。结束时，用冰冷水淬灭反应，用DCM进行萃取。将合并的有机相干燥，减压浓缩，将残余物柱层析纯化得到标题化合物（0.3g，39%）。
步骤6：合成4-(烯丙基(5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
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将NaOH（0.113g，2.83mmol）水溶液加入到4-(烯丙基(5-氯-3-(甲氧基羰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.60g，1.41mmol）的乙醇（15mL）溶液中。在60℃下搅拌1小时后减压除去乙醇，混合物用稀盐酸酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用DCM进行萃取。将合并的有机相干燥，浓缩得到单独的酸（0.5g，86%）。然后将上述酸（0.5g，1.22mmol）溶解于DMSO（5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.37g，2.44mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.95g，1.83mmol），继续搅拌过夜。将混合物加入到冰中，并用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机相干燥，浓缩后经柱层析纯化得到标题化合物（0.2g，30%）。
步骤7：合成3-(烯丙基(哌啶-4-基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将搅拌后的化合物4-(烯丙基(5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（0.2g，0.36mmol）的DCM（5mL）冷却至0℃，并加入TFA（0.5mL）。将混合物在室温下搅拌18小时后，浓缩至干燥。将残余物用乙醚洗涤，然后用制备HPLC纯化，以得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.06g，37%）。LCMS:443.25(M+1)+;HPLC:97.14%(@254nm)(Rt;5.074;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相A:0.05%TFA的水溶液/流动相B:0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5% B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.38(bs,1H),8.21(t,1H),8.05(d,1H),7.21(d,1H,J=4.4Hz),6.97(d,1H,J=1.6Hz),5.86(s,1H),5.56-5.64(m,1H),4.97-5.09(m,2H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.62(d,2H,J=5.2Hz),3.23(m,2H),3.10-3.16(m,1H),2.85-2.88(m,2H),2.19(s,3H),2.18(s,3H),2.10(s,3H),1.83-1.86(m,2H),1.68-1.73(m,2H)。
化合物97：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(哌啶-4-基(丙基)氨基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-(烯丙基(哌啶-4-基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.04g，0.09mmol)的MeOH（3mL）溶液中加入10%Pd/C（0.01g），并在氢气氛（气球压力）中、在室温下搅拌反应2小时。将混合物通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩，得到固体粗产物，该粗产物经制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.012g，40%）。LCMS:445.25(M+1)+;HPLC:95.52%(@254nm)(Rt;5.102;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.39(bs,1H),8.22(t,1H),8.03(bs,1H),7.25(s,1H),6.98(s,1H),5.86(s,1H),4.24(d,2H,J=4.8Hz),3.24-3.27(m,2H),3.00(m,1H),2.92(m,2H),2.83-2.86(m,2H),2.18(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,3H),1.79-1.82(m,2H),1.67-1.71(m,2H),1.18-1.23(m,2H),0.75(t,3H,J=8Hz)。
化合物144：3,6-二氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-4-[甲基 (哌啶-4-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺
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步骤1：合成3,4,6-三氯吡啶-2-羧酸甲酯
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向搅拌后的3,6-二氯吡啶-2-羧酸甲酯（0.96g，4.66mmol）的TFA（5mL）溶液中加入过氧化氢（30%w/w水溶液，435μl，2.5mmol），反应混合物在60℃加热20小时。然后将反应混合物冷却，并缓慢加到饱和K2CO3(100mL）溶液中，随后用EtOAc萃取（2x200mL）水层，用盐水洗涤（2x50mL）合并的有机相，干燥（Na2SO4)，蒸发。所需的3,6-二氯-2-(甲氧羰基)吡啶-1-N-氧化物（3,6-dichloro-2-(methoxycarbonyl)pyridin-1-ium-1-olate）的粗品未经任何进一步纯化而用于合成的下一步骤中。向3,6-二氯-2-(甲氧羰基)吡啶-1-N-氧化物（约70%纯度，2.40g，7.7mmol）中加入POCl3(3.5ml，38mmol），将溶液加热至100℃4小时。冷却后在真空中除去POCl3，以产生白色固体，将该白色固体通过硅胶(洗脱液为0%-10%的EtOAc庚烷溶液）进行层析，以得到的无色针状的标题化合物（340mg，两步30%）。LC-MS100%,2.20分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=239.8/241.7,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.51(1H,s),3.92(3H,s)。
步骤2：合成4-({1-[(叔丁氧)羰基]哌啶-4-基}(甲基)氨基)-3,6-二氯吡啶-2-羧酸甲酯
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向搅拌后的3,4,6-三氯吡啶-2-羧酸甲酯（310mg，1.29mmol）的DMF（5mL）溶液中加入TEA（359μl，2.58mmol），然后加入4-(甲基氨基)哌啶-1-羧酸叔丁酯（276mg，1.29mmol），反应混合物在100℃加热4小时。然后将反应混合物冷却到室温，倒入水中（50mL），随后将产物萃取到TBME（3x50mL）中，用盐水（50mL）洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥，蒸发。粗产品用10g硅胶Isolute柱（洗脱梯度为0%-50%的EtOAc庚烷溶液）纯化得到白色固体状的标题化合物（95mg，18%）。LC-MS95%,2.29分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=418.1/419.8,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.87(s,1H)4.12-4.34(m,2H)3.99(s,3H)3.69-3.80(m,1H)2.79(s,3H)2.64-2.77(m,2H)1.75(br.s.,4H)1.48(s,9H)。
步骤3：合成4-({1-[(叔丁氧)羰基]哌啶-4-基}(甲基)氨基)-3,6-二氯吡啶-2-羧酸
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向搅拌后的4-({1-[(叔丁氧)羰基]哌啶-4-基}(甲基)氨基)-3,6-二氯吡啶-2-羧酸甲酯（95mg，0.23mmol）的THF（5mL）溶液中加入2M NaOH溶液（2.3ml,4.54mmol）水溶液，反应混合物在室温下搅拌16小时，该时间之后，在真空中除去THF。水相用10%的柠檬酸水溶液酸化至pH值5-6，然后用EtOAc萃取（3x50mL），合并的有机相用Na2SO4干燥，蒸发，得到白色粉末状的标题化合物（77mg，84%）。LC-MS100%,2.02分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=403.9/405.6,1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ7.09(s,1H)4.14-4.22(m,2H)3.80-3.89(m,1H)2.84(s,5H)1.74-1.81(m,4H)1.46(s,9H)。
步骤4：合成4-[(3,6-二氯-2-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基 甲酰基}吡啶-4-基)(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯
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将搅拌后的4-({1-[(叔丁氧)羰基]哌啶-4-基}(甲基)氨基)-3,6-二氯吡啶-2-羧酸（75mg，0.19mmol）的DMF（2mL）溶液冷却至0℃后，向其加入DIPEA（48μl，0.28mmol），然后再加入PYBOP（116mg，0.22mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%的纯度，35mg，0.2mmol）。然后将反应混合物室温下搅拌16小时，之后将该反应倒入水（30mL）中，用EtOAc萃取（3x50mL），之后用盐水（50mL）洗涤合并的有机相，干燥（Na2SO4)并蒸发。粗产物用5g硅胶Isolute柱（洗脱梯度0%-100%的EtOAc庚烷溶液）纯化，得到的白色固体的标题化合物，通过NMR检测其中包含～45%w/w三吡咯烷氧化膦（tripyrrolidinophosphene oxide）-该化合物未经任何进一步纯化而用于合成的下一步骤中。LC-MS93%,1.97分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=538.0/539.45/542.05,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ10.03(br.s,1H),8.13–7.97(m,1H),6.79(s,1H),5.87(s,1H),4.50(d,J=6.1Hz,2H),4.16(br.m,2H),3.78–3.62(m,1H),2.72(s,3H),2.65(br.m,2H),2.35(s,3H),2.22(s,3H),1.73–1.63(m,4H),1.44(s,9H)。
步骤5：合成3,6-二氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-4-[甲基(哌啶-4-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺盐酸盐
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将4-[(3,6-二氯-2-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}吡啶-4-基)(甲基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（310mg，1.29mmol）溶于4M盐酸的人氧六环溶液（3mL）中，在室温下搅拌16小时，然后蒸发除去溶剂，化合物通过 制备HPLC纯化得到米黄色粉末状的标题化合物（13mg，14%）。LC-MS100%,2.41分钟(7分钟LC-MS法),m/z=438.1/439.8,1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ7.12(s,1H),6.11(s,1H),4.46(s,2H),4.01-3.81(m,1H),3.45(d,J=12.9Hz,2H),3.12-2.97(m,2H),2.82(s,3H),2.35(s,3H),2.22(s,3H),2.13-1.93(m,4Hz)。
化合物386：3,6-二氯-n-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺
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步骤1：合成3,6-二氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯
向搅拌后的3,4,6-三氯吡啶-2-羧酸甲酯（600mg，2.50mmol）的DMF（12mL）溶液中加入TEA(696μl，4.99mmol），随后加入N-甲基四氢吡喃-4-胺（287mg，2.50mmol），反应混合物在100℃加热20小时。然后将反应混合物冷却到室温并倒入水（100mL）中，然后将产物萃取至EtOAc（3x100mL）中，用盐水洗涤（50mL）合并的有机相，用Na2SO4干燥并蒸发。粗产物用10g硅胶Isolute柱（洗脱梯度为0%-60%EtOAc/庚烷溶液）纯化得到白色固体状的标题化合物（114mg，14%）。LC-MS100%,1.91分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=319.3/320.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.87(s,1H),4.15-4.00(m,2H),3.98(s,3H),3.93-3.71(m,1H),3.54-3.24(m,2H),2.82(s,3H),1.94(dd,J=12.1,4.7Hz,2H),1.70(d,J=10.2Hz,2H)。(br.s.,4H)1.48(s,9H)。
步骤2：合成3,6-二氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸
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向搅拌后的3,6-二氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯（114mg，0.36mmol）的THF（5mL）溶液中加入2M NaOH水溶液（0.89ml，1.79mmol）中，将反应混合物在室温下搅拌20小时，然后在真空中除去THF。然后用10%柠檬酸水溶液酸化水相至pH值为5-6，然后用EtOAc萃取（3x50mL），再用1:1的IPA/CHCl3溶液萃取（2x50mL），然后用盐水（50mL）洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥并蒸发，以得到白色固体状的标题化合物（85mg，78%）。LC-MS100%,1.47分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=305.5/306.9,1H NMR(500MHz,CD3OD)δ7.10(s,1H),4.03(dd,J=11.5,4.4Hz,2H),3.99-3.86(m,1H),3.47(t,J=11.0Hz,2H),2.90(s,3H),2.05-1.90(m,2H),1.74(d,J=12.4Hz,2H)。
步骤3：合成3,6-二氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺
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向搅拌后的3,6-二氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸（85mg，0.28mmol）的DMF（2mL）溶液中加入DIPEA（73μl，0.42mmol）和HATU（127mg，0.33mmol）。在室温下搅拌反应5分钟后，加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,52mg，0.31mmol），在室温下搅拌反应16小时。然后将反应混合物倒入50ml水中，水相用EtOAc萃取（3x50mL），用盐水洗涤（50mL），干燥（Na2SO4)并蒸发以得到油状物。然后将所得产品用5g硅胶Isolute柱纯化(洗脱液为0%-5%的DCM/MeOH)，蒸发，以得到玻璃状固体，将该固体与乙醚一起研磨，过滤，得到白色粉末状的标题化合物（50mg，41%）。LC-MS95%,,m/z=439.0/440.8,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.33(br.s,1H),8.20(br.s,1H),6.79(s,1H),5.93(s,1H),4.51(s,2H),4.02(dd,J=11.4,3.8Hz,2H),3.92-3.72(m,1H),3.39(t,J=11.3Hz,2H),2.78(s,3H),2.38(s,3H),2.27(s,3H),1.89(tt,J=12.0,6.2Hz,2H),1.83-1.52(m,2H)。
化合物387：3-溴-6-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-4-[甲 基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺
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步骤1：合成3-溴-6-氯吡啶-2-羧酸甲酯
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向搅拌后的3-溴-6-氯吡啶-2-羧酸（2.00g，8.46mmol）的MeOH（40mL）溶液中加入H2SO4(189μl，3.55mmol），将溶液加热回流16小时。将反应混合物冷却后在减压下除去甲醇，将得到的固体溶于EtOAc（100mL），并用饱和NaHCO3溶液（2x50mL）洗涤，然后用盐水洗涤（50mL），干燥（Na2SO4），减压蒸发，以得到的灰白色固体状的标题化合物（1.97g，93%），其无需进一步纯化即可使用。LC-MS98%,m/z=249.8/251.7/253.7。
步骤2：合成3-溴-4,6-二氯吡啶-2-羧酸甲酯
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向搅拌后的3-溴-6-氯吡啶-2-羧酸甲酯（1.92g，7.67mmol）的TFA（18mL）溶液中加入过氧化氢（30%w/w水溶液，5.22ml，53.7mmol），反应混合物在60℃加热21小时。然后将反应混合物冷却并慢慢加入饱和K2CO3溶液（100mL）中，然后用EtOAc萃取（3x100mL）水层，用盐水洗涤（2x50mL）合并的有机相，干燥（Na2SO4)并蒸发。所需的3-溴-6-氯-2-(甲氧羰基)吡啶-1-N-氧化物（2.61g，～75%纯度)粗品没有进一步纯化，用于该合成的下一步。向3-溴-6-氯-2-(甲氧羰基)吡啶-1-N-氧化物粗品（约75%的纯度，2.61g，7.35mmol）中加入POCl3（3.42ml，36.7mmol），将溶液加热至100℃4小时。冷却后真空除去POCl3，得到白色固体， 该固体经硅胶柱（用0%-10%的EtOAc的庚烷溶液洗脱）纯化，得到浅黄色粉末状的标题化合物（1.07g，两步49%）。LC-MS99%,2.02分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=283.7/285.7/287.7,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.56(s,1H),4.00(s,3H)。
步骤3：合成3-溴-6-氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯
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向搅拌后的3-溴-4,6-二氯吡啶-2-羧酸甲酯（600mg，2.1mmol）的DMF（5mL）溶液中加入TEA（587μl，4.21mmol），然后再加入N-甲基四氢吡喃-4-胺（240mg，2.1mmol），反应混合物在80℃加热20小时。将反应混合物冷却到室温后，倒入水（100mL）中，然后将产物萃取至EtOAc（3x100mL）中，用盐水（50mL）洗涤合并的有机相，用Na2SO4干燥并蒸发。然后将所得粗品用10g的硅胶Isolute柱（洗脱梯度为0%-100%的EtOAc的庚烷溶液）纯化，得到的白色固体状的标题化合物（110mg，14%）。LC-MS100%,1.94分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=362.8/365.2/346.8,1H NMR(250MHz,CDCl3)δ6.87(s,1H),4.17-3.99(m,2H),3.98(s,3H),3.93-3.70(m,1H),3.41(t,J=10.9Hz,2H),2.81(s,3H),1.93(dd,J=11.9,4.6Hz,2H),1.71(d,J=10.3Hz,2H)。
步骤4：合成3-溴-6-氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸
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向搅拌后的3-溴-6-氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸甲酯（102mg，0.28mmol）的THF（2mL）溶液中加入2M NaOH（0.70ml，1.40mmol）水溶液，将反应混合物在室温下搅拌18小时后，之后在真空中蒸发除去THF。水相用10%柠檬酸水溶液酸化至pH值为5-6，然后先用EtOAc萃取（3x50mL），再用1:1的 IPA/CHCl3溶液萃取（2x50mL），用盐水洗涤合并的有机相(50mL），用Na2SO4干燥，蒸发，得到白色固体状的标题化合物（72mg，73%）。LC-MS100%,1.49分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=349.0/351.0/352.9,1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ7.07(s,1H),4.02(dd,J=11.3,4.3Hz,2H),3.96-3.87(m,1H),3.46(t,J=11.0Hz,2H),2.85(s,3H),1.96(dd,J=12.3,4.3Hz,2H),1.77(s,2H)。
步骤5：合成3-溴-6-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的3-溴-6-氯-4-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-2-羧酸（73mg，0.21mmol）的DMF（2mL）溶液中加入DIPEA（56μl，0.31mmol）和HATU（95mg，0.25mmol）。在0℃搅拌反应5分钟后，加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,52mg，0.31mmol），在室温下搅拌反应16小时。然后将反应混合物倒入50ml水中，水相用EtOAc萃取（3x50mL），用盐水洗涤（50mL），干燥（Na2SO4)并蒸发，得到一个油状物。然后所得产物经5g硅胶柱（用0%-4%的MeOH/DCM洗脱）纯化，蒸发，得到玻璃状固体，将该固体与乙醚一起研磨并过滤，在真空干燥箱中在40℃下干燥24小时，得到白色粉状的标题化合物（50mg，41%）。LC-MS99%,m/z=483.1/485.0/486.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.94(br.s,1H),8.14-7.98(m,1H),6.83(s,1H),5.92(s,1H),4.55(d,J=6.1Hz,2H),4.15-3.94(m,2H),3.93-3.70(m,1H),3.40(t,J=11.0Hz,2H),2.78(s,3H),2.39(s,3H),2.28(s,3H),1.99-1.82(m,2H),1.79-1.64(m,2H)。
化合物213：5-(氮杂环丁烷-3-基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在氮气保护下，向搅拌后的3-氨基-2-甲基-5-溴苯甲酸甲酯（4.06g，16.6mmol）的DCE（60mL）溶液中依次加入四氢吡喃酮（3.07ml，33.3mmol）和醋酸（5.71ml，99.8mmol），将反应搅拌5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（10.6g，49.9mmol）。反应在室温下搅拌3小时，之后加入蒸馏水（50mL），溶液用固体NaHCO3中和。两相分离，然后水相用EtOAc（2x100mL）洗涤，合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。残余物经硅胶FCC（用10%-40%的EtOAc的庚烷溶液梯度洗脱）纯化，得到灰白色固体状的标题化合物（3.88g，71%）。LC-MS100%,2.10分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=327.9/329.8,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.23(d,J=1.9Hz,1H),6.84(d,J=1.7Hz,1H),4.02(dt,J=11.7,3.5Hz,2H),3.87(s,3H),3.65(d,J=7.2Hz,1H),3.59–3.45(m,3H),2.23(s,3H),2.05(d,J=13.8Hz,2H),1.51(ddd,J=24.1,10.8,4.2Hz,2H)。
步骤2：合成5-溴-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯
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在氮气气氛下，向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯 （2.0g，6.1mmol）的DCE（10mL）溶液中依次加入乙醛（1.0ml，18mmol）和醋酸（2.1ml，37mmol），反应搅拌5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（6.6g，31mmol）。在室温下搅拌反应16小时，之后加入乙醛（1.0ml，22mmol）和三乙酰基硼氢化钠（3.0g，14mmol），再搅拌反应6小时，之后加入蒸馏水（100mL），并分离两相。水相用EtOAc（3x100mL）洗涤，合并的有机相用Na2SO4干燥，过滤，蒸发，得到的无色油状的标题化合物（2.10g，93%），其无需进一步纯化即适合使用。LC-MS96%,2.38分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=356.1/357.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.70(d,J=2.0Hz,1H),7.36(d,J=2.0Hz,1H),3.95(d,J=11.3Hz,2H),3.88(d,J=9.1Hz,3H),3.32(td,J=11.5,2.5Hz,2H),3.04(q,J=7.1Hz,2H),2.98–2.87(m,1H),2.44(s,3H),1.77–1.55(m,4H),0.86(t,J=7.1Hz,3H)。
步骤3：合成3-{3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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向干燥的烧瓶中依次加入锌粉（40mg，0.61mmol）和无水DMA（2mL），向该容器中通入氮气，同时剧烈搅拌并加热到65℃。加入TMS-Cl(9μl，0.07mmol）和1,2-二溴乙烷（6μl，0.07mmol），反应在65℃搅拌30分钟，然后逐滴滴加N-Boc-3-碘代氮杂环丁烷（133mg，0.47mmol）的无水DMA（1mL）溶液。将反应冷却至室温，向其加入5-溴-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯（100mg，0.28mmol）的无水DMA（2mL）溶液。所得溶液用氮气进行脱气处理5分钟后，加入固体形式的Pd(dppf)Cl2.DCM（7mg，0.01mmol）和碘化亚铜(3mg，0.02mmol）。将反应加热至80℃16小时，然后冷却到室温，之后加入饱和NH4Cl溶液（50mL）。水相用EtOAc萃取（3x100mL），合并的有机相用盐水洗涤（2x50mL），用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。残余物经5g Isolute柱（使用10-30%EtOAc的庚烷溶液作为洗脱液）纯化，得到无色油状的标题化合物（77mg，62%）。LC-MS98%,2.19分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=433.2,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.49(d,J= 1.6Hz,1H),7.16(d,J=1.6Hz,1H),4.31(t,J=8.7Hz,2H),3.94(dd,J=14.4,5.5Hz,4H),3.89(s,3H),3.77–3.64(m,1H),3.31(td,J=11.4,2.7Hz,2H),3.06(q,J=7.0Hz,2H),2.99–2.87(m,1H),2.46(s,3H),1.65(ddd,J=11.1,8.6,6.0Hz,4H),1.46(s,9H),0.85(dd,J=13.1,6.1Hz,3H)。
步骤4：合成5-{1-[(叔丁氧)羰基]氮杂环丁烷-3-基}-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸
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向搅拌后的3-{3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯基}氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（78mg，0.18mmol）的THF（2mL）和MeOH（0.1mL）溶液中加入2M NaOH溶液（0.9ml，1.8mmol），在室温下搅拌反应16小时，随后在50℃加热22小时。将反应冷却至室温，真空除去溶剂，之后水溶液用1M HCl调至pH值为5。将产物萃取到DCM中（2x50mL），用Na2SO4干燥，过滤，得到的无色油状的标题化合物（54mg，72%）。LC-MS100%,1.70分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=419.2,1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.77(s,1H),7.55(s,1H),4.36(t,J=8.2Hz,2H),3.90(d,J=27.0Hz,5H),3.71(t,J=6.5Hz,1H),3.36(t,J=11.3Hz,3H),2.55(s,3H),1.92–1.81(m,1H),1.64(d,J=55.8Hz,3H),1.49–1.42(m,10H),0.93(s,3H)。
步骤5：合成5-(氮杂环丁烷-3-基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酰胺
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将搅拌后的5-{1-[(叔丁氧)羰基]氮杂环丁烷-3-基}-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨 基]-2-甲基苯甲酸（54mg，0.13mmol）的DMF（2mL）溶液用冰浴冷却，然后加入DIPEA（45μl，0.26mmol）和HATU（59mg，0.15mmol）。反应在0℃搅拌5分钟后，加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,24mg，0.14mmol），在室温下搅拌16小时。然后将反应混合物倒入50ml水中，水相用EtOAc（3x50mL）萃取，用盐水（50mL）洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，蒸发，得到油状物。所得产物再用5g硅胶Isolute柱（用0%-2.5%的MeOH/DCM洗脱）纯化，蒸发，得到无色油状的3-(3-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}-5-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-4-甲基苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（29mg）。LC-MS90%,m/z=553.3。将该原料溶解于4M HCl的二氧六环(3mL）溶液中，并在室温下搅拌90分钟，之后将溶剂蒸干，化合物通过制备HPLC纯化，得到白色固体状的标题化合物（11mg，两步8%）。LC-MS97%,2.17分钟(7分钟LC-MS法),m/z=453.2,1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.26(s,1H),7.18(s,1H),6.14(s,1H),4.48(s,2H),4.39(s,2H),4.22(s,3H),3.93(d,J=10.5Hz,2H),3.40–3.33(m,2H),3.29–2.90(m,3H),2.40(s,3H),2.31(s,3H),2.26(s,3H),1.68(d,J=26.3Hz,4H),0.87(s,3H)。
化合物245：5-(氮杂环丁烷-3-基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在氮气气氛下，向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯 （1.20g，3.66mmol）的DCE（10mL）溶液中依次加入多聚甲醛（659mg，21.9mmol）和醋酸（1.26ml，21.9mmol），将反应搅拌5分钟后，向其中加入三乙酰基硼氢化钠（4.65g，21.9mmol）。室温下搅拌反应16小时，然后加入额外的多聚甲醛（325mg，10.8mmol）和三乙酰基硼氢化钠（2.40g，11.3mmol），继续搅拌18小时，届时向其中加入蒸馏水（30mL），加入固体NaHCO3直到水相pH值为7，分离两相，水相用EtOAc（3x50mL）洗涤，然后合并的有机相用盐水（50mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗制的残余物经硅胶FCC（用0-10%EtOAc的庚烷溶液洗脱）纯化，得到的无色油状的标题化合物（728mg，52%）。LC-MS87%,m/z=341.9/343.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.60(d,J=2.0Hz,1H),7.25(d,J=1.9Hz,1H),3.92(d,J=11.1Hz,2H),3.82(s,3H),3.27(td,J=11.5,2.0Hz,2H),2.94–2.79(m,1H),2.57(s,3H),2.36(s,3H),1.74–1.52(m,4H)。
步骤2：合成5-{1-[(叔丁氧)羰基]氮杂环丁烷-3-基}-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸
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向干燥的烧瓶中加入锌粉（436mg，6.67mmol），并用热枪将该烧瓶加热几分钟。然后在氮气保护下，将无水DMA（20mL）加入到上述烧瓶中，同时剧烈搅拌并加热到65℃。向其中加入TMS-Cl(102μl，0.8mmol）和1,2-二溴乙烷（70μl，0.8mmol），反应在65℃搅拌30分钟后，随后逐滴滴加N-Boc-3-碘代氮杂环丁烷（1.46g，5.16mmol）的无水DMA(15mL）溶液。然后将反应冷却至室温，添加5-溴-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（1.06g，3.09mmol）的无水DMA（15mL）溶液。所得溶液用氮气进行10分钟脱气处理，之后添加固体形式的Pd(dppf)Cl2.DCM（76mg，0.09mmol）和碘化亚酮（35mg，0.19mmol）。将反应加热至80℃90分钟，然后冷却到室温，随后加入蒸馏水（100mL）和饱和NH4Cl溶液（10mL）。水相用TBME(3x50mL）萃取，然后合并的有机相用Na2SO4 干燥，过滤，蒸发。残余物经25g Isolute柱（使用0%-40%的EtOAc的庚烷溶液作为洗脱液）纯化，得到浅棕色油状的标题化合物（507mg）。LC-MS97%,m/z=420.0.向搅拌后的3-[3-(甲氧羰基)-4-甲基-5-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（85mg，0.2mmol）的THF（2mL）和MeOH（0.1mL）溶液中加入2M NaOH溶液（1.02ml，2.03mmol），在50℃搅拌反应16小时，然后再添加4MNaOH溶液（0.5ml，2,0mmol），再加热反应24小时。将反应冷却至室温，真空除去溶剂，然后用1M HCl将水溶液调至pH值为3。将产物萃取到DCM（2x50mL）中，用盐水（20mL）洗涤，用Na2SO4干燥并过滤，得到灰白色固体状的标题化合物（47mg，两步21%）。LC-MS95%,m/z=405.1,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.66(t,J=7.0Hz,1H),7.19(d,J=1.3Hz,1H),4.34(t,J=8.7Hz,2H),3.98(dd,J=16.6,10.2Hz,4H),3.79–3.69(m,2H),3.35(dd,J=11.5,10.0Hz,2H),2.97(td,J=10.8,5.3Hz,1H),2.67(s,3H),2.55(d,J=6.6Hz,3H),1.74(ddd,J=15.5,12.1,4.3Hz,2H),1.66(d,J=11.1Hz,2H),1.48(s,9H)。
步骤3：合成3-(3-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}-4-甲基-5-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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在0℃下，向搅拌后的5-{1-[(叔丁氧)羰基]氮杂环丁烷-3-基}-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸（47mg，0.12mmol）的DMF（2mL）溶液中加入DIPEA（40μl，0.23mmol）和HATU（53mg，0.14mmol）。在0℃搅拌反应5分钟后，向其加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,22mg，0.13mmol），在室温下搅拌16小时。然后将反应混合物倒入蒸馏水（50mL）中，水相用DCM（3x50mL）萃取，用盐水（50mL）洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，蒸发，得到油状物。然后产物用5g硅胶Isolute柱（用0%-5%MeOH/DCM洗脱）纯化，蒸发，得到无色油状的标题化合物（44mg，67%）。LC-MS96%,m/z=539.4,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.68(s,1H),6.95(t,J=5.8Hz,1H),6.92(d,J=4.2Hz,2H),5.88(s,1H),4.47(d,J=5.8Hz,2H),4.20(t,J=8.7Hz,2H),3.90(d,J= 11.2Hz,2H),3.86–3.73(m,2H),3.62–3.50(m,1H),3.26(t,J=10.8Hz,2H),2.89(ddd,J=14.6,10.8,3.7Hz,1H),2.55(s,3H),2.33(s,3H),2.20(s,3H),2.14(s,3H),1.75–1.47(m,4H),1.39(d,J=5.7Hz,9H)。
步骤4:合成5-(氮杂环丁烷-3-基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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向搅拌后的3-(3-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}-4-甲基-5-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（29mg，1.29mmol）的DCM（4mL）溶液中加入TFA（1mL），所得溶液在室温下搅拌90分钟，然后蒸发脱去溶剂，添加饱和NaHCO3水溶液至pH值为7-8。水相用1:1的IPA:CHCl3混合物（2x50mL）萃取，合并的有机相用盐水（30mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。残余物通过制备HPLC纯化，得到白色固体状的标题化合物（15mg，42%）。LC-MS100%,m/z=439.3,1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.19(d,J=1.4Hz,1H),7.10(d,J=1.5Hz,1H),6.12(s,1H),4.46(s,2H),4.41–4.27(m,2H),4.26–4.13(m,3H),3.93(d,J=11.4Hz,2H),3.36(td,J=11.3,3.3Hz,2H),3.06(dq,J=14.6,5.0Hz,1H),2.65(s,3H),2.39(s,3H),2.26(s,3H),2.24(s,3H),1.75–1.60(m,4H)。
化合物269：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-(氮杂环丁烷-3-基)-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-[3-(甲氧羰基)-4-甲基-5-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（400mg，0.96mmol）的DCM（4mL）溶液中加入TFA（1mL），溶液在室温下搅拌45分钟，之后将溶剂蒸干，添加饱和NaHCO3水溶液至pH值为7-8。水相用DCM（3x30mL）萃取，用盐水（30mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到橙色油状的标题化合物（370mg，95%）。LC-MS96%,m/z=319.1,1HNMR(500MHz,CDCl3)δ7.49(d,J=1.4Hz,1H),7.20(d,J=1.3Hz,1H),4.32–4.10(m,5H),3.98(d,J=11.0Hz,2H),3.90(d,J=8.4Hz,3H),3.34(t,J=10.8Hz,2H),2.99(ddd,J=14.7,10.9,3.8Hz,1H),2.65(d,J=8.3Hz,3H),2.51–2.41(m,3H),1.73(ddd,J=15.7,12.1,4.3Hz,2H),1.64(d,J=11.2Hz,2H)。
步骤2：合成2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酸甲酯
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在氮气气氛下，向搅拌后的5-(氮杂环丁烷-3-基)-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（320mg，1.01mmol）的DCE（10mL）溶液中依次加入多聚甲醛（151mg，5.03mmol）和醋酸（0.115ml，2.01mmol），搅拌反应5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（852mg，4.02mmol）。在室温下搅拌反应16小时后，向反应混合物加入额外的多聚甲醛（21mg）和三乙酰基硼氢化钠（98mg），继续 搅拌反应4小时，届时添加蒸馏水（20mL），添加固体NaHCO3直到水相pH值为7。两相分离，水相用DCM（3x20mL）洗涤，合并的有机相用盐水（50mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤，蒸发，得到油状的标题化合物（296mg，89%）。LC-MS100%,m/z=333.1,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.42(d,J=1.4Hz,1H),7.09(s,1H),3.96(d,J=11.2Hz,2H),3.92–3.82(m,5H),3.74(d,J=7.2Hz,1H),3.30(dt,J=22.2,15.0Hz,4H),3.00–2.89(m,1H),2.62(s,3H),2.49–2.39(m,6H),1.75–1.59(m,4H)。
步骤3：合成N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺
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向搅拌后的2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酸甲酯（296mg，0.89mmol）的THF（10mL）和MeOH（1mL）溶液中加入2M NaOH溶液（4.5ml，8.9mmol），在50℃搅拌反应16小时，之后加入4M NaOH溶液（1ml，4.5mmol），反应继续加热24小时。将反应冷却至室温，产物用1M HCl中和，蒸干，然后通过与甲苯共沸除掉残留的水。所得粗品酸用于下一阶段，而不进行任何纯化。将2-甲基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酸的粗品悬浮于DMF（10mL）中，用冰浴冷却溶液，然后向该溶液中加入DIPEA（433μl，2.49mmol）和HATU（567mg，1.49mmol）。在0℃搅拌该反应5分钟后，向其加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,221mg，1.29mmol），在室温下搅拌反应16小时。然后将反应混合物倒入蒸馏水中（50mL），水相用DCM（3x50mL）萃取，用盐水（50mL）洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，蒸发，得到油状物。所得产物再经制备HPLC法纯化，蒸干，在乙醚中研磨，过滤，得到的灰白色固体状的标题化合物（51mg，10%）。LC-MS91%,m/z=453.2,1H NMR(500MHz,MeOD)δ7.14(d,J=1.7Hz,1H),7.09(d,J=1.7Hz,1H),6.12(s,1H),4.46(s,2H),4.41(t,J=9.2Hz,2H),4.22(t,J=9.3Hz,2H),4.14(dd,J=17.4,8.5Hz,1H),3.98–3.89(m,2H),3.36(td,J=11.3,3.4Hz,2H),3.06(ddd,J= 14.6,9.8,4.9Hz,1H),2.97(s,3H),2.64(s,3H),2.39(s,3H),2.26(s,3H),2.24(s,3H),1.73–1.62(m,4H)。
化合物389：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-5-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-4-甲基吡啶-3-甲酰胺
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步骤1：合成5-氨基-4-甲基吡啶-3-羧酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的5-氨基-4-甲基吡啶-3-羧酸（0.94g，6.18mmol）的MeOH（20mL）溶液中逐滴添加二氯亚砜。然后将溶液加热至50℃3.5小时，再加10mlMeOH，在50℃加热反应5小时，随后在室温下搅拌64小时。然后减压蒸发溶剂，加入饱和NaHCO3溶液直到为pH值为7-8。将产物萃取到EtOAc（2x50mL）中，合并的有机相用盐水洗涤（50mL），用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到灰白色粉末状的标题化合物（824mg，80%），该化合物适合用于下一步骤中，无需任何纯化。LC-MS m/z=167.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.52(d,J=34.2Hz,1H),8.16(s,1H),3.95(d,J=4.8Hz,3H),3.78(s,2H),2.42(s,3H)。
步骤2：合成4-甲基-5-[(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-3-羧酸甲酯
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在氮气气氛下，向搅拌后的5-氨基-4-甲基吡啶-3-羧酸甲酯（805mg，4.84mmol）的DCE（20mL）溶液中依次加入四氢吡喃酮（537μl，5.80mmol）和三氟乙酸（742μl，9.69mmol），搅拌反应5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（1.54g，7.27mmol）。在室温下搅拌反应16小时，再添加更多的四氢吡喃酮（100μl）和三乙酰基硼氢化钠（300mg），反应继续搅拌6小时。向反应混合物加入蒸馏水（20mL）和固体NaHCO3至pH值为8。两相分离，水相用EtOAc（2x50mL）洗涤，合并的有机相用盐水（50mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到淡黄色固体状的标题化合物（1.11g，88%），该化合物不经任何进一步的纯化而用于下一步骤中。LC-MS96%,m/z=251.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),8.10(s,1H),4.03(dt,J=11.9,3.5Hz,2H),3.92(s,3H),3.68–3.58(m,1H),3.54(tt,J=8.1,4.1Hz,3H),2.35(s,3H),2.12–2.05(m,2H),1.53(ddd,J=23.8,11.0,4.3Hz,2H)。
步骤3：合成5-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-4-甲基吡啶-3-羧酸甲酯
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在氮气气氛下，向搅拌后的4-甲基-5-[(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-3-羧酸甲酯（600mg，2.40mmol）的DCE（20mL）溶液中依次加入乙醛（1.07ml，19.2mmol）和三氟乙酸（367μl，4.79mmol），搅拌反应5分钟后，添加三乙酰基硼氢化钠（3.05g，14.4mmol）。在室温下搅拌反应16小时，之后向反应混合物加入更多的乙醛（500μl）和三乙酰基硼氢化钠（1.0g），继续搅拌反应16小时。向反应混合物添加蒸馏水（20mL），并添加固体NaHCO3至pH值为8。两相分离，水相用DCM（2x50mL）洗涤，合并的有机相用盐水（50mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。残余物用25g Isolute硅胶柱（用梯度0-50%的EtOAc的庚烷溶液洗脱）纯化，得到淡黄色油状的标题化合物（418mg，60%）。LC-MS96%,m/z=279.1,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.44(s,1H),3.97(d,J=11.0Hz,2H),3.93(s,3H),3.33(td,J=11.6,2.1Hz,2H),3.13(q,J=7.1Hz,2H),3.04(tt,J=10.9,4.0Hz,1H),2.54(s,3H),1.76–1.59(m,4H),0.89(t,J=7.1Hz,3H)。
步骤4：合成5-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-4-甲基吡啶-3-羧酸
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向搅拌后的5-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-4-甲基吡啶-3-羧酸甲酯（415mg，1.49mmol）的THF（7mL）和MeOH（3mL）溶液中加入4M NaOH溶液（932μl，3.73mmol）。在室温下搅拌反应4.5小时后，通过添加1M HCl来中和溶液，减压除去溶剂，然后添加饱和盐水（10mL）。水相用1:1的IPA:CHCl3（3×50mL）萃取，合并的有机相用盐水（30mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到灰白色固体状的标题化合物（305mg，77%），该化合物适合用于下一步骤中，而不经任何进一步的纯化。LC-MS99%,m/z=265.1,1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),8.46(s,1H),3.82(d,J=11.6Hz,2H),3.25(t,J=10.9Hz,2H),3.16–2.99(m,3H),2.45(s,3H),1.64(d,J=11.0Hz,2H),1.48(dt,J=11.9,5.7Hz,2H),0.81(t,J=7.0Hz,3H)。
步骤5：合成N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-5-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-4-甲基吡啶-3-甲酰胺
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向搅拌后的5-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-4-甲基吡啶-3-羧酸（300mg，1.13mmol）的DMF（10mL）溶液中加入DIPEA（395μl，2.27mmol）和HATU（518 mg，1.36mmol）。在室温下搅拌5分钟后，加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，214mg，1.25mmol），在室温下搅拌反应18小时。然后将反应混合物倒入500ml水，将产物萃取到EtOAc中（3x200mL），合并的有机相用盐水洗涤（2x100mL），干燥(Na2SO4)，蒸发。粗产物再用制备HPLC纯化，所得固体在乙醚中磨碎并过滤分离，得到灰白色固体状的标题化合物（115mg，25%）。LC-MS100%,m/z=399.2,1H NMR(500MHz,Acetone)δ10.97(s,1H),8.32(s,1H),8.22(s,1H),7.73(s,1H),5.92(s,1H),4.41(d,J=5.3Hz,2H),3.85(dd,J=11.3,3.0Hz,2H),3.28(td,J=11.7,1.9Hz,2H),3.15(q,J=7.1Hz,2H),3.09(ddd,J=11.1,7.2,3.9Hz,1H),2.32(d,J=1.5Hz,6H),2.23(s,3H),1.69(dd,J=12.6,1.7Hz,2H),1.55(ddd,J=24.3,12.2,4.4Hz,2H),0.85(t,J=7.1Hz,3H)。
化合物322：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯
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在氮气气氛下，向搅拌后的5-溴-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯（622mg，1.90mmol）的DCE（10mL）溶液中依次加入乙醛（318μl，5.69mmol）和醋酸（650μl，11.4mmol），将反应搅拌5分钟后，加入三乙酰基硼氢 化钠（2.00g，9.48mmol）。在室温下搅拌反应16小时后，向反应混合物加加入额外的乙醛（300μl）和三乙酰基硼氢化钠（1.2g）。反应搅拌继续6小时，然后添加蒸馏水（100mL），并添加固体NaHCO3直到水相pH值为7。两相分离，水相用DCM（2x50mL）洗涤，合并的有机相用盐水（100mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗产物用硅胶FCC（用0-5%的EtOAc的庚烷溶液洗脱）纯化，得到标淡黄色油状的题化合物（470mg，70%）。LC-MS100m/z=356.0/357.9.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.64(d,J=2.0Hz,1H),7.29(d,J=2.0Hz,1H),3.89(d,J=11.3Hz,2H),3.83(s,3H),3.26(td,J=11.5,2.6Hz,2H),2.98(q,J=7.1Hz,2H),2.86(dd,J=9.7,5.2Hz,1H),2.38(s,3H),1.67–1.52(m,4H),0.80(t,J=7.1Hz,3H)。
步骤2：合成5-(氮杂环丁烷-3-基)-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯
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向干燥的烧瓶中加入锌粉（186mg，2.85mmol）并用热枪将该烧瓶加热几分钟。然后氮气保护下，将无水DMA（15mL）加入到上述烧瓶中，同时剧烈搅拌并加热到65℃。向反应混合物中加入TMSCl(44μl，0.34mmol）和1,2-二溴乙烷（30μl，0.34mmol），反应在65℃搅拌30分钟，随后逐滴滴加N-Boc-3-碘代氮杂环丁烷（624mg，2.20mmol）的无水DMA（5mL）溶液。然后将反应冷却到室温，向反应混合物加入5-溴-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯（470mg，1.32mmol）的无水DMA（10mL）溶液。将所得溶液用氮气进行脱气处理10分钟后，向其加入固体形式的Pd(dppf)Cl2.DCM（32mg，0.04mmol）和碘化亚铜(15mg，0.08mmol）。在80℃加热反应60分钟，然后冷却到室温，加入蒸馏水（50mL）和饱和NH4Cl溶液（10mL）。水相用EtOAc萃取（3x50mL），然后合并的有机相用盐水洗涤（20mL），用Na2SO4干燥，过滤并蒸干，随后通过与庚烷形成共沸物除去残余的DMA。残余物经10g Isolute柱（用0%-25%EtOAc 的庚烷溶液作为洗脱液）纯化，得到浅棕色油状的标题化合物（565mg）。LC-MS100%,2.12分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=433.2。向该油状物中依次加入DCM（4mL）和TFA（1mL），所得溶液在室温下搅拌2小时，之后将溶剂蒸发，加饱和NaHCO3水溶液至pH值为7-8。水相用DCM萃取（3x30mL），用盐水洗涤（30mL），用MgSO4干燥，过滤并蒸发，得到黄色油状的标题化合物（440mg）。LC-MS100%,m/z=333.1。
步骤3：合成N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酰胺
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在氮气气氛下，向搅拌后的5-(氮杂环丁烷-3-基)-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯（440mg，1.32mmol）的DCE（10mL）溶液中依次加入多聚甲醛（278mg，9.27mmol）和醋酸（0.15ml，2.65mmol），搅拌反应5分钟后，加三乙酰基硼氢化钠（1.40g，6.62mmol）。在室温下搅拌反应16小时，然后向反应混合物添加蒸馏水（20mL），并添加固体NaHCO3直到水相pH值为8，两相分离，水相用DCM（3x30mL）洗涤，合并的有机相用盐水（50mL）洗涤，干燥Na2SO4，过滤，蒸发。残余物经10g Isolute层析（用0-5%的MeOH/DCM洗脱）纯化，蒸发，然后经氧化铝（用0-1%的MeOH/DCM洗脱）纯化，得到黄色油状的标题化合物，其直接用于合成的下一步。LC-MS77%,1m/z=347.1。
将3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基-5-(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)苯甲酸甲酯（103mg，0.30mmol）溶于THF（20mL）和MeOH（5mL）的混合溶液中，向该溶液中加入2M NaOH（1.49ml，2.97mmol）。反应混合物在50℃搅拌16小时，冷却，用6M HCl酸化至pH值为4，减压蒸发脱去溶剂，然后残余物在真空干燥箱中在40℃下干燥5小时，得到粗品酸。向所得酸的DMF（10mL）溶液中加入HATU（170mg，0.45mmol）和DIPEA（130μl，0.74mmol）。所得混合物在室温下搅拌5分钟后，加3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2酮（89%，66mg，0.39 mmol）。反应搅拌16小时后，向反应混合物中加入额外的HATU（80mg）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（30mg），继续搅拌5小时。将反应混合物倒入蒸馏水（50mL）中，用EtOAc萃取（3x50mL），用盐水洗涤（2x20mL），用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。粗产物经制备HPLC纯化，并蒸发，得到灰白色固体的标题化合物（28mg，三步5%）。LC-MS95%,m/z=467.3,1H NMR(500MHz,Acetone-d6)δ10.73(s,1H),7.61(s,1H),7.30(s,1H),7.26(s,1H),5.97(s,1H),4.74(t,J=9.9Hz,2H),4.60(t,J=9.6Hz,2H),4.38(q,J=6.2Hz,3H),3.83(d,J=11.6Hz,2H),3.27(s,3H),3.23(t,J=11.6Hz,2H),3.10(dd,J=14.1,7.0Hz,2H),3.04–2.97(m,1H),2.34(s,3H),2.31(s,3H),2.25(s,3H),1.67(d,J=11.1Hz,2H),1.56(td,J=11.8,4.1Hz,2H),0.83(t,J=7.0Hz,3H)。
化合物332：3-[苄基(甲基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺
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步骤1：合成N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-氟代-2-(三氟甲基)苯甲酰胺
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在冰浴冷却下，向搅拌后的3-氟代-2-(三氟甲基)苯甲酸（1.00g，4.81mmol）的DMF（25mL）溶液中加入HATU（2.19g，5.77mmol）和DIPEA（1.67ml，9.61mmol）。在0℃搅拌反应5分钟后，向反应混合物中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,904mg，5.29mmol），在室温下搅拌4小时。然后将反 应混合物倒入蒸馏水（300mL）中并搅拌1小时，然后采用微纤维纸通过真空抽滤收集沉淀物。将所得固体在乙醚中磨碎并过滤，得到浅褐色固体状的标题化合物（1.19g，72%）。LC-MS100%,m/z=343.0,1H NMR(500MHz,DMSO)δ11.48(s,1H),8.54(t,J=4.8Hz,1H),7.71(dd,J=13.3,8.0Hz,1H),7.56–7.45(m,1H),7.20(d,J=7.6Hz,1H),5.86(s,1H),4.25(d,J=4.9Hz,2H),2.18(s,3H),2.11(s,3H)。
步骤2：合成3-(苄基氨基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺
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将N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-氟代-2-(三氟甲基)苯甲酰胺（0.80g，2.34mmol）的苄胺（2.6ml，23.4mmol）悬浮液在微波反应器中在210℃加热4小时。冷却后向浆体中加入蒸馏水（20mL），并添加2M HCl直到其pH值为5。混合物用EtOAc萃取（3x50mL）。合并的有机相依次用pH值为5的HCl溶液（2x50mL）和盐水（30mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。所得油状物用50g Isolute硅胶柱（用0-5%的MeOH/DCM洗脱）纯化，得到灰白色固体状的标题化合物（313mg，29%）。LC-MS94%,m/z=430.2,1H NMR(500MHz,Acetone-d6)δ7.41–7.16(m,8H),6.69(d,J=8.5Hz,1H),6.50(d,J=7.4Hz,1H),5.87(s,1H),5.84(s,1H),4.53(d,J=5.7Hz,2H),4.35(d,J=5.6Hz,2H),2.28,(d,J=4.0Hz,3H),2.21(s,3H)。
步骤3：合成3-[苄基(甲基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向3-(苄基氨基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺（100mg，0.23mmol）的DCE（5mL）溶液中依次加入醋酸（27μl，0.47mmol）和多聚甲醛（7mg，0.23mmol），反应在室温下搅拌10分钟。然后 向反应混合物中一次性加入三乙酰基硼氢化钠（74mg，0.35mmol），在室温下搅拌16小时。用乙醛（35mg)、三乙酰基硼氢化钠（250mg）和AcOH(100mL）进行进一步的处理。再过24小时后，向反应混合物中再加乙醛（445mg）和三乙酰基硼氢化钠（250mg），继续搅拌反应3小时。然后向反应混合物中加水（20mL），分批加入NaHCO3来中和水相。水相用DCM萃取（2x50mL），然后合并的有机相用盐水洗涤，干燥（Na2SO4)并蒸发。所得产物用5g Isolute经FCC（用0-5%的MeOH/DCM洗脱）纯化，得到灰白色粉末状的标题化合物（24mg，22%）。LC-MS95%,4.12分钟(7分钟LC-MS法),m/z=444.2,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.10(br.s,1H),7.44(t,J=7.8Hz,1H),7.38–7.29(m,5H),7.27–7.23(m,1H),7.12(d,J=7.4Hz,1H),7.04(t,J=5.6Hz,1H),5.92(s,1H),4.52(d,J=5.9Hz,2H),4.09(s,2H),2.60(s,3H),2.38(s,3H),2.19(s,3H)。
化合物333：3-[苄基(乙基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向3-(苄基氨基)-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺（198mg，0.46mmol）的DCE（5mL）溶液中依次加入醋酸（80μl，1.38mmol）和乙醛（129μl，2.31mmol），反应在室温下搅拌10分钟。然后向反应混合物一次性加入三乙酰基硼氢化钠（490mg，2.31mmol），在室温下搅拌反应16小时。3天之内，用乙醛（4x130μl）和三乙酰基硼氢化钠（4x0.5g）进行进一步的处理以结束反应。然后向反应混合物加水（100mL），分批加NaHCO3中和水相。水相用DCM（2x50mL）萃取，然后合并的有机相用盐水洗涤,干燥(Na2SO4)，蒸发。所得产物用5g Isolute FCC（用0-5%的MeOH/DCM洗脱）纯化，随后通过RP-HPLC纯化，得到灰白色粉末状的标题化合物（76mg，34%）。LC-MS100%,m/z=458.3,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.70(s,1H),7.42(t,J=7.8Hz,1H),7.36–7.27(m,5H),7.24(d,J=7.1Hz,1H),7.12(d,J=7.4Hz,1H), 7.03(d,J=5.4Hz,1H),5.90(s,1H),4.50(d,J=5.7Hz,2H),4.05(s,2H),2.96(q,J=7.1Hz,2H),2.36(s,3H),2.15(s,3H),0.89(t,J=7.1Hz,3H)。
化合物334：3-[苄基(乙基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(苄基氨基)-2-甲基苯甲酸乙酯
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向搅拌后的3-氨基-2-甲基苯甲酸乙酯（1.00g，5.58mmol）的DCE（20mL）溶液中依次加入苯甲醛（569μl，5.58mmol）和醋酸（0.64ml，11.2mmol）。在室温下搅拌反应1小时后，然后向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（1.77g，8.37mmol），搅拌反应2小时。向反应混合物中加入蒸馏水（20mL），并加入固体NaHCO3直至水相pH值为7，两相分离。水相用DCM洗涤（2x50mL），合并的有机相用盐水洗涤（50mL），用Na2SO4干燥，过滤并蒸发，得到黄色油状的标题化合物（1.52g，96%），其未经任何进一步纯化，即用于下一步反应。LC-MS95%,m/z=270.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.42–7.32(m,4H),7.32–7.28(m,1H),7.17–7.06(m,2H),6.73(dd,J=7.8,1.1Hz,1H),4.40(s,2H),4.36(q,J=14.3,5.3Hz,2H),4.08(br.s,1H),2.35,(s,3H),1.39(t,3H)。
步骤2：合成3-[苄基(乙基)氨基]-2-甲基苯甲酸乙酯
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向搅拌后的3-(苄基氨基)-2-甲基苯甲酸乙酯（396mg，1.47mmol）的DCE（10mL）溶液中依次加入乙醛（164μl，2.94mmol）和醋酸（0.17ml，2.94mmol）。在室温下搅拌反应10分钟后，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（0.62g，2.94mmol），搅拌反应16小时。加入蒸馏水（30mL），并加入固体NaHCO3直到水相pH值为7，两相分离，水相用DCM（2x50mL）洗涤，合并的有机相用盐水（50mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发。所得残余物再用25g硅胶Isolute柱（用0%-5%的EtOAc的庚烷溶液洗脱）纯化，得到无色油状的标题化合物（372mg，81%）。LC-MS94%,m/z=298.1,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.48(dd,J=7.5,1.3Hz,1H),7.29–7.08(m,8H),4.32(q,J=7.1Hz,2H),4.05(s,2H),2.92(q,J=7.1Hz,2H),2.56(s,3H),1.35(t,J=7.1Hz,3H),0.92(t,J=7.1Hz,3H)。
步骤3：合成3-[苄基(乙基)氨基]-2-甲基苯甲酸
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向搅拌后的3-[苄基(乙基)氨基]-2-甲基苯甲酸乙酯（370mg，1.24mmol）的THF（20mL）和MeOH（5mL）溶液中加入2M NaOH（3.11ml，6.22mmol），反应在50℃搅拌16小时。将反应混合物冷却到室温，真空除去溶剂，用1M HCl将水溶液调至pH值为1。将产品萃取到DCM中（3x50mL），用盐水洗涤（20mL），用Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到橙色油状的标题化合物（296mg，80%），其未经任何进一步的纯化，而用于下一步反应中。LC-MS91%,m/z=270.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.73(d,J=7.5Hz,1H),7.34–7.30(m,4H),7.23(dt,J=15.4,6.9Hz,3H),4.12(d,J=13.5Hz,2H),3.04–2.94(m,2H),2.69(s,3H),0.99(t,J=7.0Hz,3H)。
步骤4：合成3-[苄基(乙基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲 基]-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的(3-[苄基(乙基)氨基]-2-甲基苯甲酸（纯度为91%,296mg，1.0mmol）的DMF（10mL）溶液中加入DIPEA（440μl，2.5mmol）和HATU（570mg，1.5mmol）。在室温下搅拌5分钟后，向反应混合物中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,222mg，1.3mmol），反应在室温下搅拌16小时。然后将反应混合物倒入150ml水中，并搅拌20分钟。将产品过滤，真空干燥，使用RP-HPLC纯化。所得固体与乙醚一起研磨并通过过滤分离，得到灰白色固体状的标题化合物（86mg，21%）。LC-MS99%,m/z=404.3,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.04(s,1H),7.33–7.23(m,4H),7.21(t,J=6.8Hz,1H),7.14–7.05(m,3H),7.05–6.99(m,1H),5.92(s,1H),4.53(d,J=5.9Hz,2H),4.06(s,2H),2.92(q,J=6.9Hz,2H),2.41(s,3H),2.39(s,3H),2.16(s,3H),0.92(t,J=7.0Hz,3H)。
化合物191：2-溴-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺
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步骤1：合成2-溴-5-氯-3-硝基苯甲酸甲酯
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将2-溴-5-氯苯甲酸甲酯（10g，40mmol）的浓H2SO4(48ml，910mmol）溶液在空气中的丙酮/冰浴中冷却至-5℃。在0℃下，在30分钟内将浓硝酸（3.35ml，52mmol）和浓硫酸（3.4ml，64mmol）的混合物逐滴滴加到反应混合物中。将黄色的反应混合物在0℃搅拌1.5小时后倒入冰中。加入EtOAc（150mL），分离两相。有机相依次用去离子水（3x50mL）和盐水（50mL）洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到淡黄色油状的标题化合物（12.0g，60%），放置固化。所得原料含40%的6-硝基异构体。所得原料使用时不用进一步纯化。LC-MS91%,m/z=无电离作用,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.86(1H,d,J=2.52Hz),7.77(1H,d,J=2.52Hz),3.99(3H,s)。
步骤2：合成3-氨基-2-溴-5-氯苯甲酸甲酯
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在室温下，向2-溴-5-氯-3-硝基苯甲酸甲酯（4.0g，14mmol）的甲醇（130mL）溶液中依次加入氯化铵（7.13g，136mmol）和去离子水（65mL）。在空气中加热混合物到70℃后，向所得混合物加入铁粉（4.55g，81.5mmol）。反应在70℃搅拌3小时，冷却到室温，通过硅胶过滤。滤饼用MeOH（65mL）洗涤，滤液减压浓缩。将残余物溶解于饱和NaHCO3溶液（50mL）和EtOAc（100mL）中。两相分离，有机相用饱和NaHCO3(aq)（3x50mL）洗涤后用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（50g硅胶，Isolute柱，洗脱梯度为95:5至7:3的庚烷：EtOAc）纯化，得到无色油状的标题化合物（1.92g，48%）。LC-MS92%,m/z=268.8/265.8/267.6,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.08(1H,d,J=2.36Hz),6.86(1H,d,J=2.36Hz),4.34-4.49(2H,m),3.93(3H,s)。
步骤3：合成2-溴-5-氯-3-(四氢吡喃-4-基氨基)苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向3-氨基-2-溴-5-氯苯甲酸甲酯（1.0g，3.8mmol）的1,2-二氯乙烷（15mL）溶液中依次加入四氢吡喃酮（0.7ml，7.6mmol）和醋酸 （1.3ml，23mmol）。在室温下搅拌溶液5分钟后，在室温下向反应溶液加入三乙酰基硼氢化钠（2.4g，11mmol）。21小时后，向反应混合物中加入额外的四氢吡喃酮（0.7ml，7.6mmol），搅拌10分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（2.4g，11mmol）。搅拌20小时后，加去离子水（30mL），所得混合物用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x30mL）。合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（25g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为9:1至8:2的庚烷：EtOAc）纯化，得到白色固体状的标题化合物（903mg，68%）。LC-MS92%,2.11分钟(3分钟LC-MS法),m/z=348.2/350.2/351.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.94-7.07(1H,m),6.70(1H,d,J=2.36Hz),4.72(1H,d,J=7.57Hz),3.96-4.15(2H,m),3.87-3.96(3H,m),3.40-3.67(3H,m),2.05(2H,d,J=13.08Hz),1.49-1.69(2H,m)。
步骤4：合成2-溴-5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向2-溴-5-氯-3-(四氢吡喃-4-基氨基)苯甲酸甲酯（300mg，0.86mmol）的1,2-二氯乙烷（3mL）溶液中依次加入乙醛（96μl，1.7mmol）和醋酸（0.3ml，5.16mmol）。在室温下搅拌反应5分钟后，在室温下向所得溶液加入三乙酰基硼氢化钠（0.55g，2.6mmol），通过LCMS监测反应。22小时后，向反应混合物中再加入乙醛（96μl，1.7mmol），搅拌10分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（0.55g，2.6mmol）。3天后，反应混合物用1,2-二氯乙烷（5mL）稀释。向反应混合物加入乙醛（962μl，17.2mmol），搅拌10分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（1.82g，8.6mmol）。15小时后，向反应混合物再加入乙醛（960μl，17.2mmol），搅拌10分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（1.82g，8.6mmol）。反应混合物在室温下再搅拌22小时，然后加去离子水（25mL），混合物用固体NaHCO3中和。加入EtOAc（25mL），两相分离。水层用EtOAc萃取（2x25mL），合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为99:1至8:2的庚烷：EtOAc）纯化，得到无色油状的标题化合物（122mg，38%）物。LC-MS85%,m/z=376.3/378.2/379.9,1H NMR(500MHz, CDCl3)δ7.31(d,J=2.5Hz,1H),7.18(d,J=2.4Hz,1H),3.98(dd,J=8.7,5.5Hz,2H),3.94(s,3H),3.35(td,J=11.6,5.5Hz,2H),3.19(t,J=7.1Hz,1H),3.12(q,J=7.1Hz,2H),1.75(td,J=10.1,8.8,3.9Hz,4H),0.92(t,J=7.1Hz,3H)。
步骤5：合成2-溴-5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸
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向2-溴-5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（122mg，0.32mmol）的四氢呋喃(3mL）溶液中加入4M NaOH（3.2mL）。反应混合物在50℃搅拌20小时。用6M HCl将反应混合物酸化至pH值2-3，用DCM萃取（3x100mL）。合并的有机液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到淡黄色泡沫状的2-溴-5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸（109mg，93%,校正产率为83%）。LC-MS89%,m/z=361.9/364.2/365.8,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.50(d,J=2.4Hz,1H),7.23(d,J=2.4Hz,1H),4.00(d,J=11.5Hz,2H),3.49–3.27(m,2H),3.21(t,J=7.4Hz,1H),3.14(q,J=7.0Hz,2H),1.78(dd,J=7.4,3.4Hz,4H),0.93(t,J=7.0Hz,3H)。
步骤6：合成2-溴-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺
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在室温和氮气保护下，向2-溴-5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸（109mg，0.3mmol）的DMF溶液（3mL）中依次加入PYBOP（187mg，0.36mmol）、N-乙基-N-(丙烷-2-基)丙烷-2-胺（78μl，0.45mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,56mg，0.33mmol）。在室温下搅拌1小时后，向反应混合物加入EtOAc（30mL），然后依次用去离子水（2x10mL）和饱和NaHCO3(aq)（2x10mL）洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（5g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为100%DCM至98:2的DCM：MeOH)进行两次纯化。样品在真空干燥箱干燥18小时，得到淡黄色固体状的标题化合物（103mg，65%）。LC-MS94%,m/z=496.0/498.0/500.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.00(s,1H), 7.20–7.10(m,1H),7.10–7.05(m,2H),5.94(s,1H),4.54(d,J=5.9Hz,2H),3.96(d,J=11.4Hz,2H),3.42–3.26(m,2H),3.28–3.12(m,1H),3.09(q,J=7.0Hz,2H),2.39(s,3H),2.23(s,3H),1.72(td,J=8.5,3.8Hz,4H),0.90(t,J=7.0Hz,3H)。
化合物102：5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(哌啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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将5-氯-2-甲基苯甲酸（9.9g，58mmol）的浓硫酸（70ml，1310mmol）溶液在丙酮/冰浴中冷却到-5℃。在-5℃下，在30分钟内将浓硝酸（4.9ml，75mmol）和浓硫酸（5.0ml，94mmol）的混合物逐滴滴加到反应混合物中。将反应混合物在-5℃搅拌2小时后倒入冰中（150g），过滤收集沉淀物。将所得沉淀物溶解在EtOAc（100mL）中，用盐水洗涤（100mL），然后用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到灰白色固体状的标题化合物（11.9g）。所得原料使用时不用进一步纯化。LC-MS57%,m/z=214.0/216.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.37(1H,br.s.),8.19(1H,d,J=2.21Hz),7.91(1H,d,J=2.21Hz),2.67(2H,s)。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（1.17g，5.43mmol）的DMF溶液中（11mL）依次加入Na2CO3（862mg，8.14mmol）和碘乙烷（0.51ml，8.14mmol）。反应混合物在室温下搅拌19小时，然后用去离子水（30mL）稀释， 并用EtOAc萃取（3x30mL）。合并的有机相用饱和NaHCO3(aq)（30mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为99:1-95:5的庚烷：EtOAc）纯化，得到淡黄色油状的标题化合物（900mg）。LC-MS89%,m/z=无电离作用,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ8.00(1H,d,J=2.21Hz),7.86(1H,d,J=2.21Hz),3.96(3H,s),2.60(3H,s).
步骤3：合成3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在室温下，向5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（9.19g，40mmol）的甲醇（200mL）溶液中依次加入氯化铵（21g，400mmol）和去离子水（100mL）。将混合物加热到70℃后,向所得混合物加入铁（13.4g，240mmol）。反应混合物在70℃搅拌的2.5小时中，颜色变深。将反应混合物冷却到室温，通过硅胶过滤。滤饼用MeOH（100mL）洗涤，滤液减压浓缩。将残余物溶解于去离子水（100mL）和EtOAc（100mL）中。两相分离，水相用EtOAc萃取（2x100mL）。合并的萃取液用盐水洗涤（100mL），用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粘稠的橙色油状的标题化合物（7.6g），放置固化。所得原料使用时不用进一步纯化。LC-MS63%,m/z=200.3/202.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.20(1H,d,J=2.21Hz),6.80(1H,d,J=2.05Hz),3.89(3H,s),3.74-3.87(2H,m),2.30(3H,s)。
步骤4：合成4-{[5-氯-3-(甲氧羰基)-2-甲基苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
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在室温和氮气保护下，向3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（100mg，0.50mmol）的1,2-二氯乙烷（2.5mL）溶液中依次加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯（200mg，1.0mmol）和醋酸（0.17ml，3.0mmol）。所得溶液在室温下搅拌5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（0.32g，1.5mmol）。在氮气氛中，搅拌反应混合物20小时。加去离子水（5mL），所得混合物用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x5mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物 通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为99:1至7:3的庚烷：EtOAc）纯化，得到白色固体状的标题化合物（131mg，68%）。LC-MS98%,m/z=405.4/406.9(M+Na),1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.10(1H,d,J=2.05Hz),6.70(1H,d,J=1.89Hz),3.98-4.16(2H,m),3.88(3H,s),3.58-3.72(1H,m),3.37-3.52(1H,m),2.97(2H,br.t,J=11.50,11.50Hz),2.24(3H,s),2.06(2H,br.d,J=10.60Hz),1.44-1.51(9H,m),1.32-1.44(2H,m)。
步骤5：合成4-{[5-氯-3-(甲氧羰基)-2-甲基苯基](乙基)氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
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在室温和氮气保护下，向4-{[5-氯-3-(甲氧羰基)-2-甲基苯基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（125mg，0.33mmol）的1,2-二氯乙烷（1.6mL）溶液中依次加入乙醛（37μl，0.65mmol）和醋酸（0.11ml，1.96mmol）。所得溶液在室温下搅拌5分钟后，在室温下加入三乙酰基硼氢化钠（0.21g，0.98mmol）。通过LCMS监测反应，4.5小时后向反应混合物中再次加入乙醛（73μl，1.31mmol）和三乙酰基硼氢化钠（0.28g，1.31mmol）。所得混合物继续搅拌18小时，然后加去离子水（10mL），并用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x10mL）。合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为99:1至8:2的庚烷：EtOAc）纯化，得到稠密的无色油状的标题化合物（131mg，98%）。LC-MS98%,m/z=433.5/435.1(M+Na),1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.57(1H,d,J=2.21Hz),7.22(1H,d,J=2.05Hz),3.97-4.14(2H,m),3.90(3H,s),3.04(2H,q,J=6.99Hz),2.81-2.91(1H,m),2.70(2H,br.t,J=11.50,11.50Hz),2.45(3H,s),1.69-1.80(2H,m),1.47-1.56(2H,m),1.46(9H,s),0.87(3H,t,J=7.09Hz)。
步骤6：合成3-({1-[(叔丁氧)羰基]哌啶-4-基}(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸
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向4-{[5-氯-3-(甲氧羰基)-2-甲基苯基](乙基)氨基}哌啶-1-羧酸叔丁酯（131mg，0.32mmol）的四氢呋喃(2mL）溶液中加入LiOH（8.4mg，0.35mmol）的去离子水（2mL）溶液。反应混合物在室温下在空气中搅拌24小时。向反应混合物中加入1M NaOH（3.19mL），继续搅拌24小时。然后将反应混合物升温至40℃25小时。用1M HCl将反应混合物酸化至pH值2-3，并用EtOAc萃取（3x20mL）。合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到稠密的橙色油状的标题化合物（122mg）。LC-MS76%,m/z=397.5/399.4,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.74(1H,s),7.20-7.35(2H,m),3.92-4.11(2H,m),2.97-3.13(2H,m),2.81-2.95(1H,m),2.62-2.79(2H,m),2.53(3H,s),1.75(2H,br.s.),1.48-1.61(2H,m),1.46(9H,s),0.89(3H,t,J=6.86Hz)。
步骤7：合成4-[(5-氯-3-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}-2-甲基苯基)(乙基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯
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在室温和氮气保护下，向3-({1-[(叔丁氧)羰基]哌啶-4-基}(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸（60mg，0.15mmol）的DMF（2mL）溶液中依次加入PYBOP（94mg，0.18mmol）、N-乙基-N-(丙烷-2-基)丙烷-2-胺（40μl，0.23mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,28mg，0.17mmol）。在室温下搅拌1小时后，向反应混合物中加入EtOAc（30mL），并依次用去离子水（5mL）和饱和NaHCO3(aq)（3x5mL）洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（2g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为100%EtOAc至96:4的EtOAc：MeOH）纯化，得到淡黄色固体状的标题化合物（71mg，88%）。LC-MS97%,m/z=531.1/533.1,1H NMR(250MHz,CDCl3)δppm11.17(1H,br.s.),7.11-7.18(1H,m),7.06(2H,dd,J=7.46,2.28Hz),5.96(1H,s),4.53(2H,d,J=5.94Hz),3.93-4.14(2H,m),2.97-3.08(2H,m),2.78-2.88(1H,m),2.68(2H,t,J=11.57Hz),2.39(3H,s),2.26(3H,s),2.24(3H,s),1.71(2H,d,J=11.27Hz),1.52(2H,br.s.),1.45(9H,s),0.86(3H,t,J=6.93Hz)。
步骤8：合成5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(哌 啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酰胺
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在室温下，向4-[(5-氯-3-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}-2-甲基苯基)(乙基)氨基]哌啶-1-羧酸叔丁酯（140mg，0.26mmol）的1,4-二氧六环(5mL）溶液中加入4M HCl的二氧六环溶液（1.32mL）。搅拌很短的时间后形成胶状物，然后将该胶状物溶解于加入的去离子水（2mL）。反应搅拌21小时后，减压浓缩得到稠密的油状物。加入DCM（3mL），形成固体。将所得混合物浓缩得到105mg黄色固体，将该固体在DCM（10mL）中搅拌1小时，再进行过滤，在真空干燥箱中在高度真空下干燥24小时。然后将所得样品溶解于去离子水（0.2mL）中，再冻干，得到米黄色固体状的标题化合物（86mg，70%）。LC-MS100%,m/z=431.2/433.2,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.44(bs,1H),7.26(bs,1H),6.69(bs,1H),4.55(s,2H),3.53–3.34(m,3H),3.28–3.08(m,2H),3.01(t,J=11.8Hz,2H),2.51(s,3H),2.43(s,3H),2.33(s,3H),2.16–1.96(m,2H),1.91–1.76(m,2H),0.92(t,J=6.9Hz,3H)。
化合物192：5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲氧基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲氧基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在0℃下，将浓硫酸（90mL）分批加入5-氯-2-甲基苯甲酸（13.2g，77.6mmol）中。然后在0℃下，再将浓HNO3(10.5g，1740mmol）和浓H2SO4(15mL）的混 合物逐滴滴加到上述混合物中，滴加时间约为1.5小时。滴加完后，所得混合物在该温度下搅拌2小时。将所得混合物在倒入冰水中同时剧烈搅拌，通过过滤收集沉淀。将所得沉淀溶解于EtOAc，用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥并浓缩，得到不经进一步的纯化即用于下一步中的标题化合物（13.2g）。LC-MS95%,m/z=245.9/247.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.01(1H,d,J=2.68Hz),7.91(1H,d,J=2.68Hz),4.01(3H,s),3.97-3.99(3H,s)。
步骤2：合成3-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯
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在室温下，向5-氯-2-甲氧基-3-硝基苯甲酸甲酯（1.21g，4.93mmol）的甲醇（50mL）溶液中依次加入氯化铵（2.59g，49.2mmol）和去离子水（25mL）。将所得混合物加热到70℃后加入铁（1.65g，29.6mmol）。反应混合物在70℃搅拌的2小时中，颜色变深。将所得混合物冷却到室温并通过硅胶过滤。滤饼用MeOH（50mL）洗涤，滤液减压浓缩。将残余物溶解于去离子水（25mL）和EtOAc（25mL）中。两相分离，水相用EtOAc萃取（2x25mL）。合并的萃取液用盐水洗涤（25mL），用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到粘性的褐色油状的标题化合物（892mg，67%）。所得原料使用时没有进一步纯化。LC-MS89%,1.75分钟(3分钟LC-MS方法),m/z=216.3/218.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.16(1H,d,J=2.52Hz),6.87(1H,d,J=2.52Hz),4.03(2H,br.s.),3.89-3.94(3H,m),3.84(3H,s)。
步骤3：合成5-氯-2-甲氧基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向3-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯（440mg，2mmol）的1,2-二氯乙烷（8mL）溶液中依次加入四氢吡喃酮（0.38ml，4.0mmol）和醋酸（0.7ml，12mmol）。在室温下搅拌溶液5分钟后，向所得溶液加入三乙酰基硼氢化钠（1.3g，6.1mmol）。搅拌23小时后加入去离子水（16mL），混合物 用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x16mL）。合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为9:1至7:3的庚烷：EtOAc）纯化，得到白色固体状的标题化合物（439mg，72%）。LC-MS97%,m/z=300.3/302.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.06(1H,d,J=2.52Hz),6.73(1H,d,J=2.52Hz),4.38-4.45(1H,m),4.02(2H,dt,J=11.78,3.49Hz),3.91(3H,s),3.81(3H,s),3.54(2H,td,J=11.47,2.13Hz),3.40-3.50(1H,m),2.03(2H,br.d,J=13.70Hz),1.48-1.55(2H,m)。
步骤4：合成5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲氧基苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-甲氧基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（220mg，0.73mmol）的1,2-二氯乙烷（2mL）溶液中依次加入乙醛（82μl，1.47mmol）和醋酸（0.25ml，4.4mmol）。在室温下搅拌5分钟后，向所得溶液加入三乙酰基硼氢化钠（0.47g，2.2mmol）。搅拌16小时后，向反应混合物加入乙醛（82μl，1.47mmol），搅拌5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（0.47g，2.2mmol）。搅拌24小时后，向反应混合物再加入乙醛（82μl，1.47mmol），搅拌5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（0.47g，2.2mmol）。反应搅拌24小时后，加去离子水（10mL），并用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x10mL）。合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为95:5至7:3的庚烷：EtOAc）纯化，得到黄色油状的标题化合物（127mg，53%）。LC-MS93%,m/z=328.4/330.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.35(d,J=2.6Hz,1H),7.09(d,J=2.6Hz,1H),3.98(dd,J=11.3,4.2Hz,2H),3.91(s,3H),3.85(s,3H),3.48(tt,J=11.6,4.0Hz,1H),3.36(td,J=11.8,1.9Hz,2H),3.15(q,J=7.0Hz,2H),1.78(qd,J=12.2,4.6Hz,2H),1.72–1.59(m,2H),0.99(t,J=7.0Hz,3H)。
步骤5：合成5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲氧基苯甲酸
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向5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲氧基苯甲酸甲酯（127mg，0.39mmol）的THF（4mL）溶液中加入4M NaOH（3.87mL）。反应在50℃搅拌24小时。用6M HCl将反应混合物酸化至pH值2-3，用DCM萃取（5x15mL）。合并的萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色油状的标题化合物（111mg，91%）。LC-MS80%,1.25分钟(3分钟LC-MS法),m/z=314.4/315.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm10.02–9.55(m,1H),8.01–7.47(m,1H),7.36–6.96(m,1H),4.15–3.86(m,5H),3.76(t,J=6.6Hz,2H),3.55–3.12(m,3H),1.95–1.59(m,4H),1.15–0.88(m,3H)。
步骤6：合成5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲氧基苯甲酰胺
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在室温和氮气保护下，向5-氯-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲氧基苯甲酸（111mg，0.35mmol）的DMF（3mL）溶液中依次加入PYBOP（220mg，0.42mmol）、N-乙基-N-(丙烷-2-基)丙烷-2-胺（92μl，0.53mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，66mg，0.39mmol）。在室温下搅拌1.5小时后，通过LCMS未观测到起始原料。向反应混合物中加入去离子水（20mL），所产生的沉淀经过滤收集。所得固体用去离子水洗涤（3x5mL），然后在空气中干燥。固体通过FCC（5g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为100%DCM–至97:3的DCM/MeOH)进一步纯化。所得样品在真空干燥箱中干燥18小时，得到白色固体状的标题化合物（105mg，64%）。LC-MS98%,m/z=449.5/452.1,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm11.47(s,1H),8.79(t,J=5.8Hz,1H),7.73(d,J=2.6Hz,1H),7.05(d,J=2.6Hz,1H),5.92(s,1H),4.55(d,J=6.0Hz,2H),3.98(dd,J=11.3,3.8Hz,2H),3.78(s,3H),3.35(t,J=11.6Hz,3H),3.12(q,J=7.0Hz,2H),2.42(s,3H),2.28(s,3H),1.92–1.61(m,4H),0.94(t,J=7.0Hz,3H)。
化合物212：5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲氧基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲氧基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-甲氧基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（500mg，1.67mmol）的1,2-二氯乙烷（16mL）溶液中依次加入多聚甲醛（300mg，10mmol）和醋酸（0.57ml，10mmol）。搅拌5分钟后，向所得混合物加入三乙酰基硼氢化钠（2.12g，10mmol）。搅拌64小时后加去离子水（30mL），混合物用固体NaHCO3中和，两相分离。水层用EtOAc萃取（3x15mL），合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为9:1至7:3的庚烷：EtOAc）纯化，得到431mg无色油状的标题化合物（82%）。LC-MS98%,m/z=314.0/316.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.30(d,J=2.5Hz,1H),7.04(d,J=2.5Hz,1H),4.00(dd,J=11.3,4.3Hz,2H),3.90(s,3H),3.82(s,3H),3.70(ddt,J=11.7,7.7,3.8Hz,1H),3.39(t,J=11.1Hz,2H),2.71(s,3H),1.84(qd,J=12.3,4.6Hz,2H),1.66–1.55(m,2H)。
步骤2：合成5-氯-2-甲氧基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸
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向5-氯-2-甲氧基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（413mg，1.32mmol）的THF（13mL）和MeOH（2mL）溶液中加入4M NaOH（13.16mL）。 反应混合物在50℃搅拌16小时。用6M HCl将反应混合物酸化至pH值2-3，并用DCM萃取（5x10mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到稠密的黄色油状的标题化合物（385mg，98%）。LC-MS94%,m/z=300.0/302.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.74(d,J=2.0Hz,1H),7.30–7.12(m,1H),4.11–4.02(m,2H),4.01(s,3H),3.54(t,J=11.6Hz,1H),3.40(t,J=11.3Hz,2H),2.76(s,3H),1.97–1.78(m,2H),1.63(d,J=11.8Hz,2H)。
步骤3：合成5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲氧基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-甲氧基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸（200mg，0.67mmol）的DMF（2mL）溶液中依次加入HBTU(304mg，0.80mmol）、N-乙基-N-(丙烷-2-基)丙烷-2-胺（174μl，1.0mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,125mg，0.73mmol）。在室温下搅拌2小时后，向反应混合物加入EtOAc（30mL），然后依次用去离子水（5mL）和饱和NaHCO3(aq)（3x5mL）洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶，Isolute柱，洗脱液梯度为100%DCM至96:4的DCM/MeOH）纯化，得到灰白色固体状的标题化合物（182mg，63%）。LC-MS98%,m/z=434.1/436.1,1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm12.52(br s,1H),8.76(t,J=5.8Hz,1H),7.69(d,J=2.6Hz,1H),7.01(d,J=2.6Hz,1H),5.94(s,1H),4.56(d,J=6.0Hz,2H),3.99(dd,J=11.2,3.9Hz,2H),3.72(s,3H),3.49(tt,J=11.5,3.7Hz,1H),3.36(t,J=11.2Hz,2H),2.67(s,3H),2.42(s,3H),2.31(s,3H),1.93–1.73(m,2H),1.64–1.52(m,2H)。
化合物205:5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-[2-(三甲基硅基)乙炔基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向2-溴-5-氯苯甲酸甲酯（14.8g，59mmol）的TEA（124ml，890mmol）溶液中加入碘化亚铜(338mg，1.78mmol）和三苯基膦（778mg，2.97mmol）。向所得混合物中通入氮气10分钟后，加入乙炔基(三甲基)硅烷（12.45ml，89mmol）和Pd(OAc)2(266mg，1.19mmol）。反应混合物在50℃搅拌20小时，然后减压浓缩。将残余物溶解于去离子水（50mL）和EtOAc（50mL）中，并通过硅藻土过滤。滤饼用EtOAc洗涤（50mL），两相分离，水层用EtOAc萃取（2x50mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶,Isolute柱，洗脱液梯度为99:1-85:15的庚烷：EtOAc）纯化，得到橙色油状的标题化合物（16.2g，102.4%），其放置固化且包含残留的庚烷。LC-MS91%,m/z=267.4/268.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.89(d,J=2.2Hz,1H),7.51(d,J=8.3Hz,1H),7.41(dd,J=8.3,2.3Hz,1H),3.92(s,3H),0.27(s,9H)。
步骤2：合成5-氯-2-乙炔基苯甲酸甲酯
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在室温下，向5-氯-2-[2-(三甲基硅基)乙炔基]苯甲酸甲酯（10g，37.5mmol）的MeOH（150mL）溶液中加入K2CO3(10.4g，75mmol）。反应混合物搅拌1小时，然后减压浓缩。将残余物溶解于去离子水（50mL）和EtOAc（50mL）。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x50mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（50g硅胶,Isolute柱，洗脱液梯度为95:5-9:1的庚烷：EtOAc）纯化，得到橙色油状的标题化合物（5.75g，55%），放置固化。 所得原料包含30%的乙醚，未经任何进一步纯化即适合使用。LC-MS38%,m/z=195.0/196.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.93(d,J=2.2Hz,1H),7.55(d,J=8.3Hz,1H),7.45(dd,J=8.3,2.3Hz,1H),3.94(s,3H),3.43(s,1H)。
步骤3：合成5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-乙炔基苯甲酸甲酯（5.34g，27mmol）的乙酸乙酯（135mL）溶液中加入Pd/C（10%）(50%水，2.92g，1.37mmol）。反应混合物在氢气氛中在室温下搅拌3小时。所得混合物通过硅藻土过滤。滤饼用EtOAc（50mL）洗涤，滤液减压浓缩，得到棕色油状的标题化合物（5.12g，94%），其未经任何进一步纯化即适合使用。LC-MS56%,m/z=198.9/200.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.84(d,J=2.3Hz,1H),7.39(dd,J=8.3,2.3Hz,1H),7.21(d,J=8.3Hz,1H),3.90(s,3H),2.94(q,J=7.5Hz,2H),1.21(t,J=7.5Hz,3H)。
步骤4：合成5-氯-2-乙基-3-硝基苯甲酸甲酯
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将5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯（5.12g，25.8mmol）的浓硫酸（31ml，587mmol）溶液在丙酮/冰浴中冷却到-5℃。将浓硝酸（2.15ml，33.5mmol）和浓硫酸（2.0ml，37.5mmol）的混合物逐滴滴加到上述混合物中，滴加时间为15分钟。将所得淡黄色反应混合物在-5℃搅拌1小时，然后倒入冰中（500mL），用EtOAc萃取（3x100mL）。合并的有机相依次用去离子水（100mL）和盐水（100mL）洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。LCMS和NMR显示了约30%的酯水解。将所得原料粗品溶解于甲醇（30mL）中，并在氮气保护下冷却到0℃，再慢慢滴加SOCl2（2.25ml，30.93mmol）。然后反应混合物加热回流6小时，减压浓缩，得到的含有原料的橙色油状的标题化合物（6.18g，98%），其是1:1的3-硝基:6- 硝基异构体的混合物，并包含一些乙酸乙酯。所得原料适合用于下一步骤，而不经过任何进一步的纯化。
步骤5：合成3-氨基-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯
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在室温下，向5-氯-2-乙基-3-硝基苯甲酸甲酯（6.18g，25.4mmol）的甲醇（250mL）溶液中依次加入氯化铵（13.3g，253mmol）和去离子水（125mL）。将所得混合物加热到70℃后加入铁（8.50g，152mmol）。反应混合物在70℃搅拌的2.5小时中，颜色变深。将所得混合物冷却至室温并通过硅胶过滤。滤饼用MeOH（250mL）洗涤，滤液减压浓缩。将残余物溶解于饱和NaHCO3(aq)（50mL）和EtOAc（150mL）中。两相分离，有机相用饱和NaHCO3(aq)（2x50mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（50g硅胶,Isolute柱，洗脱液梯度为95:5-75:25的庚烷：EtOAc）纯化，得到2.42g黄色油状的3-氨基-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯粗品。所得原料用于下一步骤，没有进一步纯化。LC-MS31%,m/z=295.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.17(d,J=2.1Hz,1H),6.79(d,J=2.1Hz,1H),3.87(s,3H),3.86–3.81(m,2H),2.74(q,J=7.5Hz,2H),1.20(t,J=7.5Hz,3H)。
步骤6：合成5-氯-2-乙基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向3-氨基-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯（1.5g，7.02mmol）的1,2-二氯乙烷（28mL）溶液中依次加入四氢吡喃酮（1.3ml，14.mmol）和醋酸（2.41ml，42mmol）。所得溶液在室温下搅拌5分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（4.46g，21mmol）。搅拌20小时后，向混合物中加入去离子水（28mL），并用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x28mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（50g硅胶,Isolute 柱，洗脱液梯度为95:5-8:2的庚烷：EtOAc）纯化，得到白色固体状的1.76g5-氯-2-乙基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯粗品。所得原料用于下一步骤，没有进一步纯化。LC-MS60%,m/z=298.0/300.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.07(d,J=2.0Hz,1H),6.71(d,J=1.9Hz,1H),4.01(dt,J=11.8,3.4Hz,2H),3.87(s,3H),3.82–3.76(m,1H),3.64–3.47(m,3H),2.79–2.63(m,2H),2.06(d,J=13.2Hz,2H),1.55–1.46(m,2H),1.18(t,J=7.5Hz,3H)。
步骤7：合成5-氯-2-乙基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-乙基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（350mg，1.18mmol）的1,2-二氯乙烷（10mL）溶液中依次加入多聚甲醛（212mg，7.05mmol）和醋酸（0.4ml，7.05mmol）。搅拌5分钟后，向所得混合物加入三乙酰基硼氢化钠（1.49g，7.05mmol）。搅拌23小时后，向反应混合物再加入多聚甲醛（212mg，7.05mmol），搅拌10分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（1.49g，7.05mmol）。搅拌3小时后，加入去离子水（15mL），所得混合物用固体NaHCO3中和，分离两相。水层用EtOAc萃取（2x15mL），合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶,Isolute柱，洗脱液梯度为99:1-85:15的庚烷：EtOAc）纯化，得到无色油状的标题化合物（334mg）。所得的产品包含约22%的乙酸乙酯。所得原料用于下一步骤，没有进一步纯化。LC-MS56%,m/z=312.0/314.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.52(d,J=2.2Hz,1H),7.24(d,J=2.2Hz,1H),4.01–3.93(m,2H),3.89(s,3H),3.34(td,J=11.7,2.3Hz,2H),3.06–2.96(m,2H),2.94–2.85(m,1H),2.61(s,3H),1.76–1.59(m,4H),1.10(t,J=7.4Hz,3H)。
步骤8：合成5-氯-2-乙基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸
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向5-氯-2-乙基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（334mg，1.07mmol）的THF（11mL）溶液中加入4M NaOH（10.7mL）。反应混合物在50℃下搅拌27小时。向反应混合物中加入MeOH（5mL），继续在50℃搅拌21小时。用6MHCl将反应混合物酸化至pH值2-3，用DCM萃取（5x10mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到311mg为橙色油状物的标题化合物，放置固化。所得原料用于下一步骤，没有进一步纯化。LC-MS79%,2.01分钟(3分钟LC-MS法),m/z=298.0/300.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.72(d,J=2.1Hz,1H),7.37–7.27(m,1H),4.00(brd,J=11.1Hz,2H),3.36(td,J=11.6,2.0Hz,2H),3.11(q,J=7.4Hz,2H),2.94(t,J=10.6Hz,1H),2.64(s,3H),1.78–1.56(m,4H),1.15(t,J=7.4Hz,3H)。
步骤9：合成5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-乙基-3-[甲基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸（100mg，0.34mmol）的DMF（2mL）溶液中依次加入HBTU(153mg，0.4mmol）、N-乙基-N-(丙烷-2-基)丙烷-2-胺（88μl，0.5mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，63mg，0.37mmol）。在室温下搅拌3小时后，向反应混合物加入EtOAc（30mL），依次用去离子水（5mL）和饱和NaHCO3(aq)（3x5mL）洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（5g硅胶,Isolute柱，洗脱液梯度为100%DCM至96:4的DCM：MeOH）纯化，得到灰白色固体状的标题化合物（94mg，65%）。LC-MS95%,m/z=432.1/434.1,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm11.34(s,1H),7.14–7.08(m,2H),7.03(d,J=2.0Hz,1H),5.95(s,1H),4.52(d,J=5.8Hz,2H),3.96(d,J=11.2Hz,2H),3.33(td,J=11.4,2.3Hz,2H),2.96–2.85(m,1H),2.79(q,J=7.4Hz,2H),2.58(s,3H),2.39(s,3H),2.23(s,3H),1.73–1.62(m,4H),1.05(t,J=7.4Hz,3H)。
化合物206：5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-乙基-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-乙基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（350mg，1.18mmol）的1,2-二氯乙烷（10mL）溶液中依次加入乙醛（0.66ml，11.8mmol）和醋酸（0.4ml，7.05mmol）。在室温下搅拌5分钟后，向所得溶液加入三乙酰基硼氢化钠（2.49g，11.8mmol）。搅拌23小时后，向该深色的反应混合物中加入乙醛（0.66ml，11.8mmol），搅拌10分钟后，添加三乙酰基硼氢化钠（2.49g，11.8mmol）。搅拌3小时后，向所得混合物中加入去离子水（15mL），用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc萃取（2x15mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（10g硅胶,Isolute柱，洗脱液梯度为99:1-85:15的庚烷：EtOAc）纯化，得到无色油状的标题化合物（317mg）。所得产品包含～25%乙酸乙酯。所得原料用于下一步骤，没有进一步纯化。LC-MS55%,2m/z=326.0/328.0,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.52(d,J=2.2Hz,1H),7.23(d,J=2.2Hz,1H),3.97(d,J=11.1Hz,2H),3.90(s,3H),3.32(td,J=11.6,2.5Hz,2H),3.04(q,J=7.1Hz,4H),2.93(ddd,J=15.1,10.8,4.3Hz,1H),1.76–1.62(m,4H),1.08(t,J=7.4Hz,3H),0.88(t,J=7.1Hz,3H)。
步骤2：合成5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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向5-氯-2-乙基-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（317mg，0.97mmol）的THF（10mL）溶液中加入4M NaOH（9.73mL）。反应混合物在50℃搅拌27小时。向反应混合物加入MeOH（5mL），在50℃继续搅拌21小时。用6M HCl将反应混合物酸化至pH值2-3，用DCM萃取（5x10mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩，得到橙色油状的标题化合物（289mg），放置固化。所得原料用于下一步骤，没有进一步纯化。LC-MS79%,m/z=311.95/313.95,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.73(d,J=1.7Hz,1H),7.29(d,J=1.8Hz,1H),3.99(d,J=11.0Hz,2H),3.38–3.29(m,2H),3.20–3.03(m,4H),3.02–2.91(m,1H),1.78–1.61(m,4H),1.13(t,J=7.4Hz,3H),0.91(t,J=7.0Hz,3H)。
步骤3：合成5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酰胺
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在室温和氮气保护下，向5-氯-2-乙基-3-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸（100mg，0.32mmol）的DMF（2mL）溶液中依次加入HBTU(146mg，0.38mmol）、N-乙基-N-(丙烷-2-基)丙烷-2-胺（84μl，0.48mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，60.3mg，0.35mmol）。在室温下搅拌3小时后，向反应混合物加入EtOAc（30mL），依次用去离子水（5mL）和饱和NaHCO3(aq)（3x5mL）洗涤。有机相用MgSO4干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过FCC（5g硅胶,Isolute柱，洗脱液梯度为100%EtOAc至97:3的EtOAc：MeOH）纯化，得到白色固体状的标题化合物（90mg，63%）。LC-MS97%,m/z=446.1/448.2,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm11.93(s,1H),7.14(t,J=5.7Hz,1H),7.10(d,J=2.0Hz,1H),7.04(d,J=2.0Hz,1H),5.95(s,1H),4.52(d,J=5.8Hz,2H),3.95(d,J=11.2Hz,2H),3.30(td,J=11.3,3.6Hz,2H),3.01(q,J=7.0Hz,2H),2.93(ddd,J=15.3,10.0,5.3Hz,1H),2.83(q,J=7.4Hz,2H),2.38(s,3H),2.22(s,3H),1.71–1.63(m,4H),1.02(t,J=7.5Hz,3H),0.86(t,J=7.0Hz,3H)。
化合物243：5-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基 3-[(四氢吡喃-4-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基]苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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将5-溴-2-甲基苯甲酸（5.0g，23mmol）的浓硫酸（27ml，512mmol）溶液在丙酮/冰浴中冷却至-5℃。在-5至0℃下，向反应混合物中逐滴滴加浓硝酸（1.9ml，30mmol）和浓硫酸（2.8ml，52mmol）的混合物，滴加时间为15分钟。所得黄色反应混合物在-5℃搅拌2小时，在此期间形成黄色沉淀。将反应混合物倒入冰中（150g），沉淀物经过滤收集。将所得沉淀物在空气中晾干，得到淡黄色固体状的标题化合物（5.5g，52%）。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm8.29(s,1H)8.13(d,J=1.58Hz,1H)2.43(s,3H)。
步骤2：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在氮气保护下，向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（5.5g，21mmol）的DMF（42mL）溶液中依次加入Na2CO3(3.4g，32mmol）和碘甲烷（2.0ml，32mmol）。反应混合物在室温下搅拌2小时。所得混合物用去离子水（150mL）稀释，用EtOAc萃取（4x50mL）。合并的有机相用饱和NaHCO3(aq)（2x50mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到黄色油状的标题化合物（6.3g，61%）。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.38(d,J=2.05Hz,1H)7.23(d,J=2.05Hz,1H)3.20(s,3H)1.82(s,3H)。
步骤3：合成3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6.3g，21mmol）的甲醇（150mL）溶液中依次加入氯化铵（11.0g，210mmol）和去离子水（75mL）。将所得混合物加热到70℃后，向其加入铁（7.0g，125mmol）。将反应混合物在70℃搅拌2小时，冷却到室温，通过硅胶过滤。滤饼用MeOH（150mL）洗涤，滤液在真空中浓缩。将残余物溶解于饱和NaHCO3(aq)（50mL）和EtOAc（150mL）中。两相分离，有机相用饱和NaHCO3(aq)（3x50mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物通过快速柱层析（50g硅胶Isolute柱，5-20%的EtOAc：庚烷）纯化，得到稠密的淡黄色油状的标题化合物（3.0g，51%）。LC-MS87%,m/z=243.9,244.9,245.9,246.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.34(d,J=1.89Hz,1H)6.95(d,J=1.89Hz,1H)3.88(s,3H)3.80(br.s.,2H)2.29(s,3H)。
步骤4：合成5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯
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在氮气保护下，向3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（3.0g，12mmol）的1,2-二氯乙烷（48mL）溶液中依次加入四氢吡喃酮（2.3ml，25mmol）和醋酸（4.2ml，74mmol）。搅拌5分钟后，向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（7.8g，37mmol）。搅拌64小时后，向混合物中加入去离子水（100mL），用固体NaHCO3中和。两相分离，水层用EtOAc（4x50mL）萃取。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物通过快速柱层析（50g硅胶,Isolute柱，10–30%EtOAc:庚烷）纯化，得到白色固体状的标题化合物（3.5g85%）。LC-MS99.8m/z=327.9,328.9,329.9,330.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.24(d,J=1.73Hz,1H)6.85(d,J=1.58Hz,1H)4.03(dt,J=11.82,3.31Hz,2H)3.88(s,3H)3.66(br.s.,1H)3.56(td,J=11.55,1.97Hz,2H)3.47-3.55(m,1H)2.24(s,3H)2.06(d,J=13.56Hz,2H)1.47-1.60(m,2H)。
步骤5：合成5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基]苯甲酸甲酯
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在5分钟中分批向5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（500mg，1.5mmol）和TFA（15mL）的溶液中加入NaBH4(1.0g，26mmol）。反应混合物在室温下搅拌2小时，然后加热至50℃3小时，并在25分钟内用另一小份NaBH4(300mg)处理。然后反应混合物在60℃加热2小时，在室温下搅拌17小时。用TFA（5mL）和NaBH4(200mg)处理该反应混合物，并再加热至60℃3.5小时。然后在15分钟中，加入另一小份NaBH4（200mg）和TFA（5mL），并继续加热3小时，在室温中放置过夜。将反应混合物倒入冰(75mL）中，并搅拌直到冰融化。然后向反应混合物加入6M NaOH(aq)（40mL）进行碱化，然后用1M HCl(aq)（40mL）将pH值调到7。所得白色悬浮液经过滤来收集，所得固体用水洗涤（20mL），并在40℃下真空干燥3小时，得到白色固体状的标题化合物（577mg，91%）。LC-MS98%,),m/z=409.90,410.9,411.90,412.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.80(d,J=1.73Hz,1H)7.41(d,J=1.73Hz,1H)4.01(dd,J=11.51,4.10Hz,2H)3.91(s,3H)3.64(d,J=5.20Hz,2H)3.32(t,J=11.82Hz,2H)2.99(tt,J=11.43,3.63Hz,1H)2.48(s,3H)1.80(dd,J=12.53,1.50Hz,2H)1.54-1.62(m,2H)。
步骤6：合成5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基]苯甲酸
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基]苯甲酸甲酯（572mg，1.4mmol）的THF（14mL）和MeOH（2.1mL）的混合溶液中加入4MNaOH(aq)（13.9mL）。反应混合物在50℃搅拌5.5小时后，再室温下搅拌17小时。在真空中浓缩除去THF，含水残余物用6M HCl(9.5mL）酸化至pH值4。所得悬浮液在室温中放置20分钟，过滤收集固体。滤饼用水（20mL）洗涤后在高度真空中干燥2小时，得到白色固体状的标题化合物（507mg，90%）。LC-MS98%,m/z=395.9,396.9,397.9,398.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.97(d,J=1.73Hz,1 H)7.48(d,J=1.73Hz,1H)4.02(dd,J=11.35,3.94Hz,2H)3.65(br.s,2H)3.33(t,J=11.59Hz,2H)3.00(tt,J=11.49,3.80Hz,1H)2.55(s,3H)1.82(d,J=11.98Hz,2H)1.55-1.69(m,2H)。观察不到OH。
步骤7：合成5-溴-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基]苯甲酰胺
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在0℃和氮气保护下，向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)(2,2,2-三氟乙基)氨基]苯甲酸甲酯（250mg，0.63mmol）的无水DMF（3.0mL）溶液中逐滴加入HATU（288mg，0.76mmol）和DIPEA（220μl，1.3mmol）。搅拌5分钟后，向所得溶液加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,119mg，0.69mmol）。所得悬浮液在0℃搅拌20分钟，然后室温下搅拌16.5小时。向反应混合物中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（30mg）。继续搅拌23小时，反应混合物在水（30mL）和CH2Cl2（20mL）之间分配。两相分离，水相CH2Cl2（3x20mL）萃取。合并的有机相依次用饱和NaHCO3溶液（50mL）、水（60mL）和盐水（2x40mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。粗制残余物经快速柱层析（10g SNAP柱，Isolera，0-10%MeOH/CH2Cl2）纯化，在乙醚（10mL）中超声波研磨。所得沉淀物经过滤收集，真空干燥，得到白色固体状的标题化合物（249mg，74%）。LC-MS100%,m/z=530.0,531.0,532.0,533.0;1H NMR(500MHz,氘代丙酮)δ10.67(s,1H),7.55(d,J=1.8Hz,2H),7.27(d,J=1.9Hz,1H),5.90(s,1H),4.40(d,J=5.5Hz,2H),3.90(dd,J=11.2,4.6Hz,4H),3.28(t,J=11.6Hz,2H),3.07–2.97(m,1H),2.32(s,3H),2.29(s,3H),2.24(s,3H),1.76(dd,J=12.3,1.6Hz,2H),1.61(qd,J=12.0,4.5Hz,2H)。
化合物244：5-溴-3-[(2,2-二氟乙基)(四氢吡喃-4-基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-3-[(2,2-二氟乙基)(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃时，在12分钟内向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-[(四氢吡喃-4-基)氨基]苯甲酸甲酯（500mg，1.5mmol）的二氟醋酸（15mL）溶液中分批加入硼氢化钠（1000mg，26mmol）。将反应混合物升温至50℃并搅拌4小时。将反应混合物冷却到室温，倒入冰中（130mL），保持5分钟。向所得混合物加入6M NaOH(aq)（35mL）进行碱化，再用1M HCl(aq)（20mL）将pH值调至7。所得悬浮液放置直到溶液澄清，过滤收集固体，在40℃真空中干燥，得到白色固体状的标题化合物（572mg，96%）。LC-MS100%,m/z=391.9,392.9,393.9,394.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.79(d,J=1.89Hz,1H)7.44(d,J=1.89Hz,1H)5.44-5.71(m,1H)4.00(dd,J=11.51,4.10Hz,2H)3.91(s,3H)3.41(td,J=13.99,4.18Hz,2H)3.32(t,J=11.27Hz,2H)2.97(tt,J=11.37,3.84Hz,1H)2.47(s,3H)1.72-1.81(m,2H)1.59-1.67(m,2H)。
步骤2：合成5-溴-3-[(2,2-二氟乙基)(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸
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向搅拌后的5-溴-3-[(2,2-二氟乙基)(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸甲酯（571mg，1.5mmol）的THF（14.6mL）和MeOH（2.2mL）的混合溶液中加入4M NaOH（14.6mL）。反应混合物在50℃搅拌7小时。停止加热，反应混合物在室温下搅拌16.5小时。在真空中除去THF，用6M HCl(aq)（10mL）将剩余水溶液酸化至pH值4，同时加冰冷却。过滤收集固体，用水洗涤（20mL），真空干燥， 得到淡米色固体状的标题化合物（526mg，96%）。LC-MS100%,m/z=377.9,378.9,379.9,380.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.91(d,J=1.58Hz,1H)7.49(d,J=1.58Hz,1H)5.43-5.75(m,1H)4.01(dd,J=11.43,3.55Hz,2H)3.42(td,J=13.95,3.78Hz,2H)3.32(t,J=11.35Hz,2H)2.98(tt,J=11.37,3.53Hz,1H)2.52(s,3H)1.77(d,J=10.88Hz,2H)1.56-1.69(m,2H)。观察不到OH。
步骤3：合成5-溴-3-[(2,2-二氟乙基)(四氢吡喃-4-基)氨基]-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃和氮气保护下，向搅拌后的5-溴-3-[(2,2-二氟乙基)(四氢吡喃-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸（250mg，0.66mmol）的无水DMF（3.0mL）溶液中逐滴加入HATU（327mg，0.86mmol）和DIPEA（230μl，1.3mmol）。搅拌5分钟后，向所得溶液加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，136mg，0.79mmol）。所得悬浮液在0℃搅拌20分钟，然后在室温下搅拌过夜。18小时后，向反应液加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（25mg），继续搅拌25小时。反应混合物用水（30mL）和CH2Cl2（30mL）稀释。两相分离，水相用CH2Cl2（3x15mL）萃取。合并的有机相依次用饱和NaHCO3(aq)（45mL）、水（2x50mL）和盐水（2x50mL）洗涤，干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残余物通过柱层析（10g SNAP柱，Isolera，0-3%MeOH:CH2Cl2）纯化，然后用乙醚研磨。固体通过过滤收集，在40℃的真空中干燥，得到灰白色固体状的标题化合物（259mg，77%）。LC-MS100%,m/z=512.0,513.0,514.0,515.0;1H NMR(500MHz,氘代丙酮)δ10.71(s,1H),7.57–7.49(m,2H),7.25(d,J=1.9Hz,1H),5.91(s,1H),5.76(tt,J=56.2,4.3Hz,1H),4.40(d,J=5.5Hz,2H),3.88(dd,J=11.3,4.2Hz,2H),3.52(td,J=14.6,4.2Hz,2H),3.33–3.23(m,2H),3.02(tt,J=11.6,3.9Hz,1H),2.32(s,3H),2.28(s,3H),2.24(s,3H),1.73(dd,J=12.4,1.9Hz,2H),1.59(qd,J=12.2,4.5Hz,2H)。
化合物328：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-3-甲基吡啶-4-甲酰胺
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步骤1：合成2-氯-N-苯基吡啶-4-甲酰胺
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在氮气保护下，向搅拌后的2-氯异烟酸（5.0g，0.03mol）的无水甲苯（100mL）和4滴DMF的悬浮液中逐滴滴加二氯亚砜（7.4ml，0.10mol）。反应混合物在60℃搅拌2.5小时，在1.5小时内将温度逐渐增加到100℃，并在此温度下搅拌2小时。反应混合物在室温下搅拌65小时，然后加入另外当量的二氯亚砜（2.3mL），并加热至95℃40分钟。将反应冷却到室温，然后在真空中浓缩至干燥，同无水甲苯共沸（2x10mL），得到黄色流性油状物，其直接用于下一步骤，没有进一步纯化。
向搅拌后的苯胺（2.9ml，0.03mol）和N-乙基-N-(丙烷-2-基)丙烷-2-胺（13.6ml，83mmol）的无水THF（50mL）溶液中逐滴滴加上述制备的酸的氯代物。反应混合物在氮气氛中搅拌19小时。向反应混合物加入碳酸氢钠饱和溶液(aq)（100mL）淬灭反应，并搅拌35分钟。两相分离，水相用乙酸乙酯萃取（3x55mL）。合并的有机萃取液依次用水（3x66mL）和盐水（80mL）洗涤，干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。将残余物悬浮于乙醚（100mL）中，进行短暂的超声处理，过滤收集产品。在室温下在高度真空中干燥3小时，然后在真空中放置过夜，得到白色固体状的标题化合物（6.1g，83%）。LC-MS100%,m/z=233.0,234.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.58(d,J=5.04Hz,1H)7.81(br.s.,1H)7.77(s,1H)7.63(d,J=7.41Hz,3H)7.42(t,J=7.96Hz,2H)7.19-7.26(m,1H)。
步骤2：合成2-氯-N,3-二甲基-N-苯基吡啶-4-甲酰胺
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在-78℃和氮气保护下，向搅拌后的2-氯-N-苯基吡啶-4-甲酰胺（2.0g，8.6mmol）的无水THF（40mL）溶液中逐滴滴加1.6M丁基锂的正己烷溶液（11.8ml，18.9mmol），滴加时间为24分钟。反应混合物在-78℃搅拌50分钟，然后逐滴滴加碘甲烷(1.8ml，28mmol），滴加时间为8分钟。反应混合物在-78℃搅拌1小时，然后慢慢升至室温并搅拌20小时。加入水（20mL）淬灭反应，两相分离。水相用CH2Cl2（3x20mL）萃取。合并的有机相用盐水洗涤（60mL），干燥（MgSO4），过滤，真空浓缩，得到稠密的棕色油状的标题化合物（2.2g，93%）。LC-MS95%,m/z=261.0,263.0;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.03(d,J=4.89Hz,1H)7.23(d,J=7.88Hz,2H)7.16-7.21(m,1H)7.02(d,J=7.25Hz,2H)6.89(d,J=4.89Hz,1H)3.51(s,3H)2.34(s,3H)。
步骤3：合成2-氯-3-甲基吡啶-4-羧酸
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将2-氯-N,3-二甲基-N-苯基吡啶-4-甲酰胺（2.2g，8.5mmol）加入到浓硫酸（23.2mL）和水（16.8mL）的混合溶液中，然后加热到130℃，保持46小时。之后将反应混合物升至室温并倒入冰中（200mL），同时搅拌直到冰融化。向所得混合物中分批加入固体Na2CO3（50.3g）以将其碱化(pH值8)。将悬浮液过滤，加入6M HCl(aq)（～1.5mL）将滤液酸化至pH值为3。通过过滤收集固体，用水洗涤（20mL），在40℃真空中干燥10小时，得到粉色固体状的标题化合物（779mg，54%）。LC-MS100%,m/z=171.9,173.9;1H NMR(500MHz,MeOD)δppm8.30(d,J=4.89Hz,1H)7.64(d,J=5.04Hz,1H)2.58(s,3H)。
步骤4：合成2-氯-3-甲基吡啶-4-羧酸甲酯
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向搅拌后的2-氯-3-甲基吡啶-4-羧酸（780mg，4.5mmol）的无水DMF（5.0mL）溶液中加入碳酸钾（1.25g，9.1mmol），然后逐滴滴加碘甲烷（0.42ml，6.8mmol）。再将4ml DMF加入到反应混合物中，在氮气氛中在室温下搅拌18.5小时。在真空中除去溶剂，然后将残余物在CH2Cl2（20mL）和水（20mL）中分配。两相分离，水层用CH2Cl2萃取（3x15mL）。合并的有机相依次用水（2x30mL）和盐水（40mL）洗涤，干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残余物通过柱层析（10g SNAP柱，Isolera，0-6%乙酸乙酯:庚烷）纯化，得到无色油状的标题化合物（591mg，59%）。LC-MS84%,m/z=185.9,187.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.33(d,J=5.04Hz,1H)7.54(d,J=5.04Hz,1H)3.95(s,3H)2.60(s,3H)。
步骤5：合成3-甲基-2-[(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-4-羧酸甲酯
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将氮气净化过的Pd(OAc)2(77mg，0.34mmol）和1,1'-联二萘-2,2'-双(二苯基膦)(430mg，0.69mmol）的1,4-二氧六环(11mL）的悬浮溶液在40℃加热1小时。然后向上述悬浮液加入四氢吡喃-4-胺（237μl，2.3mmol）、2-氯-3-甲基吡啶-4-羧酸甲酯（213mg，1.2mmol）的经过除气的二氧六环(2mL）溶液和Cs2CO3(562mg，1.7mmol），所得红色悬浮液在100℃加热6小时。冷却到室温后，反应混合物用CH2Cl2(30mL）和水（20mL）稀释。两相分离，水相用CH2Cl2萃取（3x15mL）。合并的有机相用盐水洗涤（25mL），干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。粗制的残余物依次通过柱层析（25g SNAP柱，Isolera，0-28%乙酸乙酯:庚烷）和制备HPLC(MeCN/Water）纯化，得到白色晶体状的标题化合物（112mg，39%）。LC-MS100%,m/z=251.0;1H NMR(500MHz,MeOD)δppm7.91(d,J=5.20Hz,1H)6.77(d,J=5.36Hz,1H)4.07-4.17(m,1H)3.98(dd,J=12.06,1.81Hz,2H)3.88(s,3H)3.55(td,J=11.78,1.66Hz,2H)2.22(s,3H)1.97(dd,J=12.69,1.97Hz,2H)1.62(qd,J=12.03,4.41Hz,2H)。观察不到到NH。
步骤6：合成2-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-3-甲基吡啶-4-羧酸
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在0℃和氮气保护下，向搅拌后的氢化钠（60%分散在矿物油中,16mg，0.4mmol）的无水DMF（0.3mL）悬浮溶液中加入3-甲基-2-[(四氢吡喃-4-基)氨基]吡啶-4-羧酸甲酯（67mg，0.27mmol）的无水DMF（1.0mL）溶液。将反应混合物升至室温并搅拌30分钟。然后向反应混合物中加入碘乙烷（16μl，0.20mmol），搅拌30分钟，再次加入碘乙烷（16μl，0.20mmol），继续搅拌30分钟。在0℃下，将反应混合物加到氢化钠（16mg，0.4mmol）的DMF（0.3mL）悬浮液中。一旦加完后，将所得反应混合物升至室温并搅拌1小时，然后加碘乙烷（2x16μl，0.40mmol）。将反应混合物继续搅拌30分钟。向反应混合物中加入氢化钠（16mg，0.4mmol），搅拌45分钟后加入碘乙烷（2x16μl，0.40mmol），搅拌15分钟，然后在氮气氛中、冷却条件下，加入到4M HCl/二样六环(5.0mL）溶液中。
然后将反应混合物在40℃真空中浓缩，用1M NaOH(aq)（5mL）处理，并冷却条件下加入10个NaOH小球将溶液碱化至pH值12。通过添加6M HCl将溶液pH值再调到10。所得溶液在室温下搅拌18小时。通过添加1M HCl(80滴)将反应混合物酸化至pH值为5。所得溶液用CHCl3/IPA(1:1)萃取（6x10mL）。合并的萃取液在真空中浓缩，得到黄色油状的标题化合物粗品（207mg）。LC-MS100%,m/z=265.1。所得原料直接用于下文所述的偶联反应。
步骤7：合成N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-3-甲基吡啶-4-甲酰胺
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在0℃和氮气保护下，向搅拌后的2-[乙基(四氢吡喃-4-基)氨基]-3-甲基吡啶-4-羧酸（20mg，0.08mmol）的无水DMF（1.0mL）溶液中逐滴加入HATU（37mg，0.1mmol）和DIPEA（26μl，0.15mmol）。搅拌10分钟后，向所得溶液加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,15mg，0.09mmol）。所得悬浮液 在0℃搅拌20分钟，然后在室温下搅拌18.5小时。将反应混合物冷却到0℃，向其中加入HATU（120mg，0.31mmol）和DIPEA（84μl，0.48mmol）。搅拌10分钟后，向反应混合物加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，49mg，0.29mmol）。反应混合物在0℃搅拌1小时，去掉冰浴，在室温下搅拌48小时。反应混合物用水（20mL）和CH2Cl2（20mL）稀释。两相分离，水相用CH2Cl2萃取（3x15mL）。合并的有机相依次用水（2x25mL）和盐水（2x25mL）洗涤，干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。粗制的残余物通过柱层析（10g SNAP柱，Isolera，0-40%MeOH:CH2Cl2和0-25%MeOH（包含10%NH4OH):CH2Cl2）纯化，得到的灰白色固体状标题化合物（6.7mg，产率22%）。LC-MS100%,m/z=399.1;1H NMR(250MHz,DMSO-d6)δ11.49(s,1H),8.32(t,J=4.9Hz,1H),8.14(d,J=4.9Hz,1H),6.84(d,J=4.9Hz,1H),5.86(s,1H),4.26(d,J=4.7Hz,2H),3.84(dd,J=10.3,3.5Hz,2H),3.21(dt,J=13.6,4.6Hz,5H),2.19(s,3H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.62(dt,J=21.1,6.6Hz,4H),0.80(t,J=6.9Hz,3H)。
化合物356：5-氯-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}-N-[(5-氟代-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氟代-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
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在75℃下，向搅拌后的2-氰基乙酰胺（689mg，8.2mmol）的无水EtOH（7.0mL）溶液中依次加入3-氟戊烷-2,4-二酮（880mg，7.5mmol）和哌啶(96μl，0.97mmol）。反应混合物在此温度下搅拌3小时，冷却到室温，然后在冰箱中保藏4天。通过过滤收集米黄色固体，用冷的EtOH（4x0.4mL）冲洗至滤液澄清。所得浅褐色固体在40℃真空中干燥5小时，得到米黄色固体状的标题化合物（733 mg，58%）。LC-MS97%,m/z=166.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm13.67(br.s.,1H)2.46(d,J=2.05Hz,3H)2.45(d,J=2.84Hz,3H)。
步骤2：合成3-(氨基甲基)-5-氟代-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮
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将0.05M5-氟代-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（731mg，4.4mmol）的1.75M NH3/MeOH（87mL）溶液在80℃和50bar下，以1ml/min的流速通过H-Cube流动氢化器。将所得溶液真空浓缩。将所得固体分为2批，将其中350mg粗产品通过柱层析（25g SNAP柱，Isolera，0-25%MeOH（包含10%NH4OH):CH2Cl2）纯化，得到灰白色固体状的标题化合物（307mg，20%）和产品:起始原料为1:1的混合物。LC-MS(ELS)100%,m/z=170.9,1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm3.79(s,2H)2.31(d,J=2.84Hz,3H)2.25(d,J=2.05Hz,3H)。
步骤3：合成5-氯-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}-2-甲基苯甲酸
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向搅拌后的5-氯-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，2.8mmol）的THF（21mL）溶液依次加入4M NaOH(aq)（21.3ml，85.0mmol）和MeOH（8.0mL）。所得溶液在50℃搅拌16.5小时，然后冷却到室温。在真空中除去有机溶剂，剩余的水相用6M HCl(aq)（14mL）调至pH值至7，再用0.1M HCl(aq)（24mL）调至pH值至4。所得混合物用乙酸乙酯萃取（3x35mL）。水相萃取液再用CHCl3:IPA(1:1)的混合液萃取（3x30mL）。将合并的CHCl3:IPA萃取液干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩，然后在高度真空下彻底干燥。将所得固体同甲苯共沸（3x20mL）。将CH2Cl2（10mL）加入到样品中，真空浓缩并在高度真空下进一步干燥数小时。得到白色固体状的标题化合物（831mg，88%）。LC-MS92m/z=339.0,341.0;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm12.21(s,1H)7.69(d,J=2.05Hz,1H)7.22-7.26(m,1H)2.99-3.11(m,3H)2.69-2.79(m,7H)2.47(s,3H)2.28(d,J=11.98Hz,2H)2.05(d,J=13.08Hz,2H)1.35-1.65 (m,4H)0.88(t,J=7.01Hz,3H)。
步骤4：合成5-氯-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}-N-[(5-氟代-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃和氮气保护下，向搅拌后的5-氯-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}-2-甲基苯甲酸（100mg，0.27mmol）的无水DMF（2.0mL）溶液中逐滴加入HATU（121mg，0.32mmol）和DIPEA（93μl，0.53mmol）。搅拌10分钟后，向所得溶液加入3-(氨基甲基)-5-氟代-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（50%,99mg，0.29mmol）。所得悬浮液在0℃搅拌1小时，再在室温下搅拌17小时。将反应混合物在水（15mL）和CH2Cl2（20mL）之间分配。两相分离，水相用CH2Cl2萃取（2x15mL）。合并的有机相依次用饱和NaHCO3(aq)（30mL）、水（2x25mL）和盐水（20mL）洗涤，干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残留的粗品通过快速柱层析（10g SNAP柱，Isolera，0-29%MeOH:CH2Cl2）纯化，得到浅褐色固体状的标题化合物（68mg，52%）。LC-MS99%,m/z=491.1,493.1;1H NMR(500MHz,MeOD-d4)δ7.17(d,J=1.9Hz,1H),7.02(d,J=2.0Hz,1H),4.59(s,1H),4.44(s,2H),3.06(q,J=7.0Hz,2H),2.69(tt,J=12.1,3.2Hz,1H),2.41–2.29(m,10H),2.24(d,J=2.8Hz,3H),2.20(s,3H),1.91(dd,J=27.7,12.2Hz,4H),1.44(q,J=12.3,11.1Hz,2H),1.30–1.20(m,2H),0.83(t,J=7.0Hz,3H)。一个质子被假定为与溶剂峰一致。
化合物347：5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺和化合物348:5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1s,4s)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-[2-(三甲基硅基)乙炔基]苯甲酸甲酯
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在室温和氮气保护下，向搅拌后的2-溴-5-氯苯甲酸甲酯（14.8g，59mmol）的三乙胺（124ml，890mmol）溶液中加入碘化铜(339mg，1.8mmol）和三苯基膦（778mg，3.0mmol）。所得混合物用氮气净化后，向其加入乙炔基(三甲基)硅烷（12.5ml，89mmol）和Pd(OAc)2(266mg，1.2mmol）。反应混合物在50℃搅拌20小时，并真空浓缩。将残余物溶解于去离子水（50mL）和EtOAc（50mL）中，并通过硅藻土过滤。滤饼用EtOAc洗涤（50mL），然后两相分离，水层用EtOAc萃取（2x50mL）。合并的有机萃取液用MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。残余物通过柱层析（10g硅胶，Isolute柱，1-15%EtOAc:庚烷）纯化，得到橙色固体状的标题化合物（16.2g，93%）。LC-MS91%,m/z=267.4,268.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.90(d,J=2.21Hz,1H)7.52(d,J=8.35Hz,1H)7.42(dd,J=8.28,2.29Hz,1H)3.93(s,3H)0.28(s,9H)。
步骤2：合成5-氯-2-乙炔基苯甲酸甲酯
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在氮气保护下搅拌碳酸钾（5.0g，36mmol）的甲醇（20mL）悬浮液，同时向其中加入5-氯-2-[2-(三甲基硅基)乙炔基]苯甲酸甲酯（4.8g，18.0mmol）的甲醇（50mL）溶液。所得混合物在20℃搅拌2小时。将反应混合物过滤，固体用甲醇洗涤。将滤液真空浓缩后再溶解于甲醇（50mL）中，向所得溶液中小心地加入乙酰氯(4.0mL）。反应混合物搅拌过夜，并在真空中浓缩。向残余物中加入 TBME(50mL），将所得悬浮液过滤。滤液用饱和NaHCO3溶液洗涤（40mL）。两相分离，水相用TBME萃取（3x40mL）。合并的有机相用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。残留的粗品通过快速柱层析（50g Isolute柱，0-10%TBME:庚烷）纯化，得到白色固体状的标题化合物（1.2g，33%）。LC-MS93%,m/z=194.9,196.9;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.94(s,1H),7.56(d,J=8.4Hz,1H),7.46(d,J=8.4Hz,1H),3.95(s,3H),3.44(s,1H)。
步骤3：合成5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-乙炔基苯甲酸甲酯（1.13g，5.8mmol）的TBME(50mL）溶液中加入Pd/C（10%）（50%水，0.61g，0.29mmol）。反应混合物在氢气氛中搅拌130分钟。混合物通过硅藻土过滤，滤饼用TBME洗涤。将滤液在真空中浓缩，得到浅棕色油状的标题化合物（1.08g，74%）。LC-MS79%,m/z=198.9/200.9;1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm7.85(s,1H)7.40(d,J=8.20Hz,1H)7.22(d,J=8.20Hz,1H)3.91(s,3H)2.95(q,J=7.46Hz,2H)1.22(t,J=7.49Hz,3H)。
步骤4：合成5-氯-2-乙基-3-硝基苯甲酸甲酯
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将5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯（1.08g，5.4mmol）的浓硫酸（7.0mL）溶液在丙酮/冰浴中冷却到-5℃。将70%硝酸（0.45ml，7.1mmol）和浓硫酸（0.5mL）的混合物在-5℃逐滴滴加到反应混合物中，滴加时间为15分钟。将所得淡黄色反应混合物在-5℃搅拌1小时后，然后倒入冰中（100mL），并用CH2Cl2萃取（3x20mL）。合并的有机相依次用去离子水（20mL）和盐水（20mL）洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。将所得油状物在0℃下加入到包含甲醇（25mL）和二氯亚砜（0.75mL）的溶液中。加完后，将混合物加热并温和回流6小时，然后冷却到室温并真空浓缩，得到橙色油状的标题化合物（1.2g），其用于下一步骤，而没有进一步纯化。
步骤5：合成3-氨基-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯
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向5-氯-2-乙基-3-硝基苯甲酸甲酯（1.2g，5.0mmol）的甲醇（50mL）和去离子水（25mL）溶液中加入氯化铵（2.6g，50mmol）。将混合物加热到70℃后加入铁（1.7g，30mmol）。反应混合物在70℃搅拌3.5小时，通过硅藻土热过滤，滤饼用MeOH（20mL）洗涤。将滤液真空浓缩，将残留水溶液溶解于饱和NaHCO3(aq)（50mL）和EtOAc（100mL）中。两相分离，有机相依次用饱和NaHCO3(aq)（2x65mL）和盐水（30mL）洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过柱层析（25g SNAP柱，Isolera，0-11%乙酸乙酯/庚烷）纯化，得到黄色油状的标题化合物（372mg，33%）。LC-MS94%,m/z=213.9,215.9;1HNMR(500MHz,CDCl3)d ppm7.18(d,J=2.21Hz,1H)6.80(d,J=2.05Hz,1H)3.88(s,3H)3.85(d,J=2.52Hz,2H)2.75(q,J=7.57Hz,2H)1.21(t,J=7.49Hz,3H)。
步骤6：合成3-[(4-{[(叔丁氧)羰基]氨基}环己基)氨基]-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯
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在氮气保护下，向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯（365mg，1.7mmol）的1,2-二氯乙烷（20mL）溶液中加入(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（364mg，1.7mmol）和醋酸（587μl，10.3mmol）。搅拌10分钟后，在1小时内向溶液中分批加入三乙酰基硼氢化钠（1.09g，5.1mmol）。所得溶液在室温下搅拌17小时，然后再向其加入(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（364mg，1.7mmol）。反应混合物搅拌30分钟后，在2.5小时内向其加入三乙酰基硼氢化钠（1.09g，5.1mmol）。反应混合物继续在室温下搅拌26小时，然后加入去离子水（40mL）。混合物用固体NaHCO3（2.95g）中和，用乙酸乙酯萃取（3x50mL）。合并的有机萃取液用盐水洗涤（35mL），干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残留的粗品通过柱层析（25g SNAP柱，Isolera，0-18%EtOAc/庚烷）纯化，得到油状的标 题化合物（623mg，85%），其为顺/反异构体的混合物。LC-MS46.1%,2.61分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=411.1,413.1和50.2%,2.66分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=411.1,413.1;1H NMR(500MHz,CDCl3)d ppm7.05(dd,J=7.09,2.05Hz,1H)6.68(t,J=2.36Hz,1H)4.36-4.63(m,1H)3.88(d,J=3.31Hz,3H)3.62-3.78(m,1H)3.49(br.s.,1H)3.23(br.s.,1H)2.63-2.76(m,2H)2.07-2.18(m,2H)1.77-1.89(m,2H)1.69(br.s.,1H)1.46(s,9H)1.27(m,3H)1.13-1.24(m,3H)。
步骤7：合成3-[(4-{[(叔丁氧)羰基]氨基}环己基)(乙基)氨基]-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-[(4-{[(叔丁氧)羰基]氨基}环己基)氨基]-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯（200mg，0.49mmol）的无水1,2-二氯乙烷（5.0mL）溶液中加入乙醛（54μl，1.0mmol）和醋酸（167μl，2.9mmol）。将反应混合物搅拌50分钟后，在2小时内分批加完三乙酰基硼氢化钠（309mg，1.5mmol），反应搅拌20小时。向反应混合物加入乙醛（54μl，1.0mmol），搅拌1小时后，在2小时内分批加入三乙酰基硼氢化钠（309mg，1.5mmol）。继续搅拌22小时后，向反应混合物中再加入乙醛（136μl，2.4mmol），搅拌1小时后，在1.5小时内加入三乙酰基硼氢化钠（516mg，2.4mmol），搅拌22小时。向反应混合物加入乙醛（109μl，2.0mmol），搅拌1.5小时后，在2小时内加入三乙酰基硼氢化钠（413mg，2.0mmol），同时加入二氯乙烷（5.0mL）以帮助搅拌。反应混合物搅拌19小时后，加入乙醛（82μl，1.5mmol），搅拌1.5小时后，45分钟内加入三乙酰基硼氢化钠（309mg，1.5mmol）。将反应混合物继续搅拌70小时，用水（20mL）稀释，逐渐加入固体NaHCO3(2.53g)将溶液pH值调至8。两相分离，水层CH2Cl2萃取（3x20mL）。合并的有机相用盐水洗涤（60mL），干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残留的粗产物通过快速柱层析（10g SNAP柱，Isolera，0-30%EtOAc/庚烷）纯化，得到黄色油状的标题化合物（163mg，73%）和顺/反异构体的混合物。LC-MS100%,5.83分钟(7分钟LC-MS法),m/z=439.2,441.2;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.45-7.55 (m,1H)7.22(dd,J=4.33,2.13Hz,1H)4.25-4.67(m,1H)3.90(d,J=2.21Hz,3H)3.29-3.76(m,1H)2.95-3.11(m,4H)2.58-2.96(m,1H)1.62-2.03(m,4H)1.38-1.53(m,11H)1.01-1.14(m,4H)0.81-0.94(m,4H)。
步骤8：合成3-[(4-{[(叔丁氧)羰基]氨基}环己基)(乙基)氨基]-5-氯-2-乙基苯甲酸
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向搅拌后的3-[(4-{[(叔丁氧)羰基]氨基}环己基)(乙基)氨基]-5-氯-2-乙基苯甲酸甲酯（156mg，0.36mmol）的THF（4.0mL）和MeOH（0.29mL）溶液中加入4M NaOH(aq)（2.7ml，10.7mmol）。所得溶液在50℃搅拌17小时。向反应混合物加入4M NaOH(aq)（0.5ml，2.0mmol），并继续在50℃搅拌32小时。停止加热，反应混合物在室温下搅拌65小时。向反应混合物加入4M NaOH(aq)（1.0ml，4.0mmol），并重新加热到50℃并保持24小时。在真空中除去有机溶剂，向水相中加入0.5M柠檬酸溶液（20mL）将pH值调到4/5。产物用乙酸乙酯（3x25mL）萃取。合并的有机相用盐水洗涤（30mL），干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩，再在高真空度下进一步干燥4小时，得到白色固体状的标题化合物（142mg，92%）为和顺/反异构体的混合物。LC-MS98%,5.49分钟(7分钟LC-MS法),m/z=425.1,427.1。1H NMR显示顺/反异构体的混合物。
步骤9：合成N-{4-[(5-氯-3-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}-2-乙基苯基)(乙基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯
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在0℃和氮气保护下，向搅拌后的3-[(4-{[(叔丁氧)羰基]氨基}环己基)(乙基)氨 基]-5-氯-2-乙基苯甲酸（139mg，0.33mmol）的无水DMF（2.0mL）溶液中加入HATU（149mg，0.39mmol）和DIPEA（114μl，0.65mmol）。将所得溶液搅拌10分钟后，加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，61mg，0.36mmol）。所得悬浮液在0℃搅拌1小时，然后再在室温下搅拌98.5小时。向反应混合物加入HATU（37mg，0.1mmol），搅拌1小时后加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%,11mg，0.07mmol）。反应混合物继续在室温下搅拌23小时，然后将其在水（20mL）和CH2Cl2（20mL）之间分配。两相分离，水相用CH2Cl2萃取（3x10mL）。合并的有机相依次用饱和NaHCO3(aq)（40mL）、水（20mL）和盐水（2x20mL）洗涤，干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残留的粗品通过快速柱层析（10g SNAP柱，Isolera，0-13%MeOH/CH2Cl2）纯化，在乙醚/庚烷（2.0mL）中通过超声磨碎，倾析液体。余下的固体在高度真空中干燥，得到米黄色固体状的标题化合物（101mg，52%）。LC-MS93%,4.54分钟(7分钟LC-MS法),m/z=559.2,561.2。1H NMR显示顺/反异构体的混合物。
步骤10：合成3-[(4-氨基环己基)(乙基)氨基]-5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的N-{4-[(5-氯-3-{[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]氨基甲酰基}-2-乙基苯基)(乙基)氨基]环己基}氨基甲酸叔丁酯（100mg，0.18mmol）的CH2Cl2(4.0mL）溶液中加入三氟乙酸（1.0mL）。反应混合物在0℃搅拌40分钟，然后在室温下搅拌2小时。将反应混合物真空浓缩，残余物用饱和NaHCO3溶液(aq)（10mL）碱化至pH值为8。残留的水溶液用20%MeOH/CH2Cl2萃取（4x15mL）。将合并的有机相干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩，得到黄色固体状的标题化合物（108mg，113%）。LC-MS48%,2.88分钟(7分钟LC-MS法),m/z=459.1和39%,2.96分钟(7分钟LC-MS法),m/z=459.1。1H NMR显示顺/反异构体的混合物。
步骤11：合成5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺和5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1s,4s)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺
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向搅拌后的3-[(4-氨基环己基)(乙基)氨基]-5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基苯甲酰胺（80mg，0.18mmol）的1,2-二氯乙烷（3.0mL）溶液中加入醋酸（60μl，1.0mmol）和多聚甲醛（31mg，1.0mmol）。将反应混合物在氮气氛中搅拌35分钟后，加入三乙酰基硼氢化钠（222mg，1.0mmol）。将反应混合物搅拌16.5小时后加入多聚甲醛（16mg，0.52mmol），并继续搅拌1小时，再加入三乙酰基硼氢化钠（111mg，0.52mmol）。反应混合物继续搅拌6小时，然后加入多聚甲醛（10mg，0.35mmol），搅拌10分钟后加入三乙酰基硼氢化钠（74mg，0.35mmol）和1,2-二氯乙烷（1.0mL），继续搅拌89小时。反应混合物用水（20mL）稀释，用固体NaHCO3(1.45g)碱化至pH值为8。加入CH2Cl2（20mL），两相分离。水相用CH2Cl2萃取（3x10mL）。合并有机相用盐水洗涤（30mL），干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残留的粗品通过制备HPLC(MeCN/水+0.2%氢氧化铵）纯化，得到白色固体状的纯净的反式异构体，即标题化合物347:5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺（22mg，26%），和白色固体状的纯净的顺式异构体，即标题化合物348:5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1s,4s)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺（18mg，21%）。
5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺
LC-MS100%,3.07分钟(7分钟LC-MS法),m/z=487.2,489.2;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ11.09(s,1H),7.11–7.04(m,2H),7.00(d,J=2.1Hz,1H),5.94(s,1H),4.51(d,J=5.9Hz,2H),3.00(q,J=7.0Hz,2H),2.79(q,J=7.4Hz,2H),2.65(t,J=11.5Hz,1H),2.38(s,3H),2.24(s,6H),2.22(s,3H),2.14(t,J=11.4Hz,1H),1.87(d,J=10.3Hz,4H),1.37(q,J=12.1Hz,2H),1.17(q,J=11.5Hz,2H),1.02(t,J=7.4Hz,3H),0.85(t,J=7.0Hz,3H)。
5-氯-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-乙基-3-{乙基[(1s,4s)-4-(二甲基氨基)环己基]氨基}苯甲酰胺LC-MS100%,3.13分钟(7分钟LC-MS法),m/z=487.2,489.2;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.72(s,1H),7.09(d,J=2.0Hz,2H),7.01(d,J=2.1Hz,1H),5.93(s,1H),4.51(d,J=5.9Hz,2H),3.01(q,J=6.7Hz,3H),2.89(q,J=7.4Hz,2H),2.39(s,3H),2.23(s,9H),2.06(s,1H),1.87–1.72(m,4H),1.43(td,J=8.3,3.8Hz,2H),1.33(dd,J=12.6,9.2Hz,2H),1.01(t,J=7.5Hz,3H),0.84(t,J=7.0Hz,3H)。
化合物92：3-(烯丙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下，将5-氯-2-甲基苯甲酸（4.0g，23mmol）分批加入到冷却的浓H2SO4（27mL）中。10分钟后，将硝化混合物{通过混合浓HNO3（3.3g，52.68mmol）和浓H2SO4（4.4mL）来制备}在-10℃下逐滴滴加到上述混合物中。所得反应物料在-10℃搅拌30分钟。结束时，将反应混合物倒入冰冷水中，将析出的固体过滤，用水洗涤并真空干燥，得到标题化合物（4.95g，99%）。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g，31.3mmol）的DMF（33mL）溶液中加入碳酸钠（13.2g，125mmol）和碘甲烷（17.8g，125mmol）。混合物在60℃加热4小时。结束时，向反应物料中加水，并用DCM萃取。将合并的有机相干燥，减压浓缩，通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（6.0g，83%）。
步骤3：合成3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6.0g，26mmol）的乙醇（60mL）溶液中加入溶解于水（60mL）中的氯化铵（6.0g，110mmol）和铁粉（11.9g，208mmol）。将所得反应物料在80℃加热1小时。结束时，向反应物料中加入水，通过硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯萃取。合并的有机相用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到照现状使用的标题化合物。
步骤4：合成5-氯-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.0g，19mmol）和二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮（2.86g，28.6mmol）的甲醇（50mL）溶液中加入醋酸（2.3g，38mmol），反应在室温下搅拌8小时。在0℃下，向反应混合物加入氰基硼氢化钠（3.0g，48mmol），在室温下搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（3.0g，42%）。
步骤5：合成3-(烯丙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（1.0g，3.3mmol）的DMF（10mL）溶液中加入NaH（0.25g，10mmol），混合物搅拌20分钟。向反应混合物中加入3-溴丙-1-烯(1.7g，14.13mmol），并在80℃加热15小时。结束时，用冰冷水淬灭反应，用DCM萃取。将合并的有机相干燥，浓缩，得到的粗产物经柱层析纯化得到标题化合物（0.50g，44%）。
步骤6：合成3-(烯丙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向3-(烯丙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（0.50g，1.54mmol）的乙醇（15mL）溶液加入NaOH（0.092g，2.32mmol）水溶液，混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，剩余的水溶液用稀HCl酸化至pH值为6，再用柠檬酸酸化至pH值为4。用DCM进行萃取。将合并的有机相干燥，浓缩，得到单独的酸（0.47g，98%）。
将上述酸（0.47g，1.52mmol）溶解到DMSO（5mL）溶液中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.462g，3.04mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（1.18g，2.28mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物倒入冰中以获得固体，将该固体过滤，干燥得到标题化合物（0.40g，59%）。LCMS:444.25(M+1)+;HPLC:96.85%(@254nm)(Rt;6.310;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.; 梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.22(t,1H),7.16(s,1H),6.93(s,1H),5.85(s,1H),5.56-5.62(m,1H),5.02-5.07(m,1H),4.94-4.96(m,1H),4.23(d,2H,J=3.6Hz),3.83(d,2H,J=9.6Hz),3.64(d,2H,J=4Hz),3.23(t,2H,J=10Hz),2.97(m,1H),2.18(s,3H),2.17(s,3H),2.10(s,3H),1.54-1.60(m,4H)。
化合物98：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(丙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-(烯丙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.10g)的MeOH（10mL）溶液中加入10%Pd/C（0.03g），反应混合物在氢气氛中（气球压力)在室温下搅拌2小时。结束时，反应混合物通过硅藻土过滤，滤液在减压下浓缩，得到固体粗品，将该固体粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（0.02g，20%）。LCMS:445.25(M+1)+;HPLC:90.40%(@254nm)(Rt;5.609;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.23(t,1H),7.19(s,1H),6.93(d,1H,J=1.6Hz),5.88(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.83(d,2H,J=10.4Hz),3.22-3.25(m,2H),2.94(t,2H,J=7.2Hz),2.88-2.90(m,1H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.56(m,4H),1.14-1.23(m,2H),0.75(t,3H,J=8Hz)。
化合物104：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(异丁基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(异丁基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.0g，25mmol）和异丁醛（4.5g，62mmol）的甲醇（50mL）溶液中加入醋酸（3.0g，50mmol），反应在室温下搅拌2小时。在0℃向反应混合物中加入氰基硼氢化钠（3.94g，62mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，减压除去溶剂，粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（6.0g，94%）。
步骤2：合成5-氯-3-(异丁基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(异丁基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.9mmol）的无水乙腈（10mL）溶液中加入碳酸铯（2.55g，7.8mmol）和碘甲烷（5.55g，39mmol）。所得混合物在80℃加热12小时。结束时，将混合物冷却到室温，过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩得到标题化合物（1.0g，95%）。
步骤3：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(异丁基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-(异丁基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.7mmol）的EtOH（5mL）溶液中加入NaOH（0.22g，5.5mmol）水溶液，混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇。残余物用稀HCl酸化至pH值为6，再用柠檬酸调至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层干燥，浓缩得到单独的酸（0.900g，95%）。然后将该酸（0.30g，1.17mmol）溶解到DMSO（1.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.357g，2.34mmol）。在室温下搅拌反应15分钟后，向其中加入PYBOP（0.915g，1.76mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料倒入冰中以获得固体，过滤得到的固体，并通过柱层析纯化，得到标题化合物（0.245g，53%）。LCMS:390.25(M+1)+;HPLC:97.59%(@254nm)(Rt;6.063;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.20(t,1H),7.07(s,1H),6.90(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4.4Hz),2.63(d,2H,J=7.2Hz),2.54(s,3H),2.18(s,3H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.75-1.78(m,1H),0.85(d,6H,J=6Hz)。
化合物105：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(异丁基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(乙基(异丁基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(异丁基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.9mmol）的无水DMF（10mL）溶液中加入碳酸铯（2.55g，7.82mmol）和碘乙烷（6.09g，39.1 mmol）。所得反应物料在80℃加热12小时。结束时，将反应物料冷却到室温，过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩得到照现状用于下一步中的原料粗品（1.0g，91%）。
步骤2：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(异丁基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向化合物7(1.0g，3.50mmol）的EtOH（5mL）溶液中加入NaOH（0.212g，5.28mmol）水溶液，在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层干燥，浓缩得到单独的酸（0.900g）。
将所得酸（0.90g，3.33mmol）溶剂于DMSO（4.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（1.01g，6.67mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（2.60g，4.9mmol），继续搅拌过夜。将混合物倒入冰中以产生固体，将该固体过滤，并通过乙腈和乙醚洗涤纯化得到标题化合物（1.0g，75%）。LCMS:404.25(M+1)+;HPLC:90.28%(@254nm)(Rt;6.063;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.19(t,1H),7.10(s,1H),6.90(s,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.8Hz),2.86(q,2H,J=7.2Hz),2.73(d,2H,J=7.6Hz),2.18(s,3H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.57-1.61(m,1H),0.91(t,3H,J=6.8Hz),0.82(d,6H,J=6.4Hz)。
化合物117：5-氯-3-((环戊基甲基)(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-((环戊基甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.0g，15mmol）和环戊基甲醛（2.2g，22mmol）的甲醇（30mL）溶液中加入醋酸（1.8g，30mmol），反应混合物在室温下搅拌8小时。然后在0℃下，向反应混合物中加入氰基硼氢化钠（2.4g，37mmol），在室温下搅拌反应过夜。结束时，减压除去溶剂，粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（4.2g，99%）。
步骤2：合成5-氯-3-((环戊基甲基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-((环戊基甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.5mmol）的乙腈（10mL）溶液中加入碳酸铯（2.3g，7.1mmol）和碘甲烷（5.0g，35mmol）。所得混合物在80℃加热12小时。冷却到室温，过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩后通过柱层析纯化，得到标题化合物（1.0g，95%）。
步骤3：合成5-氯-3-((环戊基甲基)(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-((环戊基甲基)(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.38mmol）的乙醇（10mL）溶液中加入NaOH（0.206g，15.1mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸将pH值调至4。用DCM进行萃取。将合并的有机层干燥，浓缩后得到单独的酸（0.9g）。将上述酸（0.3g，1.06mmol）溶解到DMSO（1.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.324g，2.12mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（0.831g，1.57mmol），继续搅拌过夜。将所得混合物倒入冰中以得到固体，将该固体过滤，用乙腈洗涤，得到标题化合物（0.25g，56%）。LCMS:416.15(M+1)+;HPLC:92.58%(@254nm)(Rt;6.169;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.19(t,1H),7.08(s,1H),6.89(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4.4Hz),2.77(d,2H,J=7.2Hz),2.57(s,3H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),2.04-2.06(m,1H),1.63-1.65(m,2H),1.49-1.52(m,2H),1.45-1.46(m,2H),1.15-1.18(m,2H)。
化合物118：5-氯-3-((环戊基甲基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-((环戊基甲基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-((环戊基甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.54mmol）的DMF（10mL）溶液中加入碳酸铯（2.31g，7.09mmol）和碘乙烷（5.53g，35.4mmol）。所得反应物料在80℃加热12小时。将所得混合物冷却到室温，过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，将滤液浓缩，得到的残余物通过柱层析纯化得到标题化合物（1.0g，91%）。
步骤2：合成5-氯-3-((环戊基甲基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-((环戊基甲基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.22mmol）的乙醇（10mL）溶液加入NaOH（0.193g，15.1mmol）水溶液，混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸调至pH值为4。用DCM进行萃取。将合并的有机层干燥，浓缩，得到单独的酸（0.9g）。
将上述酸（0.3g，1.01mmol）溶解到DMSO（1.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.308g，2.12mmol）。在室温中搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（0.791g，1.52mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料倒入冰中以获得固体，将固体过滤，用乙腈洗涤得到标题化合物（0.25g，57%）。LCMS:430.2(M+1)+;HPLC:91.54%(@210nm)(Rt;9.378;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.20(t,1H),7.12(s,1H),6.91(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=3.6Hz),2.83-2.89(m,4H),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.85-1.89(m,1H),1.51-1.58(m,4H),1.41-1.46(m,2H),1.14-1.15(m2H),0.91(t,3H,J=8Hz)。
化合物123：5-氯-3-(环丁基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(环丁基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（2.0g，10mmol）和环丁酮（1.4g，20mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（3.6g，60mmol），在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向所得混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（6.3g，30mmol），在室温下搅拌3小时。结束时，减压除去溶剂，粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（1.4g，56%）。
步骤2：合成5-氯-3-(环丁基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(环丁基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.7g，2.8mmol）的乙腈（10mL）溶液中加入碳酸铯（2.2g，6.8mmol）和碘甲烷（3.9g，28mmol）。所得反应混合物在80℃加热8小时。结束时，将反应混合物冷却到室温，过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩得到标题化合物（0.62g，84%）。
步骤3：5-氯-3-(环丁基(甲基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-(环丁基(甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.60g，2.23mmol）的乙醇（10mL）溶液中加入NaOH（0.134g，3.34mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸将pH值调至4。用DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩得到单独的酸（0.5g）。
将上述酸（0.25g，0.98mmol）溶解于DMSO（5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.22g，1.41mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（0.767g，1.47mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩，然后得到的粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（0.36g，95%）。LCMS:388.09(M+1)+;HPLC:96.62%(@254nm)(Rt;5.461;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.44(s,1H),8.18(t,1H),6.90(d,2H,J=7.2Hz),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.65(m,1H),2.45(s,3H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),2.03(bs,2H),1.76-1.81(m,2H),1.61-1.62(m,2H)。
化合物137：5-氯-3-(环丁基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(环丁基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(环丁基氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.70g，2.73mmol）和乙醛（0.36g，8.20mmol）的二氯乙烷（15mL）溶液加入醋酸（0.98g，16.4mmol），反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（1.7g，8.2mmol），在室温下搅拌反应3小时。结束时，减压除去溶剂得到标题化合物（0.71g，91%）。
步骤2：合成5-氯-3-(环丁基(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-(环丁基(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.70g，2.48mmol）的乙醇（10mL）溶液加入NaOH（0.149g，3.7mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸调至pH值为4。用DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩得到单独的酸（0.6g）。
将上述酸（0.6g，2.2mmol）溶解在DMSO（5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.67g，4.44mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（1.7g，3.33mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应物料倒入到冰中；用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产物再通过溶剂洗涤纯化得到标题化合物（0.45g，50%）。LCMS:402.20(M+1)+;HPLC:98.73%(@254nm)(Rt;4.096;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min 5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.22(t,1H,J=4.4Hz),6.97(s,1H),6.92(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4.4Hz),3.75-3.79(m,1H),2.87-2.93(m,2H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.99(m,2H),1.58-1.69(m,4H),0.77(t,3H,J=6.8Hz)。
化合物126：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（2.0g，10mmol）和四氢-2H-吡喃-4-甲醛（1.71g，15mmol）的甲醇（20mL）溶液中加入醋酸（1.2g，20mmol），反应混合物在室温下搅拌8小时。然后在0℃向反应混合物加入氰基硼氢化钠（2.11g，25.1mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，减压除去溶剂，粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（1.8g，60%）。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-(甲基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.80g，2.71mmol）的乙腈（20mL）溶液中加入碳酸铯（1.75g，5.42mmol）和碘甲烷（1.93g，13.6mmol）。所得反应混合物在80℃下加热8小时。结束时，将混 合物冷却到室温，过滤。残余物用乙酸乙酯洗涤，滤液经浓缩得到粗产物，将该粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（0.70g，84%）。
步骤3：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-(甲基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯甲酰胺
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向5-氯-2-甲基-3-(甲基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.70g，2.25mmol）的乙醇（10mL）溶液加入NaOH（0.18g，4.5mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸调至pH值为4。用DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩得到单独的酸（0.2g）。
将上述酸（0.2g，0.68mmol）溶解到DMSO（0.5mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.206g，1.35mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（0.528g，1.01mmol），继续搅拌过夜。将所得混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（0.2g，69%）。LCMS:432.25(M+1)+;HPLC:99.95%(@254nm)(Rt;5.750;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.19(t,1H),7.10(d,1H,J=1.6Hz),6.90(d,1H,J=2Hz),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4.8Hz),3.80(d,2H,J=8.4Hz),3.21-3.27(m,2H),2.73(d,2H,J=7.2Hz),2.55(s,3H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.74-1.75(m,1H),1.58-1.61(m,2H),1.07-1.16(m,2H)。
化合物127：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(乙基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-(((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)苯甲酸甲酯（0.40g，1.35mmol）和乙醛（0.120g，2.71mmol）的二氯乙烷（5mL）溶液中加入醋酸（0.48g，8.1mmol），在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（0.663g，4.05mmol），在室温下搅拌3小时。结束时，减压除去溶剂，粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（0.38g，86%）。
步骤2：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-(乙基((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.38g，1.2mmol）的乙醇（20mL）溶液中加入NaOH（0.099g，2.46mmol）水溶液，混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸调至pH值为4。用DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩得到单独的酸（0.2g）。
将上述酸（0.2g，0.64mmol）溶解在DMSO（2mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.196g，1.29mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（0.504g，0.97mmol），继续搅拌过夜。将混合 物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到的粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（0.15g，52%）。LCMS:446.20(M+1)+;HPLC:99.89%(@254nm)(Rt;5.381;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(s,1H),8.21(t,1H),7.14(s,1H),6.91(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4.4Hz),3.78(d,2H,J=8.8Hz),3.18(t,2H,J=11.6Hz),2.82-2.89(m,4H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.54-1.57(m,3H),1.09-1.15(m,2H),0.91(t,3H,J=6.8Hz)。
化合物157：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2,5-二甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下，向搅拌后的2-甲基-3-硝基苯甲酸（50g，276mmol）的浓H2SO4(200mL）溶液中分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，152mmol）。将所得混合物在室温下搅拌5小时，然后倒入冰冷水中。将沉淀物过滤，用水洗涤，真空干燥得到标题化合物（71g，99%）。
步骤2：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（287g，1100mmol）的DMF（150mL）溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（627g，4415mmol）。所得 混合物在60℃加热8小时。将沉淀物过滤，用乙醚洗涤（5次）。将合并的有机层干燥，减压浓缩，得到标题化合物（302g，99%），其可直接用于下一步骤，没有进一步纯化。
步骤3：合成3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（150g，544mmol）的乙醇（750mL）溶液加入溶解于水（750mL）中的氯化铵（150g，2777mmol）和铁粉（93.3g，1636mmol）。反应混合物在80℃加热7小时，然后通过硅藻土过滤，所得固体用水和乙酸乙酯洗涤，合并的滤液用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥，减压浓缩，得到标题化合物（175g），其可以使用，不用进一步纯化。
步骤4：合成5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（15g，61mmol）和二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮（9.2g，92mmol）的二氯乙烷（300mL）溶液中加入醋酸（22g，368.4mmol），反应混合物在室温下搅拌2小时。然后在0℃下，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（39g，184mmol），在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂，粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（14g，69%）。
步骤5：合成5-溴-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)苯甲酸甲酯（14g，43mmol）和乙醛（3.75g，85mmol）的二氯乙烷（150mL）溶液中加入醋酸（15.4g，256mmol），反应在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（27.0g，128mmol），在室温下搅拌反应2小时。减压除 去溶剂，向残余物加水。用DCM萃取，合并的有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩，得到粗产物，将该粗产物通过柱层析纯化得到标题化合物（14g，93%）。
步骤6：合成5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-溴-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（14g，39mmol）的乙醇（100mL）溶液中加入NaOH（2.36g，59mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸调至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层干燥并浓缩得到单独的酸（13.9g）。
然后将上述酸（10g，29mmol）溶解在DMSO（25mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（8.8g，58mmol）和三乙胺（5.6g，58mmol）。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（22g，43.8mmol），继续搅拌过夜。将所得混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩，得到原料粗品，将该原料粗品通过溶剂洗涤纯化得到标题化合物（14g，74%）。
步骤7：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2,5-二甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.30g，0.63mmol）的DMF（2mL）溶液中依次加入二氯二(三苯基膦)钯(II)(0.028g，0.034mmol）和四甲基锡(0.124g， 0.69mmol）。所得混合物在微波反应器中在160℃下加热30分钟。加水淬灭反应，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩得到粗产物。将粗产物通过柱层析和然后通过制备HPLC纯化，得到标题化合物相应的三氟乙酸盐（0.15g，57.7%）。LCMS:412.15(M+1)+;HPLC:94.29%(@254nm)(Rt;4.245;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(CD3OD,400MHz)δ7.54(s,1H),7.33(s,1H),6.13(s,1H),4.47(s,2H),3.95-3.98(m,4H),3.74(bs,2H),3.37(m,1H),2.42(s,3H),2.38(s,3H),2.37(s,3H),2.24(s,3H),1.61-1.91(bs,4H),1.01(t,3H,J=3.2Hz)。
化合物222：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1s,4s)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在室温下，向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.0g，25mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（6.95g，32.6mmol）的25ml二氯乙烷溶液中加入醋酸（9.0ml，450.75mmol）。将反应混合物冷却，加三乙酰基硼氢化钠（22.8g，108mmol），所得混合物室温下搅拌过夜。用饱和NaHCO3溶液中和反应混合物，并用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，通过硅胶（100-200）柱层析分离产物异构体得到极性较小的反式异构体，即3-(((1s,4s)- 4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.2g，52%），和极性较大的标题化合物反式异构体，即3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.5g，35%）。
步骤2：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.0g，7.6mmol）和乙醛（0.66g，15mmol）的15ml二氯乙烷溶液中加入醋酸（2.72ml，45.45mmol），所得混合物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物冷却到0℃，加三乙酰基硼氢化钠（4.81g，22.72mmol），在室温下搅拌过夜。反应混合物用饱和NaHCO3溶液中和，用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，粗产物通过硅胶（100-200）柱层析纯化得到标题化合物（3.5g，96%）。
步骤3：合成((1r,rs)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.5g，8.2mmol）和NaOH（0.49g，12mmol）的20ml乙醇:水（4:1)溶液在70℃加热2小时。将反应混合物冷却到0℃，用1N HCl酸化至pH值为6。将混合物浓缩，残余物在水和乙酸乙酯之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到3.2g粗品酸。所得粗品酸（3.2g，7.8mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2.36mg，15.5mmol）和PYBOP（6.07mg，11.7mmol）的混合物在15ml DMSO中在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，并用10% MeOH/DCM萃取。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶（100-200）柱层析纯化得到标题化合物（3.0g，71%）。
步骤4：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向冷却的((1r,4r)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（400mg，0.73mmol）的5ml DCM溶液中加入2ml TFA，反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物减压浓缩干。将所得粗产物溶解于10%MeOH/DCM，依次用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物（320mg，98%）。
步骤5：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（300mg，0.67mmol）和甲醛（0.5ml38%溶液，6.75mmol）的3ml甲醇溶液中加入三乙酰基硼氢化钠（83.0mg，1.35mmol），混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物浓缩至干燥，将残余物在水和10%MeOH的DCM溶液之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，所得粗品通过碱性氧化铝纯化得到标题化合物（120mg，32%）。
化合物268：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（80mg，0.16mmol）的5ml甲醇溶液中加入催化量的10%钯碳。所得混合物在气球压力的氢气氛中搅拌13小时。反应混合物通过硅藻土床层过滤，减压浓缩，得到的粘性油状物经乙醚洗涤后得到灰白色固体状的标题化合物（40mg，54%）。
LCMS:439.25(M+1)+;HPLC:88.61%(@254nm)(Rt4.084;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),8.03(t,1H),7.15-7.13m,2H),6.94(d,1H),4.26(d,2H,J=4.4Hz),3.02(d,2H,J=6.8Hz),2.61(s,6H),2.18(s6H),2.10(s,3H),1.97-1.83(m,4H),1.39(m,4H),0.8(t,3H,J=6.8Hz),(3H合并在溶剂峰中)。
化合物273：5-氯-3-(((1s,4s)-4-(二乙基氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（150mg，0.33mmol）和乙醛（0.15ml，2.70mmol）的5ml二氯乙烷溶液中加入醋酸（0.14ml，2.36mmol），所得混合 物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物冷却到0℃，向其加入三乙酰基硼氢化钠（286mg，1.35mmol），并在室温下搅拌过夜。反应混合物用饱和NaHCO3溶液中和，用DCM萃取，用Na2SO4干燥，减压浓缩得到残余物。所得残余物通过制备HPLC纯化得到标题化合物（100mg，59%）。LCMS:501.50(M+1)+;HPLC:93.90%(@210-370nm)(Rt;4.543;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(bs,1H),8.21(t,1H),7.13(s,1H),6.92(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=3.6Hz),3.03-3.01(m,2H),2.67-2.61(m,2H),2.42-2.33(m,4H),2.19(s,3H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.73(m,4H),1.39-1.19(m,4H),0.92(m,6H),0.78(t,3H)。
化合物277：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-乙炔基-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯6.0g，13.0mmol）和乙醛（1.5ml，27.0mmol）的二氯乙烷（60mL）溶液加入醋酸（5.4ml，82mmol），在室温下搅拌20分钟。在0℃下，向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（8.6g，41mmol），在室温下搅拌混合物2小时。反应 混合物用饱和NaHCO3溶液中和，用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗产物通过硅胶（100-200）柱层析纯化得到标题化合物（5.0g，79%）。
步骤2和3：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-乙炔基-2-甲基苯甲酸甲酯
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将5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.5g，3.20mmol）、三甲基硅基乙炔(0.52ml，3.84mmol）、碘化铜(12mg，0.06mmol）和N,N-二异丙基胺（1.0ml，8.38mmol）的20ml甲苯溶液用氩气净化。将二氯-二(三苯基膦)钯(II)（44mg，0.06mmol）加入到反应混合物中，在80℃加热16小时。将反应混合物冷却到室温，用乙酸乙酯释稀，用水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到1.8g硅基保护的化合物粗品。将所得粗品溶解于15ml THF，在室温下向该溶液中加入四丁基氟化铵（7.5ml1M的THF溶液，7.40mmol）。将混合物搅拌2小时，用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶（100-200）柱层析纯化得到标题化合物（800mg，52%）。
步骤4和5：合成((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-5-乙炔基-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-乙炔基-2-甲基苯酸甲酯（800mg，1.92mmol）和NaOH（115mg，2.89mmol）在12ml乙醇:水（3:1）中的混合物在70℃下加热2小时。将反应混合物浓缩干，将残余物在水和DCM 之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到700mg粗品酸。将所得粗品酸（700mg，1.75mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（532mg，3.5mmol）和PYBOP（1.36g，2.62mmol）在7ml DMSO中在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，过滤沉淀的产物，通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（750mg，80%）。
步骤6：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-乙炔基-2-甲基苯甲酰胺
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向冷却的((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-5-乙炔基-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（750mg，1.40mmol）的10ml DCM溶液中加入3ml TFA。所得混合物在室温下搅拌2小时，减压浓缩干。将残余物溶解于10%的MeOH/DCM中，并依次用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物粗品（600mg，98%）。
步骤7：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-乙炔基-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-乙炔基-2-甲基苯甲酰胺粗品（600mg，1.38mmol）和甲醛（0.4ml38%溶液，6.75mmol）的10ml二氯乙烷溶液中加入三乙酰基硼氢化钠（731mg，3.45mmol）。反应混合物在室温下搅拌3小时，然后将其在水 和10%MeOH/DCM之间分配。分离有机层，用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经碱性氧化铝纯化得到标题化合物（450mg，70%）。
N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-乙炔基-2-甲基苯甲酰胺-三氟乙酸盐的分析数据:LCMS:463.65(M+1)+;HPLC:92.65%(@254nm)(Rt;4.748;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),9.43(bs,1H),8.23(t,1H),7.36(s,1H),7.12(s,1H),5.87(s,1H),4.26(d,2H,J=4.0Hz),3.17-3.03(m,4H),2.69-2.68(m,6H),2.50(1H合并在溶剂峰中),2.21(s,3H),2.19(s,3H),2.11(s,3H),1.96-1.84(m,4H),1.43(m,4H),0.79(t,3H)。
化合物278：5-氰基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(((1s,4s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氰基-2-甲基苯甲酸甲酯
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向化合物5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0gm,2.13mmol）和Zn(CN)2（370mg，3.19mmol）的6ml DMF溶液中通入氩气脱气20分钟后加入Pd(PPh3)4（240mg，0.21mmol）。反应混合 物在100℃加热过夜，用水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（280mg，82%）。
步骤2和3：合成((1r,4r)-4-((5-氰基-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氰基-2-甲基苯甲酸甲酯（735mg，1.78mmol）和NaOH（85mg，2.13mmol）在12ml乙醇:水（3:1）中的混合物在70℃加热2小时。将所得混合物浓缩干，将粗产物在水和DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到380mg粗品酸。将所得粗品酸（380mg，0.94mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（287mg，1.89mmol）和PYBOP（737mg，1.41mmol）在4ml DMSO中的混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（350mg，75%）。
步骤4：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氰基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向冷却后的化合物（(1r,4r)-4-((5-氰基-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（350mg，0.80mmol）在5ml DCM中的溶液加入1ml TFA。将所得混合物搅拌2小时，减压浓缩至干燥。将残余物溶解于10%MeOH/DCM中，依次用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到284mg标题化合物的粗品。
步骤5：合成5-氰基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氰基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺粗品（325mg，0.74mmol）和甲醛（0.3ml38%溶液，3.72mmol）的甲醇（10ml）溶液中加入氰基硼氢化钠（100mg，1.49mmol）。将混合物在室温下搅拌4小时，并将其在水和10%MeOH/DCM中分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过碱性氧化铝柱纯化得到标题化合物（75mg，22%）。
5-氰基-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1s,4s)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺的分析数据:LCMS:464.30(M+1)+;HPLC:87.24%(@254nm)(Rt;4.540;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(bs,1H),8.31(t,1H),7.61(s,1H),7.35(s,1H),5.87(s,1H),4.26(d,2H,J=4.4Hz),3.07-3.05(m,3H),2.73-2.63(m,7H),2.25(s,3H),2.20(s,3H),2.11(s,3H),1.96-1.82(m,4H),1.41-1.37(m,4H),0.78(t,3H)。
化合物279：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（300mg，0.67mmol）和二氢-2H-吡喃-4(3H)-酮（99mg，1.01mmol）的二氯乙烷（5ml）溶液中加入醋酸（0.24ml，4.05mmol），混合物在室温下搅拌20分钟。将所得混合物冷却到0℃，加三乙酰基硼氢化钠（429mg，2.02mmol），在室温下搅拌反应过夜。反应混合物用饱和NaHCO3溶液中和，用DCM萃取。合并有机相Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（175mg，57%）。
步骤2：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基(四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺 （175mg，0.33mmol）和福尔马林（99mg，3.31mmol）的甲醇（2ml）溶液中加入氰基硼氢化钠（41mg，0.66mmol）。混合物在室温下搅拌过夜，用饱和NaHCO3溶液中和，用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化得到标题化合物（70mg，39%）。
LCMS:543.65(M+1)+;HPLC:98.19%(@210-370nm)(Rt;4.515;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(bs,1H),8.21(t,1H),7.13(s,1H),6.92(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=4Hz),3.84-3.82(m,2H),3.26-3.23(m,3H),3.03-3.01(m,2H),2.67-2.53(m,2H),2.19(s,3H),2.14(s,3H),2.11(s,6H),1.75-1.57(m,6H),1.41-1.24(m,6H),0.78(t,3H)。
化合物276：合成化合物5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下，向搅拌后的化合物2-甲基-3-硝基苯甲酸（50.0g，276mmol）的浓H2SO4（200mL）分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，152mmol），继续搅拌5小时。结束时，将反应混合物倒入冰冷水中，将固体沉淀物过滤，用水洗涤，真空干燥，得到标题化合物粗品（71.7g，99.9%），其使用时没有进一步纯化。
步骤2：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸粗品（287g，1103mmol）的DMF（150mL）溶液中加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626g，4415mmol）。所得混合物在60℃加热8小时，冷却到室温。将固体沉淀物过滤，用乙醚洗涤（5次）。将合并的有机层干燥，减压浓缩得到标题化合物（302g，99%），其可直接使用。
步骤3：合成3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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在剧烈搅拌条件下，向上述化合物5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯粗品（150g，0.54mol）的乙醇（750mL）溶液中依次加入溶解于水（750mL）中的氯化铵（150g，2.78mol）和铁粉（93.3g，1.64mol）。所得混合物在80℃加热7小时，通过硅藻土过滤。滤饼用水和乙酸乙酯洗涤，滤液用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物（175g粗品)。
步骤4：合成5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯粗品（15g，62mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（17g，8mmol）的二氯乙烷（200mL）溶液中加入醋酸（23ml，368mmol），反应在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下，将三乙酰基硼氢化钠（40g，185mmol）加到反应混合物中，在室温下搅拌过夜。反应混合 物用饱和NaHCO3溶液中和，用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩。通过柱层析分离异构混合物粗品得到所需的标题化合物（6.0g，22%）。
步骤5：合成5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（6.0g，13.0mmol）和乙醛（1.5ml，27.0mmol）的二氯乙烷（60mL）溶液中加入醋酸（5.4ml，82mmol），在室温下搅拌20分钟。在0℃下，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（8.6g，40.9mmol），在室温下搅拌2小时。反应混合物用饱和NaHCO3溶液中和，并用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱层析得到标题化合物（5.0g，79%）。
步骤6和7：合成((1r,4r)-4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.00g，2.13mmol）和NaOH（102mg，2.56mmol）在6ml乙醇:水（2:1）中的混合物在70℃加热2小时。将反应混合物浓缩干，将残余物在水和DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到1.0g粗品酸。将所述粗品酸（1.0g，2.20mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（669mg，4.40mmol）、PYBOP（1.71g，3.30mmol）和1ml三乙胺在2ml DMSO中在室温下搅拌过夜。 反应混合物用水稀释，并用DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（1.0g，83%）。
步骤8：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向冷却的化合物（(1r,4r)-4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（1.0g，1.60mmol）的DCM（10ml）溶液加入2ml TFA。反应混合物在室温下搅拌2小时，减压浓缩干。将残余物溶解于10%MeOH/DCM中，依次用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物的粗品（650mg，81%）。
步骤9：合成5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺粗品（650mg，1.32mmol）和甲醛（0.5ml38%溶液，13.3mmol）的甲醇（10ml）溶液中加入氰基硼氢化钠（82mg，1.32mmol），混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物在水和10%MeOH/DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过碱性氧化铝柱纯化得到标题化合物（450mg，65%）。5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺 的分析数据:LCMS:519.30(M+1)+;HPLC:98.35%(@254nm)(Rt;4.392);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),9.39(bs,1H),8.23(t,1H),7.30(s,1H),7.09(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,2H,J=4.0Hz),3.03-3.01(m,3H),2.69-2.69(m,6H),2.50(1H merged insolvent peak),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.94-1.84(m,4H),1.42(m,4H),0.79(t,3H,J=6.8Hz)。
化合物282：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-乙基-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-乙烯基苯甲酰胺
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5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（200mg，0.38mmol）、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂硼烷（71mg，0.46mmol）和碳酸钠（147mg，1.39mmol）在10ml二氧六环中的混合物用氩气进行20分钟脱气处理，然后向上述溶液加Pd(PPh3)4(44mg，0.04mmol），所得混合物在100℃加热过夜。将反应混合物冷 却到室温，用水稀释。混合物用10%MeOH/DCM萃取，合并的有机相用Na2SO4干燥，浓缩。残余物通过硅胶层析纯化得到标题化合物（150mg，83%）。
步骤2：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-乙基-2-甲基苯甲酰胺
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向化合物N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-乙烯基苯甲酰胺（150mg，0.32mmol）的甲醇（5mL）溶液中加入催化量的10%钯碳。所得混合物在气球压力的氢气氛中搅拌12小时，通过硅藻土过滤，减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（65mg，43%）。
LCMS:467.35(M+1)+;HPLC:93.41%(@254nm)(Rt;10.946;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;10m M甲酸铵水溶液+0.1%NH3,B;乙腈+5%溶剂A+0.1%NH3;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.0mL/min.;梯度:0-6.0min15%B-95%B,6.0-8.0min保持,在8.5min15%B保持到15min);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(bs,1H),9.45(s,1H),8.38(s,1H),8.03(s,2H),7.26-6.84(m,2H),5.87(s,1H),4.26(d,J=4.0Hz,2H),3.17-2.89(m,3H),2.70,2.68(2s,6H),2.19,2.11(3s,9H),1.96-1.87(m,4H),1.42(m,4H),1.15(t,J=7.2Hz,3H),0.80(s,3H)。
化合物283：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯甲酸甲酯
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5-(3-溴丙-1-炔-1-基)-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（500mg，1.0mmol）和1-甲基哌嗪(0.49ml，4.9mmol）的DMF（5ml）溶液在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，并用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物（550mg）。
步骤2和3：合成((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将化合物3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯甲酸甲酯（550mg，1.0mmol）和NaOH（83mg，2.1mmol）在8ml乙醇:水（3:1）中的混合物在70℃加热2小时。将反应混合物浓缩干，将残余物在水和DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到470mg酸。将所得粗品酸（470mg，0.92mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（279mg，1.83mmol）、PYBOP（716mg，1.37mmol）和三乙胺（0.38ml，2.75mmol）的混合物在5ml DMSO中在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，将化合物萃取到10%MeOH/DCM中。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（350mg，50%）。
步骤4：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯甲酰胺
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向冷却的((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（350mg，0.54mmol）的DCM（5ml）溶液中加入2ml TFA。反应混合物在室温下搅拌2小时，减压浓缩干。将残余物溶解于10%MeOH/DCM中， 依次用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物粗品（250mg，84%）。
步骤5：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-炔-1-基)苯甲酰胺粗品（250mg，0.45mmol）和甲醛（0.35ml38%溶液，4.56mmol）的甲醇（3ml）溶液中加入氰基硼氢化钠（85mg，1.37mmol）。将所得混合物在室温下搅拌4小时，并将其在水和10%MeOH/DCM之间分配。分离有机层，用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（40mg，15%）。
LCMS:575.45(M+1)+;HPLC:99.30%(@254nm)(Rt;3.849;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(D2O,400MHz)δ7.75(s,1H),7.60(s,1H),6.28(s,1H),4.45(d,J=4.0Hz,2H),3.80-3.63(m,5H),3.40-3.21(m,9H),2.92(s,3H),2.79(2s,6H),2.35(m,3H),2.32(s,3H),2.26(s,3H),2.19-2.05(m,4H),1.65-1.57(m,4H),0.97(t,J=7.2Hz,3H)。
化合物284：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.0g，25mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（6.95g，32.7mmol）的二氯乙烷（25mL）溶液中加入醋酸（9.0ml，450mmol），并在室温下搅拌10分钟。混合物冷却到室温后，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（22.8g，108mmol），搅拌过夜。混合物用饱和NaHCO3溶液中和，并用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得到标题化合物极性较大的反式异构体3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.5g,35%），以及极性较小的顺式异构体3-(((1s,4s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.2g，52%）。
步骤2：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.0g，7.6mmol）和乙醛（0.66g，15mmol）的二氯乙烷（15mL）溶液 中加入醋酸（2.7ml，45mmol），混合物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物冷却到0℃，向其加入三乙酰基硼氢化钠（4.8g，22mmol），在室温下搅拌过夜。混合物用饱和NaHCO3溶液中和，并用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物经硅胶柱纯化得到标题化合物（3.5g，96%）。
步骤3：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向冷却后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1.1g，3.3mmol）的THF（12mL）溶液中依次加入氢化钠（410mg，10mmol）和碘甲烷（2.1ml，34mmol）。将混合物在室温下搅拌过夜，通过缓慢加入冰水来淬灭反应，再用柠檬酸溶液酸化。用10%MeOH/DCM萃取，将合并的有机相干燥，减压浓缩，得到标题化合物（1.0g，88%）。
步骤4和5：合成((1r,4r)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯
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将3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，2.4mmol）和NaOH（140mg，3.5mmol）在10ml乙醇:水（4:1）中的混合物在70℃加热2小时。将反应混合物浓缩干，将残余物在水和DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到1.0g的粗品酸。将所得粗品酸（1.0g，2.4mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（716mg，4.71mmol）、PYBOP（1.83g，3.53mmol）和三乙胺（2mL）的DMSO（5ml）溶液在室温下 搅拌过夜。将所得混合物用水稀释，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（700mg，53%）。
步骤6：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向冷却后的((1s,4s)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯（700mg，1.25mmol）的DCM（20ml)溶液中加入TFA（3mL）。反应混合物在室温下搅拌2小时，减压浓缩干。将残余物溶解于10%MeOH/DCM，依次用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（500mg，87%）。
LCMS:459.35(M+1)+;HPLC:97.63%(@254nm)(Rt;4.565;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ11.46(bs,1H),8.32(s,2H),8.22(m,1H),7.20(s,1H),7.00(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,J=4.0Hz,2H),3.74(m,3H),3.03-3.01(m,3H),2.67(m,1H),2.19(s,3H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.33(m,2H),1.82-1.80(m,2H),1.42-1.23(m,2H+2H),0.78(t,J=7.2Hz,3H)。
化合物285：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(乙基(甲基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(乙基(甲基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的化合物5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（200mg，0.43mmol）和乙醛（0.03ml，0.43mmol）的二氯乙烷（5mL）溶液中加入醋酸（0.15ml，2.62mmol），混合物在室温下搅拌20分钟。混合物冷却到0℃后，向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（0.28g，1.31mmol），混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用饱和NaHCO3中和，并用DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化标题化合物的三氟乙酸盐（80mg，37%）。LCMS:487.35(M+1)+;HPLC:99.87%(@254nm)(Rt;4.711;方法:色谱柱:YMCODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ11.47(bs,1H),9.15(s,1H),8.22(s,1H),7.19(s,1H),6.97(s,1H),5.86(s,1H),4.24(d,J=4.0Hz,2H),3.16-3.01(m,5H),2.64-2.63(m,4H),2.19(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.91-1.83(m,4H),1.47(m,4H),1.19(m,3H),0.79(t,J=7.2Hz,3H)。
化合物286:5-氯-3-(((1r,4r)-4-((环丙基甲基)(甲基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(((1r,r)-4-((环丙基甲基)(甲基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基氨基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（200mg，0.43mmol）和环丙基甲醛（0.03gm,0.43mmol）的二氯乙烷（5mL）溶液中加入醋酸（0.15ml，2.62mmol），所得混合物在室温下搅拌20分钟。将混合物冷却到0℃，并添加三乙酰基硼氢化钠（0.277g，1.31mmol），混合物在室温下搅拌过夜。所得混合物用饱NaHCO3中和，并用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（100mg，44%）。LCMS:513.40(M+1)+;HPLC:94.81%(@254nm)(Rt;4.924;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ11.47(bs,1H),9.09(s,1H),8.21(s,1H),7.18(s,1H),6.97(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,J=4.0Hz,2H),3.24(m,1H),3.03-3.01(m,3H),2.89-2.87(m,1H),2.71-2.70(m,4H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.93-1.83(m,4H),1.46-1.44(m,4H),1.05(m,1H),0.79(t,J=7.2Hz,3H),0.63(m,2H),0.38-0.31(m,2H)。
化合物287:合成化合物5-氯-3-(((1r,4r)-4-(环丁基(甲基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1和2：合成((1r,4r)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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将化合物3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.5g，8.2mmol）和NaOH（0.5g，12mmol）在20ml乙醇:水（4:1)中的混合物在70℃加热2小时。将反应混合物冷却到0℃，用1N HCl酸化至pH值为6，然后浓缩。将残余物在水和乙酸乙酯之间分配，有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，得到3.2g粗品酸。将所得粗品酸（3.2g，7.8mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2.36mg，15.6mmol）和PYBOP（6.1mg，11mmol）在15ml DMSO中室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，用10%MeOH/DCM萃取，合并的有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析得到标题化合物（3.0g，71%）。
步骤3：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向冷却后的((1s,4s)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（400mg，0.73mmol）的DCM（5mL）溶液中加入2ml TFA。反应混合物在室温下搅拌2小时，减压浓缩干。将残余物溶解于10%MeOH/DCM中，依次用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物（320mg，98%）。
步骤4：合成5-氯-3-(((1r,4r)-4-(环丁基氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-12-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（300mg，0.67mmol）和环丁酮（141mg，2.02mmol）的甲醇（20mL）溶液中加入氰基硼氢化钠（127mg，2.02mmol）。混合物在室温下搅拌过夜，用饱和NaHCO3中和，用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物粗品（260mg，77%）。
步骤5：合成5-氯-3-(((1r,4r)-4-(环丁基(甲基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的5-氯-3-(((1r,4r)-4-(环丁基氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（230mg，0.46mmol）和福尔马林（138mg，4.61mmol）的甲醇（10ml）溶液中加入氰基硼氢化钠（43mg，0.69mmol）。混合物在室温下搅拌过夜，用饱和溶液NaHCO3中和，并用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得到标题化合物（150mg，63%）。
5-氯-3-(((1r,4r)-4-(环丁基(甲基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺-三氟乙酸盐的分析数据:LCMS:513.25(M+1)+;HPLC:96.89%(@254nm)(Rt;4.886;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-D6,400MHz)δ11.45(bs,1H),9.40(s,1H),8.21(s,1H),7.18(s,1H),6.97(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,J=4.0Hz,2H),3.77-3.75(m,1H),3.12-3.02(m,3H),2.69(m,1H),2.50(4H合并在溶剂峰中),2.18,2.15,2.11(3s,6小时+3H+3H),1.83-1.44(m,10H),0.78(t,3H)。
化合物290：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1和2：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(3-羟丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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将5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.5g，3.2mmol）、叔丁基二甲基(丙-2-炔-1-基氧基)硅烷（1.6g，9.6mmol）、碘化铜(183mg，0.96mmol）和三乙胺（1.30ml，9.60mmol）的DMF（10ml）溶液用氩气净化20分钟。向反应混合物中加入四-(三苯基膦)钯(369mg，0.32mmol），所得混合物在100℃加热5小时，然后冷却到室温。所得混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤，有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，得到1.9g硅基保护的中间体产物的粗品。在室温下，将所得产品溶解于15ml THF中，并加入四丁基氟化铵（6.81ml1M的THF溶液，6.81mmol），将所得混合物搅拌2小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。有机层Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱层析纯化得到标题化合物（950mg，630%）。
步骤3：合成5-(3-溴丙-1-炔-1-基)-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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在室温下，向3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(3-羟丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酸甲酯（950mg，2.14mmol）的DCM（13ml）溶液中加入三苯基膦（840mg，3.21mmol）和四溴化碳（1.06gm,3.21mmol）。所得混合物搅拌3小时，用DCM稀释，用水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物经硅胶柱纯化得到标题化合物（900mg，82%）。
步骤4：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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将5-(3-溴丙-1-炔-1-基)-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（500mg，0.98mmol）和2M N,N-二甲基胺（2.5ml，4.9mmol）的THF溶液的DMF（5mL）溶液在室温下搅拌过夜。所得混合物减压浓缩，用水稀释，用DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，在真空下浓缩，得到标题化合物（450mg，96%）。
步骤5和6：合成((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酸甲酯（450mg，0.95mmol）和NaOH（57mg，1.40mmol）在10ml乙醇:水（4:1）中的混合物在70℃加热2小时。将反应混合物浓缩干，将残余物在水和DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩得到430mg酸。将所得粗品酸（430mg，0.94mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（280mg，1.88mmol）、PYBOP（733mg，1.40mmol）和三乙胺（0.1ml，0.94mmol）在7ml DMSO中在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，将沉淀的化合物过滤，真空干燥，得到标题化合物的粗品（450mg，81%）。
步骤7：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酰胺
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向冷却后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酸甲酯（450mg，0.76mmol）的DCM（6ml）溶液中加入1ml TFA。反应混合物在室温下搅拌2小时，减压浓缩干。将残余物溶解于10%MeOH/DCM，依次用饱和NaHCO3、水和盐水洗涤。有机相用Na2SO4干燥，减压浓缩，得到标题化合物的粗品（350mg，93%）。
步骤8：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的化合物3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔-1-基)-2-甲基苯甲酰胺粗品（350mg，0.71mmol）和甲醛（0.56ml38%的溶液，7.10mmol）的甲醇（8ml）溶液中加入氰基硼氢化钠（132mg，2.10mmol）。所得混合物在室温下搅拌4小时，将其在水和10%MeOH/DCM之间分配。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过碱性氧化铝柱层析纯化得到标题化合物（120mg，32%）。
LCMS:520.6(M+1)+;HPLC:92.27%(@254nm)(Rt;3.886;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min 5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(bs,1H),8.18(t,1H),7.15(s,1H),6.96(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,2H),3.02-3.00(m,2H),2.50(13质子合并在溶剂峰中),2.33(s,3H),2.23(s,3H),2.18(s,3H),2.11(s,3H),1.82(m,4H),1.39-1.28(m,4H),0.77(t,3H)。
化合物301：N-((1-苄基-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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将5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸（1eq）溶解于DMSO中，然后将3-(氨基甲基)-1-(2-羟乙基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2eq）和三乙胺（1eq）加入到上述溶液。反应混合物在室温下搅拌15分钟，向其中加入PYBOP（1.5eq），继续搅拌过夜。将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩，得到粗产品，将该粗产品用制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.011g，16%）。LCMS:563.40(M+1)+;HPLC:90.27%(@210nm-370nm)(Rt;6.122;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(MeOD,400MHz)δ,7.31-7.26(m,2H),7.24-7.04(m,5H),6.23(s,1H),5.40(d,2H),4.50(s,2H),3.34(1个质子合并在溶剂峰中),3.11-3.08(m,2H+1H),2.81(s,3H+3H),2.42(s,3H),2.29(s,3H),2.21(s,3H),2.08-1.99(m,2H+2H),1.52-1.49(m,4H),0.86(t,3H J=7.2Hz)。
化合物302：5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((1-(2-羟乙基)-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸乙酯（3.4g，8.0mmol）的DCM（35mL）溶液中加入TFA（10mL）。所得混合物在室温下搅拌1小时，减压除去溶剂，添加饱和NaHCO3溶液。用10%MeOH/DCM萃取，合并的有机层依次用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥。在减压下蒸发除去溶剂得到3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（2.5g，96%）。
将上述化合物（2.4g，7.4mmol）溶解于甲醇（25mL）中，将所得混合物冷却到0℃。向所得混合物中加入福尔马林（2.21g，73.95mmol），在同一温度下搅拌20分钟。向反应混合物中加入氰基硼氢化钠（0.92g，14.8mmol），在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂，向残余物中加水，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥，减压浓缩，得到标题化合物（2.3g，88)，其没有进一步纯化即用于下一步骤中。
步骤2：合成5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸
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向5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸乙酯（2.3g，9.1mmol）的乙醇（25mL）溶液中加入NaOH（0.73g，18.35mmol）水溶液， 所得混合物在60℃搅拌1小时。减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。合并的有机层经干燥，浓缩得到标题化合物（2.0g，92%）。
步骤3：合成5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-N-((1-(2-羟乙基)-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸（1eq）溶解于DMSO中，并将3-(氨基甲基)-1-(2-羟乙基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2eq）和三乙胺（1eq）加入上述溶液中。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（1.5eq），继续搅拌过夜。结束后，将反应混合物倒入冰中，并用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩，得到粗产物，将该粗产物经制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.07g，20%）。LCMS:517.35(M+1)+;HPLC:91.15%(@254nm)(Rt;5.134;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-D2O交换,400MHz)δ7.17(s,1H),6.94(s,1H),6.01(s,1H),4.26(m,2H),3.99(s,2H),3.01-2.99(m,3H),2.67(s,3H+3H),2.35(1个质子合并在溶剂峰中),2.33(m,2H+2H),2.19(s,3H),2.12(s,3H),1.94-1.81(m,5H)1.40(m,4H),0.77(t,3H)。
化合物306：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（2.0g，9.1mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（2.52g，11.87mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（3.28g，54.8mmol），反应混合物在室温搅拌10分钟。然后，在0℃下向反应混合物中加三乙酰基硼氢化钠（5.80g，27.4mmol），反应混合物在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应。将有机相分离，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（2.8g，82%）。
步骤2：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（0.9g，2.40mmol）和乙醛（0.21g，4.80mmol）的二氯乙烷（10mL）溶液中加入醋酸（0.85g，14.2mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（1.53g，7.21mmol），在室温下搅拌过夜。用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，将有机相分离，水相用二氯甲 烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，减压浓缩，原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（0.8g，83%）。
步骤3：合成((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向化合物3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸甲酯（0.80g，1.98mmol）的乙醇（8mL）溶液中加入氢氧化钠（0.12g，2.97mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，再用柠檬酸调至pH值为4。用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥浓缩得到单独的酸（0.7g）。将所得酸（0.7g，1.8mmol）溶解于DMSO（10mL）中，并将3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.54g，3.59mmol）加入到上述溶液中。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（1.40g，2.69mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩，得到的粗产物用乙腈洗涤纯化得到标题化合物（0.7g，74%）。
步骤4：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.7g，1.3mmol）的DCM（10mL）溶液中加入TFA（3mL），反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，减压除去溶剂，加入饱和NaHCO3溶液。用10%MeOH/DCM萃取； 合并的有机层用水和盐水洗涤；用无水Na2SO4干燥；过滤并减压浓缩得到标题化合物（0.56g，98%），其直接用于下一步骤。
步骤5：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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在0℃下，向3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺（0.5g，1.2mmol）的DCM（5mL）溶液中加入福尔马林（0.124g，4.13mmol）。反应混合物在0℃搅拌20分钟后加三乙酰基硼氢化钠（0.63g，2.95mmol），反应混合物在室温下搅拌1小时。结束后，加水并用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩。所得固体粗品用乙腈和乙醚洗涤后得到标题化合物（0.4g，67%）。LCMS:507.45(M+1)+;HPLC:96.81%(@210-370nm)(Rt;4.857;方法:色谱柱:YMCODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),8.34(s,1H),7.38(s,1H),7.20(s,1H),5.86(s,1H),4.27(d,2H),3.08(m,2H),2.67(m,1H),2.40(s,6H),2.24(s,3H),2.19(s,3H),2.10(s,3H),1.85(m,2H),1.80(m,2H),1.42(m,2H),1.25(m,2H),0.78(t,3H)。
化合物390：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-4-甲基烟酰胺
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步骤1：合成5-氨基-4-甲基烟酸甲酯
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在室温下，向搅拌后的5-氨基-4-甲基烟酸（5.0g，32mmol）的甲醇（75mL）溶液中慢慢加入浓H2SO4(5mL）。所得混合物在70℃搅拌12小时。结束时，减压除去溶剂，残余物用饱和NaHCO3溶液中和。用EtOAc萃取；合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，减压浓缩，得到标题化合物（4.1g，75%），所述化合物使用时不用进一步纯化。
步骤2：合成5-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-4-甲基烟酸甲酯
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向搅拌后的5-氨基-4-甲基烟酸甲酯（1.20g，7.22mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（2.30g，10.8mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（2.59g，43mmol），所得混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（4.59g，21.56mmol），反应混合物在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩。化合物粗品通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（0.65g，25%）。
步骤3：合成5-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)-氨基)-环己基)-(乙基)-氨基)-4-甲基烟酸甲酯
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向搅拌后的5-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-4-甲基烟酸甲酯（0.65g，1.79mmol）和乙醛（0.39g，8.95mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（0.64g，10.7mmol），所得混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃ 下向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（1.13g，5.33mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到标题化合物（0.55g，79%）。
步骤4：合成((1r,4r)-4-((5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基吡啶-3-基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向5-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)-氨基)-环己基)-(乙基)-氨基)-4-甲基烟酸甲酯（0.55g，1.40mmol）的乙醇（7mL）溶液中加入NaOH（0.11g，2.81mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，所得混合物用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯进行萃取。将合并的有机层干燥，浓缩得到单独的酸（0.5g）。将上述酸（0.5g，1.3mmol）溶解于DMSO（5mL）中，并将3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.48g，2.65mmol）加入到上述溶液中。在室温下搅拌15分钟后，向反应混合物加入PYBOP（1.02g，1.58mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩，残余物通过硅胶层析纯化得到标题化合物（0.5g，74%）。
步骤5：合成5-(((1r,r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-甲基烟酰胺
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向搅拌后的((1r,4r)-4-((5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基吡啶-3-基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.5g，0.97mmol）的DCM（10mL）溶液中加入TFA（2mL）。所得混合物在室温下搅拌1小时， 减压除去溶剂。向残余物中添加饱和NaHCO3，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用水和盐水洗涤；用无水Na2SO4干燥；过滤并减压浓缩，得到标题化合物（0.35g，88%）。
步骤6：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-4-甲基烟酰胺
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将5-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-4-甲基烟酰胺（0.35g，0.85mmol）溶解于DCM（5mL）中，在0℃下向所得溶液中加入福尔马林(0.089g，2.96mmol）。将所得混合物搅拌20分钟后，向混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（0.45g，2.12mmol），混合物在室温下搅拌1小时。结束后，混合物用水稀释，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩。得到的固体经乙腈和乙醚洗涤进一步纯化得到标题化合物（0.3g，80%）。LCMS:440.45(M+1)+;HPLC:73.44%&21.34%(@210-370nm)(Rt;3.769&3.965);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(bs,1H),8.34(s,1H),8.29(s,1H),8.07(s,1H),5.86(s,1H),4.27(d,2H),3.18(m,1H),3.01(m,2H),2.22(s,3H),2.19(s,3H),2.12(s,6H),2.10(s,3H),1.74(m,2H),1.64(m,2H),1.40-1.20(m,4H),0.81(t,3H)。
化合物308：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-甲氧基-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸（1.50g，7.61mmol）的DMF（15mL）溶液中加入碳酸钠（3.23g，30.5mmol）和碘甲烷（1.88ml，30.5mmol）。所得反应混合物在60℃加热8小时。结束时，反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩，得到标题化合物粗品（1.7g），其直接用于下一步骤。
步骤2：合成3-氨基-5-甲氧基-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-甲氧基-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（1.7g，7.6mmol）的乙醇（20mL）溶液中加入溶解于水（20mL）中的氯化铵（1.7g，32mmol）和铁粉（3.38g，60.44mmol）。混合物在80℃加热3小时，过滤，残余物用热乙醇充分洗涤。将滤液浓缩，残余物用碳酸氢钠水溶液碱化。水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩，得到标题化合物（1.2g），其直接用于下一步骤。
步骤3：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-甲氧基-2-甲基苯甲酸甲酯（1.2g，6.15mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（1.70g，7.99mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（2.21g，36.8mmol）。反应在室温下搅拌20分钟。在0℃下向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（3.91g，18.4mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品经柱层析纯化得到标题化合物（0.35g，14%）。
步骤4：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-(乙基)氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯甲酸甲酯（0.35g，0.89mmol）和乙醛（0.2g，4.46mmol）的二氯乙烷（5mL）溶液中加入醋酸（0.32g，5.35mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（0.57g，2.67mmol），在室温下搅拌2小时。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品经色谱柱层析纯化得到标题化合物（0.3g，80%）。
步骤5：合成((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-5-甲氧基-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯甲酸甲酯（0.3g，0.71mmol）的乙醇（4mL）溶液中加NaOH（0.06g，1.42mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥并浓缩后得到粗品酸（0.25g）。
将上述酸（0.25g，0.62mmol）溶解于DMSO（3mL）中，并将3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.19g，1.23mmol）加入到上述溶液中。反应混合物在室温搅拌15分钟后，将PYBOP（0.48g，0.92mmol）加到反应混合物中，搅拌过夜。将反应物倒入冰中以淬灭反应，所得混合物用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到原料粗品，其经柱层析纯化得到标题化合物（0.2g，60%）。
步骤6：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-甲氧基-2-甲基苯甲酰胺
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向((1r,4r)-4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-5-甲氧基-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.2g，0.37mmol）的DCM（4mL）溶液中加入TFA（2mL），反应混合物在室温搅拌1小时。反应结束后，减压除去溶剂，向残余物中加入饱和NaHCO3溶液。用10%MeOH/DCM萃取；合并的有机层用水和盐水洗涤；用无水Na2SO4干燥；过滤并减压浓缩得到Boc-去保护的化合物（0.15g，)。
将所得Boc-去保护的化合物（0.15g，0.34mmol）溶解于DCM（2mL）中，并在0℃下向该溶液加入福尔马林（0.035g，1.19mmol）。所得反应混合物在0℃搅拌10分钟。加入三乙酰基硼氢化钠（0.18g，0.85mmol），所得混合物在室温下搅拌1小时。反应结束时，加水，用10%MeOH/DCM进行萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩，得到的原料粗品经制备HPLC纯化获得标题化合物的三 氟乙酸盐（0.02g，12%）。LCMS:469.80(M+1)+;HPLC:96.80%(@210-370nm)(Rt;3.802);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),9.42(s,1H),8.06(s,1H),6.75(s,1H),6.58(s,1H),5.86(s,1H),4.26(d,2H,J=4Hz),3.72(s,3H),3.09(m,3H),2.69(s,3H),2.68(s,3H),2.19(s,3H),2.10(s,6H),1.95(m,2H),1.87(m,2H),1.41(m,4H),0.801(t,3H)。
化合物309：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸（3.50g，17.8mmol）的甲醇（40mL）溶液中加入二氯亚砜（3.9ml，53mmol）。将反应混合物加热回流3小时。结束时，减压除去溶剂。向残余物加入碳酸氢钠水溶液，随后用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（3.0g，80%）。
步骤2：合成5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（1.5g，7.1mmol）的ACN（15mL）溶液中加入碳酸铯(4.6g，14mmol）和2-溴乙醇（2.5ml，35mmol）。所得反应混合物在80℃加热过夜。结束时，反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（1.35g，74%）。
步骤3：合成3-氨基-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（1.5g，5.88mmol）的乙醇溶液（20mL）加入溶解于水（20mL）中的氯化铵（1.5g，28mmol）和铁粉（1.3g，23mmol）。所得反应混合物在80℃加热3小时。结束时，将反应混合物过滤，残余物用热乙醇充分洗涤。将滤液浓缩，残余物用碳酸氢钠水溶液碱化。水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩，得到标题化合物（1.3g），其可直接使用。
步骤4：合成3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)-环己基)氨基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.3g，5.77mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（1.6g，7.5mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（2.07g，34.66mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下将三乙酰基硼氢化钠（3.7g，17mmol）加入反应混合物中，在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过硅胶柱层析纯化，得到作为为顺/反异构体的混合物的标题化合物（2.0g，82%），其继续作为混合物直到最终的化合物309，所述化合物309也是作为顺/反异构体的分离物。。
步骤5：合成3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-(乙基)氨基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯（2.0g，4.7mmol）和乙醛（0.63g，14.2mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（1.7g，28mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（3.0g，14.2mmol），反应在室温下搅拌2小时。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩；所得原料粗品经柱层析纯化得到标题化合物（1.9g，89%）。
步骤6：合成(4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯基)-(乙基)-氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-(乙基)氨基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.9g，4.2mmol）的乙醇溶液（20mL）中加入NaOH（0.25g，6.33mmol）水溶液，混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥并浓缩得到相应的粗品酸（1.8g）。
然后将上述酸（1.8g，4.1mmol）溶解到DMSO（15mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（1.25g，8.25mmol）。反应混合物在室温搅拌15分钟后，向其加入PYBOP（3.22g，6.19mmol），继续搅拌过夜。 反应结束后，将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到的原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（1.4g，59%）。
步骤7：合成3-((4-氨基环己基)-(乙基)-氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺
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向(4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯基)-(乙基)-氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.80g，1.40mmol）的DCM（5mL）溶液中加入TFA（2mL），反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，减压除去溶剂，向残余物加入饱和NaHCO3溶液。用10%MeOH/DCM萃取；合并的有机层用水和盐水洗涤；用无水Na2SO4干燥；过滤并减压浓缩得到标题化合物（0.5g，76%）。
步骤8：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向3-((4-氨基环己基)-(乙基)-氨基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺（0.30g，0.63mmol）的DCM（3mL）溶液中加入福尔马林（0.07g，2.23mmol）。所得反应混合物在0℃搅拌20分钟。向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（0.34g，1.59mmol），在室温下搅拌1小时。结束后，减压除去溶剂，向残余物中加水，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩。所得固体通过用乙腈和乙醚洗涤进一步 纯化，得到作为顺/反异构体的混合物的标题化合物N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺（0.25g，78%）.LCMS:499.55(M+1)+;HPLC:51.61&47.78%(@210-370nm)(Rt;3.539&3.751);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(bs,1H),8.04(s,1H),6.68(s,1H),6.51(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H),3.92(t,2H),3.67(t,2H),2.97(m,2H),2.18(s,3H),2.16(s,3H),2.12(s,3H),2.10(s,3H),2.08(s,3H),1.89(s,3H),1.76(m,3H),1.65(bs,1H),1.33(m,3H),1.10(m,1H),0.788(bs,3H)。
化合物310：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（1.50g，7.61mmol）的ACN（15mL）溶液中加入碳酸铯（4.96g，15.2mmol）和1-溴-2-甲氧基乙烷（1.57g，11.4mmol）。所得反应混合物在80℃加热过夜。结束时，反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（1.3g，68)。
步骤2：合成3-氨基-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（1.35g，4.83mmol）的乙醇（20mL）溶液中加入溶解于水（20mL）中的氯化铵（1.35g，25.0mmol）和铁粉（1.07g，19.3mmol）。所得反应混合物在80C加热3小时。结束时，将反应混合物过滤，残余物用热乙醇充分洗涤。将滤液浓缩，残余物用碳酸氢钠水溶液碱化。水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到的标题化合物粗产物（1.23g），其直接用于下一步骤。
步骤3：合成3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.23g，5.14mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（1.42g，6.69mmol）的二氯乙烷（15mL）溶液中加入醋酸（1.8g，31mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（3.2g，15mmol），反应在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过柱层析纯化，得到作为顺/反异构体的混合物的标题化合物（1.6g，72%），其继续使用直到作为顺/反异构体混合物的最终的化合物。
步骤4：合成3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.60g，3.67mmol）和乙醛（0.48g，10.9mmol）的二氯乙烷（20mL）溶液中加入醋酸（1.3g，22mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（2.33g，11.0mmol），反应在室温下搅拌2小时。用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩，所得原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（1.6g，94%）。
步骤5：合成(4-((3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯基)-(乙基)-氨基)-环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.6g，3.5mmol）的乙醇（20mL）溶液中加入NaOH（0.2g，5.3mmol）水溶液，并在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸酸化至pH值为4。用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层浓缩后得到相应的粗品酸（1.4g）。
将上述酸（1.4g，3.1mmol）溶解到DMSO（15mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.95g，6.2mmol）。反应混合物在室温下搅拌15后，向其加入PYBOP（2.4g，4.6mmol），进行搅拌过夜。将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干 燥，过滤并减压浓缩，将得到的原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（1.9g，95%）。
步骤5：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺
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向3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.2g，2.67mmol）的DCM（10mL）溶液中加入TFA（2mL），反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，减压除去溶剂，向残余物中加入饱和NaHCO3溶液。用10%MeOH/DCM萃取；合并的有机层用水和盐水洗涤；用无水Na2SO4干燥；过滤并减压浓缩得到Boc脱保护的化合物（0.78g，)。
将上述Boc脱保护的化合物（0.30g，0.62mmol）溶解于DCM（3mL）中，并在0℃下向该溶液中加入福尔马林（0.07g，2.33mmol）。将所得反应混合物在0℃下搅拌20分钟。然后向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（0.33g，1.56mmol），在室温下搅拌1小时。结束后，减压除去溶剂，向残余物中加水，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩，得到的原料粗品通过制备HPLC纯化得到作为顺/反异构体的混合物的标题化合物N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(2-甲氧基乙氧基)-2-甲基苯甲酰胺（0.02g，6.3%）。LCMS:513.60(M+1)+;HPLC:44.48%&50.77%(@210-370nm)(Rt;3.879&4.316);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.04(s,1H),6.68(s,1H),6.52(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=4.4Hz),4.03(bs,2H),3.61(bs,2H),3.28(s,3H),3.10(m,1H),2.95(m,2H),2.18(s,6H),2.12(s,3H),2.10(s, 3H),2.08(s,3H),1.77(m,2H),1.65(bs,2H),1.33(m,3H),1.15(m,1H),0.78(t,3H,J=4Hz)。
化合物311：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(乙基硫代)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在室温下向搅拌后的2-甲基-3-硝基苯甲酸（50.0g，276mmol）的浓H2SO4（200mL）溶液中分批加入1,3-二溴-5,5-二甲基-2,4-咪唑烷二酮（43.4g，151.8mmol），反应混合物在室温下搅拌5小时。结束时，将反应混合物倒入冷冰水中，将所得沉淀物过滤，用水洗涤并真空干燥，得到所需标题化合物粗品（71.7g，99.9%），其直接用于下一步骤。
步骤2：合成5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在室温下向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸（285g，1104mmol）的DMF（2.8L）溶液中依次加入碳酸钠（468g，4415mmol）和碘甲烷（626g，4415mmol）。所得反应混合物在60℃加热8小时。结束后，将反应混合物过滤，用乙酸乙酯洗涤。合并的滤液用水洗涤，水相用乙酸乙酯来回萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到灰白色固体状的标题化合物（290g，97%的产率)。所得单独的化合物直接用于下一步骤。
步骤3：合成3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（290g，1060mmol）的乙醇（1.5L）溶液中加入溶解于水（1.5L）中的氯化铵（283g，5290mmol），将所得混合物搅拌并在80℃下加热，随后向其分批加入铁粉（472g，8450mmol）。所得反应混合物在80℃加热12小时。结束后，将反应混合物通过硅藻土进行热过滤，并且硅藻土床层依次用甲醇（5L）和30%MeOH/DCM（5L）洗涤。合并的滤液真空浓缩，得到的残余物用碳酸氢钠水溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到棕色固体状的标题化合物（220g，89%的产率)。
步骤4：合成5-溴-3-(((1R,4R)-4-((叔丁氧羰基)-氨基)-环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯（15.0g，617mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲叔丁酯（17.1g，80.2mmol）的二氯乙烷（150mL）溶液中加入醋酸（22.2g，370mmol），反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（39.3g，185mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)-氨基)-环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（10.5g，39%）。
步骤5：合成5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)-氨基)-环己基)-(乙基)-氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)-氨基)-环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（10.0g，22.7mmol）和乙醛（2.99g，68mmol）的二氯乙烷（100mL）溶液中加入醋酸（8.18g，136mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（14.5g，68.1mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（9.0g，84%）。
步骤6：合成((1r,4r)-4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)-(乙基)-氨基)-环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向5-溴-3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)-氨基)-环己基)-(乙基)-氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（9.0g，19mmol）的乙醇（100mL）溶液中加入NaOH（1.15g，28.8mmol）水溶液，混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调至pH值为4。用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩得到粗品酸（8.6g，)。
将上述酸（8.6g，19mmol）溶解到DMSO（10mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（5.74g，37.8mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后，向其加入PYBOP（14.7g，2845mmol），继续搅拌过夜。将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥，浓缩，得到的原料粗品用乙腈洗涤纯化得到标题化合物（10.2g，92%）。
步骤7：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)-(乙基)-氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向((1r,4r)-4-((5-溴-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)-(乙基)-氨基)-环己基)氨基甲酸甲酯（3.0g，5.10mmol）的DCM（20mL）溶液中加入TFA（5mL），反应混合物在室温下搅拌1小时。反应结束后，减压除去溶剂，向残余物中加入饱和NaHCO3溶液。用10%MeOH/DCM萃取；合并的有机层用水和盐水洗涤；用无水Na2SO4干燥；过滤并减压浓缩，得到标题化合物（2.2g，88%），其直接用于下一步骤。
步骤8：合成5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)-(乙基)-氨基)-5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（2.20g，4.50mmol）的DCM（25mL）溶液中加入福尔马林（0.49g，16.3mmol）。所得反应混合物在0℃搅拌20分钟。向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（2.39g，11.2mmol），在室温下搅拌1小时。结束后，加水，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩，得到标题化合物（2.3g，98%），其直接用于下一步骤。
步骤9：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-5-(乙基硫代)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.40g，0.77mmol）的二氧六环溶液中加入乙硫醇（0.048g，0.77mmol）和DIPEA（2.70ml，1.55mmol），然后向反应混合物通入氩气10分钟。然后，将Pd(OAc)2（0.009g，0.038mmol）和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽（Xantphos）（0.045g，0.077mmol）加入到反应混合物中，并在100℃搅拌过夜。反应结束后，加水并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到的原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（0.17g，44%）。LCMS:499.55(M+1)+;HPLC:99.30%(在210-370nm)(Rt;4.264);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mmx5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),9.37(s,1H),8.14(s,1H),7.08(s,1H),6.89(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,2H,J=4Hz),3.15-2.90(m,6H),2.69(s,3H),2.68(s,3H),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.94(m,2H),1.85(m,2H),1.41(m,4H),1.20(t,3H,J=7.2),0.78(t,3H,J=6Hz)。
化合物313：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-羟基环己基)-氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.0g，25mmol）和1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-酮（5.86g，37.8mmol）的二氯乙烷（50mL）溶液中加入醋酸（9.0g，150mmol），反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（15.9g，752mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（6.6g，76%）。
步骤2：合成5-氯-3-(乙基(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（6.6g，19mmol）和乙醛（2.56g，58.4mmol）的二氯乙烷（70mL）溶液中加入醋酸（7.0g，120mmol），反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（12g，57mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，无水硫酸钠干燥并减压浓缩。所得原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（4.0g，56%）。
步骤3：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-(乙基(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（6.9g，19mmol）的乙醇（70mL）溶液中加入NaOH（1.5g，38mmol）水溶液，混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调至pH值为4。用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层干燥并浓缩得到粗品酸（6.5g）。
将上述酸（6.5g，18mmol）溶解在DMSO（50mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（5.6g，37mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后，加入PYBOP（14.3g，27.5mmol），继续搅拌过夜。反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，过滤并减压浓缩，得到标题化合物（5.9g66%），其直接用于下一步骤。
步骤4：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-氧代环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（2.0g，4.1mmol）的丙酮：水（14mL+6mL）溶液中加入PTSA（3.1g，16mmol）。所得反应混合物在70℃搅拌过夜。结束时，减压除去溶剂，残余物用碳酸氢钠水溶液碱化。水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到标题化合物（1.5g，83%），其直接用于下一步骤。
步骤5：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-羟基环己基)-氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下向搅拌后的5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-氧代环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.30g，0.68mmol）的MeOH溶液中慢慢加入NaBH4（0.038g，1.01mmol）。所得反应混合物在0℃搅拌2小时。结束时，用水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到的原料粗品通过乙腈和乙醚洗涤纯化，得到作为异构体的混合物的标题化合物（175mg，58%）。LCMS:446.35(M+1)+;HPLC:74.32%&24.18%(@210-370nm)(Rt;5.157&5.276);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mmx5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.49(s,1H),8.25(s,1H),7.17(s,1H),6.96(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,2H,J=4Hz),3.33(m,1H),3.04(m,2H),2.19(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.78(m,2H),1.66(m,2H),1.38(m,3H),1.10(m,2H),0.78(t,3H)。
化合物315：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.30g，0.58 mmol）和2-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷（0.18g，0.88mmol）的二氧六环-水混合溶液中加入Na2CO3(0.22g，2.07mmol）。向溶液通入氩气15分钟后加入Pd(PPh3)4（0.067g，0.05mmol），继续向溶液通入氩气10分钟。反应混合物在100℃加热3小时。结束时，反应混合物用水稀释，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层Na2SO4干燥，减压除去溶剂得到标题化合物（0.30g，98%）。
步骤2：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯甲酰胺
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向搅拌后的5-(3,6-二氢-2H-吡喃-4-基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.3g，0.576mmol）的甲醇溶液中加入催化量的10%Pd/C。反应混合物在气球压力的氢气气氛中在室温下搅拌1小时。结束时，反应混合物通过硅藻土床层过滤，用甲醇洗涤硅藻土，将滤液减压浓缩，得到的化合物粗品通过制备HPLC纯化得到目标化合物N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1s,4s)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(四氢-2H-吡喃-4-基)苯甲酰胺的三氟乙酸盐（0.08g，26%）。
LCMS:523.60(M+1)+;HPLC:48.41+51.05%(@210nm-370nm)(Rt;3.93&3.99);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,,400MHz)δ11.47(bs,1H),8.39(t,1H),8.08(s,1H),7.07(s,1H),6.86(s,1H),5.87(s,1H),4.26(d,2H,J=2.8Hz),3.94-3.92(m,2H),3.41(m,2H),3.09-2.89(m,3H),2.69(s,3H+3H),2.19(s,3H+3H),2.11(s,3H),1.99-1.86(m,5H),1.64(m,4H),1.42(m,3H),1.25(m,2H),0.79(t,3H)。
化合物319:N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(乙基磺酰基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(乙基硫代)-2-甲基苯甲酰胺
向搅拌后的5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.4g，0.77mmol）的二氧六环溶液中加入乙硫醇（0.048g，0.77mmol）和DIPEA（2.7ml，1.55mmol）。向溶液通入氩气10分钟后加入Pd(OAc)2(0.009g，0.038mmol）和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽（0.045g，0.077mmol），继续向该溶液通入氩气10分钟。反应混合物在100℃搅拌过夜，加水，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到的原料粗品经柱层析纯化得到标题化合物（0.17g，44%）。LCMS:499.55(M+1)+;HPLC:99.30%(@210-370nm)(Rt;4.264);方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),9.37(s,1H),8.14(s,1H),7.08(s,1H),6.89(s,1H),5.86(s,1H),4.25(d,2H,J=4Hz),3.15-2.90(m,6H),2.69(s,3H),2.68(s,3H),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.94(m,2H),1.85(m,2H),1.41(m,4H),1.20(t,3H,J=7.2),0.78(t,3H,J=6Hz)。
步骤2：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(乙基磺酰基)-2-甲基苯甲酰胺
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在室温下向搅拌后的N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(乙基硫代)-2-甲基苯甲酰胺（0.085g，0.17mmol）的甲醇溶液中加入硫酸氢钾（0.105g，0.34mmol）。反应混合物在室温下搅拌4小时，加水，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到的原料粗品通过制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.07g，77%）。LCMS:531.60(M+1)+;HPLC:89.24%(@210nm-370nm)(Rt;4.082;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,,400MHz)δ11.47(s,1H),9.36(s,1H),8.36(s,1H),7.53(s,1H),7.38(s,1H),7.22(m,1H),7.09(s,1H),6.96(s,1H),5.87(s,1H),4.29-4.28(d,2H,J=4.8Hz),3.0-3.20(m,4H),2.60-2.80(m,8H),2.27(s,9H),2.20(s,3H),2.11(s,3H),1.90-2.0(m,2H),1.80-1.90(m,2H),1.40-1.50(m,4H),1.05-1.15(t,3H,J=7.6Hz),0.75-0.85(t,3H,J=6.8Hz)。
化合物320：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-异丙基-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺
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向搅拌后的5-溴-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（0.30g，0.58mmol）和4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷（0.147g，0.875mmol）的二氧六环/水的混合溶液中加入Na2CO3（0.22g，2.07mmol），向溶液通入氩气15分钟。然后加入Pd(PPh3)4（0.067g，0.058mmol），继续通入氩气10分钟。反应混合物在100℃加热2小时，用水稀释，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到的原料粗品通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（0.20g，71%）。
步骤2：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-异丙基-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-(丙-1-烯-2-基)苯甲酰胺（0.20g，0.41mmol）的甲醇溶液中加入催化量的10%Pd/C。反应混合物在氢气气氛中（气球压力)在室温下搅拌2小时。所得混合物通过硅藻土床层过滤，用甲醇洗涤，滤液减压浓缩。所得化合物粗品通过制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.07g，35%）。LCMS:481.40(M+1)+;HPLC:97.01%(@210nm-370nm)(Rt;3.996;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),9.37(bs,1H),8.00(s,1H),7.01(s,1H),6.83 (s,1H),5.86(s,1H),4.26-4.25(d,2H,J=4.0Hz),3.0-3.25(m,3H),2.70-2.8(m,1H),2.60-2.75(m,6H),2.19(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.90-2.0(m,2H),1.80-1.90(m,2H),1.35-1.50(m,4H),1.16-1.20(d,6H,J=6.8Hz),0.75-0.85(t,3H)。
化合物321：5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-N-((4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（126g，0.59mol）的DMF（1.0L）溶液中加入碳酸钠（249g，2.34mol）和碘甲烷（145ml，2.34mol）。反应混合物在60℃加热4小时。结束时，将反应混合物过滤，残余物用DCM洗涤。分离水相，用DCM萃取。将合并的有机层干燥，减压浓缩，通过硅胶柱层析（洗脱液为乙酸乙酯：己烷）纯化得到标题化合物（85g，63%）。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.25(d,1H),8.05(s,1H),3.9(s,1H),2.4(s,1H)。
步骤2：合成3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（85g，0.37mol）的乙醇（425mL）溶液加入溶解于水（425mL）中的氯化铵（85g，112mmol）和铁粉（169g，2.96mol）。所得反应混合物在80℃加热16小时，过滤，残余物用热乙醇充分洗涤。 将滤液浓缩，残余物用碳酸氢钠水溶液碱化。水相用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到标题化合物（70g），其直接使用。1H NMR(DMSO-d6,400MHz):δ6.8(s,2H),5.45(s,2H),3.75(s,3H),2.15(s,3H)。
步骤3：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（12g，60mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（15.4g，72mmol）的二氯乙烷（120mL）溶液中加入醋酸（21g，360mmol），反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（38.2g，180mmol），在室温下搅拌2小时。结束时，向反应混合物中加水，用DCM萃取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的原料粗品再通过柱纯化得到标题化合物的反式异构体3-(((1r,4rs)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（8.0g，33%）。
步骤4：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-环己基)-(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（11.4g，28.8mmol）和乙醛（2.5g，56mmol）的二氯乙烷（120mL）溶液中加入醋酸（10.7g，169mmol），反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（17.95g，84.6mmol），在室温下搅拌2小时。结束时，向反应混合物加水，用DCM萃取。合并的有机层用碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的原料粗品再通过柱纯化得到标题化合物（9.8g，80%）。
步骤5：合成5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)-环己基)-(乙基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（9.8g，23mmol）的DCM（50mL）溶液中加入TFA（10mL），反应混合物在室温下搅拌2小时。结束后，将反应混合物浓缩干。再用饱和碳酸氢钠溶液（100mL）将残余物碱化至pH值为8，水层用20%甲醇/DCM萃取（100mL x4)。合并的有机层用Na2SO4干燥，减压除去溶剂，得到胺的粗品（7.4g），其直接用于下一步反应。
在0℃下，向搅拌后的上述胺（7.4g，23mmol）的DCM（70mL）溶液中加入37-41%福尔马林水溶液(2.4g，81mmol），反应混合物在室温下搅拌10分钟。然后向反应混合物中加入NaBH(OAc)3（12.1g，57mmol），搅拌2小时。结束时，用水淬灭反应。加入MeOH（8mL），两相分离。用10%MeOH/DCM萃取，将合并的有机相干燥并浓缩。残余物通过碱性氧化铝柱纯化得到标题化合物（8.0g，99%）。
步骤6：合5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-2-甲基-苯甲酸
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向化合物3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-环己基)-(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（8.0g，23mmol）的乙醇（70mL）溶液中加入NaOH（1.8g，45mmol/7mL H2O）水溶液，在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为6，并用柠檬酸调至pH值为4。用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥并浓缩得到标题化合物（7.6g，99%）。
步骤7：合成3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮
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向4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（1eq）的甲醇和氨水（9:1)溶液中加入催化量的雷尼镍。反应混合物在氢气气氛（气球压力）和室温条件下搅拌2-5小时。反应结束时，通过硅藻土床层过滤，将滤液减压浓缩得到标题化合物。
步骤8：合成5-氯-3-(((1r,4r)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-N-((4-乙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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将上述酸和5-氯-3-(((反式)-4-(二甲基氨基)环己基)-(乙基)-氨基)-2-甲基-苯甲酸（1eq）溶解于DMSO中，并将3-(氨基甲基)-4-乙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮（2eq.）加入到上述溶液中。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（1.5eq.）和三乙胺（1eq.）。反应混合物搅拌过夜。然后将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩，得到的产物再依次经柱层析和制备HPLC纯化得到标题化合物的三氟乙酸盐（0.1g，70%）。LCMS:487.45(M+1)+;HPLC:96.17%(@254nm)(Rt;6.026;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),9.33(s,1H),8.22(s,1H),7.19(s,1H),6.97(s,1H),5.88(s,1H),4.20-4.25(d,2H),3.0-3.15(m,1H+2H),2.60-2.75(m,1H+3H+3H),2.35-2.45(m,2H),2.20(s,3H),2.15(s,3H),1.90-2.0(m,2H),1.80-1.90(m,2H),1.35-1.50(m,4H),1.10-1.20(t,3H,J=7.2Hz),0.75-0.85(t,3H)。
化合物335：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)硫代)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-溴-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的CuBr2（12.3g，55.3mmol）的乙腈（150mL）溶液中加入亚硝酸叔丁酯（7.77g，75.4mmol），然后加入3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（10.0g，50.3mmol）的乙腈溶液。所得反应混合物在0℃搅拌2小时，然后在室温18小时。结束时，反应混合物用水稀释，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层干燥，减压浓缩，并通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（6.6g，50%）。
步骤2：合成3-溴-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)-甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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向3-溴-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（2.0g，7.6mmol）的EtOH（20mL）溶液中加入NaOH（0.45g，11.4mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，残余物用稀HCl酸化至pH值为8，再用柠檬酸酸化至pH值为6。水相用10%甲醇/DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩得到单独的粗品酸中间体（1.5g）。
将上述酸（1.5g，6.2mmol）溶解在DMSO（15mL）中，并向其中加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（1.67g，12.43mmol）和三乙胺（0.61g，6.01mmol）。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（4.81g，9.26mmol），在室温继续搅拌过夜。结束后，将反应混合物倒入冰水中。过滤收集悬浮的固体， 用水充分洗涤并干燥。所得固体通过乙腈洗涤进一步纯化得到标题化合物（2.18g，92%）。
步骤3：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-((4-氧代环己基)硫代)苯甲酰胺
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向3-溴-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)-甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.35g，0.91mmol.)、4-巯基环己酮（0.142g，1.09mmol）和DIPEA（0.235g，1.82mmol）的二氧六环溶液通入氩气10分钟。然后加入Pd(OAc)2（0.01g，0.044mmol）和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽（0.052g，0.089mmol），继续通入氩气10分钟。反应混合物在100℃搅拌过夜。反应结束后，加水，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，得到的原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（0.50g，88%）。
步骤4：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)硫代)-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-3-((4-氧代环己基)硫代)苯甲酰胺（0.45g，1.03mmol）和二甲基胺（0.14g，3.11mmol）的二氯乙烷（5mL）溶液中加入醋酸（0.37g，6.16mmol），所得混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下，向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（0.66g，3.11mmol），在室温下搅拌过夜。反应结束时，减压除去溶剂。向残余物中加水，用5%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩，得到的原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（0.016g，3.3%）。分析数据:LCMS:462.35(M+1)+;HPLC:89.00%(@210-370nm)(Rt;4.949;方法:色谱柱:YMC ODS-A 150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ7.44(s,1H),7.16(s,1H),6.10(s,1H),4.44(s,2H),3.63(m,1H),3.13(m,1H),2.38(s,3H),2.36(s,3H),2.35(s,3H),2.31(s,3H),2.24(s,3H),1.75-2.08(m,8H)。
化合物336：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-羟基环己基)硫代)-2-甲基苯甲酰胺
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该化合物作为附加产物也从化合物335（0.235g，50%）的纯化过程中分离出来，分析数据:LCMS:435.30(M+1)+;HPLC:99.37%(@210-370nm)(Rt;5.900;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(bs,1H),8.31(t,1H),7.72-7.68(m,1H),7.41(s,1H),7.07(s,1H),5.85(s,1H),4.58(d,1H,J=4Hz),4.24(d,2H,J=4Hz),4.13(m,1H),3.43(m,1H),2.20(s,3H),2.18(s,3H),2.10(s,3H),1.95-1.80(m,1H),1.75-1.55(m,1H),1.40-1.20(m,4H),0.87(m,2H)。
化合物339：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在室温下向2-甲基-3-硝基苯甲酸（10.0g，55.0mmol）的120ml甲醇溶液中加入浓H2SO4(15mL），所得混合物在60℃搅拌过夜。将所得混合物减压浓缩，原料粗品用饱和NaHCO3中和并用乙酸乙酯萃取。有机相用Na2SO4干燥并减压浓缩得到标题化合物（10g）。
步骤2：合成3-氨基-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（10.0g，56.4mmol）的60ml乙醇溶液中加入溶解于水（60mL）中的氯化铵（18.0g，338mmol）和铁粉（18.8g，338.2mmol）。所得反应混合物在80℃加热3小时。向反应混合物中加水，通过硅藻土过滤。滤液用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩得到标题化合物（7.0g，83%）。
步骤3：合成3-((4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-2-甲基苯甲酸甲酯（1.5g，9.1mmol）和4-羟基-4-甲基环己酮（1.51ml，11.8mmol）的二氯乙烷（10ml）溶液中加入醋酸（3.2ml，55mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物冷却至0℃，然后加入三乙酰基硼氢化钠（5.78g，27.3mmol），所得混合物室温下搅拌过夜。用饱和NaHCO3中和反应混合物，用DCM萃取，用Na2SO4干燥，减压浓缩，并通过硅胶柱层析纯化，得到的标题化合物作为顺反异构体的混合物（1.4g，56%）继续向后续步骤推进。
步骤4：合成3-(乙基(4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-((4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.4g，5.05mmol）和乙醛（0.7ml，13mmol）的二氯乙烷（20ml）溶液中加入醋酸（1.7ml，30mmol），反应混合物在室温下搅拌20分钟。将反应混合物冷却至0℃，并加入三乙酰基硼氢化钠（3.2g，15mmol），所得混合物在室温下搅拌过夜。用饱和NaHCO3中和反应混合物，用DCM萃取，用Na2SO4干燥，减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（1.42g，94%）。
步骤5：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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3-(乙基(4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（300mg，0.98mmol）和NaOH（58mg，1.47mmol）在乙醇/水（3:2)(5mL）中的混合物在70℃加热2小时。将反应混合物浓缩干，将残余物在水和乙酸乙酯之间分配。将有机层用Na2SO4干燥并减压浓缩得到270mg粗品酸。将所得粗品酸（270g，0.92mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（282mg，1.85mmol）、PYBOP（717mg，1.38mmol）和三乙胺（0.12ml，0.92mmol）在3ml DMSO中在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机相用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化，得到作为异构体的混合物的标题化合物N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（120mg，30%）。LCMS:426.45(M+1)+;HPLC:62.09&33.24%(@210-370nm)(Rt;3.982&4.164;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样 量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.44(s,1H),8.04(m,1H),7.12(s,2H),6.91(m,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=4Hz),4.15(m,1H),3.00(m,2H),2.84(m,1H),2.18(s,6H),2.10(s,3H),1.75-1.60(m,2H),1.55-1.35(m,4H),1.35-1.15(m,4H),1.08&1.03(s,3H),0.87&0.77(t,3H)。
化合物340：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-甲氧基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(乙基(4-甲氧基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向冷却后的3-(乙基(4-羟基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（300mg，0.98mmol）的THF（5mL）溶液中分批加入氢化钠（235mg，5.89mmol），然后再加入碘甲烷（0.61ml，9.8mmol）。所得混合物在室温下搅拌1小时，冷却至0℃后用冷冰水淬灭，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用Na2SO4干燥并减压浓缩，得到300mg标题化合物粗品。
步骤2：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-甲氧基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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将3-(乙基(4-甲氧基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（300mg，0.94mmol）和NaOH（56mg，1.41mmol）在乙醇/水（4:1)(5mL）中的混合物在70℃加热2小时。将反应混合物浓缩干，将残余物在水和乙酸乙酯之间分配。将有机层用Na2SO4干燥并减压浓缩得到280mg粗品酸。将所得粗品酸（280mg，0.91mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（279mg，1.83mmol）、PYBOP（716mg，1.37mmol）和三乙胺（0.12ml，0.91mmol）的混合物的DMSO（3mL）溶液在室温下搅拌过夜。反应混合物用水稀释，并用10%MeOH/DCM萃取，用Na2SO4干燥，浓缩，残余物通过硅胶柱层析纯化，得到作为异构体混合物的标题化合物N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(4-甲氧基-4-甲基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺（70mg，17%）。LCMS:440.45(M+1)+;HPLC:45.77&48.47%(@210-370nm)(Rt;4.297&4.430;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mmx4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.03(bs,1H),7.15(bs,2H),6.91(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=2.8Hz),3.10-2.90(m,7H),2.19(s,6H),2.10(s,3H),1.72-1.10(m,8H),1.08&0.99(s,3H),0.77(t,3H)。
化合物344：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1s,4s)-4-甲氧基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-3-(((1s,4s)-4-甲氧基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，5.0mmol）和4-甲氧基环己酮（1.28g，10.0mmol）的二氯乙烷（10mL）溶液中加入醋酸（1.8g，30mmol），所得混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（3.2g，15mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥并减压浓缩。得到的原料粗品通过硅胶柱层析纯化，分离得到的标题化合物的顺式异构体为极性较小的异构体产物（0.60g，38%）。其反式异构体也可以继续向后续反应推进以生成相应的反式的最终产物化合物343。
步骤2：合成5-氯-3-(乙基((1s,4s)-4-甲氧基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-3-(((1s,4s)-4-甲氧基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.60g，1.92mmol）和乙醛（0.25g，5.78mmol）的二氯乙烷（10mL）溶液中加入醋酸（0.69g，11.6mmol），所得混合物在室温下搅拌10分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（1.22g，5.78mmol），在室温下搅拌过夜。结束时，用碳酸氢钠水溶液淬灭反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用无水硫酸钠干燥并减压浓缩，粗产物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（0.60g，92%）。
步骤3：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1s,4s)-4-甲氧基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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向5-氯-3-(乙基((1r,4r)-4-甲氧基环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（0.4g，1.17mmol）的乙醇（5mL）溶液中加入NaOH（0.07g，1.76mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6并用柠檬酸调至pH值为4。用乙酸乙酯萃取，将合并的有机层干燥浓缩得到单独的粗品酸（0.35g）。
将上述粗品酸（0.35g，1.1mmol）溶解于DMSO（4mL）中，并将3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.33g，2.14mmol）加入到上述溶液中。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（0.84g，1.61mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将所得混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用无水硫酸钠并干燥减压浓缩，产生的粗产物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（0.55g，79%）。LCMS:460.30(M+1)+;HPLC:97.37%(@210-370nm)(Rt;5.026;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.44(bs,1H),8.21(t,1H),7.13(s,1H),6.93(s,1H),5.85(s,1H),4.25(d,2H,J=3.2Hz),3.27(m,1H),3.18(s,3H),2.99(q,2H),2.79(m,1H),2.18(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.77(m,2H),1.60(m,2H),1.45(m,2H),1.33(m,2H),0.78(t,3H,J=6Hz)。
化合物349：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯甲酰胺
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步骤1：合成5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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在0℃下，向搅拌后的5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸（3.50g，17.8mmol）的甲醇（40mL）溶液中加入二氯亚砜（3.9ml，53mmol）。将所得混合物加热回流3小时，然后减压浓缩。向残余物中加入碳酸氢钠水溶液，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（3.0g，80%）。
步骤2：合成3-(3-(甲氧羰基)-4-甲基-5-硝基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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向搅拌后的5-羟基-2-甲基-3-硝基苯甲酸酯（1.5g，7.1mmol）的ACN（15mL）溶液中加入碳酸铯（4.64g，14.2mmol）和3-碘代氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（3.0g，11mmol）。所得混合物在80℃加热过夜。结束时，反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥并减压浓缩。原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（1.2g，46%）。
步骤3：合成3-(3-氨基-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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向搅拌后的3-(3-(甲氧羰基)-4-甲基-5-硝基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（1.0g，2.7mmol）的甲醇（10mL）溶液中加入催化量的10%Pd/C。所得混合物在室温和氢气气氛中（气球压力)搅拌3小时。结束时，反应混合物通过硅藻土床层过滤，用甲醇洗涤硅藻土床层。合并的滤液减压浓缩得到标题化合物（0.90g，98%）。
步骤4：合成3-(3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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向搅拌后的3-(3-氨基-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（0.90g，2.67mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.741g，3.47mmol）的二氯乙烷（10mL）溶液中加入醋酸（0.96g，16.1mmol），所得混合物在室温下搅拌20分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（1.7g，8.0mmol），在室温下搅拌2小时。结束时，用碳酸氢钠水溶淬灭液反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，减压浓缩，原料粗品通过柱层析纯化，得到的标题化合物（0.9g，63%）为顺反异构体的混合物。
步骤5：合成3-(3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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向搅拌后的3-(3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（0.90g，1.69mmol）和乙醛（0.22g，5.06mmol）的二氯乙烷（10mL）溶液中加入醋酸（0.61g，10mmol），反应混合物在室温搅拌20分钟。然后在0℃下向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（1.07g，5.05mmol），反应在室温下搅拌2小时。结束时，用碳酸氢钠水溶淬灭液反应，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取。合并的有机层用水洗涤，干燥，减压浓缩，得到标题化合物（0.85g），其使用时不用进一步纯化。
步骤6：合成3-(3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯
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向3-(3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(甲氧羰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（0.85g，1.52mmol）的乙醇（10mL）溶液中加入NaOH（0.12g，3.03mmol）水溶液，所得混合物在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，用稀HCl酸化至pH值为6，用柠檬酸调至pH值为4。用乙酸乙酯萃取。合并的有机层干燥并浓缩后得到单独的酸（0.75g）。
然后将上述酸（0.75g，1.37mmol）溶解于DMSO（7mL）中，并将3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.42g，2.74mmol）加入到上述溶液中。反应混合物在室温搅拌15分钟后加入PYBOP（1.06g，2.05mmol），继续搅拌过夜。结束后，将反应混合物倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层用水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩得到标题化合物（0.80g，85%）。
步骤7：合成N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-((4-(二甲基氨基)环己基)(乙基)氨基)-2-甲基-5-((1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯甲酰胺
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向冷却并搅拌后的3-(3-((4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-4-甲基苯氧基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯（0.80g，1.17mmol）的DCM（10mL）溶液中加入TFA（2mL）。所得混合物在室温下搅拌1小时，减压浓缩，向残余物加入饱和NaHCO3溶液。用10%MeOH/DCM萃取，合并的有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥。减压除去溶剂得到Boc脱保护的中间体化合物（0.5g）。
将上述中间体（0.5g，1.0mmol）溶解于MeOH（3mL）中，并在0℃加入福尔马林（0.16g，5.33mmol）。所得混合物在相同温度搅拌20分钟。然后加入三乙酰基硼氢化钠（0.55g，2.59mmol），所得混合物在室温下搅拌1小时。结束后，减压除去溶剂，向残余物中加水。用10%MeOH/DCM萃取。将合并的有机层干燥并减压浓缩，得到的原料粗品通过柱层析纯化得到标题化合物（0.03g，5.5%）。
LCMS:524.55(M+1)+;HPLC:37.93+61.46%(@210-370nm)(Rt;3.462and3.810;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(bs,1H),8.05(bs,1H),6.56(s,1H),6.36(s,1H),5.85(s,1H),4.69(bs,1H),4.24(bs,2H),3.67(m,2H),3.08-2.92(m,4H),2.33-2.11(m,20H),1.73-1.65(m,4H),1.35-1.29(m,4H),0.77(t,3H)。
化合物119：3-(((1s,4s)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸
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在-10℃下，向搅拌后的5-氯-2-甲基苯甲酸（4.0g，24mmol）的浓硫酸（27mL）溶液中加入浓缩HNO3(3.3g，53mmol）溶解于浓硫酸（4.4mL）中组成的硝化溶液。所得混合物在-10℃搅拌3小时，然后倒入冰水中。将产生的沉淀物过滤，用水洗涤并真空干燥得到标题化合物（4.95g，99%）。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸（6.75g，31.3mmol）的DMF（33mL）溶液中加入碳酸钠（13.2g，125mmol）和碘甲烷（17.8g，125mmol）。所得混合物在60℃加热4小时。向反应混合物中加水，用二氯甲烷萃取。合并的有机萃取液用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。所得粗产物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（6.0g，84%）。
步骤3：合成3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-硝基苯甲酸甲酯（6.0g，26mmol）的乙醇（60mL）溶液中加入氯化铵(6.0g，112mmol）的水（60mL）溶液和铁粉（11.9g，208mmol）。所得混合物在80℃加热1小时。加水，所得混合物通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯萃取。合并的有机层用水洗涤，用硫酸钠干燥并减压浓缩得到标题化合物粗品（5.0g）。
步骤4：合成3-(((1s,4s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在室温下，向搅拌后的3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.0g，25mmol）和(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯（6.95g，32.7mmol）的二氯乙烷（25mL）溶液中加入醋酸（9.0g，150mmol）。然后再加入三乙酰基硼氢化钠（15.97g，75.4mmol），反应混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂，原料粗品纯化硅胶柱层析得到5.2g(52%）首先被洗脱下来的标题化合物的顺式异构体产物3-(((1s,4s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯和3.5g(35%）极性较大的反式异构体产物3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯。
步骤5：合成3-(((1s,4s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在室温下，向搅拌后的3-(((1s,4s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.20g，13.1mmol）和乙醛（1.15g，26.3mmol）的二氯乙烷（15mL）溶液中加入醋酸（4.72g，78.8mmol）。然后向反应混合物中加入三乙酰基硼氢化钠（8.35g，39.4mmol），搅拌1小时。向混合物加水，用二氯甲烷萃取。合并的有机层干燥硫酸钠并减压浓缩。粗产物通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（5.3g，99%）。
步骤6：合成((1s,4s)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向搅拌后的3-(((1s,4s)-4-((叔丁氧羰基)氨基)-环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（5.20g，12.2mmol）的乙醇（15mL）溶液中加入NaOH（0.73g，18.4mmol）水溶液。混合物在60℃搅拌1小时，减压浓缩，然后依次用稀HCl和柠檬酸酸化至pH值为4。所得混合物用乙酸乙酯萃取，将合并的萃取液干燥并减压浓缩得到相应的粗品酸（4.4g）。在0℃下，向搅拌后的上述酸（4.4g，10.7mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（3.25g，21.4mmol）和三乙胺（1.08g，10.70mmol）的DMSO（15mL）溶液中加入PYBOP（8.34g，16.05mmol）。在室温下搅拌过夜后，将所得混合物倒入冰中，并用10%MeOH/CH2Cl2萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的原料粗品通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（4.20g，72%）。LCMS:548.40(M+1)+;HPLC:98.62%(@254nm)(Rt;5.736;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.20(t,1H),7.13(s,1H),6.91(m,2H),5.85(s,1H),4.22(d,2H),3.47(bs,1H),3.00-3.02(m,3H),2.18(s,3H),2.16(s,3H),2.10(s,3H),1.71(m,2H),1.53(m,2H),1.39(m,4H),1.37(s,9H),0.78(t,3H,J=6.8Hz)。
步骤7：合成3-(((1s,4s)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的((1s,4s)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.60g，1.10mmol）的CH2Cl2（10mL）溶液中加入三氟乙酸（2mL）。所得混合物在室温下搅拌2小时，浓缩干。将残余物溶解于碳酸氢钠水溶液中，用20%MeOH/CH2Cl2萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的残余物经研磨得到标题化合物（0.5g，100%）。LCMS:445.30(M+1)+;HPLC:99.3%(@254nm)(Rt;4.524;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.21(t,1H),7.13(s,1H),6.91(d,1H,J=1.6Hz),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.8Hz),2.99-3.04(m,2H),2.82-2.85(m,2H),2.18(s,3H),2.15(s,3H),2.10(s,3H),1.75-1.77(m,2H),1.36-1.39(m,6H),0.79(t,3H,J=6.8Hz)。
化合物121：3-(((1s,4s)-4-乙酰氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在室温下，向搅拌后的3-(((1s,4s)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.30g，0.68mmol）和EDCI.HCl(0.194g，1.01mmol）的DMF（5mL）溶液中加入HOBt(0.091g，0.675mmol）和醋酸（0.081g，1.35mmol）。搅拌18小时后加水，所得混合物用10%MeOH/CH2Cl2萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥并浓缩，得到的残余物纯化通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（0.10g，30%）。LCMS:487.30(M+1)+;HPLC:91.72%(@254nm)(Rt;4.585;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5% B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.22(t,1H),7.75(d,1H,J=7.2Hz),7.15(s,1H),6.93(s,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.4Hz),3.69(bs,1H),3.01-3.03(m,2H),2.94(m,1H),2.18(s,6H),2.10(s,3H),1.80(s,3H),1.69-1.71(m,2H),1.37-1.51(m,6H),0.79(t,3H,J=6.8Hz)。
化合物120：3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
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在室温下，向搅拌后的上述制备的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.5g，8.8mmol）和乙醛（0.77g，17.7mmol）的二氯乙烷（15mL）溶液中加入醋酸（3.17g，53mmol）。搅拌10分钟后，向反应混合物加入三乙酰基硼氢化钠（5.61g，26.5mmol），反应在室温下搅拌1小时。加水，所得混合物用二氯甲烷萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的原料粗品通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（3.5g，93%）。
步骤2：合成((1r,4r)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯
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向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己基)(乙基)氨基)-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（3.50g，8.23mmol）的乙醇（15mL）溶液中加入NaOH（0.49g，12.4mmol）水溶液。所得混合物在60℃搅拌1小时，减压浓缩并依次用稀HCl和柠檬酸水溶液酸化至pH值为4。所得混合物用乙酸乙酯萃取，将合并的有机层干燥，减压浓缩得到相应的粗品酸（3.2g）。在0℃下，向搅拌后的上述酸（3.2g，7.8mmol）、3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（2.36g，15.6mmol）和三乙胺（0.79g，7.8mmol）的DMSO（15mL）溶液中加入PYBOP（6.07g，11.7mmol）。在室温下搅拌过夜，然后将混合物倒入冰中，并用10%MeOH/CH2Cl2萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的原料粗品硅胶柱层析纯化得到标题化合物（3.0g，70%）。分析数据:LCMS:545.25(M+1)+;HPLC:99.92%(@254nm)(Rt;5.677;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.46(s,1H),8.23(t,1H),7.14(s,1H),6.92(s,1H),6.65(d,1H,J=7.2Hz),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4Hz),3.14(bs,1H),3.00-3.02(m,2H),2.18(s,3H),2.11(s,3H),2.10(s,3H),1.67-1.76(m,4H),1.40(m,2H),1.35(m,9H),1.04-1.13(m,2H),0.77(t,3H,J=6Hz)。
步骤3：合成3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的((1r,4r)-4-((5-氯-3-(((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)氨基甲酰基)-2-甲基苯基)(乙基)氨基)环己基)氨基甲酸叔丁酯（0.6g，1.10mmol）的二氯甲烷（2mL）溶液中加入TFA（2mL）。所得混合物在室温下搅拌2小时，浓缩干。将残余物溶解于碳酸氢钠水溶液并用20%MeOH/CH2Cl2萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥并减压浓缩，得到的粗产品通过硅胶柱层析纯化得到标题化合物（0.40g，81%）。LCMS:445.18(M+1)+;HPLC:98.13%(@254nm)(Rt;4.096;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1HNMR(DMSO-d6,400MHz)δ8.22(t,1H),7.13(s,1H),6.92(s,1H),5.85(s,1H),4.23(d,2H,J=4Hz),3.00-3.01(m,2H),2.59(m,1H),2.18(s,3H),2.12(s,3H),2.10(s,3H),1.73-1.76(m,2H),1.65-1.68(m,2H),1.36-1.39(m,2H),0.97-1.00(m,2H),0.77(t,3H,J=6Hz)。[1H合并在溶剂峰中]。
化合物122：3-(((1r,4r)-4-乙酰氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在室温下，向搅拌后的3-(((1r,4r)-4-氨基环己基)(乙基)氨基)-5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.30g，0.68mmol）和EDCI.HCl(0.19g，1.0mmol）的DMF（5mL）溶液中加入HOBt(0.09g，0.68mmol）和醋酸（0.081g，1.35mmol）。搅拌18小时后，加水，所得混合物用10%MeOH/DCM萃取。合并的有机层干燥并浓缩，得到的原料粗品经硅胶柱层析纯化得到标题化合物（0.10g，30%）。LCMS:487.25(M+1)+;HPLC:92.95%(@254nm)(Rt;4.445;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.45(s,1H),8.21(t,1H),7.64(d,1H,J=7.6Hz),7.14(s,1H),6.92(s,1H),5.85(s,1H),4.24(d,2H,J=4.8Hz),3.41-3.43(m,1H),3.01-3.03(m,2H),2.61(m,1H),2.18(s,3H),2.13(s,3H),2.10(s,3H),1.74(t,7H,J=18Hz),1.40-1.43(m,2H),1.07-1.12(m,2H),0.77(t,3H,J=6.8Hz)。
化合物207：5-氯-3-(环己基硫代)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成3-溴-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯
在0℃下，向搅拌后的CuBr2(12.3g，55.3mmol）的乙腈（100mL）溶液中加入亚硝酸叔丁酯（7.79g，75.4mmol）。向该溶液中加入3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（10g，50.3mmol）的乙腈（50mL）溶液，并在0℃搅拌2小时，室温下搅拌过夜。结束时，加水，用乙酸乙酯萃取产物。有机层用NH4Cl水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，再减压浓缩。经硅胶柱纯化得到标题化合物（6.6g，50%）。
步骤2：合成5-氯-3-(环己基硫代)-2-甲基苯甲酸甲酯
向搅拌后的3-溴-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.79mmol）的1,4-二氧六环溶液中加入N,N-二异丙基乙基胺（0.98g，7.59mmol）。向反应混合物中通入氩气20分钟。然后向反应混合物中依次加入Pd(OAc)2(0.042g，0.189mmol）、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(0.22g，0.38mmol）和环己基硫醇（0.44g，3.79mmol），再次通入氩气10分钟。将反应混合物回流16小时。结束时，加水，产物用乙酸乙酯萃取。有机层用硫酸钠干燥，产物通过硅胶柱纯化得到标题化合物（1.0g，83%）。
步骤3：合成5-氯-3-(环己基硫代)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
向5-氯-3-(环己基硫代)-2-甲基苯甲酸甲酯（1.0g，3.35mmol）的乙醇（10mL）溶液中加入NaOH（0.2g在2.5mL H2O中,5.02mmol）水溶液，溶液在60℃搅拌1小时。反应结束后，减压除去乙醇，水层用稀HCl酸化至pH值为6，再用 柠檬酸酸化至pH值为4。产物用10%甲醇/DCM萃取。将合并的有机层干燥并浓缩得到单独的酸（0.91g，95%）。
将上述酸（0.91g，3.2mmol）溶解于DMSO（2mL）中，并将3-(氨基甲基)-4,6-二甲基吡啶-2(1H)-酮（0.974g，6.41mmol）和三乙胺（0.65g，3.2mmol）加入到上述溶液中。反应混合物在室温下搅拌15分钟后加入PYBOP（2.5g，4.8mmol），继续搅拌过夜。反应结束后，将溶液倒入冰中，用10%MeOH/DCM萃取产物。将合并的有机层干燥并浓缩，得到的粗产品通过溶剂洗涤纯化得到标题化合物（1.3g，93%）。
分析数据：LCMS:419.2(M+1)+;HPLC:98.38%(@254nm)(Rt;7.989;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ11.47(bs,1H),8.32(t,1H),7.40(s,1H),7.07(s,1H),5.85(s,1H),4.24-4.25(d,1H,J=4Hz),2.21(s,3H),2.18(s,3H),2.11(s,3H),1.88-1.91(m,2H),1.56-1.69(m,3H),1.25-1.38(m,5H),2个质子合并在溶剂峰中。
化合物208：5-氯-3-(环己基亚磺酰基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的5-氯-3-(环己基硫代)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.2g，0.48mmol）的DCM（7mL）溶液中加入m-CPBA(0.098g，0.57mmol），并在0℃搅拌2小时。通过TLC监测反应。结束后，反应混合物用DCM稀释，用NaHCO3水溶液洗涤。产物通过溶剂洗涤纯化得到标题化合物（0.17g，82.3%）。
分析数据:LCMS:435.1(M+1)+;HPLC:92.68%(@220nm)(Rt;5.996;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B; 0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(CDCl3,400MHz)δ11.44(bs,1H),7.82(s,1H),7.45(t,1H),7.39(s,1H),5.97(s,1H),4.52(bs,2H),2.53-2.59(m,1H),2.38(s,3H),2.34(s,3H),2.23(s,3H),1.85-1.93(m,3H),1.65(m,2H),1.20-1.29(m,3H)。
化合物209：5-氯-3-(环己基磺酰基)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢-吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃下，向搅拌后的5-氯-3-(环己基硫代)-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺（0.1g，0.238mmol）的DCM（4mL）溶液中加入m-CPBA(0.082g，0.48mmol），并在室温下搅拌2小时。通过TLC监测反应。结束后，反应混合物用DCM稀释，用NaHCO3水溶液洗涤。产物通过制备HPLC纯化得到标题化合物（0.075g，23%）。
分析数据:LCMS:451.1(M+1)+;HPLC:83.44%(@254nm)(Rt;6.547;方法:色谱柱:YMC ODS-A150mm x4.6mm x5μ;流动相:A;0.05%TFA的水溶液/B;0.05%TFA的乙腈溶液;进样量:10μL,柱温:30℃;流速:1.4mL/min.;梯度:0-8min5%B-95%B,保持1.5min,9.51-12min5%B);1H NMR(CDCl3,400MHz)δ11.44(bs,1H),7.98(s,1H),7.50(s,1H),7.45(t,1H),5.97(s,1H),4.51(d,2H,J=4Hz),2.94-3.00(m,1H),2.62(s,3H),2.38(s,3H),2.21(s,3H),1.88-1.95(m,4H),1.70(m,1H),1.52-1.55(m,2H),1.21(m,3H)。
化合物416：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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步骤1：合成4-甲磺酰基环己基-1-酮
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向包含(丁-1,3-二烯-2-基氧基)(三甲基)硅烷（12.5ml，70.7mmol）的甲苯（50mL）溶液中加入(甲基磺酰基)乙烯（4.1ml，47.1mmol），并加热回流76小时。然后，将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩得到黄色油状物。将所得油状物溶解于CH2Cl2(120mL）中，并通过硅藻土![]()
过滤。将滤液真空浓缩，再将所得残余物在（冰/水)冷却条件下溶解于MeOH（8mL）溶液中。再加入TFA（2.0mL）。反应混合物在0℃继续搅拌10分钟，再在室温下搅拌25小时。将反应混合物真空浓缩，残余物通过Biotage Isolera100g SNAP快速柱层析（0-10%MeOH/CH2Cl2）纯化，得到稠密的黄色油状的标题化合物1.2g(14%）。LC-MS94%,0.39分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=177.0(仅ELS可见).1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm3.24-3.32(m,1H),2.94(s,3H),2.62-2.70(m,2H),2.50-2.56(m,2H),2.38-2.45(m,2H),2.07-2.18(m,2H)。
步骤2：合成5-氯-2-甲基-3-(((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)苯甲酸甲酯
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在氮气气球下，向搅拌后的4-甲磺酰基环己基-1-酮（94%,0.56g，3.0mmol）的1,2-二氯乙烷（10mL）溶液中依次加入3-氨基-5-氯-2-甲基苯甲酸甲酯（0.60g，3.0mmol）和醋酸（1.0ml，18.0mmol）。溶液搅拌50分钟后，在4小时内向该溶液中分批加入三乙酰基硼氢化钠（1.9g，9.0mmol）。所得悬浮液搅拌过夜后，在2.5小时内向其加入4-甲磺酰基环己基-1-酮（0.28g，1.5mmol）的1,2-二氯乙烷（1.5mL）溶液和三乙酰基硼氢化钠（0.96g，4.5mmol）。反应混合物继续搅拌67小时，然后向其加入去离子水（40mL），逐渐加入NaHCO3固体（4.8g）中和反应混合物（pH值为8）。用CH2Cl2（3x25mL）萃取混合物。合并的有机萃取液用盐水洗涤（40mL），用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将残余物预先吸附到硅胶上并通过Biotage Isolera100g SNAP快速柱层析（0-55%乙酸乙酯/庚烷）纯化得到标题化合物（131mg，12%）。LC-MS96%,2.09分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=359.85,360.85,361.90,362.85;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.12(br.s.,1H),6.68(br.s.,1H),3.89(s,3H),3.82(br.s.,1H),3.71(br.s.,1H),2.93-3.02(m,1H),2.89(s,3H),2.29(s,3H),2.03-2.18(m,4H),1.91-2.02(m,2H),1.71-1.83(m,2H)。
另一个异构体5-氯-2-甲基-3-(((1r,4r)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)苯甲酸甲酯同样被分离。
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（92mg，8%），LC-MS96%,2.06分钟(3.5分钟LC-MS法),m/z=359.85, 360.90,361.90,362.85;1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.11(br.s,1H),6.68(br.s.,1H),3.89(s,3H),3.62(br.s.,1H),3.27-3.36(m,1H),2.84-2.95(m,4H),2.32-2.42(m,4H),2.24(br.s.,3H),1.72-1.85(m,2H),1.27-1.35(m,2H)。
从进一步的NMR实验得到顺式和反式的分配是不能实现的，分配是任意的。
步骤3：合成5-氯-3-(乙基((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯
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向搅拌后的5-氯-2-甲基-3-(((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)苯甲酸甲酯（246mg，0.68mmol）的无水1,2-二氯乙烷（6.0mL）溶液中依次加入乙醛（115μl，2.1mmol）和醋酸（235μl，4.1mmol）。反应搅拌35分钟后，在50分钟内向反应混合物分批加入三乙酰基硼氢化钠（435mg，2.1mmol），反应搅拌过夜，加乙醛（115μl，2.1mmol）。反应混合物搅拌1小时后，在1小时内分批加三乙酰基硼氢化钠（435mg，2.1mmol），反应混合物搅拌过夜。加乙醛（229μl，4.1mmol），反应混合物搅拌2.5小时后，在1.5小时内再分批加三乙酰基硼氢化钠（869mg，4.1mmol），继续搅拌过夜。加入乙醛（229μl，4.1mmol），同时加入1,2-二氯乙烷(4.0mL）以帮助溶解，所得反应混合物搅拌4小时。在2小时内分批加入三乙酰基硼氢化钠（869mg，4.1mmol），继续搅拌整个周末。加入乙醛（229μl，4.1mmol），所得反应混合物搅拌1.5小时后，在1小时内等量分批地加入三乙酰基硼氢化钠（869mg，4.1mmol），同时加入1,2-二氯乙烷（5.0mL），继续搅拌过夜。加入乙醛（382μl，6.8mmol），所得反应混合物搅拌2.5小时后，在4小时内等量分批地加入三乙酰基硼氢化钠（1.4g，6.8mmol），同时加入1,2-二氯乙烷（10mL），继续搅拌过夜。反应混合物用水（40mL）稀释，逐渐加固体NaHCO3(5.79g）中和至pH值为8。两相分离，水层用CH2Cl2（3x25mL）萃取。合并的有机相用盐水洗涤（20mL），干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。将剩余产物预先吸附在硅胶上，通过Biotage Isolera10g SNAP柱层析（0-50%EtOAc/庚烷）纯 化，得到无色玻璃状固体状的题述化合物（140mg，51%）。LC-MS97%,2.29分钟(3分钟LC-MS法),m/z=387.95,388.95,389.90,390.95.1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.59(d,J=1.89Hz,1H),7.21(d,J=1.89Hz,1H),3.91(s,3H),3.45(br.s.,1H),3.01(m,2H),2.86-2.95(m,1H),2.82(s,3H),2.52(s,3H),2.08(br.s.,2H),1.94(br.s.,2H),1.86(br.s.,2H),1.46-1.54(m,2H),0.89(t,J=7.01Hz,3H)。
步骤4：合成5-氯-3-(乙基((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸
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向搅拌后的5-氯-3-(乙基((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯（140mg，0.36mmol）的THF（5.0mL）和MeOH（0.3mL）溶液中加入4MNaOH（2.7mL）溶液。所得溶液在50℃搅拌21小时，然后再加入4M NaOH（0.9ml，3.6mmol）并继续加热4小时。之后，将反应混合物冷却到室温，然后真空浓缩。所得剩余的水溶液用CH2Cl2（20mL）和乙醚（20mL）萃取。用1M HCl(aq)（13mL）将水相的pH值调至3-4，并用乙酸乙酯萃取（3x25mL）。合并的乙酸乙酯萃取液用MgSO4干燥，过滤并真空浓缩，得到淡黄色固体状的标题化合物（122mg，产率为80%）。LC-MS89%,4.03分钟(7分钟LC-MS法),m/z=373.95,374.90,375.95,377.00.1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm7.77(d,J=1.89Hz,1H),3.47(br.s.,1H),3.03(br.s.,2H)2.88-2.97(m,1H),2.84(s,3H),2.60(s,3H),2.12(br.s,2H),1.96(br.s,2H),1.88(br.s.,2H),1.55(br.s.,2H),0.91(t,J=7.01Hz,3H)。1个ArH被认为掩盖在CDCl3峰中，并且也看不到CO2H峰。
步骤5：合成5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
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在0℃和氮气气球下，向搅拌后的5-氯-3-(乙基((1s,4s)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酸（90%,122mg，0.29mmol）的无水DMF（2.0mL）溶液中逐滴加入HATU（134mg，0.35mmol）和DIPEA（102μl，0.59mmol）。所得溶液搅拌10分钟后，向其加入3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮（89%，60mg，0.35mmol）。所得悬浮液在0℃搅拌15分钟，然后在室温下搅拌整个周末。将反应混合物在水（10mL）和CH2Cl2（10mL）之间分配。两相分离，水相用CH2Cl2萃取（3x15mL）。合并的有机相依次用NaHCO3(aq)（10mL）饱和溶液、水（40mL）和盐水（2x25mL）洗涤，干燥（MgSO4），过滤并真空浓缩。残余物通过Biotage Isolera10g SNAP柱层析（0-9%MeOH/CH2Cl2）纯化，得到灰白色固体状的标题化合物（120mg，产率为76%）。LC-MS:95%,3.71分钟(7分钟LC-MS法),m/z=508.10,509.10,510.10,511.10.1H NMR(500MHz,CDCl3)δ10.84(s,1H),7.07(s,2H),7.00(m,1H),6.10(s,1H),4.53(d,J=5.8Hz,2H),3.45(s,1H),3.07–2.95(m,2H),2.93–2.85(m,1H),2.81(s,3H),2.45(s,3H),2.31(s,3H),2.29(s,3H),2.14–2.01(m,2H),1.97-1.89(m,2H),1.87-1.80(m,2H),1.50(br s,2H),0.88(t,J=5.9Hz,3H)。
化合物417：5-氯-N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基((1r,4r)-4-(甲基磺酰基)环己基)氨基)-2-甲基苯甲酰胺
通过以制备化合物416类似的方法采用在步骤2中得到的其他异构体来制备该化合物。
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化合物392：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸（原料粗品,580mg，1.68mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮盐酸盐（477mg，2.53mmol）的DMSO（6mL）溶液中加入PYBOP（1.57g，3.02mmol）和hunig碱（650mg，5.04mmol）。反应混合物在23℃搅拌20小时。用水淬灭反应，收集产生的沉淀物。所得固体通过硅胶柱层析（NH-SiO2乙酸乙酯/MeOH=25/1）纯化，得到白色无定形的标题化合物（386mg，产率为48%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.31(s,1H),7.27(s,1H),7.18(t,J=5.7Hz,1H),5.95(s,1H),4.55(d,J=5.9Hz,2H),3.17(dq,J=6.4,3.3Hz,2H),3.08(q,J=7.0Hz,2H),2.81(m,2H),2.70(m,1H),2.40(s,3H),2.33(s,3H),2.23(s,3H),2.21(s,3H),1.78-1.93(m,2H),1.70(m,2H),0.84(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)[M+H]479.2,[M+Na]501.3;HPLC纯度为96.8%。
化合物393：3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸（原料粗品,680mg，1.97mmol）和3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-1,2-二氢吡啶-2-酮盐酸盐（642mg，2.96mmol）的DMSO（7mL）溶液中加入PYBOP（1.85g，3.55mmol）和hunig碱（764mg，5.91mmol）。反应混合物在23℃搅拌20小时。用水淬灭反应，收集产生的沉淀物。所得固体通过硅胶柱层析（NH-SiO2乙酸乙酯/MeOH=20/1）纯化，得到白色固体状的标题化合物（224mg，产率为22%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.31(s,1H),7.26(s,1H),7.16(m,1H),5.94(s,1H),4.55(d,J=5.9Hz,2H),3.08(q,J=7.0Hz,2H),2.82(m,2H),2.66-2.73(m,3H),2.33(s,3H),2.24(s x2,6H),1.79-1.98(m,2H),1.67-1.75(m,4H),1.59-1.66(m,2H),1.02(t,J=7.2Hz,3H),0.84(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)[M-H]505.2;HPLC纯度为98.1%。
化合物394：3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(丙-2-基)-1,2-二氢吡啶-3-基]甲基}-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸（原料粗品,～0.313mmol）和3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(丙-2-基)-1,2-二氢吡啶-2-酮盐酸盐（88.0mg，0.407mmol）的DMSO（2.4mL）溶液中加入PYBOP（244mg，0.470mmol）和hunig碱（164μl,0.939mmol）。反应混合物在室温下搅拌16小时。用水淬灭反应，用乙酸乙酯稀释。水层用二氯甲烷萃取。合并的有机层用 盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱层析（NH-SiO2乙酸乙酯/MeOH=20/1+5%三乙胺）纯化。将化合物粗品溶解于DMSO中，用水稀释。收集沉淀的固体，用乙酸乙酯/TBME/己烷研磨，得到白色固体状的标题化合物（80.0mg，产率为51%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.31(s,1H),7.26(s,1H),7.03-7.10(m,1H),6.04(s,1H),4.59(d,J=6.0Hz,2H),3.49-3.55(m,1H),3.09(q,J=6.8Hz,2H),2.81-2.84(m,2H),2.70-2.78(m,1H),2.32(s,3H),2.26(s,3H),2.24(s,3H),1.86-1.89(m,2H),1.68-1.71(m,4H),1.22(d,J=6.4Hz,6H),0.84(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)[M+H]507.2,[M+Na]529.2;HPLC纯度为97.7%。
化合物395：3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基]甲基}-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸（原料粗品,～0.313mmol）和3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-2-酮盐酸盐（100mg，0.91mmol）的DMSO（2.4mL）溶液中加入PYBOP（248mg，1.05mmol）和hunig碱（166ul,2.10mmol）。反应混合物在室温下搅拌16小时。用水淬灭反应，收集产生的沉淀物。所得固体在乙酸乙酯/己烷中研磨。所得固体通过硅胶柱层析（NH-SiO2乙酸乙酯/MeOH=10/1+10%三乙胺）纯化。将化合物粗品在乙酸乙酯/己烷中研磨并干燥，得到白色固体状的标题化合物（75.0mg，产率为44%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.32(s,1H),7.26(s,1H),6.86-6.89(m,1H),6.34(s,1H),4.73(d,J=6.4Hz,2H),3.08(q,J=7.2Hz,2H),2.80-2.85(m,2H),2.70-2.78(m,1H),2.37(s,3H),2.35(s,3H),2.24(s,3H),1.85-1.89(m,2H),1.69-1.72(m,4H),0.84(t,J=7.2Hz,3H);MS(ES)[M+H]533.1,[M+Na]555.2;HPLC纯度为95.8%。
化合物395：3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-2-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二甲酸盐
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.39(s,2H),7.48(s,1H),7.36(s,1H),6.36(s,1H),4.52(s,2H),3.38(br,2H),3.18(br,m,1H),3.11(q,J=7.2Hz,2H),2.96(br,m,2H),2.77(s,3H),2.35(s,3H),2.31(s,3H),1.97(br,d,J=12.0Hz,2H),1.83(br,m,2H),0.84(t,J=7.2Hz,3H);MS(ES)(M+H)=533.53。
根据与上述3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基]甲基}-5-(三氟甲基)苯甲酰胺相同的制备方法，用相应的羧酸和胺制备下面的类似物，并通过反相HPLC（包含0.1%的甲酸的ACN-H2O）纯化。
化合物396：3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟-6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺甲酸盐
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.31(s,1H),7.49(s,1H),7.34(s,1H),4.45(s,2H),3.39(br,2H),3.17(br,1H),3.10(q,J=7.2Hz,2H),2.97(br,m,2H),2.77(s,3H),2.74(br,m,2H),2.33(s,3H),2.22(d,J=2.8Hz,3H),1.97(br,m,2H),1.85(br,m,2H),1.60(m,2H),1.02(t,J=7.2Hz,3H),0.84(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+H)=525.58。
化合物397：3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺甲酸盐
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LCMS ES+(M+1)=525.58.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.31(s,1H),7.50(s,1H),7.34(s,1H),4.49(s,2H),3.48(m,1H),3.39(br,2H),3.18(br,m,1H),3.09(q,J=6.8Hz,2H),2.97(br,m,2H),2.78(s,3H),2.34(s,3H),2.21(d,J=3.2Hz,3H),1.96(br,d,J=12.0Hz,2H),1.86(br,m,2H),1.32(dd,J=1.6Hz,J=7.2Hz,6H),0.84(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+H)=525.58。
化合物398：3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺甲酸盐
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.29(s,1H),7.49(s,1H),7.35(s,1H),4.45(s,2H),3.39(br,2H),3.19(br,1H),3.09(q,J=7.2Hz,2H),2.97(br,m,2H),2.77(s,3H),2.34(d,J=2.4Hz,3H),2.33(s,3H),2.22(d,J=3.2Hz,3H),1.97(br,m,2H),1.86(br,m,2H),0.84(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+H)=497.51。
化合物399：3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二甲酸盐
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.32(s,2H),7.50(s,1H),7.34(s,1H),4.59(s,2H),3.40(br,2H),3.18(br,m,2H),3.09(q,J=6.8,2H),2.96(br,m,2H),2.78(s,3H),2.35(s,3H),2.29(d,J=3.2Hz,3H),1.98(br,d,J=13.2Hz,2H),1.86(m,1H),1.80(br,m,2H),0.84(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+H)=551.53。
化合物399：3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二甲酸盐
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采用上述5-氟代-4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈的方法将6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈氟化。产物分离为6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈（起始原料)与5-氟代-6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈为3:1的混合物。对于5-氟代-6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈，LCMS E-S(M+H)=221.2。将该腈类混合物采用上述制备3-(氨基甲基)-5-氟代-4-异丙基-6-甲基吡啶-2(1H)-酮的还原条件还原。氟化化合物LCMS(ES)(M+H)显示225.2，非氟化的类似物的LCMS(ES)(M+H)显示为207.2。用没有进一步纯化的胺的混合物粗品进行随后的偶联反应。3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺二甲酸盐;1HNMR(400MHz,CD3OD)δppm8.32(s,2H),7.50(s,1H),7.34(s,1H),4.59(s,2H),3.40(br,2H),3.18(br,m,1H), 3.09(q,J=6.8,2H),2.96(br,m,2H),2.78(s,3H),2.35(s,3H),2.29(d,J=3.2Hz,3H),1.98(br,d,J=13.2Hz,2H),1.80(br,m,2H),0.84(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+H)551.5。
化合物400：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-{乙基[1-(丙-2-基)哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-{乙基[1-(丙烷-2-基)哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸（原料粗品,510mg，0.569mmol）和3-(氨基甲基)-4,6-二甲基-1,2-二氢吡啶-2-酮盐酸盐（161mg，0.854mmol）的DMSO（2mL）溶液中加入PYBOP（534mg，1.02mmol）和hunig碱（220mg，1.71mmol）。反应混合物在23℃搅拌20小时。用水淬灭反应，收集产生的沉淀物。所得固体通过硅胶柱层析（NH-SiO2乙酸乙酯/MeOH=20/1）纯化，得到白色固体状的标题化合物（129mg，产率为44%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.30(s,1H),7.26(s,1H),7.22(t,J=5.9Hz,1H),5.95(s,1H),4.54(d,J=5.9Hz,2H),3.16(m,2H),3.08(q,J=7.0Hz,2H),2.85(m,2H),2.62-2.74(m,1H),2.38(s,3H),2.33(s,3H),2.19(s,3H),2.00-2.09(m,1H),1.81(m,2H),1.58-1.76(m,2H),0.99(s x2,6H),0.83(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)[M+H]507.2,[M+Na]529.3;HPLC纯度为97.2%。
化合物401：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-{[(2R*,6R*)-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-{[(2R,6R)-1-苄基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺（267mg，0.459mmol）的MeOH（5mL溶液中)加入Pd/C（250mg）。反应混合物在室温和氢气气氛中搅拌2小时。将反应混合物过滤，滤液真空浓缩。残余物通过硅胶柱层析（1.Nagara Science Co.,Ltd.生产的NAM-300H硅胶，乙酸乙酯/MeOH=4/1～乙酸乙酯/MeOH/三乙胺=1/1/0.01，2.NH-SiO2,庚烷/乙酸乙酯=30/1～8/1）纯化，得到白色固体状的标题化合物（127mg，产率为56%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.30(s,1H),7.26(s,1H),7.14(t,J=6.1Hz,1H),5.94(s,1H),4.54(dd,J=5.9,1.6Hz,2H),3.41-3.49(m,1H),3.01-3.13(m,3H),2.85-2.92(m,1H),2.40(s,3H),2.32(s,3H),2.22(s,3H),1.63-1.80(m,4H),1.13(d,J=7.0Hz,3H),1.02(d,J=6.2Hz,3H),0.83(t,J=7.0Hz,3H);LC-MS:m/z[M+H]493.1,[M+Na]515.3;HPLC;纯度为97.2%。
化合物402：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-{[(2R*,4R*,6S*)-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺
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向搅拌后的3-{[(2R,4R,6S)-1-苄基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺（35.6mg，0.0611mmol）的MeOH（3.0mL）溶液中加入Pd/C（120mg）。反应混合物在室温和氢气气氛中搅拌30分钟。用氮气置换后，将反应混合物过滤，滤液真空浓缩。残余物通过两次制备TLC(TLC硅胶60F254,MERCK,MeOH/Et3N=100/1）纯化，得到白色固体状的标题化合物（4.4mg，产率为15%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.33(s,1H),7.30(s,1H),7.18(m,1H),5.96(s,1H),4.54(d,J=6.0Hz,2H),3.73(m,1H),3.26-2.69(m,4H),2.40(s,3H),2.38(s,3H),2.23(s, 3H),1.90-1.10(m,4H),1.10-0.86(m,6H),0.83(t,J=7.2Hz,3H)。(-2H);LC-MS:m/z[M+H]493.2,[M+Na]515.3;HPLC;纯度为88.8%。
化合物403：3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-5-(三氟甲基)苯甲酰胺甲酸盐
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.33(s,1H),7.37(s,1H),7.26(s,1H),6.11(s,1H),4.46(s,2H),4.42(br,m,1H),4.21(br,2H),3.82(br,2H),3.00(q,J=6.8Hz,2H),2.88(s,3H),2.65(m,2H),2.40(s,3H),2.22(s,3H),1.61(m,2H),0.99(t,J=7.2Hz,3H),0.86(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+1)480.53。
化合物404：3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-N-((4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺甲酸盐
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.31(s,1H),7.37(s,1H),7.27(s,1H),6.21(s,1H),4.50(s,2H),4.41(br,1H0,4.21(br,2H),3.81(br,2H),3.38(m,1H),3.00(q,J=6.8Hz,2H),2.87(s,3H),2.40(s,3H),2.24(s,3H),1.20(d,J=6.4Hz,6H),0.86(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+1)479.54。
化合物405：N-((4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺甲酸盐
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1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm8.32(s,1H),7.39(s,1H),7.26(s,1H),6.08(s,1H),4.44(s,2H),4.41(br,m,1H),4.21(br,2H),3.82(br,2H),3.00(q,J=6.8Hz,2H),2.88(s,3H),2.39(s,3H),2.34(d,J=1.2Hz,3H),2.21(s,3H),0.86(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)(M+1)451.49。
化合物406：5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-[(6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]苯甲酰胺
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向搅拌后的5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸（原料粗品,1.80g，3.26mmol）和3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-1,2-二氢吡啶-2-酮盐酸盐（916mg，4.24mmol）的DMSO（10mL）溶液中加入PYBOP（3.10g，5.87mmol）和hunig碱（1.20g，9.78mmol）。在反应混合物在23℃搅拌16小时。用水淬灭反应，收集产生的沉淀物。所得固体通过硅胶柱层析（NH-SiO2乙酸乙酯/MeOH=10/1）纯化，得到白色固体状的标题化合物（264mg，产率为17%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.20(t,J=5.9Hz,1H),7.06(d,J=2.0Hz,1H),7.02(d,J=2.0Hz,1H),5.96(s,1H),4.54(d,J=5.9Hz,2H),3.02(q,J=7.0Hz,2H),2.81(m,2H),2.64-2.71(m,3H),2.21-2.27(s x3,9H),1.84-1.94(m,2H),1.55-1.65(m,6H),1.00(t,J=7.4Hz,3H),0.84(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)[M+H]473.1,[M+Na]495.3;HPLC纯度为94.7%。
化合物407：5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-3-基]甲基}苯甲酰胺
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向搅拌后的5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸（原料粗品,～0.7mmol）和3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-2-酮的盐酸盐（200mg，0.91mmol）的DMSO（5.3mL）溶液中加入PYBOP（550mg，1.05mmol）和hunig碱（366ul,2.10mmol）。反应混合物在23℃搅拌7小时。用水淬灭反应，收集生成的沉淀物。所得固体通过硅胶柱层析（NH-SiO2乙酸乙酯/MeOH=10/1+10%三乙胺）纯化。将化合物粗品在乙酸乙酯/己烷中研磨，干燥，得到白色固体状的标题化合物（166mg，产率为50%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.06(d,J=2.4Hz,1H),7.01-7.05(m,1H),7.00(d,J=2.4Hz,1H),6.04(s,1H),4.57(d,J=6.0Hz,2H),3.49-3.57(m,1H),3.02(q,J=6.8Hz,2H),2.80-2.84(m,2H),2.61-2.69(m,1H),2.29(s,3H),2.23(s,3H),2.23(s,3H),1.86-1.90(m,2H),1.66-1.70(m,4H),1.21(d,J=6.8Hz,6H),0.84(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)[M+Na]495.2;HPLC纯度为95.7%。
化合物408：5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基]甲基}苯甲酰胺
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向搅拌后的5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基苯甲酸（原料粗品,～0.7mmol）和3-(氨基甲基)-6-甲基-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-2-酮的盐酸盐（200mg，0.91mmol）的DMSO（5.3mL）溶液中加入PYBOP（550mg，1.05mmol） 和hunig碱（366ul,2.10mmol）。反应混合物在23℃搅拌7小时。反应用水淬灭，用乙酸乙酯稀释。水层用二氯甲烷萃取。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱层析（SiO2，乙酸乙酯/MeOH=10/1+5%三乙胺）纯化。所得化合物粗品用乙酸乙酯/己烷研磨并干燥，得到白色固体状的标题化合物（145mg，产率为42%）。1H-NMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.08(d,J=2.4Hz,1H),7.03(d,J=2.4Hz,1H),6.81-6.85(m,1H),6.35(s,1H),4.71(d,J=5.2Hz,2H),3.03(q,J=6.8Hz,2H),2.81-2.85(m,2H),2.68-2.72(m,1H),2.39(s,3H),2.27(s,3H),2.24(s,3H),1.88-1.94(m,2H),1.67-1.72(m,4H),0.85(t,J=6.8Hz,3H);MS(ES)[M+H]499.1,[M+Na]521.1;HPLC纯度为96.0%。
根据与上述5-氯-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-N-{[6-甲基-2-氧代-4-(三氟甲基)-1,2-二氢吡啶-3-基]甲基}苯甲酰胺相同的制备方法，用之前所述的相应的吡啶酮片段制备下列类似物，并通过反相HPLC/MS（ACN-H2O，包含0.1%甲酸）纯化。
化合物409：5-氯-3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺甲酸盐
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1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm8.45-8.25(br,1H),7.30(d,J=2.0Hz,1H),7.13(d,J=2.0Hz,1H),4.47(s,2H),3.50-3.38(br,2H),3.25-3.15(br,1H),3.08(q,J=7.0Hz,2H),3.06-2.98(br,2H),2.83(s,3H),2.38(d,J=2.0Hz,3H),2.27(s,3H),2.26(d,J=2.0Hz,3H),2.03(bd,J=14.75Hz,2H),1.90-1.77(br,2H),0.89(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)(M+H)463.50。
化合物410：5-氯-3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺甲酸盐
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1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm8.43-8.26(br,1H),7.30(d,J=2.0Hz,1H),7.12(d,J=2.0Hz,1H),4.47(s,2H),3.47-3.39(br,2H),3.23-3.15(br,1H),3.08(q,J=7.0Hz,2H),3.05-2.96(br,2H),2.82(s,3H),2.79(bd,J=8.2Hz,2H),2.28-2.26(br,6H),2.06-1.99(br,2H),1.93-1.82(br,2H),1.68-1.59(m,2H),1.06(t,J=7.5Hz,3H),0.89(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)(M+H)491.52。
化合物411：5-氯-3-(乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基)-N-((5-氟代-4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺甲酸盐
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1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm8.48-8.34(br,1H),7.35(d,J=2.0Hz,1H),7.16(d,J=2.0Hz,1H),4.57(s,2H),3.61-3.53(m,1H),3.52-3.44(br,2H),3.30-3.20(br,1H),3.13(q,J=7.0Hz,2H),3.10-3.01(br,2H),2.87(s,3H),2.33(s,3H),2.31(d,J=2.8Hz,3H),2.10-2.04(br,2H),1.98-1.87(br,2H),1.41(d,J=6.5Hz,6H),0.93(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)(M+H)491.51。
化合物412：5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺甲酸盐
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根据与从其相应的羧酸酯制备3-{乙基[1-(丙烷-2-基)哌啶-4-基]氨基}-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酸相同的制备方法，将5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基苯甲酸甲酯水解为5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基苯甲酸。将5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基苯甲酸的粗品与之前制备的3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-1,2-二氢吡啶-2-酮的盐酸盐偶联，其中3-(氨基甲基)-6-甲基-4-丙基-1,2-二氢吡啶-2-酮的盐酸盐根据所述制备N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-[乙基(1-甲基哌啶-4-基)氨基]-2-甲基-5-(三氟甲基)苯甲酰胺的方法制备。通过反相HPLC/MS(包含0.1%甲酸的CAN-H2O）纯化获得标题化合物。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm8.58-8.24(br,1H),7.15(d,J=2.0Hz,1H),7.08(d,J=2.0Hz,1H),6.14(s,1H),4.48(s,2H),4.41-4.34(m,1H),4.25(br,2H),3.85(br,2H),3.00(q,J=7.0Hz,2H),2.92(s,3H),2.72-2.66(m,2H),2.34(s,3H),2.26(s,3H),1.70-1.61(m,2H),1.04(t,J=7.2Hz,3H),0.91(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)(M+H)445.48。
化合物413:5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-N-((4-异丙基-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)-2-甲基苯甲酰胺甲酸盐
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采用与之前制备的化合物5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基-N-((6-甲基-2-氧代-4-丙基-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基)苯甲酰胺甲酸盐相同的制备方法，用5-氯-3-(乙基(1-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基)-2-甲基苯甲酸和3-(氨基甲 基)-6-甲基-4-(丙烷-2-基)-1,2-二氢吡啶-2-酮的盐酸盐制备标题化合物。通过反相HPLC/MS(包含0.1%甲酸的CAN-H2O）纯化后，得到标题化合物。1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm8.43-8.25(br,1H),7.15(d,J=2.0Hz,1H),7.08(d,J=2.0Hz,1H),6.25(s,1H),4.52(s,2H),4.40-4.34(m,1H),4.29-4.21(br,2H),3.90-3.79(br,2H),3.48-3.40(m,1H),3.00(q,J=7.0Hz,2H),2.92(s,3H),2.34(s,3H),2.28(s,3H),1.24(d,J=7.0Hz,6H),0.90(t,J=7.0Hz,3H)。MS(ES)(M+H)445.47。
化合物414：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-{[(2R,6R)-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的3-{[(2R,6R)-1-苄基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-5-氟代-2-甲基苯甲酰胺（378mg，0.709mmol）的MeOH（7mL）溶液中加入Pd/C（150mg）。反应混合物在23℃和氢气气氛中搅拌1小时。将反应混合物过滤，滤液真空浓缩，残余物通过硅胶柱层析（1.Nagara Science Co.,Ltd.生产的NAM-300H硅胶，乙酸乙酯/MeOH=4/1～乙酸乙酯/MeOH/三乙胺=1/1/0.01，2.NH-SiO2,庚烷/乙酸乙酯=30/1～8/1）纯化，得到白色固体状的标题化合物（235mg，产率为75%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.08(t,J=6.2Hz,1H),6.82(dd,J=10.7,2.5Hz,1H),6.75(dd,J=8.2,2.7Hz,1H),5.93(s,1H),4.51(d,J=6.2Hz,2H),3.40-3.48(m,1H),2.95-3.09(m,3H),2.83-2.92(m,1H),2.39(s,3H),2.22(s x2,6H),1.63-1.78(m,4H),1.13(d,J=7.0Hz,3H),1.02(d,J=6.2Hz,3H),0.84(t,J=7.0Hz,3H);MS(ES)[M+H]443.1,[M+Na]465.2;HPLC;纯度为99.3%。
化合物415：N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-3-{[(2R,4R,6S)-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-5-氟代-2-甲基苯甲酰胺
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向搅拌后的3-{[(2R,4R,6S)-1-苄基-2,6-二甲基哌啶-4-基](乙基)氨基}-N-[(4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-基)甲基]-5-氟代-2-甲基苯甲酰胺（50.1mg，0.0860mmol）的MeOH（2mL）溶液中加入Pd/C（100mg）。反应混合物在23℃和氢气气氛中搅拌3小时。用氮气净化后，将所得混合物过滤，滤液真空浓缩，残余物通过硅胶柱层析（Nagara Science Co.,Ltd.生产的NAM-300H硅胶，乙酸乙酯/MeOH=4/1～乙酸乙酯/MeOH/三乙胺=1/1/0.01）纯化。收集目标部分，并在真空中浓缩。残余物通过硅胶柱层析（NH-SiO2,乙酸乙酯/MeOH=30/1～20/1～8/1）纯化。收集目标部分并在真空中浓缩。残余物用制备TLC（TLC硅胶60F254,MERCK,MeOH/Et3N=100/1）纯化，得到白色固体状的标题化合物（17.2mg，产率为45%）。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm;7.10(m,1H),6.81(m,2H),5.91(s,1H),4.52(d,J=6.0Hz,2H),3.61(m,1H),3.23-2.73(m,4H),2.40(s,3H),2.28(s,3H),2.24(s,3H),1.64-1.05(m,4H),1.05-0.86(m,6H),0.82(t,J=7.2Hz,3H)。(-2H);LC-MS:m/z[M+H]443.2,[M+Na]465.3;HPLC;纯度为97.4%。
实施例45：合成化合物6、9、11-12、19、22、24、27、29、34-35、37-47、65-90、93-96、99-101、103、106-116、124、125、128-136、138-143、145-156、158-190、193-204、210、211、214-221、223-242、244-267、270-272、274、275、280、281、288、289、291-300、303-305、307、312、314、316-318、323-327、329-331、337、338、341-343、345、346、350-355、357-385、388、391和418
通过与在实施例1-44中描述的类似方法或者通过在一般方案中描述的反应方案来合成化合物6、9、11-12、19、22、24、27、29、34-35、37-47、65-90、93-96、99-101、103、106-116、124、125、128-136、138-143、145-156、158-190、193-204、210、211、214-221、223-242、244-267、270-272、274、275、280、281、288、289、291-300、303-305、307、312、314、316-318、323-327、329-331、337、338、341-343、345、346、350-355、357-385、388、391和418。
实施例46：生物试验方案和一般方法
野生型和突变型的PRC2酶的实验方案
一般材料。
从Sigma-Aldrich公司购买可能的最高纯度的S-腺苷甲硫氨酸（S-adenosylmethionine，SAM）、S-腺苷同型半胱氨酸（S-adenosylhomocyteine，SAH）、N-二甘氨酸（bicine）、KCl、吐温20（Tween20）、二甲基亚砜（DMSO）和牛皮胶（BSG）。二硫苏糖醇（dithiothreitol，DTT）购自EMD。3H-SAM购自American Radiolabeled Chemicals，其特异性活性为80Ci/mmol。384孔链霉亲和素闪光板（Flashplates）购自PerkinElmer。
底物
人体组蛋白H3氨基酸残基21-44的代表性肽是由21st Century Biochemicals公司用C端G（K-生物素）连接-亲和标签结构域和C端酰胺帽合成的，其要么包括未修饰过的赖氨酸27（H3K27me0）要么包括二甲基化的赖氨酸27（H3K27me2）。通过高效液相色谱（HPLC）将此肽纯化至95%以上的纯度，通过液相色谱-质谱联用（LC-MS）来确认。序列列出如下：
H3K27me0:ATKAARKSAPATGGVKKPHRYRPGGK(生物素)-酰胺(SEQID NO:1)
H3K27me2:ATKAARK(me2)SAPATGGVKKPHRYRPGGK(生物素)-酰胺(SEQ ID NO:2)
鸡红细胞寡聚核小体根据已确定的程序从鸡血中纯化。
重组PRC2酶
人类PRC2酶作为4-组分酶复合物纯化，其利用一种杆状病毒表达系统在草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda，sf9）细胞中共表达。表达的亚基为野生型EZH2（NM_004456）或从野生型EZH2构造产生的突变型EZH2Y641F、Y641N、Y641H、Y641S或Y641C、EED（NM_003797）、Suz12（NM_015355）和RbAp48（NM_005610）。EED亚基包含N端FLAG标签，其用于纯化来自于sf9细胞裂解物的整个4-组分复合物。通过SDS-PAGE和安捷伦生物分析仪（AgilentBioanalyzer）分析来确定复合物的纯度满足或超过95％。使用布拉德福德 （Bradford）法、以牛血清白蛋白（BSA）标准液作为对照来确定酶浓缩母液的浓度（通常为0.3-1.0mg/mL）。
对多肽底物的PRC2酶试验的一般程序
所有的试验均在由20mM的N-二甘氨酸（pH值=7.6）、0.5mM的DTT、0.005％的BSG和0.002％的吐温20构成的缓冲液中进行，缓冲液在使用当天制备。用配有384通道吸量管头的板伴侣（Platemate）2×3（Thermo公司）将在100％DMSO（1μL）中的化合物点到384孔聚丙烯V形底板（Greiner公司）中。作为最大信号对照，将二甲基亚砜（1μL）加入到列11、12、23、24，行A-H的孔中，作为最小信号对照，将SAH（PRC2的已知的产物和抑制剂）（1μL）加入到列11、12、23、24，行I-P的孔中。含有野生型PRC2酶和H3K27me0肽或是Y641的任意突变型酶和H3K27me2肽的混合物（40μL）通过Multidrop Combi分液器(Thermo公司)加入。在25℃下将化合物和PRC2一起孵育30分钟，然后加入包含非放射性和3H-SAM的混合物的混合物（10μL）以引发反应（最终体积=51μL）。在所有情况下，终浓度如下：野生型或突变型PRC2酶是4nM，SAH在最小信号对照孔中为1mM，DMSO浓度为1％。其余组分的终浓度显示于下表2中。通过加入非放射性的SAM（10μL）至终浓度为600μm来终止该试验，这样3H–SAM被稀释到不再检测到其并入肽底物的程度。然后将384孔聚丙烯板中的50μL的反应物转移到384孔闪光板中，将生物素化的肽结合到链亲和素表面至少1小时，之后在Biotek ELx405洗板机中用0.1％的吐温20洗涤三次。然后将板在PerkinElmer TopCount读板器上读数以测定结合到闪光板表面的3H-标记的肽的量，其是以每分钟衰变（dpm）或者被称为每分钟计数（cpm）来测量。表2：基于EZH2同一性的每一个试验变化（野生型或Y641突变的EZH2）的组分的终浓度
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对寡聚核小体底物的野生型PRC2酶试验的一般步骤
该试验是在由20mM的N-二甘氨酸（pH值=7.6）、0.5mM的DTT、0.005％的BSG、100mM的KCl和0.002％的吐温20组成的缓冲液中进行，其在使用当天制备。用配有384通道吸量管头的板伴侣2×3（Thermo公司）将在100％的DMSO（1μL）中的化合物点到384孔聚丙烯V形底板（Greiner公司）中。作为最大信号对照，将二甲基亚砜（1μL）加入到列11、12、23、24，行A-H的孔中，作为最小信号对照，将SAH（PRC2的已知的产物和抑制剂）（1μL）加入到列11、12、23、24，行I-P的孔中。将含有野生型PRC2酶和鸡红细胞寡聚核小体的混合物（40μL）通过Multidrop Combi分液器(Thermo公司)加入。将化合物和PRC2一起在25℃孵育30分钟，然后加入包含非放射性和3H-SAM的混合物的混合物（10μL）以引发反应（终体积=51μL）。终浓度如下：野生型PRC2酶是4nM，非放射性的SAM是430nM，3H-SAM为120nm，鸡红细胞寡聚核小体为120nm，SAH的最小信号对照孔为1mM，二甲基亚砜浓度为1％。通过加入非放射性的SAM（10μL）至终浓度为600μM来终止该反应，3H–SAM被稀释到不能再检测到其并入鸡红细胞寡聚核小体底物的程度。然后将384-孔聚丙烯板中的50μL的反应物转移到384孔闪光板，将鸡红细胞核小体固定至板表面，之后在BiotekELx405洗板机中用0.1％的吐温20洗涤三次。然后将板在PerkinElmer TopCount读板器上读数以测定结合到闪光板表面的3H标记的鸡红细胞寡聚核小体的量，其是以每分钟衰变（dpm）或者被称为每分钟计数（cpm）来测量。
%抑制率（inh）计算
%inh=100-(dpmcmpd-dpmmindpmmax-dpmmin)x100]]>
其中，dpm=每分钟衰变，cmpd=试验孔信号，min和max分别是最小和最大信号对照。
4参数IC50拟合
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其中，顶部和底部通常允许浮动，但也可以在3参数拟合中分别固定为100或0。Hill系数通常允许浮动，但也可以在3参数拟合中固定为1。Y为抑制率％，X是化合物浓度。
对肽底物（例如，EZH2野生型和Y641F）的PRC2酶试验的IC50值列于下表3中。
WSU-DLCL2甲基化试验
WSU-DLCL2悬浮细胞从DSMZ（德国微生物菌种保藏中心，Braunschweig，德国）购买。RPMI/Glutamax培养基、青霉素-链霉素、热灭活胎牛血清和D-PBS购自Life Technologies公司（Grand Island，纽约州，美国）。提取缓冲液和中和缓冲液（5X）购自Active Motif公司（Carlsbad，加利福尼亚州，美国）。兔抗组蛋白H3抗体购自Abcam公司（Cambridge，马萨诸塞州，美国）。兔抗H3K27me3和结合了HRP的抗兔IgG购自Cell Signaling Technology公司（Danvers，马萨诸塞州，美国）。TMB“超级敏感”底物来自BioFX实验室（Owings Mills，马里兰州，美国）。无IgG的牛血清白蛋白购自Jackson ImmunoResearch公司（WestGrove，宾夕法尼亚州，美国）。含Tween的PBS（10X PBST）从KPL公司（Gaithersburg，马里兰州，美国）购买。硫酸购自Ricca Chemical公司（Arlington，德克萨斯州，美国）。Immulon ELISA板购自Thermo公司（Rochester，纽约州，美国）。V形底细胞培养板购自Corning公司（Corning，纽约州，美国）。V形底聚丙烯板购自Greiner Bio-One公司（Monroe，北卡罗来纳州，美国）。
WSU-DLCL2悬浮细胞维持在生长培养基中（补充有10％v/v的热灭活的胎牛血清和100单位/mL的青霉素-链霉素的RPMI1640），在37℃、5％CO2中培养。根据试验条件，细胞在板振荡器上、在分析培养基中（补充有20％v/v的热灭活的胎牛血清和100单位/mL的青霉素-链霉素的RPMI1640）、在37℃、5％CO2中孵育。
WSU-DLCL2细胞在分析培养基中以每毫升50000个细胞的浓度向96孔V形底细胞培养板中以每孔200μL的量接种。将96孔源板的化合物（1μL）直接 加入到V形底细胞板中。将板在37℃、5％CO2下在滴度板摇床上孵育96小时。孵育四天后，将板以241×g转速离心五分钟，将培养基从细胞板的每个孔中轻轻地吸出，而不干扰细胞沉淀。将沉淀重悬于200μL的DPBS，然后将板再次以241×g转速离心五分钟。将上清液吸出，将冷（4℃）提取缓冲液（100μL）加入到每个孔中。在4℃下，将板在定轨摇床上孵育2小时。将平板以3427×g的转速离心10分钟。将上清液（每孔80μL）转移到其在96孔V形底聚丙烯板上的相应的孔中。把5×中和缓冲液（每孔20μL）加入到含有上清液V形底聚丙烯板中。含粗蛋白制剂（CHP）的V形底聚丙烯板在定轨摇床上孵育五分钟。将粗组蛋白制剂（每孔2μL）分别加入到包含100μL包被缓冲液（1×PBS+BSA0.05％w/v）的重复的96孔ELISA板的孔中。将平板密封并在4℃下孵育过夜。第二天，将板用每孔300μL的1×PBST洗涤三次。以每孔300μL ELISA稀释剂（（PBS（1×）的BSA（2％w/v）和吐温20（0.05％v/v））将孔阻断两小时。将板用1×PBST洗涤三次。对于组蛋白H3检测板，加入100μL/每孔的在ELISA稀释剂中以1:10000稀释的抗组蛋白H3抗体（Abcam公司，ab1791）。对于H3K27三甲基化检测板，加入100μL/每孔的在ELISA稀释剂中以1:2000稀释的抗H3K27me3。板在室温下孵育90分钟。用每孔300μL的1×PBST将板洗涤三次。对于组蛋白H3的检测，向每孔加入100μL的在ELISA稀释剂中以1:6000稀释的结合HRP的抗兔IgG抗体。对于H3K27me3的检测，向每孔加入100μL在ELISA稀释剂中以1:4000稀释的结合HRP的抗兔IgG抗体。将板在室温下孵育90分钟。用每孔300μl1×PBST将板洗涤四次。每孔中加入100μL的TMB底物。将组蛋白H3板在室温下孵育5分钟。将H3K27me3板在室温下孵育10分钟。用硫酸1N（每孔100μL）使反应停止。每个板的吸光度在450nm处读数。
首先，每个孔的比率通过下式确定：![]()
每个板包括八个只有DMSO处理的对照孔（最小抑制），以及八个作为最大抑制的对照孔（背景孔）。
计算每种对照类型的比值的平均值，将其用于确定板上每个测试孔的抑制百分数。从25μM开始，将测试化合物在DMSO中连续地三倍稀释，以获得一共十组测试浓度。确定抑制百分数，用每浓度的化合物的重复孔来产生IC50曲线。该试验的IC50值列于下表3。
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细胞增殖分析
WSU-DLCL2悬浮细胞从DSMZ（德国微生物菌种保藏中心，Braunschweig，德国）购买。RPMI/Glutamax培养基、青霉素-链霉素、热灭活胎牛血清购自LifeTechonologies公司（Grand Island，纽约州，美国）。V形底聚丙烯384孔板购自Greiner Bio-One公司（Monroe，北卡罗来纳州，美国）。细胞培养384孔白色不透明板购自Perkin Elmer公司（Waltham，马萨诸塞州，美国）。Cell-Titer![]()
购自Promega公司（Madison，威斯康星州，美国）。SpectraMax M5酶标仪器购自Molecular Devices LLC公司（Sunnyvale，加利福尼亚州，美国）。
WSU-DLCL2悬浮细胞维持在生长培养基（补充有10％v/v的热灭活的胎牛血清的RPMI1640）中，在37℃、5％CO2中培养。在试验条件下，细胞在分析培养基（补充有20％v/v的热灭活的胎牛血清和100units/mL的青霉素-链霉素的RPMI1640）中、在37℃、5％CO2中孵育。
为了评估化合物对WSU-DLCL2细胞系的增殖的效果，将指数生长的细胞在最终体积为50μl的分析培养基中以1250个细胞/ml的密度接种于384孔白色不透明板中。通过在DMSO中从10mM（在试验中化合物的最高终浓度为20μM，DMSO为0.2％）开始进行一式三份的九点的连续3倍稀释来制备化合物源板。将来自于化合物储存板的100nL的等分加入到细胞板中其各自的孔中。100％抑制对照由终浓度为200nM的十字孢碱处理的细胞组成，0％抑制对照由用DMSO处理的细胞组成。加入化合物后，将分析板于37℃、5％CO2、相对湿度>90％的条件下孵育6天。向细胞板加入35μl的Cell Titer![]()
试剂，通过存在于细胞培养物中ATP的量化来测量细胞的存活率。在Spectramax M5中读取发光值。抑制50％细胞存活率的浓度通过使用的标准化的剂量响应曲线的4参数拟合来确定。该试验的IC50值也列于下表3中。
表3
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实施例47：最低细胞毒性浓度（Lowest Cytotoxic Concentration，LCC）的偏差
已经确认，细胞增殖通过细胞分裂发生，细胞分裂导致相对于分裂之前细胞的数量分裂后细胞的数量增加一倍。在固定的环境条件（例如，pH、离子强度、温度、细胞密度、蛋白质和生长因子的培养基含量等）下，细胞将根据下面的方程、通过连续的倍增（即分裂）来增殖，条件是有足够的营养物和其他必需的因子可用。
Nt=N0×2ttD---(A.1)]]>
其中，Nt是观察期开始后在时间点(t)的细胞数量，N0是观察期开始时的细胞数量，t是观察期开始后的时间，tD是细胞倍增所需的时间间隔，也称作倍增时间。方程A.1可以被转换成以e为底数的指数方程的更方便的形式，其利用等式0.693=ln(2)。
Nt=N0e0.693ttD---(A.2)]]>
如下所示，细胞增殖的速率常数(kp)与倍增时间呈倒数相关
kp=0.693tD---(A.3).]]>
合并方程A.2和A.3得到
Nt=N0ekpt---(A.4).]]>
因此，根据方程A.4细胞数预计在被称为对数生长期的细胞生长的初期随时间指数性地增加（图1A）。指数方程，如方程A.4，可以通过对两边取自然对数来进行线性化处理
ln(Nt)=ln(N0)+kpt (A.5)
因此，作为时间函数的ln(Nt)的图预计产生上升的直线，其斜率等于kp，y轴截距等于ln(N0)，如图1B所示。
环境条件的变化可以导致细胞增殖速率的变化，细胞增殖速率的变化可通过增殖速率常数kp的变化来量化。可能会导致增殖速率的变化的条件有在观察期的开始（即在t=0）时向系统引入抗增殖化合物。当抗增殖化合物对细胞增殖有立即的影响时，期望作为时间函数的ln(Nt)的图会继续在所有化合物浓度下呈线性，随着化合物浓度的增加kp值递减。
根据抗增殖作用的机理基础，一些化合物可能不会立即造成增殖速率的变化。相反，在化合物的作用实现前可能会有一段潜伏时间。在这些情况下，作为时间的函数的ln(Nt)曲线图呈现出两个阶段，化合物的作用开始的时间点可以作为两个阶段之间的拐点被确定（图2）。不管化合物对增殖的作用是即时的或是在潜伏期后开始的，在各化合物浓度下的增殖的速率常数最好由ln(Nt)对从化合物的作用开始的时间点到该实验的观察期的结束的时间图的斜率来定义。
用于生长细胞的化合物可能会以两种普遍方式之一来影响所观察的增殖：通过抑制进一步的细胞分裂（细胞生长抑制）或通过杀死细胞（细胞毒性）。如果化合物是抑制细胞生长的，那么增加化合物的浓度会降低kp值直到没有进一步的细胞分裂。这时，细胞生长的速率、从而kp的值将会是0。另一方面,如果该化合物是细胞毒性的，那么kp的值将会由两个速率常数组成：在化合物存在下连续的细胞生长的速率常数(kg)和细胞被化合物杀死的速率常数(kd)。因此在化合物的固定浓度下增殖的总速率常数将是这些相反的速率常数的绝对值的差。
kp=|kg|-|kd| (A.6)
在细胞生长速率超过杀死细胞速率的化合物浓度下，kp值将会是正值（即kp>0）。在细胞生长速率小于杀死细胞速率时的化合物浓度下,kp值将会是负值（即kp<0），并且细胞数量将随着时间的推移减少，其表明很强的细胞毒性。当kg与kd恰好相等时，那么总增殖速率常数kp的值将会是0。因此我们可以将最低细胞毒性浓度(LCC)定义为导致kp值等于0的化合物浓度，由于大于该浓度的任何浓度将导致明显的可观察到的细胞毒性。注意：在LCC以下的浓度有可能发生细胞杀死，但发生在小于剩余的细胞增殖速率的速率。这里的处理不是为了限定 化合物作用的生物学细节。相反，这里的目标是仅限定一个实际参数，其用来客观量化细胞杀死速率超过新细胞生长速率时的化合物浓度。事实上，LCC表示拐点或临界浓度，高于此浓度时可以观察到明显的细胞毒性，而非表示细胞毒性浓度本身。就这一点而言，LCC可以被看作类似于其他物理拐点的指标，如临界胶束浓度(CMC)，其被用于定义脂质、清洁剂或其他表面活性剂种类的浓度，在此浓度以上的所有分子并入胶束结构中。
传统上，抗增殖化合物对细胞生长的作用最常被IC50值量化，其被定义为将细胞增殖速率降低到在化合物不存在（即载剂或溶剂对照样品；图2）时观察的速率的一半时的化合物浓度。但是IC50不能使研究者区分开细胞抑制化合物和细胞毒性化合物。相反，LCC很容易使人能做出这样的区分，并进一步量化在转变为很强的细胞毒性行为发生时的浓度。
如果将观察时间期限限定为作用开始（如在上文和在图2中所定义的）到实验结束之间，那么当为作为时间的函数的ln(Nt)作图时（见上文），数据通常与线性方程较好地拟合。在该类型的拟合中，kp值可以在所测试化合物的各个浓度下确定。作为化合物浓度([I])的函数的kp值的重新画图将有一个下降的等温线的形式，在[I]=0时有最大值kmax（通过载剂或溶剂对照样品定义），在无限大的化合物浓度时有最小值kmin（图3）。
kp=(kmax-kmin)1+[I]Imid+kmin---(A.7)]]>
其中，Imid为产生在kmax和kmin之间的中间值的kp值的化合物的浓度（注意Imid值与IC50值并不一样，除了彻底且仅仅为抑制细胞生长的化合物的情况外）。因此，向方程A.7重新画图数据拟合提供了kmax、kmin和Imid的估值。如果化合物是抑制细胞生长的(如此处定义的)，kmin值不能小于零。对于细胞毒性化合物，kmin将小于零，kmin的绝对值与化合物在杀死细胞方面的效果直接相关。
来自方程A.7的拟合值也可以用于确定LCC值。按照定义，当[I]=LCC时，kp=0。因此，在这些条件下方程A.7变为
0=(kmax-kmin)1+LCCImid+kmin---(A.8).]]>
方程A.8的代数重排产生对于LCC的方程
LCC=Imid[(kmax-kmin-kmin)-1]---(A.9)]]>
用非线性曲线拟合软件实现该分析很简单，可以应用在整个药物发现和开发过程中的化合物活性的细胞分析。用这种方式，LCC可以提供对化合物SAR的评估的有价值的指标(构效关系)。
下表4提供本发明的某些化合物对WSU-DLCL2细胞的LCC和IC50数据。
表4
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实施例48：体内试验
小鼠
雌性Fox Chase![]()
小鼠（CB17/Icr-Prkdcscid/IcrIcoCrl,Charles RiverLaboratories公司）或胸腺缺失的裸鼠（Crl:NU(Ncr)-Foxn1nu,Charles RiverLaboratories公司）是8周大，在研究第一天（D1）体重（BW）范围为16.0–21.1g。以让其随意饮水(反向渗透1ppm Cl)、喂NIH31经修饰且具有辐射处理过的Lab![]()
（由18.0%的粗蛋白、5.0%粗脂肪和5.0%粗纤维组成）的方式来给动物喂食。此小鼠在静态微分离器中的辐射过的Enrich-o’cobsTM垫上经12小时光照周期、在20-22℃(68–72°F)和40-60%的湿度下饲养。在约束、饲养、手术治疗、饲料和 液体管理和医疗照顾方面的所有的程序符合Guide for Care and Use of LaboratoryAnimals的建议。
肿瘤细胞培养
人淋巴瘤细胞系从不同来源(ATCC,DSMZ)获得，在包含100units/mL的青霉素G钠盐、100g/mL的链霉素和25g/mL的庆大霉素的RPMI-1640培养基中作为悬浮培养液的Piedmont中维持细胞系。所述培养基补充有10%的胎牛血清和2mM的谷氨酰胺。细胞在加湿的培养器中的组织培养瓶中、在37℃、5%CO2和95%空气的气氛中培养。
体内肿瘤移植
收获在对数生长中期阶段的人淋巴瘤细胞系，重悬于含50%MatrigelTM（BDBiosciences公司）的PBS中。每只小鼠在右侧经皮下地接受1x107个细胞（0.2mL细胞悬浮液）。随着肿瘤的平均体积接近所需的80–120mm3的范围时，在两个维度来测量肿瘤以监控其增长。肿瘤大小（以mm3为单位）通过下式计算：
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其中w为肿瘤的宽度，l为肿瘤的长度，以mm为单位。肿瘤重量可以基于以下假设估算出来：1mg等同于肿瘤体积的1mm3。10-30天（根据所用的细胞系）后，长有108–126mm3大小的肿瘤的小鼠被分选到平均肿瘤体积为117–119mm3的八组中。
供试品
测试化合物在室温下避光保存。在每一个治疗日，通过将粉末悬浮于含0.5%的羧甲基纤维素钠(NaCMC)和0.1%的![]()
80的去离子水中来制备新鲜的化合物制剂。EM10载剂（在去离子水中0.5%的NaCMC和0.1%的![]()
80）以相同的时间表用于处理对照组。给药之前制剂在4℃避光保存。
处理计划
以范围为1–1000mg/kg的化合物剂量和各种天数的TID(每日三次，每8小时一次)、BID（每日两次，每12小时一次）或QD（每日一次）的时间表，通过口 腔喂食或通过静脉内、腹膜内或皮下途径注射来处理小鼠。每一种剂量以0.2mL/20g小鼠（10mL/kg）的体积输送，根据最后记录的动物个体的重量进行调节。最大治疗时间长度为28天。
中值肿瘤体积(MTV)和肿瘤生长抑制(TGI)分析
疗效在处理的最后一天确定。为各组确定MTV(n)，即此动物数量n的中值肿瘤体积，n可在最后一天被评估。肿瘤生长抑制百分数(%TGI)可以以几种方式定义。首先，指定对照组的MTV(n)和药物处理组的MTV(n)之间的差值被表达为对照组的MTV(n)的百分比：
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计算%TGI的另外一种方法是考虑从第1天到第n天肿瘤大小的变化，n为处理的最后一天。
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肿瘤生长延迟分析
可选地，为了肿瘤生长延迟分析，使小鼠在最后治疗日之后继续存活。肿瘤用测径器每周测量两次，当其瘤达到2000mm3的终点体积时或在预先规定的研究的最后一天对每只试验用动物实施安乐死，无论哪一个先到。每只小鼠的到终点的时间(TTE)从下面的方程计算：
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其中，b是截距，m是通过肿瘤生长数据集的对数变换的线性回归获得的线的斜率。所述数据集由对超过研究终点体积的首次观察和三个连续的对直接领先达到的终点体积的观察组成。没有达到终点体积的动物被分配的TTE值等于研究的最后 一天（预先规定的）。任何被分类为处理相关(TR)死亡的动物被分配的TTE值等于死亡日。任何被分类为非处理相关(NTR)死亡的动物从TTE计算和所有进一步的分析中排除。
处理效果从肿瘤生长延迟(TGD)来确定，肿瘤生长延迟被定义为处理组与对照组相比的中值TTE的增加：
TGD＝T－C
以天数或对照组的中值TTE的百分比表示：
%TGD=T-CC×100]]>
其中：
T=处理组中值TTE
C=对照组中值TTE
毒性
在第1–5天每天为动物称重，之后每周两次为动物称重直到研究结束。针对任何不利的、治疗相关的副作用的明显迹象对小鼠进行频繁地检查，并记录下来。对最大耐受剂量(maximum tolerated dose，MTD)的可接受的毒性定义为在试验期间由于TR死亡造成的、少于20%、不多于10%的死亡率的组均体重损失。如果死亡归因于由临床症状和/或尸体剖检证明的处理副作用，或由于在给药期间的不明原因，那么死亡被归类为TR。如果有证据表明死亡与处理副作用无关，那么死亡被归类为NTR。给药间隔期间的NTR死亡通常将归类为NTRa（由于意外或人为失误）或NTRm（由于尸体剖检确认的肿瘤通过入侵和/或转移散播）。当群组表现不支持TR分类且尸体解剖以排除给药剂量错误不可行时，在给药期间死于不明原因的口服处理的动物可以分为NTRu。
采样
在研究期的数天以预先规定的方式对小鼠采样。取样包括在未麻醉条件下从下颌静脉采非末端血(0.25mL)和在CO2麻醉条件下经末端心脏穿刺进行全血采集。对血液样本用K2-EDTA作为阻凝剂进行处理以获得血浆。在进行化合物水平的生物分析之前，将血浆样品在-80℃下冷冻和保存。
在无RNA酶的条件下从指定的小鼠收获肿瘤，并将其分为两份。将来自于每个肿瘤的一半的2mm厚度的切片用福尔马林固定24h，转移到70%的乙醇中。固定的肿瘤组织嵌入石蜡。将来自于每只动物的剩下的肿瘤组织在液氮中快速冷冻，用研钵和研杵研磨成粉末。
对特定的小鼠进行取样以获得替代组织，所述取代组织包括脾脏、皮肤、骨髓和腮须。将每个组织分离并固定和/或快速冷冻。
统计和图形分析
用Windows系统Prism3.03（GraphPad）软件进行全部的统计和图形分析。采用了几种分析方法。中值D29肿瘤体积用克鲁斯卡尔-沃利斯（Kruskal-Wallis）检验和事后Dunn多项比较检验（post hoc Dunn’s multiple comparison test）相比较。将这些检验进行三次。
在P=0.05时进行双尾统计分析。Prism以在P>0.05时为非显著的(ns)，在0.01<P<0.05时为显著的(用符号“*”表示)，在0.001<P<0.01时为非常显著的(“**”)，在P<0.001时极其显著的(“***”)来报告结果。
为了检验在整个处理期间对照组和处理组之间的统计显著性，采用重复测量方差分析（ANOVA）检验，然后再Dunnets多重比较效果检验或两因素方差分析检验。
为了以图形表示，构建“盒须图”（“box and whiskers”）以显示每组的个体肿瘤体积的分布。盒代表观察值的25%至75%，水平线对应中值，须线表明最大和最小值。中值或平均的(±SEM)肿瘤体积用作为时间函数的半对数图或线性图表示。在研究期间的组平均BW变化被绘制为从D1开始的变化百分数，±SEM。
通过组构建散点图以显示TTE值。TTE图包括从所有的其它图形分析中排除的NTR死亡。当动物由于肿瘤大小退出研究时，为动物记录的最终肿瘤体积包括在用于在随后的时间点计算中值体积的数据中。在研究中每组剩余的动物百分比对时间呈现在Kaplan-Meier存活图中。
组蛋白提取
为了组蛋白的分离，将60-90mg的肿瘤组织在1.5ml的核提取缓冲液（10mMTris-HCl，10mM MgCl2，25mM KCl，1%Triton X-100，8.6%蔗糖，加上Roche 蛋白酶抑制剂片剂1836145）中匀浆，在冰上孵育5分钟。细胞核通过在4℃、600g的转速下离心5分钟收集，在PBS中洗涤一次。去除上清液，提取组蛋白一小时（每15分钟用0.4N冷硫酸震荡一次）。通过在4℃、10000g的转速下离心10分钟来净化提取物，转移到包括10倍体积的冰冷丙酮的新鲜的微量离心管中。在-20℃下组蛋白沉淀2小时-过夜，通过在10000g的转速下离心10分钟来获得沉淀并重悬于水。
蛋白质印迹（Western Blot）分析
酸提取的组蛋白的蛋白质浓度通过BCA法(Pierce)测定。400-800ng的每种溶解物在10-20%的三甘氨酸凝胶(Biorad公司)分离，用iBlot(在程序3上7分钟，硝酸纤维素转移膜)转移，用下列Odyssey封闭液中的抗体探测：兔抗H3K27me3（CST9733；1:20000稀释）和鼠抗总H3（CST3638；1:20000稀释）。一抗孵育后，膜用IRDye800CW驴抗鼠IgG(LiCOR#926-32212)和Alexa Fluor680羊抗兔IgG(Invitrogen公司#A-21076)二抗进行探测，然后利用LiCOR Odyssey系统成像。
酶联免疫吸附测定（ELISA）
组蛋白在包被缓冲液（PBS+0.05%BSA）中以相同的浓度制备，得到了0.5ng/μl的样品，将100μl的样品或标准物成对地加入到两个96孔ELISA板（ThermoLabsystems公司，Immulon4HBX#3885）中。将板密封，在4℃孵育过夜。第二天，在Bio Tek洗板机中将板用300μl/孔的PBST（PBS+0.05%吐温20；10×PBST，KPL#51-14-02）洗涤3次。将板中反应用300μl/孔的稀释剂（PBS+2%BSA+0.05%吐温20）阻断，在室温下孵育2小时，用PBST洗涤3次。所有的抗体在稀释剂中稀释。将100μl/孔的抗H3K27me3（CST#9733，50%甘油母液1:1000）或抗总H3（Abcam ab1791，50%甘油1:10000）加入到每个板中。在室温下将板孵育90分钟，用PBST洗涤3次。将100μl/孔的抗Rb-IgG-HRP（Cell Signaling Technology公司，7074）以1:2000加入到H3K27Me3板中，以1:6000加入到H3板中，并在室温下孵育90分钟。用PBST洗涤板4次。为了检测，加入100μl/孔的TMB底物（BioFx Laboratories，#TMBS），将板在黑暗、室温下孵育5分钟。用100μl/孔的1N H2SO4终止反应。在SpectaMax M5酶标仪上读取在450nm处的吸光度
化合物222的体内试验结果在图4和图5中显示。图4显示具有WSU-DLCL2异种移植肿瘤的小鼠用化合物222处理27天后的肿瘤生长。在全部的3种剂量（100mg/kg(b.i.d.，27天)、200mg/kg(b.i.d.，27天)和400mg/kg（400mg/kg b.i.d.7天，0mg/kg7天和300mg/kg b.i.d.，13天））中观察到肿瘤生长抑制。图5显示在WSU-DLCL2肿瘤中对全局H3K27me3甲基化，所述肿瘤来自于用化合物222或载剂处理27天的小鼠。该图显示每一剂量组的H3K27Me3标记的减少。
引用结合
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等同
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