《油茶籽壳原花青素的制备方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《油茶籽壳原花青素的制备方法.pdf（10页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、10申请公布号CN104083534A43申请公布日20141008CN104083534A21申请号201410347223522申请日20140721A61K36/82200601A61K31/353200601C07D311/6220060171申请人湖南农业大学地址410128湖南省长沙市芙蓉区湖南农业大学72发明人陆英刘仲华谭斌林海燕庄凌74专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人裴娜54发明名称油茶籽壳原花青素的制备方法57摘要本发明涉及植物产品提取加工技术领域，具体来说是一种油茶籽壳原花青素的制备方法，包括粉碎、提取、过滤，浓缩、浓度调整、上样、洗脱、浓缩干燥。
2、后得原花青素；本发明方法能从油茶籽壳中提取原花青素，所需时间短，提取物纯度高，所用试剂均为乙醇，具有操作简单、成本低的特点，可广泛运用于油茶籽壳中原花青素的提取分离。51INTCL权利要求书1页说明书8页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书8页10申请公布号CN104083534ACN104083534A1/1页21油茶籽壳原花青素的制备方法，其特征在于，步骤为取油茶籽壳粉碎，加入油茶籽壳510倍重量的质量浓度为5060的乙醇，90条件下连续提取两次，过滤，合并滤液，55真空条件下浓缩回收乙醇，得油茶籽壳原花青素提取液，加入适量的水调整提取液浓度，使其中原花青素。
3、含量为112168MG/ML，以23BV/H的流速通过装有AB8大孔吸附树脂的层析柱，上样液体积37BV，上样完毕后关闭层析柱活塞，静置05H，然后打开活塞，用6BV的蒸馏水通过层析柱至流出水为无色后，再用质量浓度为1060的乙醇洗脱，洗脱液在55真空条件下浓缩干燥后得原花青素。2根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取时间为6090MIN。3根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述洗脱时，乙醇溶液的流速为23BV/H。权利要求书CN104083534A1/8页3油茶籽壳原花青素的制备方法技术领域0001本发明涉及植物产品提取加工技术领域，具体来说是一种油茶籽壳原花青素的制备方法。背景。
4、技术0002原花青素有非常强的抗氧化和清除自由基的性能，具有保护心血管和预防高血压、抗炎、抗诱变、抗溃疡、抗肿瘤、抑制微生物活性、促进毛发生长、调节免疫活性等作用，是一种高效、低毒的天然活性物质，广泛分布于自然界中。虽然原花青素的需求量日益增大，但目前国际市场上流行的相关产品来源较单一，以葡萄籽、松树皮为主。有一些文章报道过对其它材料的研究，但可能由于含量太低或其他原因，大多数没有利用性开发与生产。0003油茶广泛分布在我国华中、华南、华东、西南等地，随着我国农业结构调整和国家退耕还林工程的实施，油茶以其经济、防护兼用林的突出产品优势、经济优势和比较优势，成为我国发展最快和最具发展潜力的木本油。
5、料之一。长期以来油茶种子主要用于茶油的制取，而油茶籽壳的利用率较低。本研究以油茶籽壳为原料，提取纯化其中的原花青素，一方面开辟新的原花青素来源，另一方面可充分利用油茶的资源提高油茶籽壳的利用价值，增加附加值，具有重要现实意义。发明内容0004本发明的目的是上述存在的问题，提供一种油茶籽壳原花青素的制备方法，该方法可快速地从油茶籽壳提取原花青素。0005为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种油茶籽壳原花青素的制备方法，步骤为取油茶籽壳粉碎，加入油茶籽壳510倍重量的质量浓度为5060的乙醇，90条件下连续提取两次，过滤，合并滤液，55真空条件下浓缩回收乙醇，得油茶籽壳原花青素提取液，加入适量。
6、的水调整提取液浓度，使其中原花青素含量为112168MG/ML，以23BV/H的流速通过装有AB8大孔吸附树脂的层析柱，上样液体积37BV，上样完毕后关闭层析柱活塞，静置05H，然后打开活塞，用6BV的蒸馏水通过层析柱至流出水为无色后，再用质量浓度为1060的乙醇洗脱，洗脱液在55真空条件下浓缩干燥后得原花青素。0006进一步的，所述提取时间为6090MIN。0007进一步的，所述洗脱时，乙醇溶液的流速为23BV/H。0008本发明中，利用乙醇洗脱时，分别用3BV的质量浓度为10，30、40的乙醇以23BV/H依次洗脱层析柱，并分别收集，将质量浓度为30乙醇洗脱注液在55真空浓缩后干燥，干粉中。
7、原花青素含量大于90；将质量浓度为10、40乙醇洗脱液合并在55真空浓缩后干燥，干粉中原花青素含量大于50；0009或用35BV的质量浓度为60乙醇以23BV/H的流速洗脱层析柱，洗脱液在55真空浓缩后干燥，干粉中原花青素含量大于50。说明书CN104083534A2/8页40010本发明的有益技术效果是本发明方法能从油茶籽壳中提取原花青素，所需时间短，提取物纯度高，所用试剂均为乙醇，具有操作简单、成本低的特点，可广泛运用于油茶籽壳中原花青素的提取分离。具体实施方式0011实施例10012油茶籽壳原花青素的制备方法，取油茶籽壳粉碎，加入油茶籽壳5倍重量的质量浓度为50的乙醇，90条件下连续提取。
8、两次，过滤，提取时间为60MIN，合并提取的滤液，用旋转蒸发仪郑州长城科工贸有限公司在55条件下真空浓缩回收乙醇，得油茶籽壳原花青素提取液，加入适量水调整提取液浓度，使其中原花青素含量为112MG/ML，以2BV/H的流速通过装有AB8大孔吸附树脂的层析柱，上样液体积3BV，上样完毕后关闭层析柱活塞，静置05H，然后打开活塞，用6BV的蒸馏水通过层析柱至流出水为无色后，再依次用3BV质量浓度为10、40的乙醇分别洗脱，流速为2BV/H，将两种浓度的洗脱液合并在55真空条件下浓缩干燥，干粉中原花青素含量大于50。0013实施例20014油茶籽壳原花青素的制备方法，取油茶籽壳粉碎，加入油茶籽壳7倍。
9、重量的质量浓度为55的乙醇，在90条件下连续提取两次，过滤，提取时间为75MIN，合并提取的滤液，用旋转蒸发仪郑州长城科工贸有限公司在55条件下真空浓缩回收乙醇，得油茶籽壳原花青素提取液，加入适量水调整提取液浓度，使其中原花青素含量为144MG/ML，以3BV/H的流速通过装有AB8大孔吸附树脂的层析柱，上样液体积5BV，上样完毕后关闭层析柱活塞，静置05H，然后打开活塞，用6BV的蒸馏水通过层析柱至流出水为无色后，再用5BV质量浓度为60的乙醇洗脱，速度为3BV/H，洗脱液在55真空条件下浓缩干燥，干粉中原花青素含量大于50。0015实施例30016油茶籽壳原花青素的制备方法，取油茶籽壳粉碎。
10、，加入油茶籽壳10倍重量的质量浓度为60的乙醇，在90条件下连续提取两次，过滤，提取时间为90MIN，合并提取的滤液，用旋转蒸发仪郑州长城科工贸有限公司在55条件下真空浓缩回收乙醇，得油茶籽壳原花青素提取液，加入适量水调整提取液浓度，使其中原花青素含量为168MG/ML，以3BV/H的流速通过装有AB8大孔吸附树脂的层析柱，上样液体积5BV，上样完毕后关闭层析柱活塞，静置05H，然后打开活塞，用6BV的蒸馏水通过层析柱至流出水为无色后，再依次用3BV质量浓度为30的乙醇洗脱，洗脱速度为3BV/H，将质量浓度为30乙醇洗脱液在55真空条件下浓缩干燥，干粉中原花青素含量大于90。0017实施例40。
11、0181、油茶籽壳原花青素的检测方法0019采用香草醛盐酸法配制浓度为10MG/ML原花青素标准品溶液，分别取0、O1、02、03、04、05、06、07、08、09ML，加60乙醇至10ML，加入60ML4香草醛甲醇溶液和30ML的浓盐酸，摇匀，避光，在30恒温水浴中保持30MIN,取出后在510NM波长下测其吸光值，吸光值与原花青素含量进行线性回归处理，线性回归方程Y1007X00138，R209999说明书CN104083534A3/8页50020取样品溶液10ML与标样同法显色，根据标准曲线计算样品中原花青素含量。00212、正交试验确定油茶籽壳原花青素提取工艺0022根据原花青素在醇。
12、水中溶解度较大的特性，选择四个有关因素进行提取实验，提取次数为两次。因素为温度A，时间B，料液比C，醇浓度D，设计因素见表1，结果见表2，方差分析见表3，表明A3B3C2D2，即温度为90，时间为90MIN，料液比为110，醇度为60时提取效果最佳。方差结果分析表明，在实验设计水平中四因素只有温度具有显著性差异，其他因素无显著性差异，因此，工业上为减少操作时间及后续浓缩消耗，提取工艺实际操作条件可以为温度为90，时间为6090MIN，料液比为15110，醇浓度5060，提取2次。0023表1因素表00240025表2正交实验表00260027表3方差分析表说明书CN104083534A4/8页。
13、6002800293大孔吸附树脂纯化工艺00301大孔吸附树脂上样原料液制备0031按上述提取工艺提取并浓缩回收乙醇，即得茶籽壳原花青素原料液，临用前加适量水至所需浓度。00322树脂的筛选0033将预处理好的6种大孔吸附树脂AB8、NKA2、NKA9、ASD21、D101、聚酰胺去表面水后，各精密量取10G，放置于具塞磨口锥形瓶中，分别加入1000ML质量浓度为1386MG/ML的茶籽壳原料液，在摇床中振荡24H，待吸附饱和，过滤，测定滤液中原花青素浓度。吸附饱和的树脂再各用100ML70乙醇解吸24H，待解吸完全后，测定解吸液中原花青素浓度，计算树脂的吸附量和解吸率。结果见表4。从表可见N。
14、KA2与聚酰胺虽然吸附量大，但解吸率较低。AB8树脂吸附量与解吸率均较好，因此，综合考虑选择AB8树脂作为后续纯化树脂。0034表46种种大孔吸附树脂的吸附量与解吸003500363上样条件的确定0037PH值对吸附量的影响0038按原料液制备方法，得到原花青素浓度为2254MG/MLPH值为44的浓缩液，取4份各50ML，用浓HCI和NAOH分别调节PH值为24、34、44、54、64，然后将所得溶液加入到一系列10G已去表面水的AB8树脂中，在摇床中震荡吸附24H，测定吸附后溶液中原花青素含量，计算树脂的吸附量。从表4可见，原料液PH值对树脂吸附量影响较小，浓缩液的说明书CN1040835。
15、34A5/8页7PH值在44左右，因此上样液浓缩后不需调整PH值。0039表5不同PH值对吸附量的影响00400041料液浓度对吸附量的影响0042取浓度为168MG/ML的原料液分成5份，每份100ML，分别用蒸馏水将料液浓度稀释成为168、112、084、067、056MG/ML，加入装有50ML的AB8树脂层析柱中，流速3BV/H,计算树脂对原花青素的吸附量。由表可见，随着料液浓度的增大，树脂的吸附量先增加后减少，在浓度为112168MG/ML时吸附率较大。0043表6不同料液浓度对吸附量的影响00440045上柱流速对吸附的影响0046取原花青素浓度为148MG/ML的原料液5份，每份。
16、350ML，分别按2、3、4、5、6BV/H的流量通过装柱体积为50ML的树脂柱，检测流出液中的原花青素含量，计算树脂的吸附量。结果见表7。上柱流速过快，原花青素类化合物没有被树脂充分吸附，影响吸附量，上柱流速慢，原花青素类物质可以充分吸收，但在工业化生产中则会影响生产效率，综合考虑树脂的吸附性能及工作效率，确定吸附流速以2BV/H3BV/H为宜。0047表7不同上柱流速对吸附量的影响0048说明书CN104083534A6/8页80049上样体积的确定0050取10份体积分别为110BV原花青素浓度为1628MG/ML的原料液以3BV/H分别通过装柱体积为50ML的树脂柱。由表8可见，随着上。
17、样体积的增大，泄漏量增大，吸附率下降，上样体积为37BV时较好。0051表8不同上样体积的吸附效果0052005300544洗脱方法一0055取154MG/ML的原料液以3BV/H的流速通过装有300ML树脂的层析柱，上样量6BV，上样完后用蒸馏水洗至洗脱液无色。依次用10、20、30、40、50、60、70乙醇水溶液以3BV/H进行洗脱，每个梯度洗脱3BV，分别收集洗脱液。由表9可知，油茶籽壳原说明书CN104083534A7/8页9花青素主要集中在20、30、40乙醇洗脱液中，其中20、30乙醇洗脱液中原花青素含量均大于90，60乙醇与70乙醇洗脱效果差异不大。0056表9不同浓度乙醇洗脱。
18、效果00570058注干物质质量为三个平行样所计算的平均值0059验证实验0060取150G油茶籽壳原料按提取工艺制备为浓度为156MG/ML的原料液3000ML，加入装有500MLAB8大孔吸附树脂的层析柱中，流速3BV/H,上样完后静置05H，用蒸馏水洗至洗脱液无色，然后依次用10、30、40的乙醇水溶液进行洗脱，每个梯度洗脱3BV。分别收集每个梯度的洗脱液并浓缩、冷冻干燥，测定原花青素含量,获得含量大于90和大于50两种产品，制率分别为104、105。0061表10不同浓度乙醇洗脱效果006200635洗脱方法二60乙醇等度洗脱0064取150G油茶籽壳原料按提取工艺制备为浓度为156M。
19、G/ML的原料液3000ML，加入装有500MLAB8大孔吸附树脂的层析柱中，流速3BV/H,上样完后静置05H后，用蒸馏水洗至洗脱液无色，然后用60乙醇水溶液以3BV/H的流速进行洗脱，每段接收100ML。测定每段洗脱液的吸光度、浓度，每段取样测定干物质质量和原花青素含量，由表8可见，用3BV的说明书CN104083534A8/8页1060乙醇等度洗脱液干物质中原花青素含量为556,制率438。0065表11分步接收洗脱液的干物质质量、原花青素纯度006600670068以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。说明书CN104083534A10。