《维生素B12用于制备预防和/或治疗术后认知功能障碍药物的应用.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维生素B12用于制备预防和/或治疗术后认知功能障碍药物的应用.pdf（8页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810600765.7 (22)申请日 2018.06.12 (71)申请人 中国人民解放军第四军医大学 地址 710032 陕西省西安市长乐西路169号 (72)发明人 熊利泽 超广超 邓姣 (74)专利代理机构 西安恒泰知识产权代理事务 所 61216 代理人 史玫 (51)Int.Cl. A61K 31/714(2006.01) A61K 31/519(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 25/00(2006.01) (54)发明名称 。
2、维生素B12用于制备预防和/或治疗术后认 知功能障碍药物的应用 (57)摘要 本发明涉及维生素B12、 叶酸用于制备防治 术后认知功能障碍药物的应用。 利用维生素B12、 叶酸合剂作为预防POCD药物时， 可以预防并减轻 患者术后早期及远期的认知功能损害症状， 加速 POCD患者术后认知功能恢复。 权利要求书1页 说明书4页 附图2页 CN 108992458 A 2018.12.14 CN 108992458 A 1.维生素B12用于制备预防和/或治疗术后认知功能障碍药物的应用。 2.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述维生素B12被维生素B12衍生物或维生素 B12药学上可接受的盐。
3、替换。 3.如权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述维生素B12的日给药剂量大于5倍的常规 标准化饮食补充维生素的剂量。 4.维生素B12叶酸合剂用于预防或/和治疗术后认知功能障碍药物的应用。 5.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述维生素B12的日给药剂量大于5倍的常规 标准化补充饮食维生素补充剂量， 所述叶酸的日给药剂量大于5倍的常规标准化补充饮食 叶酸补充剂量。 6.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述维生素B12的日给药剂量为12 g2mg， 所述叶酸的日给药剂量为2mg20mg。 7.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述维生素B12被维生素B12衍生物或维。
4、生素 B12药学上可接受的盐替换。 8.如权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述叶酸被叶酸药学上可接受的盐替换。 9.一种治疗POCD的药物， 其特征在于， 该药物由维生素B12和叶酸制成。 10.如权利要求9所述的治疗POCD的药物， 其特征在于， 所述药物剂型为注射剂、 片剂、 胶囊、 分散剂、 速崩剂型、 泡腾片剂型、 软膏剂型、 凝胶剂型或透皮缓释剂剂型。 11.如权利要求9所述的治疗POCD的药物， 其特征在于， 所述维生素B12被维生素B12衍 生物或维生素B12药学上可接受的盐替换。 12.如权利要求9所述的治疗POCD的药物， 其特征在于， 所述叶酸被叶酸药学上可接受 的盐。
5、替换。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108992458 A 2 维生素B12用于制备预防和/或治疗术后认知功能障碍药物的 应用 技术领域 0001 本发明涉及维生素B12及其衍生物(Vitamin B12,VB12)用于制备预防或/和治疗 术后认知功能障碍药物的应用。 背景技术 0002 术后认知功能障碍(Postoperative cognitive dysfunction,POCD)， 是患者在手 术后出现的严重的长期并发症之一， 主要表现为记忆力、 抽象思维等障碍， 同时伴有社会活 动能力的减退。 在接受高风险手术患者， 尤其是老年、 骨科或心脏外科手术患者群体中， POC。
6、D的发病率可高达53， 少数患者(约1)症状可延续至术后1-2年。 同时， POCD也会引起 其他类型并发症的发生率升高， 手术后1年的死亡率也更高。 尤其是目前我国已有2.3亿的 老年人口， 老龄化问题日益加剧， 老年POCD已成为亟待解决的临床难题。 发明内容 0003 发明人研究发现维生素B12参与体内如甲基化等多种代谢反应， 进一步意外发现 维生素B12叶酸合剂二者相互协同参与体内如甲基化等多种代谢反应， 对血管性痴呆等中 枢神经系统和认知类疾病具有明确的保护作用， 尤其对老年群体具有预防和治疗POCD的效 果。 0004 基于上述发现本发明提供了： 0005 (1)维生素B12用于制。
7、备预防和/或治疗术后认知功能障碍药物的应用。 0006 所述维生素B12被维生素B12衍生物或维生素B12药学上可接受的盐替换。 0007 所述维生素B12的日给药剂量大于5倍的常规标准化饮食补充维生素的剂量。 0008 (2)维生素B12叶酸合剂用于预防或/和治疗术后认知功能障碍药物的应用。 0009 所述维生素B12的日给药剂量大于5倍的常规标准化补充饮食维生素补充剂量， 优 选12 g2mg， 所述叶酸的日给药剂量大于5倍的常规标准化补充饮食维生素补充剂量， 优 选2mg10mg。 0010 所述维生素B12被维生素B12衍生物或维生素B12药学上可接受的盐替换。 0011 所述叶酸被叶。
8、酸药学上可接受的盐替换。 0012 (3)一种治疗POCD的药物， 其特征在于， 该药物由维生素B12和叶酸制成。 0013 所述药物剂型包括注射、 片剂、 胶囊、 分散剂、 速崩剂型、 泡腾片、 软膏、 凝胶或透皮 缓释剂剂型等。 0014 所述维生素B12被维生素B12衍生物或维生素B12药学上可接受的盐替换。 0015 所述叶酸被叶酸药学上可接受的盐替换。 0016 利用本发明的方案， 尤其是维生素B12叶酸合剂作为预防POCD的药物时， 可以预防 并减轻患者术后早期及远期的认知功能损害症状， 加速POCD患者术后认知功能恢复。 说 明 书 1/4 页 3 CN 108992458 A 。
9、3 附图说明 0017 图1为老年小鼠与青年小鼠接受POCD造模前后的行为学及血清学变化。 首先对比 生理状态下青老年小鼠血清维生素B12和叶酸含量差别(图1A， 1B)， 结果显示老年小鼠血清 维生素B12含量显著低于青年小鼠， 血清叶酸含量差别不显著。 然后对比青年及老年小鼠术 后14天新物体识别(图1C)， 情景恐惧记忆(图1D)， 空间记忆(图1E)， 结果显示老年小鼠术后 POCD症状明显， 青年小鼠术后不易发生POCD。 血清学直方图中的所有数据采用 mean SEM， *P0.05； 行为学直方图中的所有数据采用meanSD， *P0.05。 0018 图2为维生素B12和叶酸对。
10、老年小鼠POCD的影响； 首先观察术前2周开始直至术后 口服补充5倍剂量维生素后老年小鼠的血清维生素B12和叶酸含量变化(图2A， 2B)， 结果显 示术后4天小鼠血清维生素B12和叶酸含量均显著下降， 后逐渐恢复， 而术前补充维生素B12 与叶酸组小鼠虽然有同样的变化趋势， 但在补充后整个围手术期的血清维生素B12水平显 著高于对照数量组， 而血清叶酸水平两者没有明显差异。 然后观察老年小鼠持续使用维生 素B12叶酸合剂补充鼠粮或对照鼠粮2周后实施手术的认知功能行为学表现， 分别为： 术后 14天小鼠新物体识别行为轨迹图及表现统计(图2C)； 情景恐惧记忆刺激反应与记忆能力 (图2D)； 空。
11、间参考的学习能力及记忆能力(图2E)， *P0.05； *P0.01， 直方图中的所有数据 采用meanSEM。 图2A、 图2B和图2C显示， 术前2周开始持续补充维生素B12和叶酸可有效改 善老年小鼠POCD症状。 0019 图3为维生素B12和叶酸对老年小鼠认知功能的影响； 对比维生素B12与叶酸合剂， 和单独补充维生素B12 或叶酸对老年小鼠POCD预防作用的差异， 采用不同补充策略干预2 周后， 对比老年小鼠术后新物体识别、 情景恐惧、 空间记忆认知行为表现差异； 图3A、 图3B、 图3C分别表示术后14天不同处理组老年小鼠新物体识别能力、 情景恐惧记忆能力、 空间参 考学习记忆能。
12、力三种认知功能表现(control对照组； FA单独叶酸补充组； VB12 单独维生素 B12补充组； FA+VB12复合补充维生素B12和叶酸组)。 结果显示单独补充维生素B12或叶酸 时， 仅对巴恩斯迷宫空间记忆能力有改善， 而补充合剂还可以对恐惧记忆以及新物体识别 能力有显著改善作用。 具体实施方式 0020 本发明所述的 “维生素B12常规标准化补充饮食维生素补充剂量” 可根据相关标准 或饮食建议确定。 目前常见的标准补充计量是： 14岁及以上成人： 每天2.4微克， 孕妇2.6微 克， 哺乳2.8微克， 治疗剂量为500微克， 3/ 日1。 本发明所述的 “常规标准化补充饮食叶酸 补。
13、充剂量” 可根据相关标准或饮食建议确定。 目前常见的标准补充计量是每日14岁及以上 成人， 400微克， 孕妇600微克， 哺乳500微克。 0021 本发明的维生素B12是指临床和食品中所用的维生素B12， 维生素B12又名钴胺素， 在体内有多种活性形式， 本发明的维生素B12衍生物包括甲钴胺、 氰钴胺、 腺苷钴胺、 羟钴胺 等。 0022 本发明的维生素B12叶酸合剂是指维生素B12和叶酸混合物。 0023 本发明所述的术后认知功能障碍包括术后辨别力、 定向力、 执行力、 注意力、 语言 能力和学习记忆功能。 说 明 书 2/4 页 4 CN 108992458 A 4 0024 以下本发。
14、明具体实施例用材料与方法： 0025 1.所使用的动物， 均购自常州卡文斯实验动物有限公司， 为健康SPF的级C57BL/6 (C57)雄性小鼠。 老年小鼠为2022月， 体重在3540g之间。 0026 2.ELISA检测血清维生素B12、 叶酸含量 0027 老年小鼠腹腔探查手术实施后4天、 8天、 15天、 29天后所采集的动脉血血清样本用 Elisa方法进行维生素B12、 叶酸的含量测定。 0028 维生素B12检测： 在酶标板上反应， 标准品和样品中的维生素B12与PNPP底物工作 液显色， 最后加终止液， 在450nm处测OD值， Vitamin B12浓度与OD值成正比， 可通过。
15、绘制标 准曲线求出标本中Vitamin B12浓度。 0029 叶酸的检测： 采用双抗体夹心ABC-ELISA法。 用抗小鼠叶酸单抗包被于酶标板上， 标准品和样品中的叶酸与单抗结合， 加入生物素化的抗小鼠叶酸， 形成免疫复合物连接在 板上， 辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合， 加入底物工作液显蓝色， 最后加 终止液硫酸， 在450nm处测OD值， 叶酸浓度与OD值成正比， 可通过绘制标准曲线求出标本中 叶酸浓度。 上述所有试剂均购自上海西唐生物科技有限公司。 0030 3.POCD模型 0031 给予手术小鼠2(氧流量1L/min)异氟醚吸入诱导麻醉， 待翻正反射消失后。
16、， 置于 加热板上， 并固定四肢。 异氟醚麻醉维持浓度为1.2-1.4(氧流量1L/min)。 清洁腹部皮肤， 消毒， 延腹正中线分层作纵向1.5-2cm切口， 分离左右腹直肌， 暴露小肠段。 用润湿的无菌纱 布保护切口， 并将5cm同一肠系膜动脉袢供血范围的小肠游离至腹部切口外， 并用润湿的无 菌纱布覆盖暴露肠段。 隔纱布搓捻肠段10min。 揉搓结束后， 还纳肠段， 分层缝合腹部切口， 消毒。 切口局部注射0.1ml 4罗哌卡因， 并涂抹利多卡因软膏。 手术全程控制在25-30min。 术后三天内每日在腹部切口处涂抹利多卡因软膏镇痛。 0032 4.行为学检测方法： 0033 4.1新物体。
17、识别： 0034 1)适应过程： 将实验小鼠放入空的行为箱中， 使其适应10min， 24h后训练； 2)训练 过程： 在行为箱中放入两个相同的物体， 将小鼠放入， 让其在箱内探索10min， 记录小鼠对每 个物体的探索时间； 3)测试过程： 小鼠训练完成2h后， 将行为箱中的其中一个物体换成新物 体， 让小鼠在箱内探索5min， 记录小鼠对新物体和旧物体的探索时间。 0035 4.2情景恐惧记忆： 0036 1)训练过程： 第一天将小鼠放在恐惧箱中使其适应环境。 第二天将小鼠放入相同 恐惧箱， 测试其基础运动状态120s， 记录Freezing时间， 然后给小鼠一个足部电击刺激(非 条件刺激。
18、， 持续2s， 0.7mA)进行恐惧情景训练， 共 5个循环； 2)测试过程： 于恐惧环境训练 24h后， 将小鼠放入相同恐惧箱， 记录其在一定时间内出现Freezing行为的时间、 次数， 计算 Freezing百分比。 0037 4.3巴恩斯迷宫： 0038 1)训练过程： 第1天将小鼠放在3.5L玻璃烧杯中， 置于巴恩斯迷宫中心， 打开白光 和白噪声， 使小鼠适应环境30s。 用烧杯缓慢地将小鼠引导到目标洞中， 让小鼠从目标洞独 自钻到逃脱笼中。 第2天将小鼠放置在不透光的圆柱罩内， 15s后打开蜂鸣器同时移走圆柱 罩， 让小鼠在迷宫中的探索3min。 期间， 若小鼠到达逃脱笼， 则使其。
19、在逃脱笼中待1min再放 说 明 书 3/4 页 5 CN 108992458 A 5 入存放笼； 若小鼠未到达逃脱笼， 则使用第一天的方法将其引导到逃脱笼中。 每只小鼠每轮 训练5-7min， 共计15轮(第1天3轮， 第2-4天每日4轮)； 2)测试过程： 于训练结束24h后， 将小 鼠放置在在不透光的圆柱罩内， 置于巴恩斯迷宫中心， 开启蜂鸣器， 移走圆柱罩， 让老鼠自 由地在迷宫中探索2min， 记录小鼠在每个象限中停留的时间及其探索孔洞的时间。 使用视 频跟踪软件(Anymaze 5.0， 美国， Stoeling公司)记录小鼠探索过程， 记录小鼠找到目标洞 的时间、 次数及进入错误。
20、洞的时间、 次数等。 0039 实施例1： 0040 该实施例维生素B12叶酸合剂补充方法： 0041 鼠粮： AIN93G标准化鼠粮(购自OpenSource DietsTM， 普通数量涵盖普通维生素包 Vitamin Mix10037， 包括维生素B12 25 g/kg， 叶酸2mg/kg)， 维生素B12叶酸合剂补充鼠粮 (购自OpenSource DietsTM， 使用5倍剂量补充维生素B12和叶酸维生素营养包， 包括维生素 B12 125 g/kg,叶酸10mg/kg)。 0042 对照组(control)持续喂养AIN93G标准化鼠粮及洁净水， 维生素B12叶酸合剂补充 组(Vit。
21、amin组)持续喂养维生素B12叶酸合剂补充鼠粮及洁净水， 于补充14天后实施POCD造 模。 0043 发明人用ELISA方法检测喂食标准化鼠粮的老年和青年小鼠血清维生素B12、 叶酸 含量， 对比显示老年小鼠血清维生素B12含量较青年小鼠下降约30(图1A)， 叶酸含量不变 (图1B)， 对比术后14天新物体识别、 情景恐惧记忆、 空间参考记忆能力， 老年小鼠认知行为 能力较青年小鼠受损显著(图1C、 1D和1E)。 0044 实施例2： 0045 该实施例含维生素B12及叶酸补充后的效果及对老年小鼠术后认知功能的影响。 0046 补充维生素B12和叶酸的老年小鼠整个围术期血清维生素B12。
22、水平显著高于对照 组(图2A)， 两组叶酸水平没有明显差异(图2B)。 0047 老年小鼠连续补充维生素B12和叶酸两周， 实施POCD造模， 术后14天认知能力较标 准化饮食组显著改善， 例如新物体识别能力(图2C)， 情景恐惧记忆能力(图2D)， 空间参考记 忆能力(图2E)表现显著提高。 0048 上述结果显示通过使用维生素B12及叶酸合剂， 可以有效改善老年群体POCD易感 状态， 预防POCD发生， 并加速术后认知功能恢复。 0049 实施例3： 0050 方法： 该实施例制备含有125 g/kg剂量单独补充VB12的鼠粮， 或正常对照鼠粮， 喂 食2周后行手术， 术后继续服用不同饮食， 直至检测认知行为， 对比单独补充VB12， 叶酸， 或 复合补充VB12+叶酸不同策略补充VB12 对防治POCD的效果差异。 结果如图3所示， 显示出术 前单独补充2周5倍生理剂量维生素B12或单独补充5倍生理剂量叶酸的小鼠， 其术后14天新 巴恩斯迷宫空间记忆能力(图2C)显著改善， 但对情景恐惧记忆(图2B) 及新物体识别能力 (图2A)没有改善作用。 说 明 书 4/4 页 6 CN 108992458 A 6 图1 图2 说 明 书 附 图 1/2 页 7 CN 108992458 A 7 图3 说 明 书 附 图 2/2 页 8 CN 108992458 A 8 。