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1、10申请公布号CN104127439A43申请公布日20141105CN104127439A21申请号201410335822522申请日20140716A61K35/30200601A23L1/312200601A23L1/29200601A61P3/0220060171申请人湖南利诺生物药业有限公司地址424400湖南省郴州市桂阳县工业园芙蓉项目区72发明人彭长福钏助胜耿华靖74专利代理机构郴州大天知识产权事务所普通合伙43212代理人徐起堂54发明名称天然复合氨基酸原料的制备方法及天然复合氨基酸原料57摘要本发明公开了一种天然复合氨基酸原料的制备方法，包括如下步骤A取冻存新鲜猪脑，解冻，。
2、清洗，匀浆，将浆液加入浓盐酸搅匀、然后离心分离，得沉淀脑蛋白；B将沉淀蛋白加入硫酸进行水解，调PH值为7585，过滤，得酸水解液；C将酸水解液加热，加活性炭，分离，收集上清液，调PH值为2545，得粗提液；D将粗提液上阳离子交换柱，调PH值为6575，用氨水洗脱，收集洗脱液，浓缩去氨水，调PH值为6575，20保存，得冷冻液；E将冷冻液自然解冻，离心分离，去除酪氨酸及相关杂质，收集上清液，将上清液超滤，收集过滤液，干燥，即得所需天然复合氨基酸原料。51INTCL权利要求书1页说明书5页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图1页10申请公布号CN10。
3、4127439ACN104127439A1/1页21一种天然复合氨基酸原料的制备方法，其特征在于包括如下步骤A取冻存新鲜猪脑，解冻，清洗，匀浆，将浆液加入浓盐酸搅匀、然后离心分离，去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白；B将经上述步骤得到的沉淀蛋白加入浓硫酸进行水解，过滤，得酸水解液；C将经上述步骤得到的酸水解液加热，加活性炭，分离，收集上清液，调PH值为2545，得粗提液；D将经上述步骤得到的粗提液上阳离子交换柱，调PH值为6575，用氨水洗脱，收集洗脱液，浓缩去氨水，调PH值为6575，20保存，得冷冻液；E将经上述步骤所得冷冻液自然解冻，离心分离，去除酪氨酸及相关杂质，收集上清液，将。
4、上清液超滤，收集过滤液，干燥，即得所需天然复合氨基酸原料。2根据权利要求1所述天然复合氨基酸原料的制备方法，其特征在于所述A步骤，取冻存新鲜猪脑，加水浸泡自然解冻，再用水清洗，然后加入猪脑重24倍重量的纯化水用胶体磨匀浆15MIN，将匀浆所得浆液倒入提取罐中加热至70100后保温1030MIN，再按猪脑重每1KG加入25ML的比例加入浓度为12MOL/L的浓盐酸搅匀、冷却至1050，再以30004000R/MIN的速度离心分离，然后去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白。3根据权利要求1所述天然复合氨基酸原料的制备方法，其特征在于所述B步骤，将经A步骤所得沉淀蛋白按每1KG加入750150。
5、0ML的比例加入浓度为184MOL/L的硫酸，制成浓度为612MOL/L的硫酸溶液，加热至110121，水解69H，再以重量比510倍的水稀释，用氢氧化钙溶液调PH值为7585，然后用200300目滤布过滤，去除硫酸钙沉淀物，得酸水解液。4根据权利要求1所述天然复合氨基酸原料的制备方法，其特征在于所述C步骤，将经B步骤所得酸水解液加热至7580，再加入酸水解液重量051的活性炭，加热至8090，保温15MIN，趁热以30004000R/MIN的速度离心分离5MIN，收集上清液，用草酸溶液调PH值为2545，静置13H，取上清液，沉淀物再以30004000R/MIN的速度离心分离5MIN，去除草。
6、酸钙沉淀物，合并上清液得粗提液。5根据权利要求1所述天然复合氨基酸原料的制备方法，其特征在于所述D步骤，将经C步骤所得粗提液过阳离子交换柱，然后用纯化水冲洗至PH值为6575，去除剩余草酸及钙离子，再用182MOL/L的氨水洗脱，收集洗脱液，调PH值为812，再以每公斤猪脑加入13G的比例加入氢氧化钠减压浓缩去氨水，浓缩至猪脑重1/51/3的量，然后用6MOL/L的盐酸调PH至6675，以20保存24H，得冷冻液。6根据权利要求1所述天然复合氨基酸原料的制备方法，其特征在于所述E步骤，将D步骤所得冷冻液自然解冻，然后以30004000R/MIN的速度离心分离，去除酪氨酸及相关杂质，收集上清液，。
7、将上清液用10000道尔顿分子量滤膜进行超滤，收集过滤液，再以60真空干燥箱或喷雾干燥即得天然复合氨基酸原料。7一种天然复合氨基酸原料，其特征在于所述天然复合氨基酸原料由猪脑组织提取而得。权利要求书CN104127439A1/5页3天然复合氨基酸原料的制备方法及天然复合氨基酸原料技术领域0001本发明涉及一种天然复合氨基酸原料的制备方法，还涉及一种天然复合氨基酸原料。背景技术0002氨基酸（AMINOACID）是构成蛋白质的基本单位，赋予蛋白质特定的分子结构形态，使他的分子具有生化活性。蛋白质是生物体内重要的活性分子，包括催化新陈代谢的酵素和酶。氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本。
8、的物质，是在生物体内构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系。它在抗体内具有特殊的生理功能，是生物体内不可缺少的营养成分之一。0003氨基酸大致可以分为三类1、必需氨基酸指人体或其它脊椎动物不能合成或合成速度远不适应机体的需要，必需由食物蛋白供给，这些氨基酸称为必需氨基酸。成人必需氨基酸的需要量约为蛋白质需要量的2037。共有8种，分别是赖氨酸，促进大脑发育，是肝及胆的组成成分，能促进脂肪代谢，调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢，防止细胞退化；色氨酸促进胃液及胰液的产生；苯丙氨酸参与消除肾及膀胱功能的损耗；蛋氨酸（甲硫氨酸）参与组成血红蛋白、组织与血清，有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能；。
9、苏氨酸有转变某些氨基酸达到平衡的功能；异亮氨酸参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢；脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺；亮氨酸作用平衡异亮氨酸；缬氨酸作用于黄体、乳腺及卵巢。00042、半必需氨基酸和条件必需氨基酸精氨酸精氨酸与脱氧胆酸制成的复合制剂（明诺芬）是主治梅毒、病毒性黄疸等病的有效药物；组氨酸可作为生化试剂和药剂，还可用于治疗心脏病，贫血，风湿性关节炎等的药物。人体虽能够合成精氨酸和组氨酸，但通常不能满足正常的需要，因此，又被称为半必需氨基酸或条件必需氨基酸，在幼儿生长期这两种是必需氨基酸。人体对必需氨基酸的需要量随着年龄的增加而下降，成人比婴儿显著下降。00053、非必需氨基酸指人。
10、或其它脊椎动物自己能由简单的前体合成，不需要从食物中获得的氨基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。0006如果人体缺乏任何一种必需氨基酸，就可导致生理功能异常，影响机体代谢的正常进行，最后导致疾病。同样，如果人体内缺乏某些非必需氨基酸，会产生机体代谢障碍。精氨酸和瓜氨酸对形成尿素十分重要；胱氨酸摄入不足就会引起胰岛素减少，血糖升高。又如创伤后胱氨酸和精氨酸的需要量大增，如缺乏，即使热能充足仍不能顺利合成蛋白质。总之，氨基酸在人体内通过代谢可以发挥下列一些作用合成组织蛋白质；变成酸、激素、抗体、肌酸等含氨物质；转变为碳水化合物和脂肪；氧化成二氧化碳和水及尿素，产生能量。因此，氨基酸在人体中的存在，不。
11、仅提供了合成蛋白质的重要原料，而且对于促进生长，进行正常代谢、维持生命提供了物质基础。如果人体缺乏或减少其中某一种，人体的正常生命代谢就会受到障碍，甚至导致各种疾病的发生或生命活动终止。所以，人体需要说明书CN104127439A2/5页4不断补充氨基酸，一些疾病需要依靠氨基酸治疗。0007现在人们常使用的氨基酸产品是人工合成的非天然的复方氨基酸输液。这种复方氨基酸输液具有促进人体蛋白质代谢正常，纠正负氮平衡，补充蛋白质，加快伤口愈合的作用。氨基酸输液在能量供给充足的情况下，可进入组织细胞，参与蛋白质的合成代谢，获得正氮平衡，并生成酶类、激素、抗体、结构蛋白，促进组织愈合，恢复正常生理功能。但。
12、是现有复合氨基酸产品都有很大的副作用，如复方氨基酸注射液可致疹样过敏反应，一旦发生需要停止用药；偶有恶心、呕吐、胸闷、心悸、发冷、发热或头痛等。0008人们为现有的非天然复合氨基酸产品的安全性担忧。本领域技术人员渴望获得一种使用安全的复合氨基酸产品，但一直没有解决这个技术问题。发明内容0009本发明要解决的技术问题就是提供一种天然复合氨基酸原料的制备方法,该天然复合氨基酸原料能够用于制备使用安全的复合氨基酸产品。还提供一种天然复合氨基酸原料。0010为了解决上述技术问题，本发明的天然复合氨基酸原料的制备方法包括如下步骤A取冻存新鲜猪脑，解冻，清洗，匀浆，将浆液加入浓盐酸搅匀、然后离心分离，去除。
13、上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白；B将经上述步骤得到的沉淀蛋白加入硫酸进行水解，过滤，得酸水解液；C将经上述步骤得到的酸水解液加热，加活性炭，分离，收集上清液，调PH值为2545，得粗提液；D将经上述步骤得到的粗提液上阳离子交换柱，调PH值为6575，用氨水洗脱，收集洗脱液，浓缩去氨水，调PH值为6575，20保存，得冷冻液；E将经上述步骤所得冷冻液自然解冻，离心分离，去除酪氨酸及相关杂质，收集上清液，将上清液超滤，收集过滤液，干燥，即得所需天然复合氨基酸原料。0011作为进一步改进，所述A步骤，取冻存新鲜猪脑，加水浸泡自然解冻，再用水清洗，然后加入猪脑重24倍重量的纯化水用胶体磨匀浆1。
14、5MIN，将匀浆所得浆液倒入提取罐中加热至70100后保温1030MIN，再按猪脑重每1KG加入25ML的比例加入浓度为12MOL/L的浓盐酸搅匀、冷却至1050，再以30004000R/MIN的速度离心分离，然后去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白。0012作为进一步改进，所述B步骤，将经A步骤所得沉淀蛋白按每1KG加入7501500ML的比例加入浓度为184MOL/L的硫酸，制成浓度为612MOL/L的硫酸溶液，加热至110121，水解69H，再以重量比510倍的水稀释，用氢氧化钙溶液调PH值为7585，然后用200300目滤布过滤，去除硫酸钙沉淀物，得酸水解液。0013作为进一步改。
15、进，所述C步骤，将经B步骤所得酸水解液加热至7580，再加入酸水解液重量051的活性炭，加热至8090，保温15MIN，趁热以30004000R/MIN的速度离心分离5MIN，收集上清液，用草酸溶液调PH值为2545，静置13H，取上清液，沉淀物再以30004000R/MIN的速度离心分离5MIN，去除草酸钙沉淀物，合并上清液得粗提液。0014作为进一步改进，所述D步骤，将经C步骤所得粗提液过阳离子交换柱，然后用纯说明书CN104127439A3/5页5化水冲洗至PH值为6575，去除剩余草酸及钙离子，再用182MOL/L的氨水洗脱，收集洗脱液，调PH值为812，再以每公斤猪脑加入13G的比例。
16、加入氢氧化钠减压浓缩去氨水，浓缩至猪脑重1/51/3的量，然后用6MOL/L的盐酸调PH至6675，以20保存24H，得冷冻液。0015作为进一步改进，所述E步骤，将D步骤所得冷冻液自然解冻，然后以30004000R/MIN的速度离心分离，去除酪氨酸及相关杂质，收集上清液，将上清液用10000道尔顿分子量滤膜进行超滤，收集过滤液，再以60真空干燥箱或喷雾干燥即得天然复合氨基酸原料。0016所述天然复合氨基酸原料由猪脑组织提取而得。0017按照本发明的方法制备的天然复合氨基酸原料，经定溶，按原液标准检定含量后调配的原液，经检定性状为浅黄色至棕黄色液体；鉴别供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图基本一。
17、致；PH值为6575。其由猪脑组织提取而得，含有门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸等15种氨基酸。经临床试验，本发明的天然复合氨基酸原料制备的产品，克服了现有非天然的复方氨基酸产品的缺陷，完全没有现有非天然的复方氨基酸输液的副作用，也没有其他不良反应，使用安全可靠，能够用于制备使用安全的复合氨基酸产品以替代现有的非天然的复方氨基酸产品，以满足市场需求。0018本发明的天然复合氨基酸原料可以用于制备使用安全的各种复合氨基酸产品，如医用的大输液、注射液、冻干粉针及口服制剂等；还可用于制备大众健康食品及保健品。
18、，作为添加剂用等，具有广阔的市场前景。0019本发明的方法能够实现本发明的目的，能够制备出天然复合氨基酸原料以用于生产使用安全的各种复合氨基酸产品。0020本发明的方法，盐酸和氢氧化钠使用量至钠盐存在原液中的含量少，经硫酸水解后用氢氧化钙和草酸中和硫酸形成硫酸钙和草酸钙沉淀及去除部分杂质，再经层析能彻底去除硫酸钙和草酸钙，制得15种纯天然酸水解的复合氨基酸原料，详见附图。本发明的方法简单可靠、成本低，能够一次性处理大量动物脑组织如猪脑，纯化时上样量大，可以进行天然复合氨基酸原料规模化生产，满足市场需要。附图说明0021图1是本发明方法所得的15种纯天然复合氨基酸的HPLC检测图。具体实施方式0。
19、022下面详细说明本发明方法的实施方式，但不仅限于以下实施例。0023实施例一本发明的该天然复合氨基酸原料的制备方法包括如下步骤A取冻存新鲜猪脑50KG，加水浸泡自然解冻，再用水清洗，然后加入100KG纯化水用胶体磨匀浆15MIN，将匀浆所得浆液倒入提取罐中加热至80后保温15MIN，再加入250ML浓度为12MOL/L的浓盐酸搅匀、冷却至40，再以3800R/MIN的速度离心分离，然后去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白23KG；说明书CN104127439A4/5页6B将经A步骤所得沉淀蛋白加入3000ML浓度为184MOL/L的硫酸进行水解，制成浓度为12MOL/L的硫酸溶液，加热。
20、至121，水解8H，再以重量比10倍的水稀释，用氢氧化钙溶液调PH值为75（所用氢氧化钙溶液用2800G氢氧化钙加5000ML纯化水溶解而得），然后用300目滤布过滤，去除硫酸钙沉淀物，得酸水解液；C脱色，即将经B步骤所得酸水解液加热至75，再加入酸水解液重量1的活性炭，加热至80，保温15MIN，趁热以3800R/MIN的速度离心分离5MIN，收集上清液，用草酸溶液调PH值为35（所用草酸溶液用750G草酸加2000ML纯化水加热溶解而得），静置3H，取上清液，沉淀物再以3800R/MIN的速度离心分离5MIN，去除草酸钙沉淀物，合并上清液得粗提液；D将经C步骤所得粗提液过阳离子交换柱，然后。
21、用纯化水冲洗至PH值为65，去除剩余草酸及钙离子，再用18MOL/L的氨水洗脱，收集洗脱液，调PH值为12，再加入150G氢氧化钠减压浓缩去氨水，浓缩至30G的量，然后用6MOL/L的盐酸调PH至72，以20保存24H，得冷冻液；E将D步骤所得冷冻液自然解冻，然后以3800R/MIN的速度离心分离，去除酪氨酸及相关杂质，收集上清液，将上清液用10000道尔顿分子量滤膜进行超滤，收集过滤液，再喷雾干燥即得天然复合氨基酸原料。0024所得天然复合氨基酸原料包含如下重量份的氨基酸门冬氨酸487，丝氨酸208，谷氨酸592，甘氨酸255，组氨酸094，精氨酸177，苏氨酸158，丙氨酸281，脯氨酸2。
22、42，缬氨酸177，甲硫氨酸091，赖氨酸381，异亮氨酸120，亮氨酸308，苯丙氨酸124。15种氨基酸总量3695。经定溶，按原液标准检定含量后调配的原液，经检定性状为浅黄色至棕黄色液体；鉴别供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图基本一致；PH值为75。0025实施例二A取冻存新鲜猪脑50KG，加水浸泡自然解冻，再用水清洗，然后加入200KG纯化水用胶体磨匀浆15MIN，将匀浆所得浆液倒入提取罐中加热至70后保温10MIN，再加入100ML浓度为12MOL/L的浓盐酸搅匀、冷却至10，再以3000R/MIN的速度离心分离，然后去除上层乳浊液，收集沉淀物，即得沉淀脑蛋白24KG；B将经A步骤所。
23、得沉淀蛋白加入2500ML浓度为184MOL/L的硫酸进行水解，制成浓度为6MOL/L的硫酸溶液，加热至110，水解6H，再以重量比5倍的水稀释，用氢氧化钙溶液调PH值为8（所用氢氧化钙溶液用2500G氢氧化钙加5000ML纯化水溶解而得），然后用200目滤布过滤，去除硫酸钙沉淀物，得酸水解液；C脱色，即将经B步骤所得酸水解液加热至75，再加入酸水解液重量05的活性炭，加热至85，保温15MIN，趁热以3000R/MIN的速度离心分离5MIN，收集上清液，用草酸溶液调PH值为25（所用草酸溶液用150G草酸加3000ML纯化水加热溶解而得），静置1H，取上清液，沉淀物再以4000R/MIN的速。
24、度离心分离5MIN，去除草酸钙沉淀物，合并上清液得粗提液；D将经C步骤所得粗提液过阳离子交换柱，然后用纯化水冲洗至PH值为75，去除剩余草酸及钙离子，再用2MOL/L的氨水洗脱，收集洗脱液，调PH值为8，再加入50G氢氧化钠减压浓缩去氨水，浓缩至50G的量，然后用6MOL/L的盐酸调PH至66，以20保存24H，说明书CN104127439A5/5页7得冷冻液；E将D步骤所得冷冻液自然解冻，然后以3000R/MIN的速度离心分离，去除酪氨酸及相关杂质，收集上清液，将上清液用10000道尔顿分子量滤膜进行超滤，收集过滤液，再以60真空干燥箱干燥即得天然复合氨基酸原料。0026上述例举了2个典型的实施例，但不限于这些实施例。申请人经过反复试验得到本发明的方法，并按照该方法进行了反复的试验，都能得到本发明的天然复合氨基酸原料。所得天然复合氨基酸原料由猪脑组织提取而得，含有15种氨基酸。经检定，性状为浅黄色至棕黄色液体；鉴别供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图基本一致；PH值为6575。说明书CN104127439A1/1页8图1说明书附图CN104127439A。