富勒烯在制备药物中的用途以及保护肾脏的药物.pdf

《富勒烯在制备药物中的用途以及保护肾脏的药物.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《富勒烯在制备药物中的用途以及保护肾脏的药物.pdf（11页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610671578.9 (22)申请日 2016.08.15 (71)申请人 中国科学院化学研究所 地址 100190 北京市海淀区中关村北一街2 号 (72)发明人 王春儒 甄明明 贾旺 (74)专利代理机构 北京清亦华知识产权代理事 务所(普通合伙) 11201 代理人 李志东 (51)Int.Cl. A61K 33/44(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 39/06(2006.01) A61P 7/00(2006.01) A23L 3。

2、3/10(2016.01) A23L 33/16(2016.01) (54)发明名称 富勒烯在制备药物中的用途以及保护肾脏 的药物 (57)摘要 本发明公开了富勒烯在制备药物中的用途 以及保护肾脏的药物。 具体地， 本发明提出了富 勒烯活性物质在制备药物中的用途。 利用富勒烯 活性物质极易与自由基反应的特点， 使得含有富 勒烯活性物质的药物在用于保护肾脏时， 具有下 列优点的至少之一： 改善肾脏微血管中血细胞的 数量和质量、 清除自由基、 生物相容性好以及毒 副作用小。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 107753512 A 2018.03.06 CN 107753512 A 1.。

3、富勒烯活性物质在制备药物中的用途， 所述药物用于保护肾脏。 2.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述药物进一步包括辅料， 所述辅料包括 水以及水溶性载体的至少之一。 3.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述富勒烯活性物质包括富勒烯、 所述富 勒烯的水溶性修饰物以及所述富勒烯的衍生物的至少之一。 4.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述富勒烯包括选自空心富勒烯C2n、 MC2n、 M2C2n、 MAC2n、 M3NC2n、 M2C2C2n、 M2SC2n、 M2OC2n和MxA3-xNC2n中的至少之一， 其中， M和A分别独立的选自Sc、 Y和镧系金属元素， 30。

4、n60， 0x3。 5.根据权利要求3所述的用途， 其特征在于， 所述富勒烯的粒径为11000nm。 6.根据权利要求3所述的用途， 其特征在于， 所述水溶性修饰物包括羟基修饰物、 氨基 修饰物以及羧基修饰物的至少之一； 所述衍生物为水溶性衍生物。 7.根据权利要求2所述的用途， 其特征在于， 所述水溶性载体包括选自脂质体、 蛋白以 及聚合物胶束中的至少之一， 其中， 所述蛋白包括白蛋白或转铁蛋白； 所述聚合物胶束含有聚乙丙交酯聚乙二醇、 聚赖氨酸以及壳聚糖的至少之一。 8.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述富勒烯活性物质的使用剂量为1- 100mg/kg。 9.一种药物、 保健食。

5、品或保健品， 所述药物、 保健食品或保健品用于保护肾脏， 其特征 在于， 所述药物、 所述保健食品或所述保健品包括权利要求18任一项所述的富勒烯活性 物质。 10.根据权利要求9所述的药物、 保健食品或保健品， 其特征在于， 所述药物为口服剂型 或静脉注射剂。 11.根据权利要求9所述的药物、 保健食品或保健品， 其特征在于， 所述富勒烯活性物质 的使用剂量为1-100mg/kg。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107753512 A 2 富勒烯在制备药物中的用途以及保护肾脏的药物 技术领域 0001 本发明属于生物医药领域， 涉及富勒烯在制备药物中的用途以及保护肾脏的药 物。 背。

6、景技术 0002 肾脏是人体中重要的器官， 主要作用有： 排泄体内代谢产物和进入体内的有害物 质、 维持水的平衡、 维持体内电解质和酸碱平衡、 调节血压、 促进红细胞生成、 促进维生素D 的活化等。 肾脏相关疾病主要有： 急性肾衰竭、 慢性肾衰竭、 高血压肾病等其它疾病并发性 肾病。 其中， 急性肾损伤(AKI)是最常见的临床情况， 死亡风险较高， 并且有进展至慢性肾脏 病的风险， 因此已逐渐成为世界范围内的一个公关卫生问题。 虽然近年来肾脏替代治疗 (RRT)技术有了长足的进步， 但住院患者急性肾损伤(AKI)的死亡率仍高达14-60， AKI 在发展中国家和发达国家都日益流行。 同时， 急。

7、性肾损伤与慢性肾衰竭等肾病关系密切。 目 前的肾脏替代治疗包括血液透析、 腹膜透析和肾移植， 虽然近年来上述技术发展较为迅速， 但患者的死亡率仍较高， 因此， 保肾药物市场潜力较大。 0003 然而， 目前用于保护肾脏的药物、 保健品或保健食品仍有待改进。 发明内容 0004 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。 0005 目前的保肾药物， 活性成分为人工合成有机化合物的， 普遍存在疗效不甚理想且 毒副反应明显或毒理不明等问题； 而采用中草药等植物提取物作为活性成分的保肝药物， 虽然毒副作用较小， 但普遍存在制药工艺原始、 质量难以控制、 提取物有效成分难以定性定 量等问题。

8、。 相比之下， 纳米材料由于尺寸小、 生物兼容性好、 表面易被生物亲和分子修饰， 合 成可控， 越来越多地应用在生物医药的研制中。 发明人经过深入研究以及大量实验发现， 在 诸多纳米材料中， 富勒烯由多个五元环以及多个六元环构成， 由于分子中具有多个双键， 极 易与自由基反应。 并且， 富勒烯能够在体内代谢， 毒副作用小， 可以通过静脉注射等方法注 入生物体内， 并通过血液循环在肾组织中富集。 富勒烯的各类修饰物(如金属富勒烯纳米材 料)、 衍生物保持了富勒烯易与自由基反应、 毒副作用小等优点， 具有改善血细胞的数量和 质量、 清除自由基、 生物相容性好以及毒副作用小等优点的至少之一。 000。

9、6 有鉴于此， 在本发明的第一方面， 本发明提出了富勒烯活性物质在制备药物中的 用途。 该药物利用富勒烯活性物质极易与自由基反应的特点， 使得含有富勒烯活性物质的 药物在用于保护肾脏时， 具有下列优点的至少之一： 改善肾脏微血管中血细胞的数量和质 量、 清除自由基、 生物相容性好以及毒副作用小。 0007 在本发明的一个方面， 本发明提出了富勒烯活性物质在制备药物中的用途， 所述 药物用于保护肾脏。 由此， 可以使该保护肾脏的药物具有下列优点的至少之一： 改善血细胞 的数量和质量、 清除自由基、 生物相容性好以及毒副作用小。 0008 根据本发明的实施例， 所述药物进一步包括辅料， 所述辅料包。

10、括水以及水溶性载 说 明 书 1/7 页 3 CN 107753512 A 3 体的至少之一。 由此， 可以简便地通过静脉注射等途径， 实现该药物的供给。 0009 根据本发明的实施例， 所述富勒烯活性物质包括富勒烯、 所述富勒烯的水溶性修 饰物以及所述富勒烯的衍生物的至少之一。 由此， 可以进一步提高该药物的使用效果。 0010 根据本发明的实施例， 所述富勒烯包括选自空心富勒烯C2n、 MC2n、 M2C2n、 MAC2n、 M3NC2n、 M2C2C2n、 M2SC2n、 M2OC2n和MxA3-xNC2n中的至少之一， 0011 其中， M和A分别独立的选自Sc、 Y和镧系金属元素， 。

11、30n60， 0x3。 由此， 可以 进一步提高该药物的使用效果。 0012 根据本发明的实施例， 所述富勒烯的粒径为11000nm。 粒径在上述范围内的富勒 烯， 生物兼容性好， 易均匀分散于常用辅料， 制备简单。 0013 根据本发明的实施例， 所述水溶性修饰物包括羟基修饰物、 氨基修饰物以及羧基 修饰物的至少之一； 所述衍生物为水溶性衍生物。 由此， 可以进一步提高该药物的使用效 果。 0014 根据本发明的实施例， 所述水溶性载体包括选自脂质体、 蛋白以及聚合物胶束中 的至少之一， 其中， 所述蛋白包括白蛋白或转铁蛋白； 所述聚合物胶束含有聚乙丙交酯聚乙 二醇、 聚赖氨酸以及壳聚糖的至。

12、少之一。 由此， 可以进一步提高该药物的生物兼容性。 0015 根据本发明的实施例， 所述富勒烯活性物质的使用剂量为1-100mg/kg。 由此， 可以 进一步提高该药物的使用效果。 0016 在本发明的另一方面， 本发明提出了一种药物、 保健食品或保健品， 所述药物、 保 健食品或保健品用于保护肾脏。 根据本发明的实施例， 所述药物、 所述保健食品或所述保健 品包括前面所述的富勒烯活性物质。 0017 根据本发明的实施例， 所述药物为口服剂型或静脉注射剂。 由此， 可以进一步提高 该药物的使用效果。 0018 根据本发明的实施例， 所述富勒烯活性物质的使用剂量为1-100mg/kg。 由此，。

13、 可以 进一步提高该药物的使用效果。 附图说明 0019 图1显示了根据本发明实施例1的水溶性羟基化金属富勒烯的清除自由基能力测 试结果图； 0020 图2显示了根据本发明实施例1的水溶性羟基化金属富勒烯对失血损伤肾脏组织 改善实验的环境扫描电镜图； 0021 图3显示了根据本发明实施例1的水溶性羟基化金属富勒烯对失血损伤肾脏组织 改善实验的病理切片光学显微镜图(200X)； 以及 0022 图4显示了根据本发明实施例1的水溶性羟基化金属富勒烯对失血损伤肾脏组织 改善实验的病理切片光学显微镜图(400X)。 具体实施方式 0023 下面详细描述本发明的实施例， 所述实施例的示例在附图中示出。 。

14、下面通过参考 附图描述的实施例是示例性的， 旨在用于解释本发明， 而不能理解为对本发明的限制。 0024 在本发明的第一方面， 本发明提出了富勒烯活性物质在制备药物中的用途。 具体 说 明 书 2/7 页 4 CN 107753512 A 4 地， 根据本发明的实施例， 该药物用于保护肾脏。 由此， 可以使该保护肾脏的药物具有下列 优点的至少之一： 改善血细胞的数量和质量、 清除自由基、 生物相容性好以及毒副作用小。 0025 在本发明中， 肾损伤的主要特征为： 内皮受损和血管中断， 其可能引起组织缺氧、 缺血的恶性循环， 从而影响肾细胞功能； 系统和肾内高血压， 肾小球超滤， 肾小管肥大、 。

15、萎 缩、 肾小管间质纤维化、 肾小球硬化、 动脉硬化、 遗传易感及体液紊乱等。 肾损伤的具体诱因 可以为： 多种疾病引发的肾小球毛细血管滤过膜的损伤、 长期接触有损肾脏的化学物质、 营 养物质摄入不足或消耗过多引起的并发性肾病等。 其中， 多种疾病引发的肾小球毛细血管 滤过膜的损伤， 包括药物(汞、 有机金、 青霉胺和海洛因等)、 感染、 过敏、 肿瘤(肺、 胃和淋巴 瘤等)、 系统性红斑狼疮等； 长期接触有损肾脏的化学物质， 例如， 长期接触镉、 氯仿、 乙烯乙 二醇和四氯乙烯等； 营养物质摄入不足或消耗过多引起的并发性肾病， 比如失血造成的肾 缺血引起的组织损伤等。 本发明中的 “肾保护”。

16、 或是 “保护肾脏” 包括保护肾脏以及改善肾功 能的至少之一。 0026 为了方便理解， 下面首先对富勒烯活性物质用于保护肾脏药物的原理进行简要说 明： 0027 将富勒烯活性物质与辅料混合制备成药物， 可以通过口服、 腹腔注射、 静脉注射等 方式进入生物体内， 并通过血液循环富集于肾脏组织中； 富勒烯活性物质由于具有碳笼结 构以及微纳米级别的粒径， 因此具有刚性， 使其可以渗透入肾脏组织中。 由此， 富勒烯活性 物质可以发挥下列作用的至少之一： 可以利用富勒烯活性物质实现改善肾脏组织的相关功 能， 比如改善血细胞的数量和质量， 修复肾损伤； 富勒烯分子中含有多个六元环， 包括多个 双键， 极。

17、易与自由基反应， 可以有效清除自由基， 起到一定程度的肾脏保护作用； 富勒烯活 性物质的生物相容性较好， 对生物体基本无毒副作用。 0028 根据本发明的实施例， 富勒烯活性物质可以包括富勒烯、 富勒烯的水溶性修饰物 以及富勒烯的衍生物的至少之一。 由此， 可以进一步提高该药物的使用效果。 0029 具体地， 根据本发明的实施例， 富勒烯可以包括选自空心富勒烯C2n、 MC2n、 M2C2n、 MAC2n、 M3NC2n、 M2C2C2n、 M2SC2n、 M2OC2n和MxA3-xNC2n中的至少之一， 其中， M和A分别独立的 选自Sc、 Y和镧系金属元素， 30n60， 0x3。 由此，。

18、 可以进一步提高该药物的使用效果。 发明人经过大量实验发现， 富勒烯不仅具有较强的清除自由基的能力， 而且能够在体内代 谢， 毒副作用小。 富勒烯分子中可以含有30120个碳原子， 由多个五元环以及六元环构成 尺寸不同的碳笼， 并且可以将碱土金属、 稀土元素嵌入到不同尺寸的碳笼中形成内嵌金属 富勒烯。 内嵌金属富勒烯包括单金属内嵌富勒烯、 双金属内嵌富勒烯、 金属氮化物内嵌富勒 烯、 金属碳化物内嵌富勒烯、 碳氮金属团簇内嵌富勒烯、 金属氧化物和金属硫化物内嵌富勒 烯等。 满足上述结构式的内嵌金属富勒烯可以直接或间接以富勒烯为本体材料合成， 保持 了富勒烯容易与自由基反应的优点， 具有较好的保。

19、护肾脏的功能。 0030 根据本发明的实施例， 富勒烯的水溶性修饰物可以包括羟基修饰物、 氨基修饰物 以及羧基修饰物的至少之一。 需要说明的是， 形成富勒烯的水溶性修饰物的具体方法不受 特别限制， 本领域技术人员可以根据富勒烯的具体组成以及药物的具体要求， 选择适当的 方法合成富勒烯的水溶性修饰物。 例如， 根据本发明的实施例， 可以通过共价作用， 将非水 溶性的上述富勒烯进行水溶性修饰。 例如， 根据本发明的具体实施例， 可以在碱性条件下， 通过固液反应制备富勒烯的水溶性修饰物。 具体地， 可以将富勒烯或金属富勒烯固体粉末 说 明 书 3/7 页 5 CN 107753512 A 5 与H2。

20、O2在碱性下反应， 制备富勒烯的羟基水溶性修饰物； 通过将富勒烯或金属富勒烯固体粉 末与H2O2和氨反应， 可制备富勒烯的氨基水溶性修饰物。 由此， 可以改善富勒烯表面的亲疏 水性能， 达到水溶性修饰的目的。 根据本发明的实施例， 富勒烯的衍生物为水溶性衍生物。 由此， 可以简便地将富勒烯的水溶性衍生物分散在水性辅料中， 方便制成静脉注射剂， 从而 可以进一步提高该药物的使用效果。 0031 根据本发明的实施例， 上述富勒烯活性物质可以为水溶性羟基化钆金属富勒烯 (GFNCs等)、 水溶性羟基化C60、 水溶性羟基化C70、 水溶性氨基化钆金属富勒烯， 例如， GdC82 (NH3)n等、 水。

21、溶性氨基化C60、 水溶性氨基化C70、 水溶性羧基化钆金属富勒烯， 例如GdC82 (COOH)n等、 水溶性羧基化C60、 水溶性羧基化C70等。 上述富勒烯活性物质生物兼容性良好， 保 持了富勒烯分子的高效清除自由基、 保护肾脏组织等特点， 同时由于该类分子特殊的物理 化学性质和水溶液中的聚集尺寸， 可以高效快速的富集在肾脏组织之中， 保护肾脏组织， 改 善肾脏组织的相关功能。 0032 根据本发明的实施例， 富勒烯活性物质的粒径为11000nm。 粒径在上述范围内的 富勒烯活性物质， 生物兼容性好， 易均匀分散于常用辅料， 制备简单， 具有一定的刚性， 不易 变形， 可以较好地经血液循。

22、环进入肾脏组织中。 0033 根据本发明的实施例， 上述药物中进一步包括辅料。 由此， 可以将富勒烯活性物质 分散在辅料中， 便于通过口服、 腹腔注射、 静脉注射等方式供给到生物体内。 具体地， 根据本 发明的实施例， 辅料可以包括水以及水溶性载体的至少之一。 由此， 可以简便地通过静脉注 射等途径， 实现该药物的供给。 0034 根据本发明的实施例， 水溶性载体包括选自脂质体、 蛋白以及聚合物胶束中的至 少之一， 其中， 蛋白包括白蛋白或转铁蛋白； 聚合物胶束含有聚乙丙交酯聚乙二醇、 聚赖氨 酸以及壳聚糖的至少之一。 由此， 可以进一步提高该药物的生物兼容性。 需要说明的是， 当 药物中的辅。

23、料含有上述水溶性载体时， 制备药物的具体方法不受特别限制， 本领域技术人 员可以根据富勒烯活性物质的具体组成以及药物的具体要求， 选择适当的方法将富勒烯活 性物质与上述水溶性载体结合。 例如， 根据本发明的实施例， 可以通过非共价键修饰方法， 将富勒烯活性物质与上述水溶性载体， 如脂质体、 聚合物胶束、 蛋白等添加至油性溶剂中， 通过疏水-疏水相互作用， 将富勒烯活性物质与上述水溶性载体结合。 0035 根据本发明的实施例， 在该药物中， 富勒烯活性物质(例如， 富勒烯和/或金属富勒 烯微纳材料)单次给药(单剂量)时在药物中的浓度范围为0.1mM-10mM， 使用剂量为1- 100mg/kg。。

24、 由此， 可以进一步提高该药物的使用效果。 本领域技术人员可以根据具体情况， 按照上述使用浓度范围进行给药， 例如， 轻度、 中度肝病患者可以单剂量使用， 重度、 极重度 肝病患者可以多剂量使用。 0036 需要说明的是， 在本发明中， 该药物的具体剂型不收特别限制。 根据本发明的实施 例， 该药物的剂型可以为注射液、 片剂、 颗粒剂、 糖浆剂、 胶囊、 口服液、 凝胶剂、 固体分散体 的至少之一。 例如， 根据本发明的具体实施例， 该药物可以为固体、 溶液、 胶体、 浑浊液等。 具 体地， 可以将富勒烯活性物质以及辅料制备成固体分散体， 或者， 可以将富勒烯活性物质分 散在胶束中， 与辅料形。

25、成胶体。 需要说明的是， 该药物可以通过包括但不限于口服、 腹腔注 射、 静脉注射等方式进入生物体内。 药物中的有效成分， 即富勒烯活性物质主要通过血液循 环作用于肾脏组织。 例如， 可以将水溶性的富勒烯活性物质溶于生理盐水或超纯水， 经滤膜 说 明 书 4/7 页 6 CN 107753512 A 6 过滤后静脉注射到生物体内。 在本发明中，“生物体” 、“生物” 等术语特指哺乳动物， 例如， 人、 鼠、 兔等。 0037 综上所述， 本发明提出的富勒烯活性物质的上述用途， 具有下列优点的至少之一： 0038 (1)所用富勒烯活性物质制备方法简单快速， 生物相容性好， 对生物体基本无毒副 作。

26、用， 代谢较快， 且较易通过血液循环作用于肾脏组织。 0039 (2)所用富勒烯活性物质对肾脏有一定的保护、 修复作用， 对肾脏组织相关功能的 恢复作用较明显。 0040 (3)所用富勒烯活性物质可通过静脉注射到生物体内， 给药方便。 0041 (4)所用富勒烯活性物质物化性质稳定， 清除自由基效果显著。 0042 在本发明的另一方面， 本发明提出了一种药物、 保健食品或保健品。 根据本发明的 实施例， 上述药物、 保健食品或保健品用于保护肾脏。 具体地， 该药物、 保健食品或保健品包 括前面所述的富勒烯活性物质。 关于富勒烯活性物质保护肾脏的原理以及富勒烯活性物质 的具体成分， 前面已经进行。

27、了详细的描述， 在此不再赘述。 由于该药物、 保健食品或保健品 中含有前面描述的富勒烯活性物质， 因此该药物、 保健食品或保健品具有与前面描述的药 物相同的特征以及优点， 在此不再赘述。 本领域技术人员能够理解的是， 在该药物、 保健食 品或保健品中， 可以进一步包括辅料， 以满足该药物、 保健食品或保健品赋形等方面的需 求。 关于辅料的具体成分以及含量不受特别限制， 本领域技术人员可以根据实际情况进行 选择。 0043 根据本发明的实施例， 该药物可以为口服剂型或静脉注射剂。 由此， 可以进一步提 高该药物的使用效果。 根据本发明的试试， 该药物的剂型可以具有与前面描述的制药用途 中的药物相。

28、同的剂型， 在此不再赘述。 0044 根据本发明的实施例， 该药物在生物体内的使用浓度范围可以为0.1mM-10mM， 使 用剂量为1-100mg/kg。 由此， 可以进一步提高该药物的使用效果。 关于该药物的有效剂量以 及给药方式， 可以具有与前面描述的制药用途中的药物相同的特征以及优点， 在此不再赘 述。 0045 下面通过具体实施例对本发明进行说明， 需要说明的是， 下面的具体实施例仅仅 是用于说明的目的， 而不以任何方式限制本发明的范围， 另外， 如无特殊说明， 则未具体记 载条件或者步骤的方法均为常规方法， 所采用的试剂和材料均可从商业途径获得。 下述实 施例中， GFNCs指水溶性。

29、羟基化钆金属富勒烯纳米材料。 0046 实施例1： 制备水溶性羟基化金属富勒烯： 0047 1)将100mg GdC82固体粉末(购买于厦门福纳新材料科技有限公司)加入100ml的 单口瓶中， 分别加入7ml体积分数为30的过氧化氢水溶液和3ml 2mol/L的氢氧化钠水溶 液， 油浴加热到70， 反应2-5h。 0048 2)反应后使用M.W.3500透析袋除去小分子， 使用电导率仪监测直至透析完成， 浓缩得到的产物即可得到水溶性羟基化空心富勒烯， 经动态光散射(DLS)测定其在水溶液 中的平均粒径为140nm， 粒径分布均一。 0049 实施例2： 制备水溶性羟基化空心富勒烯： 0050 。

30、1)将100mg C60固体粉末加入100ml的单口瓶中， 分别加入7ml体积分数为30的过 氧化氢水溶液和3ml的2mol/L的氢氧化钠水溶液， 油浴加热到70， 反应2-5h。 说 明 书 5/7 页 7 CN 107753512 A 7 0051 2)反应后使用M.W.3500透析袋除去小分子， 使用电导率仪监测直至透析完成， 浓缩得到的产物即可得到水溶性羟基化空心富勒烯， 经DLS测定其在水溶液中的平均粒径 为143.4nm， 粒径分布均一。 0052 清除自由基能力监测 0053 本发明通过电子自旋共振波谱(ESR)来检测水溶性羟基化钆金属富勒烯清除自由 基的能力。 0054 羟基自。

31、由基寿命短， 无法直接测得， 因此使用羟基自由基捕获试剂二甲基吡啶N- 氧化物(DMPO)。 通过紫外诱导的方法产生羟基自由基， 然后DMPO捕获产生的羟基自由基生 成DMPO自由基， 而DMPO自由基比较稳定， 它的强度可以使用ESR测得。 在反应体系中， 随着羟 基自由基浓度的提高， DMPO自由基的信号强度也越来越高， 如果羟基自由基被淬灭， 那么就 会抑制DMPO自由基的生成。 利用该原理， 通过抑制DMPO自由基， 间接得到GFNCs清除羟基自 由基的效果。 0055 测试时， 对照组为： 将50 L质量浓度为37的双氧水、 50 L PBS缓冲液(pH7.4) 溶液混合后加入100。

32、 L(0.133mM)(DMPO、 自由基捕获剂)溶液混合， 用280nm紫外光照射 8min； 实验组为： 将50 L质量浓度为37的双氧水和100 L(0.133mM)二甲基吡啶N-氧化物 (DMPO、 自由基捕获剂)溶液混合， 立即加入5 M的实施例1中制备的水溶性羟基化钆金属富 勒烯水溶液50 L， 用280nm紫外光照射8min， 检测自由基的信号强度。 0056 参考图1， 实验组中， 在实施例1中的GFNCs浓度为5 M时， 相对于对照组自由基信号 明显减弱， 即能有效淬灭由紫外光照射双氧水产生的自由基。 0057 对失血引起的肾脏损伤的保护效果 0058 动物模型： 选用ICR。

33、 9周龄雌性小鼠， 将其随机分成3组， 每组6只， 分别为空白组、 失血组和实验组。 0059 实验组： 放血(0.20.3ml/次)； 药物通过静脉注射入小鼠体内， 具体剂量为： 实施 例1制备的GFNCs 160 l的1.005mmol/L/次。 0060 空白组： 不放血； 用同体积的生理盐水代替实验组所注射的药物， 尾静脉注射入小 鼠体内； 其它处理方式与实验组一致。 0061 失血组： 放血(0.20.3ml/次)； 用同体积的生理盐水代替实验组所注射的药物， 尾静脉注射入小鼠体内； 其它处理方式与实验组一致。 0062 先培养小鼠23天， 观察小鼠状态， 状态稳定后， 作为实验的第。

34、1天。 然后分别在第 1天、 第5天(上午)通过小鼠眼眶放血， 并于第5天(下午)、 第6天、 第7天尾静脉注射GFNCs于 小鼠体内。 0063 在第11天分别在空白组、 失血组、 实验组随机选取2只小鼠， 颈椎脱臼法处死， 分别 取其肾脏， 一部分用2.5戊二醛固定， 一部分用4甲醛固定， 并做好标记。 0064 环境扫描电镜样品制备： (1)固定： 2.5戊二醛固定样品4h以上， 然后用磷酸缓冲 液清洗3次， 每次1520min(2)脱水： 30、 50、 70、 85、 95乙醇各一次， 每次15 20min。 100乙醇2次， 每次1520min(3)置换： 乙酸异戊酯2次， 每次1。

35、5min以上(4)二氧化 碳临界点干燥。 0065 做好样品后， 用FEG场发射环境扫描电子显微镜(采用低真空模式)观察、 选择合适 区域、 照相。 每个样品至少选择4个区域观察、 对比。 如图2所示， 空白组小鼠的肾脏中血细胞 说 明 书 6/7 页 8 CN 107753512 A 8 数量正常且红细胞饱满； 失血组小鼠肾脏中血细胞(箭头所指处)数量明显减少， 且红细胞 呈扁平状， 说明失血对小鼠肾脏的血细胞数量以及质量均有较大影响； 实验组小鼠肾脏中 血细胞(箭头所指处)数量以及质量均明显好于失血组。 0066 病理切片观察样品制备： 用4甲醛固定， 送至北大医学部制样， 然后在400X。

36、显微 镜下观察。 如图3以及图4所示， 实验组小鼠肾脏中血细胞数量以及质量均明显好于失血组。 0067 综上， 放血后， 对小鼠肾脏有一定程度的损伤， 而注射水溶性羟基化钆金属富勒烯 后， 小鼠肾脏有明显的改善， 较接近空白组， 可见水溶性羟基化钆金属富勒烯对肾脏有较好 的保护作用。 0068 在本说明书的描述中， 参考术语 “一个实施例” 、“一些实施例” 、“示例” 、“具体示 例” 、 或 “一些示例” 等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、 结构、 材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。 在本说明书中， 对上述术语的示意性表述不 必须针对的是相同的实施例或示例。 。

37、而且， 描述的具体特征、 结构、 材料或者特点可以在任 一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。 此外， 在不相互矛盾的情况下， 本领域的技 术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结 合和组合。 0069 需要说明的是， 在本发明中，“肝保护” 、“保护肾脏” 等术语包括保护肾脏、 改善肝 功能等情况的至少之一。 0070 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例， 可以理解的是， 上述实施例是示例 性的， 不能理解为对本发明的限制， 本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述 实施例进行变化、 修改、 替换和变型。 说 明 书 7/7 页 9 CN 107753512 A 9 图1 图2 说 明 书 附 图 1/2 页 10 CN 107753512 A 10 图3 图4 说 明 书 附 图 2/2 页 11 CN 107753512 A 11 。