技术领域
本发明涉及营养保健医疗领域，特别是涉及一种冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物及其制备方法。
背景技术
冬凌草系唇形科香茶菜属植物，学名碎米亚，它在冬季早晨，气温降至0℃以下时，其内含物与地面水蒸气在茎上凝结成如纸的冰片，卷曲成各种图案，故又名冰凌草、冰凌花、冻凌草。1972年，河南省医科所在济源县发现了冬凌草，在此之前，《本草纲目》中没有记载。此后，中国科学院昆明植物研究所等单位对其进行了大量的科学研究，冬凌草也被收载于《中国药典》1977年版一部。1991年我国卫生部批准将其干燥叶及地上部分作为中药材，收入部颁中药材标准。冬凌草主要分布于我国黄河流域及其以南广大地区，主产于河南济源县、信阳县、山西太行山鹤壁地区、陕西太白山区、四川南川县、贵州施秉县、习水县、遵义地区凤岗县。据《现代中药学大辞典》记载，冬凌草苦、甘、微寒，具有清热解表、消炎止痛，因此常用于咽喉肿痛、扁桃体炎、蛇虫咬伤、风湿骨痛等的治疗。同时，冬凌草还能健胃活血、增强免疫，并具有良好的抗肿瘤作用。
随着冬凌草功效在医学临床方面的不断发现，冬凌草的防癌抗癌、消热降脂的保健作用正被越来越多的人接受，冬凌草泡茶也走进人们的日常生活，“冬凌草片”、“冬凌草糖浆”等药品也相继应用并取得广泛的疗效，主要用于热毒壅盛所致咽喉肿痛、声音嘶哑；扁桃体炎、咽炎、口腔炎见上述证候者及癌症的辅助治疗。而“冬凌草牙膏”、“冬凌草茶叶”、“冬凌草爽口液”等产品也逐渐进入人们的生活。冬凌草具有很好的抗癌活性，尤其对消化道肿瘤具有不错的疗效。
冬凌草中化学成分甚为复杂，含有从单萜、倍半萜到二萜、三萜等一系列该类化合物。冬凌草甲素就是从冬凌草中分离出的一种天然有机化合物，它被认为是冬凌草具有抗癌活性和抗炎活性的主要有效成分。冬凌草甲素属贝壳杉烯二萜类化合物，为无色棱柱状结晶，味道极苦，不溶于水，可溶于乙醚、甲醇、乙醇等有机溶剂，分子式为C20H28O6，结构式如式Ⅰ所示，如果破坏其结构中与环外亚甲基共轭的环戊酮结构则其抗癌和抗炎作用消失，说明该结构为其生物活性中心。
冬凌草甲素对多种球菌及杆菌有明显的抗菌作用，临床实验证明，冬凌草甲素对食管癌、贲门癌、原发性肝癌及乳癌等有明显缓解症状作用，有稳定和缩小瘤体及延长病人生命的效果。与化疗合用，可减轻化疗药物的不良反应，提高疗效，对食管上皮重度增生也有一定的疗效。另外，冬凌草甲素对急性喉炎、急性化脓性扁桃体炎有显着疗效，对慢性支气管炎及慢性咽炎等也有良好效果。
冬凌草甲素具有很好的生物活性，但由于水溶性差，生物利用度低，使其临床应用受到了限制.而通过应用纳米给药系统的原理改进剂型，能够克服这种缺陷，同时还能提高药效，提高药物靶向性。
硒元素是人体必需的微量矿物质元素，遍布于人体的各个组织器官，对提高免疫力和预防癌症非常重要。由于人体无法自行合成硒元素且没有能够大量储存硒元素的器官，所以需要不断地从食物中摄入硒元素。人体内硒元素的代谢平衡对人体许多器官、组织的结构功能和生理功能都有着重要的保护作用和促进作用。当人体缺乏硒元素的时候，会导致人体免疫能力的下降，导致各种生理上的疾病，还会引起人类精神上的萎靡不振，进一步引起心理疾病，严重威胁人类健康。另外，硒还被称为化学元素中的抗癌之王，能很好的抑制癌症的发生，另一方面硒也是目前发现的最为重要的抗衰老元素。而缺硒已经成为人类健康的一大威胁，各国政府也越来越重视人体硒元素的摄取量，将补硒列为一项重要的营养指标。目前有大量的补硒产品已经面世并向消费者出售，比如富硒螺旋藻，各种补硒的胶囊和各种补硒的口服液等等。总的来说，硒具有清除自由基、抵抗衰老、保护肝脏、抵抗有害重金属、抗辐射、免疫调节和预防癌症等作用，且其对肿瘤病人的放化疗也有明显的辅助治疗作用。
近年来，纳米药物的制备及其抗癌效果的研究逐渐成为新的研究热点。单质硒以纳米态存在时具有良好的生物可利用性和生物活性，而毒性却很低，因此，纳米硒本身即可作为一类低毒高效的补硒剂。纳米硒的生物学功效已被认可，国家卫生部已批准纳米硒胶囊为保健食品(卫食健字1998第134号)。纳米硒良好的生物活性使其也成为一种潜在的抗癌，抗炎和免疫调节的药物。同时，纳米硒也可作为药物载体，借助于纳米硒良好的生物可利用性，将药物运送到作用位置，提高药物的生物利用率。
目前，现有技术中已有关于褪黑素纳米硒、葡苷聚糖纳米硒和甲壳素纳米硒、液相多、聚糖纳米硒的相关报道，但采用冬凌草甲素功能化的纳米硒材料迄今仍无专利和文献报道。
发明内容
基于此，本发明的目的之一在于提供一种冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的制备方法。
解决上述技术问题的具体技术方案如下：
一种冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的制备方法，其包括如下步骤：
(1)将硒化合物溶于水中，得硒化合物溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇或二甲基亚砜中，得冬凌草甲素溶液；
(3)将还原剂溶于水中，得还原剂溶液；
(4)将稳定剂溶于水或体积分数为0.1％-10％的醋酸水溶液中，得稳定剂溶液；所述稳定剂为壳聚糖、透明质酸、透明质酸钠或纤维素衍生物中的至少一种；
(5)将硒化合物溶液、冬凌草甲素溶液和稳定剂溶液混合，再加入还原剂溶液，控制体系中硒化合物、冬凌草甲素、稳定剂和还原剂的浓度分别为0.01-10mM、10-10000μM、0.001％-10％和0.1-100mM，进行反应，直至体系中的颜色不再发生变化为止，即得冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物溶液。
在其中一些实施例中，步骤(5)中所述体系中硒化合物、冬凌草甲素、稳定剂和还原剂的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM。
在其中一些实施例中，步骤(5)中所述反应的条件为：于4℃-100℃下，进行静置、搅拌或超声处理。
在其中一些实施例中，步骤(1)中所述的硒化合物溶液中硒浓度为1-1000mM。
在其中一些实施例中，所述的硒化合物溶液中硒浓度为20-100mM。
在其中一些实施例中，步骤(2)中所述的冬凌草甲素溶液的浓度为1-100mM。
在其中一些实施例中，所述的冬凌草甲素溶液的浓度为10-100mM。
在其中一些实施例中，所述的冬凌草甲素溶液的浓度为10-60mM。
在其中一些实施例中，所述的冬凌草甲素溶液的浓度为20-60mM。
在其中一些实施例中，步骤(3)中所述的还原剂溶液的浓度为1-1000mM。
在其中一些实施例中，所述的还原剂溶液的浓度为20-100mM。
在其中一些实施例中，步骤(4)中所述的稳定剂溶液的浓度为0.1％-20％。
在其中一些实施例中，所述的稳定剂溶液的浓度为0.1％-5％。
在其中一些实施例中，步骤(1)中所述的硒化合物溶液中硒浓度为1-1000mM，冬凌草甲素溶液的浓度为1-100mM，还原剂溶液的浓度为1-1000mM，稳定剂溶液的浓度为0.1％-20％。
在其中一些实施例中，步骤(1)中所述的硒化合物溶液中硒浓度为20-100mM，冬凌草甲素溶液的浓度为10-60mM，还原剂溶液的浓度为20-100mM，稳定剂溶液的浓度为0.1％-5％。
在其中一些实施例中，所述还原剂为抗坏血酸、没食子酸、天门冬酰胺或亚硫酸钠等中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述硒化合物为亚硒酸、亚硒酸盐、酸式亚硒酸盐、硒代硫酸盐或二氧化硒中的至少一种。
在其中一些实施例中，所述冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将硒化合物溶于水中，得硒浓度为1-1000mM的硒化合物溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇或二甲基亚砜中，得浓度为1-100mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将还原剂溶于水中，得浓度为1-1000mM的还原剂溶液；所述还原剂为抗坏血酸、没食子酸、天门冬酰胺或亚硫酸钠中的至少一种；
(4)将稳定剂溶于水或体积分数为0.1％-10％醋酸水溶液中，得浓度为0.1％-20％的稳定剂溶液；
(5)将硒化合物溶液、冬凌草甲素溶液和稳定剂溶液混合，再加入还原剂溶液，控制体系中硒化合物、冬凌草甲素、稳定剂和还原剂的浓度分别为0.01-10mM、10-10000μM、0.001％-10％和0.1-100mM，并于4℃-100℃下，进行静置、搅拌或超声处理，直至体系中颜色不再发生变化为止，即得冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物溶液。
在其中一些实施例中，所述的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将硒化合物溶于水中，得硒浓度为1-1000mM的硒化合物溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇或二甲基亚砜中，得浓度为1-100mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将还原剂溶于水中，得浓度为1-1000mM的还原剂溶液；所述还原剂为抗坏血酸、没食子酸、天门冬酰胺或亚硫酸钠中的至少一种；
(4)将壳聚糖溶于体积分数为0.1％-10％醋酸水溶液中，得浓度为0.1％-20％的壳聚糖溶液；
(5)取硒化合物溶液、冬凌草甲素溶液、壳聚糖溶液和水混合，再加入还原剂溶液进行反应，控制体系中硒、冬凌草甲素、壳聚糖和还原剂的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM，并于4℃-100℃下，进行静置、搅拌或超声处理，直至体系中的颜色不再发生变化为止，即得冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物溶液。
在其中一些实施例中，所述的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将硒化合物溶于水中，得硒浓度为20-100mM的硒化合物溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇或二甲基亚砜中，得浓度为10-60mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将还原剂溶于水中，得浓度为20-100mM的还原剂溶液；所述还原剂为抗坏血酸、没食子酸、天门冬酰胺或亚硫酸钠中的至少一种；
(4)将壳聚糖溶于体积分数为1％-5％醋酸水溶液中，得浓度为0.1％-5％的壳聚糖溶液；
(5)取硒化合物溶液、冬凌草甲素溶液、壳聚糖溶液和水混合，再加入还原剂溶液进行反应，控制体系中硒、冬凌草甲素、壳聚糖和还原剂的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM，并于4℃-100℃下，进行静置、搅拌或超声处理，直至体系中的颜色不再发生变化为止，即得冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物溶液。
在其中一些实施例中，所述的冬凌草甲素溶液的浓度为20-60mM。
在其中一些实施例中，所述冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将硒化合物溶于水中，得硒浓度为1-1000mM的硒化合物溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于二甲基亚砜中，得浓度为1-100mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将还原剂溶于水中，得浓度为1-1000mM的还原剂溶液；所述还原剂为抗坏血酸、没食子酸、天门冬酰胺或亚硫酸钠等中的至少一种；
(4)将透明质酸或透明质酸钠溶于水中，得浓度为0.1％-20％的透明质酸溶液或透明质酸钠溶液；
(5)将硒化合物溶液、冬凌草甲素溶液和透明质酸溶液或透明质酸钠溶液混合，加水，再加入还原剂溶液，控制体系中硒化合物、冬凌草甲素、还原剂和透明质酸或透明质酸钠的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM，并于4℃-100℃下，进行静置、搅拌或超声处理，直至体系中颜色不再发生变化为止，即得冬凌草甲素修饰的纳米硒复合物溶液。
在其中一些实施例中，所述的冬凌草甲素溶液的浓度为10-100mM。
在其中一些实施例中，所述的稳定剂溶液的浓度为0.1％-5％。
在其中一些实施例中，所述制备方法还包括步骤(6)纯化：将冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物溶液进行透析，以去除未反应的原料；或将冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物溶液离心，取沉淀物，水清洗。
在其中一些实施例中，所述制备方法还包括步骤(7)干燥。
本发明的另一目的在于提供一种上述制备方法制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物。
本发明所述的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物及其制备方法具有以下优点和有益效果：
本发明经发明人大量的研究和实验，得出：以硒化合物、冬凌草甲素、特定的稳定剂和还原剂为原料，并控制体系中各原料的浓度进行反应，所制得的冬凌草甲素修饰纳米硒复合物粒径分布均匀(在10-2000nm之间)、水溶性好、稳定性佳，还具有良好的抗癌、抗炎、养颜抗衰及免疫调节等生物活性，水溶性显著优于冬凌草甲素，这提高了冬凌草甲素的生物利用率，故该复合物在食品保健以及医疗卫生领域有着潜在的应用前景；另外，所述制备方法还具有简便易行，适宜工业化生产的优点。
附图说明
图1为实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的红外吸收图谱；
图2为实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的粒径分布图；
图3为实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物表面的Zeta电位(A)和其在4℃冰箱储存两个月内的粒径变化情况(B)；
图4为实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的透射电镜图；
图5为实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物对癌细胞活性的影响结果图；
图6为冬凌草甲素水溶液图(无色液体，其中白色沉淀为无法溶解的冬凌草甲素)和修饰有冬凌草甲素的纳米硒复合物的水溶液图(橙黄色液体，无冬凌草甲素沉淀)。
具体实施方式
以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
本实施例一种冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将亚硒酸钠溶于水中，配制成20-100mM的亚硒酸钠溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成10-60mM冬凌草甲素溶液；
(3)将抗坏血酸溶于水中，配制成20-100mM的抗坏血酸溶液；
(4)将壳聚糖溶于1-5％的醋酸溶液中配成0.1-5％的壳聚糖溶液，搅拌溶解，静置后取上层清夜作为壳聚糖溶液待用；
(5)取50-200μl的亚硒酸钠溶液和10-50μl的冬凌草甲素溶液混合，随后加入100-500μl的壳聚糖溶液和1000-10000μl的蒸馏水，混匀，加入300-1500μl的抗坏血酸溶液，混合后，控制体系中亚硒酸钠、冬凌草甲素、壳聚糖和抗坏血酸的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM，在4℃冰箱静置过夜进行反应，得冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒溶液；
(6)将纳米硒溶液用透析袋以蒸馏水透析48h除去未反应的杂质，即可得到冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物。
实施例2
本实施例一种冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒的复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将亚硒酸溶于水中配成20-100mM的亚硒酸溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于DMSO中得到20-60mM冬凌草甲素溶液；
(3)将抗坏血酸溶于水配制成20-100mM的抗坏血酸溶液；
(4)将壳聚糖溶于体积分数为1-5％的醋酸溶液中配制成0.1-5％的壳聚糖溶液，超声溶解，并用440nm滤头过滤得壳聚糖溶液；
(5)随后取10-60μl的冬凌草甲素溶液与100-500μl的壳聚糖溶液混匀，再加入50-200μl的亚硒酸溶液和1000-10000μl的蒸馏水，混匀后加入300-1500μl的抗坏血酸溶液，混匀后，控制体系中亚硒酸、冬凌草甲素、壳聚糖和抗坏血酸的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM，在室温超声作用下反应至溶液不再变红为止，得冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒溶液；
(6)将纳米硒溶液直接离心并用蒸馏水清洗，即可得到纯化的粒径为10-2000nm冬凌草甲素功能化纳米硒复合物；或将该纳米硒溶液用透析袋透析除去未反应的物质，即可得到纯化的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒溶液，所得到的溶液冷冻干燥、真空干燥或离心之后作为固体保存，也可直接以液体形式保存于4℃冰箱中。
实施例3
本实施例一种冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒的复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将亚硒酸钠溶于水中，配制成20-100mM的亚硒酸钠溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成10-100mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将抗坏血酸溶于水中，配制成20-100mM的抗坏血酸溶液；
(4)将透明质酸钠溶于蒸馏水中，配制成0.1-5％的透明质酸钠溶液；
(5)将10-200μl的亚硒酸钠溶液、10-60μl的冬凌草甲素溶液和10-500μl的透明质酸钠溶液混匀，再加入10-200μl的抗坏血酸的溶液，最后加1000-10000μl的蒸馏水，控制体系中亚硒酸钠、冬凌草甲素、透明质酸钠和抗坏血酸的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM，室温搅拌下反应至溶液不再继续变红为止，得冬凌草甲素修饰的纳米硒溶液；
(6)将纳米硒溶液直接离心并用蒸馏水清洗，即可得到纯化的粒径为10-2000nm冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物；或将该纳米硒溶液用透析袋透析除去未反应的物质，即可得到纯化的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒溶液，所得到的溶液冷冻干燥、真空干燥或离心之后作为固体保存，也可直接以液体形式保存于4度冰箱中。
实施例4
本实施例一种冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒的复合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将二氧化硒溶于水中，配制成1-1000mM的二氧化硒溶液；
(2)将冬凌草甲素溶于甲醇中，配制成10-100mM的冬凌草甲素溶液；
(3)将亚硫酸钠溶于水中，配制成1-1000mM的亚硫酸钠溶液；
(4)将透明质酸溶于水中，搅拌溶解，配制成0.1-5％的透明质酸溶液；
(5)将10-1000μl的二氧化硒溶液和10-100μl的冬凌草甲素溶液混合，随后加入10-1000μl的透明质酸溶液和1000-10000μl的蒸馏水，混匀后，加入100-10000μl的亚硫酸钠溶液，控制体系中二氧化硒、冬凌草甲素、透明质酸和亚硫酸钠的浓度分别为0.5-5mM、10-1000μM、0.01％-1％和2-50mM，在搅拌下加热到100℃进行反应，得冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒溶液；
(6)将纳米硒溶液离心并用蒸馏水清洗，即可得到粒径为10-2000nm冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒复合物。
实施例5
一、实验目的
本实验通过红外分析对实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的结构进行表征。
二、实验方法
按照常规红外测定方法，分析鉴定实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的结构。
三、实验结果
红外吸收图谱结构参见图1，从图1可知：冬凌草甲素在1709.86cm-1处和1457.02cm-1处具有特征吸收峰(如图中A所示)，分别为冬凌草甲素分子中的羰基和六元碳环所引起的特征吸收。在壳聚糖稳定的纳米硒中并不存在这两处吸收峰(如图中B所示)，但在冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒的红外吸收图谱中，类似的在1688.29cm-1处和1461.78cm-1处出现了强吸收峰(如图中C所示)，说明在得到的产品中出现了冬凌草甲素的特征吸收峰，即说明冬凌草甲素被功能化修饰到了纳米硒上。其中，冬凌草甲素修饰到纳米硒上之后，其羰基的吸收峰从1709.86cm-1蓝移到了1688.29cm-1，说明该修饰过程对羰基的影响较大，而相反对六元碳环的影响较小，说明冬凌草甲素在修饰纳米硒时很可能是通过其羰基与纳米硒相连接。
实施例6
一、实验目的
本实验分析测定实施例1所制得的一系列不同粒度的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的粒径。
二、实验方法
采用纳米粒度仪分析测定实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的粒径。
三、实验结果
粒径分析结果参见图2，从图2可知：实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的粒径分布在10nm-2000nm之间。
实施例7
一、实验目的
本实验分析研究实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的稳定性。
二、实验方法
本实验通过测定冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物表面的Zeta电位和其在4℃冰箱储存两个月内的粒径变化情况来分析研究复合物的稳定性。
三、实验结果
结果参见图3，从图3(A)可知：实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的平均zeta电位为45mV，而根据文献报道绝对值大于30mV即说明纳米颗粒很稳定，说明实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物很稳定；从图3(B)可知：两个月内该复合物粒径变化很小，这进一步说明了其具有良好的稳定性。
实施例8
一、实验目的
本实验分析测定实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的形貌。
二、实验方法
采用透射电镜分析测定实施例1不同配方所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的形貌。
三、实验结果
结果参见图4，从图4可知：实施例1中按照反应物的不同配比所得到的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的形貌均为球形，但粒径会随反应物配比不同而变化。图4中所示3种不同配比得到的3中冬凌草甲素功能化纳米硒的平均粒径分别为10nm、60nm和100nm左右，说明实施例1可以成功制备球形的冬凌草甲素功能化修饰的球形纳米硒粒子，且该纳米硒粒子粒度分布均匀，稳定性好，适于长期保存。
实施例9
一、实验目的
本实验分析研究实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的生物活性。
二、实验方法
本实验检测实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物对癌细胞活性的影响，所述癌细胞具体为：食道癌KYSE-150细胞、Ec-9706细胞、结肠癌Coco-2细胞和肝癌HepG2细胞；
具体检测方法为：MTT细胞活性检测法。
三、实验结果
结果参见图5，从图5可知：实施例1所制得的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物对食道癌KYSE-150细胞、Ec-9706细胞、结肠癌Coco-2细胞和肝癌HepG2细胞均有很好的抑制作用，冬凌草甲素功能化纳米硒作用48h对癌细胞抑制作用的IC50值在10-100μM，而据文献报道，纳米硒本身对癌细胞72h抑制作用的IC50值在200-300μM之间(Biomaterials 34(2013)7106-7116；ACS Nano 6(2012)6578–6591)，说明修饰上冬凌草甲素之后，纳米硒的抗癌活性显著提高，显示了该复合物潜在的抗癌活性。
实施例10
一、实验目的
通过对比分析评价实施例1所得到的冬凌草甲素功能化修饰的纳米硒固体复合物的水溶性。
二、实验方法
本实验分为对照组和实验组，其中：
对照组为1mM冬凌草甲素水溶液，配制方法为：将1.44mg冬凌草甲素溶于4ml水中得1mM冬凌草甲素水溶液；
实验组为实施例1中方法得到的将1.68mg冬凌草甲素修饰到纳米硒上得到的冬凌草甲素功能化的纳米硒溶液。
具体分析方法：直接拍摄水溶液照片比较冬凌草甲素和冬凌草甲素功能化纳米硒的水溶性。
三、实验结果
从图6可以看出，A管中：1.44mg冬凌草甲素溶于水中有大量白色沉淀，说明冬凌草甲素水溶性非常低，在水中几乎不溶；B管中：所示橘红色的液体为实施例1中方法所得到的冬凌草甲素功能化纳米硒溶液，其中冬凌草甲素含量为1.68mg，溶液透明澄清，并无沉淀出现，说明冬凌草甲素被修饰到纳米硒上之后水溶性显著增强，所得到的冬凌草甲素功能化纳米硒水溶性良好。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。