技术领域
本发明涉及一种刺五加甙E的医药新用途，具体涉及刺五加甙E在制备肿 瘤多药耐药逆转剂、联合抗肿瘤药物应用于多药耐药性肿瘤的新用途。
背景技术
肿瘤是危害人类健康重大疾病之一，化疗是治疗肿瘤的主要手段。然而在肿 瘤的化疗过程中人们发现化疗药物会出现耐药性，而且往往是多药耐药(multiple drugresistance,MDR)，这已成为肿瘤治疗失败最常见又难以解决的问题。因此， 寻找高效、低毒的逆转剂在抗肿瘤药物开发中有重要意义。
刺五加甙E是我国传统中药刺五加的重要成分之一，来源十分广泛，并且 具有多种生物活性，例如抗疲劳、抗辐射、抗应激、耐缺氧、提高机体对温度变 化的适应力、解毒作用、抗心律失常、改善大脑供血量、调节血压、止咳、祛痰、 抗炎、抗菌和抗病毒等作用。近期还发现其具有抗肿瘤作用，但是其对多药耐药 性肿瘤细胞的增殖抑制作用尚未有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供刺五加甙E新的药物用途。
中药刺五加的重要成分之一刺五加甙E，分子式为C35H48O16，其化学结构式如下：
其特征在于，其作为肿瘤多药耐药性逆转剂的应用。
本发明所提供的刺五加甙E不但具有杀灭肿瘤细胞的作用，而且能够逆转肿瘤 细胞多药耐药性。可作为肿瘤化疗药物的增效剂，从而提高多耐药性肿瘤细胞对 化疗药物的敏感性，提高化疗药物的杀癌细胞效应，应用前景广泛。
附图说明
图1刺五加甙E对多药耐药性细胞MCF-7/ADM的逆转作用；
图2刺五加甙E对MCF-7/ADM细胞内阿霉素蓄积量的影响；
图3刺五加甙E对MCF-7/ADM细胞内耐药基因MDR1表达的影响。
具体实施方式
实施案例1：刺五加甙E对多药耐药性人乳腺癌细胞MCF-7/ADM的逆转作用
将对数生长期的MCF-7/ADM细胞接种于96孔板中，接种密度约为每孔5 000个细胞。培养24h后，分组加入药物，一组加入10μM刺五加甙E和0-50μM 的阿霉素；另一组加入0-50μM的阿霉素，继续培养48h。培养结束后每孔加入 5g·L-1的MTT溶液20μL，继续培育4h。吸去培养基，每孔加入150μL 的DMSO，振荡，混匀1。用酶标仪在492nm处测定各孔OD值，记录结果。 以细胞存活率对剂量作图求IC50值。
实验结果如图1所示，MCF-7/ADM细胞经过10μM刺五加甙E处理之后， 该细胞株对化疗药物阿霉素的IC50值从34.7μM降低到6.3μM，逆转倍数为约5.5 倍。说明刺五加甙E具有提高阿霉素对耐药人乳腺癌细胞MCF-7/ADM的细胞 毒性作用，即可逆转肿瘤细胞的多药耐药性。
实施案例2：刺五加甙E对MCF-7/ADM细胞内阿霉素蓄积量的影响
将对数生长期的MCF-7和MCF-7/ADM细胞接种于6孔板中，接种密度约 为1.0×105个细胞/ml，孵育24小时。对照组加入10μM的阿霉素，其他各组分 别加入10μM的阿霉素和10μM的刺五加甙E，继续培养3小时。离心细胞， PBS洗涤3次，加入0.5MHCl-50％乙醇溶液，破碎细胞，12000r/min离心，取 上清，用荧光分光光度计在470/590nm处测荧光强度，计算阿霉素含量。
实验结果表明(图2)，刺五加甙E可显著影响阿霉素在MCF-7/ADM细胞 内的蓄积量。加入10μM的刺五加甙E后，使得细胞内阿霉素的蓄积量提高了 2.3倍。结果说明刺五加甙E是通过增加抗肿瘤药物的在细胞内的蓄积量而实现 逆转肿瘤细胞的多药耐药性的作用。
实施案例3：刺五加甙E对多药耐药基因MDR1表达水平的影响
将对数生长期的MCF-7/ADM细胞接种到6孔板中，密度为4×105个细胞/ 孔，培养24小时后分别加入10、20μM的刺五加甙E，继续培养48小时。PBS 洗涤3次，收集细胞，提取总RNA，收集进行逆转录。B-actin引物： 5’-GTTGCTATCCAGGCTGTGC-3’,5’-GCATCCTGTCGGCAATGC-3’；MDR1 引物:MDR1-F为5’-CATCGAGTCACTGCCTAATAAATA-3’,MDR1-R为 5’-GCTTCTTGGACAACCTTTTCACT-3’。反应条件:94℃预变性3min；94℃30 s,60℃退火30s，72℃延伸1min,30个循环。B-actin为内参对PCR产物凝胶电 泳。凝胶电泳结束后成像，分析结果。
实验结果如图3所示，与空白对照相比，在加入不同浓度的刺五加甙E后， MCF-7/ADM细胞内的MDR1表达量明显下调，并呈剂量相关性。结果说明刺五 加甙E逆转肿瘤细胞的多药耐药性的作用可能是通过抑制多药耐药基因MDR1 的表达来实现的。