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1、(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510888090.7 (22)申请日 2015.12.07 A61K 31/495(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C07D 295/088(2006.01) C07D 233/60(2006.01) A61K 31/4164(2006.01) (71)申请人 南京海澳斯生物医药科技有限公司 地址 211111 江苏省南京市建邺区奥体大街 69 号新城科技大厦 03 幢 3 层 (72)发明人 丁秋菊 (54) 发明名称 组合物及其在抗肿瘤药物中的应用 (57) 摘要 本发明涉及有机合成和药物化学领域， 。
2、具体 涉及组合物及其在抗肿瘤药物中的应用。本发明 公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表 明， 本发明的组合物具有抗肿瘤的作用， 具有开发 抗肿瘤药物的价值。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 CN 105343079 A 2016.02.24 CN 105343079 A 1/1 页 2 1.一种组合物， 其特征为该组合物由化合物 III 和化合物 IV 组成， 该组合物中化合物 III 和化合物 IV 的质量百分数分别为 40和 60， 2.如权利要求 1 所述的组合物的制备方法， 其特征为 ： 将化合物 I。
3、II 的粉末和化合物 IV 的粉末按照质量百分数分别为 40和 60充分混合。 3.如权利要求 1 所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用。 4.如权利要求 3 所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用， 其特征为 ： 所述肿瘤为消化系 统肿瘤。 5.如权利要求 4 所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用， 其特征为 ： 所述消化系统肿瘤 为肝癌、 胰腺癌、 结肠癌或者胃癌。 6.如权利要求 3 所述的组合物在抗肿瘤药物中的应用， 其特征为 ： 所述肿瘤为乳腺癌 或者肺癌。 权 利 要 求 书 CN 105343079 A 2 1/6 页 3 组合物及其在抗肿瘤药物中的应用 技术领域 0001 本发明涉及有机合成。
4、和药物化学领域， 具体涉及组合物、 制备方法及其用途。 背景技术 0002 癌症是对人类生命健康危害最大的疾病之一， 每年都有大量的人死于癌症。抗癌 药物的研发一直是药学研究的热点。抗肿瘤药物中有 74是天然产物或其衍生物， 如紫杉 醇及其衍生物就是目前临床上应用效果比较好的抗肿瘤药物。因此， 从天然产物中寻找化 合物或先导化合物并进行结构修饰获得其衍生物， 从而得到高效低毒的潜在药物最有重要 价值。 0003 本发明涉及的化合物 I 是一个 2011 年发表 (Antonella Maggio et al.,2011. Artalbic acid,a sesquiterpene with a。
5、n unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily.Tetrahedron Letters,52(2011)45434545) 的化合物， 我们对化合物I进行了结构修饰， 获得了两个新的衍生物即化合物III和化合物IV， 并用化 合物III和化合物IV制备了组合物并对该组合物抗肿瘤活性进行了评价， 其具有抗肿瘤活 性。 发明内容 0004 本发明公开了一个新的组合物， 该组合物由化合物 III 和化合物 IV 组成， 该组合 物中化合物 III 和化合物 IV 的质量百分数分别为 40和 60。 0005 说 明 书 CN。
6、 105343079 A 3 2/6 页 4 0006 药效学实验表明， 本发明的组合物具有较好的抗肿瘤作用。 0007 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明， 但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制， 而是由权利要求加以限定。 具体实施方式 0008 实施例 1 化合物 Artalbic acid 的制备 0009 化合物 Artalbic acid(I) 的制备方法参照 Antonella Maggio 等人发表的 文献 (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skel。
7、eton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily.Tetrahedron Letters,52(2011)45434545) 的方法。 0010 说 明 书 CN 105343079 A 4 3/6 页 5 0011 实施例 2 Artalbic acid 的 O- 溴乙基衍生物 (II) 的合成 0012 将化合物 I(266mg， 1.00mmol) 溶于 10mL 苯， 向溶液中加入四丁基溴化铵 (TBAB) (0.08g)， 1,2- 二溴乙烷 (3.760g， 20.00mmol) 和 6mL 的 50氢氧化钠溶液。混合物在 40 摄氏度。
8、搅拌 16h。16h 之后将反应液倒入冰水中， 立即用二氯甲烷萃取两次， 合并有机相 溶液。然后对有机相溶液依次用水和饱和食盐水洗涤 5 次， 再用无水硫酸钠干燥， 最后减 压浓缩去除溶剂得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化 ( 流动相为 ： 石油醚 / 丙酮 100:1.0， v/v)， 收集棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物 II 的棕色粉末 (272mg， 73 )。 0013 1H NMR(500MHz,DMSO-d 6)11.41(s,1H),6.06(s,1H),5.76(s,1H),4.99(s,1H),4 .71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.。
9、54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H),2 .10(s,1H),1.64(s,3H),1.54(s,1H),1.44(s,2H),0.95(s,3H). 0014 13C NMR(125MHz,DMSO-d6)201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.0 5(s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s) ,33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s). 0015 HRMS(E。
10、SI)m/zM+H+calcd for C17H26BrO4:373.1014 ； found 373.1017. 0016 0017 实施例 3 Artalbic acid 的 O-( 哌嗪基 ) 乙基衍生物 (III) 的合成 0018 将化合物 II(187mg， 0.5mmol) 溶于 25mL 乙腈当中， 向其中加入无水碳酸钾 说 明 书 CN 105343079 A 5 4/6 页 6 (345mg， 2.5mmol)， 碘化钾 (84mg， 0.5mmol) 和无水哌嗪 (3446mg， 40mmol)， 混合物加热回流 4h。反应结束后将反应液倒入 20mL 冰水中， 用等量二。
11、氯甲烷萃取 2 次， 合并有机相。依次 用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相， 再用无水硫酸钠干燥， 减压浓缩去除溶剂得到 产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化 ( 流动相为 ： 石油醚 / 丙酮 100:1.5， v/v)， 收集 淡棕色集中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物 III 的棕色粉末 (124.7mg,66 )。 0019 1H N M R ( 5 0 0 M H z , D M S O - d 6 ) 1 1 . 5 6 ( s , 1 H ) , 6 . 2 2 ( d t , J 3.9,1.8Hz,1H),5.92(dt,J 4.0,1.9Hz,1H),4.914.80(m,2H。
12、),4.76 4.67(m,1H),3.65(t,J 7.6Hz,2H),2.80(m,5H),2.70-2.62(m,6H),2.45(td,J 12.2,0.6Hz,4H),2.23(dd,J24.7,17.4Hz,1H),1.79(t,J2.0Hz,3H),1.721.51(m,3 H),1.20(s,1H),1.10(s,3H). 0020 13C NMR(125MHz,DMSO-d6)202.02(s),176.02(s),149.24(s),148.28(s),117.2 0(s),109.50(s),81.95(s),67.17(s),57.81(s),54.66(s),54.3。
13、1(s),45.42(s),41.39(s) ,39.17(s),38.98(s),35.78(s),30.84(s),20.53(s),18.53(s). 0021 HRMS(ESI):m/zM+H+calcd for C21H35N2O4:379.2597 ； found:379.2592。 0022 0023 实施例 4 Artalbic acid 的 O-( 咪唑基 ) 乙基衍生物 (IV) 的合成 0024 将化合物 II(187mg， 0.5mmol) 溶于 25mL 乙腈当中， 向其中加入无水碳酸钾 (345mg， 2.5mmol)， 碘化钾(84mg， 0.5mmol)和咪唑(。
14、870mg， 10mmol)， 混合物加热回流4h。 反 应结束后将反应液倒入 35mL 冰水中， 用等量二氯甲烷萃取三次， 合并有机相。依次用水和 饱和食盐水洗涤合并之后的有机相， 再用无水硫酸钠干燥， 减压浓缩去除溶剂得到产物粗 品。产物粗品用硅胶柱层析纯化 ( 流动相为 ： 石油醚 / 丙酮 100:0.6， v/v)， 收集褐色集 中洗脱带并挥去溶剂即得到化合物 IV 的棕色粉末 (109.8mg,61 )。 0025 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)19.91(s,1H),8.07(s,1H),7.34(s,1H),6.95(s,1H),6 .28(s,1H),5.93(。
15、s,1H),4.86(d,J12.0Hz,2H),4.77(s,1H),4.19(d,J16.7Hz,2H),4. 04(s,2H),2.81(s,1H),2.71(s,2H),2.64(s,2H),2.14(s,1H),1.83(d,J 12.0Hz,5H),1. 66(s,1H),1.14(s,3H). 0026 13C NMR(125MHz,DMSO-d6)202.12(s),176.12(s),149.34(s),148.38(s),139.9 6(s),128.96(s),119.59(s),117.28(s),109.63(s),82.08(s),67.99(s),57.89(s)。
16、,44.05 说 明 书 CN 105343079 A 6 5/6 页 7 (s),41.50(s),39.28(s),39.04(s),35.89(s),30.95(s),20.64(s),18.64(s). 0027 HRMS(ESI):m/zM+H+calcd for C20H29N2O4:361.2127 ； found:361.2122。 0028 0029 实施例 5 体外抗肿瘤活性筛选 0030 筛选细胞株为HepG2(人肝癌细胞)， PANC-1(人胰腺癌)， MCF-7(人乳腺癌细胞)， SW620( 人结肠癌细胞 )， A549( 人肺癌细胞 )， HGC-27( 人胃癌细。
17、胞 )， LO2( 人正常肝实质细 胞 )。 0031 组合物的制备 ： 将研磨之后过 200 目网的 40mg 化合物 III 的粉末和研磨之后过 200 目网的 60mg 化合物 IV 的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到 100mg 组 合物， 使用时用水溶解这 100mg 的组合物即得到组合物的溶液。 0032 实验方法 ： 0033 取对数生长期状态良好的细胞， 胰蛋白酶消化， 制成 5104细胞 /mL 的悬液。将 细胞悬液移入 96 孔培养板， 每孔 100L， 置 37、 5 CO2条件下培养 24h。 0034 将受试化合物 III、 化合物 IV 和组合物分别用 。
18、DMSO 配制成一定浓度的母液， 再用 RPMI1640 培养基将衍生物母液稀释成不同作用浓度的稀释液。移去旧培养基， 加入不同浓 度的含药培养基， 每孔 100L。另设空白对照组。药物作用 48h 后， 吸弃含药培养基， 于每 孔加入无血清、 无酚红 1640 培养基 100L， 再加入 MTT 溶液 (5mg/mL)10L， 继续温育 4h。 0035 吸去各孔内上清液， 每孔加入 DMSO 150L， 暗处振荡 10min， 使结晶物充分溶解， 酶标仪测定 490nm 处各孔的光吸收值 (OD 值 )， 计算细胞的增殖抑制率 ： 抑制率 ( ) (1- 用药组平均 OD 值 / 空白对照。
19、组平均 OD 值 )100。应用 SPSS16.0 软件进行数据处 理并计算癌细胞增殖的半数抑制浓度 (IC50)， 结果见表 1。 0036 表 1 化合物或组合物对 7 种癌细胞的体外增殖抑制作用 0037 说 明 书 CN 105343079 A 7 6/6 页 8 0038 如表 1 结果所示， 组合物对不同的肿瘤细胞均具有一定的增殖抑制作用 ； 而对于 正常的肝实质细胞LO2的IC50非常大(40M)、 没有增殖抑制作用， 说明安全性非常高。 化 合物 III 和化合物 IV 对于所有肿瘤细胞没有增殖抑制作用。组合物表现出较好的抗癌活 性， 具有开发抗癌药物的潜力。 0039 实施例 6 本发明所涉及组合物片剂的制备 0040 取 2 克组合物， 加入制备片剂的常规辅料 18 克， 混匀， 常规压片机制成 100 片。 0041 实施例 7 本发明所涉及组合物胶囊的制备 0042 取 2 克组合物， 加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉 18 克， 混匀， 装胶囊制成 100 粒。 说 明 书 CN 105343079 A 8 。