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1、10申请公布号CN104107324A43申请公布日20141022CN104107324A21申请号201410367290322申请日20140729A61K36/8969200601A61P3/1020060171申请人上海中医药大学附属曙光医院地址200021上海市黄浦区普安路185号72发明人陆灏陶枫姚政蔡淦陈清光夏卉莉李俊燕张振华江涛唐菁74专利代理机构上海晨皓知识产权代理事务所普通合伙31260代理人成丽杰54发明名称一种治疗2型糖尿病的中药复方制剂及其制备方法57摘要本发明涉及一种治疗2型糖尿病的中药复方制剂，由下列重量份的中药原料药制成党参545份，黄芪545份，山药545份。
2、，黄精545份，黄连19份，黄芩327份，葛根545份，鬼箭羽545份。本发明还涉及该中药复方制剂的制备方法称取各中药原料药后，加水煎煮，过滤，合并滤液并浓缩；然后离心，取上清液，浓缩，加入药学上可接受的辅料，以常规的中药制剂方法，制备成本发明的中药复方制剂的常规剂型。本发明所提供的中药复方制剂以“从脾论治”治则理论为指导，对2型糖尿病的临床防治具有益气养阴，健脾清热，活血降糖之功效，且安全有效、服量较少。51INTCL权利要求书1页说明书15页附图9页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书15页附图9页10申请公布号CN104107324ACN104107324。
3、A1/1页21一种治疗2型糖尿病的中药复方制剂，其特征在于，由下列重量份的中药原料药制成党参545份，黄芪545份，山药545份，黄精545份，黄连19份，黄芩327份，葛根545份，鬼箭羽545份。2根据权利要求1所述的治疗2型糖尿病的中药复方制剂，其特征在于，由下列重量份的中药原料药制成党参15份，黄芪15份，山药15份，黄精15份，黄连3份，黄芩9份，葛根15份，鬼箭羽15份。3权利要求1所述的治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，包含以下步骤1称取权利要求1所述重量份的各中药原料药党参、黄芪、山药、黄精、黄连、黄芩、葛根和鬼箭羽；2加水煎煮，过滤，合并滤液，浓缩至20时相。
4、对密度为053；3离心，取上清液，浓缩至0654G生药/G浸膏；4加糊精制粒，或进一步加入药学上可接受的辅料，以常规的中药制剂方法，制备成本发明的中药复方制剂的常规剂型。4根据权利要求3所述的治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，步骤2中加水煎煮13次，每次加水515倍体积量，每次煎煮1545分钟。5根据权利要求3所述的治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，步骤3中离心时，以4000RPM的转速离心3060分钟。6根据权利要求3所述的治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，步骤4中制备本发明的中药复方制剂的颗粒剂时，加入0654倍体积量糊精制粒。7根据权。
5、利要求3所述的治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，步骤4中所述的常规剂型为颗粒剂、煎剂、合剂或口服液。权利要求书CN104107324A1/15页3一种治疗2型糖尿病的中药复方制剂及其制备方法技术领域0001本发明涉及中药领域，特别涉及一种治疗2型糖尿病的中药复方制剂及其制备方法。背景技术00022009年，中国糖尿病和糖尿病前期患病率分别为97和155，已超越美国糖尿病发病率83。2013年3月14日上海市卫生计生委透露，上海糖尿病患病率高于全国同期水平，且患病年轻化趋势明显，据推算全市约有180万糖尿病患者。糖尿病现已成为继肿瘤、心脑血管疾病之后威胁人类健康和生命安全的第三。
6、位重大疾病。糖尿病患者需终身监测及治疗，如果血糖不能得到良好的控制，可引起全身各脏器并发症，并最终导致心脑血管疾病、血脂异常、失明、肾功能衰竭和截肢等严重并发症，危害人民群众的健康和生命，造成巨大的社会负担和经济负担。00032型糖尿病是一种终身存在并缓慢进展的疾病，其发病过程是正常糖耐量糖调节受损2型糖尿病，发病的中心环节是胰岛素抵抗和胰岛细胞功能缺陷。胰岛素抵抗贯穿在2型糖尿病发生、发展的始终。同时，胰岛素抵抗也是多种心血管代谢疾病的共同病理基础，包括高血压、冠心病及肥胖等。目前糖尿病治疗领域，针对胰岛素抵抗的药物主要有双胍类和噻唑烷二酮类，前者有较多的胃肠道反应且肝肾功能不全者不能使用；。
7、后者的安全性近年受到质疑，其与心血管死亡、肿瘤发生、骨折等的关系有待进一步厘清。因此，寻找一种安全有效的改善胰岛素抵抗的药物十分必要。而中医药在这方面已被证实是有效的。00042型糖尿病属于中医“消渴”范畴，对于消渴多从三消论治。而随着中医学的发展，认识到多数2型糖尿病患者，大多没有典型的“三多一少”症状，却多有形体肥胖，神疲倦怠，肢体乏力，面色萎黄便秘或腹泻等症状，这些症状与脾的运化功能失常有关。“三消论治”已不能解决糖尿病中医治疗的临床问题。0005脾为“后天之本”，主运化。人体水谷精微之运化输布、滋养周身，皆以脾为枢纽。从脾论治消渴，理论渊源可以追溯到黄帝内经。素问奇病论曰“此肥美之所发。
8、也，此人必数食甘美而多肥也，肥者令人内热，甘者令人中满，故其气上溢，转为消渴。”明确指出消渴病的发生是由于过食肥甘厚味，与现代糖尿病的最主要病因营养过剩导致肥胖及胰岛素抵抗完全一致。其症候表现“中满”，是指脾失健运，肥甘厚味郁久化热，燥热内生，发为消渴。“从脾论治”是近年提出的糖尿病中医治疗理论，但缺乏系统的研究，比如“从脾论治”的中药方药的临床疗效点在哪里、疗效如何以及中药方药可能的作用机制是什么。0006临床上2型糖尿病以阴虚内热为核心病机，多采用具有养阴、清热、补肾、疏肝等功效的中药治疗本病。尽管国内这方面的研究比较丰富，也有上市药物，但仍存在不足。譬如，多数中药复方把改善患者症状作为主。
9、要疗效指标，对血糖的影响有限，对糖尿病的基础病理生理胰岛素抵抗的影响也缺乏研究；部分上市中成药药味冗杂，日服用剂量偏大；部分上市中成药药味精简，但价格昂贵，不利于推广。说明书CN104107324A2/15页4发明内容0007本发明的目的在于提供一种安全有效、服量较少且价格适度的治疗2型糖尿病的中药复方制剂。0008本发明的另一目的在于提供上述治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法。0009为解决上述技术问题，本发明所提供的治疗2型糖尿病的中药复方制剂，由下列重量份的中药原料药制成党参545份，黄芪545份，山药545份，黄精545份，黄连19份，黄芩327份，葛根545份，鬼箭羽545份。0。
10、010优选地，本发明所提供的治疗2型糖尿病的中药复方制剂，由下列重量份的中药原料药制成党参15份，黄芪15份，山药15份，黄精15份，黄连3份，黄芩9份，葛根15份，鬼箭羽15份。0011本发明还提供上述治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法，包含以下步骤00121称取下列重量份的各中药原料药党参545份，黄芪545份，山药545份，黄精545份，黄连19份，黄芩327份，葛根545份，鬼箭羽545份；00132加水煎煮，过滤，合并滤液，浓缩至20时相对密度为053；00143离心，取上清液，浓缩至0654G生药/G浸膏；00154加糊精制粒，或进一步加入药学上可接受的辅料，以常规的中药制剂方。
11、法，制备成本发明的中药复方制剂的常规剂型，如颗粒剂、煎剂、合剂、口服液等。0016优选地，在上述制备本发明的治疗2型糖尿病的中药复方制剂的制备方法中步骤2中加水煎煮13次，每次加水515倍体积量，每次煎煮1545分钟；步骤3中离心时，以4000RPM的转速离心3060分钟；步骤4中制备本发明的中药复方制剂的颗粒剂时，加入0654倍体积量糊精制粒。此外，本发明的中药复方制剂可制成的常规剂型可为颗粒剂、煎剂、合剂、口服液等。0017对于2型糖尿病的治疗，在素问奇病论中记载“此人必数食甘美而多肥也，肥者令人内热，甘者令人中满，故其气上溢，转为消渴”，明确指出过食肥甘厚味，损伤脾胃，气阴不足，燥热内盛。
12、，进而发为消渴。与糖尿病的主要病因胰岛素抵抗一致。因此，本发明认为针对糖尿病的胰岛素抵抗病因，应当“从脾论治”，既要看到糖尿病“气阴不足”正气虚的一面，也要重视“燥热内盛”邪气盛的一面，还要兼顾“脾络受伤”的一面，斡旋中州，恢复升降，攻补兼施，综合考虑益脾气、泄脾热、养脾阴、通脾络等治法辨证论治，才能契合糖尿病的复杂病机，提高改善胰岛素抵抗的效应。现有的“从脾论治”中药复方尚缺乏系统的研究，局限于理论探讨或临床观察阶段，其改善胰岛素抵抗的作用、可能的作用靶点以及作用机制尚未明确。0018本发明的中药复方制剂相对于现有的用于治疗2型糖尿病的中药复方制剂，在原料药味的选择上以“从脾论治”治则理论为。
13、指导，将古方“补脾胃泻阴火升阳汤”化裁为本申请的中药复方制剂SGNFM01，选取黄芪、党参“益脾气”，黄连、黄芩、葛根“清脾热”，山药、黄精“养脾阴”，鬼箭羽、葛根“通脾络”，以益脾气药物组为君药，并以清脾热、养脾阴药物组及通脾络药物组为臣药，将各治法有机结合，使其更符合2型糖尿病的临床防治，共奏益气养阴，健脾清热，活血降糖之功效。0019在药效作用方面，首先，本发明通过动物实验，证明本发明所提供的中药复方制剂说明书CN104107324A3/15页5能降低糖尿病大鼠和DB/DB糖尿病小鼠的血糖；改善糖尿病大鼠和DB/DB糖尿病小鼠胰岛素抵抗反映在糖尿病大鼠和DB/DB糖尿病小鼠胰岛素抵抗的指。
14、标HOMAIR，糖尿病大鼠葡萄糖胰岛素钳夹技术证明葡萄糖输注率GIR；改善糖尿病大鼠和DB/DB糖尿病小鼠胰岛细胞功能反映大鼠和小鼠分泌胰岛素能力的血清胰岛素浓度，代表胰岛细胞再生的关键因子PDX1，DB糖尿病小鼠胰腺组织病理形态改善；促进糖尿病大鼠肠促胰岛素的分泌；改善糖尿病大鼠和DB/DB糖尿病小鼠的脂代谢反映脂代谢的指标TG，并改善糖尿病小鼠肝脏的病理结构；影响糖尿病发病机制中胰岛素抵抗相关的多个差异基因的表达和多条通路的调节基因表达谱芯片分析；增强肝脏IRS2PI3KAKT信号通路活性上调糖尿病大鼠肝脏IRS2蛋白表达，以及IRS2、ARRESTIN2、GLUT2MRNA表达；上调DB。
15、小鼠肝脏AKT2蛋白表达，以及AKT2、PI3KP110MRNA表达，从而调节糖脂代谢，胰岛素抵抗得到改善。0020其次，本发明进一步地通过临床试验，证明本发明所提供的的中药复方制剂改善2型糖尿病患者和糖尿病前期患者的中医临床症状；对2型糖尿病患者的糖代谢起有益的调节作用代表患者血糖水平的金指标HBA1C；明显降低患者的胰岛素抵抗指数临床评价糖尿病患者胰岛素抵抗指数的关键指标HOMA2IR；改善患者的胰岛细胞功能的作用临床评价糖尿病患者胰岛功能的关键指标HOMA2B；提高患者GLP1水平，并抑制患者胰高糖素水平。附图说明0021图1是试验例1中，中药复方制剂改善2型糖尿病患者中医临床症状的试验。
16、结果图；0022图2是试验例2中，中药复方制剂调节2型糖尿病患者糖代谢、降低HBA1C的试验结果图；0023图3是试验例3中，中药复方制剂改善2型糖尿病患者胰岛素抵抗的试验结果图；0024图4是试验例4中，中药复方制剂改善糖尿病患者胰岛细胞功能的试验结果图；0025图5是试验例6中，中药复方制剂对糖尿病大鼠进行腹腔葡萄糖耐量试验结果图其中，图5A显示0分钟时各组大鼠的血糖值，图5B显示15分钟时各组大鼠的血糖值，图5C显示30分钟时各组大鼠的血糖值，图5D显示60分钟时各组大鼠的血糖值，图5E显示120分钟时各组大鼠的血糖值，图5F显示各组大鼠的葡糖糖曲线下面积；0026图6是试验例7中，中药。
17、复方制剂改善糖尿病大鼠腹腔胰岛素耐量试验结果图其中，图6A显示0分钟时各组大鼠的血糖值，图6B显示30分钟时各组大鼠的血糖值，图6C显示60分钟时各组大鼠的血糖值，图6D显示120分钟时各组大鼠的血糖值，图6E显示各组大鼠的葡糖曲线下面积；0027图7是试验例7中，糖尿病大鼠腹腔胰岛素耐量试验中降糖率的结果图其中，图7A显示30分钟时各组大鼠的降糖率，图7B显示60分钟时各组大鼠的降糖率，图7C显示120分钟时各组大鼠的降糖率；0028图8是试验例7中，糖尿病大鼠葡萄糖输注率的试验结果图；0029图9是试验例9中，糖尿病大鼠回肠组织GLP1合成表达的试验结果图其中，图说明书CN10410732。
18、4A4/15页691显示对照组，图92显示模型组，图93显示本制剂组；0030图10是试验例10中，中药复方制剂对DB/DB糖尿病小鼠腹腔葡萄糖耐量试验结果图其中，图101显示的是各组小鼠腹腔糖耐量各时间点的血糖值，图102显示的是各组小鼠葡萄糖曲线下面积；0031图11是试验例11中，中药复方制剂改善糖尿病小鼠的胰岛素抵抗的试验结果图其中，图11A显示各组小鼠的空腹血清血糖值；图11B显示各组小鼠的胰岛素抵抗指数；图11C显示各组小鼠空腹胰岛素值；图11D显示各组小鼠胰高血糖素值；0032图12是试验例12中糖尿病小鼠胰腺组织病理切片结果图；其中，图121显示对照组，图122显示模型组，图1。
19、23显示本发明的中药复方制剂组；0033图13是试验例13中糖尿病小鼠肝脏组织病理切片结果图；其中，图131显示对照组，图132显示模型组，图133显示本发明的中药复方制剂组；0034图14是试验例14中糖尿病大鼠肝脏组织和血液组织的基因表达谱结果图其中，图14A显示SGNFM01组和模型对照组血液组织的火山图，14B显示SGNFM01组和模型对照组肝脏组织的火山图，图14C显示SGNFM01治疗后的差异基因涉及的与糖尿病有关的信号通路；0035图15是试验例15中糖尿病大鼠各组肝组织IRS2蛋白表达的比较；0036图16是试验例15中糖尿病大鼠各组肝组织AKT2蛋白表达的比较；0037图17。
20、是试验例15中各组糖尿病大鼠肝组织中IRS2、AKT2蛋白相对表达量的比较；其中，17A显示各组大鼠肝组织中IRS2蛋白相对表达量的比较；17B显示各组大鼠肝组织中AKT2蛋白相对表达量的比较；0038图18是试验例15中DB小鼠各组肝组织IRS2蛋白表达的比较；0039图19是试验例15中DB小鼠各组肝组织AKT2蛋白表达的比较；0040图20是试验例15中DB小鼠肝组织中IRS2、AKT2蛋白相对表达量的比较其中，20A显示DB小鼠肝组织中IRS2蛋白相对表达量的比较；图20B显示DB小鼠肝组织中AKT2蛋白相对表达量的比较；0041图21是试验例15中，糖尿病大鼠各组肝组织MRNA表达的。
21、比较其中，图21A显示糖尿病大鼠各组肝组织IRS2MRNA表达的比较，图21B显示糖尿病大鼠各组肝组织GLUT2MRNA表达的比较，图21C显示糖尿病大鼠各组肝组织ARRESTIN2MRNA表达的比较，图21D显示糖尿病大鼠各组肝组织AKT2MRNA表达的比较，图21E显示糖尿病大鼠各组肝组织PI3KP110MRNA表达的比较；0042图22是试验例15中DB小鼠各组肝组织MRNA表达的比较其中，图22A显示DB小鼠各组肝组织IRS2MRNA表达的比较，图22B显示DB小鼠各组肝组织PI3KP110MRNA表达的比较，图22C显示DB小鼠各组肝组织AKT2MRNA表达的比较，图22D显示DB小。
22、鼠各组肝组织GLUT2MRNA表达的比较，图22E显示DB小鼠各组肝组织ARRESTIN2MRNA表达的比较。具体实施方式0043以下通过制备实施例来进一步阐述本发明的中药复方制剂的制备方法。实施例1制备本发明的中药复方制剂颗粒剂简称SGNFM01说明书CN104107324A5/15页700441称取下列质量的中药饮片原料0045党参15克，上海雷允上中药饮片厂；产地甘肃；0046黄芪15克，上海雷允上中药饮片厂；产地内蒙；0047山药15克，上海国药制品有限公司；产地广西；0048黄精15克，上海康桥中药饮片有限公司；产地湖南；0049黄连3克，上海雷允上中药饮片厂；产地四川；0050黄芩。
23、9克，上海养和堂中药饮片有限公司；产地内蒙；0051葛根15克，上海国药制品有限公司；产地安徽；0052鬼箭羽15克，上海同济堂药业有限公司；产地浙江；00532加10倍体积量水，煎煮2次，每次30MIN，过滤，合并滤液，浓缩至密度为106620；00543离心4000RPM，45MIN，取上清液，浓缩至18G生药/G浸膏；00554加18倍体积量糊精制粒；用10目和80目筛整粒，取能通过10目且不能通过80目筛的颗粒为合格颗粒。0056实施例2制备本发明的中药复方制剂合剂00571称取下述重量份的各中药原料药党参10G、黄芪10G、山药10G、黄精10G、黄连2G、黄芩6G、葛根10G和鬼箭。
24、羽10G；00582加3倍药物体积量的清水浸泡1小时，煎煮3次，过滤，合并滤液，浓缩至20时相对密度为05；00593离心，取上清液，在100下用清水回流提取两次，每次3小时；00604提取液减压浓缩后，加入无水乙醇，420下过夜沉淀；00615取滤液，7080温度下浓缩至原体积的1/31/4，即到本合剂，即为合剂。0062实施例3制备本发明的中药复方制剂煎剂00631称取下述重量份的各中药原料药党参45G、黄芪45G、山药45G、黄精45G、黄连9G、黄芩27G、葛根45G和鬼箭羽45G；00642加3倍药物体积量的清水浸泡1小时，移入砂锅中大火煮沸，然后文火煎煮1小时，过滤出药液；0065。
25、3再加入2倍药物体积量的清水继续煎煮1小时，滤出药液；00664合并滤液，两次共得煎剂500ML，饭后1小时服用，一日两次服完。0067实施例4制备本发明的中药复方制剂口服液00681称取下述重量份的各中药原料药党参150G、黄芪150G、山药150G、黄精150G、黄连30G、黄芩90G、葛根150G和鬼箭羽150G；00692加3倍药物体积量的清水浸泡1小时，移入砂锅中大火煮沸，然后文火煎煮1小时，过滤出药液；00703再加入2倍药物体积量的清水继续煎煮1小时，滤出药液；00714合并滤液，浓缩至密度为106620；00725离心4000RPM，45MIN，取上清液，浓缩至18G生药/G浸。
26、膏。00736加水至2000ML，搅匀，静置，过滤，灌封，得到口服液。说明书CN104107324A6/15页80074以下通过试验例阐述本发明中药复方制剂的有益效果，包括本发明实施例1所制备的颗粒剂SGNFM01的临床疗效试验和动物药效学试验。0075试验例1本发明制剂SGNFM01对2型糖尿病患者的中医临床症状的改善00761研究方法采用随机、双盲、安慰剂对照的方法进行研究。0077随机方法对符合纳入标准的研究对象采用随机数字表法，按11比例随机分组。首先编制病例随机分配表，根据病例随机分配表，取得临床研究随机号，分别纳入A、B组。0078样本含量目前成人糖尿病患病率约为55，根据本研究的。
27、实际情况，拟进行小样本临床研究，治疗组和对照组各30例患者。考虑可脱落因素，再增加20样本量。最终设计入选36对，共72例临床病例。0079盲法设计本研究采用双盲安慰剂对照方法。按照双盲临床试验规范化操作步骤，对试验药和对照药进行重新包装和分配，包括应急信件等。00802病例选择方法008121纳入标准1凡符合糖尿病诊断标准且分型属于2型糖尿病的患者；2糖化血红蛋白167MMOL/L继续喂养高脂饲料2周，复核血糖后进入分组实验。实验动物，基础饲料及定制的高脂饲料均由中国科学院上海实验动物中心提供。012214实验步骤2型糖尿病大鼠造模成功后，选择体重相近的大鼠开始实验。整个实验期间，所有糖尿病。
28、大鼠均给予高脂饲料。采用随机数字表法，将大鼠分为3组SGNFM01组/CON组糖尿病模型对照/TZD组艾可拓，灌胃，每日一次；给药组大鼠每日药量按每公斤体重以人体每日用药量为基数，根据换算系数进行计算换算系数确定为15。每周记录大鼠生长情况一次。干预时间为4周。每组随机选取大鼠20只，禁食12H后，用3戊巴比妥钠40MG/KG腹腔注射麻醉。分别在大鼠0MIN和灌服葡萄糖负荷2G/KG后5MIN，10MIN,15MIN时间点取全血各1ML，按照试剂盒要求采集样本，分离血清，70低温冰箱保存，统一检测相关指标。每组随机选取大鼠10只，禁食12H后，用3戊巴比妥钠40MG/KG腹腔注射麻醉，分离胰腺。
29、，液氮罐保存。匀浆后检测PDX1表达。随机选取每组大鼠5只进行葡萄糖钳夹实验。SGNFM01组和模型组每组随机选取大鼠3只，选取血液和肝脏组织，提取总RNA，进行AFFYMETRIX230基因表达谱芯片检测。012315观察指标大鼠血糖检测罗氏ADVANDGE，胰岛细胞内PDX1因子检测RTPCR法，血清胰岛素、GLP1检测ELISA法，基因表达谱芯片检测。01242实验结果0125表6腹腔葡萄糖耐量试验IPGTT结果血糖单位MMOL/L01260127与CON相比，P005，P001；与TZD相比，P005，P001；0128本试验例、以及下述各试验例的图、表中NOR代表正常对照组或简称正常。
30、组；CON代表糖尿病模型对照组或简称模型组；TZD代表西药组艾可拓组；SGNFM01代表本发明实施例1制备的中药复方制剂组或简称本制剂组0129表7腹腔葡萄糖耐量试验AUC结果说明书CN104107324A1110/15页1201300131与CON相比，P005，P001；与TZD相比，P005，P001；0132通过比较4组大鼠糖耐量各时间点的血糖，我们发现中药复方SGNFM01的降糖作用明显好于模型组P001。在60MIN和120MIN时，SGNFM01的降糖作用优于西药艾可拓TZD。利用葡萄糖曲线下面积计算公式AUCG1/4G0MING30MIN1/4G30MING60MIN1/2G6。
31、0MING120MIN，再次肯定了中药复方SGNFM01的降糖作用，见附图5。0133试验例7本发明制剂SGNFM01改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗0134材料与方法同实施例6略0135实验结果0136表8腹腔胰岛素耐量IPITT01370138与CON相比，P005，P001；0139通过比较4组大鼠各时间点的胰岛素耐量水平，我们发现中药复方SGNFM01的各点血糖下降P001，曲线下面积AUC显著降低P001。利用降糖率的计算降糖率0MIN血糖30MIN血糖/0MIN血糖，再次肯定了中药复方SGNFM01改善胰岛素抵抗，见附图6和附图7。高胰岛素正葡萄糖钳夹结果显示，中药复方SGNFM01治疗后。
32、的糖尿病大鼠的葡萄糖输注速率明显高于模型组P001，与西药TZD组相比没有显著性差异，再次说明SGNFM01明显改善胰岛素抵抗水平，见附图8。0140试验例8本发明制剂SGNFM01改善糖尿病大鼠胰岛细胞功能0141材料与方法同实施例6略0142实验结果0143表9空腹血糖的变化血糖单位MMOL/L0144说明书CN104107324A1211/15页130145与模型组相比，P005，P001；与TZD相比，P005，P0010146通过比较4组大鼠各时间点的空腹血糖，发现中药复方SGNFM01的降糖作用明显好于模型组P001。在2W时，SGNFM01的降糖作用优于西药艾可拓TZDP001。。
33、表9说明，SGNFM01明显降低糖尿病大鼠的空腹血糖水平。0147表10各组PDX1基因表达的变化01480149CON组与NOR组比较P001；SGNFM01组与CON组比较P0010150通过实时荧光定量PCR检测显示，模型组PDX1基因表达显著低于正常组，SGNFM01组PDX1基因表达显著高于模型组，差异均有统计学意义P005，说明SGNFM01明显提高糖尿病大鼠的PDX1基因的表达水平，见表10。0151试验例9本发明制剂SGNFM01改善糖尿病大鼠肠促胰岛素分泌0152材料与方法同实施例6略0153实验结果0154表11各组血浆GLP1水平变化MQR01550156与CON组相比，。
34、P005，P0010157比较各组动物检测空腹及糖负荷后5MIN、10MIN、15MIN血浆GLP1水平，在各时间点CON组均显著低于正常组，SGNFM01组在各时间点均显著高于CON组，说明SGNFM01明显提高糖尿病大鼠的GLP1的水平。同时，免疫组化研究也提示，SGNFM01可促进肠道L细胞GLP1的合成表达，见附图9。0158试验例10本发明制剂SGNFM01对DB/DB糖尿病小鼠血糖的作用01591材料与方法说明书CN104107324A1312/15页14016011实验药物本发明制剂SGNFM01。016112实验动物DB/DB小鼠及C57BL小鼠购自南京大学模式动物研究所。01。
35、6213实验步骤DB/DB小鼠及C57BL小鼠适应性喂养1周。采用随机数字表法，将小鼠分为2组SGNFM01组/CON组糖尿病模型模型，以C57BL小鼠作为NOR组正常对照。本制剂组予以灌胃，每日一次；大鼠每日药量按每公斤体重以人体每日用药量为基数，根据换算系数进行计算换算系数确定为15。每周记录小鼠生长情况一次。干预时间为4周。每组随机选取小鼠10只，禁食12H后，用3戊巴比妥钠40MG/KG腹腔注射麻醉。分别在小鼠0MIN和腹腔葡萄糖负荷2G/KG后30MIN，60MIN,90MIN，120MIN时间点取全血各1ML，按照试剂盒要求采集样本，分离血清，70低温冰箱保存，统一检测相关指标。0。
36、16315观察指标小鼠血糖检测罗氏ADVANDGE，胰岛素抵抗指标检测，脂代谢指标检测，胰腺和肝脏组织的病理切片。01642实验结果0165表12腹腔葡萄糖耐量试验IPGTT结果血糖单位MMOL/L01660167通过比较3组小鼠腹腔糖耐量各时间点的血糖，我们发现中药复方SGNFM01的各点血糖明显好于CON组。利用葡萄糖曲线下面积计算公式AUCG1/4G0MING30MIN1/4G30MING60MIN1/2G60MING120MIN，再次肯定了中药复方SGNFM01的降糖作用P001，见附图10。0168试验例11本发明制剂SGNFM01改善糖尿病小鼠的胰岛素抵抗0169材料与方法同实施例。
37、11略0170实验结果0171表13胰岛素抵抗的变化017201730174与CON相比，P0050175通过比较小鼠的空腹血糖，胰岛素分泌和HOMAIR检测结果显示，与CON组相比，SGNFM01显著降低糖尿病小鼠的胰岛素的抵抗水平P005，再次肯定SGNFM01改善糖尿病小鼠的胰岛素抵抗，见附图11。0176试验例12本发明制剂SGNFM01改善糖尿病小鼠胰岛细胞功能说明书CN104107324A1413/15页150177材料与方法同实施例11略0178实验结果通过比较NOR组，CON组和SGNFM01组的胰腺组织的病理切片结果显示，SGNFM01治疗后的糖尿病小鼠的胰腺组织的细胞致密性。
38、好于CON组，见附图12。0179试验例13本发明制剂SGNFM01改善糖尿病鼠的脂代谢指标0180材料与方法同实施例11略0181实验结果0182表14糖尿病小鼠脂代谢指标的变化01830184与模型组相比，P0050185表15糖尿病大鼠脂代谢指标的变化01860187与CON相比，P005；0188通过比较脂代谢指标显示，相比于CON组，SGNFM01治疗后的糖尿病大鼠和糖尿病DB小鼠的总胆固醇水平显著下降，由此可见，SGNFM01明显改善糖尿病大鼠及糖尿病DB小鼠的脂代谢。通过比较NOR组，CON组和SGNFM01组的肝脏组织的病理切片结果显示，SGNFM01治疗后的糖尿病小鼠的肝细胞。
39、好于CON组，见附图13。0189试验例14本发明制剂SGNFM01对糖尿病大鼠基因表达谱的影响0190材料与方法同实施例6略0191实验结果表16SGNFM01影响的信号通路0192说明书CN104107324A1514/15页160193通过对糖尿病大鼠肝脏组织和血液组织的基因表达谱检测发现，与模型组比较，SGNFM01治疗后，肝脏组织和血液组织的基因表达谱中共460个基因表达发生变化，其中315个基因表达上调，145个基因表达下调。通过GO分析，发现差异基因重点参与代谢过程。通过基因芯片信号通路的分析可以看出，共有89条信号通路与SGNFM01影响糖尿病机制有关。其中胰岛素分泌、脂肪酸代。
40、谢通路、TNF信号通路等均参与SGNFM01治疗糖尿病的过程，见表11。由此可见，SGNFM01能显著影响多个差异基因的表达和多条通路的调节，见附图14。0194试验例15本发明制剂SGNFM01对糖尿病鼠肝脏PI3K/AKT信号通路的影响0195材料与方法同实施例6略0196实验结果0197表17糖尿病大鼠肝组织蛋白表达比较01980199注与CON组相比，P0050200表18DB小鼠各组肝组织蛋白表达的比较02010202注与CON组相比，P0050203结果显示，与CON组相比，SGNFM01组糖尿病大鼠肝脏IRS2蛋白表达明显增加P005。SGNFM01组糖尿病DB小鼠SGNFM01。
41、组AKT2蛋白表达增加P005。0204表19糖尿病大鼠各组肝组织MRNA表达的比较0205说明书CN104107324A1615/15页170206注与CON组相比，P005；与CON组相比，P0010207表20DB小鼠各组肝组织MRNA表达的比较02080209注与CON组相比，P0050210PCR结果显示，糖尿病大鼠部分，与CON组相比，SGNFM01和TZD组肝组织各指标MRNA表达均增加，其中IRS2表达明显增加P005，GLUT2、ARRESTIN2表达显著上调P001。糖尿病DB小鼠部分，PCR结果显示，与CON组相比，SGNFM01各指标MRNA表达上升，其中AKT2、PI。
42、3KP110MRNA表达明显增加P005。说明书CN104107324A171/9页18图1图2图3说明书附图CN104107324A182/9页19图4图5说明书附图CN104107324A193/9页20图6图7说明书附图CN104107324A204/9页21图8图9图10说明书附图CN104107324A215/9页22图11图12说明书附图CN104107324A226/9页23图13图14说明书附图CN104107324A237/9页24图15图16图17说明书附图CN104107324A248/9页25图18图19图20说明书附图CN104107324A259/9页26图21图22说明书附图CN104107324A26。