本发明涉及依诺肝素的新治疗应用。
依诺肝素(Lovenox，Clexane)是一种市场销售的低分子量肝素，它用于 预防性治疗在外科手术有中等或高度危险的静脉血栓栓塞的疾病，预防在血液 透析过程中体外循环回路的血凝固，治疗体质的深度静脉血栓形成，它还与阿 司匹林配合用于治疗不稳定的心绞疼和急性期无Q波的心肌梗塞。依诺肝素同 样适用于预防和/或治疗中枢神经系统创伤(WO 98/53833)和脑水肿(WO 98/53834)。
在预防和/或治疗脑缺血患者体内的深度静脉血栓形成时曾试验低分子量 肝素，但未证明对局部缺血产生任何效果(A.ELIAS及其同事，《内科学杂志》 《La Revue de Médecine Interne》，1(XI)，95-98(1990)；MH.PRINS及其同 事，《Haemostasis》，19，245-250(1989)；AGG.TURPIE及其同事，《Lancet》， 523-526(1987))。
现在发现依诺肝素能够减少脑缺血后遗症，因此可以用于治疗脑局部缺血。
根据下述方案在鼠体内确定了这种新的治疗应用：
随意地向雄性斯—道鼠(230-250克，Iffa Credo)喂食喂水并且对其保持 12小时昼-夜循环。在氟烷(1.4％，在70％N2O/30％O2混合物中)下进行外科手术。 在麻醉期间，将该鼠放在恒温毡下保持体温正常。剥离左颈总动脉，进行松 弛捆扎。通过颞下开颅术暴露开左脑中动脉，用微型夹钳钳住该动脉端 部，接着用颈动脉绷带扎住。两小时后，这些动物再次被麻醉，通过取 下脑中动脉夹钳和颈动脉绷带，恢复脑循环。这时这些鼠被放回到26-28 ℃恒温间的笼中。
在外科手术48小时后，由不了解处理情况的研究人员对每只鼠进行 神经学研究。在表1中列出使用的神经学评级。
表1 项目 正常 不足 紧紧抓住不放的本能 反应 右前爪 1 0 移位反应 失去支撑 右前爪 1 0 右后爪 1 0 伸直本能反应 旋转 右侧 1 0 左侧 1 0 非正常姿势 无 有 右前爪弯曲 1 0 身体扭曲 1 0 神经学总分 7 0
在神经学研究后，使这些鼠无痛苦死亡，再取出它们的脑。制备厚度1.5 毫米的系列切片，并用2％2，3，5-三苯基四唑氯(TTC)着色。在10％甲醛溶液中后 固定24小时后，在皮层和纹状体处测量损伤(脑梗塞)区域；通过积分损伤表面 积计算出体积。这些值用毫米3表示(平均值±E.S.M)。通过用于非参数偏差分 析的Mann-Whitney检验或Kruskal-Wallis检验，接着通过组之间的比较(相对 于对照组，*：p＜0.05，**：p＜0.01，***：p＜0.001)的Dunn检验， 进行统计分析。
在研究1中，在局部缺血开始后2小时和24小时，12只鼠以1.5毫克/千 克的剂量静脉给药依诺肝素。按照同样的方案，对照组的10只鼠只被给予赋形 剂(0.9％氯化钠生理盐水)。
在研究2中，研究依诺肝素治疗时机。在局部缺血后5小时开始治疗，接 着在24小时第二次给药。该研究在于依诺肝素剂量对脑损伤所产生的功效。研 究的剂量是静脉给药0.5，1和1.5毫克/千克(每组9-10只鼠)。对照组的11 只鼠只被给予赋形剂(0.9％氯化钠生理盐水)。
在研究3中，在局部缺血开始后5和24小时，10只鼠按照1.5毫克/千克 的剂量静脉给药依诺肝素。对照组的13只鼠只是给予赋形剂(0.9％氯化钠生理 盐水)。
在研究4中，其方案与其他研究过程相同，不同之处在于永久性地烧灼左 脑中动脉并且不闭塞左颈动脉。13只鼠在局部缺血开始后5和24小时按照 1.5毫克/千克的剂量静脉给药依诺肝素。对照组的13只鼠只是给予赋形剂 (0.9％氯化钠生理盐水)。
得到的结果汇集于下表2。
表2 研究 皮层损伤(毫米3) 神经学分 7分级 研究1 对照组 依诺肝素组 2×1.5毫克/千克静脉内 186±18 131±13* 1.7±0.3 3.1±0.2** 研究2 对照组 依诺肝素组 2×0.5毫克/千克静脉内 2×1毫克/千克静脉内 2×1.5毫克/千克静脉内 203±12 164±15 142±24* 129±17* 研究3 对照组 依诺肝素组 2×1.5毫克/千克静脉内 195±12 129±16** 1.8±0.3 3.4±0.3*** 研究4 对照组 依诺肝素组 2×1.5毫克/千克静脉内 137±23 71±13* 1.7±0.2 2.9±0.3**
这些结果证明，
-在研究1中，依诺肝素显著地提高脑缺血后48小时的神经学分，另外显 著降低皮层损伤达30％，
-在研究2中，依诺肝素降低皮层损伤达30％(2×1毫克/千克)和36％(2× 1.5毫克/千克)，
-在研究3中，依诺肝素显著地提高神经学分，降低皮层损伤达34％，
-在研究4中，依诺肝素显著地提高神经学分，降低皮层损伤达49％。
这些研究中没有遇到任何出血问题。
这些药物由呈组合物形式的依诺肝素组成，其中依诺肝素可与任何其他在 药学上相容的产品组合，这些产品可以是惰性的或在生理学上是活性的。优选 地可以通过静脉内和皮下途径给药本发明的药物。
用于静脉内和皮下给药的无菌组合物一般是水溶液。这些组合物还可以含 有添加剂，特别是润湿剂、等渗剂、乳化剂、分散剂和稳定剂。灭菌可以多种 方式，例如通过灭菌过滤、混入灭菌剂组合物之中、辐照来进行。这些组合物 还可以制备成无菌的固体组合物形式，在使用时可以将这些组合物溶于无菌的 水中或任何其他可注射的无菌介质中。
作为一种组合物实例，可以将20毫克依诺肝素溶于其量足以制备0.2毫升 溶液的蒸馏水中。
剂量取决于追求的效果，治疗时间和用药方式。皮下用药剂量一般是每天 0.2-4毫克/千克，即每个成人每天14-280毫克，单位剂量是5-280毫克。
一般地，医生将根据待治疗患者的年龄、体重和所有其他自身因素确定适 当的剂量。
本发明还涉及治疗人的脑缺血方法，该方法包括给药有效量的依诺肝素。
本发明还涉及依诺肝素在制备适用于治疗脑缺血药物中的应用。