一种多糖亚硒酸酯的制备方法.pdf

本发明公开了一种多糖亚硒酸酯的制备方法，包括步骤：将多糖与硝酸溶液混合，在室温下搅拌，使所述多糖溶胀；在得到的多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡，在温度为60～80℃的水浴中搅拌反应6～14小时后，冷却至室温，在压强为0.07～0.08MPa时进行抽滤处理和一次离心处理；将得到的一次上清液装入透析袋中，依次进行流水透析处理和蒸馏水透析处理后，减压浓缩至原体积的1/40～1/20；对得到的浓缩液进行醇沉处理和二次离心处理，得到下沉沉淀；再对所述沉淀进行冷冻干燥处理，得到所述多糖亚硒酸酯。本发明所述方法，具有反应条件可控和重复性高的优点。

1.  一种多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a、按多糖重量∶硝酸体积＝1g∶100ml的配比关系，将所述多糖与对应的硝酸溶液混合，在室温下搅拌，使所述多糖溶胀，得到多糖硝酸溶液；
b、在所述多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡，在温度为60～80℃的水浴中搅拌，酯化反应6～14小时后，冷却至室温，在压强为0.07～0.08Mpa时进行抽滤处理和一次离心处理，得到一次上清液；
c、将所述一次上清液装入透析袋中，依次进行流水透析处理和蒸馏水透析处理后，减压浓缩至原体积的1/40～1/20，得到浓缩液；
d、对所述浓缩液进行醇沉处理和二次离心处理，得到下沉沉淀；再对所述沉淀进行冷冻干燥处理，得到所述多糖亚硒酸酯。

2.  根据权利要求1所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，所述多糖为兰州百合多糖。

3.  根据权利要求1所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，所述多糖为锁阳多糖。

4.  根据权利要求1-3中任一项所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，在步骤a中，所述硝酸溶液的体积浓度为0.3～0.8％。

5.  根据权利要求1-3中任一项所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，在步骤b中，在所述抽滤处理和所述一次离心处理之间，还包括以下步骤：使用无水碳酸钠，将所述抽滤处理所得滤液的PH值调至5～6。

6.  根据权利要求1-3中任一项所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，在步骤b中，所述亚硒酸钠和所述氯化锡的重量比为1∶1.675～3.35。

7.  根据权利要求1-3中任一项所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，在步骤c中，当在所述透析袋中加入抗坏血酸、所述透析袋中液体的红色消失时，所述蒸馏水透析处理完成。

8.  根据权利要求1-3中任一项所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，在步骤c中，所述流水透析处理的时间为36～48小时；
所述减压浓缩处理的温度为50～60℃、压强条件为0.07～0.08Mpa；
所述透析袋的截留分子量为8000～12000道尔顿。

9.  根据权利要求1-3中任一项所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，在步骤d中，所述醇沉处理具体包括：
在所述浓缩液中加入乙醇，在室温下静置20～30小时；其中，所述乙醇的体积占所述浓缩液和所述乙醇总体积的75～80％。

10.  根据权利要求1-3中任一项所述的多糖亚硒酸酯的制备方法，其特征在于，在步骤b和d中，所述一次和二次离心处理的温度为15～20℃、转速为4000～4500转/分钟，所述冷冻干燥处理的温度为-60℃～-50℃、压强为1-5Pa、时间为36～48小时。

一种多糖亚硒酸酯的制备方法
技术领域
本发明涉及硒化多糖技术领域，具体地，涉及一种多糖亚硒酸酯的制备方法。
背景技术
多糖是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物大分子，具有抗感染、肿瘤防治、病毒性肝炎、类风湿症和艾滋病等免疫损伤或免疫缺损症和抗氧化等多方面功能和生物活性，近年来受到人们的普遍重视。近年来，有关多糖的分子修饰研究已有大的进展。在多糖的分子修饰中，利用糖残基上的羟基、羧基和氨基等基团，运用化学方法进行修饰，有可能提高多糖的活性。这里，多糖的分子修饰的化学方法包括硫酸化、羧甲基化、硒酸化和磷酸酯化等。
另外，硒是人和动物生命活动过程中必需的微量元素，人体缺硒会造成致命的缺硒综合症，如克山病，大骨节病和白内障等40多种疾病，均与人体的硒含量有关。近代研究还表明，硒可以刺激免疫球蛋白的生成，具有抗氧化和抗癌作用。但是，摄入硒过量也会引起白内障、脱发和脱甲等中毒综合症。可以通过常规的补硒形式，通过摄取无机硒和生物活性硒进行补硒。亚硒酸钠也是一种补硒的药物，但亚硒酸钠同时是一种无机盐，给药量不易控制，有效吸收性差。
在申请号为00114699.8的专利申请中，提供了一种壳聚糖亚硒酸盐及其制备方法，该壳聚糖亚硒酸盐是用壳聚糖与亚硒酸反应所得，反应所得产物中硒的含量为0～26％；采用不同分子量的壳聚糖与亚硒酸反应，可以制备不同分子量的壳聚糖亚硒酸盐，反应所得产物依其分子量大小、以及结合的亚硒酸的多少，而具有不同的水溶性。这种壳聚糖亚硒酸盐毒性低、易被吸收，可以作为补硒制剂，用于医药、保健品、化妆品和农业等领域。
另外，在申请号为200610045482.8的专利申请中，提供了一种多糖亚硒酸酯的制法及其应用，该多糖亚硒酸酯由多糖或多糖复合物和硒化试剂反应制得，其中，硒化试剂可以是卤氧化硒或者含有卤氧硒结构的化合物，硒化试剂与多糖中羟基基团的投料摩尔比为1∶0.1～20；制得的多糖亚硒酸酯可以用于抗癌药物和抗氧化药物的制备。这里，多糖亚硒酸酯的含硒量较高。
百合多糖和锁阳多糖是一类天然的多糖高聚物，其中，百合来源于兰州百合(Lilium davidii var.unicolor Salisb.)干燥肉质鳞叶，性味甘寒，具有养阴清肺和清心安神的功效。现代医学研究表明，兰州百合具有抗癌、抗疲劳、耐缺氧和止咳等作用，中药兰州百合中含有皂苷、生物碱、多糖、磷脂、蛋白质、氨基酸、维生素、淀粉和大量微量元素等化学成分。目前，兰州百合多糖的研究尚处于起步阶段，但因其良好的应用前景，近年逐渐引起越来越多的关注。
在申请号为ZL200610041681.1的专利申请中，提供了一种抗疲劳兰州百合多糖的制备方法，以天然兰州百合鳞茎为原料，经过提取、脱蛋白、分离和柱层析处理，制备出具有抗疲劳作用的新的天然兰州百合多糖；该天然兰州百合多糖具有抗疲劳效果好和无毒副作用的优点。
另外，在申请号为ZL200810097243.6的专利申请中，提供了一种增强免疫力的百合多糖的制备方法，以天然兰州百合鳞茎为原料，经过提取、纯化、分离、脱蛋白等步骤制备出一种增强免疫力的天然多糖；该天然兰州百合多糖与其它增强免疫产品相比，具有生产工艺简单，使用方便，且特色优势明显，资源储量充足。
锁阳又名不老药，在传统蒙药中是重要的补益壮阳的品种，锁阳中活性总多糖中性单糖组成均为半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖和核糖等；属多年生肉质寄生草本，是锁阳科植物锁阳(Cynomorium songaricum Rupr.)的干燥肉质茎；性甘温，具有补肾阳、益精血和润肠通便之功能；临床用于骨蒸潮热、腿膝痿弱无力和肠燥便秘等。糖尿病小鼠实验表明，使用锁阳多糖3周左右时，糖尿病小鼠的血糖值明显降低，肝糖原含量显著升高，各项血液生化指标谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮和肌酐都明显降低，说明锁阳多糖可以改善糖尿病小鼠的肝肾功能，使肝、肾和心各器官SOD活性提高，MDA含量降低，从而表明锁阳多糖可以提高糖尿病小鼠肝脏和肾脏抗氧化能力。
在申请号为200510055385.2的专利申请中，提供了一种复方锁阳滴丸及其制备方法，该复方锁阳滴丸以含有锁阳、枸杞子和五味子的三味中药活性成份的提取物为原料，与可药用基质一起制备而成；该复方锁阳滴丸具有补肝肾、益精血、强筋骨作用，用于腰膝痿软和肠燥便秘等病症治疗的药物组合物，该复方锁阳滴丸具有生物利用度高、药物含量高、药效快、服用方便和价格低廉的优点。
在上述多糖与亚硒酸的制剂中，多糖亚硒酸酯的硒含量有限；并且，由于多糖结构的复杂性，不同的多糖其亚硒酸酯的制备方法不同，因此，针对某种特定多糖建立一种合适的亚硒酸酯化的方法是十分必要的。在现有技术中，尚未见到以兰州百合多糖或锁阳多糖为原料、制备多糖亚硒酸酯的方法。
发明内容
本发明的目的在于针对上述问题，提出一种多糖亚硒酸酯的制备方法，以实现含硒量高和药效好的优点。
为实现上述目的，本发明提供了一种多糖亚硒酸酯的制备方法，包括步骤：a、按多糖∶硝酸＝1g∶100ml的配比关系，将所述多糖与对应的硝酸溶液混合，在室温下搅拌，使所述多糖溶胀，得到多糖硝酸溶液；b、在所述多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡，在温度为60～80℃的水浴中搅拌，酯化反应6～14小时后，冷却至室温，在压强为0.07～0.08Mpa时进行抽滤处理和一次离心处理，得到一次上清液；c、将所述一次上清液装入透析袋中，依次进行流水透析处理和蒸馏水透析处理后，减压浓缩至原体积的1/40～1/20，得到浓缩液；d、对所述浓缩液进行醇沉处理和二次离心处理，得到下沉沉淀；再对所述沉淀进行冷冻干燥处理，得到所述多糖亚硒酸酯。
其中，所述多糖为兰州百合多糖或锁阳多糖。
进一步的，在步骤a中，所述硝酸溶液的体积浓度为0.3～0.8％。
进一步的，在步骤b中，在所述抽滤处理和所述一次离心处理之间，还包括以下步骤：使用无水碳酸钠，将所述抽滤处理所得滤液的PH值调至5～6。
更进一步的，在步骤b中，所述亚硒酸钠和所述氯化锡的重量比为1∶1.675～3.35，所述氯化锡为催化剂。
进一步的，在步骤c中，当在所述透析袋中加入抗坏血酸、所述透析袋中液体的红色消失时，所述蒸馏水透析处理完成。
更进一步的，在步骤c中，所述流水透析处理的时间为36～48小时；所述减压浓缩处理的温度为50～60℃、压强条件为0.07～0.08Mpa；所述透析袋的截留分子量为8000～12000道尔顿。
进一步的，在步骤d中，所述醇沉处理具体包括：在所述浓缩液中加入乙醇，在室温下静置20～30小时；其中，所述乙醇的体积占所述浓缩液和所述乙醇总体积的75～80％。
更进一步的，在步骤b和d中，所述一次和二次离心处理的温度为15～20℃、转速为4000～4500转/分钟，所述冷冻干燥处理的温度为-60℃～-50℃、时间为36～48小时。
本发明各实施例的多糖亚硒酸酯的制备方法，以兰州百合多糖或锁阳多糖为主料，以硝酸和亚硒酸钠为辅料，以氯化锡为催化剂，按多糖∶硝酸＝1g∶100ml的配比关系，将兰州百合多糖或锁阳多糖与对应的硝酸溶液混合，在室温下搅拌过夜，使兰州百合多糖或锁阳多糖溶胀；在得到的多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡，在温度为60～80℃的水浴中搅拌，酯化反应6～14小时后，冷却至室温，在压强为0.07～0.08Mpa时进行抽滤处理和一次离心处理；将得到的一次上清液装入透析袋中，依次进行流水透析处理和蒸馏水透析处理后，减压浓缩至原体积的1/40～1/20；对得到的浓缩液进行醇沉处理和二次离心处理，得到下沉沉淀；再对该沉淀进行冷冻干燥处理，可以制得兰州百合多糖或锁阳多糖亚硒酸酯，该兰州百合多糖或锁阳多糖具有含硒量高和药性好的优点。
总之，本发明以含有天然植物兰州百合或锁阳的提取物、即兰州百合多糖或锁阳多糖为原料，首次在硝酸-氯化锡的催化作用下，利用利用亚硒酸钠对兰州百合多糖或锁阳多糖进行分子修饰，合成了兰州百合多糖亚硒酸酯或锁阳多糖亚硒酸酯，该反应条件可控，重复性高，溶解性好，市场前景好；另外，在分子结构中引入亚硒酸根，其中硒是正四价，硒是处于中间价态，既可以被氧化也可以被还原，可见，利用本发明所述制备方法，制得的多糖亚硒酸酯在人体内具有潜在的生物活性。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在所写的说明书、权利要求书、以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。
下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为根据本发明多糖亚硒酸酯的制备方法中兰州百合多糖及其亚硒酸酯的紫外光谱图；
图2为根据本发明多糖亚硒酸酯的制备方法中锁阳多糖及其亚硒酸酯的紫外光谱图；
图3为根据本发明多糖亚硒酸酯的制备方法中兰州百合多糖及其亚硒酸酯的红外光谱图；
图4为根据本发明多糖亚硒酸酯的制备方法中锁阳多糖及其亚硒酸酯的红外光谱图。
结合附图，本发明实施例中附图标记如下：
A1-兰州百合多糖；B1-兰州百合多糖亚硒酸酯；A2-锁阳多糖；B2-锁阳多糖亚硒酸酯。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明的基本思想是：以兰州百合多糖或锁阳多糖、即含有兰州百合或锁阳中药活性成份的提取物为原料，在体积浓度为0.3～0.8％的硝酸溶液中搅拌过夜，使其溶胀，得到兰州百合多糖或锁阳多糖的硝酸溶液，置于室温条件下备用；将得到的兰州百合多糖或锁阳多糖的硝酸溶液、与亚硒酸钠和氯化锡的混合物、在60～80℃的水溶液中搅拌6～14小时后，冷却至室温，进行过滤，并采用无水碳酸钠、将过滤得到的滤液的PH值调整到5～6，再进行离心处理；将离心处理得到的上清液进行透析，用乙醇进行沉淀，在室温下静止后，进行二次离心处理，将二次离心得到的下沉沉淀进行冷冻干燥，得到纯化的兰州百合多糖亚硒酸酯或锁阳多糖亚硒酸酯。
在图1-图4中，A1表示兰州百合多糖，B1表示兰州百合多糖亚硒酸酯；A2表示锁阳多糖，B2表示锁阳多糖亚硒酸酯。
由图1和图2对比可知，图1中兰州百合多糖亚硒酸酯B1和图2中锁阳多糖亚硒酸酯B2在λ＝334nm处有吸收峰，与硒在λ＝335nm的吸收峰的文献资料基本吻合；在图3中，3400cm^-1左右的-OH吸收峰，2928cm^-1左右的C-H伸缩振动峰、以及1400-1200cm^-1的C-H变角振动峰都是糖类的化合物的特征吸收峰，由图3和图4对比可知，兰州百合多糖亚硒酸酯除了多糖母体特征吸收峰外，还增加了870.05cm^-1处的吸收峰，为亚硒酸酯中Se＝O的伸缩振动，这是亚硒酸酯的特征吸收峰；同时，兰州百合多糖亚硒酸酯在2928cm^-1附近的羟基吸收峰有所降低，表明部分羟基被酯化，可见多糖已形成亚硒酸酯；在图4中，通过锁阳多糖和锁阳多糖亚硒酸酯的红外光谱对比分析，可以看出锁阳多糖亚硒酸酯除了多糖母体特征吸收峰保留外，还增加了871.65cm^-1处的吸收，为亚硒酸酯中Se＝O的伸缩振动，这是亚硒酸酯的特征吸收峰，通过紫外光谱和红外光谱充分说明锁阳多糖已形成锁阳多糖亚硒酸酯。
实施例一
根据本发明实施例，提供了一种多糖亚硒酸酯的制备方法。在本实施例中，该多糖为兰州百合多糖，该兰州百合多糖亚硒酸酯的制备方法包括：
步骤1：溶胀处理：将1.0g兰州百合多糖加入100ml体积浓度为0.3％硝酸溶液中，在室温下搅拌过夜，使其充分溶胀，得到兰州百合多糖硝酸溶液，放置在室温下备用；
步骤2：酯化反应：在步骤1得到的兰州百合多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡的混合物2.145g，在60℃的水浴中搅拌反应6小时后，冷却至室温、在0.07Mpa下抽滤；
使用无水碳酸钠、将抽滤后的滤液的PH值调至5后，进行一次离心处理，得到一次上清液；这里，亚硒酸钠与氯化锡的质量比例为1∶1.675；
步骤3：纯化：将步骤2得到的一次上清液，装入截留量为8000～12000道尔顿的透析袋中，流水透析36小时后，进行蒸馏水透析，直至透析袋中的液体加入抗坏血酸时红色消失时，停止蒸馏水透析，并在50℃、0.07Mpa下，将透析袋内的液体减压浓缩至原体积的1/20；
步骤4：在步骤3得到的浓缩液中加入乙醇，使乙醇的体积占浓缩液和乙醇总体积的75％，在室温下静置20小时进行醇沉，之后以温度为15℃、4000转/分钟的转速进行二次离心处理；
将二次离心处理得到的下沉沉淀在-50℃、1Pa的条件下冷冻干燥36小时，得到纯化的兰州百合多糖亚硒酸酯。
经上述步骤1至步骤4，可以制得兰州百合多糖亚硒酸酯，经ICP-AES检测知，该兰州百合多糖亚硒酸酯中的硒含量为2508mg/kg。
在本实施例中，流水透析指使用自来水进行透析，且水是流动的，就是说在透析过程中需不断更换新水；蒸馏水透析指使用蒸馏水进行透析。
实施例二
在本实施例中，兰州百合多糖亚硒酸酯的制备方法包括：
步骤1：溶胀处理：将1.0g兰州百合多糖加入100ml体积浓度为0.8％硝酸溶液中，在室温下搅拌过夜，使其充分溶胀，得到兰州百合多糖硝酸溶液，放置在室温下备用；
步骤2：酯化反应：在步骤1得到的兰州百合多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡的混合物2.748g，在70℃的水浴中搅拌反应10小时后，冷却至室温、在0.075Mpa下抽滤；
使用无水碳酸钠、将抽滤后的滤液的PH值调至5.5后，进行一次离心处理，得到一次上清液；这里，亚硒酸钠与氯化锡的质量比例为1∶2.146；
步骤3：纯化：将步骤2得到的一次上清液，装入截留量为8000～12000道尔顿的透析袋中，流水透析44小时后，进行蒸馏水透析，直至透析袋中的液体加入抗坏血酸时红色消失时，停止蒸馏水透析，并在55℃、0.075Mpa下，将透析袋内的液体减压浓缩至原体积的1/30；
步骤4：在步骤3得到的浓缩液中加入乙醇，使乙醇的体积占浓缩液和乙醇总体积的77.5％，在室温下静置25小时进行醇沉，之后以温度为18℃，4200转/分钟的转速进行二次离心处理；
将二次离心处理得到的下沉沉淀在-55℃、3Pa的条件下冷冻干燥40小时，得到纯化的兰州百合多糖亚硒酸酯。
经上述步骤1至步骤4，可以制得兰州百合多糖亚硒酸酯，经ICP-AES检测知，该兰州百合多糖亚硒酸酯中的硒含量为5617mg/kg。
实施例三
在本实施例中，兰州百合多糖亚硒酸酯的制备方法包括：
步骤1：溶胀处理：将1.0g兰州百合多糖加入100ml体积浓度为0.5％硝酸溶液中，在室温下搅拌过夜，使其充分溶胀，得到兰州百合多糖硝酸溶液，放置在室温下备用；
步骤2：酯化反应：在步骤1得到的兰州百合多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡的混合物3.350g，在80℃的水浴中搅拌反应14小时后，冷却至室温、在0.08Mpa下抽滤；
使用无水碳酸钠、将抽滤后的滤液的PH值调至6后，进行一次离心处理，得到一次上清液；这里，亚硒酸钠与氯化锡的质量比例为1∶2.616；
步骤3：纯化：将步骤2得到的一次上清液，装入截留量为8000～12000道尔顿的透析袋中，流水透析48小时后，进行蒸馏水透析，直至透析袋中的液体加入抗坏血酸时红色消失时，停止蒸馏水透析，并在60℃、0.08Mpa下，将透析袋内的液体减压浓缩至原体积的1/40；
步骤4：在步骤3得到的浓缩液中加入乙醇，使乙醇的体积占浓缩液和乙醇总体积的80％，在室温下静置30小时进行醇沉，之后以温度为20℃，4500转/分钟的转速进行二次离心处理；
将二次离心处理得到的下沉沉淀在-60℃、5Pa的条件下冷冻干燥48小时，得到纯化的兰州百合多糖亚硒酸酯。
经上述步骤1至步骤4，可以制得兰州百合多糖亚硒酸酯，经ICP-AES检测知，该兰州百合多糖亚硒酸酯中的硒含量为9431mg/kg。
实施例4
在本实施例中，提供了一种多糖亚硒酸酯的制备方法，该多糖为锁阳多糖，该锁阳多糖的制备方法包括：
步骤1：溶胀处理：将1.0g锁阳多糖加入100ml体积浓度为0.8％硝酸溶液中，在室温下搅拌过夜，使其充分溶胀，得到锁阳多糖硝酸溶液，放置在室温下备用；
步骤2：酯化反应：在步骤1得到的锁阳多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡的混合物2.145g，在60℃的水浴中搅拌反应14小时后，冷却至室温、在0.07Mpa下抽滤；
使用无水碳酸钠、将抽滤后的滤液的PH值调至5后，进行一次离心处理，得到一次上清液；这里，亚硒酸钠与氯化锡的质量比例为1∶1.675；
步骤3：纯化：将步骤2得到的一次上清液，装入截留量为8000～12000道尔顿的透析袋中，流水透析36小时后，进行蒸馏水透析，直至透析袋中的液体加入抗坏血酸时红色消失时，停止蒸馏水透析，并在50℃、0.07Mpa下，将透析袋内的液体减压浓缩至原体积的1/20；
步骤4：在步骤3得到的浓缩液中加入乙醇，使乙醇的体积占浓缩液和乙醇总体积的75％，在室温下静置20小时进行醇沉，之后以温度为15℃，4000转/分钟的转速进行二次离心处理；
将二次离心处理得到的下沉沉淀在-50℃、2Pa的条件下冷冻干燥36小时，得到纯化的锁阳多糖亚硒酸酯。
经上述步骤1至步骤4，可以制得锁阳多糖亚硒酸酯，经ICP-AES检测知，该锁阳多糖亚硒酸酯中的硒含量为2678mg/kg。
实施例5
在本实施例中，锁阳多糖亚硒酸酯的制备方法包括：
步骤1：溶胀处理：将1.0g锁阳多糖加入100ml体积浓度为0.5％硝酸溶液中，在室温下搅拌过夜，使其充分溶胀，得到锁阳多糖硝酸溶液，放置在室温下备用；
步骤2：酯化反应：在步骤1得到的锁阳多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡的混合物2.748g，在70℃的水浴中搅拌反应10小时后，冷却至室温、在0.075Mpa下抽滤；
使用无水碳酸钠、将抽滤后的滤液的PH值调至5.5后，进行一次离心处理，得到一次上清液；这里，亚硒酸钠与氯化锡的质量比例为1∶2.146；
步骤3：纯化：将步骤2得到的一次上清液，装入截留量为8000～12000道尔顿的透析袋中，流水透析44小时后，进行蒸馏水透析，直至透析袋中的液体加入抗坏血酸时红色消失时，停止蒸馏水透析，并在55℃、0.075Mpa下，将透析袋内的液体减压浓缩至原体积的1/30；
步骤4：在步骤3得到的浓缩液中加入乙醇，使乙醇的体积占浓缩液和乙醇总体积的77.5％，在室温下静置25小时进行醇沉，之后以温度为18℃，4200转/分钟的转速进行二次离心处理；
将二次离心处理得到的下沉沉淀在-55℃、4Pa的条件下冷冻干燥40小时，得到纯化的锁阳多糖亚硒酸酯。
经上述步骤1至步骤4，可以制得锁阳多糖亚硒酸酯，经ICP-AES检测知，该锁阳多糖亚硒酸酯中的硒含量为3761mg/kg。
实施例6
在本实施例中，锁阳多糖亚硒酸酯的制备方法包括：
步骤1：溶胀处理：将1.0g锁阳多糖加入100ml体积浓度为0.3％硝酸溶液中，在室温下搅拌过夜，使其充分溶胀，得到锁阳多糖硝酸溶液，放置在室温下备用；
步骤2：酯化反应：在步骤1得到的锁阳多糖硝酸溶液中，加入亚硒酸钠和氯化锡的混合物3.350g，在60℃的水浴中搅拌反应6小时后，冷却至室温、在0.08Mpa下抽滤；
使用无水碳酸钠、将抽滤后的滤液的PH值调至6后，进行一次离心处理，得到一次上清液；这里，亚硒酸钠与氯化锡的质量比例为1∶2.616；
步骤3：纯化：将步骤2得到的一次上清液，装入截留量为8000～12000道尔顿的透析袋中，流水透析48小时后，进行蒸馏水透析，直至透析袋中的液体加入抗坏血酸时红色消失时，停止蒸馏水透析，并在60℃、0.08Mpa下，将透析袋内的液体减压浓缩至原体积的1/40；
步骤4：在步骤3得到的浓缩液中加入乙醇，使乙醇的体积占浓缩液和乙醇总体积的75％，在室温下静置20小时进行醇沉，之后以温度为20℃，4500转/分钟的转速进行二次离心处理；
将二次离心处理得到的下沉沉淀在-60℃、5Pa的条件下冷冻干燥48小时，得到纯化的锁阳多糖亚硒酸酯。
经上述步骤1至步骤4，可以制得锁阳多糖亚硒酸酯，经ICP-AES检测知，该锁阳多糖亚硒酸酯中的硒含量为7859mg/kg。
本发明上述各实施例，以兰州百合多糖或锁阳多糖为原料，利用硝酸-氯化锡法，高效、快速的制备天然植物多糖亚硒酸酯；具体的，以天然植物多糖兰州百合或锁阳多糖为原料，首次在硝酸～氯化锡的催化作用下，利用亚硒酸钠对兰州百合多糖或锁阳多糖进行分子修饰，合成了兰州百合多糖亚硒酸酯或锁阳多糖亚硒酸酯。反应条件可控，重复性高，溶解性好，市场前景好；在分子结构中引入亚硒酸根，其中硒是正四价，硒是处于中间价态，既可以被氧化也可以被还原，因此本发明的多糖亚硒酸酯在人体内具有潜在的生物活性。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。