一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法.pdf

摘要
申请专利号：	CN201410328595.3	申请日：	2014.07.11
公开号：	CN104072630A	公开日：	2014.10.01
当前法律状态：	授权	有效性：	有权
法律详情：	授权\|\|\|实质审查的生效IPC(主分类):C08B 37/00申请日:20140711\|\|\|公开
IPC分类号：	C08B37/00	主分类号：	C08B37/00
申请人：	合肥工业大学
发明人：	王军辉; 张建波; 杜逸群; 刘咏; 张海林
地址：	230009 安徽省合肥市包河区屯溪路193号
优先权：
专利代理机构：	合肥金安专利事务所 34114	代理人：	金惠贞
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内容摘要

本发明涉及一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法。通过沸水浸提、醇沉、脱蛋白、透析和冻融的方法提取了一种絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖，并测定了其一级结构。该黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0.54%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成。本发明具有以下优点：（1）通过冻融方法分离出一种β-(1→6)-葡聚糖，操作简便，便于大规模生产。（2）提取的β-(1→6)-葡聚糖在黄山石耳中含量丰富，扩大了其应用领域和范围。（3）一定浓度的多糖溶液，在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶，预示了其在食品中有广泛的应用前景，如作为胶凝剂，乳化剂及增稠剂等。

权利要求书

1.  一种黄山石耳冷致凝胶多糖，其特征在于：所述黄山石耳冷致凝胶多糖为絮状，为一种酸性多糖，糖醛酸含量为0.54%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。

2.  制备权利要求1所述一种黄山石耳冷致凝胶多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）将黄山石耳粉碎，脱色脱脂，烘干，得到石耳粉；（2）水提得到水提液；（3）加入乙醇醇沉，收集沉淀物；（4）用H₂O₂脱色，得到脱色后的提取液；（5）用Sevag试剂脱蛋白；（6）透析离心；（7）冻融处理，保留解冻沉淀物；（8）纯化得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为0.54%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。

3.  根据权利要求2所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于具体制备操作步骤如下：
（1）原料预处理：将干燥的黄山石耳粉碎，过80目筛，并经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂8-10 h，温度45-55℃烘干，得到石耳粉；
（2）多糖的提取：将石耳粉置于30-50倍体积的沸水中，提取时间2 h，提取2-3次，经纱布过滤，合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3～1/4，得到水提液；
（3）醇沉：在水提液中缓慢加入四倍体积的95%的乙醇，搅拌均匀，在温度4℃条件下静置8～10小时，离心，收集沉淀物；
（4）脱色：将上述沉淀物复溶于50℃的热水中，按1/10-1/15体积的量加入H₂O₂脱色剂，得到脱色后的提取液；
（5）脱蛋白：按脱色后的提取液1/3-1/4体积加入Sevag试剂，摇晃20min至不出现沉淀，表明蛋白质去除完全，得到脱蛋白提取液；
（6）透析离心：将脱蛋白提取液进行透析处理，先用自来水流水透析3～4天，再用蒸馏水透析3～4天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；
（7）冻融处理：将上清液在-20℃条件下静置24-36 h，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；
（8）纯化：将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗3～4遍，真空冷冻干燥，得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为0.54%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。

4.  根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所加入的95%乙醇的体积为浓缩液的4倍。

5.  根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于：步骤（4）中所加入的H₂O₂的浓度为20%-30%，脱色温度为45-55 ℃，脱色时间为4～6 h。

6.  根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于：步骤（5）中的Sevag试剂为氯仿和正丁醇的混合物，氯仿和正丁醇的质量比为4：1。

7.  根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于：步骤（6）中所述透析的截留分子量为3500 Da。

说明书

一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法
技术领域
本发明涉及具有应用前景的黄山石耳冷致凝胶多糖的制备和结构鉴定领域，确切地说是一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法。
背景技术
黄山石耳，石耳科，石耳属，地衣门，学名为Umbilicaria esculenta (Miyoshi) Minks。黄山石耳主要分布在安徽省黄山市，被称为“黄山三石”之一，是一种重要的地衣。黄山石耳含有多种活性成分，主要包括地衣酸和多糖类，具有调节人体新陈代谢、帮助消化、降低血压、减少胆固醇、预防肝硬变、消除胆结石、防治佝偻病等功效。
专利《一种皖南石耳多糖的制备方法》（公开号：CN 103588893 A）中提出了一种皖南石耳多糖的制备方法，其通过热水浸提、膜分离和柱层析等步骤获得皖南石耳多糖，但是其方法并不能获得相对均一的多糖，其获得的多糖组成复杂，尚不能得到有效地分离。我们以黄山石耳为原料，提取了一种采用简单方法制备其主要活性成分的冷致凝胶多糖。
发明内容
本发明的目的是在于提供一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法，通过以下步骤实现：
一种黄山石耳冷致凝胶多糖为絮状，为一种酸性多糖，糖醛酸含量为0.54%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。
制备黄山石耳冷致凝胶多糖包括以下步骤：（1）将黄山石耳粉碎，脱色脱脂，烘干，得到石耳粉；（2）水提得到水提液；（3）加入乙醇醇沉，收集沉淀物；（4）用H₂O₂脱色，得到脱色后的提取液；（5）用Sevag试剂脱蛋白；（6）透析离心；（7）冻融处理，保留解冻沉淀物；（8）纯化得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为0.54%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。
本发明的有益技术效果体现在以下方面：
（1）通过冻融方法分离出一种β-(1→6)-葡聚糖，操作简便，便于大规模生产；
（2）提取的β-(1→6)-葡聚糖在黄山石耳中含量丰富，提取率高达25%，扩大了其应用领域和范围；
（3）浓度大于1.0×10^-2g/mL的黄山石耳多糖溶液，在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶，预示了其在食品中有广泛的应用前景，如作为胶凝剂，乳化剂及增稠剂等；
（4）扩大了黄山石耳的利用范围，提升了了黄山石耳的利用价值。
附图说明
图1为实施例1的黄山石耳多糖的红外光谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。
实施例1-3所用原料的来源说明如下：
黄山石耳购自安徽省黄山市，经去除杂质、烘干后备用。实验中用到的透析袋购自Solarbio公司，其它化学药品均购自国药集团化学试剂有限公司，其中用于醇沉的酒精为工业酒精，剩下的药品为分析纯级。
实施例1
（1）石耳原料的预处理：将干石耳样品用高速粉碎机粉碎，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂8 h后，45 ℃烘干；
（2）多糖的提取：在脱色脱脂后的石耳粉体中加入30倍体积的去离子水，沸水提取时间1 h，提取2次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；
（3）醇沉：往上述浓缩液中加入四倍体积的95%的乙醇，搅拌均匀，置于4 ℃冰箱中过夜；
（4）脱色：将离心后得到的沉淀物复溶于50℃的热水中，按1/10体积的量加入浓度20%的H₂O₂脱色剂，脱色温度为45 ℃，脱色时间为4 h，得到脱色后的提取液；
（5）脱蛋白：按脱色后的提取液1/4体积加入Sevag试剂（氯仿：正丁醇=4：1），摇晃20min至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；
（6）透析离心：使用3500Da透析袋进行透析处理，先用自来水流水透析3~4天，再用蒸馏水透析3~4天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；
（7）冻融处理：将上清液置于-20 ℃冰箱中24 h，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；
（8）纯化：将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗4遍，真空冷冻干燥，得到絮状的石耳凝胶多糖；
（9）结构表征：用FT-IR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明：黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0.54%±0.015%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。
实施例2
（1）石耳原料的预处理：将干石耳样品用高速粉碎机粉碎，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂10 h后，55℃烘干；
（2）多糖的提取：在脱色脱脂后的石耳粉体中加入50倍体积的去离子水，沸水提取3 h,提取3次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；
（3）醇沉：往上述浓缩液中加入四倍体积的95%的乙醇，搅拌均匀，置于4 ℃冰箱中过夜；
（4）脱色：将离心后得到的沉淀物复溶于50℃的热水中，按1/15体积的量加入浓度30%的H₂O₂脱色剂，脱色温度为55 ℃，脱色时间为6 h，得到脱色后的提取液；
（5）脱蛋白：按脱色后的提取液1/3体积加入Sevag试剂（氯仿：正丁醇=4：1），摇晃20min至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；
（6）透析：使用3500Da透析袋进行透析处理，先用自来水流水透析3天，再用蒸馏水透析3天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；
（7）冻融处理：将上清液置于-20 ℃冰箱中24 h，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；
（8）纯化：将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗4遍，真空冷冻干燥，得到石耳凝胶多糖；
（9）结构表征：用FT-IR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明：黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0.54%±0.019%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。
实施例3
（1）石耳原料的预处理：将干石耳样品用高速粉碎机粉碎，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂8 h后，45 ℃烘干；
（2）多糖的提取：在脱色脱脂后的石耳粉体中加入40倍体积的去离子水，提取时间2 h，提取2次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；
（3）醇沉：往上述浓缩液中加入四倍体积的95%的乙醇，搅拌均匀，置于4 ℃冰箱中过夜；
（4）脱色：将离心后得到的沉淀物复溶于50℃的热水中，按1/10体积的量加入浓度25%的H₂O₂脱色剂，脱色温度为50 ℃，脱色时间为5 h，得到脱色后的提取液；
（5）脱蛋白：按脱色后的提取液1/3体积加入Sevag试剂（氯仿：正丁醇=4：1），摇晃20min至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；
（6）透析：使用3500Da透析袋进行透析处理，先用自来水流水透析4天，再用蒸馏水透析4天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；
（7）冻融处理：将上清液置于-20 ℃冰箱中36 h，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；
（8）纯化：将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗3遍，真空冷冻干燥，得到石耳凝胶多糖；
（9）结构表征：用FT-IR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明：黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0.54%±0.010%，其糖链由β-(1→6)-葡聚糖组成，浓度大于1.0×10^-2g/mL的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。

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1、10申请公布号CN104072630A43申请公布日20141001CN104072630A21申请号201410328595322申请日20140711C08B37/0020060171申请人合肥工业大学地址230009安徽省合肥市包河区屯溪路193号72发明人王军辉张建波杜逸群刘咏张海林74专利代理机构合肥金安专利事务所34114代理人金惠贞54发明名称一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法57摘要本发明涉及一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法。通过沸水浸提、醇沉、脱蛋白、透析和冻融的方法提取了一种絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖，并测定了其一级结构。该黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量。

2、为054，其糖链由16葡聚糖组成。本发明具有以下优点（1）通过冻融方法分离出一种16葡聚糖，操作简便，便于大规模生产。（2）提取的16葡聚糖在黄山石耳中含量丰富，扩大了其应用领域和范围。（3）一定浓度的多糖溶液，在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶，预示了其在食品中有广泛的应用前景，如作为胶凝剂，乳化剂及增稠剂等。51INTCL权利要求书1页说明书3页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图1页10申请公布号CN104072630ACN104072630A1/1页21一种黄山石耳冷致凝胶多糖，其特征在于所述黄山石耳冷致凝胶多糖为絮状，为一种酸性多糖。

3、，糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。2制备权利要求1所述一种黄山石耳冷致凝胶多糖的方法，其特征在于包括以下步骤（1）将黄山石耳粉碎，脱色脱脂，烘干，得到石耳粉；（2）水提得到水提液；（3）加入乙醇醇沉，收集沉淀物；（4）用H2O2脱色，得到脱色后的提取液；（5）用SEVAG试剂脱蛋白；（6）透析离心；（7）冻融处理，保留解冻沉淀物；（8）纯化得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。3根据权利要求。

4、2所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于具体制备操作步骤如下（1）原料预处理将干燥的黄山石耳粉碎，过80目筛，并经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂810H，温度4555烘干，得到石耳粉；（2）多糖的提取将石耳粉置于3050倍体积的沸水中，提取时间2H，提取23次，经纱布过滤，合并提取液，减压浓缩至原体积的1/31/4，得到水提液；（3）醇沉在水提液中缓慢加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，在温度4条件下静置810小时，离心，收集沉淀物；（4）脱色将上述沉淀物复溶于50的热水中，按1/101/15体积的量加入H2O2脱色剂，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/31/4体积。

5、加入SEVAG试剂，摇晃20MIN至不出现沉淀，表明蛋白质去除完全，得到脱蛋白提取液；（6）透析离心将脱蛋白提取液进行透析处理，先用自来水流水透析34天，再用蒸馏水透析34天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液在20条件下静置2436H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗34遍，真空冷冻干燥，得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。4根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备。

6、方法，其特征在于步骤（3）中所加入的95乙醇的体积为浓缩液的4倍。5根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于步骤（4）中所加入的H2O2的浓度为2030，脱色温度为4555，脱色时间为46H。6根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于步骤（5）中的SEVAG试剂为氯仿和正丁醇的混合物，氯仿和正丁醇的质量比为41。7根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于步骤（6）中所述透析的截留分子量为3500DA。权利要求书CN104072630A1/3页3一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法技术领域0001本发明涉及具有应用前景。

7、的黄山石耳冷致凝胶多糖的制备和结构鉴定领域，确切地说是一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法。背景技术0002黄山石耳，石耳科，石耳属，地衣门，学名为UMBILICARIAESCULENTAMIYOSHIMINKS。黄山石耳主要分布在安徽省黄山市，被称为“黄山三石”之一，是一种重要的地衣。黄山石耳含有多种活性成分，主要包括地衣酸和多糖类，具有调节人体新陈代谢、帮助消化、降低血压、减少胆固醇、预防肝硬变、消除胆结石、防治佝偻病等功效。0003专利一种皖南石耳多糖的制备方法（公开号CN103588893A）中提出了一种皖南石耳多糖的制备方法，其通过热水浸提、膜分离和柱层析等步骤获得皖南石耳多糖，但是。

8、其方法并不能获得相对均一的多糖，其获得的多糖组成复杂，尚不能得到有效地分离。我们以黄山石耳为原料，提取了一种采用简单方法制备其主要活性成分的冷致凝胶多糖。发明内容0004本发明的目的是在于提供一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法，通过以下步骤实现一种黄山石耳冷致凝胶多糖为絮状，为一种酸性多糖，糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0005制备黄山石耳冷致凝胶多糖包括以下步骤（1）将黄山石耳粉碎，脱色脱脂，烘干，得到石耳粉；（2）水提得到水提液；（3）加入乙醇醇沉，收集沉淀物；（4）用H2O2脱色，得到脱色后的提取。

9、液；（5）用SEVAG试剂脱蛋白；（6）透析离心；（7）冻融处理，保留解冻沉淀物；（8）纯化得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0006本发明的有益技术效果体现在以下方面（1）通过冻融方法分离出一种16葡聚糖，操作简便，便于大规模生产；（2）提取的16葡聚糖在黄山石耳中含量丰富，提取率高达25，扩大了其应用领域和范围；（3）浓度大于10102G/ML的黄山石耳多糖溶液，在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶，预示了其在食品中有广泛的应用前景，如作为胶凝剂，乳化剂及增稠剂等；（。

10、4）扩大了黄山石耳的利用范围，提升了了黄山石耳的利用价值。附图说明0007图1为实施例1的黄山石耳多糖的红外光谱图。说明书CN104072630A2/3页4具体实施方式0008下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。0009实施例13所用原料的来源说明如下黄山石耳购自安徽省黄山市，经去除杂质、烘干后备用。实验中用到的透析袋购自SOLARBIO公司，其它化学药品均购自国药集团化学试剂有限公司，其中用于醇沉的酒精为工业酒精，剩下的药品为分析纯级。0010实施例1（1）石耳原料的预处理将干石耳样品用高速粉碎机粉碎，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂8H后，45烘干；（2）多糖的提取在脱色脱脂后。

11、的石耳粉体中加入30倍体积的去离子水，沸水提取时间1H，提取2次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；（3）醇沉往上述浓缩液中加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，置于4冰箱中过夜；（4）脱色将离心后得到的沉淀物复溶于50的热水中，按1/10体积的量加入浓度20的H2O2脱色剂，脱色温度为45，脱色时间为4H，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/4体积加入SEVAG试剂（氯仿正丁醇41），摇晃20MIN至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；（6）透析离心使用3500DA透析袋进行透析处理，先用自来水流水透析34天，再用蒸馏水透析34天；将经透析处理后的提取液经高速离心。

12、机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液置于20冰箱中24H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗4遍，真空冷冻干燥，得到絮状的石耳凝胶多糖；（9）结构表征用FTIR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0540015，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0011实施例2（1）石耳原料的预处理将干石耳样品用高速粉碎机粉碎，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂10H后，55。

13、烘干；（2）多糖的提取在脱色脱脂后的石耳粉体中加入50倍体积的去离子水，沸水提取3H,提取3次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；（3）醇沉往上述浓缩液中加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，置于4冰箱中过夜；（4）脱色将离心后得到的沉淀物复溶于50的热水中，按1/15体积的量加入浓度30的H2O2脱色剂，脱色温度为55，脱色时间为6H，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/3体积加入SEVAG试剂（氯仿正丁醇41），摇晃20MIN至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；说明书CN104072630A3/3页5（6）透析使用3500DA透析袋进行透析处理，先用自来水流水。

14、透析3天，再用蒸馏水透析3天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液置于20冰箱中24H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗4遍，真空冷冻干燥，得到石耳凝胶多糖；（9）结构表征用FTIR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0540019，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0012实施例3（1）石耳原料的预处理将干石耳样品用高速粉碎机粉碎。

15、，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂8H后，45烘干；（2）多糖的提取在脱色脱脂后的石耳粉体中加入40倍体积的去离子水，提取时间2H，提取2次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；（3）醇沉往上述浓缩液中加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，置于4冰箱中过夜；（4）脱色将离心后得到的沉淀物复溶于50的热水中，按1/10体积的量加入浓度25的H2O2脱色剂，脱色温度为50，脱色时间为5H，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/3体积加入SEVAG试剂（氯仿正丁醇41），摇晃20MIN至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；（6）透析使用3500DA透析袋进行透析处理，。

16、先用自来水流水透析4天，再用蒸馏水透析4天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液置于20冰箱中36H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗3遍，真空冷冻干燥，得到石耳凝胶多糖；（9）结构表征用FTIR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0540010，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。说明书CN104072630A1/1页6图1说明书附图CN104072630A。

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