一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法.pdf

1、10申请公布号CN104072630A43申请公布日20141001CN104072630A21申请号201410328595322申请日20140711C08B37/0020060171申请人合肥工业大学地址230009安徽省合肥市包河区屯溪路193号72发明人王军辉张建波杜逸群刘咏张海林74专利代理机构合肥金安专利事务所34114代理人金惠贞54发明名称一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法57摘要本发明涉及一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法。通过沸水浸提、醇沉、脱蛋白、透析和冻融的方法提取了一种絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖，并测定了其一级结构。该黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量

2、为054，其糖链由16葡聚糖组成。本发明具有以下优点（1）通过冻融方法分离出一种16葡聚糖，操作简便，便于大规模生产。（2）提取的16葡聚糖在黄山石耳中含量丰富，扩大了其应用领域和范围。（3）一定浓度的多糖溶液，在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶，预示了其在食品中有广泛的应用前景，如作为胶凝剂，乳化剂及增稠剂等。51INTCL权利要求书1页说明书3页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页附图1页10申请公布号CN104072630ACN104072630A1/1页21一种黄山石耳冷致凝胶多糖，其特征在于所述黄山石耳冷致凝胶多糖为絮状，为一种酸性多糖

3、，糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。2制备权利要求1所述一种黄山石耳冷致凝胶多糖的方法，其特征在于包括以下步骤（1）将黄山石耳粉碎，脱色脱脂，烘干，得到石耳粉；（2）水提得到水提液；（3）加入乙醇醇沉，收集沉淀物；（4）用H2O2脱色，得到脱色后的提取液；（5）用SEVAG试剂脱蛋白；（6）透析离心；（7）冻融处理，保留解冻沉淀物；（8）纯化得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。3根据权利要求

4、2所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于具体制备操作步骤如下（1）原料预处理将干燥的黄山石耳粉碎，过80目筛，并经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂810H，温度4555烘干，得到石耳粉；（2）多糖的提取将石耳粉置于3050倍体积的沸水中，提取时间2H，提取23次，经纱布过滤，合并提取液，减压浓缩至原体积的1/31/4，得到水提液；（3）醇沉在水提液中缓慢加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，在温度4条件下静置810小时，离心，收集沉淀物；（4）脱色将上述沉淀物复溶于50的热水中，按1/101/15体积的量加入H2O2脱色剂，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/31/4体积

5、加入SEVAG试剂，摇晃20MIN至不出现沉淀，表明蛋白质去除完全，得到脱蛋白提取液；（6）透析离心将脱蛋白提取液进行透析处理，先用自来水流水透析34天，再用蒸馏水透析34天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液在20条件下静置2436H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗34遍，真空冷冻干燥，得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。4根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备

6、方法，其特征在于步骤（3）中所加入的95乙醇的体积为浓缩液的4倍。5根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于步骤（4）中所加入的H2O2的浓度为2030，脱色温度为4555，脱色时间为46H。6根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于步骤（5）中的SEVAG试剂为氯仿和正丁醇的混合物，氯仿和正丁醇的质量比为41。7根据权利要求3所述的一种黄山石耳冷致凝胶多糖的制备方法，其特征在于步骤（6）中所述透析的截留分子量为3500DA。权利要求书CN104072630A1/3页3一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法技术领域0001本发明涉及具有应用前景

7、的黄山石耳冷致凝胶多糖的制备和结构鉴定领域，确切地说是一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法。背景技术0002黄山石耳，石耳科，石耳属，地衣门，学名为UMBILICARIAESCULENTAMIYOSHIMINKS。黄山石耳主要分布在安徽省黄山市，被称为“黄山三石”之一，是一种重要的地衣。黄山石耳含有多种活性成分，主要包括地衣酸和多糖类，具有调节人体新陈代谢、帮助消化、降低血压、减少胆固醇、预防肝硬变、消除胆结石、防治佝偻病等功效。0003专利一种皖南石耳多糖的制备方法（公开号CN103588893A）中提出了一种皖南石耳多糖的制备方法，其通过热水浸提、膜分离和柱层析等步骤获得皖南石耳多糖，但是

8、其方法并不能获得相对均一的多糖，其获得的多糖组成复杂，尚不能得到有效地分离。我们以黄山石耳为原料，提取了一种采用简单方法制备其主要活性成分的冷致凝胶多糖。发明内容0004本发明的目的是在于提供一种黄山石耳冷致凝胶多糖及其制备方法，通过以下步骤实现一种黄山石耳冷致凝胶多糖为絮状，为一种酸性多糖，糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0005制备黄山石耳冷致凝胶多糖包括以下步骤（1）将黄山石耳粉碎，脱色脱脂，烘干，得到石耳粉；（2）水提得到水提液；（3）加入乙醇醇沉，收集沉淀物；（4）用H2O2脱色，得到脱色后的提取

9、液；（5）用SEVAG试剂脱蛋白；（6）透析离心；（7）冻融处理，保留解冻沉淀物；（8）纯化得到絮状的黄山石耳冷致凝胶多糖；其中糖醛酸含量为054，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0006本发明的有益技术效果体现在以下方面（1）通过冻融方法分离出一种16葡聚糖，操作简便，便于大规模生产；（2）提取的16葡聚糖在黄山石耳中含量丰富，提取率高达25，扩大了其应用领域和范围；（3）浓度大于10102G/ML的黄山石耳多糖溶液，在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶，预示了其在食品中有广泛的应用前景，如作为胶凝剂，乳化剂及增稠剂等；（

10、4）扩大了黄山石耳的利用范围，提升了了黄山石耳的利用价值。附图说明0007图1为实施例1的黄山石耳多糖的红外光谱图。说明书CN104072630A2/3页4具体实施方式0008下面结合实施例，对本发明作进一步地说明。0009实施例13所用原料的来源说明如下黄山石耳购自安徽省黄山市，经去除杂质、烘干后备用。实验中用到的透析袋购自SOLARBIO公司，其它化学药品均购自国药集团化学试剂有限公司，其中用于醇沉的酒精为工业酒精，剩下的药品为分析纯级。0010实施例1（1）石耳原料的预处理将干石耳样品用高速粉碎机粉碎，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂8H后，45烘干；（2）多糖的提取在脱色脱脂后

11、的石耳粉体中加入30倍体积的去离子水，沸水提取时间1H，提取2次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；（3）醇沉往上述浓缩液中加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，置于4冰箱中过夜；（4）脱色将离心后得到的沉淀物复溶于50的热水中，按1/10体积的量加入浓度20的H2O2脱色剂，脱色温度为45，脱色时间为4H，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/4体积加入SEVAG试剂（氯仿正丁醇41），摇晃20MIN至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；（6）透析离心使用3500DA透析袋进行透析处理，先用自来水流水透析34天，再用蒸馏水透析34天；将经透析处理后的提取液经高速离心

12、机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液置于20冰箱中24H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗4遍，真空冷冻干燥，得到絮状的石耳凝胶多糖；（9）结构表征用FTIR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0540015，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0011实施例2（1）石耳原料的预处理将干石耳样品用高速粉碎机粉碎，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂10H后，55

13、烘干；（2）多糖的提取在脱色脱脂后的石耳粉体中加入50倍体积的去离子水，沸水提取3H,提取3次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；（3）醇沉往上述浓缩液中加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，置于4冰箱中过夜；（4）脱色将离心后得到的沉淀物复溶于50的热水中，按1/15体积的量加入浓度30的H2O2脱色剂，脱色温度为55，脱色时间为6H，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/3体积加入SEVAG试剂（氯仿正丁醇41），摇晃20MIN至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；说明书CN104072630A3/3页5（6）透析使用3500DA透析袋进行透析处理，先用自来水流水

14、透析3天，再用蒸馏水透析3天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液置于20冰箱中24H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗4遍，真空冷冻干燥，得到石耳凝胶多糖；（9）结构表征用FTIR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0540019，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。0012实施例3（1）石耳原料的预处理将干石耳样品用高速粉碎机粉碎

15、，过80目筛，经丙酮和乙酸乙酯回流脱色脱脂8H后，45烘干；（2）多糖的提取在脱色脱脂后的石耳粉体中加入40倍体积的去离子水，提取时间2H，提取2次，经纱布过滤后合并提取液，减压浓缩至原体积的1/3；（3）醇沉往上述浓缩液中加入四倍体积的95的乙醇，搅拌均匀，置于4冰箱中过夜；（4）脱色将离心后得到的沉淀物复溶于50的热水中，按1/10体积的量加入浓度25的H2O2脱色剂，脱色温度为50，脱色时间为5H，得到脱色后的提取液；（5）脱蛋白按脱色后的提取液1/3体积加入SEVAG试剂（氯仿正丁醇41），摇晃20MIN至不再出现沉淀，表明蛋白质去除完全；（6）透析使用3500DA透析袋进行透析处理，

16、先用自来水流水透析4天，再用蒸馏水透析4天；将经透析处理后的提取液经高速离心机离心，弃去沉淀，保留上清液；（7）冻融处理将上清液置于20冰箱中36H，室温下解冻，离心分离两相，保留解冻沉淀物；（8）纯化将解冻沉淀物用超纯水在室温下洗3遍，真空冷冻干燥，得到石耳凝胶多糖；（9）结构表征用FTIR、GC、甲基化、NMR确定其一级结构，并采用间羟基联苯法对其糖醛酸含量进行了测定。结果表明黄山石耳冷致凝胶多糖是一种酸性多糖，糖醛酸含量为0540010，其糖链由16葡聚糖组成，浓度大于10102G/ML的多糖溶液在室温下不需要添加附加物即可以形成凝胶。说明书CN104072630A1/1页6图1说明书附图CN104072630A