技术领域
本发明属于保健品领域，具体涉及一种具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊及其制备方法。
背景技术
高血脂、高血压与高血糖被称为“三高”，三者密切相关，但实际情况是，目前病患广泛关注高血压与高血糖及其所引发的并发症问题，对高血脂及其并发症的关注程度相对较低，危害了解程度相对较差，预防控制意识教弱。并且卫生部公布的“中国居民营养与健康现状”报告显示：中国血脂异常人口有1.6亿，且随着国家人均生活水平的逐步改善和提高，血脂异常人数还在持续增加。
公开号为CN102907677A的专利提出一种辅助降血脂功能的沙棘紫苏油软胶囊，所述软胶囊由囊壳和内容物组成，有效成分内容物由如下重量百分比的原料制成：沙棘籽油30～50％和紫苏籽油70～50％。两种原料均具有较好的食用、药用价值，根据两者各自的特点，取长补短，进行复配，经试验证明两者配溶性好，互助性强，可相辅组成发挥互补协调增效作用。然而，所述软胶囊受限于组分数量和复配方式，作用功能并不全面，故仍需进一步研制具有降血脂功效的保健食品。
发明内容
为了解决现有技术存在的问题，本发明提供了一种具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊及其制备方法。所述具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊原料间作用相互协同，且经动物、人体临床实验证实对于辅助降血脂有显著的效果。所述制备方法可复制性强，有利于规模化生产。
本发明的方案为提供了一种具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊，包括如下重量份的原料：紫苏油250～350份、黑加仑油100～200份、维生素E 0.4～1.0份、明胶50～100份和甘油20～50份。
优选地，所述的具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊包括如下重量份原料的制成：紫苏油300份、黑加仑油150份、维生素E 0.7份、明胶75份和甘油35份。
本发明还提供一种具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊的制备方法，包括以下步骤：
(1)将紫苏油、黑加仑油和维生素E均匀搅拌混合，得混合物a；
(2)将明胶与纯净水充分搅拌混合，完毕后得膨胀明胶；将甘油与纯净水均匀搅拌混合后，得混合甘油；
(3)将步骤(2)所得膨胀明胶与所得混合甘油均匀混合后，得混合胶液；
(4)待步骤(3)所得的混合胶液固化后，压片制成胶囊壳，并将步骤(1)所得混合物a封入胶囊壳中，再经预干燥、清洗、终干燥后即得具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊。
优选地，步骤(1)中，所述均匀搅拌混合转速为60～100r/min，搅拌温度为50～60℃，搅拌时间为40～60min。
优选地，步骤(2)中，所述明胶与纯净水的添加重量比为1:0.7～0.9。
优选地，步骤(2)中，所述甘油与纯净水的添加重量比为1:0.4～0.6。
优选地，步骤(4)中，所述预干燥方法为：在温度30～35℃、相对湿度为15～25％RH条件下干燥至胶囊壳含水量为6～8％。
优选地，步骤(4)中，所述清洗以85～95％的酒精进行清洗。
优选地，步骤(4)中，所述终干燥方法为：将清洗好的胶囊在温度为21～24℃、相对湿度为30～40％RH的条件下干燥28～32h。
本发明的有益效果为：
1、本发明所述的具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊，含有关键性的有效成分：其中紫苏油富含的α-亚麻酸和黑加仑油富含的γ-亚麻酸均具有使甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)与高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的比值(LDL-C/HDL-C)降低的作用，即能够调节降低血脂；再辅以能够改善脂质代谢的维生素E，对于降低血中胆固醇、甘油三酯以及在增加动脉管壁的弹性等方面均能发挥重要作用。且经动物及人体临床实验证实，三种原料间作用相互协同，对于辅助降血脂有显著的效果。
2、本发明所述的具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊的制备方法，所述制备方法简单易操作：仅需将紫苏油、黑加仑油和维生素E混合后装填胶囊壳即可，制备方法可复制性强，有利于规模化生产。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
实施例1
本实施例提供一种具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊的制备方法，包括如下步骤：
(1)将250g紫苏油、200g黑加仑油和0.4g维生素E在搅拌转速为60r/min、搅拌温度为60℃的条件下均匀混合40min，得混合物a；
(2)将100g明胶与70g纯净水充分搅拌混合，完毕后得膨胀明胶；将20g甘油与8g纯净水均匀搅拌混合后，得混合甘油；
(3)将步骤(2)所得膨胀明胶与混合甘油均匀混合后，得混合胶液；
(4)将步骤(3)所得的混合胶液固化后，压片制成胶囊壳，并将步骤(1)所得混合物a封入胶囊壳中，再在温度为30℃、相对湿度为25％RH的条件下预干燥至胶囊壳含水量至6％，然后经浓度为85％的酒精清洗，最后在温度为21℃、相对湿度为40％RH的条件下终干燥28h，即得具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊。
实施例2
本实施例提供一种具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊的制备方法，包括如下步骤：
(1)将350g紫苏油、100g黑加仑油和1.0g维生素E在搅拌转速为100r/min、搅拌温度为50℃的条件下均匀混合60min，得混合物a；
(2)将50g明胶与45g纯净水充分搅拌混合，完毕后得膨胀明胶；将50g甘油与30g纯净水均匀搅拌混合后，得混合甘油；
(3)将步骤(2)所得膨胀明胶与混合甘油均匀混合后，得混合胶液；
(4)将步骤(3)所得的混合胶液固化后，压片制成胶囊壳，并将步骤(1)所得混合物a封入胶囊壳中，再在温度为35℃、相对湿度为15％RH的条件下预干燥至胶囊壳含水量至8％，然后经浓度为95％的酒精清洗，最后在温度为24℃、相对湿度为30％RH的条件下终干燥32h，即得具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊。
实施例3
本实施例提供一种具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊的制备方法，包括如下步骤：
(1)将300g紫苏油、150g黑加仑油和0.7g维生素E在搅拌转速为80r/min、搅拌温度为55℃的条件下均匀混合50min，得混合物a；
(2)将75g明胶与60g纯净水充分搅拌混合，完毕后得膨胀明胶；将35g甘油与17.5g纯净水均匀搅拌混合后，得混合甘油；
(3)将步骤(2)所得膨胀明胶与混合甘油再次均匀混合后，得混合胶液；
(4)将步骤(3)所得的混合胶液固化后，压片制成胶囊壳，并将步骤(1)所得混合物a封入胶囊壳中，再在温度为32℃、相对湿度为20％RH的条件下预干燥至胶囊壳含水量至7％，然后经浓度为90％的酒精清洗，最后在温度为22℃、相对湿度为35％RH的条件下终干燥30h，即得具有辅助降血脂功效的保健食品胶囊。
现对制备所得的具有辅助降血脂功效的保健食品进行安全性毒理实验、降血脂动物实验、降血脂人体实验及卫生学、稳定性检测：
一、安全性毒理实验：
1、实验用动物及环境：中南大学实验动物学部提供的清洁剂级昆明种小鼠(批准证号为湖南省医动字第20-011号)和SD大鼠(批准证号为湖南省医动字第20-010号)。试验期间环境温度23～25℃，湿度52～60％RH，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002号。
2、实验单位：湖南省疾病预防控制中心。
3、实验方法：
(1)小鼠急性毒性试验：选用体重为18～22g的健康昆明种小鼠20只，雌雄各半。设计量为21500mg/kg·bw，取本发明所述胶囊内容物，并配置成所需浓度，以0.2ml/10g·bw的灌胃体积，一日内间隔4小时给小鼠经口灌胃2次。灌胃前禁食16小时。灌胃后连续观察两周，记录中毒变现及死亡情况。
(2)污染物致突变性检测(Ames试验)：采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株菌株进行试验。采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝微粒体酶(S-9)作为体外代谢活化系统。在顶层琼脂中加入0.1ml试验菌株增菌液，0.1ml受试物溶液和0.5ml S-9混合液(当需要代谢活化时)，混匀后倒入底层培养基平板上。五个实验剂量分别为5000、1000、200、40、8ug/皿，取本样品内容物用二甲基亚砜配置。同时设自发回变、溶剂对照(二甲基亚砜)和阳性突变剂对照。37℃培养48小时，计数每皿菌落数。如果受试物的回变菌落数超过自发回变菌落数的2倍以上，并有剂量—反应关系者定为阳性。整套实验在相同实验条件下重复做两次。
(3)小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：采用间隔时间24小时两次经口灌胃法进行试验。取体重为25g-30g的健康昆明种小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg/kg·bw计量的环磷酰胺为阳性对照，食用植物油为阴性对照。试验组3个剂量分别为10000、5000、2500mg/kg·bw，高剂量组取样品内容物原液灌胃，中、低剂量组取样品用食用植物油配置所需浓度给小鼠灌胃，灌胃量为0.12mlmg/10g·bw。末次给样后6小时颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PCE)，微核发生率以含微核的PCE千分率计，按X2检验统计处理。计数200个嗜多染红细胞，计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比值(PCE/NCE)。
(4)小鼠精子畸形试验：取体重25g-35g的雄性昆明种小鼠25只，随机分为5组，每组5只。以40mg/kg·bw计量的环磷酰胺为阳性对照，食用植物油为阴性对照。实验组的三个剂量分别为10000mg/kg·bw、5000mg/kg·bw、2500mg/kg·bw，高剂量组取样品内容物原液灌胃，中、低剂量组取样品用食用植物油配置所需浓度给小鼠灌胃，灌胃量为0.12mlmg/10g·bw。每日灌胃一次，连续5天，于末次灌胃后的第30天处死动物，取副睾涂片，伊红染色，每只动物计数1000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率。按X2检验统计处理。
(5)30天喂养实验：
(Ⅰ)剂量组选择与受试物的给予方式：取70～90g的SD大鼠80只，雌雄各半。将实验动物随机分为四组，及对照组及三个受试物组，每组20只，雌雄各半。设样品内容物低、中、高剂量分别为1.33g/kg·bw、2.37g/kg·bw、5.33g/kg·bw，分别相当于人体推荐量的25、50、100倍。高剂量组灌原液，低、中剂量组取样品用食用植物油配置所需浓度，对照组给予等体积的食用植物油，每日灌胃一次，灌胃体积为0.6mlmg/100g·bw，连续30天。
(Ⅱ)试验方法：试验期间所有动物机遇普通饲料，单笼饲养，自由摄食饮水，每天观察动物的活动和生长情况，每周加食3次，记录给食量和剩食量，每周称一次体重，计算每周进食量和食物利用率，实验末计算总的食物利用率。实验末期，采尾尖血测定血红蛋白(Hb)、红细胞压积(HCT)，进行红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)计数及WBC分类。禁食14小时，摘眼球采血分离血清，测定TP、ALB、ALT、Cr、BUN、AST、CHOL、TGH和GLU。采血后颈椎脱臼处死动物做大体解剖，称肝、肾、脾、睾丸重量，计算脏/体比值，取肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸、卵巢作病理切片检查。在对各剂量组动物作大检查未发现明显病变和生化指标改变时，只进行最高剂量组及对照组动物主要脏器的组织病理学检查，如发现病变则对较低剂量组器官及组织进行检查。
4、实验结果：
(1)急性经口毒性试验：以21500mg/kg·bw计量的样品给两种性别的昆明种小鼠灌胃后未见明显中毒症状，观察14天无死亡。第15天将受试动物处死进行解剖检查，肝、脾、肾、胃、肠、心、肺等主要脏器，未见明显异常改变。样品对雌、雄昆明种小鼠的急性经口LD50大于21500mg/kg·bw。根据《保健食品检验与评价性技术规范》(2003年版)中的急性毒性分级标准，属无毒物。
(2)污染物致突变性检测(Ames试验)：对TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株，加与不加S-9，样品各剂量组回变菌落数均为超过自发回变菌落数的2倍，亦无剂量—反应关系，说明该受试物为诱变阴性。
(3)小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：样品各剂量组微核率与阴性对照组比较差异无显著性，而环磷酰胺组与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.05)，样品对小鼠骨髓细胞未见损伤作用。
(4)小鼠精子畸形试验：小鼠精子畸变发生率未产生明显改变，样品各剂量组与阴性对照组比较差异无显著性(P＞0.05),而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。样品对小鼠精子不产生畸变作用。
(5)30天喂养试验：30天喂养期间，各组动物生长发育良好，无异常行为和中毒症状，无死亡。具体表现如下：
(Ⅰ)样品对大鼠体重及食物利用率的影响：以1.33g/kg·bw、2.37g/kg·bw、5.33g/kg·bw剂量的样品给大鼠经口灌胃30天，喂养期间，各剂量组雌雄鼠各时点体重、末重和增重、平均进食量、总食物利用率与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。
(Ⅱ)样品对大鼠血常规指标的影响：以1.33g/kg·bw、2.37g/kg·bw、5.33g/kg·bw剂量的样品给大鼠经口灌胃30天，各剂量组雌雄大鼠的血红蛋白、红细胞总数、红细胞积压、血小板数、白细胞总数及分类与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。
(Ⅲ)样品对大鼠生化指标的影响：以1.33g/kg·bw、2.37g/kg·bw、5.33g/kg·bw剂量的样品给大鼠经口灌胃30天，对照组和各剂量组雌雄大鼠的血清谷丙转氨酶、胆固醇、尿素氮、肌酐、血糖、总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶及甘油三酯与对照组比较均无显著性差异(P＞0.05)。
(Ⅳ)样品对大鼠脏器/体重比值的影响：以1.33g/kg·bw、2.37g/kg·bw、5.33g/kg·bw剂量的样品给大鼠经口灌胃30天，各剂量组大鼠的肝/体、脾/体、肾/体、雄鼠睾/体比值与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。
(Ⅴ)大体解剖及组织学检查结果：在对各剂量组动物作大体解剖检查时，未发现明显病变，只进行高剂量组及对照组动物主要脏器的组织病理学检查。组织病理切片检查结果显示高剂量组肝、脾、肾、肠、胃、睾丸、卵巢与对照组比较均未见与样品有关的病理改变。
5、实验结论：
(1)小鼠急性毒性试验：急性经口LD50结果：对雌、雄昆明种小鼠急性经口LD50大于21500mg/kg·bw，属无毒。
(2)三项遗传毒性试验结果：污染物致突变性检测(Ames试验)、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验结果均为阴性。即Ames试验说明该受试物为诱变阴性；小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验样品对小鼠骨髓细胞未见损伤作用；小鼠精子畸形试验样品对小鼠精子不产生畸变作用。
(3)30天喂养试验记过：以1.33g/kg·bw、2.37g/kg·bw、5.33g/kg·bw剂量的产品样品给大鼠经口灌胃30天，试验期间，动物生长发育良好，各剂量组体重、增重、食物利用率、血常规指标、血生化指标、脏器/体重比值与对照组比较，无显著性差异(P＞0.05)。大体解剖和组织病理检查未见与样品有关的异常改变。提示该送检样品30天喂养对大鼠各项观察指标未产生明显毒副作用。
二、降血脂动物实验：
1、实验用动物及环境：中南大学实验动物学部提供的雄性SD大鼠(批准证号为湖南省医动字第20-010号)40只，体重160～190g。试验期间环境温度为23～26℃，湿度为54～68％RH。实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002号。
2、实验单位：湖南省疾病预防控制中心。
3、剂量选择：设低、中、高计量分别为0.267g/kg·bw、0.533g/kg·bw、1.599g/kg·bw，取本发明所述胶囊内容物，并配置成所需浓度，按0.5ml/100g·bw体积给大鼠灌胃，对照组给予等体积食用植物油。每日一次，连续30天。
4、判定依据：
(1)辅助降血脂功能结果判定：在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇检测中，血清总胆固醇、甘油三酯二项指标阳性，可判定该受试样品辅助降血脂功能动物实验结果为阳性。
(2)辅助降低甘油三酯结果判定：甘油三酯二个剂量组结果阳性或甘油三酯一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低甘油三酯动物实验结果为阳性。
(3)辅助降低血清总胆固醇结果判定：血清总胆固醇二个剂量组结果阳性或血清总胆固醇一个剂量组结果阳性，同时高密度脂蛋白胆固醇显著高于对照组，可判定该受试样品辅助降低血清总胆固醇动物实验结果为阳性。
5、实验结果：
以0.267g/kg·bw、0.533g/kg·bw、1.599g/kg·bw剂量的样品给大鼠灌胃30天，1.599g/kg·bw剂量可显著降低饲高脂饲料大鼠血清总胆固醇水平(P＜0.05)，0.533g/kg·bw剂量可显著降低饲高脂饲料大鼠血清甘油三酯水平(P＜0.05)，0.267g/kg·bw剂量可显著降低饲高脂饲料大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇水平(P＜0.05)。综上所述，胶囊保健食品具有辅助降血脂作用。
三、降血脂人体实验：
1、受试者选择：
(1)纳入标准：受试者选自湖南省长沙市岳麓区雅湾社区，性别不限。年龄18～65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿受试保证配合。
(2)受试者排除标准：妊娠或哺乳期妇女，对保健食品过敏者；心、肝、肾和造血系统严重疾病患者；短期内服用与受试功能有关的物品，影响对结果判断者；不符合纳入标准，未按规定食用受试样品，无法判断功效或资料不全影响功效或安全性判定者。
2、实验设计与分组：采用自身和组间两种对照设计。接受试者血脂水平随机分为产品样品试食组和安慰剂对照组，尽可能考虑影响结果的主要因素如年龄、性别等，进行平衡性检验，以保证组间的可比性。试食组50例，对照组50例。按双盲法进行试食实验。
3、试验方法：受试者每天服用产品或安慰剂2次，每次4粒，连续服用45天。试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食。
4、实验单位：湖南省疾病预防控制中心。
5、判定依据：
(1)胆固醇(CHOL)降低＞10％；甘油三酯(TG)降低＞15％；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)上升＞0.104mmol/L；各功效观察指标实验前后自身比较和试食后组间比较均有统计学意义，方可判定该指标阳性；
(2)血清总胆固醇、甘油三酯二项指标阳性，高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，可判定受试样品具有辅助降血脂功能作用；血清总胆固醇、甘油三酯二项指标中一项阳性，高密度脂蛋白胆固醇不显著低于对照组，可判定受试样品具有辅助降低血清胆固醇或辅助降低甘油三酯作用。
6、结果判断：
(1)安全性观察：
(Ⅰ)试食实验前后的试食样品前、后试食组及对照组血常规指标变化值均在正常范围内。
(Ⅱ)试食实验前后的试食样品前、后试食组及对照组肝功能指标血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)变化值均在正常范围内。
(Ⅲ)试食实验前后的试食样品前、后试食组及对照组肾功能指标血清肌酐(Cr)、血糖(GLU)、血清尿素氮(BUN)变化值均在正常范围内。
(2)结果判定：
采用自身对照及组间对照方法，选择身体健康状况良好的志愿受试者100例，随机分为产品样品试食组(50例)和安慰剂对照组(50例)，服用受试物45天后，结果表明：服用产品样品试食组自身配对比较，试食组试食后胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)与试食前比较，差异有显著性意义(P＜0.01)，对照组试食后胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)与试食前比较差异无显著性(P＞0.05)。试食后试食组胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)与对照组比较，差异有显著性意义(P＜0.01)。且试食后试食组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。综上所述，胶囊保健食品具有辅助降血脂作用。
四、卫生学、稳定性检测：
1、样品：本发明所述的胶囊，阴凉干燥处存放。
2、检验项目及依据：对胶囊进行砷(GB/T5009.11-1996)、铅(GB/T5009.12-1996)、汞(GB/T5009.17-1996)、铜(GB/T5009.13-1996)维生素E(GB/T5413.9-1997)、脂肪(GB/T5009.6-85)、脂肪酸(GB9596.2-88)、崩解时限(《中华人民共和国药典》2000年版)、酸价与过氧化值(GB/T5009.37-1996)、DDT及六六六(GB/T5009.19-1996)、霉菌及酵母菌(GB4789.15-94)、菌落总数(GB4789.2-94)、大肠菌群(GB4789.3-94)、沙门氏菌(GB4789.4-94)、志贺氏菌(GB4789.5-94)、金黄色葡萄球菌(GB4789.10-94)及溶血性链球菌(GB4789.11-94)的含量检测。
3、检验机构：北京市疾病预防控制中心。
4、检验结果：
(1)卫生学：样品依据国标内规定的方法进行检验，结果表明样品卫生学相关指标符合国标规定。
(2)稳定性(保温实验)：样品在37～40℃，相对湿度为75％RH条件下进行三个月保温实验，经理化、微生物检验，提示所检验指标质量稳定。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。