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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610834910.9 (22)申请日 2016.09.20 (71)申请人 宁波美丽人生医药生物科技发展有 限公司 地址 315899 浙江省宁波市保税西区创业 大道7号4幢305室 (72)发明人 田晓丽 (51)Int.Cl. A01K 67/02(2006.01) (54)发明名称 一种乳腺癌原位PDX模型的构建方法 (57)摘要 本发明涉及生物医药领域， 特别是涉及一种 乳腺癌原位PDX模型的构建方法。 该方法通过将 人体乳腺癌患者手术后的肿瘤组织移植到NOG （。
2、NSG） 小鼠第四对乳腺脂肪垫内， 使小鼠成瘤， 构 建乳腺癌的原位PDX模型。 本发明给出的乳腺癌 的原位PDX模型构建方法为临床上乳腺癌的治疗 提供了很好的实验平台。 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 CN 107836409 A 2018.03.27 CN 107836409 A 1.一种乳腺癌原位PDX模型的构建方法,其特征在于包括以下步骤: (1)实验小鼠的准备； (2)将切取到的乳腺癌肿瘤组织预处理； (3)将所述肿瘤组织移植到NOG(NSG)小鼠第四对乳腺脂肪垫内。 2.如权利要求1所述乳腺癌原位PDX模型的构建方法,其特征在于,在步骤(1)中， 实验 小鼠为饲育于Nasal。
3、000级净化室内， 按SPF级要求管理， 雌鼠， 鼠龄4-6周的NOG(NSG)小鼠。 3.如权利要求1所述乳腺癌原位PDX模型的构建方法,其特征在于,在步骤(2)中， 所述 肿瘤组织预处理包括： 将手术切除的人体肿瘤组织立即放在无菌、 低温保存液中， 去除可辨 认的坏死组织； 将肿瘤生长旺盛部位切成113mm的组织块。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107836409 A 2 一种乳腺癌原位PDX模型的构建方法 技术领域： 0001 本发明涉及生物技术及医学领域， 特别是涉及一种乳腺癌原位PDX模型的构建方 法。 背景技术： 0002 乳腺癌是我国多数大中城市女性最常见的恶性肿瘤。
4、， 其发病率呈明显上升的趋 势。 如何早期发现、 早期诊断和早期治疗， 对于提高乳腺癌患者的生存率和生活质量至关重 要。 乳腺癌动物模型的建立除了在研究乳腺癌的病因和发病机制等方面发挥重要作用外， 在早期诊断、 药物筛选、 基因治疗以及临床干预之后的疗效随访中亦有极其重要的价值。 0003 乳腺癌动物模型根据建立方法可分为自发型、 诱发型和移植型三种。 自发型乳腺 癌模型多采用近交系小鼠， 如C3H， 其生长到一定年龄便自然发生乳腺肿瘤。 这种模型最大 的特点是实验动物未经任何有意识的人工处理， 其发生的条件比较自然， 与人类患病过程 更为相似。 目前此种动物模型是乳腺肿瘤多级预防、 治疗和研。
5、究发病机制的良好模型。 但自 发型乳腺癌模型生长缓慢， 不易同时获得大批病程基本一致的动物， 观察时间长， 实验耗费 大。 诱发型乳腺癌模型是通过经口、 涂抹、 注射和埋藏等方法应用于实验动物， 使之发生乳 腺癌。 用二甲基苯蒽为诱癌剂诱发乳腺癌， 是应用较多的一种方法。 这种方法形成的肿瘤与 人体肿瘤增殖动力学基本类似， 但诱癌过程较长， 成功率不高， 肿瘤发生的潜伏期个体变异 较大， 不易同时获得病程或肿块大小均一的模型。 相比之下， 移植型动物模型克服了上述缺 点。 采用移植法建立的乳腺癌模型周期短， 成本低， 可使实验动物均带有同样的肿瘤， 生长 速度也较一致， 个体差异小， 无自发缓。
6、解， 成瘤率高， 是目前实验室应用最多的模型。 发明内容： 0004 本发明目的在于提供一种乳腺癌原位PDX模型的构建方法， 为临床上乳腺癌的治 疗提供一个强有力的实验平台。 0005 本发明是这样实现的， 一种乳腺癌原位PDX模型的构建方法， 包括以下步骤： 0006 (1)实验小鼠的准备； 0007 (2)将切取到的乳腺癌肿瘤组织预处理； 0008 (3)将所述肿瘤组织移植到NOG(NSG)小鼠第四对乳腺脂肪垫内； 0009 (4)待肿瘤生长到预定大小后， 处死小鼠， 在无菌条件下暴露肿瘤， 获取影像资料 后切取肿瘤组织， 进行冰冻保存； 0010 优选的， 在步骤(1)中， 所选取的实验。
7、小鼠为饲育于Nasal000级净化室内， 按SPF级 要求管理， 雌鼠， 鼠龄4-6周的NOG(NSG)小鼠。 0011 优选的， 在步骤(2)中， 所述肿瘤组织预处理包括将手术切除的人体肿瘤组织立即 放在无菌、 低温保存液中， 去除可辨认的坏死组织； 将肿瘤生长旺盛部位切成113mm的 组织块。 0012 优选的， 在步骤(3)中， 乳腺癌肿瘤组织的移植包括： 小鼠在常规消毒、 麻醉下切开 说 明 书 1/3 页 3 CN 107836409 A 3 小鼠右侧胸壁皮肤约1.0cm， 暴露第四对乳腺脂肪垫， 将肿瘤组织块接种至裸鼠右侧第四对 乳腺的脂肪垫内， 缝合切口。 0013 目前,原位P。
8、DX模型具有功能性的基质和血管、 肿瘤微环境、 并能反映肿瘤中心坏 死和肿瘤分化的特征， 因此被认为是反映人体内肿瘤生长的真实情况的最佳模型。 这些原 位PDX模型比来源于细胞系的移植瘤更能够反映病人体内肿瘤的真实分子特征和肿瘤的异 质性。 肿瘤的生长和药物的作用均可受到血管生成、 生长因子、 间质和肿瘤微环境的影响， 因此， 基于原位PDX模型所获得的结果要比单纯细胞系获得的移植瘤更有信服力。 附图说明： 0014 图1A： 是本发明实施例1中移植乳腺肿瘤组织成功后成瘤小鼠； B： 是本发明实施例 1中移植乳腺肿瘤组织成功后成瘤小鼠(剔除成瘤部位毛发后)； C： 用于移植的肿瘤组织块。 00。
9、15 图2是本发明实施例1中小鼠成瘤后取出的肿瘤块； 具体实施方式： 0016 以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式， 本领域技术人员可由本说明书 所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。 本发明还可以通过另外不同的具体实 施方式加以实施或应用， 本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用， 在没有背离 本发明的精神下进行各种修饰或改变。 0017 在进一步描述本发明具体实施方式之前， 应理解， 本发明的保护范围不局限于下 述特定的具体实施方案； 还应当理解， 本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体 实施方案， 而不是为了限制本发明的保护范围； 在本发明说明书和权利要求书中。
10、， 除非文中 另外明确指出， 单数形式 “一个” 、“一” 和 “这个” 包括复数形式。 0018 当实施例给出数值范围时， 应理解， 除非本发明另有说明， 每个数值范围的两个端 点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。 除非另外定义， 本发明中使用的所有技术和 科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。 除实施例中使用的具体方法、 设备、 材料外， 根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载， 还可以使用与本 发明实施例中所述的方法、 设备、 材料相似或等同的现有技术的任何方法、 设备和材料来实 现本发明。 0019 实施例1 0020 本实施例主要介绍脑胶质瘤原位PDX模。
11、型的构建过程。 0021 1、 动物选择： NOG(NSG)小鼠， 雌鼠， 鼠龄46周。 0022 2、 组织处理： 将手术切除的肿瘤组织立即放在无菌、 低温保存液中， 在超净工作台 内修剪、 去除可辨认的坏死组织。 将肿瘤生长旺盛部位切成113mm的组织块， 本过程在 冰表面、 无菌操作， 应该在3060分钟内完成。 0023 3、 组织移植： 将小鼠在常规消毒、 麻醉条件下， 切开裸鼠右侧胸壁皮肤约1.0cm， 暴 露第四对乳腺脂肪垫， 将肿瘤组织块接种至裸鼠右侧第四对乳腺的脂肪垫内， 缝合切口。 0024 4、 组织保存： 待肿瘤生长到体外可见或者可触摸时， 常规处死动物、 在无菌条件下 暴露肿瘤， 获取影像资料后切除肿瘤， 将组织块放在含有1DMSO的保存液中， 以每分钟降 低1度的速度降至-80， 3小时后转移到液氮内保存。 说 明 书 2/3 页 4 CN 107836409 A 4 0025 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、 等同替换和改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 3/3 页 5 CN 107836409 A 5 图1 图2 说 明 书 附 图 1/1 页 6 CN 107836409 A 6 。