一种鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂.pdf

本发明公开了一种用于鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA分子，双链小RNA分子的正向序列为：5′-AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT-3′；双链小RNA分子的反向序列为：5′-AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTs-Chol3′，反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰AsAs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsTsTs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。本发明的突出优点是人工合成了促进鳜鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合物，制作的肌肉生长促进剂能够明显促进养殖鳜鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌肉生长促进剂后鳜鱼肉质不受影响。

1.一种用于鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂，其特征在于，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA 分子，双链小RNA 分子的正向序列为：5′AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT3′；双链小RNA 分子的反向序列为：5′AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTsChol3′，反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰AsAs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsTsTs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。

技术领域

本发明涉及一种新颍的具有抑制肌肉生成抑制素(myostatin，MSTN)表达的化学合成剂，其在鳜鱼幼鱼肌肉生长中起促进作用。

背景技术

肌肉生成抑制素(myostatin，MSTN)作为一种新的生长因子在1997年被发现，被命名为生长分化因子-8(GDF-8)。McPherron和Grobet等报道Myostatin编码序列发生突变的牛肌肉质量增加显著，呈现所谓的“双肌现象”。敲除myostatin基因的转基因小鼠的骨骼肌重量比正常的小鼠增加2-3倍。近年来人们试图找到myostatin的抑制物来降低myostatin对肌肉成长抑制功能的发挥。Bogdanovich和Kim等分别在鸡和小鼠体内注射myostatin蛋白抗体，实验结果发现鸡、小鼠的体重和肌肉量都增加。Lee等在2010年报道将虹鳟鱼浸泡在含有体外表达MSTN抑制物的溶液中，鱼体重能够提高42%。Amali等在2004年通过给斑马鱼注射morpholino抑制MSTN表达观察到鱼体皆增大现象。

鳜鱼 (Siniperea chuatsi) 属鲈形目，鮨科，鳜属。鳜鱼是原产于我国各主要江河湖泊的名贵食用鱼。鳜鱼味道鲜美，肉质细嫩，营养价值高，深受广大消费者欢迎。上世纪80年代鳜鱼人工繁殖成功并进行大规模推广养殖，使之成为我国主要名贵养殖鱼类之一。目前我国鳜鱼养殖年产量超过20万吨，其产值每年在100亿人民币以上，而且近几年其价格稳中有升，人工养殖获经济效益较大，现已成为水产品市场中重要中高档产品。如何提高鳜鱼养殖产量满足市场需求稳定鳜鱼价格已成为当务之急，也是保持我国鳜鱼养殖业沿着优质高效方向持续快速健康发展的必要前提。开发MSTN抑制剂是促鱼肉生长新途径，因此本发明通过化学合成一对特异抑制鳜鱼MSTN表达的核苷酸短链，从抑制肌肉生成抑制素方面来促进鳜鱼鱼肉生长，为保持我国鳜鱼高效健康养殖持续发展奠定基础。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂，解决了上述背景技术中的问题。

本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：

一种用于鳜鱼幼鱼肌肉生长促进剂，其成分是经过标记与化学修饰的化学合成的双链小RNA 分子，

双链小RNA 分子的正向序列为：5′-AACAUUCAACGCGTCGGTGAGTT-3′；

双链小RNA 分子的反向序列为：5′-AsAsCUCACCGACGCGTTGAATsGsTsTs-Chol3′，

反向序列进行化学修饰，反向序列的3′端胆固醇修饰-Chol，反向序列的5′端两个硫代修饰AsAs，反向序列的3′端四个硫代修饰TsGsTsTs，反向序列的碱基全部甲基化修饰。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

（1）本发明是综合运用分子生物学、动物营养学和化学合成原理，对影响鳜鱼肌肉生长深入研究基础上，研究开发的具有高效、稳定等特点的肌肉生长促进剂。

（2）本发明生产工艺成熟、产品质量稳定、价格合理、核心技术先进和经济效益显著，是目前比较理想的鳜鱼肌肉生长促进剂，具有广阔的市场前景。

（3）本发明的突出优点是人工合成了促进鳜鱼幼鱼肌肉生长的新型小RNA化合物，制作的肌肉生长促进剂能够明显促进养殖鳜鱼的生长，抑制MSTN表达，同时在使用肌肉生长促进剂后鳜鱼肉质不受影响。

附图说明

图1为肌肉生长促进剂对鳜鱼肌肉MSTN表达的影响（n=5）的柱形图。

具体实施方式

为了使本发明的技术手段、创作特征、工作流程、使用方法达成目的与功效易于明白了解，下面进一步阐述本发明。

实施例1

肌肉生长促进剂对鳜鱼生长的影响

通过鳜鱼肌肉局部注射的方式，发挥肌肉生长促进剂在促肌肉生长中的作用。以不注射任何试剂为阴性对照组，以注射PBS为阳性对照组，以注射肌肉生长促进剂为试验组，试验组注射剂量为20μg/g 体重，连续注射三天，每天一次，注射完成后一周测定鱼体生长指标，具体结果如表1：注射肌肉生长促进剂的试验组鳜鱼体长增加和增重比阳性和阴性对照组显著提高。阳性和阴性对照组鳜鱼体长和体重增加差异不显著。因此注射肌肉生长促进剂能改善鳜鱼生长性能。

表1肌肉生长促进剂对鳜鱼生长性能的影响（平均值±标准差）n=5

项目 阴性对照组 阳性对照组 试验组 体长增加（cm） 3.14±0.42a 3.41±0.73a 5.21±0.93b 增重（g） 17.59±3.28a 17.21±3.64a 33.41±8.26b

注：同行数据肩注字母相同者表示差异不显著，不同表示差异显著。

实施例2

肌肉生长促进剂对鳜鱼肌肉MSTN表达的影响

实验分组如实施例1，实验一周后，取三组鳜鱼背部肌肉对MSTN表达进行荧光定量分析，具体结果如图1：注射肌肉生长促进剂的试验组鳜鱼肌肉MSTN表达量比阳性和阴性对照组显著降低。阳性和阴性对照组鳜鱼MSTN表达量差异不显著。因此注射肌肉生长促进剂能降低鳜鱼肌肉MSTN表达量。

实施例3 

肌肉生长促进剂对鳜鱼肉质指标的影响

实验分组如实施例1，实验一周后，取三组鳜鱼背部肌肉进行指标测量, 由表2可见，与两对照组相比，添加肌肉生长促进剂的试验组肌肉营养成分差异不显著，但添加肌肉生长促进剂试验组粗蛋白都有增加趋势，而粗脂肪都有减少趋势。

表2 肌肉生长促进剂对鳜鱼肌肉营养成分的影响（平均值±标准差）n=5

成分 阴性对照组 阳性对照组 试验组 水分 81.27±0.46 82.30±0.51 81.34±0.61 粗蛋白 15.11±0.22 15.21±0.21 15.44±0.32 粗脂肪 1.57±0.33 1.50±0.22 1.47±0.23 粗灰分 1.65±0.24 1.51±0.27 1.64±0.27

肌肉生长促进剂对鳜鱼肌纤维性状的影响：由表3可见，与两对照组相比，注射肌肉生长促进剂的试验组在肌肉弹性、咀嚼度、硬度和凝聚性方面不存在显著差异。因此注射肌肉生长促进剂不会影响鳜鱼口感。

表3肌肉生长促进剂对鳜鱼肌纤维性状的影响（平均值±标准差）n=5

项目 阴性对照组 阳性对照组 试验组 弹性 2.67±0.04  2.58±0.05  2.71±0.06  凝聚性 0.35±0.05  0.37±0.06 0.36±0.04 硬度 38.17±0.69 37.37±0.71 37.40±0.67  咀嚼度 39.58±3.92  39.15±4.11 38.83±3.36

    以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明的要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。