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1、(10)授权公告号 CN 102669088 B (45)授权公告日 2013.08.14 CN 102669088 B *CN102669088B* (21)申请号 201210172951.8 (22)申请日 2012.05.30 A01N 1/02(2006.01) (73)专利权人 河南省农业科学院 地址 450008 河南省郑州市金水区花园路 116 号 (72)发明人 施巧婷 王二耀 辛晓玲 郎利敏 陈俊峰 张玉洋 魏成斌 水谷将也 岛田浩明 徐照学 (74)专利代理机构 郑州大通专利商标代理有限 公司 41111 代理人 陈大通 CN 102405901 A,2012.04.11。
2、, JP 特开 2002-315573 A,2002.10.29, EP 2353383 A2,2011.08.10, CN 1774501 A,2006.05.17, CN 101589707 A,2009.12.02, CN 101200706 A,2008.06.18, (54) 发明名称 哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体 (57) 摘要 本发明公开了一种哺乳动物胚胎和卵母细胞 玻璃化冷冻载体， 包括冷冻细管和锥形吸头， 两者 匹配对扣安装， 其中所述冷冻细管的后端安装有 金属配重体， 该金属配重体与冷冻细管的存放内 腔之间设置有密封隔层。 本发明成本低， 制作材料 是常用的耗材， 。
3、操作简单 ； 能够精确控制冷冻液 的量， 而且一次可以冷冻多枚卵母细胞或者胚胎 ； 采用金属配重体， 样品不会漂于液氮表面， 不会丢 失样品 ； 使冷冻速度快、 效率高， 减少了样品的冷 冻损伤 ； 载体可重复利用， 不会断裂丢失样品， 节 约成本。在细管上可以做标记， 便于长期保存。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 江笑丹 权利要求书 1 页 说明书 3 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书3页 附图1页 (10)授权公告号 CN 102669088 B CN 102669088 B *CN102669088B* 。
4、1/1 页 2 1. 一种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体， 其特征是 ： 包括冷冻细管和锥形吸 头， 两者匹配对扣安装， 其中所述冷冻细管的后端安装有金属配重体， 该金属配重体与冷冻 细管的存放内腔之间设置有密封隔层 ； 所述冷冻细管的前端与锥形吸头连接处设置有至少 一条纵向的剪切口 ； 所述金属配重体外露于冷冻细管之外， 金属配重体仅有部分与冷冻细 管套装固定， 金属配重体的前端设置有叉状筋， 所述叉状筋穿过隔层后伸入存放内腔中， 并 贴合固定在冷冻细管的内侧壁上。 2. 根据权利要求 1 所述的哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体， 其特征是 ： 所述 金属配重体完全密封于冷冻细管的。
5、后端， 或者， 在金属配重体接触的冷冻细管侧壁上设置 有孔。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体， 其特征是 ： 所述锥形吸头的尖端切口处的口径范围为 100m 200m。 权 利 要 求 书 CN 102669088 B 2 1/3 页 3 哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体 技术领域 0001 本发明涉及细胞玻璃化冷冻技术领域， 特别涉及一种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻 璃化冷冻载体。 背景技术 0002 哺乳动物卵母细胞和胚胎冷冻是人类和动物生殖生物学的重要组成部分。 特别是 玻璃化冷冻的发明， 可以使冷冻不需要借助常规的冷冻仪器， 将冷冻材料放入冷。
6、冻液后直 接投入液氮， 大大简化了程序。玻璃化冷冻技术是利用体积微小的冷冻载体， 在极快的降 温 （2000 /min） 过程中， 使高浓度的冷冻保护液变为黏度很强的类似玻璃样的固态， 避 免细胞内冰晶的形成， 达到冷冻保护的目的， 从而显著提高细胞、 组织冷冻后的存活力和发 育能力。 0003 常用的玻璃化冷冻方法有 ： 尼龙环玻璃化法 （Cryoloop） 、 开放式拉管法 （OPS, Open Pulled Straw） 、 微细玻璃管法 （GMP） 、 微滴法 （Microdrops） 、 铜网法、 Cryoloop、 Cryotop 等。 0004 在玻璃化冷冻过程中冷冻载体的选择非。
7、常重要， 直接影响着冷冻效率。冷冻载体 的功能在于承载标本的同时尽量减少负载的冷冻液， 达到冷冻过程中使标本直接接触液 氮， 快速降温达到玻璃化状态， 同时解冻过程中又能迅速脱除冷冻液的目的。 开放式拉管法 由于重量轻冷冻时易漂浮于液氮表面， 而且细管管壁较薄， 在液氮中极易断裂在成样品丢 失。微细玻璃管法在冷冻过程中易断裂， 易造成样品丢失 ； GMP 的直径和体积很小， 限制了 一次冷冻的样品数量， 而且该法虹吸效果显著， 增加了操作难度。 微滴法在贮存过程中无法 进行标识， 不利于样品的长期贮存。铜网法、 Cryoloop 和 Cryotop 在冷冻解冻过程中都存 在样品丢失现象。 发明。
8、内容 0005 针对目前现有技术中细胞冷冻存在的问题和缺陷， 本发明提供一种哺乳动物胚胎 和卵母细胞玻璃化冷冻载体。 0006 技术方案 ： 一种哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体， 包括冷冻细管和锥形 吸头， 两者匹配对扣安装， 其中所述冷冻细管的后端安装有金属配重体， 该金属配重体与冷 冻细管的存放内腔之间设置有密封隔层。 0007 所述冷冻细管的前端与锥形吸头连接处设置有至少一条纵向的剪切口。 0008 所述金属配重体完全密封于冷冻细管的后端， 或者， 在金属配重体接触的冷冻细 管侧壁上设置有孔。 0009 所述金属配重体的前端设置有叉状筋， 所述叉状筋穿过隔层后伸入存放内腔中， 并贴。
9、合固定在冷冻细管的内侧壁上。 0010 所述金属配重体外露于冷冻细管之外， 金属配重体仅有部分与冷冻细管套装固 定， 金属配重体的前端设置有叉状筋， 所述叉状筋穿过隔层后伸入存放内腔中， 并贴合固定 说 明 书 CN 102669088 B 3 2/3 页 4 在冷冻细管的内侧壁上。 0011 所述锥形吸头的尖端切口处的口径范围为 100m 200m。 0012 有益效果 ： 1. 本发明成本低， 制作材料可以常用的耗材， 操作简单。2. 能够精确 控制冷冻液的量， 而且一次可以冷冻多枚卵母细胞或者胚胎。 3.采用金属配重体， 样品不会 漂于液氮表面， 不会丢失样品。4. 采用金属配重体具有较。
10、好的导热性能， 使冷冻速度快、 效 率高， 减少了样品的冷冻损伤。 尤其是采用了延伸到存放内腔中的叉状筋， 不仅起到支撑冷 冻管从而保护冷冻细胞的作用， 而且与金属配重体连接具有加快降温的作用， 降温效果显 著。5. 载体可重复利用， 不会断裂丢失样品， 节约成本。在细管上可以做标记， 便于长期保 存。 附图说明 0013 图 1 是本发明玻璃化冷冻载体的冷冻细管剖面结构示意图之一 ； 0014 图 2 是与图 1 中冷冻细管配合安装的锥形吸头结构示意图 ； 0015 图 3 是本发明玻璃化冷冻载体的冷冻细管剖面结构示意图之二 ； 0016 图 4 是图 3 的 A 部放大结构示意图 ； 00。
11、17 图 5 是图 3 的 B-B 剖面结构示意图 ； 0018 图 6 是本发明玻璃化冷冻载体的冷冻细管剖面结构示意图之三。 0019 图中标号1为冷冻细管， 11为冷冻细管的存放内腔， 2为金属配重体， 21为叉状筋， 3 为隔层， 4 为封口， 5 为剪切口， 6 为孔， 7 为锥形吸头， 71 为切口， 72 为安装口。 0020 具体实施方式 0021 实施例一 ： 参见图 1 和图 2， 该哺乳动物胚胎和卵母细胞玻璃化冷冻载体包括冷冻 细管 1 和锥形吸头 7， 两者匹配对扣安装。 0022 图 1 中， 冷冻细管 1 的前端与锥形吸头 7 连接处设置有至少一条纵向的剪切口 5， 。
12、便于与锥形吸头匹配套装， 并具有紧固性。图 2 中， 锥形吸头 7 的尖端设置切口 71， 另一端 为安装口 72， 切口 71 处的口径范围为 100m 200m。用 Eppendorf 20l 移液器安装 锥形吸头7， 将该载体装置一同放入液氮， 用镊子将吸有冷冻样品的锥形吸头7从剪切口5 处插入冷冻细管1。 等全部样品冷冻完成后， 将所有冷冻细管1放入液氮罐中的提子里， 放 入液氮罐中即可长久保存。 0023 其中所述冷冻细管的后端安装有金属配重体 2， 该金属配重体 2 与冷冻细管的存 放内腔之间设置有密封隔层3。 所述金属配重体2完全密封于冷冻细管1的后端， 便于冷冻 细管能够下沉。。
13、另外， 金属配重体 2 还能加速热传递的作用， 提高冷冻效率， 减少了样品的 冷冻损伤。 0024 实施例二 ： 参见图3、 图4和图5， 内容与实施例一基本相同， 相同之处不重述， 不同 的是 ： 在金属配重体 2 接触的冷冻细管侧壁上设置有孔 6。并且， 所述金属配重体 2 的前端 设置有叉状筋 21， 所述叉状筋 21 穿过隔层后伸入存放内腔 11 中， 并贴合固定在冷冻细管 1 的内侧壁上， 叉状筋 21 不仅对支撑冷冻细管具有加强和支持作用， 而且与金属配重体连接 具有加快降温的作用， 降温效果显著。 0025 实施例三 ： 参见图 6， 内容与实施例二基本相同， 相同之处不重述， 不同的是 ： 所述 金属配重体 2 外露于冷冻细管之外， 金属配重体 2 仅有部分与冷冻细管 1 套装固定， 金属配 说 明 书 CN 102669088 B 4 3/3 页 5 重体2的前端设置有叉状筋21， 所述叉状筋21穿过隔层3后伸入存放内腔11中， 并贴合固 定在冷冻细管 1 的内侧壁上。外漏的金属配重体 2 更利于导热作用。 说 明 书 CN 102669088 B 5 1/1 页 6 图 1 图 2 图 3 图 4 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 102669088 B 6 。