《促进脂联素产生的组合物.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《促进脂联素产生的组合物.pdf（9页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)授权公告号 CN 102892423 B (45)授权公告日 2014.12.03 CN 102892423 B (21)申请号 201180024775.7 (22)申请日 2011.05.13 2010-117264 2010.05.21 JP A23L 1/30(2006.01) A61K 35/60(2006.01) A61K 36/06(2006.01) A61K 38/17(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 43/00(2006。
2、.01) (73)专利权人 最终未来国际股份有限公司 地址 日本爱知县 (72)发明人 许善花 (74)专利代理机构 中原信达知识产权代理有限 责任公司 11219 代理人 杨青 穆德骏 JP 2008-063293 A,2008.03.21, 说明书第 6-12 段 . JP 9-224607 A,1997.09.02, 说明书第 7-8 段 . JP 2010-088403 A,2010.04.22, 权利要求 10、 说明书第 28-30 段 . CN 1340302 A,2002.03.20, 全文 . JP 2010-037221 A,2010.02.18, 说明书第 52-53 段。
3、 . Noriko MIYANO et alKakusan Eiyo Ryoho no Inu Neko ni taisuru Rinsho Oyo. Journal of Veterinary Oriental Medicine .1999,( 第 5 期 ),57-60. 黄海龙等 . 牛脂联素基因的克隆及在毕赤酵 母中的表达 . 中国兽医学报 .2009, 第 29 卷 ( 第 9 期 ),1197-1200. (54) 发明名称 促进脂联素产生的组合物 (57) 摘要 本发明要解决的课题在于提供一种促进脂联 素产生且在副作用和毒性等安全性方面不存在问 题并且能够口服摄取的组合物。制备一。
4、种促进脂 联素产生的组合物， 其含有鲑鱼鱼白提取物、 啤酒 酵母提取物、 鸡胶原蛋白和含矿物质酵母， 并且具 有促进脂联素产生的作用。 作为鲑鱼鱼白提取物， 优选含有通过对鲑鱼鱼白进行酶处理而分解成寡 核苷酸和寡肽的低分子成分。作为啤酒酵母提取 物， 优选含有 5080% 的 RNA。作为含矿物质酵母， 优选在干酵母中含有23%的锌、 0.30.5%的铜和 0.010.02% 的硒。另外， 优选每 100 质量份的鲑 鱼鱼白提取物含有 1617 质量份的啤酒酵母提取 物、 3334质量份的鸡胶原蛋白和2223质量份的 含矿物质酵母。 (30)优先权数据 (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2。
5、012.11.19 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/JP2011/002678 2011.05.13 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2011/145307 JA 2011.11.24 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 吕敏 权利要求书 1 页 说明书 6 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 (10)授权公告号 CN 102892423 B CN 102892423 B 1/1 页 2 1. 一种促进脂联素产生的组合物， 其特征在于， 以相对于鲑鱼鱼白提取物 100 质量份、 啤酒酵母提。
6、取物为 16 17 质量份、 鸡胶原蛋白为 33 34 质量份、 含矿物质酵母为 22 23 质量份的配合比例， 含有鲑鱼鱼白提取物、 啤酒酵母提取物、 鸡胶原蛋白和含矿物质酵 母， 并且具有促进脂联素产生的作用， 所述鲑鱼鱼白提取物含有通过对鲑鱼鱼白进行酶处 理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分， 所述含矿物质酵母在干酵母中含有 2 3的 锌、 0.3 0.5的铜和 0.01 0.02的硒。 2. 如权利要求 1 所述的促进脂联素产生的组合物， 其特征在于， 啤酒酵母提取物为含 有 50 80的 RNA 的啤酒酵母提取物。 权 利 要 求 书 CN 102892423 B 2 1/6 页 3。
7、 促进脂联素产生的组合物 技术领域 0001 本发明涉及一种促进脂联素产生的组合物， 更详细而言， 本发明涉及一种包含鲑 鱼鱼白提取物、 啤酒酵母提取物、 鸡胶原蛋白、 含矿物质酵母 ( 含有 Zn、 Se、 Cu) 的脂联素产 生促进剂。 背景技术 0002 脂联素 (Adiponectin) 是由包含 244 个氨基酸的脂肪组织分泌的激素， 于 1996 年 自人脂肪组织中被分离出来。脂联素是脂肪组织特异性的分泌蛋白 ( 非专利文献 2)， 不仅 大量存在于脂肪组织中， 而且还大量存在于血液中 ( 在正常人中为 510g/ml)( 非专利 文献 3)。已知其在骨骼肌和肝脏中通过活化 AMP。
8、 激酶 (AMP-activated protein kinase ； AMPK)而促进脂肪的燃烧和糖的摄取。 已知该脂联素在小型脂肪细胞中大量地分泌， 当脂肪 细胞肥大化时， 其分泌量会减少。 0003 此外， 脂联素作为抑制动脉硬化的有益脂肪细胞因子而为人所知。脂肪细胞因子 中， 除上述有益脂肪细胞因子以外， 还存在 PAI-1、 TNF- 等促进动脉硬化的有害脂肪细胞 因子。在正常状态下， 这些有益脂肪细胞因子和有害脂肪细胞因子的分泌量保持平衡。但 是， 当由于肥胖等导致脂肪细胞肥大化时， 有益脂肪细胞因子的分泌量会减少， 而另一方 面， 有害脂肪细胞因子会过剩地分泌。结果， 两者的平衡。
9、崩溃而成为 II 型糖尿病、 动脉硬化 症等生活习惯病发病的原因。 0004 可见， 脂联素与肥胖及伴随肥胖而来的生活习惯病相关， 认为活化该脂联素对预 防或治疗生活习惯病有效。而且， 还已知脂联素具有抑制肝纤维化的效果。已发现脂联素 具有改善高血压、 改善脂代谢、 改善胰岛素敏感性、 抗炎作用、 抑制肝纤维化、 促进正常肝细 胞增殖的效果 ( 专利文献 1)、 抗炎效果 ( 专利文献 2) 等多方面的作用 ( 专利文献 25)， 可 以说使血中的脂联素浓度上升的药品或饮食品显示出对代谢综合征具有预防、 改善作用。 0005 在上述背景下， 作为促进脂联素产生的药剂， 已知有噻唑烷衍生物。但是。
10、， 该噻唑 烷衍生物有时伴有腹泻、 便秘、 恶心等消化系统症状、 肝脏损伤等副作用。 0006 此外， 提出了若干种促进脂联素产生的化合物或成分。例如， 专利文献 6 中公开 了 ： N- 乙酰半胱氨酸使脂肪细胞的脂联素的表达量增加 ； 以及夹竹桃麻素使血浆中的脂联 素浓度上升且使脂肪组织中的脂联素的表达量增加。专利文献 7 中公开了姜辣素化合物， 专利文献 8 中公开了余甘子果实或其提取物使脂联素的产生增强。除这些物质以外， 还期 待优良的促进脂联素产生的物质。 因此， 在代谢综合征的对策成为社会问题的当前， 要求开 发出一种具有促进并增强脂联素在体内产生的作用的安全的物质。 0007 现有。
11、技术文献 0008 专利文献 0009 专利文献 1 ： 日本特开 2002-363094 号公报 0010 专利文献 2 ： 日本特开 2000-256208 号公报 0011 专利文献 3 ： 日本专利第 3018186 号公报 说 明 书 CN 102892423 B 3 2/6 页 4 0012 专利文献 4 ： 美国专利申请公开第 2002/0132773 号 0013 专利文献 5 ： 日本特开 2005-325072 号公报 0014 专利文献 6 ： 日本特开 2005-232059 号公报 0015 专利文献 7 ： 日本特开 2006-45210 号公报 0016 专利文献。
12、 8 ： 日本特开 2006-56836 号公报 0017 非专利文献 0018 非专利文献 1 ： 馬場江等 ,Foods&Food Ingredients Journal ofJapan,1998 年 ,No.178,p.52-60 0019 非专利文献 2 ： Maeda K et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,221:286(1996) 0020 非专利文献 3 ： Arita Y et al.,Biochem.Biophys.Res. Commun.,257:7983(1999) 发明内容 0021 发明所要解决的问题 0022 本发明的课题在于提供。
13、一种促进脂联素产生且在副作用和毒性等安全性方面不 存在问题并且能够口服摄取的组合物。 0023 用于解决问题的手段 0024 发明人对各种食材进行了关于脂联素产生的研究， 结果发现， 通过将鲑鱼鱼白提 取物、 啤酒酵母提取物、 鸡胶原蛋白、 含矿物质酵母 ( 含有 Zn、 Se、 Cu) 组合而制备的混合物 显示出优良的促进脂联素产生的能力， 从而完成了本发明。 0025 即， 本发明涉及 ： 1 一种促进脂联素产生的组合物， 其特征在于， 含有鲑鱼鱼白 提取物、 啤酒酵母提取物、 鸡胶原蛋白和含矿物质酵母， 并且具有促进脂联素产生的作用 ； 2 如上述 1 所述的促进脂联素产生的组合物， 其。
14、特征在于， 鲑鱼鱼白提取物为含有通 过对鲑鱼鱼白进行酶处理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分的鲑鱼鱼白提取物 ； 3 如上述 1 或 2 所述的促进脂联素产生的组合物， 其特征在于， 啤酒酵母提取物为含 有 5080% 的 RNA 的啤酒酵母提取物 ； 4 如上述 13 中任一项所述的促进脂联素产 生的组合物， 其特征在于， 含矿物质酵母为在干酵母中含有 23% 的锌、 0.30.5% 的铜和 0.010.02% 的硒的含矿物质酵母 ； 5 如上述 14 中任一项所述的促进脂联素产生的 组合物， 其特征在于， 每 100 质量份的鲑鱼鱼白提取物含有 1617 质量份的啤酒酵母提取 物、 333。
15、4 质量份的鸡胶原蛋白和 2223 质量份的含矿物质酵母。 0026 发明效果 0027 本发明的脂联素产生促进剂在以鲑鱼鱼白提取物作为主要成分并单独含有啤酒 酵母提取物、 鸡胶原蛋白、 含矿物质酵母时不具有产生脂联素的能力， 而通过将上述物质混 合则具有优良的促进脂联素产生的效果。本发明的脂联素产生促进剂对改善、 治疗或预防 糖尿病、 肥胖、 动脉硬化症以及起因于上述疾病的症状例如糖尿病并发症 ( 糖尿病视网膜 病变、 糖尿病神经病变、 糖尿病性肾病等 )、 脑梗塞、 心肌梗塞、 肾硬化症等有效。 附图说明 0028 图 1 是表示使用本发明的促进脂联素产生的组合物测定分泌到脂肪细胞的培养 。
16、说 明 书 CN 102892423 B 4 3/6 页 5 上清中的脂联素浓度而得到的结果的图。 具体实施方式 0029 作为本发明的促进脂联素产生的组合物， 只要是含有鲑鱼鱼白提取物、 啤酒酵母 提取物、 鸡胶原蛋白和含矿物质酵母并且具有促进脂联素产生的作用的组合物， 则没有特 别限制， 在此， 促进脂联素产生的作用是指促进作为糖代谢、 脂代谢等的重要调节因子的脂 联素的分泌、 从而使体内特别是血中的脂联素量增加的作用。 0030 作为上述鲑鱼鱼白提取物， 只要是可以作为食品用途使用的鲑鱼鱼白提取物则没 有特别限制， 优选含有通过对鲑鱼鱼白进行酶处理而分解成寡核苷酸和寡肽的低分子成分 的鲑。
17、鱼鱼白提取物。特别优选含有 2070% 的分子量 10003000 的寡核苷酸、 寡肽的鲑鱼鱼 白提取物。这样的鲑鱼鱼白提取物例如可以从株式会社一等获得。 0031 另外， 上述鲑鱼鱼白提取物也可以依据日本特开 2004-16143 中记载的方法来制 备。即， 从鲑鱼的鱼白中除去皮、 肌肉、 血管等后， 进行纯化而去除油分， 接着利用蛋白酶和 核酸酶进行处理。上述蛋白酶是以胰蛋白酶作为主体的蛋白酶。胰蛋白酶为具有高特异性 的丝氨酸蛋白酶， 在精氨酸和赖氨酸的羧基侧选择性地水解肽键， 因此适于含有大量精氨 酸的鱼精蛋白的水解。 另外， 上述蛋白酶除了包含胰蛋白酶以外， 还可以包含其他蛋白酶例 如。
18、胰凝乳蛋白酶等。作为良好的蛋白酶， 可以列举 一株式会社制造的蛋白酶。另外， 利用核酸酶进行水解反应的温度为 6075的范围， 其中 最优选70。 蛋白酶处理和核酸酶处理的顺序没有特别限制， 优选先利用蛋白酶进行处理， 接着利用核酸酶进行处理。 0032 作为上述啤酒酵母提取物， 只要是可以作为食品用途使用的啤酒酵母提取物则没 有特别限制， 优选含有 5080% 的 RNA 的啤酒酵母提取物。这样的啤酒酵母提取物例如可以 从株式会社一等获得。 0033 作为上述鸡胶原蛋白， 没有特别限制， 可以优选使用食品用的鸡胶原蛋白， 可以优 选列举例如株式会社一制造的鸡胶原蛋白。 0034 作为上述含矿。
19、物质酵母， 只要是提高了矿物质含量的面包酵母则没有特别限制， 优选在干酵母中含有23%的锌的含矿物质酵母， 其中可以列举在干酵母中含有23%的锌、 0.30.5% 的铜、 0.010.02% 的硒的含矿物质酵母。这样的含矿物质酵母可以从株式会社 一等获得。另外， 可以通过将富含锌的锌酵母、 富含铜的铜酵母、 富 含硒的硒酵母混合来制备这样的含矿物质酵母。富含各矿物质的酵母可以从株式会社 一等获得。 0035 另外， 作为本发明的促进脂联素产生的组合物中的鲑鱼鱼白提取物、 啤酒酵母提 取物、 鸡胶原蛋白和含矿物质酵母的配合比例， 可以优选例示每 100 质量份的鲑鱼鱼白提 取物含有1025质量份。
20、、 优选1617质量份的啤酒酵母提取物， 2540质量份、 优选3334质 量份的鸡胶原蛋白和 1530 质量份、 优选 2223 质量份的含矿物质酵母的组合物。 0036 本发明的促进脂联素产生的组合物中， 除了可以添加药学上容许的通常的载体、 粘合剂、 稳定剂、 赋形剂、 稀释剂、 pH 缓冲剂、 崩解剂、 增溶剂、 助溶剂、 等渗剂等各种调剂用 配合成分以外， 还可与其他脂联素产生促进剂等治疗药并用。 0037 本发明的促进脂联素产生的组合物可以用作对治疗或预防由脂联素的产生下降 说 明 书 CN 102892423 B 5 4/6 页 6 引起的疾病有用的药品、 补充品、 食品、 饲料。
21、等， 施用量或摄取量优选为成年人每人每天 0.110g， 更优选 0.55g。 0038 作为可以应用本发明的促进脂联素产生的组合物的食品或食品材料的种类， 没有 特别限制， 可以列举例如 ： 酸奶、 饮料型酸奶、 果汁、 牛奶、 豆奶、 酒类、 咖啡、 红茶、 煎茶、 乌龙 茶、 运动饮料等各种饮料， 布丁、 饼干、 面包、 蛋糕、 果冻、 煎饼等烘烤糕点， 羊羹等日式糕点， 冷冻甜点、 口香糖等的面包 / 糕点类， 乌冬面、 荞麦面等面类， 鱼糕、 火腿、 鱼肉香肠等掺有 鱼肉的制品， 味噌、 酱油、 调味汁、 蛋黄酱、 甜味料等调味品类， 奶酪、 奶油等乳制品， 豆腐、 魔 芋以及咸烹海。
22、味、 饺子、 炸肉饼、 沙拉等各种家常菜。 另外， 可以根据需要在应用了促进脂联 素产生的组合物的食品或食品材料中进一步配合维生素、 矿物质等其他营养成分。在将本 发明的促进脂联素产生的组合物应用于食品或饲料中的情况下， 可以在食品或食品材料或 者饲料或饲料材料的包装体或附带的说明书中标明具有促进脂联素产生的作用的主旨。 0039 以下， 利用实施例具体地说明本发明， 但本发明的技术范围并不限定于这些例示。 0040 实施例 1 0041 试样的制备 0042 将 60mg 鲑鱼鱼白提取物 ( 株式会社一制造的 “ ” )、 10mg 啤酒酵母提取物 ( 株式会社一制造的 “啤酒酵母提取 RN。
23、A” )、 20mg 胶原蛋白 ( 株式会社 一制造的 “鸡胶原蛋白” )、 13.5mg 含矿物质酵母 ( 株式会社一制造的 “混合含矿物质酵母 C” ) 悬浮 于 PBS 中， 制备成 2.5mg/ml 后， 利用 0.45m 的过滤器进行过滤。使用该滤液， 以表 1 所 示的试样浓度进行评价。 0043 表 1 0044 0045 促进脂联素产生的效果 0046 (1)3T3-L1 细胞的培养和传代培养 0047 将 3T3-L1 细胞 ( 小鼠成纤维细胞 ) 在含有 10% 胎牛血清的杜尔贝科改良的伊格 尔培养基 (CS-DMEM) 中培养至达到密集的状态 ( 铺满 ) 后， 除去培养。
24、烧瓶内的培养基， 并 利用 PBS(-) 洗涤 2 次。然后， 添加 0.1% 胰蛋白酶 -EDTA 溶液而将细胞从烧瓶底面剥离， 将该剥离的细胞和 0.1% 胰蛋白酶 -EDTA 溶液转移至离心沉淀管中。向其中添加等体积的 10%CS-DMEM， 并以 1500rpm 进行 5 分钟的离心分离。然后， 使细胞在 10%FCS-DMEM 中达到均 匀， 接种至烧瓶中并放入 CO2孵育箱中， 在 5%CO2的条件下在 37下进行培养。 0048 (2) 向脂肪细胞的分化诱导 0049 在 10%CS-DMEM 中培养 3T3-L1 细胞， 自达到密集状态 ( 铺满 ) 之日起 2 天后， 将培 。
25、养基更换为分化培养基 1 并进一步培养 2 天。接着， 将培养基更换为分化培养基 2 并培养 2 天。向脂肪细胞的分化诱导中使用了分化培养基 1 和分化培养基 2。 说 明 书 CN 102892423 B 6 5/6 页 7 0050 分化培养基 1 为包含 10%FBS、 0.5mM 异丁基 -1- 甲基黄嘌呤 (IBMX)、 1M 地塞米 松 (DEX) 和 10g/ml 胰岛素的 DMEM。分化培养基 1 的制备通过将 10mg/ml 胰岛素、 500mM IBMX 和 1mM DEX 的混合液用 10%FCS-DMEM 稀释来进行。另外， 分化培养基 2 为包含 10%FCS 和 1。
26、M 胰岛素的 DMEM。分化培养基 2 的制备通过将 10mg/ml 胰岛素用 10%FCS-DMEM 稀释 来进行。 0051 (3) 促进脂联素产生的效果的评价 0052 分化成脂肪细胞后， 将培养基更换为 0.1%BSA-DMEM 并培养 24 小时。然后， 添加混 合物以分别达到 0g/ml( 试样 1)、 50g/ml( 试样 2)、 250g/ml( 试样 3)， 进而在 37下 孵育 48 小时。收集培养上清， 使用脂联素 ELISA 试剂盒 ( 大塚制药株式会社 ) 测定上清中 的脂联素量。结果示于图 1 中， 数值化后的结果示于表 2 中。 0053 结果， 添加 50g/m。
27、l 和 250g/ml 时与未添加 ( 试样 1) 时相比， 观察到脂联素浓 度呈浓度依赖性地增加。若将未添加时 ( 对照 ) 设为 100%， 则在添加 50g/ml 的混合物时 分泌到培养上清中的脂联素浓度显示为对照的 126%， 在添加 250g/ml 的混合物时分泌到 培养上清中的脂联素浓度显示为对照的 183%( 显著性水平为 1% 时具有显著差异 )。此时， 在任何浓度下对存活率均无影响。 0054 表 2 0055 0056 实施例 2 0057 按下述表 3 所示的比例将鲑鱼鱼白提取物 ( 株式会社 一制造的 “” )、 啤酒酵母提取物 ( 株式会社一制造的 “啤酒酵母提取 R。
28、NA” )、 胶原蛋白 ( 株式会社一制造的 “鸡胶原蛋 白” )、 含矿物质酵母 ( 株式会社一制造的 “混合含矿物质酵母 C” ) 进行配合， 并添加其他维生素类， 制备用于口服施用的脂联素产生促进剂 ( 片剂 )。 0058 表 3 0059 成分6 粒中 鲑鱼鱼白提取物600mg 啤酒酵母提取物100mg 胶原蛋白200mg 含矿物质酵母135mg 0060 产业上的可利用性 0061 本发明的脂联素产生促进剂促进作为糖代谢、 脂代谢等的重要调节因子的脂联素 说 明 书 CN 102892423 B 7 6/6 页 8 的分泌， 从而使体内特别是血中的脂联素量增加。 本发明的脂联素产生促进剂对改善、 治疗 或预防糖尿病、 肥胖、 动脉硬化症以及起因于上述疾病的症状例如糖尿病并发症 ( 糖尿病 视网膜病变、 糖尿病神经病变、 糖尿病性肾病等)、 脑梗塞、 心肌梗塞、 肾硬化症等有效。 本发 明的促进脂联素产生的组合物 ( 脂联素产生促进剂 ) 可作为药品、 补充品、 食品等使用。 说 明 书 CN 102892423 B 8 1/1 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 102892423 B 9 。