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1、10申请公布号CN104072507A43申请公布日20141001CN104072507A21申请号201410266390722申请日20140616C07D493/0420060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法57摘要本发明公开了一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法，包括以下步骤（1）以聚伞凹顶藻为原料，进行干燥、粉碎，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质；（2）残渣加乙醇溶液进行超声循环提取；（3）提取液浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和10。
2、30乙醇溶液洗脱，再用85乙醇溶液洗脱，收集85乙醇洗脱液；（4）洗脱液浓缩，上硅胶短粗柱，以氯仿甲醇混合溶液为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，放置结晶；（5）分出结晶，丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇。本发明方法操作简单，可实现规模化生产。51INTCL权利要求书1页说明书3页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页10申请公布号CN104072507ACN104072507A1/1页21一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行（1）以聚伞凹顶藻为原料，进行干燥、粉碎，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质；（2）残渣加。
3、810倍（V/W）7590乙醇溶液进行超声循环提取23次，每次12H，合并提取液；（3）提取液浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和1030乙醇溶液洗脱，再用85乙醇溶液洗脱，收集85乙醇洗脱液；（4）洗脱液浓缩，上硅胶短粗柱，柱径高比为135，以氯仿甲醇混合溶液为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，放置结晶；（5）分出结晶，丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶。2如权利要求1所述的一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法，其特征在于，所述步骤（1）中超临界二氧化碳萃取温度为3045，压力为1522MPA，萃取时间为051H。3如权利要求1所述的一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法，其特征在于，所述步。
4、骤（4）中氯仿甲醇混合溶液体积比为117。权利要求书CN104072507A1/3页3一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法技术领域0001本发明属于天然药物领域，具体而言，本发明涉及一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法。背景技术0002聚伞凹顶藻醇（THYRSIFEROL），CAS号66873390，MP133136，分子式C30H53BRO7，分子量60565，结构式为聚伞凹顶藻醇来源于松节藻科RHODOMELACEAE聚伞凹顶藻LAURENCIATHYRSIFERAHOOK。研究表明，聚伞凹顶藻醇具有细胞毒活性，对小鼠淋巴细胞白血病P388体外培养有细胞毒作用，ED50为10NG/ML；抗病毒活性，对。
5、单纯性疱疹病毒和疱疹性口炎病毒有抑制作用。0003经文献检索，尚无适用于高纯度聚伞凹顶藻醇的易于工业化提取纯化方法的相关专利报道。发明内容0004本发明要解决的技术问题是提供一种适用于规模化生产、产品纯度高的提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法。0005为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下一种提取纯化聚伞凹顶藻醇的方法，其特征在于按如下工艺步骤进行（1）以聚伞凹顶藻为原料，进行干燥、粉碎，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质；（2）残渣加810倍（V/W）7590乙醇溶液进行超声循环提取23次，每次12H，合并提取液；（3）提取液浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和1030乙醇溶。
6、液洗脱，再用85乙醇溶液洗脱，收集85乙醇洗脱液；（4）洗脱液浓缩，上硅胶短粗柱，柱径高比为135，以氯仿甲醇混合溶液为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，放置结晶；（5）分出结晶，丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶。0006所述步骤（1）中超临界二氧化碳萃取温度为3045，压力为1522MPA，萃取时间为051H。说明书CN104072507A2/3页40007所述步骤（4）中氯仿甲醇混合溶液体积比为117。0008综上所述，本发明存在以下优点（1）采用超临界二氧化碳萃取技术脱除油脂类物质，快速、高效。0009（2）采用超声循环提取的方法，提取效率高。0010（3）采用大孔树脂和硅。
7、胶短粗柱层析后进行结晶，从而获得含量95以上的聚伞凹顶藻醇，成本低，分离效果好。0011下面将结合具体实施方式对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。具体实施方式0012实施例1取聚伞凹顶藻粗粉500G，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质，萃取温度为30，压力为22MPA，萃取时间为1H，残渣加9倍（V/W）90乙醇溶液进行超声循环提取2次，每次1H，合并提取液，浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和30乙醇溶液洗脱，再用85乙醇溶液洗脱，收集85乙醇洗脱液，浓缩，与100目的硅胶按重量比11拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为15，以氯仿甲醇混合溶液。
8、为洗脱剂，依次按11、14、17体积比进行洗脱，收集含聚伞凹顶藻醇的洗脱液，回收试剂，将所得聚伞凹顶藻醇浓缩液置于结晶罐中静置20小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶159MG，纯度为967。0013实施例2取聚伞凹顶藻粗粉500G，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质，萃取温度为40，压力为20MPA，萃取时间为05H，残渣加8倍（V/W）80乙醇溶液进行超声循环提取2次，每次1H，合并提取液，浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和30乙醇溶液洗脱，再用85乙醇溶液洗脱，收集85乙醇洗脱液，浓缩，与200目的硅胶按重量比11拌。
9、匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为15，以氯仿甲醇混合溶液为洗脱剂，依次按11、13、17体积比进行洗脱，收集含聚伞凹顶藻醇的洗脱液，回收试剂，将所得聚伞凹顶藻醇浓缩液置于结晶罐中静置24小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶146MG，纯度为954。0014实施例3取聚伞凹顶藻粗粉500G，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质，萃取温度为45，压力为15MPA，萃取时间为05H，残渣加10倍（V/W）90乙醇溶液进行超声循环提取2次，每次2H，合并提取液，浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和25乙醇溶液洗脱，再用85乙醇溶液洗。
10、脱，收集85乙醇洗脱液，浓缩，与100目的硅胶按重量比11拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为15，以氯仿甲醇混合溶液为洗脱剂，依次按11、13、17体积比进行洗脱，收集含聚伞凹顶藻醇的洗脱液，回收试剂，将所得聚伞凹顶藻醇浓缩液置于结晶罐中静置12小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶167MG，纯度为956。0015实施例4取聚伞凹顶藻粗粉1KG，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质，说明书CN104072507A3/3页5萃取温度为45，压力为20MPA，萃取时间为05H，残渣加8倍（V/W）75乙醇溶液进行超声循环提取3次，。
11、每次1H，合并提取液，浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和20乙醇溶液洗脱，再用85乙醇溶液洗脱，收集85乙醇洗脱液，浓缩，与200目的硅胶按重量比11拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为13，以氯仿甲醇混合溶液为洗脱剂，依次按11、13、17体积比进行洗脱，收集含聚伞凹顶藻醇的洗脱液，回收试剂，将所得聚伞凹顶藻醇浓缩液置于结晶罐中静置18小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶324MG，纯度为958。0016实施例5取聚伞凹顶藻粗粉5KG，采用超临界二氧化碳技术萃取聚伞凹顶藻中的油脂类物质，萃取温度为38，压力为20MPA，萃取时间为1H，残渣加10倍（V/W）80乙醇溶液进行超声循环提取3次，每次2H，合并提取液，浓缩后上D101型大孔树脂柱，先用水和10乙醇溶液洗脱，再用85乙醇溶液洗脱，收集85乙醇洗脱液，浓缩，与200目的硅胶按重量比11拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为15，以氯仿甲醇混合溶液为洗脱剂，依次按11、13、17体积比进行洗脱，收集含聚伞凹顶藻醇的洗脱液，回收试剂，将所得聚伞凹顶藻醇浓缩液置于结晶罐中静置12小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得聚伞凹顶藻醇无色结晶172G，纯度为965。说明书CN104072507A。