技术领域
本发明涉及的是一种生物技术领域的制备方法，具体是一种苜蓿青贮添加 剂的制备方法。
背景技术
紫花苜蓿(以下简称苜蓿)(Medicago sativa L.)是一种多年生豆科牧草， 营养价值丰富，是草食动物优质的饲草，有“牧草之王”的美誉。长期以来， 紫花苜蓿的保存主要以晒制干草为主，这种方法的最大缺点是营养物质损失严 重。近几年，加拿大、日本等国家开始利用青贮的方法保存苜蓿，解决了苜蓿 保存过程中营养物质损失严重的问题。由于苜蓿可溶性糖含量低，缓冲能高， 属于难青贮的豆科牧草，直接青贮效果不好，需要在青贮发酵过程中使用添加 剂。国外目前使用比较普遍的添加剂种类有甲酸、乳酸菌制剂、酶制剂、以及 乳酸菌和酶制剂的混合物等。
经对现有技术的文献检索发现，Mitsuaki Ohshima等(1997)在Animal Feed Science Technology杂志第66期(129-137页)首次提出绿汁发酵液 (Previously Fermented Juice，简写为PFJ)的制作方法及其在苜蓿青贮中 的效果。该方法的主要制作过程如下：新鲜苜蓿→切碎→加水→浸渍→粉碎(打 浆)→过滤→滤液中加葡萄糖→发酵→制成PFJ。由于绿汁发酵液含有多种来 源于苜蓿的乳酸菌菌种，在苜蓿青贮中有明显降低青贮料pH值的作用，并且， 绿汁发酵液制作简单，取材方便，家畜食用青贮料后无副作用，青贮制作过程 中对人体无害，因此，逐渐开始在生产中得到应用。作为乳酸发酵的启动因子， 绿汁发酵液能够在青贮过程中促进乳酸菌种群扩大，抑制其它有害菌的生长， 改善苜蓿青贮品质。许多的研究证明用绿汁发酵液青贮苜蓿，其作用比接种单 一乳酸菌更有效，可显著降低青贮苜蓿的pH值。然而，绿汁发酵液中除含有多 种乳酸菌外，还含有多种有害的菌种，这些菌种同样也具有启动因子的作用， 在苜蓿青贮过程中诱导有害菌种群扩大，因而降低或减缓了绿汁发酵液更好地 促进乳酸菌扩大繁殖的作用，使得青贮苜蓿在预备发酵期和酸化前期不能在短 期内急剧降低青贮料的pH值，这是绿汁发酵液作为青贮添加剂在苜蓿青贮中存 在的最大缺陷，影响到青贮苜蓿高质量发酵和形成高质量的青贮料。在进一步 的检索中，还未见将绿汁发酵液和甲酸配合作为苜蓿青贮添加剂以及制备方法 的报道。
发明内容
本发明针对背景技术中绿汁发酵液青贮的不足和缺陷，提供一种苜蓿青贮 添加剂的制备方法，使其在使用PFJ的基础上，配合使用甲酸以快速降低预备 发酵期的pH值，有效地抑制有害菌的繁殖，为耐酸性能较强的乳酸菌繁殖创造 条件，从而快速降低预备发酵期和酸化前期青贮苜蓿pH值，提高苜蓿青贮料的 质量。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明所述的苜蓿青贮添加剂，由绿 汁发酵液和甲酸组成，其重量百分比是40～60％：40～60％，制备步骤如下：
(1)制备绿汁发酵液；
(2)确定甲酸使用量；
(3)绿汁发酵液(PFJ)和甲酸溶液配合使用，形成苜蓿青贮添加剂。
所述的步骤(1)，具体为：(a)取新鲜的苜蓿植株，去掉基部和顶部各约 10cm，同时去掉主枝和比较粗的枝条，将剩余的幼枝和叶保留，切碎成3-5cm； (b)按苜蓿(g)和水(ml)1∶2.5的比例加入蒸馏水，充分混合，用高速组 织粉碎机将混合后的苜蓿捣碎，静置1小时，双层纱布过滤；(c)按苜蓿原料∶ 葡萄糖＝10g∶1g的比例在滤液中加入葡萄糖或相当葡萄糖量的糖浆，充分搅拌， 置于30℃的环境中发酵48小时，制成绿汁发酵液。
所述的步骤(2)，具体为：以每公斤苜蓿4.0～6.0ml 100％浓度的甲酸作为 实施用量。
所述的步骤(3)，具体为：绿汁发酵液(PFJ)与100％浓度的甲酸溶液(FA) 按40～60％∶40～60％的比例形成苜蓿青贮添加剂，青贮时每公斤苜蓿添加 4.0～6.0mlPFJ和4.0～6.0ml FA(或相当甲酸量的非100％甲酸溶液)，绿汁发酵 液和甲酸溶液先后分别喷洒在苜蓿表面。
本发明的特点在于：将甲酸与PFJ两个功能互补的添加剂配合使用，形成 本添加剂，它不同于国外单独用甲酸或PFJ作为苜蓿青贮添加剂的方法。绿汁 发酵液是乳酸发酵的启动因子，而甲酸有抑制有害菌繁殖的作用，两种添加剂 的综合和互补，既能直接快速降低预备发酵期的pH值，抑制有害菌繁殖，又可 促进预备发酵期和酸化前期乳酸菌大量繁殖，产生更多的乳酸，形成最终较低 的pH值，从而有效提高青贮苜蓿的质量。使用本添加剂比绿汁发酵液单独使用 有更好的降低pH值和提高青贮质量的效果。用本添加剂处理的苜蓿，经30天 青贮，青贮料pH值比用绿汁发酵液处理降低14.3～17.1％。
具体实施方式
结合本发明方法步骤提供以下实施例：
实施例一
1、绿汁发酵液制作：(1)取新鲜的苜蓿植株，去掉基部和顶部各约10cm， 同时去掉主枝和比较粗的枝条，将剩余的幼枝和叶保留，切碎成3-5cm，(2)按 苜蓿(g)和水(ml)1∶2.5的比例加入蒸馏水，充分混合，用高速组织粉碎机 捣碎，静置1小时，双层纱布过滤，按苜蓿原料∶葡萄糖＝10g∶1g的比例在滤 液中加入葡萄糖或相当葡萄糖量的糖浆，充分搅拌，置于30℃的环境中发酵48 小时，制成绿汁发酵液；
2、甲酸使用量：以每公斤苜蓿4.0ml 100％浓度的甲酸作为实施用量。
3、苜蓿青贮添加剂的制作：绿汁发酵液(PFJ)与100％浓度的甲酸溶液(FA) 60％∶40％的比例形成苜蓿青贮添加剂，青贮时每公斤苜蓿添加6.0mlPFJ和4.0ml FA(或相当甲酸量的非100％甲酸溶液)，绿汁发酵液和甲酸溶液先后分别喷洒在 苜蓿表面。
表1 实施例一的苜蓿青贮效果 处理 感观品质 pH α＝0.05 蛋白质 α＝0.05 无添加剂 低劣 5.10±0.12 a 17.25±0.51％ c PFJ 中等 4.87±0.16 b 20.31±0.12％ b 本发酵液 优良 4.26±0.04 c 24.56±0.23％ a
从表1看出，用本发酵液处理的苜蓿，经30天青贮，青贮料感观评价达到 优良，而PFJ的感观评价为中等；pH值和蛋白质含量分别比PFJ处理低14.3％ 和提高20.9％，差异均达到显著水平。
实施例二
1、绿汁发酵液制作：(1)取新鲜的苜蓿植株，去掉基部和顶部各约10cm， 同时去掉主枝和比较粗的枝条，将剩余的幼枝和叶保留，切碎成3-5cm，(2)按 苜蓿(g)和水(ml)1∶2.5的比例加入蒸馏水，充分混合，用高速组织粉碎机 捣碎，静置1小时，双层纱布过滤，按苜蓿原料∶葡萄糖＝10g∶1g的比例在滤 液中加入葡萄糖或相当葡萄糖量的糖浆，充分搅拌，置于30℃的环境中发酵48 小时，制成绿汁发酵液；
2、甲酸使用量：以每公斤苜蓿5.0ml 100％浓度的甲酸作为实施用量；
3、苜蓿青贮添加剂制作：绿汁发酵液(PFJ)与100％浓度的甲酸溶液(FA) 按50％∶50％的比例形成苜蓿青贮添加剂，青贮时每公斤苜蓿添加5.0mlPFJ和 5.0ml FA(或相当甲酸量的非100％甲酸溶液)，绿汁发酵液和甲酸溶液先后分 别喷洒在苜蓿表面。
表2 实施例二的苜蓿青贮效果 处理 感观品质 pH α＝0.05 蛋白质 α＝0.05 无添加剂 低劣 5.10±0.12 a 17.25±0.51％ c PFJ 中等 4.87±0.16 b 20.31±0.12％ b 本发酵液 优良 4.24±0.14 c 24.21±0.18％ a
从表2看出，用本发酵液处理的苜蓿，经30天青贮，青贮料感观评价达到 优良，而PFJ的感观评价为中等；pH值和蛋白质含量分别比PFJ处理低14.9％ 和提高19.2％，差异均达到显著水平。
实施例三
1、绿汁发酵液制作：(1)取新鲜的苜蓿植株，去掉基部和顶部各约10cm， 同时去掉主枝和比较粗的枝条，将剩余的幼枝和叶保留，切碎成3-5cm，(2)按 苜蓿(g)和水(ml)1∶2.5的比例加入蒸馏水，充分混合，用高速组织粉碎机 捣碎，静置1小时，双层纱布过滤，按苜蓿原料∶葡萄糖＝10g∶1g的比例在滤 液中加入葡萄糖或相当葡萄糖量的糖浆，充分搅拌，置于30℃的环境中发酵48 小时，制成绿汁发酵液；
2、甲酸使用量：以每公斤苜蓿6.0ml 100％浓度的甲酸作为实施用量；
4、PFJ甲酸苜蓿青贮添加剂制作：绿汁发酵液(PFJ)与100％浓度的甲酸 溶液(FA)按40％∶60％的比例形成苜蓿青贮添加剂，青贮时每公斤苜蓿添加 4.0mlPFJ和6.0ml FA(或相当甲酸量的非100％甲酸溶液)，绿汁发酵液和甲酸 溶液先后分别喷洒在苜蓿表面。
表3 实施例三的苜蓿青贮效果 处理 感观品质 pH α＝0.05 蛋白质 α＝0.05 无添加剂 低劣 5.10±0.12 a 17.25±0.51％ c PFJ 中等 4.87±0.16 b 20.31±0.12％ b 本发酵液 优良 4.16±0.22 c 24.64±0.43％ a
从表3看出，用本发酵液处理的苜蓿，经30天青贮，青贮料感观评价达到 优良，而PFJ的感观评价为中等；pH值和蛋白质含量分别比PFJ处理低17.1％ 和提高21.3％，差异均达到显著水平。
上述三个实施例的制作方法流程可以简述为：
新鲜苜蓿→精选→切碎→浸渍→粉碎(打浆)→静置→过滤→加葡萄糖→ 发酵→制成PFJ→甲酸→苜蓿青贮添加剂。