技术领域
本发明涉及藿香油的新用途，特别涉及藿香油在制备抗病毒药物中的用 途。
背景技术
由病毒引起的感染性疾病，一直严重威胁着人类的生命与健康。据统计， 80%以上的传染病是由病毒引起。病毒性疾病已涉及到临床医学的各个领域， 目前病毒及其造成的疾病成为许多学科关注的热点，病毒感染疾病中最常见 的就是由呼吸道病毒和肠道病毒造成的感染疾病。
呼吸道病毒是一大类能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病变，或仅以呼吸道 为侵入门户引起呼吸道组织器官病变的病毒，是引起急性呼吸道传染的主要 病原体。目前,已知能引起急性呼吸道感染的病毒有10多种,包括流感病毒、 副流感病毒、腺病毒、单纯疱疹病毒、呼吸道合胞病毒等。据统计，90%以 上急性呼吸道感染由病毒引起，尤以上呼吸道感染为临床上的常见病和多发 病，感染者中严重者呈细支气管炎和肺炎，可引起急性呼吸窘迫和心衰，甚 至导致死亡。呼吸道病毒易发生变异，从而增加其致病性，或引发一些新的 疾病。其中流感病毒（influenza）是引起急性呼吸道感染性疾病流感的主要 致病病毒，流感具有传染性强、传播快、人群反复易感等特点。据世界卫生 组织发布最新疫情通报，仅今年至今甲型HINI流感己在全球造成超过1万 人死亡，其在中亚、南亚地区的活动更是持续加强。我国是流感的多发区， 流感的流行或局部暴发基本上每年都会发生，使1亿多人遭受流感的困扰， 因流感到医院就医者超过50万人，造成的社会和经济负担难以统计。腺病毒 的危害也不容忽视，腺病毒AdV（Adneovirus）是儿童呼吸道感染的常见病 毒，最常引起的疾病是咽扁桃体炎，其次为肺炎、胃肠炎、支气管炎及中耳 炎，也可引起咽-结膜炎、脑炎、角膜炎、肠炎等，病死率甚高。
柯萨奇病毒（Coxsaekieviurs）属小核糖核酸病毒科（Picomaviridea），肠 道病毒属（Enterroviurs），根据其对乳鼠致病能力的不同可分为A组和B组。 柯萨奇病毒B（Coxsackievirusgroup B，CVB）可引起流行性胸痛、无菌性脑 炎、脑膜脑炎和心包炎，尤其CVB3是病毒性心肌炎的主要病原体，能引起 心肌组织发生灶性坏死，并伴有炎性细胞浸润，心肌细胞裂解等病理改变， 病毒持续感染可导致扩张性心肌病，给人类带来了极大的威胁。
20世纪90年代以来，研究人员发现不少新的抗病毒药物，目前在临床 上应用的抗病毒药物已超过20余种，但其确切疗效仍有很大争议，并且抗病 毒化学合成类药物长期应用后，病毒易对其产生耐药性，现已成为临床上治 疗病毒性疾病的棘手问题。现在常规用于防治病毒感染的药物病毒唑 (ribavirin)，通过抑制磷酸次嘌核脱氢酶，从而抑制病毒复制，早期用药有效。 但病毒唑静脉给予时存在骨髓细胞毒性，因此最好只通过少量的气雾剂经呼 吸道给予，但临床应用中常出现白细胞减少，剂量过大时可致头痛、不可逆 贫血、血清胆红素升高等副作用，动物实验有致畸的报道。因此，抗病毒药 物的研究具有重要的实际意义，寻找一种高效、安全、副作用少的抗病毒药 物的研究势在必行。
我国的中药资源极为丰富，应用历史悠久，在长期的实践中积累了很多 资料和经验。中药疗效肯定，毒副作用小，药源丰富且价格低廉。中医理论 中提出具有清热，解毒作用的，如金银花、大青叶、苍术、黄芪等单味药物， 及板兰根冲剂等复方药物可在抗病毒方面发挥优势。体外实验和临床实践证 明，多数病毒对中草药敏感，如呼吸道病毒(流感病毒、麻疹病毒、流行性腮 腺炎病毒)、肠道病毒(脊灰炎病毒、轮状病毒、柯萨奇病毒)、煤病毒(流行 性乙脑病毒、脑炎病毒)等使用中药治疗可获得较好疗效。一般药理作用原 理是通过抑制病毒复制，阻止病毒致细胞的病变，调节免疫作用，改善肺循 环，减少和消除致病部位炎性渗出物等综合作用，使病毒感染性疾病症状减 轻或痊愈，因此中药抗病毒有着潜在优势和广阔的前景。
广藿香为唇形科（Labiatae）多年生刺蕊草本植物广藿香（Pogostemon cablin(Blanco)Benth.），又名枝香，原产菲律宾等热带亚洲，现广泛分布在中 国、印度、日本、印度尼西亚、马来西亚、马达加斯加、巴西、巴拉圭和俄 罗斯等。目前广蕾香在广东的广州、肇庆、湛江以及海南、广西、四川等省(区) 均有栽培，是“十大南药”之一，其药材商品按产地不同分为牌香(广州产)、 枝香(肇庆产)、湛香(湛江产)和南香(海南产)4种。其味辛，性微温，归脾、 胃、肺经，以全草入药，具有芳香化浊、开胃止呕、发表解暑之功效。常用 于湿浊中阻、脘痞呕吐，暑湿倦怠、胸闷不舒、寒湿闭暑、腹痛吐泻、鼻渊 头痛、外感风寒。广藿香的挥发油具有抗炎、镇痛和抗菌活性。
藿香为唇形科植物藿香Agastache rugosa(Fisch.Et Mey.)O.Ktze.的干燥 地上部分，含有挥发油，功效同广藿香。现代药理表明，广藿香具有抗病原 微生物、抗炎、解热、镇痛等作用，是藿香正气水、抗病毒口服液等治疗流 感、感冒常用中成药的主要成分，但其药效物质基础尚不明确且未见有其体 内抗流感病毒作用报道。藿香的挥发油具有抗菌作用。
发明内容
本发明的目的在于提供藿香油的新用途，以及以藿香油为活性成分的药 物组合物。
本发明藿香油新用途是在制备抗病毒药物中的用途。
所述抗病毒药物是抗流感病毒、CVB-3和/或腺病毒的药物。
所述抗病毒药物是治疗呼吸道感染性疾病、肺炎、中耳炎、病毒性心肌 炎、结膜炎、脑炎、角膜炎、肝炎或/和肠炎的药物。其中，所述的治疗呼吸 道感染性疾病的药物是治疗鼻炎、咽炎、扁桃体炎、喉炎、气管炎或/和支气 管炎的药物。
其中，所述的藿香油来源于广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.或藿 香Agastache rugosa(Fisch.Et Mey.)O.Ktze.提取的挥发油。
其中，所述源于广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.的藿香油，百 秋李醇含量不低于40％（w/w），广藿香酮含量不低于20％（w/w）。
所述的藿香油是由以下方法制备得到的：取广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.或藿香Agastache rugosa(Fisch.Et Mey.)O.Ktze.的全草，粉 碎成粗粉，加水，浸泡，采用水蒸气蒸馏法提取，即得藿香油。
本发明抗病毒的药物组合物，是以藿香油为活性成分，加上药学上可接 受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。
所述的药剂是外用制剂、口服制剂或注射制剂。
所述外用制剂为洗剂、栓剂、涂膜剂或搽剂。
所述制剂中藿香油的含量为0.1％～100％（w/w）。
本发明藿香油具有抗病毒的作用，尤其是对流感病毒、CVB-3和/或腺病 毒的抑制作用显著，对病毒引起的急性呼吸道感染以及其他炎症有治疗作用， 其中，对病毒性心肌炎、肺炎的疗效确切，具有良好的临床应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段， 在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、 替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步 的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。 凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1本发明藿香油的制备
取广藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.全草，粉碎过20-40目筛，加 入10-14倍重量的蒸馏水，浸泡1-5小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2-6小时， 即得本发明藿香油，又称广藿香油，其中，含百秋李醇(C15H26O)不得低于40 ％w/w，广藿香酮不得低于20％w/w。
实施例2本发明藿香油的制备
取藿香Agastache rugosa(Fisch.Et Mey.)O.Ktze.全草，粉碎过20-40目筛， 加入10-14倍重量的蒸馏水，浸泡1-5小时后，采用水蒸气蒸馏法提取2-6 小时，即得本发明藿香油。
本发明藿香油也可按照药典(2005年版)附录XD挥发油测定法提取，还 可采用有机溶剂提取、超临界CO2萃取等现有技术进行提取，或者通过购买 市售产品获得。
以下通过药效试验证明本发明的有益效果：
实验例1本发明藿香油体外抗病毒实验
1、材料及仪器
1.1细胞株和病毒株
1.1.1细胞株：
MDCK细胞（犬肾细胞）、Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）、HeLa细胞（宫 颈癌细胞），购自中国药品与生物制品检定所。
1.1.2病毒株：
甲型流感病毒选用A/PR/8/34病毒株，血清型为H1N1（以下简称流感病 毒），源自国家流感中心；柯萨奇病毒选用B组3型（以下简称CVB-3），源 自四川省临检中心；腺病毒选用常见的3型（Ad-3），由甘肃省疾控中心馈 赠。
1.2药物及对照药物
试验药物：发明药物：实施例1制备的广藿香油。
阳性药物：利巴韦林注射液：规格为100mg/ml，天津药业焦作有限公司 生产。批准文号：国药准字H19992467，生产批号：10110521；注射用阿昔 洛韦：规格为0.25g/瓶，天津药业焦作有限公司生产。批准文号：国药准字 H20034034，生产批号：10122403。
1.3培养基、试剂及耗材
RPMI-1640培养基（GibcoTM公司，批号1313945）；DMEM培养基 （GibcoTM公司，批号1345538）；胎牛血清（HyClone生物化学制品（北京） 有限公司，批号NVM0347）；胰蛋白酶（Amresco公司）；青霉素G钠、链 霉素无菌细胞培养瓶和96孔细胞培养板（美国Corning公司）。1、5、10ml 一次性吸管，200μl、1ml一次性枪头（江苏海门生物耗材公司）
1.4主要仪器
隔水式恒温CO2培养箱（型号MCO-15AC，日本三洋公司）；
OLYMPUS倒置显微镜（型号CKX41，日本奥林巴斯公司）；
微量移液器（法国GILSON公司生产）；
隔水式电热恒温培养箱（型号GSV-DA-1，湖北省黄石市医疗器械厂）；
水平离心机（型号LXJ-II，上海医用分析仪器厂）；
电子天平（型号JA-2603，上海天平仪器厂）。
2、试验方法
2.1药物及阳性对照的前处理
将发明药物广藿香油先用0.5%吐温-80助溶为白色液体制剂，其初始浓度 为20%（广藿香油密度是1.012g/ml，浓度202.4mg/ml）。使用前用0.5%吐温-80 将此白色液体做1/10稀释，过滤除菌后备用。
将用于流感病毒和柯萨奇病毒的阳性对照药物利巴韦林注射液和用于腺 病毒的阳性对照药物注射用阿昔洛韦用无菌水做1/10稀释（即10mg/ml）以 备用。
2.250%组织细胞感染剂量的测定
流感病毒和腺病毒用3%胎牛血清DMEM，柯萨奇病毒B3用3%胎牛血 清RPMI-1640稀释成不同浓度的病毒液。
流感病毒接种MDCK细胞，柯萨奇病毒B3株接种HeLa细胞，腺病 毒接种Hep-2细胞，于37℃，5%CO2孵箱中培养7d后观察感染细胞圆缩、 脱落等细胞病变（cytopathiceffect,CPE）情况，以测定各病毒引起50%组织 细胞病变的感染剂量（50%tissue culture infective dose,TCID50）。
2.3抗病毒实验
在96孔培养板的MDCK单层细胞中加入100×TCID50流感病毒液0.1ml， 在HeLa单层细胞中加入100×TCID50CVB-3病毒液0.1ml以及在Hep-2单层细 胞中加入100×TCID50Ad-3病毒液0.1ml，于37℃、5%CO2吸附2小时，吸弃 病毒液，分别加入稀释好的发明药物和阳性对照药，每个浓度做3复孔。实验 同时设置感染等量病毒不给药的感染对照和无病毒感染的正常细胞对照。各 培养板于37℃、5%CO2继续培养5d，每天显微镜下观察CPE。
3．实验结果及药效学指标计算
3.1各病毒的TCID50值
流感病毒接种MDCK细胞后约3天出现CPE，柯萨奇病毒B3接种HeLa细 胞和腺病毒Ad-3接种Hep-2细胞后约5天出现CPE。流感病毒的TCID50效价为 10-4，柯萨奇病毒B3和腺病毒Ad-3的TCID50效价均为10-12。
3.3发明药物抗病毒实验效果及药效学指标计算
3.3.1实验结果
实验结果如表1所示：
表1发明药物抗病毒实验结果（n=3）
由表1可以看出，本发明药物对流感病毒、柯萨奇病毒B3株和腺病毒 的抑制效果好。达到相同的病毒抑制率(75%)，本发明药物的用量为 0.092mg/ml，而阳性药物的用量为0.156mg/ml，是本发明药物的用量的1.7 倍。
实验说明，本发明藿香油抑制甲型流感病毒、CVB-3和腺病毒的效果优 良。
实验例2本发明藿香油体内抗病毒实验
1、材料及仪器
1.1病毒株
甲型流感病毒选用A/PR/8/34病毒株，血清型为H1N1（以下简称流感病 毒），源自国家流感中心；柯萨奇病毒选用B组3型（以下简称CVB-3），源 自四川省临检中心；腺病毒选用常见的3型（Ad-3），由甘肃省疾控中心馈 赠。
1.2药物及对照药物
试验药物：发明药物：实施例1制备的广藿香油。
阳性药物：利巴韦林注射液：规格为100mg/ml，天津药业焦作有限公司 生产。批准文号：国药准字H19992467，生产批号：10110521；注射用阿昔 洛韦：规格为0.25g/瓶，天津药业焦作有限公司生产。批准文号：国药准字 H20034034，生产批号：10122403。
1.3动物：小鼠Bab/c级雄，体重10士2g，雌雄各半
小鼠Bab/c级雄，体重18士2g，雌雄各半
1.4培养基、试剂及耗材
RPMI-1640培养基（GibcoTM公司，批号1313945）；DMEM培养基 （GibcoTM公司，批号1345538）；胎牛血清（HyClone生物化学制品（北京） 有限公司，批号NVM0347）；胰蛋白酶（Amresco公司）；青霉素G钠、链 霉素无菌细胞培养瓶和96孔细胞培养板（美国Corning公司）。1、5、10ml 一次性吸管，200μl、1ml一次性枪头（江苏海门生物耗材公司）
乙醚（分析纯，成都科龙化工试剂厂，批号：20111215）；0.9%生理盐 水（成都科伦制药有限公司，批号：H120115）
乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号： 20121013；超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所， 批号：20121012；丙二醛（MDA）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所， 批号：20121010；CK-MB（肌酸激酶同工酶）、TNF-α（肿瘤活化因子α） 测定试剂盒，美国RD公司，批号：201210
1.4主要仪器
隔水式恒温CO2培养箱（型号MCO-15AC，日本三洋公司）；
OLYMPUS倒置显微镜（型号CKX41，日本奥林巴斯公司）；
微量移液器（法国GILSON公司生产）；
隔水式电热恒温培养箱（型号GSV-DA-1，湖北省黄石市医疗器械厂）；
水平离心机（型号LXJ-II，上海医用分析仪器厂）；
电子天平（型号JA-2603，上海天平仪器厂）；
酶标仪，美国Thermo Scientific公司，型号：Varioskan Flash。
2、试验方法
2.1药物及阳性对照的前处理
将发明药物藿香油先用0.5%吐温-80助溶为白色液体制剂，其初始浓度为 20%（藿香油密度是1.012g/ml，浓度202.4mg/ml）。使用前用0.5%吐温-80将 此白色液体做1/10稀释，过滤除菌后备用。
将用于流感病毒和柯萨奇病毒的阳性对照药物利巴韦林注射液和用于腺 病毒的阳性对照药物注射用阿昔洛韦用无菌水做1/10稀释（即10mg/ml）以备 用。
2.2发明药物体内抗病毒实验
2.2.1病毒感染动物致病模型的建立
取Bab/c小鼠40只，SPF级，体重10士2g，随机分为4组，每组10 只。注射部位常规消毒后，按组分别腹腔注射原倍、1/2和1/4的CVB3病毒 液0.3ml，正常对照组采用0.3ml生理盐水腹腔注射。
另取Bab/c小鼠，SPF级，体重18士2g，随机分组，每组10只。按组 先用乙醚轻度麻醉，然后分别滴鼻感染原倍、1/2和1/4的流感病毒液或腺病 毒液1ml，正常对照组采用1ml生理盐水滴鼻。
动物室保持空气新鲜，相对湿度60%，温度22士2℃，每天定时补充饲 料、水分、更换垫料，观察小鼠的发病及死亡情况，并记录之，以确定是否 成功建立CVB3、流感病毒和腺病毒感染动物致病模型。
2.2.2发明药物体内抗病毒致病模型试验
2.2.2.1发明药物体内抗病毒性心肌炎模型试验
取Bab/c小鼠140只，体重10士2g，随机分成7组，每组20只。做标 记。
以广藿香油临床注射用量和LD50为依据，在安全剂量范围内分别设立 高、中、低、超低4种浓度的药物治疗组，即药物原始浓度的1.25%（0.127g/kg）、 0.95%（0.096g/kg）、0.625%（0.063g/kg）和0.48%（0.049g/kg）。同时设置 正常对照组、CVB3病毒模型对照组和利巴韦林阳性药物对照组（阳性药物 浓度为0.15g/kg）。
将小鼠注射部位常规消毒，除正常对照组外，其他各组腹腔注射病毒模 型所需的CVB3病毒液，正常对照组采用生理盐水腹腔注射，注射量与其他 组病毒液注射量相同。24h后开始腹腔注射给药，注射量为0.1ml/10g，每日 1次。动物室保持空气新鲜，相对湿度60%，温度22士2℃，每天定时补充 饲料、水分、更换垫料，连续治疗7天后，停止给药观察到第15天。每天观 察小鼠的发病体征及死亡情况，称取体重并记录。
按治疗给药当天起算，在第5天、第10天和第15天时分别从各组动物 随机处死4只，眼眶取血收集，取出心脏、肝脏、肺、肾脏，用滤纸除去表 面血液后，称量，计算心肝肺肾脏器体率。然后将各脏器取100mg，用 RPMI-1640细胞维持液2ml充分匀浆。组织匀浆液用微孔滤膜过滤除菌后， 反复冻融三次，3000rPm离心30min，取上清液0.1ml接种于已生长成单层 Hela细胞的96孔板中，每个样品做3复孔，37℃，5%CO2孵育2h后弃去 孔内液体，PBS洗涤3次后，加入1640细胞维持液，37℃，5%C02培养 72h-120h。每天观察细胞生长情况及相应CPE程度，未出现CPE者经盲传3 次仍无CPE则为无病毒感染者。将眼眶取血收集到的血液于4℃放置过夜， 3000rpm离心20min，取血清进行血清生化指标检测。
2.2.2.2发明药物体内抗肺炎模型试验
取Bab/c小鼠140只，体重18士2g，随机分组，每组20只。做标记。
以广藿香油临床灌胃给药用量为依据，在安全剂量范围内分别设立高、 中、低、超低4种浓度的药物治疗组，即药物原始浓度的10%（1.27g/kg）、 5%（0.508g/kg）、2.5%（0.254g/kg）和1.25%（0.127g/kg）。同时设置正常对 照组、流感病毒模型对照组、腺病毒模型对照组、利巴韦林阳性药物对照组 和阿昔洛韦阳性药物对照组。
除正常对照组外，模型组按造模成功所需的流感病毒和腺病毒病毒量分 别给小鼠滴鼻感染，正常对照组采用生理盐水滴鼻，滴鼻量与其他组病毒液 感染量相同。24h后开始灌胃给药，灌胃量为0.3ml/10g，每日1次。
动物室保持空气新鲜，相对湿度60%，温度22士2℃，每天定时补充饲 料、水分、更换垫料，连续治疗7天后，停止给药观察到第15天。每天观察 小鼠的发病体征及死亡情况，称取体重并记录。
按治疗给药当天起算，在第5天、第10天和第15天时分别从各组动物 随机处死4只解剖，肉眼观察期肺部病变情况，摘取全肺用滤纸除去表面血 液后，称量，计算其肺体率。然后研磨鼠肺接种相应的敏感细胞,以确定肺病 变是否由该试验病毒感染所致。
3、试验结果
3.1小鼠体内病毒模型建立
将原倍、1/2和1/4的CVB3病毒液腹腔注射小鼠，0.3ml/只，观察发 现小鼠在注射病毒前毛发有光泽,活动、饮食、大小便正常。注射药物后，与 正常对照组小鼠相比，原倍病毒液组小鼠在第2～3天开始活动减少,饮食量下 降,体重减轻,毛发失去光泽,并出现卷毛，第6～7天相继死亡，到第8天时全 部死亡，解剖发现心脏明显比正常组小鼠小，同时心脏外膜下可见乳白色点 状、条索状类脂肪样病变。1/2原倍浓度组和1/4原倍浓度组小鼠在第2～3天 时也出现活动减少，饮食量下降，体重减轻，但在第5天时开始增加活动， 饮食量增加，状态逐渐恢复到正常组小鼠状态。说明建立病毒性心肌炎模型 需要用原倍CVB3病毒液腹腔注射小鼠，0.3ml/只。
将原倍、1/2和1/4的流感病毒液、腺病毒液分别滴鼻感染小鼠，1ml/只， 观察发现模型小鼠与正常对照组小鼠相比，原倍病毒液组小鼠在滴鼻当天开 始陆续出现死亡，于第4天左右全部死亡；1/2原倍浓度组在第2～3天出现 活动减少，饮食量下降，毛发失去光泽，并出现卷毛，第5～6天相继出现死 亡，于第7天时全部死亡，解剖发现肺部病变明显。1/4原倍浓度组在第2 天出现不适症状，但是于第3～4天状态相继好转。说明建立肺炎模型需要的 流感病毒和腺病毒均为1/2原倍浓度组，1ml/只。
3.2发明药物体内抗病毒效果
3.2.1发明药物对病毒性心肌炎小鼠模型的效果
3.2.1.1一般情况影响
实验结果如表2所示：
表2各实验组小鼠体重及死亡情况
组别 0d 5d 10d 14d 总死亡数 正常组 12.0±0.5 13.3±0.5 15.0±0.5 18.9±2.1 0/20 模型组 12.5±0.4 10.3±0.5 12.0±1.5 17.5±0.5 18/20 阳性组（0.15g/kg） 12.0±0.5 11.8±0.7 12.6±1.2 15.3±1.0 8/20 发明药物1.25%(0.127g/kg) 11.5±0.6 9.8±0.7 15.0±1.5 16.8±1.5 14/20 发明药物0.95%(0.096g/kg) 12.0±0.5 9.9±0.2 10.8±0.7 17.2±1.6 6/20 发明药物0.63%(0.063g/kg) 11.8±0.5 10.5±0.5 12.1±1.2 14.5±1.2 8/20 发明药物0.48%（0.049g/kg） 12.0±0.5 10.5±0.5 11.5±1.0 13.8±1.2 13/20
正常组小鼠的行动正常，至观察结束时，死亡率为0%；
模型组、阳性组和发明药物组小鼠在造模结束时，均不同程度出现体重 减轻，伴皮毛不泽，活动、摄食减少，排尿增加；
模型组小鼠于第6～7天开始相继死亡，观察结束时，死亡率高达90%；
阳性药物组和发明药物组小数的症状均减轻，活动量、摄食量增加，体 重开始上升：
其中，阳性组的死亡率为40%；发明药物1.25%的死亡率为70%；发明 药物1.25%的死亡率为30%；发明药物0.63%的死亡率为40%；发明药物 0.48%的死亡率为65%。
本发明藿香油对病毒性心肌炎的治疗效果随着用量的增加，先升高，后 降低，以用量为0.096g/kg的效果最优。
本发明广藿香油使用剂量为0.063～0.096g/kg时，治疗效果优于阳性药物 （0.15kg/g），说明本发明药物对病毒性心肌炎的治疗效果优良。
3.2.1.2发明药物对小鼠心肺肾肝脏器体率的影响
实验结果如表3所示：
表3各实验组小鼠不同取样时间的体重与心肺肾肝脏器体率结果（n=4）
时间 项目 正常组 模型组 阳性组 1.250% 0.950% 0.625% 0.480% 5d 体重 12.3±0.5 10.3±0.5 11.8±0.7 9.8±0.7 9.9±0.2 10.5±0.5 10.5±0.5 心体率 0.6315±0.0235 0.6597±0.0663 0.7184±0.0042 0.5996±0.0046 0.6821±0.0112 0.6076±0.0848 0.6419±0.0109
肺体率 0.8166±0.0450 0.8887±0.0783 0.8332±0.0399 0.9207±0.0077 0.7389±0.0453 0.9248±0.0257 0.8686±0.0932 肾体率 1.3447±0.0286 1.6533±0.0867 1.5537±0.102 1.4497±0.0234 1.1958±0.0611 1.5233±0.1719 1.5800±0.0665 肝体率 4.4300±0.3908 3.7796±0.3976 4.1572±0.4694 4.4444±0.5096 5.0274±0.9181 3.8457±0.2019 5.2962±1.0982 10d 体重 15.0±0.5 12.0±1.5 12.6±1.2 15.0±1.5 10.8±0.7 12.1±1.2 11.5±1.0 心体率 0.5877±0.0601 0.5232±0.0546 0.5922±0.0922 0.5253±0.0192 0.5843±0.0277 0.5388±0.0812 0.5606±0.0564 肺体率 0.7314±0.0653 0.7073±0.1145 0.7642±0.0773 0.7402±0.0998 0.7428±0.0332 0.8637±0.1201 0.7274±0.0124 肾体率 1.3330±0.0909 1.2767±0.2100 1.4587±0.1702 1.2835±0.1712 1.3658±0.0299 1.4435±0.9087 1.2995±0.1021 肝体率 5.5674±0.9655 4.7726±1.3837 4.4343±0.9207 4.8972±0.2366 5.1760±0.8779 3.8525±2.0364 4.3800±0.34 14d 体重 18.9±2.1 17.5±2.0 15.3±1.0 16.8±1.5 17.2±1.6 14.5±1.2 12.8±1.2 心体率 0.4601±0.0312 0.4960±0.0213 0.4881±0.0505 0.4555±0.0368 0.4807±0.0093 0.5966±0.0557 0.4641±0.0634 肺体率 0.6754±0.0846 0.6954±0.264 0.7439±0.0892 0.8072±0.0385 0.6291±0.0150 0.7214±0.0854 0.7187±0.1611 肾体率 1.0997±0.0570 1.1669±0.0690 1.3179±0.1507 1.2525±0.0993 1.3243±0.0551 1.2476±0.0229 1.1804±0.1223 肝体率 4.3529±0.2331 4.4303±0.8590 4.5229±1.2381 4.1260±0.8362 5.5778±0.0487 5.0745±0.5338 4.0730±1.0212
正常组小鼠心肺肾肝脏器均红而光泽；
模型组心脏色黯且缩小同时伴有心外膜出现乳白色点状、条索状类脂肪 样，肺脏肿大，肝肾不显变化；
阳性组和发明药物各浓度组的心脏出现色黯缩小到颜色逐渐恢复，心外 膜乳白色点状、条索状类脂肪样减少的趋势，肺脏肿大程度减轻。
本发明广藿香油可以缓解各项脏器病变，可有效缩小心脏的色黯至逐渐 恢复正常，进一步说明了本发明广藿香油可以缓解病毒性心肌炎。
3.2.1.3发明药物对小鼠血清生化指标的影响
将病毒接种5d、10d和14d的小鼠血清做血清生化指标检测，正常组与 模型组相比，LDH、CK-MB和TNF-α水平以及MDA含量显著低，SOD活 性明显高（P<0.01）；阳性组与发明药物各浓度组与模型组相比，LDH、CK-MB 和TNF-α水平以及MDA含量有不同程度的降低，SOD活性则不同程度增 加（P<0.01），而阳性组与发明药物各浓度组与正常组相比LDH、CK-MB和 TNF-α水平以及MDA含量有不同程度的增加，SOD活性则不同程度降低 （P<0.05）。正常组的LDH和CK-MB水平随着时间的增加变化不大，SOD 活性有较小增加，MDA含量和TNF-α水平则明显降低；模型组的LDH、 CK-MB水平随着时间的增加明显降低，SOD活性、MDA含量和TNF-α水 平则显著增加；阳性组、0.95%和0.625%浓度组的LDH和CK-MB水平随着 时间的增加较小降低，SOD活性增加，MDA含量和TNF-α水平则明显降低， 并且指标变化都趋于正常组水平；1.25%与0.48%浓度组的LDH、CK-MB水 平、MDA含量和TNF-α水平随着时间的增加降低，SOD活性增加，指标变 化趋于模型组水平。各实验组小鼠血清生化指标结果见表4。
表4各实验组小鼠不同取样时间的血清生化指标（n=4）
(*与模型组比较，P<0.01，#与正常组比较，P<0.05)
由表4可以看出，发明药物可以显著降低LDH、CK-MB和TNF-α水平 以及MDA含量，提高SOD活性，与模型组相比，差异显著（P<0.01），进一 步验证了本发明广藿香油对病毒性心肌炎的治疗作用。
3.2.2发明药物对肺炎小鼠模型的效果
3.2.2.1一般情况影响
当病毒滴鼻感染2～3天后，病毒组小鼠均不同程度出现体重减轻，伴皮 毛不泽，活动、摄食减少，排尿增加；模型组小鼠于第6～7天开始相继死亡， 12天后仅剩2只直至观察结束；发明药物4个浓度组小鼠体重减轻较模型组 明显，利巴韦林、阿昔洛韦阳性组和发明药物各浓度组小鼠于5～6天出现部 分死亡，阳性组小鼠于7～8天（即停药后1天）开始状态逐渐好转，活动量、 摄食量增加，体重开始上升。而发明药物各浓度组小鼠虽然部分状态有所好 转。
3.2.2.2发明药物对小鼠肺指数的影响
发明药物治疗肺炎的结果见表5,6。
表5药物体内抗流感病毒作用体重与肺指数比较（n=4）
由表5可以看出，发明药物浓度大于5%时，可以有效改善肺指数，说 明发明药物可以有效治疗流感病毒引起的肺炎。
表6药物体内抗腺病毒作用体重与肺指数比较（n=4）
由表6可以看出，发明药物可以有效改善肺指数，说明发明药物可以有 效治疗腺病毒引起的肺炎。
综上，藿香油具有抗病毒的作用，对流感病毒、CVB-3及腺病毒的抗性 明确，可以治疗呼吸道感染性疾病、肺炎、中耳炎、病毒性心肌炎、结膜炎、 脑炎、角膜炎、肝炎以及肠炎，其中，对病毒性心肌炎、肺炎的疗效确切， 药理作用强，市场应用前景良好。