技术领域
本发明涉及一种心可舒制剂的半仿生制备方法，属中药制剂技术领域。
背景技术
心脑血管疾病是危害人类健康与生命的严重疾病，被世界卫生组织称为“人类头号杀手”。 在我国，每年大约有195万新发心血管病人，有近156万人死于心血管疾病，心脑血管疾病 致亡率已达到35％，位居各类疾病致亡率之首。
心可舒制剂由丹参、三七、葛根、山楂、木香组成，为活血化瘀、行气止痛的中药组方， 用于气滞血瘀型冠心病引起的胸闷、头晕、头痛、颈项疼痛及心律失常、高血脂等，对冠心 病及心绞痛疗效显著，是中药治疗冠心病最常用的药物之一。本申请的申请人多年致力于研 究心可舒的制备方法、新用途等，并申请了多项发明专利，其中涉及心可舒制剂制备方法的 有：一种心可舒片的制备(专利号为200610081419.X，授权公告号为CN100339096C)、一种 治疗冠心病的中药组合物及其制备方法(专利号为2001310682901.9，授权公告号为CN 103610786B)等。但现有技术中的心可舒制剂的制备方法，其制备工艺为部分药材粉碎成原 药粉，部分药材进行水提、醇提的粗制品，存在有效成分含量低、服用量大、吸收不完全、 生物利用度低、药效发挥较慢、携带不方便等不足之处。随着科学技术的不断发展和新药研 发水平的不断提高，新理论、新技术、新工艺、新设备的不断应用，其传统制备工艺已不完 全符合中药现代化的要求。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供了一种心可舒制剂的半仿生制备方法，其具有有效成分 含量高、生物利用度高、更适合人体吸收等优点。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种心可舒制剂的半仿生制备方法，所述心可舒制剂是由以下重量份的原料药制成的： 葛根900～1600份，山楂900～1600份，丹参900～1600份，三七40～120份，木香40～120 份；制备工艺包括以下步骤：
(1)取木香，粉碎，加水，加热回流1～3h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏0.5～1.5h； 提取挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
优选的，所述加入水的量为木香重量的2～8倍；
(2)取葛根、山楂、丹参和三七，粉碎，与步骤(1)中药渣合并，加入pH值为2.0～ 2.5的水(向水中加入盐酸或磷酸调节至pH值为2.0～2.5)，加热提取1～3小时，滤过，滤 液、滤渣备用；
优选的，所述加入水的量为药材重量(指木香药渣与其它四种原料药的总重量，以下均 指该步所用药渣重量)的2～4倍；
(3)步骤(2)所得药渣加pH值为6.5～7.0的水，加热提取1～3小时，滤过，滤液、 滤渣备用；
优选的，所述加水量为药材重量的1～3倍；
(4)步骤(3)所得药渣加pH值为7.8～8.5的水，加热提取1～3小时，滤过，滤液备 用；
优选的，所述加水量为药材重量的1～3倍；
所述pH值为6.5～7.0的水，为自然界自然存在的水，无需进行特殊处理即可常规途径 得到；所述pH值为7.8～8.5的水，可采用0.1mol/L的NaOH溶液调节得到；
(5)合并步骤(2)(3)(4)中所得滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，制粒， 干燥，加入步骤(1)中所得挥发油，混匀，加入药剂学上可接受的载体或辅料，制备成药物 制剂。
优选的，所述心可舒制剂是由以下重量份的原料药制成的：葛根1000～1400份，山楂 1000～1400份，丹参1000～1400份，三七60～100份，木香60～100份；进一步优选的， 是由以下重量份的原料药制成的：葛根1200份，山楂1200份，丹参1200份，三七80份， 木香80份。
优选的，所述药物制剂的剂型可以为片剂、胶囊、滴丸、颗粒等剂型。
优选的，以片剂为例，制备工艺步骤如下：
(1)取粉碎的木香，加5倍量的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h； 提取挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取其它四味药材粉碎，与步骤(1)中的药渣合并，加入pH值为2.2的水，加水量 为药材重量的3倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(3)步骤(2)所得药渣加pH值为6.8的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小 时，滤过，滤液备用；
(4)步骤(3)所得药渣加pH值为8.2的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小 时，滤过，滤液备用；
(5)合并步骤(2)(3)(4)所得滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，制粒， 干燥，加入步骤(1)所得挥发油，混匀，加入适量辅料，压片即得。
本发明的心可舒制剂的半仿生制备方法，本着使制剂达到“三小(剂量小、毒性小、副作 用小)、三效(高效、速效、长效)、五方便(生产、运输、服用、携带、贮藏)”的目的，在处 方确定的基础上，对药材的提取纯化工艺进行了全新摸索，综合考虑了药材物理性质、有效 成分特性及生产成本等因素，并结合现代生物药剂学的新技术，采用半仿生提取法，创造性 的对其进行了提取纯化，有效地保留了活性成分。半仿生法是模仿口服药物在胃肠道的转运 过程而提出的一种中药提取新技术，其采用选定pH值的酸性水和碱性水依次连续提取，其目 的是提取含指标成分高的“活性混合物”。该法在提取工艺的设计中坚持“有成分论，不惟成 分论，重在机体药效学反应”的观点，以一种或几种有效成分、总浸出物及不同极性部分或 主要药理作用做指标，综合评判，优选提取工艺的理论原则，这样既能充分发挥混合物成分 的综合作用特点，又有利于用单体成分控制制剂质量，最终得到适合人体吸收的药效成分。 在本发明中，申请人通过大量的实验研究，筛选得到了本发明的技术方案，去掉丹参、三七 等药材中大部分不被人体吸收的杂质并最大限度保留各药味的有效成分，使得本发明所得精 制心可舒片较原工艺的产品载药量提高了接近100％(以生药量计)，同时有效成分含量相对 提高，以该有效成分制成片剂、胶囊、滴丸、颗粒等剂型，能够更好地满足心脑血管疾病患 者的用药需求。
附图说明
图1：血药浓度——时间曲线示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常 规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的制备方法、实验 方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规制备方法、实验方法，检测 方法等。
实施例1制备心可舒片
原料组成为：葛根1200g、山楂1200g、丹参1200g、三七80g、木香80g。
制备方法步骤如下：
(1)木香粉碎，加5倍量的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h；提取 挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取其它四味药材粉碎，与木香药渣合并，加入pH值为2.2的水(向水中加入盐酸 调节pH至2.2)，加水量为药材重量的3倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(3)药渣加pH值为6.8的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小时，滤过，滤 液备用；
(4)药渣再加pH值为8.2的水(向水中加入0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至8.2)， 加水量为药材重量的2倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(5)合并上述步骤(2)(3)(4)滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，制粒， 干燥，加入步骤(1)的木香挥发油，混匀，加入适量辅料，压成1000片(每片0.3克)，即 得。
实验1药效成分含量的检测及比较
取实施例1制得的精制心可舒片，与现有工艺生产的心可舒片(山东沃华医药科技股份 有限公司生产，批号150124，按照专利号为200610081419.X的专利说明书中实施例1的方 法制备得到；下同)，及市售心可舒胶囊(重庆希尔安药业生产，批号20140915)比较，采 用高效液相色谱法测定主要药效成分含量，结果如表1所示。
表1
通过表1中的比较可以看出，利用本发明的方法制备的精制心可舒片，在人参皂苷Re、 人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、丹酚酸B、金丝桃苷、葛根异黄酮、去氢木香内 酯木香烃内酯等药效成分的含量上，明显优于现有技术中的心可舒片、心可舒胶囊，差异极 其显著。
实验2生物利用度的检测及比较
通过人体试验测定精制心可舒片(实施例1制备)和心可舒片在不同时刻血浆中葛根素 的浓度，绘制血药浓度-时间曲线，计算精制心可舒片和心可舒片主要药动学参数及相对生物 利用度。
(一)材料与方法
(1)仪器与药品
岛津高效液相色谱仪(SPD检测器)，HC2518高速离心机(科大创新股份有限公司)，XW-80A 型混合器；精制心可舒片(批号：150124)、心可舒片(批号150124)、去离子水均为本公司 自制，四氢呋喃和乙腈为色谱纯，其他化学试剂均为分析纯。
(2)受试者
健康男性志愿者8名，平均年龄22.5±0.9岁(22-24岁)，67.9±6.5kg，平均身高 171.2±5.2cm，试验前进行体格检查，心、肝肾功能均为正常。试验前两周内未服用其它任 何药物，试验期间禁止服用其它药物及烟、酒等。
(二)试验方案
(1)试验设计
采用单剂量自身对照交叉试验方法，每个受试者均随机先后接受精制心可舒片或心可舒 片2次试验。每次试验间隔为7d。受试前禁食12h，服用药物4h后给予统一标准餐。
(2)给药与采血
8名志愿者随机分成两组，每组4人，经12h禁食后，一组于当日清晨空腹口服精制心 可舒片4片，另一组口服心可舒片4片，用温开水150ml送服，服药4h后统一进标准餐。服 药前及服药后0h、1h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、16h、20h、24h、30h、36h、 48h静脉取血。
(三)结果与讨论
(1)血药浓度测定结果
8名健康受试者口服精制心可舒片或心可舒片后在不同时间的血药浓度数据分别经数学 平均，绘制血药浓度——时间曲线，如图1所示。
(2)主要药动学参数
利用软件求算药动学参数，用梯形法以实测浓度计算药时曲线下面积AUC，相对生物利 用度F＝AUC片剂/AUC胶囊。
计算结果显示：精制心可舒片和心可舒片达峰时间tmax分别为(6.88±0.4)h和 (8.35±0.1)h，P>0.05，无显著性差异。峰值血药浓度cmax分别为(206.25±22.94)ng·L-1 及(152.95±19.11)ng·L-1，P<0.05，有显著性差异。主要药动学参数结果见表2。
表2
(3)相对生物利用度
精制心可舒片和心可舒片的AUC0h～48h分别为(4843.97±155.80)ng·h·L-1与(3285.49 ±128.68)ng·h·L-1，经t检验，P<0.05，有显著差别。精制心可舒片对心可舒片的相 对生物利用度为147.44％。
(4)讨论
本试验结果显示精制心可舒片血药浓度及药-时曲线下面积明显大于心可舒片，且经软件 计算得出，精制心可舒片对心可舒片的相对生物利用度为147.44％，精制心可舒片生物利用 度明显大于心可舒片。表明精制心可舒片更利于机体吸收。
实验3精制心可舒片抗心肌缺血作用研究
(1)药品和试剂：受试品：精制心可舒片(实施例1制备)，批号：150124；阳性对照 1：心可舒片(山东沃华医药科技股份有限公司生产，批号150124)；阳性对照2：心可舒胶 囊(重庆希尔安药业生产，批号20140915)盐酸利多卡因注射液(lidocainehydrochlorate injection)，批号20150911，山东华鲁制药有限公司生产；3％戊巴比妥钠(sodium pentobarbital)，批号141208，北实纵横科技发展有限公司；1％氯化三苯基四氮唑(TTC)， 批号1412B41，SIGMA公司产品；0.2％肝素钠注射液，批号140901，山东鲁抗辰欣药业有限 公司。乳酸脱氢酶(LDH)测试药盒：批号150042，肌酸激酶(CK)测试药盒：批号141003， 均为北京中生北控生物科技股份有限公司生产。
(2)动物：杂种犬，雌雄兼用，体重：12.8±1.7kg，由山东大学实验动物中心提供。
(3)仪器：SC-3型电动呼吸机(上海医疗设备厂)；MFV-3200型电磁流量计(日本光电 产品)；RM-6000四道生理记录仪(日本光电产品)；SteellexLG-R-80D型血液粘度仪(中勤 世帝科学仪器有限公司)。
(4)步骤：动物以戊巴比妥钠30mg/kg静脉注射麻醉，分离左侧颈总动脉，插管连接压 力换能器，记录血压。气管插管进行辅助呼吸。沿左侧第4肋间开胸，缝心包床。分离主动 脉弓，放置电磁流量计探头，测量心输出量。心尖插管，连接压力换能器，测量心室内压。 缝置16导联心外膜电极连接心电放大器，记录心外膜心电图。腹部开口，分离十二指肠备给 药用。各项指标稳定15min后，记录正常值作为实验前数据,采用两步结扎法结扎冠脉左前 降支，并于正式结扎即刻给药，模型组给与等容量的生理盐水。分别在结扎前，结扎即刻， 结扎后5，10，15，30，45，60，90，120，150，180min记录心外膜心电图；于结扎前和结 扎后30，60，120，180min记录动物血流动力学指标；分别于预扎前和结扎后180min时间 点心脏取血，测定全血粘度和血清中LDH及CK含量。试验结束时取心脏，自心尖到结扎点平 均切成五片，1％TTC染色，拍照，将图片输入计算机，以图像分析软件计算梗塞面积与所切 心肌组织面积之比。
(5)结果：如表3～表7所示。由表3～表7可见，与模型组比较，心可舒片给药后15 分钟，心肌缺血的范围开始缩小，给药后30分钟时间点的上述结果与模型组比较有显著性差 异；给药5分钟时，心肌缺血的严重程度与模型组比较已有缓解，于30分钟时间点两组该项 指标有显著性差异，30分钟后缺血程度与模型组比较虽然没有统计学意义，但仍维持较低水 平直到实验结束；缺血3小时后，心肌梗死百分比和血清中LDH、CK水平均明显低于模型组。
精制心可舒片给药后，5分钟开始即见动物心肌缺血的范围缩小，并始终维持在此水平， 其中结扎后10、15、30、45、60、120、180分钟时间点缺血范围与模型组比较有显著性差异； 给药/结扎5分钟时，心肌缺血的严重程度与模型组比较已有所缓解，且始终维持较低水平直 到实验结束，其中30和60分钟时间点两组间有显著性差异；心肌梗死比例以及血清学指标 与模型组比较亦有显著性差异。与精制心可舒组相似，心可舒胶囊组心肌缺血范围与模型组 相近，而心肌缺血严重程度自给药/结扎后5分钟开始有所缓解，虽然与模型组比较没有统计 学意义，但仍维持较低水平直到实验结束；心肌梗死比例与模型组比较虽有所降低，但没有 统计学意义，血清学指标(LDH、CK)与心可舒片组相似。
心可舒片给药后可缓解缺血程度，缩小缺血范围，表现出抗心肌缺血作用，而精制心可 舒片表现出更佳的抗缺血作用，缺血范围上，心可舒片出现一定的波动，而精制心可舒片作 用稳定，始终维持较低水平，缺血程度上，与心可舒片相比，精制心可舒片在缺血初始阶段 表现出更好的保护作用，ST段抬高数值较心可舒片组低。由此可见，在抗心肌缺血方面，精 制心可舒片具有确切的疗效，且优于心可舒片。
(6)结论：精制心可舒片十二指肠给药可明显减轻冠脉结扎造成的犬急性心肌缺血性损 伤，其作用强度优于心可舒片。
表5.精制心可舒片对麻醉犬冠脉结扎3小时后心肌梗塞范围的影响(X±SD)
剂量(mg生药/kg) 动物数 缺血范围(％) 模型 -- 10 3.6±1.3 心可舒片 160 5 1.9±1.1* 精制心可舒片 160 5 1.3±0.5* 心可舒胶囊 160 5 2.0±2.0
与模型组相比，*P<0.05。
表6.精制心可舒片对麻醉犬冠脉结扎后血清中LDH水平的影响(X±SD,U/L)
与模型组相比，*P<0.05。
表7.精制心可舒片对麻醉犬冠脉结扎后血清中CK水平的影响(X±SD,U/L)
与模型组相比，*P<0.05。
实施例2制备心可舒片
原料组成为：葛根1000g，山楂1400g，丹参1000g，三七100g，木香60g。
制备方法步骤如下：
(1)木香粉碎，加2倍量的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h；提取 挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取其它四味药材粉碎，与木香药渣合并，加入pH值为2.0的水，加水量为药材重 量的4倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(3)药渣加pH值为6.8的水，加水量为药材重量的3倍，加热提取3小时，滤过，滤 液备用；
(4)药渣再加pH值为8.2的水，加水量为药材重量的3倍，加热提取3小时，滤过， 滤液备用；
(5)合并上述步骤(2)(3)(4)滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，制粒， 干燥，加入步骤(1)的木香挥发油，混匀，加入适量辅料，压成1000片，即得。
实施例3制备心可舒片
原料组成为：葛根1400g，山楂1000g，丹参1400g，三七60g，木香100g。
制备方法步骤如下：
(1)木香粉碎，加8倍量的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h；提取 挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取其它四味药材粉碎，与木香药渣合并，加入pH值为2.5的水，加水量为药材重 量的2倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(3)药渣加pH值为6.8的水，加水量为药材重量的1倍，加热提取1小时，滤过，滤 液备用；
(4)药渣再加pH值为8.2的水，加水量为药材重量的1倍，加热提取1小时，滤过， 滤液备用；
(5)合并上述步骤(2)(3)(4)滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，制粒， 干燥，加入步骤(1)的木香挥发油，混匀，加入适量辅料，压成1000片，即得。
实施例4制备心可舒片
原料组成为：葛根900g，山楂900g，丹参1600g，三七120g，木香40g。
制备方法步骤如下：
(1)木香粉碎，加5倍量的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h；提取 挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取其它四味药材粉碎，与木香药渣合并，加入pH值为2.2的水，加水量为药材重 量的4倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(3)药渣加pH值为6.8的水，加水量为药材重量的3倍，加热提取2小时，滤过，滤 液备用；
(4)药渣再加pH值为8.2的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小时，滤过， 滤液备用；
(5)合并上述步骤(2)(3)(4)滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，制粒， 干燥，加入步骤(1)的木香挥发油，混匀，加入适量辅料，压成1000片，即得。
实施例5制备心可舒片
原料组成为：葛根1600g，山楂1600g，丹参900g，三七40g，木香120g。
制备方法步骤如下：
(1)木香粉碎，加4倍量的水，加热回流2h蒸馏，收集初蒸馏液后，重蒸馏1h；提取 挥发油；蒸馏液过滤，药渣备用；
(2)取其它四味药材粉碎，与木香药渣合并，加入pH值为2.2的水，加水量为药材重 量的3倍，加热提取2小时，滤过，滤液备用；
(3)药渣加pH值为6.8的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小时，滤过，滤 液备用；
(4)药渣再加pH值为8.2的水，加水量为药材重量的2倍，加热提取2小时，滤过， 滤液备用；
(5)合并上述步骤(2)(3)(4)滤液，浓缩至相对密度为1.10～1.20的清膏，制粒， 干燥，加入步骤(1)的木香挥发油，混匀，加入适量辅料，压成1000片，即得。