一.技术领域
本发明涉及微生物发酵液在植物保护和促进植物生长方面的新用 途，属于微生物学，化学和农业技术领域，涉及微生物学，化学，农 学和生物化学等。
二.技术背景
随着化学工业的发展和农药肥料使用范围的扩大，化学农药的 数量和品种都在不断增加，现在世界化学农药总产量(以有效成分 计)超过300万吨。由于化学农药和化肥的长期大量施用，已带来了 严重的环境污染和病虫抗药性的不断增加。许多国家都投入了大量 资金研究开发能够替代或减少化学农药和化肥的新制剂，以保持农 业生产的可持续发展。
农药化肥造成的环境污染和农药残留在我国更为严重。我国有 1.2亿公顷耕地，化学农药总施用量达131.2万吨，平均每亩 施用931.3克，蔬菜和瓜果更达到6.67公斤/亩。我国的化肥用 量则占了全球用量的1/3，由此带来了严重的河流湖泊以及地下水 富营养化污染。导致我国化肥农药的大量施用一方面由于种植者片 面追求产量，另一方面是由于缺少能够有效减少肥料和农药的使用 但能保证作物产量和品质的方法和产品。
前期的研究发现一些微生物能够分泌调节植物生长发育的植物 激素，如引哚乙酸，脱落酸，赤霉素等，还有一些微生物的代谢产 物可以诱导植物抗性(CN1456059A)，如几丁质，聚氨基葡糖等。 而大量存在于自然界中的脂肪酸也被注意到具有一定的杀细菌和杀 真菌活性，高浓度的壬酸有很强的植物毒性还被用作除草剂。S.D. 萨瓦格等人将脂肪酸施用到植物的病害部位直接杀真菌和细菌取得 了很好的效果(CN1069391A)，他们的研究强调了脂肪酸通过杀真 菌和细菌治疗植物病害的治疗效果，但作出陈述脂肪酸的浓度很低 就没有活性，过高则对植物造成伤害，并且脂肪酸和它的盐或衍生 物对植物病害没有预防活性。在他们给出的实验结果中，脂肪酸和 它的盐或衍生物是直接施用到植物的病害部位才起到治疗作用的， 而且脂肪酸和它的盐或衍生物施用到植物上的最低有效浓度为 0.125％a.i.(1250毫克/升)，浓度低至0.063％时所用的脂肪酸或 它的盐或衍生物就没有控制病菌侵染的效果了。
本发明涉及用微生物发酵液配制的用于调节植物生长发育和防 治植物病害的多效制剂。通过微生物发酵液与无机酸或有机酸和无 机盐或有机盐的组合，取得了在促进植物生长，增加植物产量上的 优秀效果，而且这种组合物还能有效预防多种植物病害。这种多效 制剂中含有的特征成分脂肪酸的存在非常明显，尽管含量低于萨瓦格 等人提出的能够杀菌的最低有效脂肪酸浓度1250毫克/升。多效制 剂实现了促进植物生长，增加植物产量，防治植物病害的多重效 果，这对于减少大量施用化肥和农药在农产品和环境中的污染有非 常积极的意义。
三.发明内容
要解决的技术问题
本发明的目的一是提供一种用微生物发酵液与无机酸或有机酸和 无机盐或有机盐的组合制成的多效制剂配方，这种多效制剂实现了 促进植物生长，增加植物产量，防治植物病害的多重效果，是一个 既能促进植物生长，提高植物产量，对植物病害既有预防效果又有 治疗效果的多效制剂。
本发明的目的二是制成的制剂可以施用于植物的种子，叶，根， 茎或果实，以及植物附着的土壤和培养液等，制剂的施用方法为喷 施，浇灌，浸种和浸果。
技术方案
本技术领域的技术人员知道，微生物在发酵过程产生的代谢产物 中有许多有用的成分，包括植物激素，诱导抗性素等。这些成分常 常需要复杂的程序提取收集，再制成制剂用于生产实践。本发明的 主要方法是将微生物发酵液与无机酸或有机酸和无机盐或有机盐直 接组合制成的一种制剂配方，通过发酵液与无机酸或有机酸和无机 盐或有机盐的协同作用，使制剂获得了促进植物生长，提高植物产 量，对植物病害既有预防效果又有治疗效果的多重功能。
所述的发酵液的主要成分包括但不局限于：从C5到C24的饱和 或不饱和的脂肪酸，脂肪酸包括但不局限于棕榈酸，棕榈烯酸，硬 脂酸，亚油酸，油酸，葵酸，月桂酸，肉豆蔻酸，壬酸，花生四烯 酸等，或脂肪酸的盐或衍生物，包括但不局限于：由钾，钠，铵等离 子或含有胺基的基团等组合成的脂肪酸盐或衍生物。所述无机酸或 有机酸包括但不局限于：硫酸，醋酸，磷酸，硝酸，盐酸，亚磷 酸，亚硫酸，硼酸，甲酸，乙酸，冰乙酸，丁酸，邻苯二甲酸，对 苯二甲酸，丁二酸，腐植酸，水杨酸，对氨基苯甲酸，邻氨基苯甲 酸，苯甲酸等。所述无机盐或有机盐包括但不局限于：氯化钙，氯 化钠，氯化钾，过磷酸钙，三磷酸钠，多磷酸钠，磷酸二氢钾，磷 酸氢二钾，硫酸钠，硫酸钾，碳酸钙，碳酸氢钙，硫酸钙，硝酸 钙，葡萄糖钙等。
本发明的实施步骤为：
1)取葡萄糖和麦芽提取粉各20克，加5克酵母提取粉，5克海藻糖 氨钙，琼脂15克，加水至1升。经灭菌消毒冷却后，倒入培养 皿中制成培养基(GMYAA)。以选自假单孢菌属的有关菌种 Pseudomonas glathei TP06在培养基上划线培养48小时培养获 得菌种。
2)将菌种从培养基转到含GMYAB培养液(葡萄糖和麦芽提取粉各20 克，加5克酵母提取粉，5克海藻糖氨钙，加水至1升)，在温 度30℃，转速125rpm的条件下于摇床上培养72小时。
3)以10％的接种量将培养的菌种转入到发酵罐以与种子罐相同培养 液在30℃通气发酵培养72小时，制得发酵液。
4)取100毫克硝酸钙加入到120毫升10％的盐酸溶液中，充分搅 拌，加入10毫升含20％的三磷酸钠溶液，充分搅拌后加入到上述 培养的1升发酵液中，充分搅拌，即制成含发酵液的多效制剂。
具体实施方式：
实例1.
1)葡萄糖和麦芽提取粉各20克，加5克酵母提取粉，5克海藻 糖氨钙，琼脂15克，加水至1升。经灭菌消毒冷却后，倒入 培养皿中制成培养基(GMYAA)。以选自假单孢菌属的有关菌 种Pseudomonas glathei TP06在培养基上划线培养48小时培 养获得菌种。
2)菌种从培养基转到含GMYAB培养液(葡萄糖和麦芽提取粉各 20克，加5克酵母提取粉，5克海藻糖氨钙，加水至1升)， 在温度30℃，转速125rpm的条件下于摇床上培养72小时。
3)以10％的接种量将培养的菌种转入到发酵罐以与种子罐相同培 养液在30℃通气发酵培养72小时，制得发酵液。
4)取100毫克硝酸钙加入到120毫升10％的盐酸溶液中，充分搅 拌，加入10毫升含20％的三磷酸钠溶液，充分搅拌后加入到 上述培养的1升发酵液中，充分搅拌，即制成含发酵液的多效 制剂。
实例2.多效制剂中脂肪酸的含量以气相色谱-质谱法按下述条件 测定。
1.仪器Agilent Technologies GC/MS 5975i
2.色谱柱：HP-5ms(30m×250μm×0.25μm)5％PhenyMethyl Siloxane
3.色谱柱温度程序：100℃保持1min，然后以30℃/min程序升 温至130℃，再以5℃/min程序升温至250℃，再以10℃/min程 序升温至300℃，保持5min；
4.载气：氦气，纯度≥99.999％，流速为1.2mL/min；
5.进样口温度：290℃；
6.进样量：2μL；
7.进样方式：无分流进样；
8.电子轰击源：70eV；
9.四极杆温度：150℃；
10.离子源温度：230℃；
11.GC-MS接口温度：280℃；
全谱扫描；质量扫描范围m/z：50到550u；溶剂延迟：3min。
测得的结果如表1。
表1多效制剂中部分主要脂肪酸的含量
名称 含量(mg/L) 棕榈酸 3.56 棕榈烯酸 1.11 硬脂酸 0.45 油酸 3.00 亚油酸 3.12
实例3.多效制剂在促进植物生长，增加产量上的效果
取多效制剂100毫升，加水稀释100倍，均匀喷洒到田间新移 栽的茄子叶片上，每隔15天喷洒一次，不使用任何化学杀菌剂和追 肥，相邻地块以喷化学农药和追肥的常规管理作对照。结果如表 2，多效制剂显著促进作物生长，并获得了高达42％的增产效果。
表2多效制剂促进茄子生长和增产效果的比较
注1：同列数字后不同字母表示处理和对照的显著差异。
实例4.在已知连续三年发生桃树黄化病的地块按随机区组设计田间 试验。引起桃树黄化病的原因尚未作出定论，但初步调查认为可能 是由于缺铁引起的生理病害或由一种类病毒侵染引起的病理性黄 化，或是这两种原因的混合作用引起的桃树黄化。将试验分为两 组，一组为桃树出现黄化前即开始处理，另一组在桃树叶片已出现 黄化症状后才开始处理。
处理取多效制剂100毫升，加水稀释100倍，均匀喷洒到桃树 的叶片上，每隔15天喷洒一次，不使用任何化学农药和追肥，以喷 化学农药和追肥的常规管理作对照。处理和对照各5株，重复3 次。调查结果如表3。
表3多效制剂在控制桃树黄化病上的效果
处理 黄化病发生前开始喷 制剂的黄化病发生率 (％) 黄化病发生后开始喷 制剂 多效制剂 0.00 喷一次多效制剂后黄 化叶叶脉转绿，喷3 次后叶片转绿 对照 75.5 全株叶片黄化，严重 的叶片小而且变白
实例5.将发生根腐病危害的新移栽莲花白幼苗地块按随机区组设 计分为处理和对照，处理取多效制剂100毫升，加水稀释100倍， 均匀喷洒到新移栽的莲花白幼苗上，每隔7天喷洒一次。对照喷洒 化学农药根腐灵。每处理30株苗，重复3次。喷3次后调查结果如 表4，对照地块的幼苗几乎全部受病菌侵染死亡，而多效制剂显著 减少了根腐病的危害，对莲花白幼苗根腐病的防治效果达到95％。
表4、多效制剂防治蔬菜根腐病的效果
处理 幼苗发病死亡率％ 多效制剂 12.3a1 对照 95.7b
注1：同列数字后不同字母表示处理和对照的显著差异。
实例6.取多效制剂100毫升，加水稀释100倍，均匀喷洒到种于温 室中受白粉病严重危害的五色梅上，处理和对照各10株，重复3 次。每隔7天喷洒一次。喷清水作对照。喷2次后调查结果如表5， 多效制剂对植物白粉病有非常显著的防治效果。
表5、多效制剂防治植物白粉病的效果
处理 发病率％ 多效制剂 21.3a 对照 98.2b
注1：同列数字后不同字母表示处理和对照的显著差异。
实例7.葡萄幼苗种于温室中，以保存在活体植株上的霜霉病菌接 种后，置于高湿环境中培育24小时。取多效制剂100毫升，加水稀 释100倍，整株均匀喷洒接种后培育了24小时的葡萄苗上，喷清水 作对照。处理和对照各5株，重复3次。7天后调查结果如表6，多 效制剂对葡萄霜霉病有非常显著的防治效果。
表6、多效制剂防治葡萄霜霉病的效果
处理 发病率％ 病情指数 多效制剂 17.2a 0.8a 对照 91.1b 4.3b
注1：同列数字后不同字母表示处理和对照的显著差异。