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1、(10)授权公告号 CN 101361469 B (45)授权公告日 2012.05.23 CN 101361469 B *CN101361469B* (21)申请号 200810013427.X (22)申请日 2008.09.25 A01K 61/00(2006.01) (73)专利权人 大连水产学院 地址 116023 辽宁省大连市沙河口区黑石礁 街 52 号 (72)发明人 闫喜武 张跃环 霍忠明 杨凤 张国范 王琦 金晶宇 (74)专利代理机构 大连东方专利代理有限责任 公司 21212 代理人 赵淑梅 CN 101103708 A,2008.01.16, 吕林兰等 . 马氏珠母贝 。
2、3 个野生种群及种群 间杂交后代遗传多样性的 ISSR 分析 .水生生物 学报 .2008, 第 32 卷 ( 第 1 期 ),26-32. 魏贻尧等 . 合浦珠母贝、 长耳珠母贝和大珠 母贝种间人工杂交的研究 . 人工杂交和杂 交后代的观察 .热带海洋 .1983, 第 2 卷 ( 第 4 期 ),309-315. 王爱民等 . 马氏珠母贝不同地理种群内自繁 和种群间杂交子一代主要性状的比较 .水产学 报 .2003, 第 27 卷 ( 第 3 期 ),200-206. (54) 发明名称 常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法 (57) 摘要 常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法， 采集4 个不同地理群。
3、体中的滩涂贝类亲本 ； 对不同地理 群体贝类亲本进行生态促熟 ： 开展两两地理群体 间的二元正反群体杂交 ； 三段法养成二元正反杂 交组合的子一代 ； 继而进行二元杂交子一代的聚 合杂交， 得到聚合杂交子一代 ； 在此基础上， 重复 以上步骤， 直到聚合子代累加了所有地理群体的 优良基因为止。本发明克服了不同地理群体间的 地理隔离、 性成熟和繁殖的生理差异。 与现有养殖 的滩涂贝类品种相比， 聚合了 4 个地理群体的 优良基因， 其杂合度大大提高， 使得聚合杂交个体 表现出生长快、 抗逆性强的特点。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 徐秋香 权利要求书 1 页 说明书 4 页 。
4、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/1 页 2 1. 一种常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法， 包括以下步骤 ： 第一步、 采集 4 个不同地理群体中的贝类作为亲本 ； 第二步、 对不同地理群体的贝类亲本进行生态促熟 ； 第三步、 两两群体的二元正反杂交 ： 待亲本成熟后， 对亲本进行性别鉴定， 鉴定后 ； 通 过阴干、 流水刺激， 亲本可以同步产卵、 排精 ； 然后按照两两群体组合进行杂交， 得到若干个 正反交组合的子一代 ； 第四步、 三段法养成二元正反杂交子一代 ： 按照三段法进行正反交子一代的养成， 直至 杂交子一代性腺同步成熟 。
5、； 第五步、 二元杂交子一代的聚合杂交 ： 同第三、 四步， 开展二元杂交子一代的聚合杂交， 得到聚合杂交子一代 ； 若贝类的地理群体数量 4 个， 需要重复以上步骤， 进行二次或多次 聚合杂交， 直到聚合子代累加了所有地理群体的优良基因为止 ； 所述的对不同地理群体的贝类亲本进行生态促熟的步骤具体为将采集的亲本放置于 生态虾池或自然海区中， 采用底播养殖的方法进行生态促熟， 直至不同地理群体贝类亲本 性腺同步成熟 ； 所述的三段法养成二元正反杂交子一代具体为将二元正反杂交子一代采集的亲本放 置于生态虾池或自然海区中， 采用底播养殖的方法进行生态促熟 ； 三段法， 即在室内进行贝类苗种繁育， 。
6、繁育得到的稚贝在虾池内或海上进行中间育成， 中间育成得到的幼贝在虾池或海上进行养成。 2. 如权利要求 1 所述的常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法， 其特征在于 ： 所述亲本性 别鉴定的步骤为采用直径为 0.6mm 的电钻， 根据要鉴定贝的种类， 确定贝类亲本的性腺位 置， 在贝类亲本的壳上钻孔直至深入至性腺部位， 将微型注射器消毒， 用消毒过的微型注射 器取出精或卵， 在显微镜下采用水滴法， 加入少许海水， 进行性别鉴定 ； 卵在海水中发散， 在 显微镜下为圆形或梨形 ； 精子在海水中为烟雾状， 显微镜下为蝌蚪状。 3. 如权利要求 1 所述的常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法， 其特征在于 ： 。
7、所述采集不 同地理群体贝类作为亲本的标准为 ： (1)、 2 龄健康无损的个体作为亲本 ； (2)、 要求其亲本 有足够大的地理差异和遗传差异。 权 利 要 求 书 CN 101361469 B 2 1/4 页 3 常见滩涂贝类聚合杂交的育种方法 技术领域 0001 本发明涉及一种贝类遗传育种技术， 具体的说是一种常见滩涂贝类聚合杂交的育 种方法。 背景技术 0002 常见滩涂贝类大多为分布较广的养殖品种， 具有养殖周期短、 投资少、 收益大的特 点。目前， 滩涂贝类在养殖中存在种质资源基础状况不清、 品质下降、 抗逆性差、 个体小型 化、 单位产量降低等不良现象。而且养殖对象均为野生型， 几。
8、乎没有人工培育的高产、 抗逆 优良品种。 对滩涂贝类进行遗传改良， 培育出生长速度快， 抗逆性强的新品种是解决这些问 题的重要途径 ( 闫喜武， 2005)。 0003 选择育种是新品种培育的有效方法， 杂交则是培育新品种的重要方法， 已经在动 植物的育种中取得广泛的成功。 聚合杂交是指通过一系列杂交将若干个亲本品种的优良基 因聚合在一起， 分为最大重组原理的组合杂交和超亲重组原理的聚合杂交。 目前， 聚合杂交 主要应用在植物育种上。 0004 申请公开号为 CN101103708 的中国专利公开了虾夷扇贝三元杂交的育种方法， 此 发明采用的 3 个地理群体的虾夷扇贝进行杂交， 得到了三元杂交。
9、个体。然而， 采用该方法进 行贝类育种的子代具有杂合度较低， 使用的杂交周期较长的缺陷。 发明内容 0005 本发明旨在通过不同地理群体滩涂贝类最大重组原理的聚合杂交， 在较短的杂交 周期内得到具有高度杂合度的杂交个体， 淘汰致死基因， 使得优良基因得到表达。 最终达到 解决当前滩涂贝类种质抗逆性差， 生长速度慢等问题。 0006 本发明的技术方案是 ： 采集 4 个不同地理群体中的滩涂贝类亲本 ； 对不同地理 群体贝类亲本进行生态促熟 ： 开展两两地理群体间的二元正反群体杂交 ； 三段法养成二元 正反杂交组合的子一代 ； 二元杂交子一代的聚合杂交， 得到聚合杂交子一代 ； 在此基础上， 重复。
10、以上步骤， 直到聚合子代累加了所有地理群体的优良基因为止。 0007 本发明的工艺过程包括以下步骤 ： 0008 第一步、 采集 4 个不同地理群体中的贝类作为亲本 ； 0009 第二步、 对不同地理群体的贝类亲本进行生态促熟 ； 0010 第三步、 两两群体的二元正反杂交 ： 待亲本成熟后， 对亲本进行性别鉴定， 鉴别后 ； 通过阴干、 流水刺激， 亲本可以同步产卵、 排精 ； 然后按照两两群体组合进行杂交， 得到若干 个正反交组合的子一代 ； 0011 第四步、 三段法养成二元正反杂交子一代 ： 按照三段法进行正反交子一代的养成， 直至杂交子一代性腺同步成熟 ； 0012 第五步、 二元杂。
11、交子一代的聚合杂交 ： 同第三、 四步， 开展二元杂交子一代的聚合 杂交， 得到聚合杂交子一代 ； 若贝类的地理群体数量 4 个， 需要重复以上步骤， 进行二次或 说 明 书 CN 101361469 B 3 2/4 页 4 多次聚合杂交， 直到聚合子代累加了所有地理群体的优良基因为止。 0013 所述的对不同地理群贝类亲本进行生态促熟的步骤可以采用以下方法 ： 将采集的 亲本放置于生态虾池或自然海区中， 采用底播养殖的方法进行生态促熟， 直至不同地理群 贝类亲本性腺同步成熟。 0014 所述亲本鉴定按以下方式进行， 可以得到更高的鉴别率 ： 所述亲本鉴定的步骤为 采用直径为 0.6mm 的电。
12、钻， 根据要鉴定贝的种类， 确定贝类亲本的性腺位置， 在贝类亲本的 壳上钻孔直至深入至性腺部位， 将微型注射器消毒， 用消毒过的微型注射器取出精或卵， 在 显微镜下采用水滴法， 加入少许海水， 进行性别鉴定 ； 卵在海水中发散， 在显微镜下为圆形 或梨形 ； 精子在海水中为烟雾状， 显微镜下为蝌蚪状。 0015 所述不同地理群体贝类以下标准采集时， 育种效果更佳 ： (1)2 龄健康无损的个体 作为亲本 ； (2) 要求其亲本有足够大的地理差异和遗传差异。 0016 所述的三段法养成二元正反杂交子一代具体为将二元正反杂交子一代采集的亲 本放置于生态虾池或自然海区中， 采用底播养殖的方法进行生态。
13、促熟。 0017 三段法， 即在室内进行贝类苗种繁育， 繁育得到的稚贝在虾池内(海上)进行中间 育成， 中间育成得到的幼贝在虾池 ( 海上 ) 进行养成。 0018 本发明对亲本采用生态促熟法， 克服了不同地理群体间的地理隔离、 性成熟和繁 殖的生理差异， 促使性腺同步发育精卵同步排放。 与现有养殖的滩涂贝类品种相比， 聚合了 4 个地理群体的优良基因， 其杂合度大大提高， 并最大程度上缩短了贝类的杂交周期。使 得聚合杂交个体表现出生长快、 抗逆性强的特点。 本方法采用的是群体杂交方式， 避免了单 体杂交基因型相对单一的弊端， 丰富了杂交个体的基因组成。 由于是多次正反杂交， 所以能 够更加充。
14、分的利用亲本效应， 从中得到的最有效的杂交组合 ； 且杂交个体的生长、 存活远大 于亲本， 表现出超亲本效应， 由于聚合杂交个体累加了各地理群体贝类的优良基因， 其生长 速度提高 30-60， 存活率提高 80-120。这为贝类杂交新品种的开发奠定了坚实的基础。 具体实施方式 0019 下面以菲律宾蛤仔为实施例， 进一步说明本发明， 但不构成对本发明的限制。 0020 实施例 1 0021 第一步、 采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本 ： 于2005年， 选择2龄健康无损的个体 作为亲本， 其亲本分别来自于中国南方莆田、 中国北方大连、 韩国釜山、 日本东京。 0022 第二步、 不同地理群体蛤仔。
15、亲本的生态促熟 ： 将采集的亲本放置于庄河海洋村的 虾池中进行生态促熟， 经过 6-12 个月的底播养殖， 于 2006 年秋季性腺同步成熟。 0023 第三步、 中国南北方、 韩日群体的二元正反杂交 ： 采用直径为 0.6mm 的电钻进行亲 本性别鉴定， 鉴别后 ； 通过阴干 8h、 流水 1h 的刺激， 亲本可以同步产卵排精 ； 然后按照中国 南方中国北方中国北方中国南方韩国日本日本韩国 开展群 体间的正反杂交， 每个杂交组合用亲本 200 个， 得到中国南北方正反交子一代和韩日正反 交子一代。 0024 第四步、 三段法养成二元正反杂交子一代 ： 按照三段法在生态虾池中进行北方正 反交子。
16、一代和韩日正反交子一代的养成， 养成周期 1 年。于第 2007 年的秋季， 杂交子一 代性腺同步成熟。 说 明 书 CN 101361469 B 4 3/4 页 5 0025 第五步、 二元杂交子一代的聚合杂交 ： 同第三步， 开展中国南北方 韩日中 国南北方日韩中国北南方韩日中国北南方日韩 群体间的杂交， 得到 中国南北方日韩、 中国南北方日韩、 中国北南方韩日、 中国北南方日韩的聚合杂交的菲律宾 蛤仔。 0026 通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔， 其生长速度提高了 40-60、 存活率提高了 90-120。 0027 实施例 2 0028 第一步、 采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本 ： 于2。
17、005年， 选择2龄健康无损的个体 作为亲本， 其亲本分别来自于中国南方莆田、 中国北方大连、 韩国釜山、 日本东京。 0029 第二步、 不同地理群体蛤仔亲本的生态促熟 ： 将采集的亲本放置于庄河海洋村的 滩涂中进行生态促熟， 经过 6-12 个月的底播养殖， 于 2006 年秋季性腺同步成熟。 0030 第三步、 中国南北方、 韩日群体的二元正反杂交 ： 采用直径为 0.6mm 的电钻进行亲 本性别鉴定， 鉴别后 ； 通过阴干 8h、 流水 1h 的刺激， 亲本可以同步产卵排精 ； 然后按照中国 南方中国北方中国北方中国南方韩国日本日本韩国 开展群 体间的正反杂交， 每个杂交组合用亲本 2。
18、40 个， 得到中国南北方正反交子一代和韩日正反 交子一代。 0031 第四步、 三段法养成二元正反杂交子一代 ： 按照三段法在生态虾池中进行北方正 反交子一代和韩日正反交子一代的养成， 养成周期 1 年。于第 2007 年的秋季， 杂交子一 代性腺同步成熟。 0032 第五步、 二元杂交子一代的聚合杂交 ： 同第三步， 开展中国南北方 韩日中 国南北方日韩中国北南方韩日中国北南方日韩 群体间的杂交， 得到 中国南北方日韩、 中国南北方日韩、 中国北南方韩日、 中国北南方日韩的聚合杂交的菲律宾 蛤仔。 0033 通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔， 其生长速度提高了 30-40、 存活率提高了 80。
19、-90。 0034 实施例 3 0035 第一步、 采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本 ： 于2005年， 选择2龄健康无损的个体 作为亲本， 其亲本分别来自于中国南方莆田、 中国北方大连、 韩国釜山、 日本东京。 0036 第二步、 不同地理群体蛤仔亲本的生态促熟 ： 将采集的亲本放置于庄河海洋村的 虾池中进行生态促熟， 经过 6-12 个月的底播养殖， 于 2006 年秋季性腺同步成熟。 0037 第三步、 中国南北方、 韩日群体的二元正反杂交 ： 通过阴干 8h、 流水 1h 的刺激， 亲 本可以同步产卵排精 ； 在产卵排精的过程中， 可以分辨出雌雄， 将雌雄个体分别抓取出来 ； 然后按照中。
20、国南方中国北方中国北方中国南方韩国日本日本 韩国 开展群体间的正反杂交， 每个杂交组合用亲本 60 个， 得到中国南北方正反交子一代 和韩日正反交子一代。 0038 第四步、 三段法养成二元正反杂交子一代 ： 按照三段法在生态虾池中进行北方正 反交子一代和韩日正反交子一代的养成， 养成周期 1 年。于第 2007 年的秋季， 杂交子一 代性腺同步成熟。 0039 第五步、 二元杂交子一代的聚合杂交 ： 同第三步， 开展中国南北方 韩日 ， 中 说 明 书 CN 101361469 B 5 4/4 页 6 国南北方日韩 ， 中国北南方韩日 ， 中国北南方日韩 群体间的杂交， 得到 中国南北方日韩。
21、、 中国南北方日韩、 中国北南方韩日、 中国北南方日韩的聚合杂交的菲律宾 蛤仔。 0040 通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔， 其生长速度提高了 30-50、 存活率提高了 80-100。 0041 实施例 4 0042 第一步、 采集不同地理群体菲律宾蛤仔亲本 ： 于2005年， 选择2龄健康无损的个体 作为亲本， 其亲本分别来自于中国南方莆田、 中国北方大连、 韩国釜山、 日本东京。 0043 第二步、 不同地理群体蛤仔亲本的生态促熟 ： 将采集的亲本放置于庄河海洋村的 虾池中进行生态促熟， 经过 6-12 个月的底播养殖， 于 2006 年秋季性腺同步成熟。 0044 第三步、 中国南北方、。
22、 韩日群体的二元正反杂交 ： 采用直径为 0.6mm 的电钻进行亲 本性别鉴定， 鉴别后 ； 通过阴干 8h、 流水 1h 的刺激， 亲本可以同步产卵排精 ； 然后按照中国 南方 中国北方中国北方中国南方韩国日本日本韩国 开展群 体间的正反杂交， 每个杂交组合用亲本 300 个， 得到中国南北方正反交子一代和韩日正反 交子一代。 0045 第四步、 三段法养成二元正反杂交子一代 ： 按照三段法在庄河海洋村贝类养殖场 的滩涂中进行北方正反交子一代和韩日正反交子一代的养成， 养成周期 1 年。于第 2007 年的秋季， 杂交子一代性腺同步成熟。 0046 第五步、 二元杂交子一代的聚合杂交 ： 同第三步， 开展中国南北方 韩日中 国南北方 日韩中国北南方 韩日中国北南方 日韩 群体间的杂交， 得 到中国南北方日韩、 中国南北方日韩、 中国北南方韩日、 中国北南方日韩的聚合杂交的菲律 宾蛤仔。 0047 通过聚合杂交得到的菲律宾蛤仔， 其生长速度提高了 40-50、 存活率提高了 80-110。 说 明 书 CN 101361469 B 6 。