含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201410675649.3

申请日:

20141121

公开号:

CN104491836B

公开日:

20160817

当前法律状态:

有效性:

有效

法律详情:

IPC分类号:

A61K38/02,A23L33/00,A61P25/28,A61K36/8968,A61K36/8945,A61K36/236,A61K36/076,A61K31/715

主分类号:

A61K38/02,A23L33/00,A61P25/28,A61K36/8968,A61K36/8945,A61K36/236,A61K36/076,A61K31/715

申请人:

辽宁大学

发明人:

刘剑利,于慧,曹向宇,杨思敏,孙宇航,杨威,刘晓

地址:

110000 辽宁省沈阳市沈北新区道义南大街58号

优先权:

CN201410675649A

专利代理机构:

沈阳杰克知识产权代理有限公司

代理人:

金春华

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内容摘要

本发明涉及一种含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品。按重量百分比组成如下:稠李花色苷30%‑50%,稠李多糖10%‑30%,高粱米多肽5%‑15%,板栗多肽5%‑15%,山药提取物5%‑10%、茯苓提取物5%‑10%、川芎提取物5%‑10%、麦门冬提取物5%‑10%。对其所具有的预防老年痴呆功能进行体外实验和动物实验研究,发现该保健品具有预防老年痴呆的活性与功能,可以代替化学合成药物,避免过多的化学合成药物毒副作用,使得稠李花色苷组合物具有更广阔的发展前景,并且成为可以应用于保健品中的新兴成分。

权利要求书

1.含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品,其特征在于由以下原料按重量百分比组成:稠李花色苷30%-50%,稠李多糖10%-30%,高粱米多肽5%-15%,板栗多肽5%-15%,山药提取物5%-10%,茯苓提取物5%-10%,川芎提取物5%-10%,麦门冬提取物5%-10%。 2.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品,其特征在于:稠李花色苷的制备方法如下:1)复合酶酶解提取:料液比按质量比1:10-1:50,将稠李冻干粉溶于水,复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的1.0%-5.0%,进行热水浸提,控制温度为30-70℃,pH范围值3.0-6.0,酶解时间为30min-60min,离心,过滤,提取液备用,沉淀物继续进行微波提取;所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5~2的混合;2)微波辅助提取:料液比按质量比1:10-1:15,将沉淀物溶于水,微波功率300W-500W,微波时间为20min-60min,离心,过滤,提取液备用,沉淀物继续进行超声浸提;3)超声浸提:料液比按质量比1:10-1:15,将沉淀物溶于乙醇中,超声波功率为100W-500W,超声时间为10min-50min,pH值为2.0-6.0,抽滤,提取液备用;4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液,提取液旋转蒸发浓缩,冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉;5)大孔树脂静态纯化:粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液,静态吸附条件是:温度20℃,树脂的添加量为0.16g/ml;解析条件是:解吸剂70%乙醇,pH值为3,温度为60℃,得稠李花色苷干粉。 3.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品,其特征在于:所述的稠李多糖的制备方法如下:1)超声浸提:料液比按质量比1:10-1:50,将稠李冻干粉溶于水中,控制温度为50-90℃,pH值5.0-9.0,超声波功率为100W-500W,超声时间为10min-50min,离心,取提取液继续进行微波提取;2)微波辅助提取:取提取液,微波功率300W-500W,微波时间为20min-60min,离心,取提取液继续进行复合酶酶解;3)复合酶酶解提取:取提取液,复合酶加入量为提取液重量的1.0%-5.0%,控制温度为30-60℃,pH3.0-6.0,酶解时间为30min-60min;抽滤,滤液旋转蒸发浓缩,加入4倍体积的95%乙醇沉淀多糖,离心,去除上清液,冷冻干燥;所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5~2的混合。 4.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品,其特征在于:所述的山药提取物的制备方法:在室温条件下,称量粉碎成200目的山药固体粉末;按质量比1:10比例称取山药固体粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得山药提取物。 5.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品,其特征在于:所述的茯苓提取物的制备方法:在室温条件下,称量粉碎成200目的茯苓固体粉末;按质量比1:10比例称取茯苓固体粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得茯苓提取物。 6.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品,其特征在于:所述的川芎提取物的制备方法:在室温条件下,称量粉碎成200目的川芎固体粉末;按质量比1:10比例称取川芎固体粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得川芎提取物。 7.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品,其特征在于:所述的麦门冬提取物的制备方法:在室温条件下,称量粉碎成200目的麦门冬固体粉末;按质量比1:10比例称取麦门冬固体粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得麦门冬提取物。

说明书

技术领域

本发明属于保健品领域,具体的涉及一种具有预防老年痴呆功能的含有稠李花色苷的保健品。

背景技术

老年痴呆症,又称阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD),是以认知功能缺失为核心的综合征,是一种神经退行性疾病,主要表现为渐进性记忆力丧失和认知障碍。老年痴呆的发病集中于60岁以上的老年人,而中国作为一个即将进入老龄化的国家,其老年痴呆患者的数目有持续增长的趋势,又由于该病病程长,确诊检验复杂,因此未来一段时间内,老年性痴呆病的诊断和治疗将是一大挑战。

目前,研究发现,老年痴呆的病因有很多,归根结底与大脑海马区的神经元损伤有关,患者大脑中与记忆和认知有关的区域产生神经性病变斑块,斑块中主要成分为多肽,β-淀粉样肽(Aβ)聚合而成的淀粉样物质和受累于其中的营养不良或变性的神经树突和轴突,以及一些炎症反应性神经胶质细胞。由于其发病因素涉及很多方面,譬如:乙酰胆碱前体物,但是存在临床试验效果不佳,或者毒副作用较大等问题。因此,老年痴呆症重在预防,及时合理补充脑细胞生理所需要的营养物质,能增强大脑的生理功能,从而预防老年痴呆的发生。

发明内容

本发明的目的是以东北地区观赏性植物稠李属稠李出发,制备稠李花色苷、稠李多糖,和其他活性物质混合,提供一种预防老年痴呆的天然保健品。

以稠李花色苷、稠李多糖、高粱米多肽、板栗多肽、茯苓提取物、山药提取物、川芎提取物、麦门冬提取物混合使用作为一种预防老年痴呆的天然保健品,按重量百分比各组成如下:

稠李花色苷 30%-50%,稠李多糖 10%-30%,高粱米多肽 5%-15%,

板栗多肽 5%-15%,山药提取物 5%-10%,茯苓提取物 5%-10%,

川芎提取物 5%-10%,麦门冬提取物 5%-10%。

本发明涉及的稠李花色苷是由稠李提取的,采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李花色苷。稠李多糖也是由稠李提取的,采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖。高粱米多肽、板栗多肽是酶解高粱米蛋白、板栗蛋白制备的。

采用复合酶酶解-微波-超声波分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用AB-8大孔树脂进行静态纯化的步骤如下:

1)复合酶酶解提取:将稠李果实去柄,破碎,去核,放入零下80℃冰箱冷冻过夜,在冷冻干燥机中干燥,待干燥之后取出,研磨成粉。料液比按质量比1:10-1:50,将稠李冻干粉溶于水,复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的1.0%-5.0%,进行热水浸提,控制温度为30-70℃,pH范围值3.0-6.0酶解时间为30min-60min,离心,过滤,提取液备用,沉淀物继续进行微波提取;所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5~2的混合;

2)微波辅助提取:料液比按质量比1:10-1:15,将酶解后的沉淀物溶于水,微波功率300W-500W,微波时间为20min-60min,离心,过滤,提取液备用,沉淀物继续进行超声浸提;

3)超声浸提:料液比按质量比1:10-1:15,将微波后的沉淀物溶于乙醇中,超声波功率为100W-500W,超声时间为10min-50min,pH值为2.0-6.0,抽滤,提取液备用;

4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液,提取液旋转蒸发浓缩,冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉;

5)大孔树脂静态纯化:粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液,静态吸附条件是:温度20℃,树脂的添加量为0.16g/ml;解析条件是:解吸剂70%乙醇,pH值为3.0,温度为60℃,得稠李花色苷干粉。

采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过Sephadex G-200层析纯化的步骤如下:

1)超声浸提:将稠李果实去柄,破碎,去核,放入零下80℃冰箱冷冻过夜,在冷冻干燥机中干燥,待干燥之后取出,研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水中,料液比按质量比1:10-1:50,控制温度为50-90℃,pH值5.0-9.0,超声波功率为100W-500W,超声时间为10min-50min,离心,收集提取液继续进行微波提取;

2)微波辅助提取:取提取液,微波功率300W-500W,微波时间为20min-60min,离心,收 集提取液继续进行复合酶酶解;

3)复合酶酶解提取:取提取液,加入提取液重量1.0%-5.0%的复合酶,控制温度为30-60℃,pH 3.0-6.0,酶解时间为30min-60min,离心,抽滤,取滤液,滤液旋转蒸发浓缩,加入4倍体积的95%乙醇沉淀多糖,3000r/min离心后去除上清液,沉淀冷冻干燥,得稠李粗多糖。所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.5~2的混合;

4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解,Sephadex G-200层析进行分离纯化,用蒸馏水洗脱,流速为1ml/min,每2ml收集一试管,用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖,收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h,冷冻干燥,进行后续实验。用DEAE-32进一步纯化,磷酸盐缓冲液-水作为流动相,梯度模式进行洗脱,流速为0.8ml/min,每2ml收集一试管,用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖,收集含量最多的多糖组分。

本发明具开创性的技术是将稠李花色苷、稠李多糖、高粱米多肽、板栗多肽、茯苓提取物、山药提取物、川芎提取物和麦门冬提取物作为一个整体的组合物预防老年痴呆,根据现代营养学模型合理搭配、科学组合应用,形成具有显著预防老年痴呆混合保健品。

附图说明

图1实施例1的组合物对H2O2诱导N2A细胞损伤保护的荧光显微照片;

其中,A:正常组;B:模型组;C:组合物处理1组;D:组合物处理2组。

图2实施例1的组合物对H2O2诱导N2A细胞损伤保护;

其中,A:正常组;B:模型组;C:组合物处理1组;D:组合物处理2组。

图3实施例1的组合物对H2O2损伤的N2A细胞内活性氧的影响的荧光显微照片;

其中,A:正常神经细胞;B:0.5mmol/l H2O2处理神经细胞;C:0.05mg/ml组合物处理神经细胞。

具体实施方式

实施例1 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品

(一)稠李花色苷的制备

本实施例采用超声波-微波-混合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用AB-8大孔树脂进行静态纯化,步骤如下:

1)复合酶酶解提取:将稠李果实去柄,破碎,去核,放入零下80℃冰箱冷冻过夜,在冷 冻干燥机中干燥,待干燥之后取出,研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水,料液比按质量比1:30,所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合,复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的3.0%,进行热水浸提,控制温度为50℃,pH值为5.0酶解时间为50min,6000r/min进行离心10min,过滤,提取液备用,沉淀物继续进行微波提取;

2)微波辅助提取:料液比按质量比1:10,将酶解后的沉淀物溶于水中,微波功率400W,微波时间为40min,6000r/min进行离心10min,过滤,提取液备用,沉淀物继续进行超声浸提;

3)超声浸提:料液比按质量比1:10,将微波后的沉淀物溶于60%乙醇中,超声波功率为400W,超声时间为30min,pH值为4.0,抽滤,提取液备用;

4)合并复合酶酶解的提取液、微波辅助的提取液和超声浸提的提取液,提取液旋转蒸发浓缩,冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉;

5)大孔树脂静态纯化:粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液,静态吸附条件是:温度20℃,树脂的添加量为0.16g/ml;解析条件是:解吸剂70%乙醇,pH值为3.0,温度为60℃,得稠李花色苷干粉。

(二)稠李多糖的制备

采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过Sephadex G-200层析纯化的步骤如下:

1)超声浸提:将稠李果实去柄,破碎,去核,放入零下80℃冰箱冷冻过夜,在冷冻干燥机中干燥,待干燥之后取出,研磨成粉。将稠李冻干粉溶于水中,料液比按质量比1:30,控制温度为60℃,pH值7.0,超声波功率为400W,超声时间为40min,3000r/min进行离心15min,收集提取液继续进行微波提取;

2)微波辅助提取:取超声后的提取液,微波功率400W,微波时间为40min,3000r/min进行离心15min,收集提取液继续进行复合酶酶解;

3)复合酶酶解提取:取微波后的提取液,加入其总重量4.0%的复合酶,控制温度为50℃,pH 4.0,酶解时间为40min,3000r/min进行离心15min,抽滤,滤液旋转蒸发浓缩,加入4倍体积的95%乙醇沉淀多糖,3000r/min离心后去除上清液,冷冻干燥,得稠李粗多糖。所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合;

4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解,Sephadex G-200层析进行分离纯 化,用蒸馏水洗脱,流速为1ml/min,每2ml收集一试管,用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖,收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h,冷冻干燥,进行后续实验。用DEAE-32进一步纯化,磷酸盐缓冲液-水作为流动相,梯度模式进行洗脱,流速为0.8ml/min,每2ml收集一试管,用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖,收集含量最多的多糖组分。

(三)高粱米多肽的制备

木瓜蛋白酶提取高粱米多肽步骤如下:

1)将高粱米粉碎,按料液比为1:15,在pH为10.0的氢氧化钠溶液中浸泡3h,提取温度为50℃,5000r/min离心20min,取上清液,用90%硫酸铵进行沉淀,再次离心,分离得到沉淀,进行冷冻干燥得到高粱米蛋白;

2)将高粱米蛋白配成8%的水溶液,pH调节为6.5,酶活添加量为6000u/g料,温度为60℃,提取时间为3h,然后沸水浴10min灭酶,3500r/min离心15min,取上清,纯净水透析、采用截留分子量为l0kDa超滤板超滤后进行冷冻干燥,得到高粱米多肽粉末。

(四)板栗多肽的制备

1)板栗去皮干燥后,用粉碎机粉碎,按料液比为1:10,加入pH 11的NaOH,提取温度为50℃,时间为3h,离心收集沉淀,冷冻干燥制备板栗蛋白。

2)复合酶分步水解:首先,以复合风味蛋白酶水解,然后再以碱性蛋白酶水解,制备板栗多肽,复合风味蛋白酶酶解条件为:pH 6.0,酶活添加量为6000u/g料,时间1h,温度55℃,碱性蛋白酶酶解条件为:pH 8.0,酶活添加量为6000u/g料,时间3h,温度50℃;将水解液加热到100℃,保持10分钟杀灭酶的活力;采用截留分子量为l0kDa超滤板超滤得到的酶解液,收集分子量为10kDa以下的酶解液;将酶解液用低温冷冻干燥机制得板栗多肽粉末。

(五)山药提取物的制备

在室温条件下,称量粉碎成200目的山药固体粉末;按质量比1:10比例称取山药固体粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得山药提取物。

(六)茯苓提取物的制备

在室温条件下,称量粉碎成200目的茯苓固体粉末;按质量比1:10比例称取茯苓固体 粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得茯苓提取物。

(七)川芎提取物的制备

在室温条件下,称量粉碎成200目的川芎固体粉末;按质量比1:10比例称取川芎固体粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得川芎提取物。

(八)麦门冬提取物的制备

在室温条件下,称量粉碎成200目的麦门冬固体粉末;按质量比1:10比例称取麦门冬固体粉末和去离子水,超声破碎30min,室温浸提3h,滤纸初过滤、超滤膜超滤,超滤液无菌冷冻干燥,得麦冬门提取物。

(九)含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品组合物

由以下原料按重量百分比组成:

(十)细胞试验

1、组合物对H2O2诱导N2A细胞损伤保护

用含10%胎牛血清得培养液配成单个N2A细胞悬液,以每孔104个细胞接种到6孔板,每孔体积2mL,接着在37℃,5%CO2培养箱中进行细胞培养24h,然后对细胞进行处理,设置3个实验组,分别为正常对照组、模型组和组合物处理组。其中模型组H2O2浓度为0.5mmol/l,组合物处理1组为0.5mmol/l H2O2和0.025mg/ml的组合物,组合物处理2组为0.5mmol/l H2O2和0.05mg/ml的组合物,继续培养1h,显微镜下分别观察不同组细胞的状态。

通过0.5mmol/L的H2O2处理能够显著降低N2A细胞的活力。加入不同剂量的组合物之后,组合物可以减少H2O2对N2A细胞的损伤,对N2A细胞有保护作用。其结果如图1和图2所示。

从图1、图2可以看出,正常细胞折光性强,细胞规则,贴壁状态良好;H2O2组细胞变圆,折光性变弱,贴壁不良,而组合物处理组细胞形态较H2O2组有所改善。H2O2能够损伤细胞膜的完整性,降低细胞的活性,对细胞的损伤很大,当H2O2浓度为0.5mmol/l时,有活力的细胞数目只达到原来的52.7%,但是,加入0.025mg/ml的组合物后,有活力的细 胞数目为原来的71.4%,当加入0.05mg/ml的组合物时,有活力的细胞数目为91.8%。由此,可以得出:不同剂量的组合物对H2O2诱导的N2A细胞损伤具有很强的保护作用,能够显著提高细胞的活性,且具有较好的剂量-效应关系。

2、组合物对H2O2损伤的N2A细胞内活性氧的影响

将N2A细胞进行种板,加入0.5mg/ml的组合物和H2O2刺激细胞,去除细胞培养液,加入PBS淋洗后,加入终浓度为20μmmol/L的稀释好的DCFH-DA,包上锡纸,37℃培养箱内温育30min,在用PBS进行淋洗,加入甲醇0.5ml,-20℃固定30min,再次淋洗后,加入丙酮(4℃预冷)0.5ml固定6min,然后每5min一次用PBS淋洗3次,最后进行封片观察,结果如图3所示。

通过荧光显微照片图3可知,A中正常组细胞荧光较为暗淡,B中H2O2处理N2A细胞荧光增强,说明细胞内活性氧水平较高。而当加入组合物后,C中的荧光强度明显降低,与正常组细胞荧光强度相近的程度,细胞内活性氧水平降低,说明组合物具有强烈的降低由H2O2导致的细胞内ROS的含量的作用。

(十一)动物实验

组合物对小鼠认知能力的干预。动物选取:品种:ICR大鼠,性别:雄性,体重18-22g,数量:50只。

分组进行实验,小鼠随机分为正常对照组(等体积生理盐水)、模型组(等体积生理盐水)、混合物低、中和高剂量组(分别灌胃给予50、100、200mg·kg-1的组合物,每日一次)。每组10只。除正常对照组外,各组动物每日腹腔注射D-半乳糖150mg/kg和亚硝酸钠80mg/kg造模,并给各组动物灌胃相应药物,连续42d。

Morris水迷宫实验:水迷宫组成是一漆成暗灰色的圆柱形水池和一金属站台。水池高50cm,直径80cm,站台直径10.0cm。实验在隔音安静的房间内进行,水池、鼠笼等实验室各种物件的位置保持不变。加水后用黑墨水染成黑色使水不透明,将迷宫均分为4个象限,水温保持在25℃左右。另有一个黑色圆形平台(直径10cm,高28cm),置于某个象限中央,位于水面下1~2cm左右。测试时,选择象限作为入水点,将小鼠面向池壁放入水中,根据水迷宫跟踪系统记录小鼠寻找并爬上平台所需时间,即逃避潜伏期(Escape latency),120s内未找到平台则将小鼠引至平台,并在平台上停留20s,逃避潜伏期记为120s。给药第16天开始水迷宫定位航行实验,每只小鼠每天训练2次(包括2个象限入水点),时限设置为每次120s,平台停留时间20s,记录各组小鼠的逃避潜伏期。定位航行实验第6天为空间探索实验,撤除平台,对角象限起始点将小鼠面向池壁放入水中,记录小鼠在60s内 的目标象限游泳时间。

试验结果如下:

表1 组合物对痴呆小鼠平台潜伏期的影响

由表1结果可见,与正常对照组比较,模型对照组潜伏期时间增加明显;给予高、中、低剂量的组合物后,低剂量组(50mg·kg-1组合物)的痴呆小鼠潜伏期有降低趋势,中剂量组(100mg·kg-1组合物)和高剂量组(200mg·kg-1组合物)的痴呆小鼠潜伏期明显降低。与空白对照组比较,模型组小鼠在目标象限的游泳时间显著缩短;与模型组比较,、中、低剂量的组合物组小鼠在目标象限的游泳时间显著延长。说明高、中、低剂量的组合物能改善痴呆小鼠的学习记忆能力。

依据试验结果可见,本发明含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品对神经细胞有保护作用,可改善认知能力和学习记忆能力,从而表现出预防老年痴呆作用,且具有明显的剂量-效应关系。因此,本发明具有预防老年痴呆作用。

实施例2 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品

由以下原料按重量百分比组成:

实施例3 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品

由以下原料按重量百分比组成:

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410675649.3 (22)申请日 2014.11.21 (73)专利权人 辽宁大学 地址 110000 辽宁省沈阳市沈北新区道义 南大街58号 (72)发明人 刘剑利 于慧 曹向宇 杨思敏 孙宇航 杨威 刘晓 (74)专利代理机构 沈阳杰克知识产权代理有限 公司 21207 代理人 金春华 (51)Int.Cl. A61K 38/02(2006.01) A23L 33/00(2016.01) A61P 25/28(2006.01) A61K 36/8968(2006.01。

2、) A61K 36/8945(2006.01) A61K 36/236(2006.01) A61K 36/076(2006.01) A61K 31/715(2006.01) (56)对比文件 CN 103505717 A,2014.01.15,全文. 辛越 等.稠李属三种果实花色苷对HepG2 细胞的增殖抑制作用比较. 食品工业科技 .2013,第34卷(第9期),第348-355页. 审查员 张蕊 (54)发明名称 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品 (57)摘要 本发明涉及一种含有稠李花色苷的预防老 年痴呆保健品。 按重量百分比组成如下: 稠李花 色苷30-50, 稠李多糖10-30, 高。

3、粱米多 肽5-15, 板栗多肽5-15, 山药提取物 5-10、 茯苓提取物5-10、 川芎提取物 5-10、 麦门冬提取物5-10。 对其所具有 的预防老年痴呆功能进行体外实验和动物实验 研究, 发现该保健品具有预防老年痴呆的活性与 功能, 可以代替化学合成药物, 避免过多的化学 合成药物毒副作用, 使得稠李花色苷组合物具有 更广阔的发展前景, 并且成为可以应用于保健品 中的新兴成分。 权利要求书2页 说明书6页 附图1页 CN 104491836 B 2016.08.17 CN 104491836 B 1.含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品, 其特征在于由以下原料按重量百分比组 成: 稠李。

4、花色苷 30-50, 稠李多糖 10-30, 高粱米多肽 5-15, 板栗多肽 5-15, 山药提取物 5-10, 茯苓提取物 5-10, 川芎提取物 5-10, 麦门冬提取物 5-10。 2.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品, 其特征在于: 稠李花色 苷的制备方法如下: 1)复合酶酶解提取: 料液比按质量比1:10-1:50, 将稠李冻干粉溶于水, 复合酶加入量 为稠李冻干粉的总重量的1.0-5.0, 进行热水浸提, 控制温度为30-70, pH范围值3.0- 6.0, 酶解时间为30min-60min, 离心, 过滤, 提取液备用, 沉淀物继续进行微波提取; 所述的 复。

5、合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.52的混合; 2)微波辅助提取: 料液比按质量比1:10-1:15, 将沉淀物溶于水, 微波功率300W-500W, 微波时间为20min-60min, 离心, 过滤, 提取液备用, 沉淀物继续进行超声浸提; 3)超声浸提: 料液比按质量比1:10-1:15, 将沉淀物溶于乙醇中, 超声波功率为100W- 500W, 超声时间为10min-50min, pH值为2.0-6.0, 抽滤, 提取液备用; 4)合并复合酶酶解的提取液、 微波辅助的提取液和超声浸提的提取液, 提取液旋转蒸 发浓缩, 冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉; 5)大孔树脂静态纯化: 粗稠李花。

6、色苷干粉配成8mg/ml的水溶液, 静态吸附条件是: 温度 20, 树脂的添加量为0.16g/ml; 解析条件是: 解吸剂70乙醇, pH值为3, 温度为60, 得稠 李花色苷干粉。 3.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品, 其特征在于: 所述的稠 李多糖的制备方法如下: 1)超声浸提: 料液比按质量比1:10-1:50, 将稠李冻干粉溶于水中, 控制温度为50-90 , pH值5.0-9.0, 超声波功率为100W-500W, 超声时间为10min-50min, 离心, 取提取液继续 进行微波提取; 2)微波辅助提取: 取提取液, 微波功率300W-500W, 微波时间为2。

7、0min-60min, 离心, 取提 取液继续进行复合酶酶解; 3)复合酶酶解提取: 取提取液, 复合酶加入量为提取液重量的1.0-5.0, 控制温度 为30-60, pH 3.0-6.0, 酶解时间为30min-60min; 抽滤, 滤液旋转蒸发浓缩, 加入4倍体积 的95乙醇沉淀多糖, 离心, 去除上清液, 冷冻干燥; 所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按 质量比1:0.52的混合。 4.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品, 其特征在于: 所述的山 药提取物的制备方法: 在室温条件下, 称量粉碎成200目的山药固体粉末; 按质量比1:10比 例称取山药固体粉末和去离子水, 超。

8、声破碎30min, 室温浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜超滤, 超滤液无菌冷冻干燥, 得山药提取物。 5.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品, 其特征在于: 所述的茯 苓提取物的制备方法: 在室温条件下, 称量粉碎成200目的茯苓固体粉末; 按质量比1:10比 例称取茯苓固体粉末和去离子水, 超声破碎30min, 室温浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜超滤, 超滤液无菌冷冻干燥, 得茯苓提取物。 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 104491836 B 2 6.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品, 其特征在于: 所述的川 芎提取物的制备方法: 在室温条。

9、件下, 称量粉碎成200目的川芎固体粉末; 按质量比1:10比 例称取川芎固体粉末和去离子水, 超声破碎30min, 室温浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜超滤, 超滤液无菌冷冻干燥, 得川芎提取物。 7.如权利要求1所述的含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品, 其特征在于: 所述的麦 门冬提取物的制备方法: 在室温条件下, 称量粉碎成200目的麦门冬固体粉末; 按质量比1: 10比例称取麦门冬固体粉末和去离子水, 超声破碎30min, 室温浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜 超滤, 超滤液无菌冷冻干燥, 得麦门冬提取物。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 104491836 B 3 含有稠。

10、李花色苷的预防老年痴呆保健品 技术领域 0001 本发明属于保健品领域, 具体的涉及一种具有预防老年痴呆功能的含有稠李花色 苷的保健品。 背景技术 0002 老年痴呆症, 又称阿尔茨海默病(Alzheimer s disease,AD), 是以认知功能缺失 为核心的综合征, 是一种神经退行性疾病, 主要表现为渐进性记忆力丧失和认知障碍。 老年 痴呆的发病集中于60岁以上的老年人, 而中国作为一个即将进入老龄化的国家, 其老年痴 呆患者的数目有持续增长的趋势, 又由于该病病程长, 确诊检验复杂, 因此未来一段时间 内, 老年性痴呆病的诊断和治疗将是一大挑战。 0003 目前, 研究发现, 老年痴。

11、呆的病因有很多, 归根结底与大脑海马区的神经元损伤有 关, 患者大脑中与记忆和认知有关的区域产生神经性病变斑块, 斑块中主要成分为多肽, - 淀粉样肽(A )聚合而成的淀粉样物质和受累于其中的营养不良或变性的神经树突和轴突, 以及一些炎症反应性神经胶质细胞。 由于其发病因素涉及很多方面, 譬如: 乙酰胆碱前体 物, 但是存在临床试验效果不佳, 或者毒副作用较大等问题。 因此, 老年痴呆症重在预防, 及 时合理补充脑细胞生理所需要的营养物质, 能增强大脑的生理功能, 从而预防老年痴呆的 发生。 发明内容 0004 本发明的目的是以东北地区观赏性植物稠李属稠李出发, 制备稠李花色苷、 稠李 多糖,。

12、 和其他活性物质混合, 提供一种预防老年痴呆的天然保健品。 0005 以稠李花色苷、 稠李多糖、 高粱米多肽、 板栗多肽、 茯苓提取物、 山药提取物、 川芎 提取物、 麦门冬提取物混合使用作为一种预防老年痴呆的天然保健品, 按重量百分比各组 成如下: 0006 稠李花色苷 30-50, 稠李多糖 10-30, 高粱米多肽 5-15, 0007 板栗多肽 5-15, 山药提取物 5-10, 茯苓提取物 5-10, 0008 川芎提取物 5-10, 麦门冬提取物 5-10。 0009 本发明涉及的稠李花色苷是由稠李提取的, 采用超声波-微波-复合酶酶解分步法 的工艺组合提取稠李花色苷。 稠李多糖也。

13、是由稠李提取的, 采用超声波-微波-复合酶酶解 分步法的工艺组合提取稠李多糖。 高粱米多肽、 板栗多肽是酶解高粱米蛋白、 板栗蛋白制备 的。 0010 采用复合酶酶解-微波-超声波分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用AB-8大孔 树脂进行静态纯化的步骤如下: 0011 1)复合酶酶解提取: 将稠李果实去柄, 破碎, 去核, 放入零下80冰箱冷冻过夜, 在 冷冻干燥机中干燥, 待干燥之后取出, 研磨成粉。 料液比按质量比1:10-1:50, 将稠李冻干粉 溶于水, 复合酶加入量为稠李冻干粉的总重量的1.0-5.0, 进行热水浸提, 控制温度为 说 明 书 1/6 页 4 CN 104491836 。

14、B 4 30-70, pH范围值3.0-6.0酶解时间为30min-60min, 离心, 过滤, 提取液备用, 沉淀物继续 进行微波提取; 所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.52的混合; 0012 2)微波辅助提取: 料液比按质量比1:10-1:15, 将酶解后的沉淀物溶于水, 微波功 率300W-500W, 微波时间为20min-60min, 离心, 过滤, 提取液备用, 沉淀物继续进行超声浸 提; 0013 3)超声浸提: 料液比按质量比1:10-1:15, 将微波后的沉淀物溶于乙醇中, 超声波 功率为100W-500W, 超声时间为10min-50min, pH值为2.0-6。

15、.0, 抽滤, 提取液备用; 0014 4)合并复合酶酶解的提取液、 微波辅助的提取液和超声浸提的提取液, 提取液旋 转蒸发浓缩, 冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉; 0015 5)大孔树脂静态纯化: 粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液, 静态吸附条件是: 温度20, 树脂的添加量为0.16g/ml; 解析条件是: 解吸剂70乙醇, pH值为3.0, 温度为60 , 得稠李花色苷干粉。 0016 采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过Sephadex G-200层析纯化的步骤如下: 0017 1)超声浸提: 将稠李果实去柄, 破碎, 去核, 放入零下80冰箱冷冻过夜。

16、, 在冷冻干 燥机中干燥, 待干燥之后取出, 研磨成粉。 将稠李冻干粉溶于水中, 料液比按质量比1:10-1: 50, 控制温度为50-90, pH值5.0-9.0, 超声波功率为100W-500W, 超声时间为10min-50min, 离心, 收集提取液继续进行微波提取; 0018 2)微波辅助提取: 取提取液, 微波功率300W-500W, 微波时间为20min-60min, 离心, 收集提取液继续进行复合酶酶解; 0019 3)复合酶酶解提取: 取提取液, 加入提取液重量1.0-5.0的复合酶, 控制温度 为30-60, pH 3.0-6.0, 酶解时间为30min-60min, 离心,。

17、 抽滤, 取滤液, 滤液旋转蒸发浓缩, 加入4倍体积的95乙醇沉淀多糖, 3000r/min离心后去除上清液, 沉淀冷冻干燥, 得稠李粗 多糖。 所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:0.52的混合; 0020 4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解, Sephadex G-200层析进行 分离纯化, 用蒸馏水洗脱, 流速为1ml/min, 每2ml收集一试管, 用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无 糖, 收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h, 冷冻干燥, 进行后续实验。 用DEAE-32进 一步纯化, 磷酸盐缓冲液-水作为流动相, 梯度模式进行洗脱, 流速为0.8ml/min, 每。

18、2ml收集 一试管, 用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖, 收集含量最多的多糖组分。 0021 本发明具开创性的技术是将稠李花色苷、 稠李多糖、 高粱米多肽、 板栗多肽、 茯苓 提取物、 山药提取物、 川芎提取物和麦门冬提取物作为一个整体的组合物预防老年痴呆, 根 据现代营养学模型合理搭配、 科学组合应用, 形成具有显著预防老年痴呆混合保健品。 附图说明 0022 图1实施例1的组合物对H2O2诱导N2A细胞损伤保护的荧光显微照片; 0023 其中, A: 正常组; B: 模型组; C: 组合物处理1组; D: 组合物处理2组。 0024 图2实施例1的组合物对H2O2诱导N2A细胞损伤保护; 00。

19、25 其中, A: 正常组; B: 模型组; C: 组合物处理1组; D: 组合物处理2组。 0026 图3实施例1的组合物对H2O2损伤的N2A细胞内活性氧的影响的荧光显微照片; 说 明 书 2/6 页 5 CN 104491836 B 5 0027 其中, A:正常神经细胞; B:0.5mmol/l H2O2处理神经细胞; C:0.05mg/ml组合物处理 神经细胞。 具体实施方式 0028 实施例1 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品 0029 (一)稠李花色苷的制备 0030 本实施例采用超声波-微波-混合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李花色苷并用 AB-8大孔树脂进行静态纯化, 步骤如。

20、下: 0031 1)复合酶酶解提取: 将稠李果实去柄, 破碎, 去核, 放入零下80冰箱冷冻过夜, 在 冷冻干燥机中干燥, 待干燥之后取出, 研磨成粉。 将稠李冻干粉溶于水, 料液比按质量比1: 30, 所用的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合, 复合酶加入量为稠李冻干粉的 总重量的3.0, 进行热水浸提, 控制温度为50, pH值为5.0酶解时间为50min, 6000r/min 进行离心10min, 过滤, 提取液备用, 沉淀物继续进行微波提取; 0032 2)微波辅助提取: 料液比按质量比1:10, 将酶解后的沉淀物溶于水中, 微波功率 400W, 微波时间为40min, 60。

21、00r/min进行离心10min, 过滤, 提取液备用, 沉淀物继续进行超 声浸提; 0033 3)超声浸提: 料液比按质量比1:10, 将微波后的沉淀物溶于60乙醇中, 超声波功 率为400W, 超声时间为30min, pH值为4.0, 抽滤, 提取液备用; 0034 4)合并复合酶酶解的提取液、 微波辅助的提取液和超声浸提的提取液, 提取液旋 转蒸发浓缩, 冷冻干燥后得到粗稠李花色苷干粉; 0035 5)大孔树脂静态纯化: 粗稠李花色苷干粉配成8mg/ml的水溶液, 静态吸附条件是: 温度20, 树脂的添加量为0.16g/ml; 解析条件是: 解吸剂70乙醇, pH值为3.0, 温度为60。

22、 , 得稠李花色苷干粉。 0036 (二)稠李多糖的制备 0037 采用超声波-微波-复合酶酶解分步法的工艺组合提取稠李多糖并通过Sephadex G-200层析纯化的步骤如下: 0038 1)超声浸提: 将稠李果实去柄, 破碎, 去核, 放入零下80冰箱冷冻过夜, 在冷冻干 燥机中干燥, 待干燥之后取出, 研磨成粉。 将稠李冻干粉溶于水中, 料液比按质量比1:30, 控 制温度为60, pH值7.0, 超声波功率为400W, 超声时间为40min, 3000r/min进行离心15min, 收集提取液继续进行微波提取; 0039 2)微波辅助提取: 取超声后的提取液, 微波功率400W, 微波。

23、时间为40min, 3000r/ min进行离心15min, 收集提取液继续进行复合酶酶解; 0040 3)复合酶酶解提取: 取微波后的提取液, 加入其总重量4.0的复合酶, 控制温度 为50, pH 4.0, 酶解时间为40min, 3000r/min进行离心15min, 抽滤, 滤液旋转蒸发浓缩, 加 入4倍体积的95乙醇沉淀多糖, 3000r/min离心后去除上清液, 冷冻干燥, 得稠李粗多糖。 所述的复合酶是纤维素酶与果胶酶按质量比1:1的混合; 0041 4)将冷冻干燥的稠李粗多糖加入适量蒸馏水重新溶解, Sephadex G-200层析进行 分离纯化, 用蒸馏水洗脱, 流速为1ml。

24、/min, 每2ml收集一试管, 用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无 糖, 收集含量最多的多糖组分在蒸馏水中透析24h, 冷冻干燥, 进行后续实验。 用DEAE-32进 说 明 书 3/6 页 6 CN 104491836 B 6 一步纯化, 磷酸盐缓冲液-水作为流动相, 梯度模式进行洗脱, 流速为0.8ml/min, 每2ml收集 一试管, 用硫酸-蒽酮法跟踪检测至无糖, 收集含量最多的多糖组分。 0042 (三)高粱米多肽的制备 0043 木瓜蛋白酶提取高粱米多肽步骤如下: 0044 1)将高粱米粉碎, 按料液比为1:15, 在pH为10.0的氢氧化钠溶液中浸泡3h, 提取温 度为50, 5000。

25、r/min离心20min, 取上清液, 用90硫酸铵进行沉淀, 再次离心, 分离得到沉 淀, 进行冷冻干燥得到高粱米蛋白; 0045 2)将高粱米蛋白配成8的水溶液, pH调节为6.5, 酶活添加量为6000u/g料, 温度 为60, 提取时间为3h, 然后沸水浴10min灭酶, 3500r/min离心15min, 取上清, 纯净水透析、 采用截留分子量为l0kDa超滤板超滤后进行冷冻干燥, 得到高粱米多肽粉末。 0046 (四)板栗多肽的制备 0047 1)板栗去皮干燥后, 用粉碎机粉碎, 按料液比为1:10, 加入pH 11的NaOH, 提取温度 为50, 时间为3h, 离心收集沉淀, 冷。

26、冻干燥制备板栗蛋白。 0048 2)复合酶分步水解: 首先, 以复合风味蛋白酶水解, 然后再以碱性蛋白酶水解, 制 备板栗多肽, 复合风味蛋白酶酶解条件为: pH 6.0, 酶活添加量为6000u/g料, 时间1h, 温度 55, 碱性蛋白酶酶解条件为: pH 8.0, 酶活添加量为6000u/g料, 时间3h, 温度50; 将水解 液加热到100, 保持10分钟杀灭酶的活力; 采用截留分子量为l0kDa超滤板超滤得到的酶 解液, 收集分子量为10kDa以下的酶解液; 将酶解液用低温冷冻干燥机制得板栗多肽粉末。 0049 (五)山药提取物的制备 0050 在室温条件下, 称量粉碎成200目的山。

27、药固体粉末; 按质量比1:10比例称取山药固 体粉末和去离子水, 超声破碎30min, 室温浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜超滤, 超滤液无菌冷 冻干燥, 得山药提取物。 0051 (六)茯苓提取物的制备 0052 在室温条件下, 称量粉碎成200目的茯苓固体粉末; 按质量比1:10比例称取茯苓固 体粉末和去离子水, 超声破碎30min, 室温浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜超滤, 超滤液无菌冷 冻干燥, 得茯苓提取物。 0053 (七)川芎提取物的制备 0054 在室温条件下, 称量粉碎成200目的川芎固体粉末; 按质量比1:10比例称取川芎固 体粉末和去离子水, 超声破碎30min, 室温。

28、浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜超滤, 超滤液无菌冷 冻干燥, 得川芎提取物。 0055 (八)麦门冬提取物的制备 0056 在室温条件下, 称量粉碎成200目的麦门冬固体粉末; 按质量比1:10比例称取麦门 冬固体粉末和去离子水, 超声破碎30min, 室温浸提3h, 滤纸初过滤、 超滤膜超滤, 超滤液无 菌冷冻干燥, 得麦冬门提取物。 0057 (九)含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品组合物 0058 由以下原料按重量百分比组成: 说 明 书 4/6 页 7 CN 104491836 B 7 0059 0060 (十)细胞试验 0061 1、 组合物对H2O2诱导N2A细胞损伤保护 006。

29、2 用含10胎牛血清得培养液配成单个N2A细胞悬液, 以每孔104个细胞接种到6孔 板, 每孔体积2mL, 接着在37, 5CO2培养箱中进行细胞培养24h, 然后对细胞进行处理, 设 置3个实验组, 分别为正常对照组、 模型组和组合物处理组。 其中模型组H2O2浓度为0.5mmol/ l, 组合物处理1组为0.5mmol/l H2O2和0.025mg/ml的组合物, 组合物处理2组为0.5mmol/l H2O2和0.05mg/ml的组合物, 继续培养1h, 显微镜下分别观察不同组细胞的状态。 0063 通过0.5mmol/L的H2O2处理能够显著降低N2A细胞的活力。 加入不同剂量的组合物 。

30、之后, 组合物可以减少H2O2对N2A细胞的损伤, 对N2A细胞有保护作用。 其结果如图1和图2所 示。 0064 从图1、 图2可以看出, 正常细胞折光性强, 细胞规则, 贴壁状态良好; H2O2组细胞变 圆, 折光性变弱, 贴壁不良, 而组合物处理组细胞形态较H2O2组有所改善。 H2O2能够损伤细胞 膜的完整性, 降低细胞的活性, 对细胞的损伤很大, 当H2O2浓度为0.5mmol/l时, 有活力的细 胞数目只达到原来的52.7, 但是, 加入0.025mg/ml的组合物后, 有活力的细胞数目为原来 的71.4, 当加入0.05mg/ml的组合物时, 有活力的细胞数目为91.8。 由此,。

31、 可以得出: 不 同剂量的组合物对H2O2诱导的N2A细胞损伤具有很强的保护作用, 能够显著提高细胞的活 性, 且具有较好的剂量-效应关系。 0065 2、 组合物对H2O2损伤的N2A细胞内活性氧的影响 0066 将N2A细胞进行种板, 加入0.5mg/ml的组合物和H2O2刺激细胞, 去除细胞培养液, 加 入PBS淋洗后, 加入终浓度为20 mmol/L的稀释好的DCFH-DA, 包上锡纸, 37培养箱内温育 30min, 在用PBS进行淋洗, 加入甲醇0.5ml, -20固定30min, 再次淋洗后, 加入丙酮(4预 冷)0.5ml固定6min, 然后每5min一次用PBS淋洗3次, 最。

32、后进行封片观察, 结果如图3所示。 0067 通过荧光显微照片图3可知, A中正常组细胞荧光较为暗淡, B中H2O2处理N2A细胞荧 光增强, 说明细胞内活性氧水平较高。 而当加入组合物后, C中的荧光强度明显降低, 与正常 组细胞荧光强度相近的程度, 细胞内活性氧水平降低, 说明组合物具有强烈的降低由H2O2导 致的细胞内ROS的含量的作用。 0068 (十一)动物实验 0069 组合物对小鼠认知能力的干预。 动物选取: 品种: ICR大鼠, 性别: 雄性, 体重18- 22g, 数量: 50只。 0070 分组进行实验, 小鼠随机分为正常对照组(等体积生理盐水)、 模型组(等体积生理 盐水。

33、)、 混合物低、 中和高剂量组(分别灌胃给予50、 100、 200mgkg-1的组合物, 每日一次)。 每组10只。 除正常对照组外, 各组动物每日腹腔注射D-半乳糖150mg/kg和亚硝酸钠80mg/kg 造模, 并给各组动物灌胃相应药物, 连续42d。 0071 Morris水迷宫实验: 水迷宫组成是一漆成暗灰色的圆柱形水池和一金属站台。 水 池高50cm, 直径80cm, 站台直径10.0cm。 实验在隔音安静的房间内进行, 水池、 鼠笼等实验室 说 明 书 5/6 页 8 CN 104491836 B 8 各种物件的位置保持不变。 加水后用黑墨水染成黑色使水不透明, 将迷宫均分为4个。

34、象限, 水温保持在25左右。 另有一个黑色圆形平台(直径10cm, 高28cm), 置于某个象限中央, 位 于水面下12cm左右。 测试时, 选择象限作为入水点, 将小鼠面向池壁放入水中, 根据水迷 宫跟踪系统记录小鼠寻找并爬上平台所需时间, 即逃避潜伏期(Escape latency), 120s内 未找到平台则将小鼠引至平台, 并在平台上停留20s, 逃避潜伏期记为120s。 给药第16天开 始水迷宫定位航行实验, 每只小鼠每天训练2次(包括2个象限入水点), 时限设置为每次 120s, 平台停留时间20s, 记录各组小鼠的逃避潜伏期。 定位航行实验第6天为空间探索实 验, 撤除平台, 对。

35、角象限起始点将小鼠面向池壁放入水中, 记录小鼠在60s内的目标象限游 泳时间。 0072 试验结果如下: 0073 表1 组合物对痴呆小鼠平台潜伏期的影响 0074 0075 由表1结果可见, 与正常对照组比较, 模型对照组潜伏期时间增加明显; 给予高、 中、 低剂量的组合物后, 低剂量组(50mgkg-1组合物)的痴呆小鼠潜伏期有降低趋势, 中剂 量组(100mgkg-1组合物)和高剂量组(200mgkg-1组合物)的痴呆小鼠潜伏期明显降低。 与空白对照组比较, 模型组小鼠在目标象限的游泳时间显著缩短; 与模型组比较, 、 中、 低剂 量的组合物组小鼠在目标象限的游泳时间显著延长。 说明高、。

36、 中、 低剂量的组合物能改善痴 呆小鼠的学习记忆能力。 0076 依据试验结果可见, 本发明含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品对神经细胞有 保护作用, 可改善认知能力和学习记忆能力, 从而表现出预防老年痴呆作用, 且具有明显的 剂量-效应关系。 因此, 本发明具有预防老年痴呆作用。 0077 实施例2 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品 0078 由以下原料按重量百分比组成: 0079 0080 实施例3 含有稠李花色苷的预防老年痴呆保健品 0081 由以下原料按重量百分比组成: 0082 说 明 书 6/6 页 9 CN 104491836 B 9 图1 图2 图3 说 明 书 附 图 1/1 页 10 CN 104491836 B 10 。

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