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1、(10)申请公布号 CN 102668981 A (43)申请公布日 2012.09.19 CN 102668981 A *CN102668981A* (21)申请号 201210153169.1 (22)申请日 2012.05.17 A01H 4/00(2006.01) A01H 1/00(2006.01) (71)申请人 云南自然谷生物开发有限公司 地址 650000 云南省昆明市西山区团结街道 办事处苏达开中草药研发基地 (72)发明人 兰振水 (74)专利代理机构 昆明正原专利商标代理有限 公司 53100 代理人 陈左 (54) 发明名称 蜘蛛香繁育方法 (57) 摘要 一种蜘蛛香繁。
2、育方法, 其特征在于通过组织 培养繁育或种子繁育后移栽大田栽种 ; 组织培养 繁育育苗包括 : 无菌系的建立, 采用培养基作愈 伤培养、 增殖培养和生根培养, 炼苗和驯化苗的处 理, 栽种后苗床及幼苗防病措施 ; 种子繁育育苗 包括 : 种子采集时间、 打破休眠期、 诱导芽胞分化 和苗期防病虫害措施 ; 本发明重点解决了蜘蛛香 繁育产业化的问题, 为种植提供了可靠保障, 有效 地保护了濒危物种, 特别是在拯救濒危药材领域 有显著进步。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 1/。
3、1 页 2 1. 一种蜘蛛香繁育方法, 其特征在于采用组织培养繁育育苗后移栽大田, 步骤如下 : (1) 、 采集发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体 ; (2) 、 将蜘蛛香外植体剥去外皮老叶、 冲洗后, 放入 70% 酒精中浸泡 30 60 秒消毒 10 分钟, 取出后冲洗 3 4 次 ; (3) 、 在无菌净化工作台上将外植体切成 1 3mm 小块后接种在装有愈伤组织培养基 中培养7天后转接到诱导分化培养基中, 所述的愈伤组织培养基由基本培养基MS加入蔗糖 3% 和琼脂 0.6% 构成, 调节愈伤组织培养基 pH6.0, 培养室温度 25 27, 光照度 2000 3000Lx, 每天。
4、光照时间 10 14h ; (4) 、 诱导生长 : 在基本培养基 MS 加入 6 BA 2.0mg/L、 IBA 0.2mg/L 和 LH800mg/L 的 诱导分化培养基中, 7 天芽孢开始萌动, 15 20 天分化出小芽, 待小芽长到 1 1.5cm 时, 切取芽茎段和愈伤组织, 无菌环境下, 接种到增殖培养基内 ; (5) 、 增殖及壮苗培养 : 在基本培养基 MS 中加入 6 BA 1.5mg/L、 KT 0.5mg/L、 IBA 0.2mg/L 构成的增殖壮苗培养基中, 10 15 天形成芽丛, 15 20 天分化出芽苗, 继代培养 一次 ; (6) 、 生根培养与驯化 : 取 1。
5、/2 基本培养基加入 MS+2mg/L NAA 为生根培养基, 将芽苗转 接到生根培养基中, 30 35 天之后产生数条根丛, 打开瓶盖, 炼苗 3 4 天之后取出洗净 培养基即是组培苗 ; 驯化是将组培苗放在 50% 多菌灵 1000 倍溶液中浸泡 10 分钟, 于 18 22温度下移栽入沙和腐殖土按 1:1 重量比例配制的育苗床上, 浇透水后用 50% 多菌灵 1000 倍溶液喷施杀菌, 隔日再喷施一次, 15 20 天长出新叶及新根 ; (7) 、 栽种 : 取蜘蛛香的组培苗, 5 月中旬 6 月上旬根据幼苗生长情况进行移栽, 株距 5 8cm, 行距 15 20cm, 栽植深度 3 5。
6、cm, 定植后覆土加压, 每亩栽种 1 1.2 万株, 苗 期 6 月及 8 月及时除草, 生长期用腐熟粪水浇灌 1-2 次, 栽种 2 年, 在当年 12 次年 1 月采 收。 2. 一种蜘蛛香繁育方法, 其特征在于采用蜘蛛香种子繁育育苗后移栽大田, 步骤如 下 : (1) 、 种子采集 : 3 月下旬到 4 月下旬每日上午收集落花后的花序, 连同花序一并剪下, 晒至七成干收集籽种得蜘蛛香种子 ; (2) 、 种子处理 : 取上一步骤取得的当年鲜种, 用 0.5mg/L 赤霉酸 GA3 浸泡 4 8 小时, 浸泡后, 过滤, 稍加晾晒至松散, 按 1:10 重量比例拌入细沙 ; (3) 、 。
7、将处理好的种子, 均匀撒播在苗床上, 覆盖 0.5cm 细土, 喷淋透水, 保持大棚内湿 度大于 60%, 温度控制在 20 25之间 ; (4) 、 播种 : 播种后 7 10 天开始发芽出苗, 保持湿度和温度, 出苗后, 喷施自配叶面肥 和 50% 多菌灵 1000 倍溶液 : 每隔 10 天喷施一次, 共喷 2 3 次, 所述的叶面肥中 N、 P、 K 按 1:0.5:0.3 重量比例配制 ; 经 45 50 天, 当苗高 3 4cm, 移栽至大田。 权 利 要 求 书 CN 102668981 A 2 1/4 页 3 蜘蛛香繁育方法 技术领域 0001 本发明涉及一种濒危药材蜘蛛香的繁。
8、育方法。 背景技术 0002 蜘蛛香 (Valeriana jatamansi Jones) 为败酱科, 心叶缬草植物的根茎, 别名 : 马 蹄香、 臭狗药、 连香草、 养血莲, 乌参等, 根茎入药。具有 : 理气止痛、 消食化气、 健胃止泻、 祛 风除湿、 镇静安神等功效。 用于脘腹胀痛、 腹泻菌痢、 消化不良、 风湿痹痛、 失眠等, 是载入药 典的云南地产药材。 0003 主要分布在云南、 贵州、 广西、 四川等省区, 生长于海拔 18002800 米的山谷林中 及沟边草丛中, 喜阴湿肥沃土壤。 由于生长环境特殊, 产区局限性大, 长期无限制采挖, 丧失 了休养生机, 野生资源再生能力急剧。
9、下降, 从而导致蜘蛛香种群数量逐渐减少, 以被列入秦 巴山区重点名录和中国高等植物濒危及受威胁物种名录, 现已被我国列为国家级重点保护 植物。 0004 蜘蛛香生物学特点为 : 开花少、 结果少、 而且花落籽落, 花开花落间隔十分短暂, 掌握不好时机, 很难收集到真正发育成熟的种子。 未成熟种子胚仍处于原胚阶段, 胚的各部 器官尚未分化, 不能用作繁育基材。 成熟的蜘蛛香种子, 种皮比较特殊, 细胞层数较多, 而且 各层细胞的细胞壁木质化程度较高, 内侧细胞细小, 排列紧密, 由于外皮质地坚硬, 不经特 殊处理, 芽胚很难萌发, 故此有关蜘蛛香野生转家种繁育技术尚未见报道。 发明内容 0005。
10、 本发明目的在于提出一种蜘蛛香繁育方法, 本发明重点解决了蜘蛛香繁育产业化 的问题, 为种植提供了可靠保障, 在保障供给的同时, 有效地保护了濒危物种, 特别是在拯 救濒危药材领域有显著进步。本发明的技术方案如下 : 一种蜘蛛香繁育方法, 其特征在于采用组织培养繁育育苗后移栽大田, 步骤如下 : (1) 、 采集发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体 ; (2) 、 将蜘蛛香外植体剥去外皮老叶、 冲洗后, 放入 70% 酒精中浸泡 30 60 秒消毒 10 分钟, 取出后冲洗 3 4 次 ; (3) 、 在无菌净化工作台上将外植体切成 1 3mm 小块后接种在装有愈伤组织培养基 中培养7天后转。
11、接到诱导分化培养基中, 所述的愈伤组织培养基由基本培养基MS加入蔗糖 3% 和琼脂 0.6% 构成, 调节愈伤组织培养基 pH6.0, 培养室温度 25 27, 光照度 2000 3000Lx, 每天光照时间 10 14h ; (4) 、 诱导生长 : 在基本培养基 MS 加入 6 BA 2.0mg/L、 IBA 0.2mg/L 和 LH800mg/L 的 诱导分化培养基中, 7 天芽孢开始萌动, 15 20 天分化出小芽, 待小芽长到 1 1.5cm 时, 切取芽茎段和愈伤组织, 无菌环境下, 接种到增殖培养基内 ; (5) 、 增殖及壮苗培养 : 在基本培养基 MS 中加入 6 BA 1.。
12、5mg/L、 KT 0.5mg/L、 IBA 0.2mg/L 构成的增殖壮苗培养基中, 10 15 天形成芽丛, 15 20 天分化出芽苗, 继代培养 说 明 书 CN 102668981 A 3 2/4 页 4 一次 ; (6) 、 生根培养与驯化 : 取 1/2 基本培养基加入 MS+2mg/L NAA 为生根培养基, 将芽苗转 接到生根培养基中, 30 35 天之后产生数条根丛, 打开瓶盖, 炼苗 3 4 天之后取出洗净 培养基即是组培苗 ; 驯化是将组培苗放在 50% 多菌灵 1000 倍溶液中浸泡 10 分钟, 于 18 22温度下移栽入沙和腐殖土按 1:1 重量比例配制的育苗床上,。
13、 浇透水后用 50% 多菌灵 1000 倍溶液喷施杀菌, 隔日再喷施一次, 15 20 天长出新叶及新根 ; (7) 、 栽种 : 取蜘蛛香的组培苗, 5 月中旬 6 月上旬根据幼苗生长情况进行移栽, 株距 5 8cm, 行距 15 20cm, 栽植深度 3 5cm, 定植后覆土加压, 每亩栽种 1 1.2 万株, 苗 期 6 月及 8 月及时除草, 生长期用腐熟粪水浇灌 1-2 次, 栽种 2 年, 在当年 12 次年 1 月采 收。 0006 一种蜘蛛香繁育方法, 其特征在于采用蜘蛛香种子繁育育苗后移栽大田, 步骤如 下 : (1) 、 种子采集 : 3 月下旬到 4 月下旬每日上午收集落。
14、花后的花序, 连同花序一并剪下, 晒至七成干收集籽种得蜘蛛香种子 ; (2) 、 种子处理 : 取上一步骤取得的当年鲜种, 用 0.5mg/L 赤霉酸 GA3 浸泡 4 8 小时, 浸泡后, 过滤, 稍加晾晒至松散, 按 1:10 重量比例拌入细沙 ; (3) 、 将处理好的种子, 均匀撒播在苗床上, 覆盖 0.5cm 细土, 喷淋透水, 保持大棚内湿 度大于 60%, 温度控制在 20 25之间 ; (4) 、 播种 : 播种后 7 10 天开始发芽出苗, 保持湿度和温度, 出苗后, 喷施自配叶面肥 和 50% 多菌灵 1000 倍溶液 : 每隔 10 天喷施一次, 共喷 2 3 次, 所述。
15、的叶面肥中 N、 P、 K 按 1:0.5:0.3 重量比例配制 ; 经 45 50 天, 当苗高 3 4cm, 移栽至大田。 具体实施方式 0007 蜘蛛香繁育方法, 通过组织培养繁育或种子繁育后移栽大田栽种。 0008 1、 蜘蛛香组织培养繁育育苗包括 : 无菌系的建立, 采用培养基作愈伤培养、 增殖培 养和生根培养, 炼苗和驯化苗的处理, 栽种后苗床及幼苗防病措施。具体步骤如下 : 1.1、 外植体的采集 : 取发育良好的蜘蛛香嫩芽茎段或顶芽作外植体。 0009 1.2、 消毒 : 取蜘蛛香外植体, 经流水冲洗剥去外皮老叶、 小心割取幼芽, 蒸馏水冲 洗后立即放入消毒器皿中, 在 70%。
16、 酒精中浸泡 30 60 秒, 再将材料移入 0.1% 升汞水中消 毒 10 分钟, 取出后用无菌水冲洗 3 4 次, 完成蜘蛛香培养基材的消毒。 0010 1.3、 接种 : 在无菌的超净化工作台上将外植体材料上的水分吸干之后, 用经消毒 的接种刀片切成 1 3mm 小块, 然后接种在装有愈伤组织培养基的 250mL 三角烧瓶中, 每 瓶接种 10 15 个外植体, 用消毒后菌种膜塞口, 在无菌室中培养 7 天。基本培养基为 MS, 愈伤组织培养基 : MS+ 蔗糖 3% 和琼脂 0.6%, pH6.0, 培养室温度 (261), 光照度 2000 3000Lx, 每天光照时间 10 14h。
17、。 0011 1.4、 诱导生长 : 外植体材料置于基本培养基 MS 加入 6 BA 2.0mg/L、 IBA 0.2mg/ L 和 LH800mg/L 构成的诱导分化培养基中, 7 天芽孢开始萌动, 随着生长, 茎基部膨大, 逐渐 分化出 3 4 个小芽, 15 20 天形成疏松的愈伤组织, 分化出小芽, 待小芽长到 1 1.5cm 时, 切取芽茎段和愈伤组织, 无菌环境下, 接种到增殖壮苗培养基内。 说 明 书 CN 102668981 A 4 3/4 页 5 0012 1.5、 增殖及壮苗培养 : 小芽在基本培养基 MS 中加入 6 BA 1.5mg/L、 KT 0.5mg/ L、 IB。
18、A 0.2mg/L 构成的增殖壮苗培养基中, 10 15 天左右形成丛芽, 15 20 天分化出芽 苗, 继代培养一次。 0013 1.6、 生根培养与驯化 : 取 1/2 基本培养基加入 MS+2mg/L NAA 为生根培养基, 将培 养的芽苗转接到生根培养基中, 30 35 天之后产生数条根丛, 株高达 2.5 3cm, 阴凉通风 处打开瓶盖, 炼苗 3 4 天之后取出洗净培养基即组培苗, 驯化是将组培苗放在 50% 多菌灵 1000 倍溶液中浸泡 10 分钟, 于 18 22温度下移入沙和腐殖土按 1:1 重量比例配制的育 苗床上, 浇透水后喷施 50% 多菌灵 1000 倍溶液, 隔日。
19、再喷一次以利杀菌, 保持湿度 75%, 15 20 天当长出新叶及新根 , 可进行大田移栽, 成活率 80 85%。 0014 2、 蜘蛛香种子繁育育苗包括 : 种子采集时间、 打破休眠期、 诱导芽胞分化和苗期防 病虫害措施。步骤如下 : 2.1、 种子采集 : 3 月下旬到 4 月下旬每日上午 10 点钟以前、 选择开败花的花序 (花序茎 梗变暗) , 连同花序一并剪下, 以免种子随风飘散。将剪下的花序置避风处晾干, 去除花梗等 杂质后, 趁鲜摘除枝干, 晒至七成干, 收集子种及时育苗。 0015 2.2、 种子处理 : 蜘蛛香种子, 暴晒或隔年的极易失活, 降低发芽率 ; 因而应取当年 鲜。
20、种装入纱布袋内, 用 0.5mg/L 赤霉酸 GA3, 浸泡 4 8 小时, 以利于打破休眠期, 促进细胞 分裂, 诱导芽的分化, 促进侧芽萌发生长, 延缓衰老。 浸泡后, 过滤出水, 稍加晾晒至松散, 按 1:10 重量比例拌入细沙。 0016 2.3、 苗圃地整理 : 大棚内, 深翻、 耙细, 每亩施 100kg 复合肥加 100kg 腐熟基肥, 二 次深翻, 耙平, 作育苗床。 0017 2.4、 播种 : 将处理好的种子, 均匀撒播在苗床上, 覆盖 0.5cm 细土, 喷淋透水, 保持 大棚内湿度大于 60%, 温度控制在 20 25之间。 0018 2.5、 管理 : 播种后 7 1。
21、0 天开始发芽出苗, 保持湿度和温度, 随时清除杂草, 出苗 后, 喷施自配叶面肥和 50% 多菌灵 1000 倍液。每隔 10 天喷施一次, 共喷 2 3 次 ; 叶面肥 中 N、 P、 K 按 1:0.5:0.3 重量比例配制, 经 45 50 天, 当苗高 3 4cm, 即可移栽至大田。 0019 3、 蜘蛛香栽培 : 3.1、 选地, 整地 : 蜘蛛香喜湿润肥沃土壤, 为较丛根性植物, 根系十分发达。因此, 选取 避荫、 背风的缓坡或者平地, 选择土层肥沃、 疏松、 排灌方便和富含腐殖质的山地夹沙土壤, 每亩施腐熟农家肥 2000kg 和普钙 100kg, 深翻、 耙细, 打成 1.5。
22、m 宽墒, 挖好排水沟。 0020 3.2、 栽种 : 取蜘蛛香的组培苗或有性繁育苗, 5 月中旬 6 月上旬根据幼苗生长情 况进行移栽, 株距 5 8cm, 行距 15 20cm, 栽植深度 3-5cm 左右, 定植后覆细土加压, 每亩 栽种 1 1.2 万株, 苗期加强水肥管理。6 月及 8 月及时除草, 生长期用腐熟粪水浇灌 1-2 次, 栽种 2 年, 12 月 1 月采收。 0021 3.3、 病虫害防治 : 菌核病、 根腐病、 地老虎和蛴螬等, 是幼苗期常见的病虫害, 其 防治方法分别为 : 菌核病的防治方法 : 及时挖去病株, 松土, 提高土壤通气, 采用 50% 多菌 灵1000倍液喷雾, 每10天1次, 连续23次 ; 地老虎、 蛴螬的防治方法 : 铲除周边杂草, 用自配生物农药, 每亩12.5Kg配水喷施, 或者用25g氯丹乳油拌炒香的麦麸5kg, 加适量 水配成毒饵, 于傍晚撒于田间或洼面诱杀。 0022 3.4、 采收加工 : 人工栽培的蜘蛛香在当年12次年1月采收质量好, 产量高, 采挖 说 明 书 CN 102668981 A 5 4/4 页 6 后, 去净泥土, 须根与根茎分开, 晾晒至干 ; 或者每 10 株为一小捆, 用绳扭结成辫或小捆, 挂 在通风处晒干, 忌水洗。 说 明 书 CN 102668981 A 6 。