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1、(10)授权公告号 CN 102150812 B (45)授权公告日 2013.04.24 CN 102150812 B *CN102150812B* (21)申请号 201110027848.X (22)申请日 2011.01.25 A23L 1/226(2006.01) A23L 1/29(2006.01) (73)专利权人 宁波大学 地址 315211 浙江省宁波市江北区风华路 818 号 (72)发明人 李和生 董亚辉 何燕飞 史秉鑫 王鸿飞 林燕 (74)专利代理机构 宁波奥圣专利代理事务所 ( 普通合伙 ) 33226 代理人 程晓明 CN 101390601 A,2009.03.。
2、25,说明书第2页 第 3-19 行 . CN 1325646 A,2001.12.12, 全文 . 林永波等 . 高分子凝胶球去除废水中重金属 离子的研究 . 环境保护科学 .2008, 第 34 卷 ( 第 2 期 ), 第 21 页第 2 栏第 9 行 - 第 22 页第 1 栏第 39 行， 第 24 页第 1 栏第 1-6 行 . 董亚辉等 . 双酶协同水解乌贼内脏的工艺条 件研究 . 中国酿造 .2011,( 第 1 期 ), 第 137 页 第 1 栏第 5-26 行， 第 140 页第 1 栏第 4-15 行 . (54) 发明名称 一种利用乌贼内脏制备海味素的方法 (57) 。
3、摘要 本发明一种利用乌贼内脏制备海味素的方 法， 特点是以乌贼内脏为原料， 包括将乌贼内脏 预处理， 利用凝胶吸附球除去重金属得到乌贼内 脏溶液的步骤 ； 在乌贼内脏溶液中加入蛋白水 解酶， 在 pH 值 6.5， 温度 50-55， 酶解 6-7h， 得 到乌贼内脏酶解液的步骤 ； 干燥脱水粉碎得到 乌贼内脏水解蛋白粉的步骤 ； 最后以玉米淀粉 作为填充剂， 按质量百分比将乌贼内脏水解蛋白 粉 48-52， 食盐 18-22， 蔗糖 3-5， 胡椒粉 0.8-1.2， 姜蒜粉 3-5及玉米淀粉 20-22混 合均匀， 得到海味素， 优点是不仅成本低， 制备工 艺简单， 重金属含量低， 而且营。
4、养丰富， 味道鲜美， 具有浓郁的海鲜风味。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 马越 权利要求书 2 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书2页 说明书7页 (10)授权公告号 CN 102150812 B CN 102150812 B *CN102150812B* 1/2 页 2 1. 一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于包括以下步骤 ： （1） 乌贼内脏预处理 ： 将乌贼内脏匀浆后与水按质量体积比为1 g ： 2.5-3.5 ml的比例混合， 在乌贼内脏溶液 中加入用于吸附重金属的质量占所述的乌贼内脏质量 1/101/。
5、8 的凝胶吸附球， 所述的凝 胶吸附球为海藻酸钠凝胶吸附球和海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球中的一种或两种， 振荡 吸附 5 6h 后， 过滤除去凝胶吸附球， 得到乌贼内脏溶液 ； （2） 乌贼内脏酶解 在步骤 （1） 得到的乌贼内脏溶液中加入蛋白水解酶， 所述的蛋白水解酶的添加量为每 克乌贼内脏 6000-7000U， 所述的蛋白水解酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或两种， 在 pH 值为 6.2-6.6， 温度为 50-55的条件下， 酶解 6-7h， 得到乌贼内脏酶解液 ； （3） 干燥脱水 将步骤 （2）得到的乌贼内脏酶解液在温度为 55-60的条件下， 干燥至水分含量为 10-13。
6、% 后， 粉碎得到乌贼内脏水解蛋白粉 ； （4） 调质 以玉米淀粉作为填充剂， 按质量百分比将乌贼内脏水解蛋白粉 48-52， 食盐 18-22， 蔗糖3-5， 胡椒粉0.8-1.2， 姜蒜粉3-5及玉米淀粉20-22%混合均匀后， 得到 海味素。 2. 根据权利要求 1 所述的一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中所述的海藻酸钠凝胶球的制备过程如下 ： 将质量百分比为 2% 的海藻酸钠水溶液滴入 到质量百分比为 5% 的氯化钙水溶液中， 静置 10-20min 后， 在氯化钙水溶液中形成粒径为 2-3mm 的海藻酸钠颗粒， 取出海藻酸钠颗粒， 淋干表面水分， 即。
7、得到海藻酸钠凝胶吸附球。 3.根据权利要求1所述的一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中所述的海藻酸钠-聚乙烯醇凝胶球的制备过程如下 ： 将质量百分比为2%的海藻酸钠水溶 液及质量百分比为0.1%的聚乙烯醇水溶液按体积比2 ： 1的比例混合均匀后， 滴入到质量百 分比为 5% 的氯化钙水溶液中， 静置 10-20min， 在氯化钙水溶液中形成粒径为 2-3mm 的海藻 酸钠 - 聚乙烯醇颗粒， 取出海藻酸钠 - 聚乙烯醇颗粒， 淋干表面水分， 即得到海藻酸钠 - 聚 乙烯醇凝胶吸附球。 4.根据权利要求1所述的一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于 ： 步。
8、骤 （1） 中所述的海藻酸钠凝胶吸附球和所述的海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球中的一种或两种 振荡吸附过程中用纱布包裹。 5.根据权利要求1所述的一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于 ： 步骤 （1） 中将用于吸附处理后的海藻酸钠凝胶吸附球或海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球置于浓度 为0.8-1.2mol/L的HCl溶液中， 在搅拌器上搅拌15-25min， 用大量的蒸馏水冲洗后， 放入质 量百分比为 5% 的氯化钙水溶液中固化 10-14h， 洗净、 干燥后可重复使用。 6.根据权利要求1所述的一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于 ： 步骤 （2） 中所述的木瓜蛋白酶与所。
9、述的中性蛋白酶按质量比3:1的比例混合， 在pH值为6.5， 温度为 50的条件下， 酶解 7h， 得到乌贼内脏酶解液。 7.根据权利要求1所述的一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于 ： 步骤 （2） 中乌贼内脏溶液先经 85预热 15min， 冷却至室温后再加入所述的蛋白水解酶， 在温度为 权 利 要 求 书 CN 102150812 B 2/2 页 3 50-55的条件下， 酶解 6-7h， 然后 90加热 10min， 使酶失活， 得到乌贼内脏酶解液。 8. 根据权利要求 1 所述的一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 其特征在于 ： 步骤 （4） 中以玉米淀粉作为填充剂， 按质。
10、量百分比将乌贼内脏水解蛋白粉 50， 食盐 20， 蔗糖 4， 胡椒粉 1， 姜蒜粉 4及玉米淀粉 21% 混合均匀后， 得到海味素。 权 利 要 求 书 CN 102150812 B 1/7 页 4 一种利用乌贼内脏制备海味素的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种海鲜调味料， 尤其是涉及一种利用乌贼内脏制备海味素的方法。 背景技术 0002 海味素即海鲜调味料， 由新鲜鱿鱼、 贝类和海鱼等海洋生物及其副产品为主要原 料， 通过天然酶解、 益生菌发酵和低温浓缩技术获得的具有浓郁海鲜风味的膏体， 天然海鲜 调味料即海味素因其含有丰富的氨基酸， 多肽等呈味物质以及浓郁的海鲜风味而深受广大 消费。
11、者的喜爱， 尤其是这类海鲜调味料中富含有对人体健康有益的生理活性物质 ( 如牛磺 酸、 生理活性肽、 核苷酸等 ) 及多种微量元素， 因而赋予了海鲜调味料特殊的营养保健功 能。 0003 随着我国远洋渔业的发展， 乌贼等头足类捕获量连年增加。乌贼经加工取得可食 部分后， 剩余的内脏、 皮、 墨汁等加工废弃物约占乌贼总重的 20以上。乌贼内脏富含蛋白 质、 多不饱和脂肪酸等营养成分， 但是对于这些废弃物， 一般处理方法是就地掩埋， 这不但 是对渔业资源的巨大浪费， 而且还存在着污染环境的隐患， 因此对于乌贼废弃物的综合利 用显得越来越迫切。 0004 目前， 海味素加工方法主要有以下三种类型 ：。
12、 分解型、 抽提型和反应型。分解型海 鲜调味料是指利用富含蛋白质的水产品原料， 通过加酸、 加酶或利用原料自身所含的酶类 及微生物的作用， 将原料组织分解， 形成富含氨基酸、 多肽、 有机酸和生物碱等营养成分以 及风味成分的调味液 ； 抽提型海鲜调味料是以水产品为原料， 经抽提、 分离、 混合、 浓缩或干 燥等工序生产的天然水产品浸出物 ； 反应型海鲜调味料以水产品原料为基料， 通过添加不 同配比的氨基酸、 还原糖以及 HVP、 酵母精等鲜味物质， 控制反应条件而制得的一类调味品， 但是以上制备方法均采用水产品为原料成本高， 而且制备过程工艺复杂， 所得的海味素重 金属含量高， 并且国内外也未。
13、发现利用乌贼内脏制备海味素的相关研究报道。 发明内容 0005 本发明所要解决的技术问题是提供一种以乌贼内脏为原料的， 成本低， 制备工艺 简单， 成品重金属含量低的利用乌贼内脏制备海味素的方法。 0006 本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为 ： 一种利用乌贼内脏制备海味素的 方法， 包括以下步骤 ： 0007 (1) 乌贼内脏预处理 ： 0008 将乌贼内脏匀浆后与水按质量体积比为1g2.5-3.5ml的比例混合， 在乌贼内脏 溶液中加入用于吸附重金属的质量占所述的乌贼内脏质量 1/10-1/8 的凝胶吸附球， 所述 的凝胶吸附球为海藻酸钠凝胶吸附球和海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球中。
14、的一种或两种， 振荡吸附 5 6h 后， 过滤除去凝胶吸附球， 得到乌贼内脏溶液 ； 0009 (2) 乌贼内脏酶解 0010 在步骤 (1) 得到的乌贼内脏溶液中加入蛋白水解酶， 所述的蛋白水解酶的添加量 说 明 书 CN 102150812 B 2/7 页 5 为每克乌贼内脏 6000-7000U， 所述的蛋白水解酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或两 种， 在 pH 值为 6.2-6.6， 温度为 50-55的条件下， 酶解 6-7h， 得到乌贼内脏酶解液 ； 0011 (3) 干燥脱水 0012 将步骤 (2) 得到的乌贼内脏酶解液在温度为 55-60的条件下， 干燥至水分含量 为 1。
15、0-13后， 粉碎得到乌贼内脏水解蛋白粉 ； 0013 (4) 调质 0014 以玉米淀粉作为填充剂， 按质量百分比将乌贼内脏水解蛋白粉 48-52， 食盐 18-22， 蔗糖 3-5， 胡椒粉 0.8-1.2， 姜蒜粉 3-5及玉米淀粉 20-22混合均匀后， 得 到海味素。 0015 步骤 (1) 中所述的海藻酸钠凝胶球的制备过程如下 ： 将质量百分比为 2的海藻 酸钠水溶液滴入到质量百分比为 5的氯化钙水溶液中， 静止 10-20min 后， 在氯化钙水溶 液中形成粒径为 2-3mm 的海藻酸钠颗粒， 取出海藻酸钠颗粒， 淋干表面水分， 即得到海藻酸 钠凝胶吸附球。 0016 步骤 (1。
16、) 中所述的海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶球的制备过程如下 ： 将质量百分比为 2的海藻酸钠水溶液及质量百分比为 0.1的聚乙烯醇水溶液按体积比 2 1 的比例混 合均匀后， 滴入到质量百分比为 5的氯化钙水溶液中， 静止 10-20min， 在氯化钙水溶液中 形成粒径为 2-3mm 的海藻酸钠 - 聚乙烯醇颗粒， 取出海藻酸钠 - 聚乙烯醇颗粒， 淋干表面水 分， 即得到海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球。 0017 步骤(1)中所述的海藻酸钠凝胶吸附球和所述的海藻酸钠-聚乙烯醇凝胶吸附球 中的一种或两种振荡吸附过程中用纱布包裹。 0018 步骤 (1) 中将用于吸附处理后的海藻酸钠凝胶吸附球或海。
17、藻酸钠 - 聚乙烯醇凝 胶吸附球置于浓度为 0.8-1.2mol/L 的 HCl 溶液中， 在搅拌器上搅拌 15-25min， 用大量的蒸 馏水冲洗后， 放入质量百分比为 5的氯化钙水溶液中固化 10-14h， 洗净、 干燥后可重复使 用。 0019 步骤 (2) 中所述的木瓜蛋白酶与所述的中性蛋白酶按质量比 3 1 的比例混合， 在 pH 值为 6.5， 温度为 50的条件下， 酶解 7h， 得到乌贼内脏酶解液。 0020 步骤 (2) 中乌贼内脏溶液先经 85预热 15min， 冷却至室温后再加入所述的蛋白 水解酶， 在温度为 50-55的条件下， 酶解 6-7h， 然后 90加热 10m。
18、in， 使酶失活， 得到乌贼 内脏酶解液。 0021 步骤 (4) 中以玉米淀粉作为填充剂， 按质量百分比将乌贼内脏水解蛋白粉 50， 食盐 20， 蔗糖 4， 胡椒粉 1， 姜蒜粉 4及玉米淀粉 21混合均匀后， 得到海味素。 0022 与现有技术相比， 本发明的优点在于 ： 本发明一种利用乌贼内脏制备海味素的方 法， 以乌贼内脏为原料， 将乌贼内脏通过预处理除去乌贼内脏中含有的大部分重金属， 然后 通过由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或两种组成的蛋白水解酶， 在一定的条件下水解 得到乌贼内脏酶解液， 通过干燥粉碎得到的乌贼内脏水解蛋白粉再添加调味剂制成海味 素， 该方法得到的海味素原料成本。
19、低， 制备工艺简单， 重金属含量低， 各项指标均符合标准 的海鲜调味剂， 本发明中海藻酸钠凝胶吸附球和海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球制备过程 简单， 重金属吸附效率高， 并且可实现重复利用 ； 将凝胶吸附球振荡吸附过程中用纱布包裹 有利于回收重复利用。 说 明 书 CN 102150812 B 3/7 页 6 0023 进一步由于采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶按质量比31的比例混合组成的蛋白 水解酶， 可产生显著的协同水解效应， 使各酶能够充分发挥各自的优点， 从而得到较高水解 度的蛋白水解液， 同时水解液的风味及色泽也更好。 0024 进一步由于乌贼内脏溶液先经 85预热 15min， 冷却至。
20、室温后再加入蛋白水解 酶， 在温度为 50-55的条件下， 酶解得到乌贼内脏酶解液， 经预处理变性后的蛋白， 能暴露 出更多的酶作用点， 可加速酶反应。 0025 综上所述， 本发明制备的海味素不仅成本低， 制备工艺简单， 重金属含量低， 而且 营养丰富， 味道鲜美， 具有浓郁的海鲜风味。 具体实施方式 0026 以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。 0027 一具体实施例 0028 实施例 1 0029 本发明一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 以乌贼内脏为原料， 包括以下步 骤 ： 0030 (1) 乌贼内脏预处理 0031 a. 凝胶吸附球的制备 0032 a1. 将质量百分比为 2。
21、的海藻酸钠 (C5H7O4COONa)n， SA) 水溶液， 在磁力搅拌的 同时滴入到质量百分比为 5的氯化钙溶液中， 静止 10min 后， 在氯化钙水溶液中形成粒径 为 2-3mm 的海藻酸钠颗粒， 取出海藻酸钠颗粒用自来水冲洗干净， 再用去离子水冲洗 2 3 遍， 淋干表面水分， 制得海藻酸钠凝胶球吸附球 ； 0033 a2. 将质量百分比为 2的海藻酸钠溶液及质量百分比 0.1的聚乙烯醇 (-CH2-CH(OH)-CH2-CH(OH)-n， PVA) 以 2 1 的体积比混合均匀后， 在磁力搅拌的同时滴 入到质量百分比 5的氯化钙溶液中， 静止 10min， 在氯化钙水溶液中形成粒径为。
22、 2-3mm 的 海藻酸钠 - 聚乙烯醇颗粒， 取出海藻酸钠 - 聚乙烯醇颗粒， 用自来水冲洗干净， 再用去离子 水冲洗 2 3 遍， 淋干表面水分， 得到海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球 (SA-PVA) ； 0034 b. 吸附重金属 0035 称取 10g 的乌贼内脏于锥形瓶中， 加入 30ml 的水， 取海藻酸钠凝胶球 (SA) 和海藻 酸钠 - 聚乙烯醇凝胶球 (SA-PVA) 各 0.5g 混合后用纱布包裹 ( 有利于回收重复利用 ) 置于 锥形瓶中， 用保鲜膜封口， 在振动器上进行振荡吸附 5h， 过滤除去海藻酸钠凝胶吸附球和海 藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球后， 得到乌贼内脏溶。
23、液 ； 0036 c. 回收重复利用 0037 将用于吸附的海藻酸钠凝胶吸附球和海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球置于浓度 为 0.8mol/L 的 HCl 溶液中， 在搅拌器上搅拌 15min， 用大量的清水冲洗后， 放入质量百分比 为 5的 CaCl2溶液中固化 10h， 洗净、 干燥后可重复使用 ； 0038 d. 结果测定 ： 0039 将通过本实施例的预处理方法得到乌贼内脏溶液与未经过预处理的乌贼内脏溶 液相比较， 重金属去除效果为 Pb、 Cr、 Cd 和 As 的去除率分别为 50.7、 40.5、 31.1和 36.0 ； Pb 0.107mg/kg， Cr 0.480mg/kg。
24、， Cd 0.034mg/kg， As 0.098mg/kg， 说 明 书 CN 102150812 B 4/7 页 7 0040 对照 无公害食品水产品中有毒有害物质限量 (NY 5073-2001) 标准， 镉 (Cd)1.0mg/kg(软体动物) ； 铬(Cr)2.0mg/kg(鱼贝类) ； 无机砷(As)1.0mg/kg(贝 类、 甲壳类、 其他海产品 ) ； 铅 (Pb) 1.0mg/kg( 软体动物 )， 各项指标均未超限， 乌贼内脏 含有较高的重金属含量， 通过上述预处理方法， 大大降低了乌贼内脏中的重金属含量 ； 0041 (2) 乌贼内脏酶解 0042 将在步骤 (1) 得到。
25、的乌贼内脏溶液经 85预热 15min， 冷却至室温后， 按 6000U 每克乌贼内脏的量加入蛋白水解酶， 该蛋白水解酶由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶按质量比 3 1 的比例混合组成， 两者具有显著的协同水解效应， 其工艺条件为 ： pH 值为 6.5， 水解温 度 50， 水解 7h， 然后 90加热 10min， 使酶失活， 得到乌贼内脏酶解液， 通过试验验证， 在 该条件下， 该酶组合对乌贼内脏具有较好的水解效果， 水解后其水解度可达 26.83 ； 0043 (3) 干燥脱水 0044 将步骤 (2) 得到的乌贼内脏酶解液在温度为 55的条件下， 干燥至水分含量为 13后， 粉碎得到乌贼内脏。
26、水解蛋白 ； 0045 (4) 调质 0046 以玉米淀粉作为填充剂， 按质量百分比将乌贼内脏水解蛋白粉 50， 食盐 20， 蔗糖 4， 胡椒粉 1， 姜蒜粉 4及玉米淀粉 21混合均匀后， 得到味道鲜美， 具有浓郁的 海鲜风味的海味素。 0047 实施例 2 0048 本发明一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 以乌贼内脏为原料， 包括以下 0049 步骤 ： (1) 乌贼内脏预处理 0050 a. 凝胶吸附球的制备 0051 制备方法同实施例 1 0052 b. 吸附重金属 0053 称取 10g 的乌贼内脏于锥形瓶中， 加入 25ml 的水， 取海藻酸钠凝胶球 (SA)1.25g 用纱布。
27、包裹置于锥形瓶中， 用保鲜膜封口， 在振动器上进行振荡吸附 6h， 过滤除去海藻酸钠 凝胶吸附球， 得到乌贼内脏溶液 ； 0054 c. 回收重复利用 0055 将用于吸附的海藻酸钠凝胶球吸附球和海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球置于浓 度为 1mol/L 的 HCl 溶液中， 在搅拌器上搅拌 20min， 用大量的清水冲洗后， 放入质量百分比 为 5的 CaCl2溶液中固化 12h， 洗净、 干燥后可重复使用 ； 0056 d. 结果测定 ： 0057 将通过本实施例的预处理方法得到乌贼内脏溶液与未经过预处理的乌贼内脏溶 液相比较， 重金属去除效果为 Pb、 Cr、 Cd 和 As 的去除率分。
28、别为 48.7、 37.0、 32.1 和 37.8， 对照 无公害食品水产品中有毒有害物质限量 (NY5073-2001) 标准， 镉 (Cd)1.0mg/kg(软体动物) ； 铬(Cr)2.0mg/kg(鱼贝类) ； 无机砷(As)1.0mg/kg(贝 类、 甲壳类、 其他海产品 ) ； 铅 (Pb) 1.0mg/kg( 软体动物 )， 各项指标均未超限， 乌贼内脏 含有较高的重金属含量， 通过上述预处理方法， 大大降低了乌贼内脏中的重金属含量 ； 0058 (2) 乌贼内脏酶解 0059 在步骤 (1) 得到的乌贼内脏溶液经 85预热 15min， 冷却至室温后， 按 7000U 每克 。
29、说 明 书 CN 102150812 B 5/7 页 8 乌贼内脏的量加入木瓜蛋白酶， 在 pH 值为 6.5， 温度为 55的条件下， 酶解 6h， 然后 90加 热 10min， 使酶失活， 得到乌贼内脏酶解液， 通过试验验证， 在该条件下， 该酶对乌贼内脏具 有较好的水解效果， 水解后其水解度可达 24.73 ； 0060 (3) 干燥脱水 0061 将步骤 (2) 得到的乌贼内脏酶解液在温度为 60的条件下， 干燥至水分含量为 10后， 粉碎得到乌贼内脏水解蛋白 ； 0062 (4) 调质 0063 以玉米淀粉作为填充剂， 按质量百分比将乌贼内脏水解蛋白粉 52， 食盐 19， 蔗糖 。
30、5， 胡椒粉 1， 姜蒜粉 5及玉米淀粉 20混合均匀后， 得到味道鲜美， 具有浓郁的 海鲜风味的海味素。 0064 实施例 3 0065 本发明一种利用乌贼内脏制备海味素的方法， 以乌贼内脏为原料， 包括以下 0066 步骤 ： (1) 乌贼内脏预处理 0067 a. 凝胶吸附球的制备 0068 制备方法同实施例 1 0069 b. 吸附重金属 0070 称取 10g 的乌贼内脏于锥形瓶中， 加入 35ml 的水， 取海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶球 (SA-PVA)1g用纱布包裹置于锥形瓶中， 用保鲜膜封口， 在振动器上进行振荡吸附56h， 过 滤除去海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球， 得到乌。
31、贼内脏溶液 ； 0071 c. 回收重复利用 0072 将用于吸附的海藻酸钠凝胶球吸附球和海藻酸钠 - 聚乙烯醇凝胶吸附球置于浓 度为 1.2mol/L 的 HCl 溶液中， 在搅拌器上搅拌 20min， 用大量的清水冲洗后， 放入质量百分 比为 5的 CaCl2 溶液中固化 12h， 洗净、 干燥后可重复使用 ； 0073 d. 结果测定 ： 0074 将通过本实施例的预处理方法得到乌贼内脏溶液与未经过预处理的乌贼内 脏溶液相比较， 重金属去除效果为 Pb、 Cr、 Cd 和 As 的去除率分别为 52.7、 43.3、 32.5和 38.0， 对照 无公害食品水产品中有毒有害物质限量 (N。
32、Y5073-2001) 标准， 镉 (Cd) 1.0mg/kg( 软体动物 ) ； 铬 (Cr) 2.0mg/kg( 鱼贝类 ) ； 无机砷 (As) 1.0mg/ kg( 贝类、 甲壳类、 其他海产品 ) ； 铅 (Pb) 1.0mg/kg( 软体动物 )， 各项指标均未超限， 乌 贼内脏含有较高的重金属含量， 通过上述预处理方法， 大大降低了乌贼内脏中的重金属含 量乌贼内脏含有较高的重金属含量， 通过上述预处理方法， 大大降低了乌贼内脏中的重金 属含量 ； 0075 (2) 乌贼内脏酶解 0076 在步骤 (1) 得到的乌贼内脏溶液经 85预热 15min， 冷却至室温后， 按 6500U。
33、 每克 乌贼内脏的量加入中性蛋白酶， 在 pH 值为 6.5， 温度为 55的条件下， 酶解 6.5h， 然后 90 加热 10min， 使酶失活， 得到乌贼内脏酶解液， 通过试验验证， 在该条件下， 该酶对乌贼内脏 具有较好的水解效果， 水解后其水解度可达 25.37 ； 0077 (3) 干燥脱水 0078 将步骤 (2) 得到的乌贼内脏酶解液在温度为 55-60的条件下， 干燥至水分含量 说 明 书 CN 102150812 B 6/7 页 9 为 10-13后， 粉碎得到乌贼内脏水解蛋白 ； 0079 (4) 调质 0080 以玉米淀粉作为填充剂， 按质量百分比将乌贼内脏水解蛋白粉 5。
34、2， 食盐 20， 蔗糖 3， 胡椒粉 0.8， 姜蒜粉 3.2及玉米淀粉 21混合均匀后， 得到味道鲜美， 具有浓 郁海鲜风味的海味素。 0081 二试验测定 0082 1、 水解度的测定 0083 1.1 总氨基氮含量的测定 0084 采用 GB18186-2000 中的甲醛电位滴定法测定总氨基氮含量 ： 吸取 5.0mL 水解液， 定容至 100mL 的容量瓶中， 吸取 20.0mL 置于 200mL 烧杯中， 加水 60mL， 开动磁力搅拌器， 用 浓度为 0.05mol/L 的 NaOH 标准溶液滴定至 pH 值为 8.2， 加入 10.00mL 甲醛溶液， 再用上述 0.05mol。
35、/LNaOH溶液继续滴定至pH为9.2， 记录消耗氢氧化钠标准液的毫升数， 同时做试剂 空白试验。 0085 1.2 总氮含量的测定 0086 采用 GB5009.5-85 中的凯氏定氮法测定总氮含量。 0087 1.3 水解度的计算公式 0088 0089 2、 海味素的理化指标分析 0090 测定通过实施例1、 实施例2和实施例3的制备方法获得的海味素中的水分， 灰分、 粗蛋白， 粗脂肪和几种重金属的等含量见表 1。 0091 表 1 海味素的理化指标 0092 0093 从表 1 可以看出海味素中的几种重金属含量均符合 GB10133-2005 水产调味品卫 生标准 中的规定， 由于乌贼。
36、内脏含有较高的重金属含量， 通过预处理步骤， 大大降低了乌 贼内脏中的重金属含量。 0094 3、 急性毒性试验表明 ： 灌胃后， 试验动物未出现中毒或死亡情况， 依据食品添加剂 说 明 书 CN 102150812 B 7/7 页 10 毒性级别分类表， 本发明制备的海味素为无毒级食品。 0095 4、 微生物检测结果显示 ： 本发明制备的海味素细菌总数 /cfu ： 1000 个 /g ； 大肠 菌群 /MPN ： 30 个 /100g。 0096 综上所述， 对海味素进行氨基酸组成与含量测定、 脂肪酸组成与含量测定以及毒 理学评价和微生物检测等， 综合对其营养价值及安全性进行评价。结果表。
37、明 ： 海味素营养 价值丰富， 氨基酸含量较高， 其中必需氨基酸占氨基酸总量的 24.07， 非必需氨基酸占氨 基酸总量的 33.37 ； 不饱和脂肪酸 (UFA) 含量占脂肪酸总量的 56.49， 多不饱和脂肪 酸 (PUFA) 含量占 24.94， 油酸， 亚油酸， 亚麻酸含量丰富， 尤其是被称为 “脑黄金” 的二十 碳五烯酸 C20:5(EPA) 和二十二碳六烯酸 C22:6(DHA) 的含量分别达到脂肪酸总量的 4.28和 13.28， 是较为理想的营养调味品。 依据食品添加剂毒性级别分类表， 急性毒性试验表明 ： 海味素为无毒级食品， 细菌总数和大肠菌群数均符合微生物卫生标准。 说 明 书 CN 102150812 B 。