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1、(10)申请公布号 CN 102264379 A (43)申请公布日 2011.11.30 CN 102264379 A *CN102264379A* (21)申请号 200980152359.8 (22)申请日 2009.12.14 2008-328085 2008.12.24 JP A61K 38/00(2006.01) A23K 1/08(2006.01) A23K 1/16(2006.01) A23L 1/305(2006.01) A23L 2/00(2006.01) A61P 21/06(2006.01) C12P 21/06(2006.01) (71)申请人 雪印惠乳业株式会社 地。
2、址 日本北海道 (72)发明人 内藤久士 三浦晋 (74)专利代理机构 北京林达刘知识产权代理事 务所 ( 普通合伙 ) 11277 代理人 刘新宇 李茂家 (54) 发明名称 肌肉增强剂 (57) 摘要 提供一种包含乳清蛋白水解物的肌肉增强 剂， 所述乳清蛋白水解物具有肌肉增强效果、 高 度安全、 其水溶液高度透明并且其可以不受限制 的用于各种产品， 这是因为该乳清蛋白水解物苦 味小并且不影响产品的味道。提供包含乳清蛋白 水解物的肌肉增强剂， 所述乳清蛋白水解物具有 10kDa 以下的分子量分布、 显示 200Da 至 3kDa 的 主峰、 具有 2 至 8 的平均肽长度 (APL)、 以相。
3、对于 其总组分为 20以下的量包含游离氨基酸和显 示等于或小于 - 乳球蛋白抗原性的 1/100,000 的抗原性。 (30)优先权数据 (85)PCT申请进入国家阶段日 2011.06.23 (86)PCT申请的申请数据 PCT/JP2009/006845 2009.12.14 (87)PCT申请的公布数据 WO2010/073531 JA 2010.07.01 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 8 页 CN 102264394 A1/1 页 2 1. 一种肌肉增强剂， 其包含作为活性成分的乳清蛋白水解物， 所述乳。
4、清蛋白水解物具 有 (1)10kDa 以下的分子量分布和 200Da 至 3kDa 的主峰， (2)2 至 8 的平均肽长度 (APL)， (3)20以下的游离氨基酸含量， (4)20以上的支链氨基酸含量， 和(5)等于或小于-乳 球蛋白抗原性的 1/100,000 的抗原性。 2. 根据权利要求 1 的肌肉增强剂， 其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤获得 ： 使用耐热蛋白酶在 50 至 70、 pH 6 至 10 下水解和热变性乳清蛋白以获得混合物的水解步 骤， 和加热所述混合物以使所述蛋白酶失活的失活步骤。 3. 根据权利要求 1 所述的肌肉增强剂， 其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下。
5、步骤获 得 ： 使用蛋白酶在20至55、 pH 6至10下水解乳清蛋白以获得混合物的初步水解步骤， 加 热所述混合物到 50 至 70并使用耐热蛋白酶在 50 至 70、 pH 6 至 10 下水解和热变性包 含于所述混合物中的未水解的乳清蛋白的水解步骤， 和加热所述混合物以使所述蛋白酶失 活的失活步骤。 4. 根据权利要求 1 所述的肌肉增强剂， 其中所述乳清蛋白水解物通过进行以下步骤获 得 ： 使用蛋白酶在20至55、 pH 6至10下水解乳清蛋白以获得混合物的初步水解步骤， 加 热所述混合物到 50 至 70并使用耐热蛋白酶在 50 至 70、 pH 6 至 10 下水解和热变性包 含于。
6、所述混合物中的未水解的乳清蛋白的水解步骤， 和加热所述混合物以使所述蛋白酶失 活的失活步骤， 使用具有1至20kDa截留分子量的超滤膜过滤所述混合物的超滤步骤， 和使 用具有100至500Da截留分子量的微滤膜来过滤通过超滤步骤获得的滤出液以获得未滤过 级分的微滤步骤。 5. 一种肌肉增强用食品、 饮品、 营养组合物或饲料， 其包含根据权利要求 1 至 4 任一项 所述的肌肉增强剂。 6. 一种生产肌肉增强剂的方法， 其包含以下步骤 ： 使用耐热蛋白酶在 50 至 70、 pH 6 至 10 下水解和热变性乳清蛋白以获得混合物的水解步骤， 和加热所述混合物以使所述蛋 白酶失活的失活步骤。 7.。
7、 根据权利要求 6 所述的方法， 其进一步包含在所述水解步骤前使用蛋白酶在 20 至 55、 pH 6 至 10 下水解所述乳清蛋白的初步水解步骤。 8. 根据权利要求 6 或 7 所述的方法， 其进一步包含使用具有 1 至 20kDa 截留分子量的 超滤膜过滤所述混合物的超滤步骤， 和在所述失活步骤后使用具有 100 至 500Da 截留分子 量的微滤膜来过滤通过所述超滤步骤获得的滤出液以获得未滤过的级分的微滤步骤。 9. 一种肌肉增强方法， 其包含以 10g/ 天以上的量给予乳清蛋白水解物， 所述乳清蛋白 水解物具有 (1)10kDa 以下的分子量分布和 200Da 至 3kDa 的主峰，。
8、 (2)2 至 8 的平均肽长度 (APL)， (3)20以下的游离氨基酸含量， (4)20以上的支链氨基酸含量， 和 (5) 等于或小 于 - 乳球蛋白抗原性的 1/100,000 的抗原性。 权 利 要 求 书 CN 102264379 A CN 102264394 A1/8 页 3 肌肉增强剂 技术领域 0001 本发明涉及一种肌肉增强剂， 其显示优异的肌力增强效果和对于由于长期不活动 或失重状态导致的肌肉萎缩的早期康复起作用或对强烈训练后的肌肉康复起作用， 该肌肉 增强剂具有低苦味性、 高稳定性和安全性。 0002 本发明还涉及包含该肌肉增强剂的肌肉增强用食品或饮品、 肌肉增强用营养组。
9、合 物和肌肉增强用饲料。 背景技术 0003 长期不活动或失重状态导致生命体的各种生理变化 ( 例如， 体重降低、 骨脱钙和 骨骼肌萎缩 )。例如， 用于治疗骨折等的长期石膏固定状态或长期卧床不起的状态， 导致肌 肉质量与健康人相比显著的减少。 已知在太空长期停留后返回地球的宇航员由于肌肉质量 减少而不能站立。为解决上述问题， 已尝试使用饮食成分 ( 特别是蛋白质和氨基酸营养成 分 ) 以便能够防止骨骼肌萎缩或从骨骼肌萎缩中早期康复。例如， 非专利文献 1 公开了使 用大豆蛋白作为饮食蛋白质源减少由于长期失重状态导致的骨骼肌萎缩的效果， 并揭示了 通过摄入大豆蛋白抑制腹部肌肉质量的减少。 00。
10、04 据说当运动员等进行完强烈训练时， 在不考虑营养成分分布的情况下， 由于运动 负荷而导致肌肉质量适应性增加。 然而， 增加肌肉质量的氨基酸的缺乏可能抑制肌肉合成。 因此， 还研究了训练期间蛋白质或肽的摄入对肌肉蛋白质合成的影响。例如， 非专利文献 2 公开了大豆肽的摄入对长期运动期间的小鼠肌肉的合成和保持的影响， 并报道了大豆肽的 摄入增加了腹部肌肉和四头肌的重量。 0005 然而， 因为大豆肽具有特殊的苦味， 并且当大豆肽分散于水中时出现浑浊， 大豆肽 用作所希望的食品或饮品等受到限制。特别是， 大豆肽不能用作希望具有透明性的产品。 0006 牛乳中含有的乳清蛋白相比于大豆蛋白具有高含量。
11、的参与肌肉合成的支链氨基 酸， 并具有高蛋白质净利用率(NPU)。 然而， 还没有系统报道乳清蛋白或乳清肽(即， 乳清蛋 白水解物 ) 的摄入对增加肌肉质量的影响。 0007 为了防止由牛乳或乳制品导致的食物过敏， 已将乳蛋白水解物用于各种产品。认 为与母乳中含有的蛋白质不同， 牛乳中含有的乳清蛋白作为变应原起作用。该问题可通过 使用蛋白酶水解乳清蛋白来解决 ( 例如， 参见专利文献 1 和 2)。 0008 例如， 当通过进行蛋白酶处理、 用加热使蛋白酶失活和接着进行额外的蛋白酶处 理来生产乳清蛋白水解物时， 存在很多问题， 例如， 1) 难以对在失活后纯化的乳清蛋白的沉 淀物和聚集物进行蛋。
12、白酶处理， 以致可能达不到抗原性降低和收率增加， 和 2) 当在蛋白酶 处理前加热 ( 在 90， 10 分钟以上 ) 乳清蛋白时， 收率可能降低。 0009 专利文献 1 ： JP-A-2-002319 0010 专利文献 2 ： JP-A-2-138991 0011 非专利文献 1 ： Tada 等人， Soy Protein Research， Vol.2， pp.112-117(1999) 0012 非专利文献 2 ： Fushiki 等人， Soy Protein Research， Vol.16， pp.1-3(1995) 说 明 书 CN 102264379 A CN 10226。
13、4394 A2/8 页 4 发明内容 0013 本发明要解决的问题 0014 本发明的目的是提供一种肌肉增强剂， 其包含显示肌肉质量增加效果的乳清蛋白 水解物。 0015 本发明的另一个目的是提供肌肉增强用食品、 肌肉增强用营养组合物和肌肉增强 用饲料， 它们显示肌肉增强效果、 非常安全并且可口服 ( 即， 风味好 )。 0016 用于解决问题的方案 0017 为了达到上述目的， 本发明的发明人对通过在给定条件下使用耐热蛋白酶来水解 和热变性乳清蛋白获得的乳清蛋白水解物进行了广泛研究， 并且发现具有以下性质的乳清 蛋白水解物显示达到上述目的的肌肉增强效果， 所述乳清蛋白水解物具有 10kDa 。
14、以下的分 子量分布、 200Da至3kDa的主峰、 2至8的平均肽长度(APL)、 全部组分的游离氨基酸含量为 20以下和抗原性等于或小于 - 乳球蛋白抗原性的 1/100,000。 0018 具体而言， 本发明提供以下。 0019 (1) 一种肌肉增强剂， 其包含作为活性成分的乳清蛋白水解物， 所述乳清蛋白 水解物具有 (1)10kDa 以下的分子量分布和 200Da 至 3kDa 的主峰， (2)2 至 8 的平均肽 长度 (APL)， (3)20以下的游离氨基酸含量， 和 (4) 等于或小于 - 乳球蛋白抗原性的 1/100,000 的抗原性。 0020 (2) 根据 (1) 所述的肌肉。
15、增强剂， 其中所述乳清蛋白水解物通过以下步骤获得 ： 使 用耐热蛋白酶在 50 至 70、 pH 6 至 10 下水解和热变性乳清蛋白以获得混合物， 和加热所 述混合物以使所述蛋白酶失活。 0021 (3) 根据 (1) 所述的肌肉增强剂， 其中所述乳清蛋白水解物通过以下步骤获得 ： 使 用蛋白酶在 20 至 55、 pH 6 至 10 下水解乳清蛋白以获得混合物， 加热所述混合物到 50 至 70， 使用耐热蛋白酶在 50 至 70、 pH 6 至 10 下水解和热变性包含于所述混合物中的未 水解乳清蛋白， 和加热所述混合物以使所述蛋白酶失活。 0022 (4) 根据 (1) 所述的肌肉增强。
16、剂， 其中所述乳清蛋白水解物通过以下步骤获得 ： 使 用蛋白酶在 20 至 55、 pH 6 至 10 下水解乳清蛋白以获得混合物， 加热所述混合物到 50 至 70， 使用耐热蛋白酶在 50 至 70、 pH 6 至 10 下水解和热变性包含于所述混合物中的未 水解乳清蛋白， 和加热所述混合物以使所述蛋白酶失活， 使用具有1至20kDa截留分子量的 超滤膜从所述混合物去除未水解的蛋白， 和使用具有 100 至 500Da 截留分子量的微滤膜从 所述混合物去除低分子量级分。 0023 (5) 一种肌肉增强用食品或饮品、 肌肉增强用营养组合物或肌肉增强用饲料， 其包 含根据 (1) 至 (4) 。
17、任一项所述的肌肉增强剂。 0024 (6) 一种肌肉增强方法， 其包含以 10g/ 天以上的量给予乳清蛋白水解物， 所述乳 清蛋白水解物具有 (1)10kDa 以下的分子量分布和 200Da 至 3kDa 的主峰， (2)2 至 8 的平均 肽长度 (APL)， (3)20以下的游离氨基酸含量， 和 (4) 等于或小于 - 乳球蛋白抗原性的 1/100,000 的抗原性。 0025 本发明的效果 0026 上述肌肉增强剂显示显著的肌肉合成效果， 并且在从肌肉萎缩的康复或从由强烈 说 明 书 CN 102264379 A CN 102264394 A3/8 页 5 训练导致的肌肉损伤的康复中是有。
18、用的。 0027 证实用作肌肉增强剂活性成分的乳清蛋白水解物具有等于或小于 - 乳球蛋白 和后述的乳清蛋白抗原性的 1/100,000 的抗原性。因此， 所述乳清蛋白水解物非常安全。 0028 乳清蛋白水解物在水中的溶解性可以通过使用超滤(UF)膜或微滤(MF)膜过滤乳 清蛋白水解物来改进。 0029 包含上述肌肉增强剂作为活性成分的肌肉增强用食品或饮品、 肌肉增强用营养组 合物或肌肉增强用饲料显示出肌肉增强效果， 并且非常安全。 0030 因为使用乳清蛋白作为原料来生产上述肌肉增强剂， 所以可以容易和经济地生产 所述肌肉增强剂。 具体实施方式 0031 根据本发明一个实施方案的肌肉增强剂包含。
19、乳清蛋白水解物， 所述乳清蛋白水解 物具有肌肉增强效果， 并且通过以下步骤获得 ： 使用耐热蛋白酶在50至70、 pH 6至10下 水解和热变性乳清蛋白以获得混合物， 和加热所述混合物以使所述蛋白酶失活。乳清蛋白 水解物的收率可以通过以下来提高 ： 使用蛋白酶在20至55、 pH 6至10下水解乳清蛋白， 然后在上述条件下快速水解所述乳清蛋白而不冷却乳清蛋白。 0032 通过使用超滤 (UF) 膜和 / 或微滤膜浓缩如上所述获得的乳清蛋白水解物来改进 肌肉增强效果， 所述超滤 (UF) 膜具有 1 至 20kDa， 优选 2 至 10kDa 的截留分子量， 所述微滤 膜具有 100 至 500。
20、Da， 优选 150 至 300Da 的截留分子量。这还可以降低苦味和提高透明性。 0033 本文使用的术语 “乳清蛋白” 是指哺乳动物如奶牛、 水牛、 山羊或人的乳清、 或其聚 集物、 粉末或纯化产品。乳清蛋白在酶反应中以水溶液状态使用。 0034 将溶液的 pH 调整为 6 至 10。乳清蛋白溶液通常具有在上述范围内的 pH。当需要 调整溶液的 pH 时， 使用酸溶液 ( 例如， 盐酸、 柠檬酸或乳酸 ) 或碱溶液 ( 例如， 苛性苏打、 氢 氧化钙或磷酸钠 ) 调整溶液的 pH 到 6 至 10。然后将溶液加热到 50 至 70。从收率的观 点， 优选在 50 至 70的加热步骤前添加耐。
21、热蛋白酶以便温度到达 50至 70前的加热期 间也发生水解。 0035 虽然正常蛋白酶的最适宜温度为 40以下， 但是耐热蛋白酶的最适宜温度为 45以上。可使用具有最适宜温度为 45以上的任意的耐热蛋白酶。该耐热蛋白酶的实 例包括木瓜蛋白酶、 Protease S( 商品名 )、 Proleather( 商品名 )、 Thermoase( 商品名 )、 Alcalase( 商品名 ) 和 Protin A( 商品名 ) 等。优选使用当在 80下加热 30 分钟时具有 10以上残存活性的耐热蛋白酶。组合使用多种蛋白酶是有效的。反应时间优选为约 30 分钟至 10 小时。 0036 在蛋白酶变性后。
22、， 然后加热反应溶液以使蛋白酶失活。 可通过在100以上加热反 应溶液 10 秒以上使蛋白酶失活。 0037 在蛋白酶失活后， 将反应溶液离心， 并收集上清液。 然后干燥上清液以获得粉末状 产品。与上清液相比， 由离心产生的沉淀物的低变应原性较小， 且优选将其去除。注意， 只 要不发生抗原性问题， 就可干燥和直接使用反应溶液。 0038 经证实， 当通过抑制 ELISA 法 ( 参见日本期刊 Pediatric Allergy and Clinical Immunology， 1， 36(1987) 测量时， 通过上述方法获得的乳清蛋白水解物具有等于或小于 说 明 书 CN 102264379。
23、 A CN 102264394 A4/8 页 6 - 乳球蛋白和乳清蛋白的抗原性的 1/100,000 的抗原性。因此， 乳清蛋白水解物非常安 全。因为乳清蛋白水解物的水溶液是透明的， 并且具有约为 2 的苦味水平， 因此乳清蛋白水 解物可用于任意产品。 0039 根据本发明的一个实施方案的乳清蛋白水解物可直接用作肌肉增强剂， 或可通过 常规方法形成为粉末剂、 颗粒剂、 片剂、 胶囊剂或可饮用制剂等。使用超滤 (UF) 膜或微滤 (MF) 膜获得的乳清蛋白水解物也可直接用作肌肉增强剂， 或可在干燥后使用。乳清蛋白水 解物也可通过常规方法形成为制剂。 0040 可将制剂添加至营养制剂、 食品或饮。
24、品 ( 例如， 酸乳酪、 乳类饮品或薄饼 )、 饲料或 补充剂等。 0041 肌肉增强用食品或饮品、 肌肉增强用营养组合物或肌肉增强用饲料中的乳清蛋白 水解物的量没有特别限定， 但优选这样确定以使成人以10g/天以上， 和优选20g/天以上的 量摄取乳清蛋白水解物。 0042 作为活性成分的乳清蛋白水解物可与适当的助剂混合， 并形成为口服制剂 ( 肌肉 增强剂 )。 0043 以下通过实施例、 比较例和试验例进一步描述本发明。 注意， 以下实施例是为说明 的目的而给出的， 不应该理解为对本发明的限定。 0044 在实施例中， 通过以下方法评价透明性和苦味。 0045 透明性评价方法 ： 制备 。
25、1乳清蛋白水解物溶液， 并测量在 650nm 处的吸光度。 0046 苦味评价方法 ： 制备 10乳清蛋白水解物溶液。 0047 使用盐酸奎宁(苦味物质)评价溶液的苦味。 如果苦味水平如表1所示为2以下， 则乳清蛋白水解物可用于食品或饮品等。 0048 表 1 0049 0050 实施例 1 0051 将木瓜蛋白酶 (50U/g 乳清蛋白 ) 和 Proleather( 由 Amano Enzyme Inc. 制造 ) (150U/g 乳清蛋白 ) 添加到 1 升 10乳清蛋白水溶液中。在调整混合物的 pH 至 8 后， 在 55下使乳清蛋白水解和变性 6 小时。在 100下加热反应溶液 15。
26、 秒以上以使蛋白酶失 活。然后将反应溶液离心， 并收集上清液。然后干燥上清液以获得乳清蛋白水解物。 0052 获得的乳清蛋白水解物具有 10kDa 以下的分子量分布、 1.3kDa 的主峰、 7.2 的 APL 和游离氨基酸的含量为全部组分的 18.9。 0053 乳清蛋白水解物具有等于或小于 - 乳球蛋白抗原性 1/100,000 的抗原性 ( 通过 抑制ELISA测量)。 收率(即， 通过离心酶反应溶液获得的上清液的干重与原料的干重的比 ( ) 为 80.3， 和苦味水平为 2。 说 明 书 CN 102264379 A CN 102264394 A5/8 页 7 0054 乳清蛋白水解物。
27、的氨基酸组成如表 2 所示。 0055 由此获得的乳清蛋白水解物可直接用作肌肉增强剂。 0056 因为实施例1中获得的乳清蛋白水解物的水溶液是透明的并且具有约2的苦味水 平， 所以乳清蛋白水解物可容易地形成为制剂、 食品或饮品等。 0057 表 2 0058 0059 实施例 2 0060 将木瓜蛋白酶 (50U/g 乳清蛋白 ) 和 Proleather(150U/g 乳清蛋白 ) 添加到 1 升 10乳清蛋白水溶液中。在调整混合物的 pH 至 8 后， 在 50下使乳清蛋白水解 3 小时。加 热混合物至 55， 在 55下使乳清蛋白变性和水解 3 小时。然后在 100下加热混合物 15 秒。
28、以上以使蛋白酶失活。使用具有 10kDa 截留分子量的 UF 膜 ( 由 STC 制造 ) 和具有 300Da 说 明 书 CN 102264379 A CN 102264394 A6/8 页 8 截留分子量的 MF 膜 ( 由 STC 制造 ) 过滤反应溶液以收集浓缩物级分。然后干燥所述级分 以获得乳清蛋白水解物。 0061 获得的乳清蛋白水解物具有 10kDa 以下的分子量分布， 500Da 的主峰， 3.0 的 APL 和游离氨基酸的含量为全部组分的 15.2。 0062 乳清蛋白水解物具有等于或小于 - 乳球蛋白抗原性的 1/100,000 的抗原性 ( 通 过抑制 ELISA 测量 。
29、)。收率为 65.4， 和苦味水平为 2。 0063 由此获得的乳清蛋白水解物可直接用作肌肉增强剂。 0064 比较例 1 0065 将120g乳清蛋白溶解于1800ml纯水中， 并使用1M苛性苏打溶液将溶液的pH调整 为 7.0。将溶液在 60下灭菌 10 分钟， 并在 45下保持。在添加 20g Amano A( 由 Amano Enzyme Inc. 制造 ) 后， 使混合物反应 2 小时。然后在 80下加热混合物 10 分钟以使蛋白 酶失活， 并冷冻干燥以获得乳清蛋白水解物。 0066 乳清蛋白水解物的水解率为 18， 收率为 80.6。 0067 比较例 2 0068 将120g乳清。
30、蛋白溶解于1800ml纯水中， 并使用1M苛性苏打溶液将溶液的pH调整 为 7.0。将溶液在 60下灭菌 10 分钟， 并在 45下保持。在添加 20g Amano A( 由 Amano Enzyme Inc. 制造 ) 后， 使混合物反应 8 小时。然后在 80下加热混合物 10 分钟以使蛋白 酶失活， 并冷冻干燥以获得乳清蛋白水解物。 0069 乳清蛋白水解物的水解率为 30， 收率为 80.6。 0070 试验例 1 0071 ( 透明性试验 ) 0072 制备在实施例1和2和比较例1和2中获得的各乳清蛋白水解物的1水溶液， 并 测量在 650nm 处的吸光度。结果如表 3 所示。 00。
31、73 表 3 0074 0075 实施例 1 和 2 中获得的乳清蛋白水解物具有低吸光度 ( 即， 高透明性 )。与实施 例 1 和 2 中获得的乳清蛋白水解物相比， 比较例 1 和 2 中获得的乳清蛋白水解物具有高吸 光度 ( 即， 低透明性 )。与实施例 1 中获得的乳清蛋白水解物相比， 经膜处理的在实施例 2 中获得的乳清蛋白水解物具有低吸光度 ( 即， 高透明性 )。 0076 试验例 2 0077 ( 肌力康复试验 ) 说 明 书 CN 102264379 A CN 102264394 A7/8 页 9 0078 将购自日本 SLC Inc. 的 Wistar 雌性大鼠 (5 周龄 。
32、) 分成 4 组， 以使各组重量在 6 周大时相等 ( 在各组中 n 6 至 7， 1446.8g)。 0079 对大鼠任意喂养标准的 AIN93 饮食， 在所述标准 AIN93 饮食中替代酪素蛋白使用 实施例1中获得的未水解的乳清蛋白、 乳清蛋白水解物， 或实施例2中获得的乳清蛋白水解 物。每 2 至 3 天测量摄食量。 0080 在后肢悬垂期间 (1 周 ) 喂养全部大鼠标准的 AIN93 饮食。在后肢悬垂期结束后， 在不同的饮食条件下将大鼠保留在通常的笼中 1 周 ( 康复期 )。将喂养标准饮食并且未经 受后肢悬垂的组用作对照。 0081 在康复期结束后， 在用戊巴比妥钠 (50mg/k。
33、g) 麻醉下取走比目鱼肌 (SOL)， 并且测 量肌肉蛋白质的重量。 0082 比目鱼肌蛋白质的含量相对于体重的测量结果如表 4 所示。 0083 表 4 0084 0085 b ： 与对照相比观察到显著差异 (p 0.05) 0086 c ： 与标准饮食组相比观察到显著差异 (p 0.05) 0087 d ： 与乳清蛋白组相比观察到显著差异 (p 0.05) 0088 与对照相比， 仅标准饮食组和乳清蛋白组显示肌肉重量的显著减少。喂养实施例 1 或 2 中获得的乳清蛋白水解物的组没有显示肌肉重量的显著减少。 0089 实施例 3 0090 肌肉增强用营养组合物的制备 0091 将 50g 实。
34、施例 2 中获得的乳清蛋白水解物溶解于 4950g 去离子水中。将溶液加热 至50， 并使用TK均质混合机(由PRIMIX Corporation制造的 “TKROBOMICS” )在6000rpm 下搅拌 30 分钟以获得乳清蛋白水解物溶液 ( 乳清蛋白水解物含量 ： 50g/5kg)。将 5.0kg 酪 素、 5.0kg大豆蛋白、 1.0kg鱼油、 3.0kg紫苏属(紫苏)油、 18.0kg糊精、 6.0kg矿物混合物、 1.95kg 维生素混合物、 2.0kg 乳化剂、 4.0kg 稳定剂和 0.05kg 芳香化合物添加到 5.0kg 乳 清蛋白水解物溶液中。用混合物填充蒸煮袋 (ret。
35、ort pouch)(200ml)。然后将混合物使用 高压杀菌釜 ( 一类压力容器，“RCS-4CRTGN” ， 由 Hisaka Works， Ltd. 制造 ) 在 121下灭菌 20 分钟以生产 50kg 本发明的肌肉增强用营养组合物。 0092 肌肉增强用营养组合物 100mg/100g 的量含有乳清蛋白水解物。 0093 实施例 4 0094 肌肉增强用饮品的制备 说 明 书 CN 102264379 A CN 102264394 A8/8 页 10 0095 将 300g 脱脂乳粉溶解于 409g 去离子水中。然后将 1g 实施例 1 中获得的乳清蛋 白水解物溶解于溶液中。将所得溶。
36、液加热至 50， 并使用超分散仪 ( 由 IKA Japan 制造的 “ULTRA-TURRAX T-25” ) 在 9500rpm 下搅拌 30 分钟。在添加 100g 麦芽糖醇、 2g 酸化剂、 20g 还原淀粉糖浆、 2g 芳香化合物和 166g 去离子水后， 用混合物充填玻璃瓶 (100ml)。在 90 下灭菌 15 分钟后， 将瓶密封以获得 10 瓶 (100ml) 肌肉增强用饮品。 0096 肌肉增强用饮品以 100mg/100ml 的量含有乳清蛋白水解物。 0097 实施例 5 0098 肌肉增强用狗粮的制备 0099 将 200g 实施例 2 中获得的乳清蛋白水解物溶解于 99。
37、.8kg 去离子水中。将所得溶 液加热至 50， 并使用 TK- 均质混合机 ( 由 PRIMIX Corporation 制造的 “MARK II 160” ) 在 3600rpm 下搅拌 40 分钟以获得乳清蛋白水解溶液 ( 乳清蛋白水解物含量 ： 2g/100g)。将 12kg 大豆粉、 14kg 粉状脱脂乳、 4kg 大豆油、 2kg 玉米油、 23.2kg 棕榈油、 14kg 玉米淀粉、 9kg 面粉、 2kg麸糠、 5kg维生素混合物、 2.8kg纤维素和2kg矿物混合物添加到10kg乳清蛋白水 解物溶液中。将混合物在 120下灭菌 4 分钟以获得 100kg 本发明的肌肉增强性狗粮。 0100 肌肉增强性狗粮以 20mg/100g 的量含有乳清蛋白水解物。 说 明 书 CN 102264379 A 。